JP2007502102A5

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Publication number: JP2007502102A5
Application number: JP2006522868A
Authority: JP
Filing date: 2004-08-16
Publication date: 2007-10-04
Anticipated expiration: 2024-08-16

Claims

（ａ）配列番号２、１２、１４、１６、１８、２０、２２、または２７記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
（ｂ）配列番号１、１１、１３、１５、１７、１９、２１、または２６記載のヌクレオチド酸配列を含むポリヌクレオチド
（ｃ）配列番号７および８記載のプライマーセットと、鋳型として微生物由来のゲノムＤＮＡとを用いた、ＰＣＲのような核酸増幅手段によって得られるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチド
（ｄ）（ａ）〜（ｃ）のいずれかに記載のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドの断片または派生物をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドであって、
前記派生物においては、前記ポリペプチドと比較して、１または２以上のアミノ酸残基が保存的に置換され、
前記断片または前記派生物は、Ｌ−ソルボソンデヒドロゲナーゼ活性を有する、
ポリヌクレオチド
（ｅ）ストリンジェントな条件下で、相補鎖が（ａ）〜（ｄ）のいずれかで定義されたポリヌクレオチドにハイブリダイズする、ポリヌクレオチド；および
（ｆ）少なくとも１００個の連続するヌクレオチドを比較して、（ａ）〜（ｄ）のいずれかで定義されたポリヌクレオチドに対して少なくとも６０％の相同性を有するポリヌクレオチド、
からなる群から選択される、Ｌ−ソルボソンデヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
または、
前記ポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチド。
配列番号１記載の塩基配列のうち少なくとも５０個の連続するヌクレオチドを有する、請求項１記載のポリヌクレオチドの断片。
請求項１または２記載のポリヌクレオチドにコードされるポリペプチド。
請求項１記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
請求項１または２記載のポリヌクレオチド、および／または請求項４記載の発現ベクターで形質転換された組換え生物であって、
真菌細胞、植物細胞、動物細胞および細菌細胞からなる群より選択される、組換え生物。
生物がグルコノバクター（Gluconobacter）、アセトバクター（Acetobacter）、シュードモナス（Pseudomonas）およびエシェリキア（Escherichia）からなる群より選択される
属の細菌である、請求項５記載の組換え生物。
Ｄ−ソルビトール、Ｌ−ソルボースおよびＬ−ソルボソンより選択される基質からのＬ−アスコルビン酸の製造方法であって、
（ａ）適切な培地中で、（ｉ）請求項５または６の生物の組換え体を増殖させるか、（ｉｉ）請求項３記載のポリペプチドをコードする非組換え微生物を増殖させるか、または（ｉｉｉ）前記基質を、請求項３記載の単離され、精製されたポリペプチドと接触させ；
（ｂ）該培地からＬ−アスコルビン酸を回収および分離すること
を含む方法。
Ｄ−ソルビトール、Ｌ−ソルボースおよびＬ−ソルボソンより選択される基質からのＬ−アスコルビン酸の製造方法であって、
（ａ）適切な培地中で請求項５または６記載の組換え生物または請求項３記載のポリペプチドをコードする非組換え微生物を増殖させ；
（ｂ）Ｌ−ソルボソンデヒドロゲナーゼを単離および精製し；
（ｃ）（ｂ）のＬ−ソルボソンデヒドロゲナーゼの存在下で該基質をインキュベートし；そして
（ｄ）反応混合物からＬ−アスコルビン酸を回収および分離すること
を含む方法。
適切な培地中で請求項１または２記載のポリヌクレオチドを含む組換え生物または請求項３記載のポリペプチドをコードする非組換え微生物を増殖し、細胞を破壊し、かつＬ−ソルボソンデヒドロゲナーゼを単離する、Ｌ−ソルボソンデヒドロゲナーゼの製造方法。
微生物の休止細胞を含む培地中で基質をビタミンＣに転換することを含み、産生されるビタミンCの収量が少なくとも１．８g/lである、ビタミンＣの製造方法。
微生物の休止細胞を含む培地中で基質をビタミンＣに転換することを含む、ビタミンＣの製造方法であって、
前記製造方法は、
（ａ）成長を可能にする条件下で微生物を培養し；
（ｂ）該微生物の成長速度を低減して休止細胞をもたらすような条件に変更し；そして
（ｃ）（ｂ）の休止細胞を使用して基質からビタミンＣを産生する
工程を含み、
工程（ａ）および（ｃ）がいかなる洗浄工程および／または単離工程によっても隔てられない、製造方法。
前記微生物は、請求項１または２記載のポリペプチドを含む組換え微生物または非組換え微生物である、請求項１０または１１記載の製造方法。
６００nmでのＯＤとして測定される、培地中の休止細胞の密度が少なくとも１０である、請求項１０〜１２のいずれか１項記載の方法。
微生物が、酵母、藻類、および細菌からなる群より選択される、請求項１０〜１３のいずれか１項記載の方法。
微生物が、カンジダ（Candida）、サッカロミセス（Saccharomyces）、チゴサッカロミセス（Zygosaccharomyces）、スキゾサッカロミセス（Scyzosaccharomyces）、クルイベロミセス（Kluyveromyces）、クロレラ（Chlorella）、グルコノバクター、アセトバクターアセチ（Acetobacter aceti）、パントエア（Pantoea）、クリプトコッカス（Cryptococcus）、シュードモナスおよびエシェリキアからなる群、または、請求項５または６記載の組換え生物、より選択される、請求項１０〜１４のいずれか１項記載の方法。
基質が、Ｄ−グルコース、Ｄ−ソルビトール、Ｌ−ソルボース、Ｌ−ソルボソン、２−ケト−Ｌ−グロナート、Ｄ−グルコナート、２−ケト−Ｄ−グルコナートおよび２，５−ジケト−グルコナートからなる群より選択される、請求項１０〜１５のいずれか１項記載の方法。
基質からビタミンＣおよび２−ケト−Ｌ−グロン酸の両方を産生できる微生物を使用し、ビタミンＣおよび２−ＫＧＡの濃度の比が０．１を超える、請求項１０〜１６のいずれか１項記載の方法。
培地からのビタミンＣの単離、および場合により一つまたは複数の精製工程をさらに含む、請求項７、８、および１０〜１７のいずれか１項記載の方法。
すべての精製工程が水性環境で行われる、請求項１８記載の方法。
更に、電気透析を用いて培地中の成分からビタミンＣを分離することを含む、請求項７、８、および１０〜１９のいずれか１項記載の方法。