JP2007512027A5

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Publication number: JP2007512027A5
Application number: JP2006541617A
Authority: JP
Filing date: 2004-11-22
Publication date: 2008-01-10

Claims

ｉＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ構築物を細胞のゲノムの所定の位置に挿入する工程
を含む、トランスジェニック細胞を産生するための方法。
ｉＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ構築物を細胞のゲノムの所定の位置に挿入する工程
を含み、該挿入が該細胞の正常な遺伝子発現を破壊しない、トランスジェニック細胞を産生するための方法。
（ｉ）標的ｍＲＮＡに対して相補的な少なくとも１つのｉＲＮＡ配列を同定する工程；
（ｉｉ）細胞中の標的内因性遺伝子配列を同定する工程；
（ｉｉｉ）ｉＲＮＡ配列をコードするＤＮＡ構築物及び該内因性標的配列に対して相同な標的配列を製造する工程；
（ｉｖ）該ＤＮＡ構築物を該細胞に導入する工程；及び
（ｖ）該ｉＲＮＡ分子が発現され、それによって該標的ｍＲＮＡの発現を調節する条件下で、該細胞を増殖させる工程
を含む、標的ｍＲＮＡの発現を調節するための方法。
前記挿入が標的遺伝子のエキソン内へのものである、請求項３に記載の方法。
前記挿入が標的遺伝子のイントロン内へのものである、請求項３に記載の方法。
前記挿入が前記標的遺伝子の機能を破壊しない、請求項３に記載の方法。
前記ＤＮＡ構築物が、該標的遺伝子と前記ＤＮＡ構築物との間の相同的組換えを可能にするために、標的遺伝子に対して相同な配列を含有する、請求項３に記載の方法。
前記ＤＮＡ構築物が合成イントロン内に含有される、請求項３に記載の方法。
前記合成イントロンが機能性イントロンである、請求項８に記載の方法。
前記合成イントロンが内因性イントロン内に挿入される、請求項９に記載の方法。
前記合成イントロンが内因性エキソン内に挿入される、請求項８に記載の方法。
前記細胞がヒト細胞である、請求項１又は２に記載の方法。
前記細胞が非ヒト哺乳動物細胞である、請求項１又は２に記載の方法。
前記ＤＮＡ構築物が、Ｄｒｏｓｈａ基質であるＲＮＡ分子をコードする、請求項１又は２に記載の方法。
ｉＲＮＡ分子がｓｉＲＮＡ分子である、請求項１又は２に記載の方法。
前記ＤＮＡが相同的組換えを介して前記遺伝子内に挿入される、請求項１又は２に記載の方法。
請求項１又は２に従って産生されるトランスジェニック細胞。
請求項１７に記載の細胞を含むトランスジェニック動物。
第１の標的ｍＲＮＡに対して相補的な第１のヌクレオチド配列と、第２の標的ｍＲＮＡに対して相補的な第２のヌクレオチド配列と
を含み、該第１及び第２のヌクレオチド配列が実質的に共にハイブリダイズして二本鎖ｉＲＮＡ分子を形成する、二本鎖ｉＲＮＡ分子。
前記第１及び第２の標的ｍＲＮＡが同じである、請求項１９に記載のｉＲＮＡ分子。
前記第１及び第２の標的ｍＲＮＡが異なる、請求項１９に記載のｉＲＮＡ分子。
前記第１及び第２のヌクレオチド配列が反復性である、請求項１９に記載のｉＲＮＡ分子。
前記第１及び第２のヌクレオチド配列を分離する第３のヌクレオチド配列
をさらに含む、請求項１９に記載のｉＲＮＡ分子。
前記第１及び第２のヌクレオチド配列が１９〜３２ヌクレオチド長である、請求項１９に記載のｉＲＮＡ分子。
前記第３のヌクレオチド配列が４〜１０ヌクレオチド長である、請求項２３に記載のｉＲＮＡ分子。
第１の標的ｍＲＮＡに対して相補的な第１のヌクレオチド配列と、第２の標的ｍＲＮＡに対して相補的な第２のヌクレオチドと
を含み、該第１及び第２のヌクレオチド配列が実質的に共にハイブリダイズして二本鎖ｉＲＮＡ分子を形成する、二本鎖ｉＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ構築物。
（ｉ）標的ｍＲＮＡに対して相補的な少なくとも１つのヌクレオチド配列を同定する工程；
（ｉｉ）該相補的な配列を分析して、共にハイブリダイズ可能な配列の一部分を同定する工程；
（ｉｉｉ）工程（ｉｉ）で同定された２つの相補的な配列を含有するｉＲＮＡ分子を製造する工程
を含み、該製造する工程を細胞中で行なうことができる、標的ｍＲＮＡの発現を調節するために二本鎖ｉＲＮＡ分子を産生するための方法。
前記ｉＲＮＡがＤＮＡ構築物によってコードされる、請求項２７に記載の方法。
前記ｉＲＮＡ分子が、共にハイブリダイズする２個の相補的なヌクレオチド配列を分離する第３のヌクレオチド配列をさらに含む、請求項２７に記載の方法。
前記相補的な配列が約１９〜３２ヌクレオチド長である、請求項２７に記載の方法。
１つの遺伝子の少なくとも２つの領域の発現を調節し、前記遺伝子の発現が機能的に排除される、１個のｉＲＮＡ分子。
標的ｍＲＮＡの同じ領域を標的化する２つのｉＲＮＡ分子を投与する工程
を含む、標的ｍＲＮＡの発現を排除するための方法。
遺伝子ファミリーの全てのメンバーに共通の相同性領域を標的化することによって、前記遺伝子ファミリーの発現を調節する１個のｉＲＮＡ分子。
ブタ内因性レトロウイルスの発現を阻害するｉＲＮＡ分子。
複数の種類のブタ内因性レトロウイルス（ＰＥＲＶ）に結合する、請求項３４に記載のｉＲＮＡ。
前記ｉＲＮＡがＰＥＲＶ−Ａ及びＰＥＲＶ−Ｂに結合する、請求項３４に記載のｉＲＮＡ。
前記ｉＲＮＡがＰＥＲＶ−Ａ及びＰＥＲＶ−Ｃに結合する、請求項３４に記載のｉＲＮＡ。
前記ｉＲＮＡがＰＥＲＶ−Ｂ及びＰＥＲＶ−Ｃに結合する、請求項３４に記載のｉＲＮＡ。
前記ブタ内因性レトロウイルスのｅｎｖ領域を標的化する、請求項３４に記載のｉＲＮＡ分子。
前記ブタ内因性レトロウイルスのｇａｇ領域を標的化する、請求項３９に記載のｉＲＮＡ分子。
前記ブタ内因性レトロウイルスのｐｏｌ領域を標的化する、請求項４０に記載のｉＲＮＡ分子。
以下のｇａｇ配列を標的化する、請求項４０に記載のｉＲＮＡ分子：
ＧＴＴＡＧＡＴＣＣＡＧＧＧＣＴＣＡＴＡＡＴ、又はこれに実質的に相同性を有するか、又はこれにハイブリダイズする配列。
以下のｐｏｌ配列を標的化する、請求項４１に記載のｉＲＮＡ分子：
ＧＴＴＡＧＡＴＣＣＡＧＧＧＣＴＣＡＴＡＡＴ、又はこれに実質的に相同性を有するか、又はこれにハイブリダイズする配列。