JP2007500009A5

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Info

Publication number: JP2007500009A5
Application number: JP2006521996A
Authority: JP
Filing date: 2004-07-26
Publication date: 2007-08-30
Anticipated expiration: 2024-07-26

Claims

以下の段階を含む、固定組織試料からRNAを単離するための方法：
(a)固定組織試料を、溶解産物を作製するために、タンパク質を消化する時間の間、ポリアニオンおよびプロテアーゼを含む消化緩衝液と接触させる段階；
(b)最大2Mのグアニジニウム濃度を得るために溶解産物にグアニジニウムを添加する段階；ならびに
(c)グアニジニウムを含む溶解産物からRNAを抽出する段階。
ポリアニオンがポリカルボキシレートを含む、請求項1記載の方法。
ポリカルボキシレートが、クエン酸ナトリウム、1,4-シクロヘキサンジカルボン酸、1,3,5-シクロヘキサンヘキサカルボン酸、イソクエン酸、およびコハク酸からなる群より選択される、請求項1記載の方法。
消化緩衝液が、約500 μg/mlのプロテイナーゼKと共に、約5%までのSDS、約200 mM TrisCl、pH 7.5、約200 mM NaCl、および約100 mMまでのクエン酸ナトリウムを含む、請求項1記載の方法。
消化緩衝液におけるポリアニオンの濃度が約1 mMと約100 mMの間である、請求項1記載の方法。
消化緩衝液がNaCl、LiCl、またはKClをさらに含む、請求項1記載の方法。
消化緩衝液におけるプロテアーゼがプロテイナーゼKを含む、請求項1記載の方法。
消化緩衝液のpHが約7.0と約9.5の間である、請求項1記載の方法。
固定組織試料および消化緩衝液の比率が、約1グラムの組織/5 ml 消化緩衝液から約1グラムの組織/25 ml 消化緩衝液までである、請求項1記載の方法。
接触させる段階が約40℃と約55℃の間の温度である、請求項1記載の方法。
グアニジニウムを含む溶解産物からRNAを抽出する段階が以下の段階を含む、請求項1記載の方法：
(d)グアニジニウムを含む溶解産物へアルコール溶液を添加する段階；
(e)アルコールを含む溶解産物を無機物支持体に適用する段階；および
(f)RNAを無機物支持体から溶出溶液で溶出する段階。
溶解産物が適用された後、無機物支持体を洗浄する段階をさらに含む、請求項11記載の方法。
無機物支持体がガラス繊維フィルターまたはガラス繊維カラムを含む、請求項11記載の方法。
溶出溶液がEDTAを含む、請求項11記載の方法。
溶出溶液が約80℃と約100℃の間の温度である、請求項11記載の方法。
アルコールを含む溶解産物へ1つまたは複数の塩を添加する段階をさらに含む、請求項11記載の方法。
ナトリウム塩をグアニジニウムを含む溶解産物へ添加する段階をさらに含む、請求項1記載の方法。
RNAが、フェノールを含む溶液を用いて溶解産物から抽出される、請求項1記載の方法。
増幅反応を用いて溶解産物から抽出されたRNAの量を定量化する段階をさらに含む、請求項1記載の方法。
抽出されたRNAからcDNA分子を生成する段階をさらに含む、請求項1記載の方法。
固定組織試料がパラフィンに包埋される、請求項1記載の方法。
試料からパラフィンを抽出する段階をさらに含む、請求項21記載の方法。
以下の段階を含む、固定組織試料由来の完全長RNAの量を測定するための方法：
(a1)固定組織試料を、溶解産物を作製するために、タンパク質を消化する時間の間、ポリカルボキシレートおよびプロテアーゼを含む消化緩衝液と接触させる段階；
(a2)最大2Mのグアニジニウム濃度を得るために溶解産物にグアニジニウムを添加する段階；ならびに
(b)グアニジニウムを含む溶解産物へアルコール溶液を添加する段階；
(c)アルコールを含む溶解産物を無機物支持体に適用する段階；
(d)完全長RNAを無機物支持体から溶出溶液で溶出する段階；ならびに
(e)溶出されたRNAを増幅する段階。
以下のものを含む、固定組織試料から完全長RNAを単離するためのキット：
(a)溶解産物を作製するためのポリカルボキシレートおよびプロテアーゼを含む消化緩衝液；ならびに
(b)ガラス繊維フィルターまたはガラス繊維カラム。
消化緩衝液が以下のものを含む、請求項24記載のキット：約5%までのSDS、約200 mM TrisCl、pH 7.5、約200 mM NaCl、約100 mMまでのクエン酸ナトリウム、および約500 μg/mlのプロテイナーゼK。