JP2007078665A - 血液エンドトキシン測定方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】全血より赤血球のみを分別除去し、残った成分血液中に含まれるエンドトキシン量を測定することによって、白血球に含まれるエンドトキシンと血漿中に含まれるエンドトキシンを総括的に測定することが可能となる。これによって、血液中のエンドトキシン測定の感度が飛躍的に向上し、エンドトキシン量と病態との関連性を明確にすることができる。
【選択図】図5
Description
実施形態1について説明をする。本実施形態は、採取した全血から赤血球のみを除いた成分血液を抽出し、成分血液中のエンドトキシンが破壊されない条件の下で、成分血液中の白血球細胞を破壊して測定用血液を調製する血液エンドトキシン測定のための血液前処理方法である。
本実施形態による血液前処理方法によって、血液中に含まれるエンドトキシンを赤血球に影響をされることなく総括的、かつ正確に測定することが可能なエンドトキシン測定用の血液試料を提供することができる。
実施形態2について説明をする。本実施形態は、全血より赤血球のみを除いた成分血液中に含まれるエンドトキシンを測定するために、前記実施形態1の測定用血液前処理ステップで得られる測定用血液中のエンドトキシンを測定する血液エンドトキシン測定方法である。特に、測定用血液からリムルステスト干渉因子を除去又は不活化した後に、C因子を含む物質であるC因子関連物質を用いて測定用血液中のエンドトキシンを測定することを特徴とする。
本実施形態による血液エンドトキシン測定によって、赤血球に影響をされることなく血液中に含まれるエンドトキシンをC因子関連物質によって総括的、かつ正確に測定することが可能なエンドトキシン測定用の血液試料を提供することができる。
本実施形態は、全血より赤血球のみを除いた成分血液中に含まれるエンドトキシンを測定するために、前記実施形態1の測定用血液前処理ステップで得られる測定用血液中のエンドトキシンを測定する血液エンドトキシン測定方法である。特に測定用血液からリムルステスト干渉因子を除去又は不活化する処理をすること無しに、C因子を含む物質であるC因子関連物質を用いて測定用血液中のエンドトキシンを測定することを特徴とする。
本実施形態による血液エンドトキシン測定によって、赤血球に影響をされることなく血液中に含まれるエンドトキシンをC因子の活性化によって総括的、かつ正確に測定することが可能なエンドトキシン測定用の血液試料を提供することができる。
<<実施例1>>
(1)一の先細遠心管は、スウィング・ローターを用いて20℃にて遠心加速度1400×gで5分間遠心した。最上層の血漿層のみを注射器を用いて回収し、新たな1.5mLチューブに移した後、水を加えて総計1mLに調整した。静かに混合した後、これを血漿分画とした。
(2)前記血漿を除いた試験管のバフィーコートを注射器を用いて回収し、新たな1.5mL遠心管に移し、水を1mL加えて静かに混合して溶血処理を行った後、再びスウィング・ローターを用いて室温にて遠心加速度1400×gで5分間遠心を行った。遠心後、沈殿を注射器で回収し、1.5mLチューブに移した後、水を加えて総計1mLに調整した。静かに混合した後、これを白血球分画とした。
(3)残った一の先細遠心管は、スウィング・ローターを用いて室温にて遠心加速度1400×gで5分間遠心した。最上層の血漿層のみを注射器を用いて回収し、新たな1.5mLチューブに移した。また、バフィーコートのみを注射器を用いて回収し、別の新たな1.5mL遠心管に移し、水を1000μL加えて静かに混合して溶血処理を行った後、再びスウィング・ローターを用いて室温にて遠心加速度1400×gで90秒間遠心を行った。遠心後、沈殿を注射器で回収し、当該沈殿を血漿分画を移した1.5mLチューブに移した。これに水を加えて総計1mLに調整した。静かに混合した後、これを成分血液分画とした。
臨床病状と各分画中のエンドトキシン量の関係
臨床症状と血中エンドトキシン濃度の結果とが、成分血液を用いたエンドトキシンの測定では一致することを確認する。
(1)検体例1は、特発性S状結腸壊死により大腸穿孔を起こした67歳の女性患者から、敗血症性ショックの発症後1時間後に静脈より5mL採血した。
(2)検体例2は、卵巣留膿腫を起こした56歳の女性患者から、敗血症性ショックの発症後25時間後に静脈より5mL採血した。
(1)検体例1では、血漿中から4.9pg/mLのエンドトキシンが検出されたことから、エンドトキシン血症陽性と診断される。すなわち、当該検体の場合、通常行われる血漿中のエンドトキシン測定でも臨床症状と血中エンドトキシン濃度の結果とが一致す結果となる。一方、白血球分画中のエンドトキシンは0.8pg/mLであることからエンドトキシン血症陰性と診断される。すなわち、当該検体の場合、本発明者が以前に発明した白血球細胞に含まれるエンドトキシンの測定方法(特許文献2)では臨床症状と血中エンドトキシン濃度の結果とが一致しない結果となる。
0502:赤血球層
0503:バフィーコート
0504:血漿
0505:溶血処理
0506:白血球分画
0507:溶血した血色素を含む上層
0508:成分血液
Claims (10)
- 全血を採取する全血採取ステップと、
全血より赤血球のみを除いた成分血液を抽出する成分血液抽出ステップと、
前記成分血液抽出ステップで抽出した成分血液中のエンドトキシンが破壊されない条件の下で、白血球細胞を破壊し、破壊済み白血球を含有する成分血液を調製する測定用血液前処理ステップと、
からなる血液前処理方法。 - 前記全血は、ヒト又はヒト以外の脊椎動物の血液である請求項1に記載の血液前処理方法。
- 前記測定用血液前処理ステップで白血球を破壊する方法は、希釈高温加熱方法によるものであることを特徴とする請求項1又は2記載の血液前処理方法。
- 請求項1から3のいずれか一に記載の血液前処理方法の測定用血液前処理ステップで得られる測定用血液中のエンドトキシンを測定する血液エンドトキシン測定方法。
- 前記血液前処理方法の測定用血液前処理ステップに続いて、
前記測定用血液前処理ステップで得られる測定用血液中のエンドトキシンをC因子を用いて測定するエンドトキシン測定ステップからなる請求項4に記載の血液エンドトキシン測定方法。 - 前記血液前処理方法の測定用血液前処理ステップに続いて、
前記測定用血液前処理ステップで得られる破壊済み白血球を含有する成分血液に含まれるリムルステスト干渉因子を、除去又は不活化した成分血液を調製する干渉因子排除ステップと、
前記干渉因子排除ステップで得られる成分血液中に含まれるエンドトキシンをC因子を含む物質であるC因子関連物質を用いて測定するエンドトキシン測定ステップと、
からなる請求項4に記載の血液エンドトキシン測定方法。 - 前記エンドトキシン測定ステップは、同一個体から経時的に複数回に分けて採取した血液に対して行い、その採取の時間ごとの比較測定を含む請求項5又は6に記載の血液前処理方法。
- 前記C因子関連物質は、カブトガニの血球抽出液から生成されたものであることを特徴とする請求項5から7のいずれか一に記載の血液エンドトキシン測定方法。
- 前記C因子は、カブトガニの血液成分であるC因子の特徴を基礎とするものであることを特徴とする請求項5から7のいずれか一に記載の血液エンドトキシン測定方法。
- 前記C因子は、カブトガニの血液成分であるC因子に類似したものであることを特徴とする請求項5から7のいずれか一に記載の血液エンドトキシン測定方法。
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