JP2007508824A - 核酸のプライマーに基づく増幅のための方法及びキット - Google Patents
核酸のプライマーに基づく増幅のための方法及びキット Download PDFInfo
- Publication number
- JP2007508824A JP2007508824A JP2006535636A JP2006535636A JP2007508824A JP 2007508824 A JP2007508824 A JP 2007508824A JP 2006535636 A JP2006535636 A JP 2006535636A JP 2006535636 A JP2006535636 A JP 2006535636A JP 2007508824 A JP2007508824 A JP 2007508824A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- amplification
- target
- primers
- detection
- primer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 230000003321 amplification Effects 0.000 title claims abstract description 375
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 title claims abstract description 375
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 193
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 141
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 110
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 110
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 195
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 118
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 118
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 81
- 208000037921 secondary disease Diseases 0.000 claims abstract description 68
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 13
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 116
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 51
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 49
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 claims description 32
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 claims description 32
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 claims description 28
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 28
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 23
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 20
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 17
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 16
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 16
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 14
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 claims description 12
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 claims description 12
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 claims description 12
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 claims description 12
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 11
- 241001466953 Echovirus Species 0.000 claims description 10
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 claims description 10
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 10
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 claims description 9
- 230000007274 generation of a signal involved in cell-cell signaling Effects 0.000 claims description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 8
- 238000013461 design Methods 0.000 claims description 7
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 claims description 5
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 claims description 5
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 5
- 229910052729 chemical element Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 3
- 241000988559 Enterovirus A Species 0.000 claims 4
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract description 21
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 abstract description 14
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 12
- 238000005457 optimization Methods 0.000 abstract description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 55
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 35
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 32
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 30
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 29
- 239000000047 product Substances 0.000 description 28
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 27
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 25
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 21
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 16
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 12
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 9
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 9
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 9
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 9
- 241001647372 Chlamydia pneumoniae Species 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 8
- 241000202934 Mycoplasma pneumoniae Species 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 238000007403 mPCR Methods 0.000 description 7
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 7
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 6
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 6
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 6
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 5
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000009088 enzymatic function Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 4
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 4
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- LHEJDBBHZGISGW-UHFFFAOYSA-N 5-fluoro-3-(3-oxo-1h-2-benzofuran-1-yl)-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1C(F)=CNC(=O)N1C1C2=CC=CC=C2C(=O)O1 LHEJDBBHZGISGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000712003 Human respirovirus 3 Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000001821 nucleic acid purification Methods 0.000 description 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 2
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 2
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 description 2
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 101000650778 Boana raniceps Raniseptin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108091033380 Coding strand Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 102000015782 Electron Transport Complex III Human genes 0.000 description 1
- 108010024882 Electron Transport Complex III Proteins 0.000 description 1
- 241001135572 Human adenovirus E4 Species 0.000 description 1
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 1
- 241000713196 Influenza B virus Species 0.000 description 1
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000012807 PCR reagent Substances 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 101710148009 Putative uracil phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- -1 but not limited to Chemical class 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012803 optimization experiment Methods 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 108700022487 rRNA Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2525/00—Reactions involving modified oligonucleotides, nucleic acids, or nucleotides
- C12Q2525/10—Modifications characterised by
- C12Q2525/155—Modifications characterised by incorporating/generating a new priming site
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2527/00—Reactions demanding special reaction conditions
- C12Q2527/143—Concentration of primer or probe
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2531/00—Reactions of nucleic acids characterised by
- C12Q2531/10—Reactions of nucleic acids characterised by the purpose being amplify/increase the copy number of target nucleic acid
- C12Q2531/113—PCR
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2537/00—Reactions characterised by the reaction format or use of a specific feature
- C12Q2537/10—Reactions characterised by the reaction format or use of a specific feature the purpose or use of
- C12Q2537/143—Multiplexing, i.e. use of multiple primers or probes in a single reaction, usually for simultaneously analyse of multiple analysis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2549/00—Reactions characterised by the features used to influence the efficiency or specificity
- C12Q2549/10—Reactions characterised by the features used to influence the efficiency or specificity the purpose being that of reducing false positive or false negative signals
- C12Q2549/119—Reactions characterised by the features used to influence the efficiency or specificity the purpose being that of reducing false positive or false negative signals using nested primers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2565/00—Nucleic acid analysis characterised by mode or means of detection
- C12Q2565/10—Detection mode being characterised by the assay principle
- C12Q2565/102—Multiple non-interacting labels
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
MASの1つの実施態様では、1つの反応においてRNAとDNAの両方を単離する核酸単離工程を使用する。代替的実施態様では、RNAとDNAを独立して単離し、この後MASにおける使用のために一緒にし得る。さらにもう1つの代替的実施態様では、1つの型の核酸だけを単離する必要がある場合は(対象とする全ての疾患因子の二次疾患因子が同じ型の核酸ゲノムを有するときなど)、RNA又はDNAだけを単離する核酸単離法を使用し得る。RNAとDNAの同時単離及び各々の別個の単離のための様々な手法及びプロトコールが当技術分野において公知であり、このような手法及びプロトコールが使用できる。ここで述べる核酸単離は、様々な患者試料又はソースからの核酸を単離するために使用し得る。患者試料/ソースの種類は、鼻腔/咽頭綿棒、唾液、痰、血清、全血及び便を含むが、これらに限定されない。
様々な多重増幅戦略がMASに関して使用し得る。このような増幅戦略の多くが当技術分野において公知である。多重増幅戦略は、疾患因子及び二次疾患因子に含まれる核酸の種類に依存してPCR、RT−PCR又はこれらの組合せを使用し得る。例えばRNAゲノムが存在する場合は、RT−PCRを使用し得る。PCR及びRT−PCRの方法は当技術分野において周知である。1つの実施態様では、MASにおいて使用する多重増幅戦略はユニークである。このユニーク多重増幅戦略は標的富化多重PCR(Tem−PCR)と称され、当技術分野において公知の他の多重増幅方法で必要とされるようなプライマーの組合せ及び増幅条件の広汎な経験的試験なしに、疾患因子及び/又は二次疾患因子からの1又はそれ以上の標的配列の効率的な増幅を可能にする。本明細書の中で使用する、「標的配列」は、増幅すべき及び最終的に検出すべき疾患因子又は二次疾患因子からのヌクレオチド配列である。標的配列は、ここで述べるプライマーセットによって増幅されるより大きな核酸配列内に含まれる。増幅のための各々の標的配列は、検出(以下で述べるような)時に、疾患因子又は二次疾患因子のいずれかが試料中に存在する場合、疾患因子又は二次疾患因子の特定を可能にする。増幅された標的配列の検出(直接又は間接的に−以下の記述参照)は、疾患因子又は二次疾患因子の存在及び同一性を指示し、これによって関連する疾患状態を診断する。1つの実施態様では、試験する各々の疾患因子又は各々の二次疾患因子から増幅のために単一標的配列を選択する。代替的実施態様では、2個以上の標的配列を各々の疾患因子又は各々の二次疾患因子からの増幅のために選択する。さらなる実施態様では、2個以上の標的配列を疾患因子からの増幅のために及び単一標的配列を各々の二次疾患因子からの増幅のために選択する。
豊富な標的配列多重増幅法が、感受性の高い特異的な多重検出のための基礎を提供する。MASにおいて使用する多重検出法は、多重増幅を補って、増幅した標的配列の検出においてバランスのとれた感受性と特異性を与える。感受性と特異性は診断試験又は鑑別診断試験の成功にとって重要な問題である。
以下は、SARS(これらの実施例ではSARS−CoV)に関する鑑別診断アッセイを提供するための本開示の教示を利用したMASのいくつかの例である。この実施例では、SARSが疾患因子であり、二次疾患因子は以下の1又はそれ以上を含む:呼吸器合胞体ウイルス(RSV)A型及びB型、パラインフルエンザウイルス(PIV)1型及び3型、インフルエンザ(INF)A型及びB型、アデノウイルス(ADV)、C.ニューモニエ(C.pneumoniae)及びM.ニューモニエ(M.pneumoniae)、エンテロウイルス(ENT)、及びコクサッキーウイルスA型(CVA)、コクサッキーウイルスB型(CVB)、ライノウイルス(RhV)及びエコーウイルスなどのエンテロウイルス型。上述したように、これらの実施例は単に例示として提供するものであり、他の疾患因子及び二次疾患因子からの他の標的配列も増幅し、検出し得るので、本発明の開示をここで開示されている鑑別診断に限定することを意図しない。
Claims (88)
- 多重プライマーに基づく増幅のための方法であって、
前記増幅を、標的富化プライマーの少なくとも第一対及び第二対並びに標的増幅プライマー(前記標的増幅プライマーはFSP及びRSPを含む。)の少なくとも第一対を含む反応混合物中にて行うことを含み、並びに
a.第一増幅反応[前記第一増幅反応は、
i)鋳型としての、少なくとも1つの病原因子からの核酸(前記核酸は前記病原因子からの少なくとも1つの標的配列を含む。);
ii)前記核酸にハイブリダイズし、前記少なくとも1つの標的配列を囲う前記標的富化プライマーの第一対;
iii)前記核酸にハイブリダイズし、前記少なくとも1つの標的配列を囲う前記標的富化プライマーの第二対(前記標的富化プライマーの第二対は少なくとも1つの標的配列に近接して位置し、前記標的富化プライマーの第二対の各々は5’末端に標的増幅プライマーの1つの配列に対応するスーパープライマー結合タグを含む。);及び
iv)第一増幅反応が複数の第一増幅産物を生産するような、第一増幅反応のための増幅試薬と条件(前記第一増幅産物の少なくとも部分はスーパープライマー結合タグの少なくとも1つの相補物を含み、これにより少なくとも1つのスーパープライマー結合部位を形成する。)
を使用する。]、及び
b.第二増幅反応[前記第二増幅反応は、
i)鋳型としての、前記少なくとも1つのスーパープライマー結合部位を含む第一増幅産物の前記部分;
ii)第一増幅産物の前記部分上の前記スーパープライマー結合部位に結合する、前記標的増幅プライマーの第一対;及び
iii)第二増幅反応が少なくとも1つの標的配列を含む複数の第二増幅産物を生産するような、第二増幅反応のための増幅試薬と条件
を使用する。]
を含む、前記方法。 - 前記標的富化プライマーの第一対がRo及びFoプライマーを含み、前記標的富化プライマーの第二対がFi及びRiプライマーを含み、及び前記標的増幅プライマーの第一対がFSPとRSPを含む、請求項1に記載の方法。
- Fi上の前記スーパープライマー結合タグが、FSPが前記Fiプライマー上のスーパープライマー結合タグの相補物に結合するように、FSPの配列と同一であり、及びRi上の前記スーパープライマー結合タグが、RSPが前記Riプライマー上のスーパープライマー結合タグの相補物に結合するように、RSPの配列と同一である、請求項2に記載の方法。
- 標的富化プライマーの第一対の各々の長さが、10−40ヌクレオチド、10−30ヌクレオチド及び10−20ヌクレオチドから成る群より選択される、請求項1に記載の方法。
- 標的富化プライマーの第二対の各々の長さが、10−40ヌクレオチド、10−30ヌクレオチド及び10−20ヌクレオチドから成る群より選択される、請求項1に記載の方法。
- 標的富化プライマーの第一対の各々の長さが10−20ヌクレオチドであり、及び標的富化プライマーの第二対の各々の長さが30−40ヌクレオチドである、請求項1に記載の方法。
- 標的増幅プライマーの第一対の各々の長さが10−20ヌクレオチドであり、及び標的富化プライマーの第二対の各々の長さが30−40ヌクレオチドである、請求項1に記載の方法。
- 標的富化プライマーが低濃度で存在し、及び標的増幅プライマーが高濃度で存在する、請求項1に記載の方法。
- 前記低濃度が0.002μM−0.2μMの濃度であり、及び前記高濃度が0.2μM−1.0μMの濃度である、請求項8に記載の方法。
- 標的富化プライマーが標的配列の対数増幅には十分でない濃度で存在し、及び標的増幅プライマーが標的配列の対数増幅に十分な濃度で存在する、請求項1に記載の方法。
- 標的富化プライマーの各々が同じ濃度で使用する、請求項1に記載の方法。
- 標的富化プライマーの少なくとも1つを他の標的富化プライマーより高い濃度で使用する、請求項1に記載の方法。
- 標的増幅プライマーの各々が同じ濃度で使用される、請求項1に記載の方法。
- 標的増幅プライマーの少なくとも1つが、他の標的増幅プライマーより高い濃度で使用される、請求項1に記載の方法。
- より高濃度の前記標的増幅プライマーが検出のための手段を含む、請求項14に記載の方法。
- 前記第一増幅反応についての条件が標的富化工程の少なくとも2回の完全なサイクルを含み、及び前記第二増幅工程についての条件が標的増幅工程の少なくとも2回の完全なサイクルを含む、請求項1に記載の方法。
- 標的富化工程が増幅に関する以下の条件:92−94℃における0.5−1分間、50−55℃における1−2.5分間及び70−72℃における0.5−1分間を含み、及び標的増幅工程が増幅に関する以下の条件:94℃における15−30秒間、50−55℃における15−30秒間及び72℃における15−30秒間を含む、請求項16に記載の方法。
- 前記第一増幅反応についての条件が標的富化工程の少なくとも2回の完全なサイクル及び選択的増幅工程の少なくとも2回の完全なサイクルを含み、及び前記第二増幅工程についての条件が標的増幅工程の少なくとも2回の完全なサイクルを含む、請求項1に記載の方法。
- 標的富化工程が増幅に関する以下の条件:92−94℃における0.5−1分間、50−55℃における1−2.5分間及び70−72℃における0.5−1分間を含み、選択的増幅工程が増幅に関する以下の条件:92−94℃における15−30秒間、70−72℃における1−2分間を含み、及び標的増幅工程が増幅に関する以下の条件:94℃における15−30秒間、50−55℃における15−30秒間及び72℃における15−30秒間を含む、請求項18に記載の方法。
- 前記選択的増幅が、スーパープライマー結合部位を含む第一増幅産物の生産の方に偏る、請求項19に記載の方法。
- 標的富化プライマーの第一対の各々の長さが10−20ヌクレオチドであり、及び標的富化プライマーの第二対の各々の長さが30−40ヌクレオチドである、請求項19に記載の方法。
- 3又はそれ以上の標的富化プライマー対をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 2又はそれ以上の標的増幅プライマー対をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記病原因子が、ウイルス及び細菌から成る群より選択される、請求項24に記載の方法。
- 前記病原因子が、アデノウイルス、インフルエンザA型、インフルエンザB型、パラインフルエンザ1型、パラインフルエンザ3型及び呼吸器合胞体ウイルス、SARS、及び(コクサッキーウイルスA型、コクサッキーウイルスB型、ライノウイルス及びエコーウイルスを含む)エンテロウイルスから成る群より選択されるウイルスである、請求項24に記載の方法。
- 前記病原因子が、マイコプラスマ(Mycoplasma)種及びクラミジア(Chlamydia)種から成る群より選択される細菌である、請求項24に記載の方法。
- 前記病原因子が、標的富化プライマーの第一対及び第二対の適切な設計によって選択される、請求項24に記載の方法。
- 前記正又は逆スーパープライマーの少なくとも1つが、検出のための手段をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記検出のための手段が、化学的エレメント、酵素エレメント、蛍光エレメント又は放射標識エレメントから成る群より選択される、請求項28に記載の方法。
- 前記標的配列を検出することをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 検出方法が直接検出方法である、請求項30に記載の方法。
- 前記検出方法が、
a.検出オリゴヌクレオチドの少なくとも一つのセットを提供すること(検出オリゴヌクレオチドの各々のセットは、前記増幅産物内の特定標的配列に結合することができるヌクレオチド配列を有し、及びシグナル生成のための第一手段を含む。);
b.前記検出オリゴヌクレオチドを、前記第二増幅産物と接触させ、インキュベートすること;
c.シグナル生成のための前記第一手段を刺激して、第一シグナルを生産すること;及び
d.前記第一シグナルを検出すること
を含む、請求項30に記載の方法。 - 前記第一シグナルが前記病原因子にユニークであり、及び前記第一シグナルが前記病原因子を特定するために使用される、請求項32に記載の方法。
- 第一シグナル生成のための前記手段が、蛍光標識、化学標識、酵素標識又は放射標識である、請求項32に記載の方法。
- 第一シグナル生成のための前記手段が蛍光ミクロスフェアである、請求項32に記載の方法。
- 前記方法が間接検出方法である、請求項30に記載の方法。
- 多重プライマーに基づく、少なくとも1つの標的配列の増幅のための方法であって、
前記増幅を、標的富化プライマーの少なくとも第一対及び標的増幅プライマー(前記標的増幅プライマーはFSP及びRSPを含む。)の少なくとも第一対を含む反応混合物中にて行うことを含み、並びに
a.第一増幅反応[前記第一増幅反応は、
i)鋳型としての、少なくとも1つの標的配列を含む核酸;
ii)前記核酸にハイブリダイズし、前記標的配列を囲う前記標的富化プライマーの第一対(前記標的富化プライマーの第一対の各々は5’末端に標的増幅プライマーの1つの配列に対応するスーパープライマー結合タグを含む。);及び
iii)第一増幅反応が複数の第一増幅産物を生産するような、第一増幅反応のための増幅試薬と条件(第一増幅産物の少なくとも部分はスーパープライマー結合タグの少なくとも1つの相補物を含み、これにより少なくとも1つのスーパープライマー結合部位を形成する。);
を使用する。]、及び
b.第二増幅反応[前記第二増幅反応は、
i)鋳型としての、前記少なくとも1つのスーパープライマー結合部位を含む第一増幅産物の前記部分;
ii)第一増幅産物の前記部分上の前記スーパープライマー結合部位に結合する、前記標的増幅プライマーの第一対;及び
iii)第二増幅反応が標的配列を含む複数の第二増幅産物を生産するような、第二増幅反応のための増幅試薬と条件;
を使用する。]
を含む、前記方法。 - 前記標的富化プライマーの第一対がFi及びRiプライマーを含み、及び前記標的増幅プライマーの第一対がFSPとRSPを含む、請求項37に記載の方法。
- Fi上の前記スーパープライマー結合タグが、FSPが前記Fiプライマー上のスーパープライマー結合タグの相補物に結合するように、FSPの配列と同一であり、及びRi上のスーパープライマー結合タグが、RSPが前記Riプライマー上のスーパープライマー結合タグの相補物に結合するように、RSPの配列と同一である、請求項38に記載の方法。
- 標的富化プライマーの第一対の各々の長さが、10−40ヌクレオチド、10−30ヌクレオチド及び10−20ヌクレオチドから成る群より選択される、請求項37に記載の方法。
- 標的富化プライマーが低濃度で存在し、及び標的増幅プライマーが高濃度で存在する、請求項37に記載の方法。
- 前記低濃度が0.002μM−0.2μMの濃度であり、及び前記高濃度が0.2μM−1.0μMの濃度である、請求項41に記載の方法。
- 標的富化プライマーが標的配列の対数増幅には十分でない濃度で存在し、及び標的増幅プライマーが標的配列の対数増幅に十分な濃度で存在する、請求項37に記載の方法。
- 標的富化プライマーの各々が同じ濃度で使用される、請求項37に記載の方法。
- 標的富化プライマーの少なくとも1つが他の標的富化プライマーより高い濃度で使用する、請求項37に記載の方法。
- 標的増幅プライマーの各々が同じ濃度で使用される、請求項37に記載の方法。
- 標的増幅プライマーの少なくとも1つが、他の標的増幅プライマーより高い濃度で使用される、請求項37に記載の方法。
- より高濃度の前記標的増幅プライマーが検出のための手段を含む、請求項47に記載の方法。
- 前記第一増幅反応についての条件が標的富化工程の少なくとも2回の完全なサイクルを含み、及び前記第二増幅工程についての条件が標的増幅工程の少なくとも2回の完全なサイクルを含む、請求項37に記載の方法。
- 標的富化工程が増幅に関する以下の条件:92−94℃における0.5−1分間、50−55℃における1−2.5分間及び70−72℃における0.5−1分間を含み、及び標的増幅工程が増幅に関する以下の条件:94℃における15−30秒間、50−55℃における15−30秒間及び72℃における15−30秒間を含む、請求項49に記載の方法。
- 前記第一増幅反応についての条件が標的富化工程の少なくとも2回の完全なサイクル及び選択的増幅工程の少なくとも2回の完全なサイクルを含み、及び前記第二増幅工程についての条件が標的増幅工程の少なくとも2回の完全なサイクルを含む、請求項37に記載の方法。
- 標的富化工程が増幅に関する以下の条件:92−94℃における0.5−1分間、50−55℃における1−2.5分間及び70−72℃における0.5−1分間を含み、選択的増幅工程が増幅に関する以下の条件:92−94℃における15−30秒間、70−72℃における1−2分間を含み、及び標的増幅工程が増幅に関する以下の条件:94℃における15−30秒間、50−55℃における15−30秒間及び72℃における15−30秒間を含む、請求項51に記載の方法。
- 前記選択的増幅が、スーパープライマー結合部位を含む第一増幅産物の生産の方に偏る、請求項52に記載の方法。
- 標的富化プライマーの第一対の各々の長さが10−20ヌクレオチドであり、及び標的富化プライマーの第二対の各々の長さが30−40ヌクレオチドである、請求項52に記載の方法。
- 2又はそれ以上の標的増幅プライマー対をさらに含む、請求項37に記載の方法。
- 前記病原因子が、ウイルス及び細菌から成る群より選択される、請求項37に記載の方法。
- 前記病原因子が、アデノウイルス、インフルエンザA型、インフルエンザB型、パラインフルエンザ1型、パラインフルエンザ3型及び呼吸器合胞体ウイルス、SARS、及び(コクサッキーウイルスA型、コクサッキーウイルスB型、ライノウイルス及びエコーウイルスを含む)エンテロウイルスから成る群より選択されるウイルスである、請求項37に記載の方法。
- 前記病原因子が、マイコプラスマ(Mycoplasma)種及びクラミジア(Chlamydia)種から成る群より選択される細菌である、請求項37に記載の方法。
- 前記病原因子が、標的富化プライマーの第一対及び第二対の適切な設計によって選択される、請求項37に記載の方法。
- 前記正又は逆スーパープライマーの少なくとも1つが、検出のための手段をさらに含む、請求項37に記載の方法。
- 前記検出のための手段が、化学的エレメント、酵素エレメント、蛍光エレメント又は放射標識エレメントから成る群より選択される、請求項60に記載の方法。
- 前記標的配列を検出することをさらに含む、請求項37に記載の方法。
- 検出方法が直接検出方法である、請求項62に記載の方法。
- 前記検出方法が、
a.検出オリゴヌクレオチドの少なくとも一つのセットを提供すること(検出オリゴヌクレオチドの各々のセットは、前記増幅産物内の特定標的配列に結合することができるヌクレオチド配列を有し、及びシグナル生成のための第一手段を含む。);
b.前記検出オリゴヌクレオチドを、前記第二増幅産物と接触させ、インキュベートすること;
c.シグナル生成のための前記第一手段を刺激して、第一シグナルを生産すること;及び
d.前記第一シグナルを検出すること
を含む、請求項62に記載の方法。 - 前記第一シグナルが前記病原因子に特有であり、及び前記第一シグナルが前記病原因子を特定するために使用される、請求項64に記載の方法。
- 第一シグナル生成のための前記手段が、蛍光標識、化学標識、酵素標識又は放射標識である、請求項64に記載の方法。
- 第一シグナル生成のための前記手段が蛍光ミクロスフェアである、請求項64に記載の方法。
- 前記方法が間接検出方法である、請求項62に記載の方法。
- a.診断を必要とする被験者から、疾患因子を含むことが疑われる試料を提供すること;
b.前記試料から、前記疾患因子からの標的配列を含む核酸を単離すること;
c.前記核酸を、請求項1又は37のいずれかに記載のプライマーに基づく増幅方法に供すること;
d.前記疾患因子からの前記標的配列を検出すること
を含む、被験者において疾患因子の存在を診断する方法。 - 疾患因子が、ウイルス及び細菌から成る群より選択される、請求項69に記載の方法。
- 前記疾患因子が、アデノウイルス、インフルエンザA型、インフルエンザB型、パラインフルエンザ1型、パラインフルエンザ3型及び呼吸器合胞体ウイルス、SARS、及び(コクサッキーウイルスA型、コクサッキーウイルスB型、ライノウイルス及びエコーウイルスを含む)エンテロウイルスから成る群より選択されるウイルスである、請求項69に記載の方法。
- 前記疾患因子が、マイコプラスマ菌種及びクラミジア菌種から成る群より選択される細菌である、請求項69に記載の方法。
- 検出方法が直接検出方法である、請求項69に記載の方法。
- 前記検出方法が、
a.検出オリゴヌクレオチドの少なくとも一つのセットを提供すること(検出オリゴヌクレオチドの各々のセットは、前記増幅産物内の特定標的配列に結合することができるヌクレオチド配列を有し、及びシグナル生成のための第一手段を含む。);
b.前記検出オリゴヌクレオチドを、前記第二増幅産物と接触させ、インキュベートすること;
c.シグナル生成のための前記第一手段を刺激して、第一シグナルを生産すること;及び
d.前記第一シグナルを検出すること
を含む、請求項69に記載の方法。 - 前記第一シグナルが前記疾患因子に特有であり、及び前記第一シグナルが前記疾患因子を特定するために使用される、請求項74に記載の方法。
- 第一シグナル生成のための前記手段が、蛍光標識、化学標識、酵素標識又は放射標識である、請求項74に記載の方法。
- 第一シグナル生成のための前記手段が蛍光ミクロスフェアである、請求項74に記載の方法。
- 前記方法が間接検出方法である、請求項69に記載の方法。
- a.診断を必要とする被験者から、疾患因子又は二次疾患因子を含むことが疑われる試料を提供すること;
b.前記試料から、前記疾患因子又は二次疾患因子又はこの両方からの標的配列を含む核酸を単離すること;
c.前記核酸を、請求項1又は38のいずれかに記載のプライマーに基づく増幅方法に供すること;
d.前記疾患因子又は二次疾患因子からの前記標的配列を検出すること
を含む、被験者において疾患因子及び二次疾患因子の存在を鑑別的に診断するための方法。 - 疾患因子又は二次疾患因子が、ウイルス及び細菌から成る群より選択される、請求項79に記載の方法。
- 前記疾患因子又は二次疾患因子が、アデノウイルス、インフルエンザA型、インフルエンザB型、パラインフルエンザ1型、パラインフルエンザ3型及び呼吸器合胞体ウイルス、SARS、及び(コクサッキーウイルスA型、コクサッキーウイルスB型、ライノウイルス及びエコーウイルスを含む)エンテロウイルスから成る群より選択されるウイルスである、請求項79に記載の方法。
- 前記疾患因子又は二次疾患因子が、マイコプラスマ(Mycoplasma)種及びクラミジア(Chlamydia)種から成る群より選択される細菌である、請求項79に記載の方法。
- 検出方法が直接検出方法である、請求項79に記載の方法。
- 前記検出方法が、
a.検出オリゴヌクレオチドの少なくとも一つのセットを提供すること(検出オリゴヌクレオチドの各々のセットは、前記増幅産物内の特定標的配列に結合することができるヌクレオチド配列を有し、及びシグナル生成のための第一手段を含む。);
b.前記検出オリゴヌクレオチドを、前記第二増幅産物と接触させ、インキュベートすること;
c.シグナル生成のための前記第一手段を刺激して、第一シグナルを生産すること;及び
d.前記第一シグナルを検出すること
を含む、請求項79に記載の方法。 - 前記第一シグナルが前記疾患因子及び二次疾患因子に特有であり、及び前記第一シグナルが前記疾患因子を特定するために使用される、請求項84に記載の方法。
- 第一シグナル生成のための前記手段が、蛍光標識、化学標識、酵素標識又は放射標識である、請求項84に記載の方法。
- 第一シグナル生成のための前記手段が蛍光ミクロスフェアである、請求項84に記載の方法。
- 前記方法が間接検出方法である、請求項79に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US51076203P | 2003-10-13 | 2003-10-13 | |
US60/510,762 | 2003-10-13 | ||
PCT/US2004/033818 WO2005038039A2 (en) | 2003-10-13 | 2004-10-13 | Method for multiplex primer based amplification of nucleic acids |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2007508824A true JP2007508824A (ja) | 2007-04-12 |
JP2007508824A5 JP2007508824A5 (ja) | 2009-07-23 |
JP4999460B2 JP4999460B2 (ja) | 2012-08-15 |
Family
ID=34465146
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006535636A Expired - Fee Related JP4999460B2 (ja) | 2003-10-13 | 2004-10-13 | 核酸のプライマーに基づく増幅のための方法及びキット |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7851148B2 (ja) |
EP (1) | EP1687437A4 (ja) |
JP (1) | JP4999460B2 (ja) |
KR (1) | KR100830623B1 (ja) |
CN (1) | CN1898395B (ja) |
AU (1) | AU2004282555B2 (ja) |
BR (1) | BRPI0415435A (ja) |
CA (1) | CA2542787C (ja) |
NZ (1) | NZ546903A (ja) |
WO (1) | WO2005038039A2 (ja) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010528592A (ja) * | 2007-06-01 | 2010-08-26 | モノクアント・ピーティーワイ・リミテッド | Dna切断点の分析のための方法 |
JP2013528049A (ja) * | 2010-05-19 | 2013-07-08 | キアゲン ガイサーズバーグ アイエヌシー. | 核酸の配列特異的な精製及び多重分析のための方法及び組成物 |
JP2013529898A (ja) * | 2010-05-07 | 2013-07-25 | ジーンマトリックス インコーポレイテッド | 標的遺伝子の多様な変異が存在する遺伝子領域を増幅するためのプライマー組成物 |
Families Citing this family (31)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2471805A3 (en) | 2005-05-06 | 2013-01-16 | Gen-Probe Incorporated | Compositions and assays to specifically detect nucleic acid of influenza virus A or B |
KR20080047355A (ko) * | 2005-07-06 | 2008-05-28 | 바이오칩 이노베이션즈 피티와이 리미티드 | 표적 핵산 서열 분석 방법 및 키트 |
US20080053911A1 (en) * | 2006-08-30 | 2008-03-06 | Qiagen Gmbh | Separation of an organic phase from a mixture comprising organic and aqueous phases by solid phase systems |
WO2008080029A2 (en) * | 2006-12-21 | 2008-07-03 | Gen-Probe Incorporated | Methods and compositions for nucleic acid amplification |
GB0703996D0 (en) * | 2007-03-01 | 2007-04-11 | Oxitec Ltd | Nucleic acid detection |
EP2193208B1 (en) * | 2007-10-22 | 2016-04-20 | Monoquant PTY LTD | A method of dna amplification |
LT2271767T (lt) * | 2008-04-03 | 2016-09-26 | Cb Biotechnologies, Inc. | Amplikoną atstatanti daugybinė polimerazės grandininė reakcija skirta kelių taikinių padauginimui |
US9012148B2 (en) * | 2008-04-16 | 2015-04-21 | Jian Han | Method for evaluating and comparing immunorepertoires |
CN102203287B (zh) * | 2008-08-26 | 2017-09-19 | 弗卢迪格姆公司 | 增加样本和/或靶通量的测定方法 |
EP2414547B1 (en) | 2009-04-02 | 2014-03-12 | Fluidigm Corporation | Multi-primer amplification method for barcoding of target nucleic acids |
AU2010266234B2 (en) | 2009-07-01 | 2013-07-25 | Gen-Probe Incorporated | Methods and compositions for nucleic acid amplification |
US9416419B2 (en) | 2009-11-16 | 2016-08-16 | Michael E. Hogan | Methods for PCR and HLA typing using unpurified samples |
US8771951B2 (en) * | 2009-11-16 | 2014-07-08 | Genomics Usa, Inc. | Methods for PCR and HLA typing using raw blood |
CN102286612B (zh) * | 2010-06-18 | 2014-10-22 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 一种致病微生物快速检测试剂盒 |
WO2012162267A2 (en) | 2011-05-20 | 2012-11-29 | Fluidigm Corporation | Nucleic acid encoding reactions |
US9115394B2 (en) | 2011-12-22 | 2015-08-25 | Roche Molecular Systems, Inc. | Methods and reagents for reducing non-specific amplification |
WO2013122826A1 (en) * | 2012-02-14 | 2013-08-22 | Gnubio, Inc. | Cascaded addition of target specific universal adapters to nucleic acids |
CN104471077B (zh) | 2012-05-21 | 2017-05-24 | 富鲁达公司 | 颗粒群的单颗粒分析 |
DK2890814T3 (da) | 2012-08-30 | 2019-12-16 | Gen Probe Inc | Flerfaset nukleinsyreamplificering |
CN104250663B (zh) * | 2013-06-27 | 2017-09-15 | 北京大学 | 甲基化CpG岛的高通量测序检测方法 |
CN103981278B (zh) * | 2014-06-06 | 2015-08-19 | 黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 利用Tem-PCR技术检测多种致病菌的PCR检测通用引物对 |
CA3006994A1 (en) | 2015-12-16 | 2017-06-22 | Fluidigm Corporation | High-level multiplex amplification |
CN105543410B (zh) * | 2015-12-25 | 2019-06-07 | 四川农业大学 | 基于tem-pcr和基因芯片检测猪病毒性疾病的方法 |
CN106834546A (zh) * | 2017-03-20 | 2017-06-13 | 杭州迪安医学检验中心有限公司 | 一种基于熔解曲线法单管同时检测多种呼吸道病毒的引物及其应用 |
US20180340214A1 (en) * | 2017-05-25 | 2018-11-29 | Diatherix Laboratories, Inc. | Quantitative multiplex polymerase chain reaction in two reactions |
CN111206081B (zh) * | 2018-11-21 | 2023-06-30 | 思纳福(苏州)生命科技有限公司 | 核酸检测微球、制备方法、试剂盒及高通量核酸检测方法 |
CN109609615A (zh) * | 2018-12-06 | 2019-04-12 | 云南中医学院 | 一种缺血性脑卒中miRNA标记物的检测方法 |
CN109609693A (zh) * | 2018-12-26 | 2019-04-12 | 山东艾克韦生物技术有限公司 | 一种同时检测多种肠道病毒的方法 |
CN109913592A (zh) * | 2019-04-30 | 2019-06-21 | 广西大学 | ENTV-2的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测引物对及诊断试剂盒 |
CN112593011A (zh) * | 2020-12-25 | 2021-04-02 | 中山大学 | 一组检测柯萨奇病毒b组的引物和探针 |
CN113637799B (zh) * | 2021-08-12 | 2023-09-29 | 北京农业生物技术研究中心 | 一种菊花b病毒的rpa检测方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000510337A (ja) * | 1996-05-04 | 2000-08-15 | ゼネカ・リミテッド | 核酸塩基配列の検出方法 |
JP2002542837A (ja) * | 1999-04-30 | 2002-12-17 | タカラバイオ株式会社 | 核酸の増幅方法 |
US20030096277A1 (en) * | 2001-08-30 | 2003-05-22 | Xiangning Chen | Allele specific PCR for genotyping |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
US5194300A (en) * | 1987-07-15 | 1993-03-16 | Cheung Sau W | Methods of making fluorescent microspheres |
JPH0491790A (ja) | 1990-08-02 | 1992-03-25 | Shionogi & Co Ltd | 2段階pcr法 |
US5341809A (en) * | 1990-08-31 | 1994-08-30 | Hitachi, Ltd. | Ultrasonic flowmeter |
EP0519338B1 (en) * | 1991-06-20 | 1996-08-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Improved methods for nucleic acid amplification |
EP0530009B1 (en) * | 1991-08-27 | 1999-01-13 | Zeneca Limited | Method of characterising genomic DNA |
US5340728A (en) | 1992-12-09 | 1994-08-23 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method for amplification of targeted segments of nucleic acid using nested polymerase chain reaction |
US5422252A (en) | 1993-06-04 | 1995-06-06 | Becton, Dickinson And Company | Simultaneous amplification of multiple targets |
WO1995003430A1 (en) | 1993-07-23 | 1995-02-02 | Gen-Probe Incorporated | Methods for enhancing nucleic acid amplification |
US5882856A (en) * | 1995-06-07 | 1999-03-16 | Genzyme Corporation | Universal primer sequence for multiplex DNA amplification |
US5642825A (en) * | 1995-08-21 | 1997-07-01 | Superseal Corporation | Container closure having peripheral tamper-indicator |
EP0932702B1 (en) | 1996-10-02 | 2002-12-11 | The Government of the United States represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services | Detection and identification of non-polio enteroviruses |
US6509157B1 (en) | 1999-11-05 | 2003-01-21 | Roche Molecular Systems, Inc | 3 blocked nucleic acid amplification primers |
US6605451B1 (en) | 2000-06-06 | 2003-08-12 | Xtrana, Inc. | Methods and devices for multiplexing amplification reactions |
US6566067B2 (en) | 2001-02-14 | 2003-05-20 | Synthegen Systems, Inc. | High fidelity PCR cloning |
RU2329305C2 (ru) * | 2001-03-01 | 2008-07-20 | Дзе Джонс Хопкинс Юниверсити | Количественный анализ, позволяющий одновременно обнаруживать и идентифицировать бактериальные инфекции |
AU2002305436A1 (en) | 2001-05-09 | 2002-11-18 | Virginia Commonwealth University | Multiple sequencible and ligatible structures for genomic analysis |
DE60216777T2 (de) * | 2001-08-23 | 2007-10-31 | Merck & Co., Inc. | Multiplex-hpv-pcr-fluoreszenzassays unter verwendung mehrerer fluorophore |
US7153656B2 (en) | 2001-09-11 | 2006-12-26 | Los Alamos National Security, Llc | Nucleic acid sequence detection using multiplexed oligonucleotide PCR |
CN1697882A (zh) | 2001-11-19 | 2005-11-16 | 帕拉里勒生物科学公司 | 多重pcr |
AU2003205817A1 (en) * | 2002-01-15 | 2003-07-30 | Matforsk | Methods of nucleic acid amplification |
DK1474529T3 (da) | 2002-02-08 | 2009-02-23 | Olympus Corp | Specifik multipleksanalyse af nucleinsyrer |
-
2004
- 2004-10-13 WO PCT/US2004/033818 patent/WO2005038039A2/en active Application Filing
- 2004-10-13 EP EP04795037A patent/EP1687437A4/en not_active Ceased
- 2004-10-13 NZ NZ546903A patent/NZ546903A/en not_active IP Right Cessation
- 2004-10-13 KR KR1020067009208A patent/KR100830623B1/ko active IP Right Grant
- 2004-10-13 US US10/575,804 patent/US7851148B2/en active Active
- 2004-10-13 CN CN200480037162.7A patent/CN1898395B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2004-10-13 AU AU2004282555A patent/AU2004282555B2/en not_active Ceased
- 2004-10-13 BR BRPI0415435-5A patent/BRPI0415435A/pt not_active IP Right Cessation
- 2004-10-13 JP JP2006535636A patent/JP4999460B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2004-10-13 CA CA2542787A patent/CA2542787C/en not_active Expired - Lifetime
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2000510337A (ja) * | 1996-05-04 | 2000-08-15 | ゼネカ・リミテッド | 核酸塩基配列の検出方法 |
JP2002542837A (ja) * | 1999-04-30 | 2002-12-17 | タカラバイオ株式会社 | 核酸の増幅方法 |
US20030096277A1 (en) * | 2001-08-30 | 2003-05-22 | Xiangning Chen | Allele specific PCR for genotyping |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010528592A (ja) * | 2007-06-01 | 2010-08-26 | モノクアント・ピーティーワイ・リミテッド | Dna切断点の分析のための方法 |
US9145587B2 (en) | 2007-06-01 | 2015-09-29 | Monoquant Pty Ltd | Method for DNA breakpoint analysis |
JP2013529898A (ja) * | 2010-05-07 | 2013-07-25 | ジーンマトリックス インコーポレイテッド | 標的遺伝子の多様な変異が存在する遺伝子領域を増幅するためのプライマー組成物 |
JP2013528049A (ja) * | 2010-05-19 | 2013-07-08 | キアゲン ガイサーズバーグ アイエヌシー. | 核酸の配列特異的な精製及び多重分析のための方法及び組成物 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2542787C (en) | 2013-10-29 |
JP4999460B2 (ja) | 2012-08-15 |
EP1687437A4 (en) | 2008-01-02 |
EP1687437A2 (en) | 2006-08-09 |
AU2004282555A1 (en) | 2005-04-28 |
NZ546903A (en) | 2009-06-26 |
KR20060088128A (ko) | 2006-08-03 |
CN1898395A (zh) | 2007-01-17 |
WO2005038039A2 (en) | 2005-04-28 |
AU2004282555B2 (en) | 2009-05-28 |
BRPI0415435A (pt) | 2006-12-05 |
CA2542787A1 (en) | 2005-04-28 |
US20070141575A1 (en) | 2007-06-21 |
CN1898395B (zh) | 2014-02-12 |
US7851148B2 (en) | 2010-12-14 |
KR100830623B1 (ko) | 2008-05-20 |
WO2005038039A3 (en) | 2006-09-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4999460B2 (ja) | 核酸のプライマーに基づく増幅のための方法及びキット | |
US20240068015A1 (en) | Nucleic Acid Detection System And Method For Detecting Influenza | |
EP2140033B1 (en) | System and method for high resolution analysis of nucleic acids to detect sequence variations | |
CN103946397B (zh) | 用于通用实时多重分析检测的双功能寡核苷酸探针 | |
CA2692633C (en) | Method for the simultaneous detection of multiple nucleic acid sequences in a sample | |
JP2005511030A (ja) | 核酸の増幅方法 | |
JP2021118716A (ja) | マイコプラズマ・ジェニタリウムを検出するための組成物と方法 | |
JP2020092721A (ja) | ターゲット核酸検出のための二重プローブアッセイ | |
JP6181742B2 (ja) | Hevアッセイ | |
KR102323375B1 (ko) | 다중 프로브 | |
JP2023518217A (ja) | 標的核酸を検出するためのループプライマー及びループ・デ・ループ方法 | |
JP2020533974A (ja) | 呼吸器合胞体ウイルス種のニッキング及び伸長増幅反応(near) | |
WO2006132601A1 (en) | Diagnostic primers and method for detecting avian influenza virus subtype h5 and h5n1 | |
EP3387149A1 (en) | Isothermal amplification for the detection of influenza viruses in a sample | |
WO2012009464A2 (en) | Detection of nucleic acids by agglutination | |
US20230220499A1 (en) | Methods and compositions for detecting sars-cov-2 nucleic acid | |
WO2023205648A1 (en) | Use of exonuclease iii and probe for sensitive and specific lateral-flow-assay detection of amplification amplicons | |
JP2024506277A (ja) | 脱塩基核酸を有する配列変換及びシグナル増幅dna、並びにそれを使用する検出方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A524 | Written submission of copy of amendment under article 19 pct |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A524 Effective date: 20071009 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20071009 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090605 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20101012 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20110106 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20110114 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110408 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120117 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120411 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120508 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120515 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4999460 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150525 Year of fee payment: 3 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |