JP2005533881A - ガンマ・インターフェロン結合性化合物、それらの調製法、およびそれらを含有する薬物 - Google Patents

ガンマ・インターフェロン結合性化合物、それらの調製法、およびそれらを含有する薬物 Download PDF

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Abstract

以下の式（Ｉ）、
【化１】
Figure 2005533881

［式中、Ｘは二価のスペーサーグループであって、オリゴ糖フラグメントＡおよびＢを各々γ−インターフェロン（γ−ＩＮＦ）ホモダイマーのＣ末端のペプチド配列１２５〜１４３の一つへの結合させるべく充分に長く、ｎは０から１０までの整数を表し、たとえば０、１、２、３、４、または５に等しく、各Ｒは独立して水素原子、ＳＯ３ −基、またはリン酸基を表し、化合物（Ｉ）のグルコサミン単位の３位にはＳＯ３ −基がないという条件付きである］に対応する分子から選ばれる、ガンマ・インターフェロン（γ−ＩＮＦ）に結合することが可能な化合物。
本発明はまた、これらの化合物を調製するためのプロセス、これらの化合物とガンマ・インターフェロンとにより形成される複合体、およびこれらの化合物または複合体を含んでなる薬物に関する。

Description

本発明は、新規なガンマ・インターフェロン結合性化合物または新規複合糖質に関する。
本発明はまた、これらの化合物の調製のためのプロセス、これらの化合物とガンマ・インターフェロンとによって形成される複合体、およびこれらの化合物または複合体を含有する薬物に関する。
ガンマ・インターフェロン（γ−ＩＮＦ）はポリペプチドであり、たとえば、ヒトでは１４３個のアミノ酸を含んでなり、サイトカインファミリーの一員である。サイトカインは細胞伝達の媒介物質であり、パラクリン、オートクリン、または時には内分泌プロセスに従って作用する。
体内では、これらのタンパク質の産生は細かく調節されており、それらの合成量の過不足が一般には種々の病的症状の原因である。
治療の観点からは、それゆえ、かかるタンパク質の生物活性を増大すること、あるいは逆に低減することが有利であってよい。
γ−ＩＮＦは、最初はその抗ウイルス活性にもとづき特徴づけられたが、特に免疫応答の調節において、また炎症を通じて必要とされている。
このサイトカインはまた、形質転換細胞にとって細胞毒性または細胞増殖抑制性であり、酸素化されたラジカルの合成を誘導する。それは細胞周辺空間の多数の分子、特に細胞表面の分子、およびまた多数の細胞外マトリックスの化合物の発現を調整する。γ−ＩＮＦはそれゆえ重要な役割を、なかんずく、免疫応答および炎症といった防御機構において、細胞増殖および分化において、また接着および細胞移動の現象において果たしている（１）。
γ−ＩＮＦのようなサイトカインに関連した治療法は、このタイプの分子を投与すること、あるいは逆にそれらの活性を阻害することにある。
したがって、上記のおよびインビトロにおいて観察された多様な活性は、多くの臨床試験を、癌（２）、慢性肉芽腫症（３）、リウマチ様関節炎（４）、細菌または寄生虫感染症（５）、肝炎の種類（６）、または全身性硬化症のような線維増殖症（７）といった、様々な病理において誘発してきた。しかしながら、γ−ＩＮＦの臨床的有効性は今日まで明確に証明されておらず、その主な適応症は稀な病気、慢性肉芽腫症に限定されたままである（８）。
反対に、ある炎症性または自己免疫性の病理においては（９）、あるいは移植後の移植片拒絶を低減する目的においては、サイトカインの生物活性を阻害することが有利であってよい。この目的のため、抗体または可溶性の形状にある受容体が開発され、動物モデルで検査されてきた（１０）。
γ−ＩＮＦの使用に基づく治療法の開発は、特にインビボにおけるその低い半減期、および乏しいバイオアベイラビリティに関連した重要な技術的問題を提起している。
γ−ＩＮＦの、乏しいバイオアベイラビリィによって与えられる障害は、局所適用法を用いることにより克服されることが可能であるが、このような方法は深部の臓器に全身的に到達することを可能にはしない；加えて、インビボにおける短い半減期の問題は手つかずのままである。
かかるγ−ＩＮＦの局所投与の方法の実例としては、肺癌の治療のためのγ−ＩＮＦの吸入法、アレルギー応答の治療におけるそのネブライザー療法、またはリポソーム内へのその封入が挙げられてよい。
γ−ＩＮＦに対する細胞応答の研究が、治療的使用において生じる困難を説明できるようにするのかもしれない。
事実、γ−ＩＮＦに対する細胞応答は、刺激された細胞のタイプに、γ−ＩＮＦの局所濃度に、また細胞が付随的に暴露される他の調節因子に依存する。
特に、γ−ＩＮＦはその細胞受容体とは無関係に、ヘパリンまたはヘパラン硫酸（ＨＳ）型のオリゴ糖に、かなりの親和性をもって（５〜１０ｎＭ）結合することも可能であることが証明されている（１１）。
動物では、インビボにおいて、ヘパラン硫酸がγ−ＩＮＦと効果的に結合し、この相互作用が血漿からのサイトカインの除去、種々の臓器におけるその同化作用、および組織におけるその局在性を調節している。
特に、静脈内注射の後、γ−ＩＮＦはバイエクスポネンシャル（ｂｉｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ）なプロセスによって除去され、これを通じて９０％のサイトカインが最初の５〜１０分の間に循環中の血液から消え、特に短い半減期は１分のあたりである。
このような結果は、注射されたγ−ＩＮＦの大部分、すなわち約９０％がヘパリン／ヘパラン硫酸型の分子によって、特に血管内皮の表面において素早く結合されることを証明している（１２）。加えて、組織切片のオートラジオグラフィーによる観察は、γ−ＩＮＦがすべての組織に対して同等にアクセスすることができるわけではないことを示している。
それは肝臓、腎臓、および脾臓に蓄積するが、たとえば筋肉には蓄積しない。さらに、同じ組織内でもそれは一様に分布せず、ヘパラン硫酸に富む領域に濃縮される。かかる局所濃度は、たとえば、肝シヌソイドにおいては、肝細胞および内皮細胞の表面において、腎糸球体において、あるいは脾臓の赤脾随において検出される（１３）。
それゆえ、サイトカインとＨＳとの相互作用は明らかに、インビボにおいて様々な区画に対するアクセスしやすさをかなり限定しているように見え、γ−ＩＮＦの治療的使用において直面する困難（１４）の一端は、このような相互作用に関係するように見える。こうした研究はまた、ヘパラン硫酸が、組織におけるサイトカインのかなりの局所蓄積の原因であることも示している。最後に、インビボにおいて、γ−ＩＮＦは、単独では、そのＣ末端のタンパク質分解性の破壊により、迅速に不活性化されることも示されている（１２）。
上記の問題に対し解決法を提供する目的で、γ−ＩＮＦをヘパリン分子と結合することが提案されてきた。この結合はサイトカインの、血漿からの非常にゆっくりした除去、およびより広い組織分布を可能にし、またタンパク質分解性の崩壊に対し、Ｃ末端ドメインを保護する機構により活性の増大も誘導する。
さらに、ヘパリン単独の注射は、内在するＨＳによって組織内に蓄積されたサイトカインを置換えることを可能にし、それによりその活性を低減または除去することができるようにする。
しかしながら、γ−ＩＮＦを保護しそのバイオアベイラビリティを増強するため、あるいは逆に、それらの局所作用を除去するためのヘパリン分子の使用は、ヘパリン自体の活性から生じる、また特にその抗凝血特性から生じる問題を提起する。
γ−ＩＮＦのための相互作用の部位は、へパラン硫酸（ＨＳ）上で特性が調べられている。それは、硫酸化のより少ない、より伸張した７ｋＤのドメインによって隔てられた、硬度に硫酸化された八糖ドメインからなる。
図１は、γ−ＩＮＦとへパラン硫酸とのダイマー複合体を示している。二つの八糖ドメインは、図１では太線により表されている。
八糖ドメインのみがダイマーの形状のγ−ＩＮＦの結合し、中央のドメインは二つの末端の間のブリッジを形成する。
文書ＦＲ−Ａ−２ ７３６ ８３２（ＷＯ−Ａ−９７／０３７００）（特許文献１）は、一群の式Ａ−Ｘ−Ｂ［式中、ＡおよびＢは独立してオリゴ糖グループを表し、充分な陰イオン電荷をたとえば硫酸基の形状において保持して、前記オリゴ糖に対し、ペプチド配列１２５〜１３１を含有するヒトのγ−インターフェロンのＣ末端部分に対する親和性を付与するようにし、Ｘはスペーサーアームであって、γ−インターフェロンのホモダイマーのＣ末端の前記ペプチド配列をグループＡおよびＢの各々に結合させるべく充分な長さがある］を含んでなるγ−インターフェロン活性調整剤を記述している。その文書に記述された化合物は、以下の欠点をもつ。
ＡおよびＢと呼ばれる分子は、ヘパリンまたはへパラン硫酸の脱重合フラグメントである。ここで、これらの分子が非常に大きな構造上の異質性によって特徴づけられること、および構造の定義されたこのタイプの分子を天然の供給源から得るためのプロセスは何ら存在しないことが思い起こされるであろう。かの文書に記述された化合物は、それゆえ、実際のところ多様な構造を持つ分子の混合物を表している。セグメントＸについても同じことが言え、場合によってはへパラン硫酸の脱重合フラグメントであってもよい。
かかる分子は必ずしもＣ２対称性（フラグメントＡ、Ｘ、およびＢが「一直線」であるかまたは同一方向に延伸するか、さもなければ「平行」に配置されている）がなく、それゆえそれが結合することになっているタンパク質の対称性は見られない。
さらに、これらの分子は動物起源であり、伝染性の可能性のある感染因子を運ぶという欠点をもつ。
国際公報ＷＯ９７／０３７００号パンフレット
それゆえ、γ−ＩＮＦに結合したとき、なかんずく、この分子をいかなる分解に対しても保護し、そのバイオアベイラビリティおよびまた半減期をも増加させることができるようにするか、またはへパラン硫酸によってこれらの組織内に蓄積されたγ−ＩＮＦを置換することが可能な分子が必要である。
言換えれば、γ−ＩＮＦと結合したとき、実質的にヘパリンと同様の作用をもち、それに関連する欠点をもたない分子が必要である。
本発明の目的は、γ−ＩＮＦに結合することが可能な、なかんずく上記の必要性を満たす分子を提供することである。
、
本発明の目的はまた、γ−ＩＮＦに結合することが可能であり、先行技術の類似の分子、特にヘパリンの、欠点、制限、不足、および不都合をもたない分子であって、先行技術の問題点を解決する分子を提供することである。
この目的および他の目的は、本発明に従って、γ−インターフェロン、γ−ＩＮＦに結合することが可能な、以下の式（Ｉ）、
Figure 2005533881
［式中、Ｘは二価のスペーサーグループであって、オリゴ糖フラグメントＡおよびＢを各々γ−インターフェロン（γ−ＩＮＦ）ホモダイマーのＣ末端のペプチド配列１２５〜１４３の一つへの結合させるべく充分に長く、ｎは０から１０までの整数を表し、たとえば０、１、２、３、４、または５に等しく、各Ｒは独立して水素原子、ＳＯ３ −基、またはリン酸基を表し、化合物（Ｉ）のグルコサミン単位の３位にはＳＯ３ −基がないという条件付きである］に対応する化合物を提供することにより達成される。
好ましくは、すべてのＲ基はＳＯ３ −基を表すか、またはすべてのＲ基はリン酸基を表す。
本発明による分子は新規である。それはいかなる天然の分子とも、また先行技術、特に出願、ＦＲ−Ａ−２ ７３６ ８３２（ＷＯ−Ａ−９７／０３７００）におけるいかなる合成分子とも同じではない。
事実、本発明による分子は、第一に、スペーサーグループＸのどちらの側にも位置する二つのオリゴ糖グループが、スペーサーアームに対して「対称」または「逆平行」として記述され得る配置をとるという事実のため、特異的な構造を有するのに対し、天然のヘパリンおよびへパラン硫酸分子の双方、および合成ヘパリンにおいては、また先行技術において記述された同様の分子においては、二つのオリゴ糖グループは「平行」または「非対称」な配列をとる。これらの分子は、それゆえ、それらが結合することが可能なタンパク質の対称性を見ることはない。
言換えれば、天然の分子および先行技術の分子は、これがヘパリン、へパラン硫酸、またはそれらに類似の分子を含んでいようとなかろうと、完全に、かつ全体的に非対称であり、すなわち、それらは「１２１２」型の形状にあるのに対し、本発明の分子は「１２２１」型の逆平行の形状にあり、すなわちＣ２型の対称性を有する。
さらに、本発明の分子は、本発明の分子がグルコサミン単位の３位に硫酸基を含まないという意味での、もう一つの本質的な構造特性によって、根本的に天然分子とは、また先行技術の分子とも異なっている。
この硫酸基がヘパリンの抗凝血活性の原因であるという事実から、本発明の分子はそれゆえ、先行技術の分子の、その抗凝血活性による主要な欠点の一つをもっていない。
本発明による分子は、ヘパリンタイプのオリゴ糖が、調整可能な親水性のスペーサー（Ｘ）によって結合されている、へパラン硫酸またはヘパリンの「構造上の模倣物」として定義されてよく、ＨＳがする方法でγ−ＩＮＦに対し特異的に結合する。
本発明の化合物はそれゆえ、すべて有利な特性と、そのうえさらにヘパリンの特性：すなわち、なかんずく、プロテアーゼからの攻撃に対しγ−ＩＮＦを保護するという事実、γ−ＩＮＦのバイオアベイラビリティの増加、競合によってγ−ＩＮＦ・へパラン硫酸複合体を解離する能力を、ヘパリンの本質的な欠点、すなわち抗凝血活性、をもつことなしに備えている。
最後に、本発明による分子は完全に合成分子であり、たとえばＦＲ−Ａ−２ ７３６ ８３２によって代表される、「末端」オリゴ糖フラグメントが、ほとんどの場合において、スペーサーアームと同様に天然起源のものである先行技術の分子とは異なっている。文書ＦＲ−Ａ−２ ７３６ ８３２の分子によって示された欠点は、特に、それを構成するフラグメントが天然の動物起源という点について、すでに前文において記述されている。
本発明の分子はそれゆえ、それらの特別の構造によって、先行技術において同じ目的のために使用された分子についての問題を解決することが見いだされた。
有利なことに、スペーサーグループは１５〜１５０Å、好ましくは３３〜５０Åの長さである。
サイトカインに対する親和性は、３３〜５０、たとえば５０Åの長さが最適である。
一般にスペーサーグループは、好ましくは１〜１２０Ｃの炭素鎖からなり、その一以上の炭素原子は任意に、Ｎ、Ｓ、Ｐ、およびＯから選ばれたヘテロ原子か、ＳＯ２基か、またはアリール基で置換され、前記炭素鎖もまた任意に、好ましくは硫酸基、リン酸基、およびカルボキシル基などから選ばれる、一以上のアニオン基を保持している。
有利なことに、また特に、本発明の化合物を合成するべく用いられるプロセスのため、スペーサーグループＸはポリグリコールに由来し、好ましくはポリ（アルキレングリコール）から選ばれ、これにおいてアルキレン基はポリ（エチレングリコール）のような、１から４個までのＣを含んでなる。
したがって、スペーサーグループは式、
Figure 2005533881
［式中、ｍは一般に５から３２までの整数である］に対応してよい。
したがって、本発明による化合物はさらに、好ましくは以下の式（ＩＩ）、
Figure 2005533881
［式中、ｎおよびｍは前文において既に示された意味を有する］に対応することができる。
式（ＩＩ）の化合物、特に好ましいものであるのは、ｎ＝０かつｍ＝５（ＩＩａ）：ｎ＝０かつｍ＝１０（ＩＩｂ）；ｎ＝０かつｍ＝３２（ＩＩｃ）；ｎ＝１かつｍ＝５（ＩＩｄ）；ｎ＝１かつｍ＝１０（ＩＩｅ）；ｎ＝１かつｍ＝３２（ＩＩｆ）；ｎ＝２かつｍ＝５（ＩＩｇ）；ｎ＝２かつｍ＝１０（ＩＩｈ）；ｎ＝２かつｍ＝３２（ＩＩｊ）である。
本発明はまた、式（ＩＩ）に相当する化合物の調製のためのプロセスに関しており、これにおいては、式（ＩＩＩ）、
Figure 2005533881
［式中、ｎは０から１０までの整数であり、たとえば０、１、２、３、４、または５に等しく、Ｒ１およびＲ２はヒドロキシル基保護基、好ましくはｐ−メトキリベンジルおよびベンジル基より選ばれる］の、オリゴ糖の前駆体である二つの水溶性化合物の、
式、
Figure 2005533881
［式中、ｍは５から３２までの整数である］の、スペーサーグループの前駆体であるジチオール化合物とのフリーラジカルカップリングが行なわれ、式（ＩＶ）、
Figure 2005533881
の化合物を得るようにし、次にチオエーテル官能基がスルホンへ酸化され、化合物（ＩＶ）の最終的な脱保護が行なわれて、式（ＩＩ）、
Figure 2005533881
［式中、Ｒ１は好ましくはｐ−メトキシベンジル基であり、Ｒ２はベンジル基である］の最終化合物を生じるようにする。
その式が上記の（ＩＩＩ）に示されているオリゴ糖の前駆体である水溶性化合物は、以下の連続的な段階により調製される：
ａ） 式（Ｖ）、
Figure 2005533881
の二糖は、Ｒ１基、好ましくはパラーメトキシベンジルの酸化的開裂を受け、式、
Figure 2005533881
の「アクセプター」二糖を生じるようにし、
ｂ） 平行して、式（Ｖ）の二糖、上記、はアリル基の１−プロペニルへの異性化を受け、次に、形成されたエノールエーテルの加水分解と、トリクロロアセトアミダートの形状にあるヒドロキシル基の活性化が続き、式（ＶＩｂ）、
Figure 2005533881
の「ドナー」二糖を生じるようにし、
ｃ） アクセプター二糖（ＶＩａ）およびドナー二糖（ＶＩｂ）は結合され、完全にアルファ立体特異性をもつ式（ＶＩＩ）の四糖（ｎ＝０）を得るようにし、
ｄ） 任意に段階ａ）〜ｃ）が繰返され、ｃ）において調製された四糖が段階ａ）の出発生成物とされ、式（ＶＩＩ）、
Figure 2005533881
の六糖（ｎ＝１）および八糖（ｎ＝２）を得るようにし、
ｅ） 任意に段階ａ）〜ｃ）が繰返され、ｄ）において調製された八糖が段階ａ）の出発生成物とされ、式（ＶＩＩ）の十六糖（ｎ＝６）を得るようにし、
ｆ） 脱アセチル、アジド官能基の還元、硫酸塩化、および鹸化が行なわれ、求めたオリゴ糖（ＩＩＩ）の前駆体である、所望の水溶性化合物を得るようにする。
式（Ｖ）の二糖は、好ましくは式（ＶＩＩＩ）
Figure 2005533881
の化合物と、式（ＩＸ）
Figure 2005533881
の化合物とのカップリング反応により調製される。
最後に、式（ＩＸ）の化合物が式（Ｘ）の化合物から調製され、式（ＶＩＩＩ）の化合物は式（ＸＩ）の化合物から調製される。
Figure 2005533881
化合物（ＸＩ）の好ましい調製プロセスは、式、
Figure 2005533881
の化合物を、−４０℃において、溶媒としてのジクロロメタン中、塩基としてのピリジン、アシル化剤としての塩化アセチル、および触媒としての４−ジメチルアミノピリジンを用いてアセチル化することである。
式（ＸＩ）の化合物は、一般に９５％以上の非常に高い収率で、かつ、フラノ誘導体が極微量、一般に約２％未満の量で存在することから高純度である。
難しい精製法はこのように、本発明によって避けられる。
以下の全体を通して、本発明による化合物の治療的使用は、本発明の化合物の一つでも、またいくつかでも使用してよい。
本発明はまた、概して薬物としての使用のための、化合物（Ｉ）に、また好ましい化合物（ＩＩ）ならびに（ＩＩａ）〜（ＩＩｉ）に関係しており、化合物（Ｉ）および化合物（ＩＩ）ならびに（ＩＩａ）〜（ＩＩｉ）は新規である。
言換えれば、本発明は概して薬物の調製のための、化合物（Ｉ）および化合物（ＩＩ）ならびに（ＩＩａ）〜（ＩＩｉ）の使用に関する。
本発明の化合物は、それらが単独で用いられる場合、外来性または内在性のγ−インターフェロンの活性を調整する、たとえば阻害するために使用されることが可能である。
本発明はそれゆえまた、モジュレーター、たとえば、阻害剤、すなわち外来性または内在性のγ−インターフェロンの活性のレジューサーまたはサプレッサーとしての使用のための、化合物（Ｉ）に、および化合物（ＩＩ）ならびに（ＩＩａ）〜（ＩＩｉ）にも関係する。
本発明はまた、γ−ＩＮＦのような前炎症性サイトカインの存在と関係づけられる、またはそれによって特徴づけられる疾患の治療における使用のための、化合物（Ｉ）に、および化合物（ＩＩ）ならびに（ＩＩａ）〜（ＩＩｉ）（単独で、すなわち何ら異なる構造を有する他の活性成分なしで）に関係しており、これらの疾患は、たとえば、多発性硬化症、肉芽腫症、クローン病、およびリウマチ様関節炎といった自己免疫性、炎症性、または変性性の疾患、および移植拒絶反応などである。
したがって本発明はまた、用いられた免疫抑制性の治療を補足するための、たとえば、移植拒絶反応を防止するための、処置における使用のための、化合物（Ｉ）に、および化合物（ＩＩ）ならびに（ＩＩａ）〜（ＩＩｉ）に関する。
本発明はまた、内在性または外来性のγ−インターフェロンの活性、特に過剰の活性に関連する症状または病理の治療を目的とした薬物の調製のための、化合物（Ｉ）（単独）および化合物（ＩＩ）ならびに（ＩＩａ）〜（ＩＩｉ）の使用に、またγ−ＩＮＦのような前炎症性サイトカインの存在と関係づけられる、またはそれによって特徴づけられる疾患の治療を目的とした薬物の調製のための、（Ｉ）の使用に関係しており、これらの疾患は、たとえば、多発性硬化症、肉芽腫症、クローン病、およびリウマチ様関節炎といった、自己免疫性、炎症性、または変性性の疾患、および移植拒絶反応などである。
本発明はまた、用いられた免疫抑制性の治療を補足するための、たとえば、移植拒絶反応を防止するための処置を目的とした薬剤の調製における、化合物（Ｉ）および化合物（ＩＩ）ならびに（ＩＩａ）〜（ＩＩｉ）の使用に関する。
本発明はさらに、式（Ｉ）または式（ＩＩ）もしくは（ＩＩａ）〜（ＩＩｉ）の化合物（またはいくつかの化合物）を含有する薬物；またγ−ＩＮＦのような前炎症性サイトカインの存在と関係づけられる、またはそれによって特徴づけられる疾患（これらは、たとえば、多発性硬化症、肉芽腫症、クローン病、およびリウマチ様関節炎といった、自己免疫性、炎症性、または変性性の疾患、および移植拒絶反応などである）の治療において使用するための、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩａ）〜（ＩＩｉ）の化合物（またはいくつかの化合物）を、単独で、および製薬上許容される賦形剤を含んでなる組成物；または、用いられた免疫抑制性の治療を補足するための、たとえば、移植拒絶反応を防止するための、処置においける使用のための、式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩａ）〜（ＩＩｉ）の化合物（またはいくつかの化合物）を含有する組成物に関する。
この点については、ガンマ・インターフェロンが前炎症性サイトカインであって、その存在が、炎症に関連したある数の病理を特徴づけていることが思い出されるべきである。かかる状況においては、内在性ガンマ・インターフェロンの生物活性を抑制または低減することが有用である。動物では実験モデルが、阻害性のモノクローナル抗体または、可溶性の形状のサイトカイン受容体を用いることにより、このような戦略（ガンマ・インターフェロンの阻害）の利点を証明している。実例としては、自己免疫性または変性性の疾患（多発性硬化症、肉芽腫症、クローン病、およびリウマチ様関節炎など）が挙げられてよい。同様に、ガンマ・インターフェロンの阻害は、免疫抑制性の治療、たとえば、移植拒絶反応を防止するための、シクロスポリンを用いた治療に対する有効な補足であってよい。
化合物（または複数の化合物）（Ｉ）を含有する薬物は、慣例的な実験手段により、特に所望される効果に従って、あらかじめ決められることが可能な濃度において投与されてよい。
本発明はまた、化合物（Ｉ）、または好ましい化合物（ＩＩ）、（ＩＩａ）から（ＩＩｉ）までに加えて、γ−インターフェロンを含有する薬物に関する。
かかる薬物は、化合物（Ｉ）とγ−インターフェロンとの組合せを、好ましくは０．０５〜１ｍｇのγ−インターフェロンおよび１〜５０当量の化合物（Ｉ）の割合で含有する。
この薬剤において、化合物（Ｉ）（たとえば（ＩＩ）または（ＩＩａ）〜（ＩＩｉ））およびγ−インターフェロンは、好ましくは化合物（Ｉ）とγ−インターフェロンとの複合体の形状にある。前記複合体はサイトカインのバイオアベイラビリティを増大し、タンパク質分解性の崩壊に対してそれを保護することを可能にする。
言換えれば、化合物（Ｉ）はγ−インターフェロンの、たとえば細胞外マトリックス中に、または多くの細胞の表面上に存在する内在性のへパラン硫酸分子による捕捉を防止し、それゆえそれが維持され、かつ全身の循環に輸送されるようにする。
さらに、化合物（Ｉ）はγ−インターフェロンを、その活性を低減または除外するかもしれない崩壊に対して保護し、かつγ−インターフェロンを、コンピテント細胞上でそれが作用する瞬間まで、その活性の最も高い形状に維持することを可能にする。
それゆえ本発明は、
− 薬物としての使用のための、式（Ｉ）（または（ＩＩａ）〜（ＩＩｉ））の化合物とγ−インターフェロンとの複合体。実際のところ、この複合体は新規であり、その治療的使用はまだ言及されていない；
− 免疫賦活薬としての使用のための上記の複合体、
に関する。
免疫賦活剤効果は、たとえば、癌における抗増加作用、および感染性の、たとえばウイルス性、細菌性、または寄生虫性の疾患その他における、免疫防御の活性化、臓器繊維症におけるコラーゲン合成の阻止能を含む。
さらに、本発明はそれゆえ、癌、感染性の、たとえばウイルス性、細菌性、または寄生虫性の疾患、および臓器繊維症から選ばれる疾患の治療における使用のための、上記の複合体に関する。
全般的に、本発明は前記複合体を含有する薬物に、また上記の疾患の治療のための該複合体の使用に関する。
本発明はまた、全般的に、薬物を調製するための複合体の使用に、および特に上記のような疾患の治療を目的とした薬物を調製するための複合体の使用に関する。
本発明はまた、癌、感染性の、たとえばウイルス性、細菌性、または寄生虫性の疾患、および臓器繊維症から選ばれる疾患の治療における使用のための、前記複合体および製薬上許容される賦形剤を含有する組成物に関する。
本発明は次に、スペーサー基が本質的にポリグリコール、特にポリエチレングリコールからなる以下の本発明の特別の態様の記載において、詳細に記述される。
本発明の化合物は、ヘパリンまたはへパラン硫酸の構造上の模倣物として、さもなければ、特に式（ＩＩ）、
Figure 2005533881
に相当する新規複合糖質として定義されることが可能である。
このような構造上の模倣物において、ヘパリン型の四〜八糖は、調節可能な長さの親水性のスペーサー、たとえばポリグリコール型のスペーサーによって結合される。
本発明による分子は、図１において記述されたように、へパラン硫酸がする方法でγ−ＩＮＦに特異的に結合する。
本発明による化合物を調製するためのプロセスの開発は、本質的に４つの問題点に直面した：
１．スペーサーとオリゴ糖の間の高収率のカップリングを得ることであり、それは常にかなりの量の合成を必要とする。
２．スペーサーと、オリゴ糖の第一のグルコサミン単位との間の結合形成の立体化学を調節すること。この立体化学は、それが天然のへパラン硫酸（ＨＳ）ポリマーにおいて見いだされる立体化学であることから、アルファであるべきである。
３．オリゴ糖のすべてのグリコシド結合のアルファ立体化学を調節すること。
４．天然の供給源から合成上の必要のための充分量を単離することができない希少糖である、Ｌ−イズロン酸を有効に利用できるようにすること。
以下の本文において本発明者らは、本発明による化合物の合成を、前文にリストされた合成の問題の各々に対し、本発明のプロセスによって提供される解決法をその都度強調しながら記述する。
１．ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）スペーサーへの効果的なカップリングの開発
オリゴ糖とスペーサーの間のカップリングのため、好ましくは通常の有機化学反応、アルケンに対するチオールのフリーラジカルカップリング（１９）、が本発明に従って利用される。この方法は、アルファ−アリル・グルコサミニド２およびジチオールＰＥＧ誘導体３ａ〜ｃを用いて首尾よく検査された（略図１）。
Figure 2005533881
２．アノマーアルキル化反応の立体選択性の調節
シュミット（Ｒ．Ｒ． ＳＣＨＭＩＤＴ）（２０）によって開発され、本研究室において既に使用されたアノマーアルキル化法（２１）が、化合物２を調製するために選択された。ヘミアセタール５ａに由来するアルコキシドの、臭化アリル６との反応は、ジクロロメタン中で、もっぱらベータ立体異性体をもたらす結果となる。
驚いたことに、テトラブチルアンモニウムアイオダイドの添加は立体化学を反転し、結果として主にアルファ異性体を９８／２まで達することが可能なアルファ／ベータ比で生じる（２２）（略図２）。意外にもアルファ異性体を生じる結果となる本発明に特異的なこの手法は、先行技術において記述も示唆もされていない。
グルコサミン誘導体５ａのための反応条件は最適化され、他の基質へ未修飾で適用された。最適化は温度、反応物質の比、濃度などに関する。このように、これらの反応条件は、他の糖およびもう一つの求電子試薬、臭化ベンジル７に適用された。こうして、テトラブチルアンモニウム塩によるアノマーアルキル化反応の立体選択性の反転が一般的であったことを示すことができた。
Figure 2005533881
３．ヘパリンフラグメント前駆体、四〜八糖の調製
ヘパリンまたは模倣体の長いフラグメントを調製するための多くの方法がある（２３）。
本発明のプロセスの本質的な段階のため、アノマー位にアリル基を有するフラグメントをスペーサーとのカップリング用に調製することが絶対必要であり、そのことは特別のプロセスが組立てられなければならないことを意味する。事実、適当に保護された二糖の調製に基づく高度に収束する方法を用いることが必要であったが、それはドナーの二糖およびアクセプターの二糖を生成して四糖を調製することができるようにし、後者は、それ自身が六および八糖の調製のためのベースとしての役割を果たすことが可能である。オリゴ糖カップリングの立体化学的制約、所望の硫酸塩化単位、およびまたアノマー位におけるアリル基の必要性は、二糖１０が合成のための基本ブリックとしてイメージされる結果を生じた（略図３）
Figure 2005533881
３．１．基本の二糖１０の合成
３．１．２．Ｌ−イズロン酸（２４）への新規なアクセス
Ｌ−イズロン酸は希少糖であり、天然の供給源から合成上の必要に対し充分な量を単離することは不可能である。それゆえ、この化合物の誘導体を調製するための効率的な方法をもつことは極めて重要である（２５）。アルデヒド１２への有機金属の添加（２６）が、非常に低いジアステレオ選択性をもって生じることは報告されている（２７）が、この化合物へのカルボン基前駆体求核試薬の付加についての研究が、本発明の文脈に取入られた（略図４）。
Figure 2005533881
最初に、ビニル有機金属化合物の付加が研究され、驚いたことに、ある条件下ではイド（ｉｄｏ）およびグルコ（ｇｌｕｃｏ）ジアステレオ異性体１３ａおよび１４ｂを５０／５０の割合で得ることができたことが注目された。この結果は、グルクロン酸およびイズロン酸を含有するグリコサミノグリカンフラグメントのコンビナトリアル合成の開発という観点から特に有利である。
続いて、Ｌ−イド立体異性体の割合が求核試薬の障害によって増加し、（ＰｈＳ）３ＣＬｉについて１００％の立体選択性に達することが注目された。アルデヒド１２への、このトリス（フェニルチオ）メチルリチウムの完全な立体選択的付加は、Ｌ−イズロン酸１７のピラノース誘導体の調製におけるキーステップである。
略図５ａに示された、略図５のプロセスにおけるもう一つの改良点は、溶媒としてのジクロロメタン中で、塩基としてのピリジン、アシル化剤としての塩化アセチル、および触媒としての４−ジメチルアミノピリジンを用いて、プロセスを−４０℃において行なうことによる化合物１５の結晶のアセチル化である。このような条件の下では、混合物１７（α：β、２／９８）が９８％の収率で得られ、フラノ誘導体１６は極微量（２％）存在するにすぎない。この改良がめざましいのは、先に記述された条件下では（２５）、誘導体１６は４０％の収率で得られ、難しい精製および脱アセチル化によるその再利用を必要としたことからである。
ジアセトングルコース１１からのヘパリンフラグメントの調製用に一般に用いられるこのシントンの調製の全体的な収率は６５％であり、それは、結果的に全体の収率が２５〜３０％に終わる、先に記述された方法（略図５）よりもはるかに高い。
Figure 2005533881
３．１．３．二糖１０の獲得
Ｌ−イズロン酸シントンを獲得する種々の方法が開発されていることから、次に基本ブロック１０を調製するための２−アジドグルコース誘導体を調製することが必要である。２位にアジド基を招く通常の合成においては、この基が最初に、それに続いてグリコシル化反応によりアノマー位を保護する基が導入される。本発明者らはすでに、アルファ・アリル−Ｎ−アセチル・グルコサミニド８ａ（略図４参照）を合成する非常に有効な方法をもっていることから、本発明者らは、バセラ（ＶＡＳＥＬＬＡ）（２８）により開発されたトリフィル（ｔｒｉｆｙｌ（トリフルオロメタンスルホニル））アジドを化合物１８上へのアジド基の導入用に使用することを決定したが、そのアノマー位はすでにアリル基によって保護されている（略図６）。
Figure 2005533881
ヘパリン型オリゴ糖の調製にシントン１３ａを用いることが可能であることを証明する目的で、それをドナー２６へ転換するため特別の方法論が開発され、それにおいては基本の二糖１０のすべての保護基がカップリング反応の前に導入される（略図７）。
この方法論はまた、部分的にグルクロニックシントン１４ａに適用されており、２６と同様の保護基をもつグルクロン酸の調製を可能にした。
Figure 2005533881
Ｌ−イズロン酸のみを有するＧＡＧ：グルコサミノグリカンを調製することが所望される場合、チオオルトエステル１３ｃを得るための立体選択性のプロセスは、１３ａおよび１４ａを生じる結果となる非立体選択性の付加よりも、はるかに有利である。シントン１７は、一段階でドナー２７へ転換され得たことが示された。この化合物は充分な収率でアクセプター２１ヘ結合して結果的に二糖２２を生じるが、それにイズロン酸部分に対する保護基がさらに導入されなければならず、このプロセスは数段階で行なわれる（略図８）。
Figure 2005533881
３．２．オリゴ糖を得るための有効な戦略
二糖１０を用いて、アクセプターの二糖２５は、ＤＤＱ：ジクロロジシアノキノンによるパラメトキシベンジル基の酸化的開裂により、容易に調製される。
ドナー二糖２６（２９）は、その部分については、イリジウムを主成分とする触媒（３０）を用いた、アリルの、１−プロペニルへの異性化と、次いでそのように形成されたエノールエーテルの、水銀塩によって触媒される加水分解によって調製され、このことがアノマー位を解放するようにし、それは続いてトリクロロアセトイミデートの形状において活性化される（略図９）。
Figure 2005533881
アクセプター二糖２５と、ドナー二糖２６との、−４０℃における、ＴＢＤＭＳＯＴｆの存在下でのカップリングは、優れた収率で、完全なアルファ・立体選択性をもつ四糖２７を生じる。四糖２７に対し，二糖に対するのと同じ操作を適用することにより、非常によい収率で、アクセプター四糖２８およびドナー四糖２９を調製することが可能であり（略図１０）、このことは六−および八糖、３０および３１を得ることを可能にする。この方法論は、何ら問題なく十六糖または十二糖の調製のために拡張されることが可能である。
Figure 2005533881
４．新規複合体の調製
保護されたオリゴ糖は、脱アセチル、アジド官能基の還元、硫酸塩化、そしてさらに鹸化により、部分的に脱保護された水溶性の化合物へ転化される（略図１１）。
Figure 2005533881
ビスチオＰＥＧへのカップリングの用意ができた水溶性化合物３２〜３４は、このようにして得られる。中圧ランプからの紫外線照射下に、予期された生成物が生じるが、おそらくはベンジル基の酸化に由来する副産物に伴われており、それはＣ１８逆相クロマトグラフィーによって除去される。新規複合糖質の最終的な脱保護は、触媒被毒を防止するため、チオエーテルをスルホンに酸化した後、リン酸緩衝液、ｐＨ７の存在下に、水酸化パラジウム炭素上での水素化分解により行なわれる（略図１２）。
Figure 2005533881
このように合成された生成物は、γ−ＩＮＦに対するそれらの結合能について検査された。
リアルタイム分子相互作用分析システム（ＢＩＡｃｏｒｅ）は、様々な分子の間に存在する親和性を非常に迅速に同定および定量化する可能性を提供する。
この装置は、バイオセンサー（「センサーチップ」）の表面で反応した分子の濃度を測定するための、光検出システム、表面プラズモン共鳴現象を使用する。ビオチン化されたヘパリンは、ストレプトアビジンであらかじめ活性化された「センサーチップ」上に固定される。これにより、固定化されたヘパリンつきの、このセンサーの表面で、連続流において注入されたγ−ＩＮＦの相互作用を測定することが可能である。ヘパリンとγ−ＩＮＦの間の相互作用は、結果としてセンサーの表面で質量に変化を生じ、それが時間の関数として記録される。第二の段階においては、γ−ＩＮＦは種々の合成された生成物とともにプレインキュベートされ、複合体は次いでバイオセンサーの表面に注入される。検査された生成物の、γ−ＩＮＦ／ヘパリン相互作用を阻害する能力が測定される。
結果は図２に開示されており、二つのオリゴ糖を連結している５ｎｍ（５０Å）のスペーサーアームを含有する分子が、サイトカインに対する非常に高い親和性をもつことを示している。
３３Åおよび１１４Åのスペーサーアームを含有する分子についても同じことが言え、それらもまたγ−ＩＮＦと相互作用する能力をもつが、それらはより低い親和性をもつ。
本発明は次に、制限しない例証として示された、以下の実施例を参照して記述されるであろう。
この実施例は、本発明の化合物、すなわちインターフェロン結合性の新規複合糖質の合成を記述しており、これにおいてスペーサーグループまたはアームは、種々の長さのポリ（エチレングリコール）に由来し、末端の二つのオリゴ糖は三硫酸化二糖体からなる。合成出発生成物は、ルビーノ（Ａ． ＬＵＢＩＮＥＡＵ）、エッシャー（Ｓ． ＥＳＣＨＥＲ）、アライス（Ｊ． ＡＬＡＩＳ）、ボナフェ（Ｄ． ＢＯＮＮＡＦＦＥ）著、テトラヘドロン速報誌（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．）、１９９７年、第３８巻、ｐ．４０８７−４０９０による、すなわち、以下の手順１に従って調製された化合物８αである：
手順１：
市販のグルコサミン塩酸塩は、無水酢酸（２０当量）およびピリジン（３０当量）の混合物中で過アセチル化される。反応物の蒸発およびトルエンとの共蒸発の後、混合物は酢酸エチル／石油エーテル混合物から晶化され、過アセチル化されたグルコサミンを９０％の収率で生じるようにする。回収された結晶は、無水ＴＨＦ中、１．１当量の酢酸ヒドラジン（０．３Ｍ濃度）により、２０℃において２０時間処理される。ＴＨＦは次いで、減圧下に周囲温度において蒸発され、残渣はトルエンと共蒸発され、残留する油は直接、シリカゲル上で、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル／ＣＨ２Ｃｌ２（８／１／１〜８／０／２）混合物を用いてクロマトグラフされる。アノマー位がフリーの組成物が７５％の収率で得られる。それは次に必要量のＣＨ２Ｃｌ２中で可溶化され、０．５Ｍの濃度を保持するようにし、臭化テトラブチルアンモニウム（２当量）、ＮａＨ（１．５当量）、および臭化アリル（２０当量）の、−２０℃に冷却された混合物に対して滴下添加された。次いで温度は１２時間で２０℃にもどされ、反応は０．５当量の酢酸の添加により停止される。反応媒体は減圧下に蒸発され、残渣は直接、シリカ上でクロマトグラフ（溶出液：１／０〜７／３ トルエン／アセトン）され、化合物８ａ αを８８％の収率で得るようにする。
化合物８ａ αは、水中、８当量のＢａ（ＯＨ）２により１００℃において一晩処理され、次に硫酸を添加することによりｐＨは３まで下げられ、混合物は遠心分離されて硫酸バリウムを沈殿するようにし、上清は集められて減圧下に蒸発され、水と共蒸発され、形成された酢酸を除去するようにする。塩１８は炭酸カリウムを用いて中和され、アルパー（Ｐ． Ｂ． ＡＬＰＥＲ）、ハング（Ｓ． Ｃ． ＨＵＮＧ）、ウォング（Ｃ． Ｈ． ＷＯＮＧ）著、テトラヘドロン速報誌（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．）、１９９６年、第３７巻、ｐ．６０２９−６０３２に記述されたプロトコール、すなわち以下の手順２に従ってＴｆＮ３で直接処理される：
手順２：
１５当量のＮａＮ３は必要最少量の水に溶解され、溶液は０℃に冷却され、次いで同体積のジクロロメタンおよび２当量のトリフリック（トリフルオロメタンスルホニック）・アンヒドライドが添加される。０℃で２時間激しく撹拌した後、混合物は静置されて沈降により分離されるようにし、次いで有機相は回収され、同体積の飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄される。有機相は次に塩１８および０．０１当量の硫酸銅の水溶液へ直接添加される。均一な混合物を得るために必要な再少量のメタノールが次に添加される。２０℃で４時間の反応の後、過剰のトリフィルアジドを破壊する目的で１当量のブチルアミンが添加される。
結果として得られた溶液は、蒸発により７０〜２００μのシリカゲル上に析出され、化合物１９が８／２ ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２混合物で溶出される。
減圧下の蒸発の後、残渣は無水アセトニトリル中に可溶化され、カンフルスルホン酸の存在下にベンズアルデヒドジメチルアセタールで処理される。周囲温度において２時間後、溶液は炭酸水素ナトリウム水溶液の添加により中和され、ジエチルエーテルを用いて化合物２０が抽出される。シリカゲル上でのクロマトグラフィー（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ）による精製の後、化合物２０はＤＭＦ中、ＭａＨの存在下に臭化ベンジルで処理される。ジエチルエーテルによる希釈、水による有機相の洗浄および蒸発の後、残渣は６０％酢酸溶液を用いて５０℃で２時間処理される。蒸発およびトルエンとの共蒸発の後、残渣はシリカゲル上でクロマトグラフされる（石油エーテル／ＥｔＯＡｃ）。そのようにして得られたジオールは、無水ピリジン中に可溶化され、１当量の塩化アセチルが−２０℃において添加され、温度は次に０℃までもどされる。反応は一晩の期間の後に完了する。ピリジンは次いで減圧下に蒸発され、残渣はジエチルエーテル中に可溶化され、得られた有機相は次に希塩酸溶液、水、および炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄される。次いで有機相は乾燥され、蒸発され、シリカゲル上で石油エーテルとＥｔＯＡｃとの混合物を用いてクロマトグラフされる。化合物２１は、このようにして８ａ αより７５％の全体収率で得られる。
さらに、誘導体１７が、ルビーノ（Ｌｕｂｉｎｅａｕ Ａ．）、ガバード（Ｇａｖａｒｄ Ｏ．）、アライス（Ａｌａｉｓ Ｊ．）、ボナフェ（Ｂｏｎｎａｆｆｅ Ｅ．）著、テトラヘドロン速報誌（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．）、２０００年、ｐ．３０７−３１１、に従って、すなわち、以下の手順３に従って調製調製される：
手順３：
ジメチルホルムアミド中に可溶化された市販のダイアセトングルコース（０．５Ｍ濃度）は、１．２当量の臭化ベンジルおよび１．３当量のＮａＨで処理される。２０℃において１時間後，過剰のＮａＨはイソプロパノールにより破壊される。次いで反応混合物はエチルエーテルで希釈され、有機相は水で３回洗浄される。蒸発の後、残渣は６０％酢酸に取上げられ、０．１Ｍの濃度を達成するようにする。５０℃で２時間後、混合物は蒸発され、次いで減圧下にトルエンで共蒸発される。シリカゲル上でのクロマトグラフィー（溶出液：９／２〜２／８ 石油エーテル／酢酸エチル）は、所望のジオールを９８％の収率で得ることを可能にする。このジオールはジクロロメタン中に可溶化され（０．２５Ｍ濃度）、同体積の水、０．５等量の硫化水素テトラブチルアンモニウム、および０．５当量のＮａＨＣＯ３が添加され、０℃まで温度が下げられた後、続いて少量部中の２当量のＮａＩＯ４が添加される。次いで温度は周囲温度までもどされ、混合物は１時間撹拌される。沈降による分離の後、有機相は回収され、蒸発され、次いでエチルエーテルで取上げられる。有機相は水で３回洗浄され、硫酸マグネシウム上で乾燥され、濾過および蒸発される。残渣はシリカゲル上に濾過され（溶出液：酢酸エチル）、定量的に得られた化合物１２は、蒸発およびトルエンとの共蒸発の後、直接次の段階で使用される。トリフェニルチオメチルリチウムの溶液は、以下の方法で調製される：１．２当量（アルデヒドを基準として）の トリフェニルチオメタンは、０．８Ｍの濃度を得るために必要な量のＴＨＦ中に可溶化され、温度は−７８℃まで下げられ、混合物は機械的に撹拌され、次いでヘキサン中の溶液にある１．１当量（アルデヒドを基準として）のｎ−ブチルリチウムが添加される。黄色の沈殿物が現れ、撹拌は−７８℃において１時間３０分にわたって維持される。次に、ＴＨＦ中に可溶化されたアルデヒド（０．６Ｍ濃度）が滴下添加される。混合物は−７８℃において１時間撹拌され、次いで温度は１６時間にわたって周囲温度までもどされ、反応は飽和塩化アンモニウム溶液の添加により停止される。結果として得られる溶液はエチルエーテルで３回抽出され、有機相は硫酸マグネシウム上で乾燥され、蒸発され、次にシリカゲル上でクロマトグラフされる（溶出液：９／１〜６／４ 石油エーテル／酢酸エチル）。化合物１３ｃは、このようにして９２％の収率で得られる。
前文で得られたトリフェニルチオオルトエステル１３ｃは、０．０５Ｍの濃度を得るために必要な体積のメタノール中に可溶化され、次いで１／１０体積の水、および１／１０体積のジクロロメタンが、続いて１．７当量のＣｕＯおよび４当量のＣｕＣｌ２が添加される。周囲温度において１時間後、混合物はセライト（Ｃｅｌｉｔｅ）５４５を通して濾過され、周囲温度に置いて減圧下に蒸発される。残渣はＣＨ２Ｃｌ２に取られ、有機相は飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄され、液相分離濾紙を通して濾過され、蒸発される。混合物はシリカ上でのクロマトグラフィー（溶出液：８／２〜５／５ 石油エーテル／ＥｔＯＡｃ）により精製される。このようにして生成物１４が９４％の収率で得られる。次に生成物１４は９０％トリフルオロ酢酸溶液により、周囲温度において３０分間処理される（反応物の最初の濃度：０．３５Ｍ）。反応媒体は減圧下に蒸発され、水で２回、共蒸発される。このようにして油が得られ、それは結晶する。化合物１５のこのような結晶は、ジクロロメタン中に懸濁され（０．２Ｍ濃度）、温度は−４０℃に低下される。次に、９当量のピリジン、０．０１当量の４−ジメチルアミノピリジンおよび５当量の塩化アセチルが添加される。１時間の−４０℃における撹拌の後、温度は周囲温度までもどされ、混合物はジクロロメタンで希釈され、有機相はＮａＨＣＯ３の飽和溶液、水、１Ｍ硫酸、および水で洗浄される。このようにして混合物１７（α／β ２／９８）が９８％の収率で得られる。
誘導体１７は、ジャキネット（Ｊａｃｑｉｎｅｔ Ｊ． Ｃ．）、プティトゥ（Ｐｅｔｉｔｏｕ Ｍ．）、デュショソワ（Ｄｕｃｈａｕｓｓｏｙ Ｐ．）、レダーマン（Ｌｅｄｅｒｍａｎ Ｉ．）、チャオアイ（Ｃｈｏａｙ Ｊ．）、トッリ（Ｔｏｒｒｉ Ｇ．）、シナイ（Ｓｉｎａｙ Ｐ．）著、カルボハイドレート・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓ．）、１９８４年、第１３０巻、ｐ．２２１により、すなわち以下の手順４に従って、ドナー２７へ転換される。
手順４：
混合物１７は無水ジクロロメタン（０．１Ｍ濃度）中に溶解され、次いで１／１０体積の無水酢酸エチルが添加され、混合物を１．３当量のＴｉＢｒ４の存在下に２４時間反応させる。混合物はＣＨ２Ｃｌ２で希釈され、氷冷水で洗浄される。有機相はシリコンペーパーを通して濾過され、次いで濃縮される。このようにして得られた生成物２７は、直接次の段階において使用される。
２１（１．２当量）の、２７とのカップリングは、ジクロロメタン中、２０℃において、行なわれ、篩４Åおよび銀トリフラート（１．２当量）の存在下に行なわれ、石油エーテル／ＥｔＯＡｃ混合物を用いたシリカゲル上でのクロマトグラフィーの後、結果として二糖２２を８５％の収率で生じる。
化合物２２は、Ｋ２ＣＯ３の存在下に無水メタノール中で脱アセチル化され、ダウエックス（ＤＯＷＥＸ（登録商標））５０ｘ８ ２００Ｈ＋樹脂を用いた中和、濾過、および蒸発の後、残渣はベンゼン中に懸濁され、２．２当量のＢｕ２ＳｎＯが添加される。２時間の水の共沸エントレインメントの後、３当量のトリメチルアミンおよび２．２当量の新たに蒸留された塩化アセチルが添加される。次いで、３つの生成物の混合物が得られ、その主要なものは化合物２４であり、６／４’および６／２’／４’位にアセチル化された化合物を伴う。
石油エーテル／ＥｔＯＡｃ混合物を用いたシリカゲル上でのクロマトグラフィーの後、副産物は脱アセチル化され、再度アシル化反応を受ける：化合物２４はこのように、リサイクリングの後に８５％の収率で得られる。
この化合物２４の、０．１当量のトリメチルシリルトリフラートの存在下における、ジクロロメタン中、２当量のパラ−メトキシベンジルアルコールトリクロロアセトイミデートによる処理は、化合物１０を８０％の収率で、２４の反応していない２０％を伴って得ることを可能にする。これらの二つの生成物１０および２４は、石油エーテル／ＥｔＯＡｃ混合物を用いたシリカゲル上でのクロマトグラフィーによって容易に分離されることが可能である。
基本の二糖１０は、９５％の収率で、ドナー二糖２６（タボー（Ｔａｂｅｕｒ Ｃ．）、マレット（Ｍａｌｌｅｔ Ｊ． Ｍ．）、ボーノ（Ｂｏｎｏ Ｆ．）、 ハーバート（Ｈｅｒｂｅｒｔ Ｊ． Ｍ．）、プティトゥ（Ｐｅｔｉｔｏｕ Ｍ．）、シナイ（Ｓｉｎａｙ Ｐ．）著、バイオオルガン・メディカル・ケミストリー（Ｂｉｏｏｒｇａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、１９９９年、第７巻、ｐ．２００３−２０１２、において、もう一つの経路によって合成された）へ、Ｃ８Ｈ１４ＭｅＰｈ２ＰＩｒ１ＰＦ６の存在下でのアリルの異性化、および水銀塩によるエノールの切断によって、オルトフォールト（Ｏｌｔｖｏｏｒｔ Ｊ． Ｊ．）、ヴァン・ボッケル（Ｖａｎ Ｂｏｅｃｋｅｌ Ｃ． Ａ． Ａ．）、コニング（Ｋｏｎｉｎｇ Ｊ． Ｈ．）、ヴァン・ブーン（Ｖａｎ Ｂｏｏｍ Ｊ． Ｈ．）著、シンセシス（Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）、１９８１年、ｐ．３０５−３０８、により記述されたように、すなわち以下の手順５に従って転換される：
手順５：
二糖１０は、無水ＴＨＦ中に可溶化され、０．０６Ｍの濃度とする。溶液は真空下に脱気され、０．０１３当量のＣ８Ｈ１４ＭｅＰｈ２ＰＩｒ１ＰＦ６が添加される。混合物は再度脱気され、二水素と２分間接触して置かれ、最後に再び脱気され、次いでアルゴン雰囲気下に置かれる。周囲温度における２時間の撹拌の後、混合物は蒸発され、０．０５Ｍの濃度を得るために必要な体積のアセトン中に取られ、次に１．２当量のＨｇＯおよび１．１当量のＨｇＣｌ２が添加される。周囲温度における２時間の撹拌の後、混合物はセライト５４５を通して濾過され、蒸発され、エチルエーテルで取上げられる。エーテル相は１０％ＫＩ溶液で、次いで水で洗浄され、硫酸マグネシウム上で乾燥され、濾過され、蒸発され、最後にシリカゲル上でクロマトグラフされ（溶出液：８／２〜６／４ トルエン／ＥｔＯＡｃ）、アノマー位がフリーの二糖を９７％の収率で生じる。
次に、ジクロロメタン中で、６当量のトリクロロアセトニトリルおよび２当量のＫ２ＣＯ３を用いた処理が、続いて石油エーテル／ＥｔＯＡｃ １％ＮＥｔ３混合物を用いたシリカゲル上でのクロマトグラフィーが行なわれる。二糖１０は、水で飽和されたジクロロメタン中、１．５当量のＤＤＱで処理され、有機相とともに飽和ＮａＨＣＯ３溶液で洗浄され、石油エーテル／ＥｔＯＡｃ混合物を用いたシリカゲル上でのクロマトグラフィーの後、アクセプター二糖２５を９５％の収率で生じる。
アクセプター二糖２５と、ドナー二糖２６（１．３当量）とのカップリングは、ジクロロメタン中、−４０℃において、篩４Åおよびｔ−ブチルジメチルシリル・トリフラート（０．２当量）の存在下に行なわれる。触媒の添加の後、反応物は−４０℃において３０分間静置され、次に温度は０℃にもどるようにされ、その温度において０．２当量のトリエチルアミンの添加により反応は停止される。反応混合物の、シリカゲル上でのＣＨ２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ／石油エーテル混合物を用いた直接のクロマトグラフィーは、四糖２７の９５％の収率での単離を可能にする。
この四糖２７は、次にアクセプター四糖２８（９０％収率）およびドナー四糖２９（９５％収率）へ、二糖１０についてと同様の反応順序を用いて転換される。四糖２７の調製と同じ条件を用いることにより、ドナー二糖２６とアクセプター四糖２８との、またドナー四糖２９とアクセプター四糖２８とのカップリングは、９５％の収率で六糖３０および八糖３１を生じる。
オリゴ糖２７、３０、および３１は、０．５当量の無水Ｋ２ＣＯ３の存在下に、無水メタノール中で脱アセチル化される。ダウエックス５０ｘ８ ２００Ｈ＋を用いた反応媒体の中和、および蒸発の後、生成物はシリカゲル上でのクロマトグラフィーにより精製され、８６〜９５％の収率で得られる。アジド基の還元は、トリエチルアミン（アジド基あたり２当量）の存在下に、メタノール中、プロパンジオール（アジド基あたり２当量）を用いて行なわれる。アルゴンスウィーピングによるメタノールの蒸発の後、残渣はシリカゲル上でクロマトグラフされ（ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）、アミノ化された化合物を９０〜８０％の収率で生じる。
これらの化合物は次に、ピリジン・ＳＯ３複合体（硫酸化される官能基あたり５当量）を用いて、ピリジン中、２０℃で１６時間、続いて５５℃で２４時間硫酸化される。過剰の硫酸化剤は１６当量のメタノールで破壊され、混合物は直接、セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ（登録商標））ＬＨ−２０（１／１ ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）上で、次いでＣ１８逆相カラム（ＭｅＯＨ／５ｍＭ ＡｃＯＨ−Ｎｅｔ３緩衝液、ｐＨ７．０）上でクロマトグラフされる。バイオラド（Ｂｉｏｒａｄ（登録商標））ＡＧ５０Ｗｘ８ ２００Ｎａ＋樹脂上での交換の後、硫酸化されたオリゴ糖は８０〜９５％の範囲の収率で得られる。鹸化は、水溶性の水酸化リチウム（鹸化されるエステルあたり２６当量）および水溶性の過酸化水素水（水酸化リチウムを基準として３当量）の存在下に、３７℃に置いて４８時間行なわれる。ｐＨは、酢酸（水酸化リチウムを基準として０．７５当量）の添加により５とされ、混合物はＣ１８逆相カラム（ＭｅＯＨ／１０ｍＭ ＡｃＯＨ−ＮＥｔ３緩衝液、ｐＨ７．０）上でクロマトグラフィーにより精製される。バイオラド（Ｂｉｏｒａｄ（登録商標））ＡＧ５０Ｗｘ８ ２００Ｎａ＋樹脂上での交換の後、各々ｎ＝０、１、および２であるオリゴ糖３２〜３４は、９０％〜定量的な収率で得られる。
オリゴ糖３２〜３４（２．５当量）の、ポリエチレングリコール由来の様々な長さ：すなわち、ｍ＝５、１０、および３２のジチオールスペーサーへの、水中０．２Ｍの濃度におけるカップリングは、３６５ｎＭにおける紫外線照射下か、またはラジカルイニシエーターの存在下での加熱によって行なわれる。
混合物は直接、８当量のオキソンで、すなわち０．２Ｍの溶液を用いて処理され、Ｋ２ＨＰＯ４の添加によりｐＨは６とされる。２０℃で４時間の反応の後、過剰の酸化剤はチオ硫酸ナトリウムの添加により還元され、混合物は直接、半調製用Ｃ１８逆相ＨＰＬＣ（ＣＨ３ＣＮ／５ｍＭ ＡｃＯＨ−ＮＥｔ３緩衝液、ｐＨ７．０）により精製される。バイオラド（Ｂｉｏｒａｄ（登録商標））ＡＧ５０Ｗｘ８ ２００Ｎａ＋樹脂上での交換の後、オリゴ糖は１００μｌの４０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液，ｐＨ７中に再度可溶化され、１質量当量の２０％水酸化パラジウム炭素の存在下に、大気の水素圧下に置かれる。２０℃において４８時間の反応の後、試料はセライト５４５を通して濾過され、次にバイオゲル（Ｂｉｏｇｅｌ（登録商標））１０ ＤＧ（Ｈ２Ｏ）上で脱塩化される。化合物ＩＩＩａ〜ｉはこのように、これらの三つの段階にわたって８０〜９０％の収率で得られる。平行して、オリゴ糖３２〜３４は同じ条件下に定量的に脱ベンジル化される。化合物１ａ〜１ｃについてｎ＝０であり、化合物１ｄ〜１ｆについてはｎ＝１であり、また化合物１ｇ〜１ｉについてはｎ＝２である。化合物１ａ、１ｄ、および１ｇについては、ｍ＝５かつスペーサーアームの長さは３３Åであり、化合物１ｂ、１ｃ、および１ｈについては、ｍ＝１０かつスペーサーアームの長さは５０Åであり、化合物１ｃ、１ｆ、および１ｉについては、ｍ＝３２かつスペーサーアームの長さは１１４Åである。
Figure 2005533881
Figure 2005533881
Figure 2005533881
参考文献
1. Billiau A., Adv. Immunol. 1996, 65 : 61 - 130.
2. Boutin C., E. Nussbaun, I. Monnet, J. Bignon, R. Vanderschueren, J.C. Guerin, O. Menard, P. Mignot, G. Dabouis and J.Y. Douillard, 1994, Cancer 74 : 2 460 - 2 467, Escudier B., F. Farace, E. Angevin, F. Triebel, S. Antoun, B. Leclercq, M. Brandely, A. Aboudaram, G. Nitenberg and T. Hercend., 1993, Eur. J. Cancer 29A : 724 - 728. Jett, J.R., A.W. Maksymiuk, J.Q. Su, J.A. Mailliard, J.E. Krook, L.K. Tschetter, C.G. Kardinal, D.I., Twito, R. Levitt, and J.B. Gerstner. 1994. J. Clin. Oncol. 12 : 2321 - 2 326.
3. Gallin J.I., 1991, New. Engl. J. Med. 324 : S09 -516.
4. Cannon, G.W., R.D. Emkey, A. Denes. S.A. Cohen, P.A. Saway, F. Wolfe, A.M. Jaffer, A.L. Weaver, B.J. Manaster, and K.A. McCarthy, 1993. J. Rheumatol. 20 : 1867 - 1873.
5. Czarniecki, C.W., and G. Sonnenfeld., 1993. APMIS 101 : 1 - 17. Murray, H.W., 1994. Am. J. Med. 97 : 459 - 467.
6. Kakumu, S, T. Ishikawa, M. Mizokami, E. Orido, K. Yoshioka, T. Wakita, M. Yamamoto., 1991., J. Med. Virol. 35 : 32 - 37.
7. Freundlich B, Jimenez SA, Steen VD, Medsger TA, Szkolnicki M, Jaffe HS., 1992., Arthritis Rheum. 35 : 1134 - 1142.
8. Todd P.A. and Goa K.L., 1992., Grugs 43 : 111 -122.
9. Froyen G. and Billiau A., 1997, Biotherapy 10 : 49 - 57.
10. Ozmen L., Roman D., Fountoulakis M., Schmid G., Ryffel B., Garotta G.J., Interferon Res, 1994, 14 : 283 - 4. Ozmen L., Roman D., Fountoulakis M., Schmid G., Ryffel B., Garotta G., Eur. J. Immunol., 1995, 25 : 6 - 12.
11. Lortat-Jacob H., H.K. Kleinman, and J.A. Grimaud, 1991, J. Clin. Invest., 87 : 878 -883. Lortat-Jacob H. and J.A. Grimaud, 1991, Cell. Mol. Biol. 37 : 253 - 360. Lortat-Jacob H. and J.A. Grimaud, 1991, FEBS Lett. 280 : 152 - 154.
12. Lortat-Jacob H. Baltzer F. and Grimaud J.A., Heparin decreases the blood clearance of interferon-gamma and increases its activity by limiting the processing of its C-terminal sequence, 1996, J. Biol. Chem., 271, 16 139 - 16 143.
13. Lortat-Jacob H., Brisson C., Guerret S. and Morel G., 1996, Cytokine 8, 557 - 566.
14. Dianzani F., 1992, J. Interferon Res., 5 : 109 -ll8.
15. Halme M., Maasilta P., Repo H., Ristola M., Taskinen E., Mattson K., Cantell K., 1995, Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys., 31 : 93 - 101.
16. Lack, G., Bradley K.L., Hamelmann E., Renz H., Loader J. Leung D.Y., Larsen G., Gelfand E.W., 1996, J. Immunol. 157 : 1 432 - 9.
17. Short S.M., Paasch B.D., Turner J.H., Weiner N., Daugherty A.L., Mrsny R.J., 1996, Pharm/Res. 13 : l 020 - 7.
18. Lortat-Jacob H., J. Turnbull and J.A. Grimaud, 1995, Biochem., J 310 : 497 - 505.
19. Lee, R.T., Lee Y.C., Carbohydrate Res., 1974, 37, 193 - 201.
20. (a) Schmidt R.R., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1986, 25, 212 - 235, (b) Klotz W., Schmidt R.R., Liebigs Ann. Chem., 1993, 683 - 690 (c) Klotz W., Schmidt R.R.J., Carbohydr. Chem., 1994, 13, 1 093 - 1 101, (d) Terjung A., Jung K.H., Schmidt R.R., Carbohydr. Res., 1997, 297, 229 - 242.
21. Lubineau A., Bienayme H., Le Gallic J.J., Chem. Soc. Chem. Commun., 1989, 1 918 - 1 919.
22. Lubineau A., Escher S., Alais J., Bonnaffe D., Tetrahedron Lett., 1997, 38 : 4 087 - 4 090.
23. Sakairi N., Basten J.E.M., Gijsbert A., van der Marel G.A., van Boeckel C.A.A., Van Boom, J.H., Chem. Eur. J., 1996, 2, 1 007 - 1 013. Petitou M., Duchaussoy P., Bernat A., Hoffmann P., Herbert J.M., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1997, 7, 2 067 - 2 070, Petitou M., Duchaussoy P., Driguez P.A., Jaurand G., Herault J.P., Lormeau J.C., van Boeckel C.A.A., Herbert, J.M. Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1998, 37, 3 009 - 3 014, LEI P.-S., Duchaussoy P., Sizun P., Mallet J.M., Petitou M., Sinay P., Bioorg. Med. Chem., 1998, 6, 1 337 - 1 346, Basten J.E.M., Dreef-Tromp, C.M., de Vijs B., van Boeckel C.A.A. Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 1 201 - 1 206, Duchaussoy P., Jaurand G., Driguez P.A., Lederman I., Gourvenec F., Strassel J.M., Sizun P., Petitou M., Herbert J.M., Carbohydrate Res., 1999, 317, 63 - 84, Duchaussoy P., Jaurand G., Driguez P.A., Lederman I., Ceccato M.L., Gourvenec F., Strassel J.M., Sizun P., Petitou M., Herbert J.M., Carbohydrate Res., 1999, 317, 84 - 99, Koshida S., Suda Y., Sobel M., Ormsby J., Kusumoto, Bior. Med. Chem. Lett., 1999, 9, 3 127 - 3 132, Kovensky J. Duchaussoy P., Bono F., Salmivirta M., Sizun P., Herbert J.M., Petitou M., Sinay P., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1999, 9, 1567 - 1580, La Ferla B., Lay L., Guerrini M., Poletti M., Panza L., Russo, Tetrahedron 1999, 55, 9867 - 9880.
24. Lubineau A., Gavard O., Alais J., Bonnaffe D., Tetrahedron Lett., 2000, 307 - 311.
25. (a) Macher I., Dax K., Wanek E., Weidmann H., Carbohydrate Res., 1980, 80, 45-5l, (b) Jacquinet J.C., Petitou M., Duchossoy P., Lederman I., Choay J., Torri G., Sinay P., Carbohydrate Res., 1984, 130, 183 - 193, (c) Baggett N., Samra A.K., Carbohydrate Res., 1984, 127, 149 - 153, (d) Medakovic D., Carbohydrate Res., 1994, 253, 299 -300, (e) Dromowicz M., Koll P., Carbohydrate Res., 1998, 308, 169 - 171, (f) Hinou H., Kurosawa H., Matsuoka K., Terunuma D., Kuzuhara H., Tetrahedron Lett., 1999, 40, 1511 - 1504.
And references quoted (g) Adinolfi M., Barone G., de Lorenzo G., Iadonisi A., Synlett, 1999, 336 - 338, (h) Ojeba R., de Paz, j.L., Martin-Lomas M., Lassaletta J.M., Synlett, 1999, 1316 - 1318. Takahashi H., Hitomi Y., Iwai Y., Ikegami, S. J. Am. Chem. Soc., 2000, 122, 2 995 - 3 000.
26. Horton D., Swanson F.O., Carbohydrate Res., 1970, 14, 159 - 171, Horton D., Tsai J.H., Carbohydrate Res., 1977, 58, 89 - 108.
27. Danishefsky S.J., Deninno M.P., Philips G.B., Zelle R.E., Lartey P.A., Tetrahedron, 1986, 42, 2 809 - 2 819.
28. (a) Vasella A., Witzig C. Chiara J.L., Martin-Lomas M., Helvetica Chim. Acta 1991, 74, 2 073 - 2 077, (b) Alper P.B., Hung S.C., Wong C.H., Tetrahedron Lett. 1996, 37, 6 029 - 6 032.
29. Tabeur C., Mallet J.M., Bono F., Herbert J.M., Petitou M., Sinay P., Bioorg. Med. Chem., 1999, 7, 2 003 - 2 012.
30. Oltvoort J.J., van Boeckel C.A.A., Koning J.H., van Boom J.H., Synthesis, 1981, 305 - 308.
本明細書は、添付の図面に関連して示される：
γ−ＩＮＦ／ＨＳまたは本発明のダイマー複合体による分子を表している。 スペーサーアーム（Åで）と、オリゴ糖グループ（四，六、または八糖）の糖の数とによって規定される、本発明による種々の分子についての％阻害、Ｉを示すグラフである。

Claims (43)

  1. γ−インターフェロン（γ−ＩＮＦ）に結合することが可能な、以下の式（Ｉ）、
    Figure 2005533881
     ［式中、Ｘは二価のスペーサーグループであって、オリゴ糖フラグメントＡおよびＢを各々γ−インターフェロン（γ−ＩＮＦ）ホモダイマーのＣ末端のペプチド配列１２５〜１４３の一つへ結合させるべく充分に長く、ｎは０から１０までの整数を表し、たとえば０、１、２、３、４、または５に等しく、各Ｒは独立して水素原子、ＳＯ３ −基、またはリン酸基を表し、化合物（Ｉ）のグルコサミン単位の３位にはＳＯ３ −基がないという条件付きである］に対応する分子から選ばれる化合物。
  2. すべてのＲ基がＳＯ３ −基を表すか、またはすべてのＲ基がリン酸基を表す、特許請求の範囲第１項に記載の化合物。
  3. スペーサーグループが、１５〜１５０Å、好ましくは３３〜５０Åの長さである、特許請求の範囲第１項に記載の化合物。
  4. 前記スペーサーグループが、好ましくは１〜１２０Ｃの炭素鎖からなり、その一以上の炭素原子が任意に、Ｎ、Ｓ、Ｐ、およびＯから選ばれたヘテロ原子か、ＳＯ２基か、またはアリール基で置換され、前記炭素鎖もまた任意に一以上のアニオン基を保持している、特許請求の範囲第１項に記載の化合物。
  5. 前記アニオン基が、硫酸基、リン酸基、およびカルボキシル基から選ばれる、特許請求の範囲第４項に記載の化合物。
  6. 前記スペーサーグループがポリグリコールに由来し、好ましくはポリ（アルキレングリコール）から選ばれ、これにおいてアルキレン基はポリ（エチレングリコール）のような、１から４個までのＣを含んでなる、特許請求の範囲第４項に記載の化合物。
  7. 前記スペーサーグループが式、
    Figure 2005533881
     ［式中、ｍは５から３２までの整数である］に対応する、特許請求の範囲第６項に記載の化合物。
  8. 以下の式（ＩＩ）、
    Figure 2005533881
     ［式中、ｎは０から１０までの整数を表し、たとえば０、１、２、３、４、または５に等しく、ｍは５から３２までの整数である］に対応する、特許請求の範囲第７項に記載の化合物。
  9. ｎ＝０かつｍ＝５である、特許請求の範囲第８項の式（ＩＩ）に対応する化合物（ＩＩａ）。
  10. ｎ＝０かつｍ＝１０である、特許請求の範囲第８項の式（ＩＩ）に対応する化合物（ＩＩｂ）。
  11. ｎ＝０かつｍ＝３２である、特許請求の範囲第８項の式（ＩＩ）に対応する化合物（ＩＩｃ）。
  12. ｎ＝１かつｍ＝５である、特許請求の範囲第８項の式（ＩＩ）に対応する化合物（ＩＩｄ）。
  13. ｎ＝１かつｍ＝１０である、特許請求の範囲第８項の式（ＩＩ）に対応する化合物（ＩＩｅ）。
  14. ｎ＝１かつｍ＝３２である、特許請求の範囲第８項の式（ＩＩ）に対応する化合物（ＩＩｆ）。
  15. ｎ＝２かつｍ＝５である、特許請求の範囲第８項の式（ＩＩ）に対応する化合物（ＩＩｇ）。
  16. ｎ＝２かつｍ＝１０である、特許請求の範囲第８項の式（ＩＩ）に対応する化合物（ＩＩｈ）。
  17. ｎ＝２かつｍ＝３２である、特許請求の範囲第８項の式（ＩＩ）に対応する化合物（ＩＩｉ）。
  18. ガンマ・インターフェロン（γ−ＩＮＦ）に結合することが可能な、特許請求の範囲第８項の式（ＩＩ）の化合物を調製するためのプロセスであって、これにおいては、式（ＩＩＩ）、
    Figure 2005533881
     ［式中、ｎは０から１０までの整数であり、たとえば０、１、２、３、４、または５に等しく、Ｒ１およびＲ２はヒドロキシル基保護基、好ましくはｐ−メトキリベンジルおよびベンジル基より選ばれる］のオリゴ糖の前駆体である二つの水溶性化合物の、
    式、
    Figure 2005533881
     ［式中、ｍは５から３２までの整数である］のスペーサーグループの前駆体であるジチオール化合物とのフリーラジカルカップリングが行なわれ、式（ＩＶ）、
    Figure 2005533881
     の化合物を得るようにし、次にチオエーテル官能基がスルホンへ酸化され、化合物（ＩＶ）の最終的な脱保護が行なわれて、式（ＩＩ）、
    Figure 2005533881
     の最終化合物を生じるようにするプロセス。
  19. Ｒ１がｐ−メトキシベンジル基であり、Ｒ２がベンジル基である、特許請求の範囲第１８項に記載のプロセス。
  20. 式（ＩＩＩ）のオリゴ糖の前駆体である前記水溶性化合物が、以下の連続的な段階により調製されるプロセスであり、
    ａ） 式（Ｖ）、
    Figure 2005533881
     の二糖が、Ｒ１基、好ましくはパラ・メトキシベンジル基の酸化的開裂を受け、式、
    Figure 2005533881
     の「アクセプター」二糖を生じるようにし、
    ｂ） 平行して、式（Ｖ）の二糖、上記、はアリル基の１−プロペニルへの異性化を受け、次に、形成されたエノールエーテルの加水分解と、トリクロロアセトアミダートの形状にあるヒドロキシル基の活性化が続き、式（ＶＩｂ）、
    Figure 2005533881
     の「ドナー」二糖を生じるようにし、
    ｃ） アクセプター二糖（ＶＩａ）およびドナー二糖（ＶＩｂ）が結合され、完全にアルファ立体特異性をもつ式（ＶＩＩ）の四糖（ｎ＝０）を得るようにし、
    ｄ） 任意に段階ａ）〜ｃ）が繰返され、ｃ）において調製された四糖が段階ａ）の出発生成物とされ、式（ＶＩＩ）、
    Figure 2005533881
     の六糖（ｎ＝１）および八糖（ｎ＝２）を得るようにし、
    ｅ） 任意に段階ａ）〜ｃ）が繰返され、ｄ）において調製された八糖が段階ａ）の出発生成物とされ、式（ＶＩＩ）の十六糖（ｎ＝７）を得るようにし、
    ｆ） 脱アセチル、アジド官能基の還元、硫酸塩化、および鹸化が行なわれ、オリゴ糖（ＩＩＩ）の前駆体である所望の水溶性化合物を得るようにする、特許請求の範囲第１８項に記載のプロセス。
  21. 式（Ｖ）の二糖が、式（ＶＩＩＩ）、
    Figure 2005533881
     の化合物と、式（ＩＸ）、
    Figure 2005533881
     の化合物とのカップリング反応により調製される、特許請求の範囲第２０項に記載のプロセス。
  22. 式（ＩＸ）の化合物が式（Ｘ）の化合物から調製され、式（ＶＩＩＩ）の化合物が式（ＸＩ）、
    Figure 2005533881
     の化合物から調製される、特許請求の範囲第２１項に記載のプロセス。
  23. 式、
    Figure 2005533881
     の化合物が、式（ＸＩＩ）、
    Figure 2005533881
     の化合物の、−４０℃における、溶媒としてのジクロロメタン中、塩基としてのピリジン、アシル化剤としての塩化アセチル、および触媒としての４−ジメチルアミノピリジンによるアセチル化によって調製される、特許請求の範囲第２２項に記載のプロセス。
  24. 薬物としての使用のための、特許請求の範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物。
  25. 薬物を調製するための、特許請求の範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物の使用。
  26. 内在性または外来性のγ−インターフェロンの活性の、モジュレーター、たとえば阻害剤としての使用のための、特許請求の範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物。
  27. γ−インターフェロンのような前炎症性サイトカインの存在と関係づけられる、またはそれによって特徴づけられる疾患、たとえば、多発性硬化症、肉芽腫症、クローン病、およびリウマチ様関節炎といった自己免疫性、炎症性、または変性性の疾患の治療において使用するための、特許請求の範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物。
  28. 用いられた免疫抑制性の治療を補足するための、たとえば、移植拒絶反応を防止するための処置における使用のための、特許請求の範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物。
  29. 特許請求の範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物を含有する薬物。
  30. 特許請求の範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物と、製薬上許容される賦形剤とを含有する、γ−インターフェロンのような前炎症性サイトカインの存在と関係づけられる、またはそれによって特徴づけられる疾患、たとえば、多発性硬化症、肉芽腫症、クローン病、およびリウマチ様関節炎といった自己免疫性、炎症性、または変性性の疾患の治療において使用するための組成物。
  31. 範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物と、製薬上許容される賦形剤とを含有する、用いられた免疫抑制性の治療を補足するための、たとえば、移植拒絶反応を防止するための処置における使用のための組成物。
  32. 範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物の、内在性または外来性のγ−インターフェロンの活性、特に過剰の活性に関連した病理または症状の治療を目的とした薬物を調製するための使用。
  33. 範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物の、γ−インターフェロンのような前炎症性サイトカインの存在と関係づけられる、またはそれによって特徴づけられる疾患、たとえば、多発性硬化症、肉芽腫症、クローン病、およびリウマチ様関節炎といった自己免疫性、炎症性、または変性性の疾患の治療を目的とした薬物を調製するための使用。
  34. 範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物の、用いられた免疫抑制性の治療を補足するための、たとえば、移植拒絶反応を防止するための処置を目的とした薬物を調製するための使用。
  35. 範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物に加えて、γ−インターフェロンを含有する薬物。
  36. 範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物およびγ−インターフェロンが、前記化合物と前記γ−インターフェロンとの複合体の形状にある薬物。
  37. 範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物とγ−インターフェロンとの、薬物としての使用のための複合体。
  38. 範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物とγ−インターフェロンとの、免疫賦活薬としての使用のための複合体。
  39. 範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物とγ−インターフェロンとの、癌、感染性の、たとえばウイルス性、細菌性、または寄生虫性の疾患、および臓器繊維症から選ばれる疾患の治療における使用のための複合体。
  40. 範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物とγ−インターフェロンとの複合体、および製薬上許容される賦形剤を含有する、癌、感染性の、たとえばウイルス性、細菌性、または寄生虫性の疾患、および臓器繊維症から選ばれる疾患の治療における使用のための組成物。
  41. 範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物とγ−インターフェロンとの複合体を含有する薬物。
  42. 範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物とγ−インターフェロンとの複合体の、薬物を調製するための使用。
  43. 範囲第１〜１７項のいずれか１項に記載の化合物とγ−インターフェロンとの複合体の、癌、感染性の、たとえばウイルス性、細菌性、または寄生虫性の疾患、および臓器繊維症のうちの、所与の疾患の治療を目的とした薬物を調製するための使用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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