JP2007153840A - 新規化合物ｆ−１４３２９及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

【課題】
新規骨格からなる抗肥満活性を有する薬剤候補化合物を提供すること。
【解決手段】
下記式（Ｉ）で表される化合物等。
【化１】

【選択図】なし

Description

本発明は肥満症若しくはそれに起因する生活習慣病の治療薬として有用な新規化合物Ｆ−１４３２９またはその塩、該化合物の製造方法、該化合物を生産する微生物、該化合物を含有する医薬等に関する。

近年先進諸国において、エネルギーの過剰摂取による肥満症、またそれに起因する糖尿病・高血圧症・虚血性心疾患などいわゆる生活習慣病の増加が問題となっている。中性脂肪（トリグリセリド：ＴＧ)は脂肪細胞における脂肪蓄積の原料であり、そのため肥満に関して重要な役割を果たし、また高トリグリセリド血症は心血管系疾患発症の危険因子である（非特許文献１参照）。通常、食餌によりエネルギーが摂取されると、血液中の中性脂肪含有量（血中ＴＧ値）が一過性に上昇し、一定時間経過後に食前のレベルまで戻るが、過剰のエネルギー摂取により、この食後血中ＴＧ値の正常レベルへの低下が起こらなくなり、定常的に血中ＴＧ値が高い状態となる。この血中の中性脂肪が脂肪細胞に蓄積されることにより肥満症が引き起こされると考えられている。これらの事実から、血中ＴＧ値（特に食後血中ＴＧ値）を減少させる治療法の開発が望まれている。現在までに、血中ＴＧ値を低下させる薬剤として、フィブレート系薬剤、ニコチン酸製剤、エイコサペンタエン酸製剤等が知られている（非特許文献２）が、Ｆ−１４３２９と類似した骨格を有する化合物がこのような活性を有することは知られていない。
Antonio M. GottoJr.著、"ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ・カルディオロジー（The American Journal of Cardiology)"、(1998), Volume 82, Issue 8, Supplement 2, p.22Q-25Q Robert H. Knopp著、「Drug treatment of Lipid Disorders」, "ザ・ニューイングランド・ジャーナル・オブ・メディシン(The New England Journal Of Medicine)", (1999) Volume 341, pp.498-511

本発明者らは、糸状菌培養液中から新規化合物Ｆ−１４３２９を見出し、該化合物を生産するチョーノピクニス（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ）属に属する微生物を単離同定し、該微生物の培養物を用いた該化合物の製造方法を確立した。更に、該化合物が食後血中ＴＧ値の上昇を抑制する活性を有することを見出し、本発明を完成した。

本発明は、
（１）下記式（Ｉ）で表される化合物又はその塩、

（２）下記の１）乃至９）の物理化学的性質を示す化合物又はその塩：
１）性質：無色粉末；
２）溶解性：ジメチルスルホキシド、メタノール、クロロホルムに可溶；
３）分子式：Ｃ_２１Ｈ_２７NＯ_５；
４）分子量：３７３；
５）紫外線吸収スペクトル：λ_max ｎｍ（logε）
メタノール溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは、次の通りである。
２８１ (４．１５)、２２５(４．１０)；
６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）：ν_max ｃｍ^−１
KBｒディスク法で測定した赤外線吸収スペクトルは、次の通りである：
３３２０、２９６４，２９２９、１６９３、１６５３，１６０１，１５１７，１４５２，１３７８，１３５４，１３３５，１２６９，１２３８，１２１７，１１７２，１０９０，１０４７，９６７；
７）^１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル； δ (ppm)
重クロロホルム溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（５００MHz）は、次の通りである。（ＴＭＳのシグナルを0.00 ppmとした。）
メジャーピーク：０．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ），１．０４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ），１．１３（１Ｈ，ｍ），１．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４ Ｈｚ），１．６４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４ Ｈｚ），１．７７（２Ｈ，ｍ），１．９５（１Ｈ，ｍ），３．６５（１Ｈ，ｍ），４．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４ Ｈｚ），４．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４ Ｈｚ），５．３７（１Ｈ，ｍ），５．３９（１Ｈ，ｍ），６．５８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３ Ｈｚ），６．８８（１Ｈ，ｂｒｓ），７．０７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３ Ｈｚ）
マイナーピーク： ０．６１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９ Ｈｚ），１．１１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ），１．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３），１．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４ Ｈｚ），１．６４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４ Ｈｚ），１．７７（２Ｈ，ｍ），１．９５（１Ｈ，ｍ），３．６５（１Ｈ，ｍ），４．２５（１Ｈ，ｂｒｓ），４．９５（１Ｈ，ｂｒｓ），５．３７（１Ｈ，ｍ），５．３９（１Ｈ，ｍ），６．４８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３ Ｈｚ），６．７４（１Ｈ，ｂｒｓ），７．００（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３ Ｈｚ）
８）^１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル； δ (ppm)
重クロロホルム溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（１２５MHz）は、次の通りである。（重クロロホルムのシグナルを７７.0 ppmとした。）
メジャーピーク：１８．０， １８．３， １９．４， ３１．３， ３４．１， ４０．１． ４０．２， ６６．１， ７４．０， １００．５， １１５．４， １２６．６， １２８．５， １２９．１， １２９．３， １５６．３， １７５．７， １９４．２， １９４．４
マイナーピーク： １８．０， １８．６， １９．２， ３１．１， ３３．６， ４０．２， ４０．４， ６４，３， ７３．９， １０４，１， １１５．２， １２６．４， １２８．２， １２８．６， １２９．３， １５６．４， １６９．９， １９５．８， ２００．６
９）比旋光度；
［α］_D ^２５ −２２０° （ｃ １．０、メタノール）、

（３）チョーノピクニス（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ）属に属する（１）乃至（２）のいずれか１項に記載の化合物の生産菌を培養し、その培養物より（１）乃至（２）のいずれか１項に記載の化合物を回収することを特徴とする、（１）乃至（２）のいずれか１項に記載の化合物の製造方法、

（４）チョーノピクニス（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ）属に属する（１）乃至（２）のいずれか１項に記載の化合物の生産菌がチョーノピクニス・アルバ（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ ａｌｂａ） ＳＡＮＫ ２１８０５株（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０４１９）であることを特徴とする、（３）に記載の製造方法、

（５）チョーノピクニス（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ）属に属する（１）乃至（２）のいずれか１項に記載の化合物を生産する微生物、

（６）チョーノピクニス・アルバ（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ ａｌｂａ） ＳＡＮＫ ２１８０５株（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０４１９）である（５）に記載の微生物、

（７）（１）乃至（２）のいずれか１項に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬、

（８）肥満症、糖尿病、高血圧症及び虚血性心疾患からなる群から選択される1つ又は2つ以上の疾患の治療薬及び／または予防薬である請求項７に記載の医薬、
に関する。

本明細書において、「Ｆ−１４３２９」とは、上記式（Ｉ）で表される構造からなる化合物、又は、上記（２）に記載の物理化学的性質を有する化合物をいう。本明細書では、Ｆ−１４３２９を「本発明の化合物」と呼ぶこともある。

Ｆ−１４３２９は、種々の互変異性体を有する。上記式（Ｉ）で表される化合物の互変異性体としては、下記式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩV）で表される化合物が挙げられる。これらの構造式で表される化合物は各々平衡状態にあり、これら４つの式は同一の化合物を表すものであることは、当業者が容易に認識するところであり、本発明のＦ−１４３２９には、これら各種互変異性体を包含する。

本発明の化合物は、溶解条件に依存して、式（Ｉ）乃至（ＶＩ）のいずれか1つで表される化合物又は2つ以上で表される化合物の混合物として検出され得る。このように、本発明の化合物は、式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）及び式（ＩＶ）からなる群から選択されるいずれか１つの式で表される化合物、又は２つ以上の式で表される化合物の混合物を包含する。
なお、式（Ｉ）で示される構造からなる化合物は上記（２）に示される物理化学的性質の核磁気共鳴スペクトルにおいてメジャーピークに帰属し、また、式（ＩＩ）で示される構造からなる化合物は上記（２）に示される物理化学的性質の核磁気共鳴スペクトルにおいてマイナーピークに帰属するものである。これら２つの構造式で表される化合物は上述したように同一物質であると考えることができる。また、これら2つの化合物の混合物として考えることもできる。

Ｆ−１４３２９は、種々の異性体を有する。本発明においては、これらの異性体がすべて単一の式で表されているが、ラセミ化合物等それらの異性体ならびにそれらの異性体の混合物も全てＦ−１４３２９に含まれる。立体特異的合成法、あるいは光学活性化合物を原料化合物とする合成法により、本発明の化合物の各異性体を直接製造することができる。また、先ず各異性体の混合物を製造し、次いで該混合物より所望の各異性体を公知の手法を用いて分離することができる。

Ｆ−１４３２９はフェノール性水酸基および、テトラミン酸等を有し、当業者に周知の方法を用いて塩にすることができる。本発明には、このようなＦ−１４３２９の塩も包含される。Ｆ−１４３２９の塩としては特に限定はないが、医薬の有効成分として用いられる場合は薬理学的に許容される塩が選択される。また、Ｆ−１４３２９の塩が医薬以外の用途に用いられる場合、例えば中間体として使用される場合には、該用途に用いることのできるものであれば特に限定されない。Ｆ−１４３２９の塩としては、例えば、アンモニウム塩のような無機塩；ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩のようなアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩；ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロカイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニア塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩のような有機塩等のアミン塩；および、グリシン塩、リジン塩、アルギニン塩、オルニチン塩、アスパラギン塩のようなアミノ酸塩を挙げることができる。Ｆ−１４３２９の好適な塩としては、薬理学的に許容される塩として好ましく使用されるもの、すなわち、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩等を挙げることができる。

また、Ｆ−１４３２９及び／又はその塩は溶剤和物になり得る。例えば、大気中での放置、再結晶などを経て、吸着水の付加、水和物化等が時に生じ得る。それらの溶剤和物も本発明に包含される。

さらに、本発明は、生体内において代謝されてＦ−１４３２９及び／又はその塩に変換される化合物、いわゆるプロドラッグも全て包含する。

１．Ｆ−１４３２９生産菌
Ｆ−１４３２９を生産する微生物としては、Ｆ−１４３２９を生産する限り特に限定されるものではないが、例えば、チョーノピクニス（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ）属に属する糸状菌等を挙げることができ、好適にはチョーノピクニス・アルバ（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ ａｌｂａ）であり、より好適にはチョーノピクニス・アルバ（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ ａｌｂａ） ＳＡＮＫ ２１８０５株（以下、単に「ＳＡＮＫ ２１８０５株」という。）である。ＳＡＮＫ ２１８０５株は、和歌山県の海岸で約４ヶ月間海に浸漬させた木片より分離された。

ＳＡＮＫ ２１８０５株を４種類の培地（CMA培地、PCA培地、PDA培地、WSH培地）に接種して、菌学的性状を観察した。４種類の培地の組成は以下の通りである。
＜ＣＭＡ培地｛コーンミール寒天（Ｃｏｒｎ Ｍｅａｌ Ａｇａｒ）培地｝＞
コーンミールアガール「ニッスイ」（日水製薬（株）製） １７ｇ、寒天 ５ｇ、蒸留水 １０００ｍｌ。
＜ＰＣＡ培地｛ポテトキャロット寒天（Ｐｏｔａｔｏ Ｃａｒｒｏｔ Ａｇａｒ）培地｝＞
ジャガイモ ２０ｇ、ニンジン ２０ｇ、寒天 ２０ｇ、蒸留水 １０００ｍｌ、ジャガイモとニンジンは、煮出し後ろ過して調製。
＜ＰＤＡ培地｛ポテトデキストロース寒天（Ｐｏｔａｔｏ Ｄｅｘｔｒｏｓｅ Ａｇａｒ）培地｝＞
ポテトデキストロース寒天培地「ニッスイ」（日水製薬（株）製） ３９ｇ、寒天 ５ｇ、蒸留水 １０００ｍｌ。
＜ＷＳＨ培地｛改変ワイツマン・シルバヒュトナー（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｗｅｉｔｚｍａｎ ａｎｄ Ｓｉｌｖａ−Ｈｕｔｎｅｒ）培地｝＞
オートミール １０ｇ、硫酸マグネシウム七水和物 １ｇ、リン酸二水素カリウム １ｇ
硝酸ナトリウム １ｇ、寒天 ２０ｇ、蒸留水 １０００ｍｌ。

色調の表示は「メチューン・ハンドブック・オブ・カラー」 （Kornerup, A. & Wanscher, J. H. 1978. Methuen handbook of colour (3rd. edition). Erye Methuen, London）に従った。

ＳＡＮＫ ２１８０５株の菌学的性状は以下の通りである。

CMA培地上でのコロニーは、２０℃、１０日の培養で直径２２−２４ｍｍである。コロニーは薄く白色を呈する。裏面は変化なし。

PCA培地上でのコロニーは、２０℃、１０日の培養で直径２４−２８ｍｍである。コロニーは羊毛状、厚く白色を呈する。裏面はパステルイエロー（３Ａ４）乃至ペールイエロー（３Ａ３）を呈する。

PDA培地上でのコロニーは、２０℃、１０日の培養で直径１４−１５ｍｍである。コロニーは羊毛状、厚く白色を呈する。裏面はペールオレンジ（５Ａ３）乃至ライトオレンジ（５Ａ４）を呈する。

WSH培地上でのコロニーは、２０℃、１０日の培養で直径２３ｍｍである。コロニーは羊毛状、厚く白色を呈する。裏面は変化なし。

培養を継続するとPCA培地とWSH培地上でコロニー全体に分生子果を形成する。気菌糸は幅０．５−１．５μｍ、平滑、無色である。分生子果は直径８０−１９０μｍ、気菌糸体中に形成され、球形から不定形、白色を呈する。分生子果の外壁は、幅１０−１５μｍ、密着した菌糸の束で構成され、柔らかい。フィアライドは分生子果外壁の内側表面に形成され、長さ５−１９μｍ、幅１−１．５μｍ、狭フラスコ形で先端が細くなる。分生子果を形成せずに、フィアライドが気菌糸から直接形成されることもある。分生子は直径１．５−２μｍ、１細胞、球形、平滑、無色、まれに卵形で直径３μｍに達することもある。厚膜胞子は観察されない。

以上の菌学的性状より、本菌に該当する菌を検索したところ、ガムスの文献(Gams, W. 1980. Chaunopycnis alba, gen. et sp. nov., a soil fungus intermediate between Moniliales and Sphaeropsidales. Persoonia 11:75-79)に記載されているチョーノピクニス・アルバの性状に、ほぼ一致した。よって、ＳＡＮＫ ２１８０５株をチョーノピクニス・アルバ（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ ａｌｂａ）と同定した。なお、ＳＡＮＫ ２１８０５株は、チョーノピクニス・アルバ（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ ａｌｂａ） ＳＡＮＫ ２１８０５株として、平成１７年９月２７日付で独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（日本国茨城県つくば市東１−１−１ 中央第６）に国際寄託され、受託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−１０４１９を付与された。

２．培養
周知の通り、真菌類は自然界において、または人工的な操作（例えば、紫外線照射、放射線照射、化学薬品処理等）により、変異を起こしやすく、本発明の提供するＳＡＮＫ ２１８０５株も同様である。本発明において、ＳＡＮＫ ２１８０５株は、Ｆ−１４３２９を生産する性質を有する限り、その全ての変異株を包含する。また、これらの変異株の中には、遺伝的方法、たとえば組み換え、形質導入、形質転換等によりえられたものも包含される。即ち、Ｆ−１４３２９を生産する限り、ＳＡＮＫ ２１８０５株、それらの変異株およびそれらと明確に区別されない菌株は、全てＳＡＮＫ ２１８０５株に包含される。

Ｆ−１４３２９の製造を目的とした該化合物生産菌の培養は、通常発酵生成物を生産するために使用される培地を用いて行うことができる。このような培地には、微生物が同化し得る炭素源、窒素源および無機塩が含まれる。

炭素源としては、グルコース、フルクトース、マルトース、シュークロース、マンニトール、グリセリン、デキストリン、澱粉、オート麦、ライ麦、ジャガイモ、トウモロコシ粉、綿実油、糖蜜、クエン酸、酒石酸等を単一に、あるいは併用して用いることができる。培地の炭素源含量は、通常、培地量の１乃至１０重量％で変量する。

窒素源としては、蛋白質若しくはその加水分解物を含有する物質又は無機塩を用い、大豆粉、フスマ、落花生粉、綿実油、カゼイン加水分解物、ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプトン、肉エキス、イースト、イーストエキス、マルトエキス、ゼラチン、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等を例示することができる。これらの窒素を単一であるいは併用して培地に含有せしめる場合の量は、通常培地量の０．２乃至１０重量％の範囲で変量する。

栄養無機塩としては、ナトリウム、アンモニウム、カルシウム、フォスフェート、サルフェート、クロライド、カーボネート等のイオンを得ることのできる通常の塩類を広く用いることができる。カリウム、カルシウム、コバルト、マンガン、鉄、マグネシウム等の金属も培地に微量含まれ得る。
液体培養に際しては、シリコン油、植物油、界面活性剤等が、消泡剤として使用される。

Ｆ−１４３２９の製造を目的として該化合物生産菌を液体培養する際の液体培地のｐＨは、特に限定されるものではないが、通常４．０乃至７．０である。

Ｆ−１４３２９生産菌の生育温度は、特に限定されるものではないが、通常１５乃至３５℃であり、好適には２０乃至３０℃である。また、Ｆ−１４３２９の製造を目的として該化合物生産菌を培養する際の温度は、特に限定されないが、通常２０乃至３０℃であり、好適には２３℃乃至２６℃である。Ｆ−１４３２９の製造を目的としてＳＡＮＫ ２１８０５株を培養する際のより好適な温度は、２３℃である。

Ｆ−１４３２９は、該化合物生産菌を好気的な条件下で培養することにより製造することができる。好気的条件下の培養方法としては、通常当該分野において使用される好気的培養方法であれば特に限定されないが、例えば、固体培養法、振とう培養法、通気攪拌培養法等を挙げることができる。

Ｆ−１４３２９を比較的大量に製造するための該化合物生産菌の培養は、通常、小規模な培養から開始し、段階的に培養規模を拡大することが好ましい。まず、少量の種培地を用いた前培養から始め、段階的に培養の規模を拡大し、多量の栄養培地に必要量の前培養液を接種することにより本培養を行うことができる。例えば、ＳＡＮＫ ２１８０５株のスラントから、少量の種培地を入れた三角フラスコへ該株を接種し、２３℃にて数日間振盪培養を行い、該株を十分成長させる。必要に応じ、該前培養の規模を段階的に拡大した後、得られた培養物の全量又は必要量を栄養培地へ接種し、本培養を行う。

Ｆ−１４３２９生産菌を大量に培養するに際し、攪拌機又は通気装置を有するタンクを使用すれば、本培養用の栄養培地をタンクの中で調製し、滅菌することが可能であり好ましい。通常、栄養培地の滅菌温度は１２１℃であり、滅菌後培地が十分冷却してから前培養物を接種し、前述の温度にて通気攪拌培養を行う。

３．Ｆ−１４３２９の回収
培養終了後、珪藻土等を助剤とするろ過操作又は遠心分離操作により、培養物を可溶性画分（培養上清）および不溶性画分（菌体）に分別し、次いで得られた各画分中に存在するＦ−１４３２９を、その物理化学的性状を利用して通常用いられる手法により抽出精製することによってＦ−１４３２９を回収することができる。例えば、以下のような分離精製操作を挙げることができる。

前述の培養により得られるＦ−１４３２９生産菌の培養上清及び／又は菌体抽出液（例えばアセトン抽出液）を、ｎ−ブタノール、酢酸エチルなど水と混和しない有機溶媒の１つ又は２つ以上と混合し、得られた有機層画分からＦ−１４３２９を精製することができる。

得られた有機層画分を、各種吸着用樹脂を用いたクロマトグラフィーに供することができる。吸着剤としては、活性炭、アンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４（以上ローム・アンド・ハース社製）、ダイヤイオンＨＰ−１０、ＨＰ−２０、ＨＰ−５０、ＣＨＰ２０Ｐ（以上三菱化学（株）社製）等を挙げることができる。前記の有機層画分をこれらの吸着剤と接触させてＦ−１４３２９を吸着せしめた後、メタノール水、アセトン水等の含水溶媒を用いて所望のＦ−１４３２９を溶出することにより、Ｆ−１４３２９含有画分を得ることができる。反対に、前記の有機画分を、不純物を吸着させる目的で通常用いられる公知の吸着剤と接触させて不純物を吸着せしめ、所望のＦ−１４３２９を素通り画分中に回収することによりＦ−１４３２９含有画分を得ることもできる。

得られたＦ−１４３２９含有画分を、イオン交換クロマトグラフィーに供することができる。イオン交換樹脂としては、ダウエックス ５０Ｗｘ４、ダウエックス１ｘ２、ダウエックス ＳＢＲ−Ｐ（以上、ダウ・ケミカル社製）等を挙げることができる。Ｆ−１４３２９含有画分をイオン交換樹脂と接触させてＦ−１４３２９を吸着せしめた後、塩酸、アンモニア等の溶媒を用いて所望のＦ−１４３２９を溶出することができる。反対に、前記の抽出物をこれらのイオン交換樹脂と接触させて不純物を吸着せしめ、所望のＦ−１４３２９を素通り画分中に回収することもできる。

得られたＦ−１４３２９含有画分を、さらに、シリカゲル、マグネシウム−シリカゲル系のフロリジル等の担体を用いた吸着カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、ＴＳＫゲルトヨパールＨＷ−４０Ｆ（登録商標、トーソー（株）社製）、セファデックスＬＨ−２０（登録商標、アマシャム バイオサイエンス社製）等を用いた分配カラムクロマトグラフィー、コスモシル１４０Ｃ１８（登録商標、ナカライテスク社製）等を用いた逆相カラムクロマトグラフィー、順相もしくは逆相カラムを用いたＨＰＬＣ等により精製し、所望のＦ−１４３２９を単離することができる。該精製工程において、前記のカラム分離又はクロマトグラフィー操作は単独で用いることもできるし、二つ以上の操作を組み合わせて用いてもよい。

本発明のＦ−１４３２９を精製する際の、各精製工程における該物質の挙動は、例えば、次の条件によるＨＰＬＣにより追跡することができる。
［Ｆ−１４３２９を検出するためのＨＰＬＣの条件］
分離カラム： ＳｕｎＦｉｒｅ Ｃ１８（５ μｍ、φ４．６ × １５０ ｍｍ： Ｗａｔｅｒｓ社製）
移動相： ５０％アセトニトリル‐０．１％ギ酸水溶液
流速： １．０ ｍｌ／分
検出波長： ２３０ ｎｍ
保持時間： Ｆ−１４３２９：９分乃至１０分（好適には９．５分）。

４．Ｆ−１４３２９の作用
本発明は、Ｆ−１４３２９又はその塩を含むことからなる医薬組成物、並びに、該物質を有効成分として含有する肥満症および糖尿病の治療又は予防剤を提供する。食餌中に含まれる中性脂肪が腸で吸収されることにより、血中ＴＧ値は食後一過性に上昇する。この上昇した血中TG値は、通常は、その後低下し数時間後には元のレベルに戻る。しかし、過栄養摂取状態においては、食餌により上昇した血中ＴＧ値が食前のレベルまで下がらないうちに次の食餌を摂取することとなり、これが繰り返されることにより、血中ＴＧ値が常に高い状態（高トリグリセリド血症）となると考えられている。また、血中の中性脂肪が脂肪細胞に貯蓄されていき肥満が引き起こされると考えられている。さらに、このようにして引き起こされた肥満による体重増加は、糖尿病、高血圧症、虚血性心疾患等のいわゆる生活習慣病の原因又は悪化要因になり得ると考えられている。Ｆ−１４３２９は、食餌後の中性脂肪の吸収を阻害し、血中ＴＧ値の上昇を抑制する作用を有することから、肥満症及び／又は肥満に起因する生活習慣病（肥満、高血圧症、又は虚血性心疾患）の治療薬及び／又は予防薬の有用成分として使用されうる。

本発明のＦ−１４３２９又はその塩は、医薬としてヒト又はヒト以外の動物に投与されるに際し、種々の形態をとり得る。その投与形態は、製剤、年齢、性別、疾患等に依存する。例えば、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤等は経口投与される。注射剤等は静脈内投与、筋肉内投与、皮内投与、皮下投与又は腹腔内投与される。坐剤は直腸内投与される。軟膏等は外用剤として使用される。

Ｆ−１４３２９を有効成分として含有する医薬製剤は、常法に従い、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、溶解剤、矯味矯臭剤、コーティング剤等、医薬製剤分野において通常使用し得る公知の補助剤を用いて製造することができる。

錠剤の形態に成形するに際しては、担体として当該分野で公知のものを広く使用することができ、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、澱粉、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、珪酸等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥澱粉、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第四級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、澱粉等の保湿剤、澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状珪酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、硼酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を挙げることができる。錠剤は、必要に応じ、通常の剤皮を施した錠剤、例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重錠、多重錠とすることができる。

丸剤の形態に成形するに際しては、担体として当該分野で公知のものを広く使用することができ、例えば、ブドウ糖、乳糖、澱粉、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤を挙げることができる。

注射剤として調製される場合、液剤及び懸濁剤は殺菌され、且つ血液と等張であることが好ましく、これら液剤、乳剤および懸濁剤の形態に形成するに際しては、希釈剤として当該分野において公知のものを広く使用することができ、例えば、水、エチルアルコール、プロピレングリコール、エポキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を挙げることができる。等張を維持するために充分な量の食塩、ブドウ糖又はグリセリンを含有せしめてもよい。溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤糖、着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤、他の薬剤等を含有せしめてもよい。

なお、注射剤を静脈内投与する場合、単独で、ブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して、又は、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等とのエマルジョンとして投与される。

坐剤の形態に成形するに際しては、担体として当該分野で公知のものを広く使用することができ、例えばポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセライド等を挙げることができる。

軟膏等の外用剤の形態に成形するに際しては、賦型剤として、疎水性基剤（油脂性軟膏基剤）、吸水基剤、親水性基剤（クリーム）ならびに水溶性基剤（非グリース製軟膏基剤）のいずれか一つに属する、当該分野で公知のものを広く使用することができる。

上述の医薬製剤に含有せしめるＦ−１４３２９又はその塩の量は、特に限定されないが、上限は３０乃至７０重量％、下限は１重量％であり、好適な範囲は１乃至３０重量％である。

Ｆ−１４３２９又はその塩の投与量は、症状、年齢、体重、投与方法、剤形等に依存するが、通常成人に対して１日当たり投与するＦ−１４３２９又はその塩の量は、上限が１００乃至１０００ ｍｇ、下限が１乃至１０ ｍｇであり、好適な範囲は１０乃至１００ ｍｇである。

Ｆ−１４３２９又はその塩の投与回数は、数日に１回、１日１回、又は１日複数回である。

本発明の提供するＦ−１４３２９は中性脂肪吸収阻害作用を有することから、該化合物又はその塩を有効成分として含有する医薬は肥満症および糖尿病の予防薬または治療薬として有用である。

次に、実施例、試験例、製剤例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。

（実施例１）．Ｆ−１４３２９生産菌の培養
ＳＡＮＫ ２１８０５株のスラントよりコロニー表面をかきとって、あらかじめ滅菌（１２１℃、２０分間）した培地組成−１からなる種培養培地３０ｍｌを含む１００ｍｌ容三角フラスコへ接種した。それを２１０ｒｐｍ、２３℃の回転振盪培養機で１６８時間培養したものを種培養液とした。次いで、培地組成−２で示される本培養培地８０ｍｌを５００ｍｌ容三角フラスコ２５本に入れ、１２１℃で２０分間加熱滅菌した。これを冷却した後、各三角フラスコに種培養液約１ｍｌを接種し、２１０ｒｐｍ、２３℃の回転振盪培養機で１６８時間本培養を行った。

［培地組成−１］
可溶性澱粉 ２．０ ％
グリセリン ３．０ ％
グルコース ３．０ ％
大豆粉 １．０ ％
ゼラチン ０．２５ ％
イーストエキス ０．２５ ％
硝酸アンモニウム ０．２５ ％
寒天 ０．３ ％
消泡剤＊ ０．００５ ％
（ｐＨ無調製）
＊ディスフォームＣＢ−４４２（日本油脂（株）製）

［培地組成−２］
グリセリン ５．０ ％
ポテトグラニュー＊＊ １．０ ％
マルトエキス ０．５ ％
イーストエキス ０．５ ％
消泡剤ＣＢ−４４２ ０．００５ ％
（ｐＨ無調製）
＊＊ポテトグラニュー（カナダ・アグラウェスト社製）
（実施例２）．Ｆ−１４３２９の単離
実施例１で得られた培養物２ Ｌを遠心分離操作により、培養物を可溶性画分（培養上清）および不溶性画分（菌体）に分別した。得られた培養上清１．９ ＬをｐＨ３．０に調整後、２．０ Ｌの酢酸エチルで２回抽出した。抽出液を１ Ｌの０．２ Ｍ リン酸水素二ナトリウム水溶液および、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで脱水して脱脂綿でろ過後、減圧下濃縮乾固して、Ｆ−１４３２９を含む抽出物６８０ ｍｇを得た。

次いで、コスモシルカラム・クロマトグラフィーを行った。すなわち、前記抽出物６８０ ｍｇを２０ ｍｌのＭｅＯＨに溶解後、５ ｇのコスモシル（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ７５Ｃ１８−ＯＰＮ）を加え均一とした後、減圧下濃縮してメタノールを留去し、アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（ｐＨ３）＝３：７、１０ ｍｌを加え、予めアセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（ｐＨ３）＝３：７で平衡化したコスモシルカラム（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ７５Ｃ１８−ＯＰＮ、容積１５０ ｍｌ）に付した。該カラムを、アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（ｐＨ３）＝３：７（３００ ｍｌ）、アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（ｐＨ３）＝４：６（４００ ｍｌ）、アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（ｐＨ３）＝５：５（４００ ｍｌ）で順に展開し、２０ ｍｌずつ分画し、Ｆ−１４３２９を含むフラクション１１から４２（６４０ ｍｌ）を回収した。減圧下で濃縮することによりアセトニトリルを留去後、３００ ｍｌの酢酸エチルで２回抽出した。抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで脱水した。それを脱脂綿でろ過後、減圧下濃縮乾固して、Ｆ−１４３２９を含む部分精製物４７０ ｍｇを得た。

この部分精製物をＨＰＬＣカラム（ＳｕｎＦｉｒｅ Ｃ１８ φ１９×１５０ ｍｍ：Ｗａｔｅｒｓ社製）で分離した。部分精製物４７０ ｍｇをメタノール、５ ｍｌに溶解したものを試料溶液とした。この試料溶液５００ μｌを、あらかじめアセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（ｐＨ３）＝５：５で平衡化したカラムに注入後、アセトニトリル：０．３％トリエチルアミンリン酸緩衝液（ｐＨ３）＝５：５を溶媒として、流速１５ ｍｌ／分で溶出した。検出波長２１０ ｎｍで溶出液をモニターし保持時間８．０から９．５分までに溶出されるＦ−１４３２９画分を分取した。残りの試料溶液についても同様の操作を行い、２３０ ｍｌのＦ−１４３２９画分を得た。減圧下濃縮してアセトニトリルを留去後、２００ ｍｌの酢酸エチルで2回抽出し、その抽出液を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで脱水した。それを脱脂綿でろ過後、減圧下濃縮乾固して、Ｆ−１４３２９の無色粉末１２０ ｍｇを得た。

（試験例１）．リンパ管中性脂肪吸収阻害試験
雄性C57BL/6Nマウス (7-15週令、体重17-35 g、日本チャールズリバー（株）より購入）に、Ｆ−１４３２９（30 mg/kg）と20%中性脂肪含有エマルジョン (イントラリピッド20%：テルモ（株）製)の混合物を経口投与（0.3 mL/マウス）する。投与１時間後にイソフルラン (フォーレン：アボットジャパン（株）製)吸入麻酔下にて開腹し、小腸リンパ管より小腸リンパ液を1〜10 μL採取する。リンパ液中の中性脂肪濃度を市販のキット(トリグリセライド E テスト ワコー：和光純薬工業（株）製)を用いて測定し、Ｆ−１４３２９投与群の20%エマルジョン投与群 (コントロール群)に対する中性脂肪濃度低下率を算出することにより、Ｆ−１４３２９の有する食後中性脂肪吸収阻害活性を測定することができる。

（製剤例） Ｆ−１４３２９含有経口カプセル剤
―――――――――――――――――――――――――――――――
Ｆ−１４３２９ ３０ ｍｇ
乳糖 １７０ ｍｇ
トウモロコシ澱粉 １５０ ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム ２ ｍｇ
―――――――――――――――――――――――――――――――
合計 ３５２ ｍｇ
―――――――――――――――――――――――――――――――
上記処方の粉末を混合し、６０メッシュのふるいに通した後、この粉末をゼラチンカプセルに入れ、カプセル剤とする。

Claims (8)

1. 下記式（Ｉ）で表される化合物又はその塩。
   

   

   
   
2. 下記の１）乃至９）の物理化学的性質を示す化合物又はその塩：
   １）性質：無色粉末；
   ２）溶解性：ジメチルスルホキシド、メタノール、クロロホルムに可溶；
   ３）分子式：Ｃ_２１Ｈ_２７NＯ_５；
   ４）分子量：３７３；
   ５）紫外線吸収スペクトル：λ_max ｎｍ（logε）
   メタノール溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは、次の通りである。
   ２８１ (４．１５)、２２５ (４．１０)；
   ６）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）：ν_max ｃｍ^−１
   KBｒディスク法で測定した赤外線吸収スペクトルは、次の通りである：
   ３３２０、２９６４，２９２９、１６９３、１６５３，１６０１，１５１７，１４５２，１３７８，１３５４，１３３５，１２６９，１２３８，１２１７，１１７２，１０９０，１０４７，９６７；
   ７）^１Ｈ−核磁気共鳴スペクトル； δ (ppm)
   重クロロホルム溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（５００MHz）は、次の通りである。（ＴＭＳのシグナルを0.00 ppmとした。）
   メジャーピーク：０．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ），１．０４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ），１．１３（１Ｈ，ｍ），１．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４ Ｈｚ），１．６４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４ Ｈｚ），１．７７（２Ｈ，ｍ），１．９５（１Ｈ，ｍ），３．６５（１Ｈ，ｍ），４．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４ Ｈｚ），４．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４ Ｈｚ），５．３７（１Ｈ，ｍ），５．３９（１Ｈ，ｍ），６．５８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３ Ｈｚ），６．８８（１Ｈ，ｂｒｓ），７．０７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３ Ｈｚ）
   マイナーピーク： ０．６１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９ Ｈｚ），１．１１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ），１．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３），１．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４ Ｈｚ），１．６４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４ Ｈｚ），１．７７（２Ｈ，ｍ），１．９５（１Ｈ，ｍ），３．６５（１Ｈ，ｍ），４．２５（１Ｈ，ｂｒｓ），４．９５（１Ｈ，ｂｒｓ），５．３７（１Ｈ，ｍ），５．３９（１Ｈ，ｍ），６．４８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３ Ｈｚ），６．７４（１Ｈ，ｂｒｓ），７．００（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３ Ｈｚ）
   ８）^１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル； δ (ppm)
   重クロロホルム溶液中で測定した核磁気共鳴スペクトル（１２５MHz）は、次の通りである。（重クロロホルムのシグナルを７７.0 ppmとした。）
   メジャーピーク：１８．０， １８．３， １９．４， ３１．３， ３４．１， ４０．１． ４０．２， ６６．１， ７４．０， １００．５， １１５．４， １２６．６， １２８．５， １２９．１， １２９．３， １５６．３， １７５．７， １９４．２， １９４．４
   マイナーピーク： １８．０， １８．６， １９．２， ３１．１， ３３．６， ４０．２， ４０．４， ６４，３， ７３．９， １０４，１， １１５．２， １２６．４， １２８．２， １２８．６， １２９．３， １５６．４， １６９．９， １９５．８， ２００．６
   ９）比旋光度；
   ［α］_D ^２５ −２２０° （ｃ １．０、メタノール）。
   
3. チョーノピクニス（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ）属に属する請求項１乃至２のいずれか１項に記載の化合物の生産菌を培養し、その培養物より請求項１乃至２のいずれか１項に記載の化合物を回収することを特徴とする、請求項１乃至２のいずれか１項に記載の化合物の製造方法。
4. チョーノピクニス（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ）属に属する請求項１乃至２のいずれか１項に記載の化合物の生産菌がチョーノピクニス・アルバ（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ ａｌｂａ） ＳＡＮＫ ２１８０５株（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０４１９）であることを特徴とする、請求項３に記載の製造方法。
5. チョーノピクニス（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ）属に属する請求項１乃至２のいずれか１項に記載の化合物を生産する微生物。
6. チョーノピクニス・アルバ（Ｃｈａｕｎｏｐｙｃｎｉｓ ａｌｂａ） ＳＡＮＫ ２１８０５株（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０４１９）である請求項５に記載の微生物。
7. 請求項１乃至２のいずれか１項に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬。
8. 肥満症、糖尿病、高血圧症及び虚血性心疾患からなる群から選択される1つ又は2つ以上の疾患の治療薬及び／または予防薬である請求項７に記載の医薬。