JP2000256385A - オリゴ糖の製造方法ならびに新規オリゴ糖およびそれを含む医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】 還元末端にガラクトース残基を有するケラタ
ン硫酸二糖を容易に製造できる方法、および、薬理作用
を有する新規なオリゴ糖を提供する。 【解決手段】下記式(1)で示される単糖と、下記式(2)で
示される単糖をグリコシド結合反応させ、下記式(3)で
示されるオリゴ糖を製造する。 （式中、Ｒ¹およびＲ²はアラルキル基、Ｒ³はアシル基
又はシリル基、Ｒ⁴はアミノ基保護基、Ｒ⁵は脱離基を示
す。） （式中、Ｒ⁶およびＲ⁸はアラルキル基、Ｒ⁷はアシル基
又はシリル基、Ｒ⁹はアラルキル基、6-O-硫酸化N-アセ
チルグルコサミン残基等、Ｚは酸素原子又は-NHCO-を示
す。） （式中、Ｒ¹⁰およびＲ¹¹は水素原子または-SO₃M、Acは
アセチル基、Ｒ¹²は水素原子、6-O-硫酸化N-アセチルグ
ルコサミン残基等、Ｚは上記と同じ。）

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、オリゴ糖の製造方
法に関する。また本発明は、新規オリゴ糖およびそれを
含む医薬組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】ケラタン硫酸は、Ｎ−アセチルグルコサ
ミン残基の６位がＯ−硫酸化されたＮ−アセチルラクト
サミンを基本構造とするグリコサミノグリカンである。
この分解物であるケラタン硫酸オリゴ糖には、薬理作用
のあるものがあることが報告されている（例えば、国際
公開パンフレット第ＷＯ９６／１６９７３号参照）。

【０００３】ケラタン硫酸に由来する二糖の構造として
は図１に示すものが可能性として考えられるが、薬理作
用を有する他のケラタン硫酸オリゴ糖の検索は、還元末
端にガラクトース残基を有する二糖（GlcNAcβ1→3Gal
(式中、Galはガラクトースを、GlcNはグルコサミンを、
Acはアセチル基を示す)）であって、ケラタン硫酸と同
様に硫酸基を有するケラタン硫酸オリゴ糖を得ることが
困難であることから制限されている。例えば、ケラタン
硫酸を公知のエンド−β−ガラクトシダーゼで処理して
も、還元末端にガラクトース残基を有する二糖（GlcNAc
β1→3Gal）を、硫酸基を保持したまま得ることは困難
であった。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明の第１の目的
は、還元末端にガラクトース残基を有するケラタン硫酸
二糖を容易に製造できる方法を提供することである。

【０００５】また、本発明の第２の目的は、薬理作用を
有する新規なオリゴ糖を提供し、これを医薬として提供
することである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、グルコサ
ミン中のヒドロキシル基およびアミノ基とガラクトース
中のヒドロキシル基とを特定の様式で保護することによ
り、グリコシド結合反応によって、還元末端にガラクト
ース残基を有する二糖が得られることを見い出した。ま
た、特定の位置のヒドロキシル基が硫酸化された二糖が
優れた薬理活性を有することを見い出した。これらの知
見に基づき、本発明は完成された。

【０００７】すなわち、本発明は、下記一般式(1)で示
される単糖と、下記一般式(2)で示される単糖とをグリ
コシド結合反応させる工程を少なくとも含む、下記一般
式(3)で示されるオリゴ糖の製造方法（以下、本発明製
造方法ともいう）を提供する。

【０００８】

【化１６】 （式中、Ｒ¹およびＲ²はそれぞれ独立してアラルキル基
を示し、Ｒ³はアシル基又はシリル基を示し、Ｒ⁴はアミ
ノ基保護基を示し、Ｒ⁵は脱離基を示す。）

【０００９】

【化１７】 （式中、Ｒ⁶およびＲ⁸はそれぞれ独立してアラルキル基
を示し、Ｒ⁷はアシル基又はシリル基を示し、Ｒ⁹はアラ
ルキル基、６−Ｏ−硫酸化Ｎ−アセチルグルコサミン残
基、アルキル基、グリセロール残基、Ｏ−アルキルグリ
セロール残基、Ｏ−アシルグリセロール残基、コレステ
ロール残基、コレスタニル基、セラミド残基、リン脂質
残基、ビオチン残基又はペプチド残基を示す。また、Ｚ
は酸素原子又は−ＮＨＣＯ−を示す。）

【００１０】

【化１８】 （式中、Ｒ¹⁰およびＲ¹¹はそれぞれ独立して水素原子ま
たは−ＳＯ₃Ｍ（Ｍはプロトン又は１価のカチオンを示
す。）を示し、Acはアセチル基を示す。また、Ｒ ¹²は水
素原子、６−Ｏ−硫酸化Ｎ−アセチルグルコサミン残
基、アルキル基、グリセロール残基、Ｏ−アルキルグリ
セロール残基、Ｏ−アシルグリセロール残基、コレステ
ロール残基、コレスタニル基、セラミド残基、リン脂質
残基、ビオチン残基又はペプチド残基を示す。また、Ｚ
は酸素原子又は−ＮＨＣＯ−を示す。）

【００１１】本発明製造方法において、Ｒ¹⁰およびＲ¹¹
の少なくとも一方が−ＳＯ₃Ｍ（Ｍはプロトン又は１価
のカチオンを示す。）であり、上記一般式(1)で示され
る単糖と、上記一般式(2)で示される単糖とをグリコシ
ド結合反応させる工程の後に、Ｒ³およびＲ⁷の少なくと
も一方を水素原子に置換し、次いで当該水素原子を−Ｓ
Ｏ₃Ｍに置換する工程が含まれることが好ましい。

【００１２】本発明製造方法の好ましい態様において
は、上記一般式(1)〜(3)が、それぞれ下記式(4)〜(6)で
示される。

【００１３】

【化１９】 （式中、Bnはベンジル基を、Ｒ¹³はアセチル基又はレブ
リノイル基を、Phthはフタロイル基を、Ｘはハロゲン原
子を示す。）

【００１４】

【化２０】 （式中、Bnはベンジル基を、Ｒ¹⁴はベンジル基、６−Ｏ
−硫酸化Ｎ−アセチルグルコサミン残基、アルキル基、
グリセロール残基、Ｏ−アルキルグリセロール残基、Ｏ
−アシルグリセロール残基、コレステロール残基、コレ
スタニル基、セラミド残基、リン脂質残基、ビオチン残
基又はペプチド残基を示す。また、Ｚは酸素原子又は−
ＮＨＣＯ−を示す。Pivはピバロイル基を示す。）

【００１５】

【化２１】 （式中、Acはアセチル基を、Ｍはプロトン又は１価のカ
チオンを示す。また、Ｒ ¹⁵は水素原子、６−Ｏ−硫酸化
Ｎ−アセチルグルコサミン残基、アルキル基、グリセロ
ール残基、Ｏ−アルキルグリセロール残基、Ｏ−アシル
グリセロール残基、コレステロール残基、コレスタニル
基、セラミド残基、リン脂質残基、ビオチン残基又はペ
プチド残基を示す。また、Ｚは酸素原子又は−ＮＨＣＯ
−を示す。）

【００１６】本発明製造方法の別の好ましい態様におい
ては、上記一般式(1)〜(3)が、それぞれ下記式(7)〜(9)
で示される。

【００１７】

【化２２】 （式中、Bnはベンジル基を、Levはレブリノイル基を、P
hthはフタロイル基を、Ｘはハロゲン原子を示す。）

【００１８】

【化２３】 （式中、Bn、Ｒ¹⁴及びＺは前記と同義である。また、Ph
はフェニル基を、Meはメチル基を示す。）

【００１９】

【化２４】 （式中、Ｒ¹⁵及びＺは前記と同義である。また、Acはア
セチル基を、Ｍはプロトン又は１価のカチオンを示
す。）

【００２０】本発明製造方法のさらに別の好ましい態様
においては、上記一般式(1)〜(3)が、それぞれ下記式(1
0)〜(12)で示される。

【００２１】

【化２５】 （式中、Bnはベンジル基を、Levはレブリノイル基を、P
hthはフタロイル基を、Ｘはハロゲン原子を示す。）

【００２２】

【化２６】 （式中、Bn、Ｒ¹⁴及びＺは前記と同義である。また、Ph
はフェニル基を、Meはメチル基を示す。）

【００２３】

【化２７】 （式中、Ｒ¹⁵及びＺは前記と同義である。また、Acはア
セチル基を、Ｍはプロトン又は１価のカチオンを示
す。）

【００２４】また、本発明は、下記一般式(13)で示され
るオリゴ糖（以下、本発明オリゴ糖ともいう）を提供す
る。

【００２５】

【化２８】 （式中、Ｒ¹⁶およびＲ¹⁷はそれぞれ独立して水素原子又
は−ＳＯ₃Ｍ（Ｍはプロトン又は１価のカチオンを示
す）を示し、Acはアセチル基を示す。またＲ¹⁸は水素原
子、６−Ｏ−硫酸化Ｎ−アセチルグルコサミン残基、ア
ルキル基、グリセロール残基、Ｏ−アルキルグリセロー
ル残基、Ｏ−アシルグリセロール残基、コレステロール
残基、コレスタニル基、セラミド残基、リン脂質残基、
ビオチン残基又はペプチド残基を示す。また、Ｚは酸素
原子又は−ＮＨＣＯ−を示す。ただし、Ｒ¹⁶およびＲ¹⁷
がいずれも水素原子であり、かつＺが酸素原子でＲ¹⁸が
水素原子又はコレスタニル基であるもの、並びにＲ¹⁶が
−ＳＯ₃Ｍ（Ｍはプロトン又は１価のカチオンを示す）
でありかつＺが酸素原子でＲ¹⁷とＲ¹⁸がいずれも水素原
子であるものを除く。）

【００２６】本発明オリゴ糖の好ましい態様は、Ｒ¹⁶お
よびＲ¹⁷がいずれも−ＳＯ₃Ｍ（Ｍはプロトン又は１価
のカチオンを示す）である。

【００２７】また、本発明オリゴ糖の別の好ましい態様
は、Ｒ¹⁶が水素原子であり、かつＲ ¹⁷が−ＳＯ₃Ｍ（Ｍ
はプロトン又は１価のカチオンを示す）である。

【００２８】本発明オリゴ糖において、好ましくは、Ｒ
¹⁸が水素原子、６−Ｏ−硫酸化Ｎ−アセチルグルコサミ
ン残基、アルキル基、Ｏ−アルキルグリセロール残基又
はコレスタニル基であり、かつＺが酸素原子である。

【００２９】本発明はさらに、下記一般式(13)で示され
る本発明オリゴ糖又はその薬学的に許容される塩を有効
成分とする医薬（以下、本発明医薬ともいう）を提供す
る。

【００３０】

【化２９】 （式中、Ｒ¹⁶およびＲ¹⁷はそれぞれ独立して水素原子又
は−ＳＯ₃Ｍ（Ｍはプロトン又は１価のカチオンを示
す）を示し、Acはアセチル基を示す。またＲ¹⁸は水素原
子、６−Ｏ−硫酸化Ｎ−アセチルグルコサミン残基、ア
ルキル基、グリセロール残基、Ｏ−アルキルグリセロー
ル残基、Ｏ−アシルグリセロール残基、コレステロール
残基、コレスタニル基、セラミド残基、リン脂質残基、
ビオチン残基又はペプチド残基を示す。また、Ｚは酸素
原子又は−ＮＨＣＯ−を示す。ただし、Ｒ¹⁶およびＲ¹⁷
がいずれも水素原子であり、かつＺが酸素原子でＲ¹⁸が
水素原子又はコレスタニル基であるものを除く。）

【００３１】特に、Ｒ¹⁶が−ＳＯ₃Ｍであり、かつＲ¹⁷
が水素原子又は−ＳＯ₃Ｍ（Ｍはプロトン又は１価のカ
チオンを示す）を示す本発明オリゴ糖またはその薬学的
に許容される塩は、抗アレルギー剤として、Ｒ¹⁶および
Ｒ¹⁷が−ＳＯ₃Ｍ（Ｍはプロトン又は１価のカチオンを
示す）を示す本発明オリゴ糖またはその薬学的に許容さ
れる塩は、抗炎症剤として有用である。

【００３２】

【発明の実施の形態】以下に、本発明の実施の形態を説
明する。まず、本明細書および図面において共通して用
いた略号を、その意味（以下の略号に付した括弧内の記
載）と共に以下に示す。

【００３３】 Ac（アセチル基） Bn（ベンジル基） Phth（フタロイル基） Piv（ピバロイル基） Lev（レブリノイル基） Ph（フェニル基） Me（メチル基） All（アリル(allyl)基） MP（パラメトキシフェニル基） Ｍ（プロトン又は１価のカチオン） Ｘ（ハロゲン原子）

【００３４】＜１＞本発明製造方法 本発明製造方法は、一般式(3)で示されるオリゴ糖の製
造方法であり、一般式(1)で示される単糖と一般式(2)で
示される単糖とをグリコシド結合反応させる工程を少な
くとも含むことを特徴とする。

【００３５】一般式(1)〜(3)における置換基は以下のと
おりである。Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁶およびＲ⁸は、それぞれ独立
して、アラルキル基を示し、アラルキル基の例として
は、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、フェネチル
基、３−フェニルプロピル基、ｐ−ニトロベンジル基、
ｏ−ニトロベンジル基、ｐ−ハロベンジル基、ｐ−シア
ノベンジル基、ジフェニルメチル基、トリフェニルメチ
ル基（トリチル基）、αもしくはβ−ナフチルメチル
基、α−ナフチルジフェニルメチル基などが挙げられ
る。Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁶およびＲ⁸は、好ましくはベンジル基
である。

【００３６】Ｒ³およびＲ⁷は、それぞれ独立して、アシ
ル基又はシリル基を示す。アシル基としては、アセチル
基、ピバロイル基、レブリノイル基、ベンゾイル基、ク
ロロアセチル基、ジクロロアセチル基、トリフルオロア
セチル基、メトキシアセチル基、プロピオニル基、ｎ−
ブチリル基、（Ｅ）−２−メチルブテノイル基、イソブ
チリル基、ペンタノイル基、ｏ−（ジブロモメチル）ベ
ンゾイル基、ｏ−（メトキシカルボニル）ベンゾイル
基、ｐ−フェニルベンゾイル基、２，４，６−トリメチ
ルベンゾイル基、ｐ−トルオイル基、ｐ−アニソイル
基、ｐ−クロロベンゾイル基、ｐ−ニトロベンゾイル
基、α−ナフトイル基などが挙げられる。シリル基とし
ては、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ジメ
チルイソプロピリシリル基、イソプロピルジメチルシリ
ル基、メチルジ−ｔ−ブチルシリル基、ｔ−ブチルジメ
チルシリル基、ｔ−ブチルジフェニルシリル基、トリイ
ソプロピルシリル基、テトライソプロピルジシロキサニ
ル基などが挙げられる。

【００３７】Ｒ³およびＲ⁷は、好ましくは、それぞれア
シル基であるか、又はＲ³がアシル基でありかつＲ⁷がシ
リル基である。アシル基としてはアセチル基、ピバロイ
ル基、レブリノイル基が好ましく、シリル基としてはｔ
−ブチルジフェニルシリル基が好ましい。

【００３８】Ｒ⁴は、アミノ基保護基を示し、アミノ基
保護基の例としては、フタロイル基、アセチル基、アリ
ルオキシカルボニル基などが挙げられる。好ましくはフ
タロイル基である。

【００３９】Ｒ⁵は、脱離基を示す。ここで脱離基と
は、一般式(1)で示される単糖と一般式(2)で示される単
糖とをグリコシド結合反応させる条件で脱離する基を意
味する。脱離基の例としては、ハロゲン原子（フッ素原
子、塩素原子、臭素原子等）、イミド基、メチルチオ
基、フェニルチオ基などが挙げられるが、ハロゲン原子
が好ましく、特にフッ素原子であることが好ましい。

【００４０】なお式(4)、(7)および(10)中のＸは、脱離
基のなかでも好ましいハロゲン原子である。このＸは、
上記と同様にフッ素原子であることが好ましい。

【００４１】Ｒ⁹は、アラルキル基、６−Ｏ−硫酸化Ｎ
−アセチルグルコサミン残基、アルキル基、グリセロー
ル残基、Ｏ−アルキルグリセロール残基、Ｏ−アシルグ
リセロール残基、コレステロール残基、コレスタニル
基、セラミド残基、リン脂質残基、ビオチン残基、又は
ペプチド残基を示す。ここで、残基とはその化合物の結
合に関与する原子又は原子群をその化合物から除いた残
りの部分を意味する。

【００４２】アラルキル基の例、および好ましいアラル
キル基については、前記と同様である。

【００４３】６−Ｏ−硫酸化Ｎ−アセチルグルコサミン
残基は、通常には、４位の水酸基が除かれた残基であ
る。

【００４４】アルキル基としては、炭素数１〜２３のも
のが例示され、炭素数８〜１４のものが好ましい。

【００４５】グリセロール残基は、通常には、いずれか
の水酸基が除かれた残基である。

【００４６】Ｏ−アルキルグリセロール残基も特に限定
されないが、通常にはいずれかの水酸基が除かれた残基
であり、ジ−Ｏ−アルキルグリセロール残基が好まし
く、２,３−ジ−Ｏ−アルキルグリセロール残基が好ま
しい。ここでいう「アルキル」としては、炭素数１〜２
３のものが例示され、炭素数８〜１４のものが好まし
い。

【００４７】Ｏ−アシルグリセロール残基も特に限定さ
れないが、通常にはいずれかの水酸基が除かれた残基で
あり、ジ−Ｏ−アシルグリセロール残基が好ましく、
２,３−ジ−Ｏ−アシルグリセロール残基が好ましい。
ここでいう「アシル」としては、炭素数１〜２３のもの
が例示され、炭素数８〜１４のものが好ましい。

【００４８】コレステロール残基は、通常には、シクロ
ペンタフェナントレン環のＣ−３の水酸基が除かれた残
基である。

【００４９】セラミド残基は、通常には、１位の水酸基
が除かれた残基である。セラミド中のＮ−アシル基の炭
素数は通常には１〜２８であり、炭素数１４〜２３のも
のが好ましい。

【００５０】リン脂質残基としては、グリセロリン脂質
（ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールア
ミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシト
ール等）残基や、スフィンゴリン脂質（スフィンゴミエ
リン等）残基が挙げられる。

【００５１】ビオチン残基は、通常には、カルボキシル
基が除かれた残基である。

【００５２】ペプチド残基は、通常には、アミノ基及び
カルボキシル基のいずれかが除かれた残基である。

【００５３】Ｚは酸素原子または−ＮＨＣＯ−を示す。
−ＮＨＣＯ−の窒素原子及び酸素原子は、いずれがＲ⁹
側となってもよい。

【００５４】なお、Ｒ⁹がアラルキル基、６−Ｏ−硫酸
化Ｎ−アセチルグルコサミン残基、アルキル基、グリセ
ロール残基、Ｏ−アルキルグリセロール残基、Ｏ−アシ
ルグリセロール残基、コレステロール残基、コレスタニ
ル基、セラミド残基又はリン脂質残基である場合には、
Ｚは酸素原子であることが好ましい。

【００５５】また、Ｒ⁹がビオチン残基またはペプチド
残基である場合には、Ｚは−ＮＨＣＯ−であることが好
ましい。

【００５６】Ｒ¹⁰およびＲ¹¹は、それぞれ独立して、水
素原子又は−ＳＯ₃Ｍを示す。

【００５７】Ｒ¹²は水素原子、６−Ｏ−硫酸化Ｎ−アセ
チルグルコサミン残基、アルキル基、グリセロール残
基、Ｏ−アルキルグリセロール残基、Ｏ−アシルグリセ
ロール残基、コレステロール残基、コレスタニル基、セ
ラミド残基、リン脂質残基、ビオチン残基、又はペプチ
ド残基を示す。これらの基及び残基はＲ⁹について記載
したのと同様である。

【００５８】なお、Ｒ¹²が水素原子、６−Ｏ−硫酸化Ｎ
−アセチルグルコサミン残基、アルキル基、グリセロー
ル残基、Ｏ−アルキルグリセロール残基、Ｏ−アシルグ
リセロール残基、コレステロール残基、コレスタニル
基、セラミド残基又はリン脂質残基である場合には、Ｚ
は酸素原子であることが好ましい。

【００５９】また、Ｒ¹²がビオチン残基またはペプチド
残基である場合には、Ｚは−ＮＨＣＯ−であることが好
ましい。

【００６０】グリコシド結合反応させる条件は、用いる
脱離基に合わせて適宜選択される。例えば、脱離基とし
てフッ素原子を選択した場合には、−７０〜６０℃で５
分〜５０時間という条件が挙げられる。溶媒は、特に限
定されず、１，２−ジクロロエタンなどを使用できる。

【００６１】アラルキル基、アシル基又はシリル基およ
びアミノ基保護基は、脱離基が脱離する条件で、遊離し
ないものが選択される。これらの基は、同一の基となっ
てもよい。

【００６２】一般式(2)の単糖の製造方法としては、図
２に概略を示したような方法が挙げられる。すなわち、
化合物２から化合物９までの合成は、ガラクトース（化
合物１）から伊藤らの報告している合成経路(Agric. Bi
ol. Chem., 50, 3227(1986))に従って行うことができ
る。化合物１０から化合物１４までの合成は、以下の合
成経路に従って行うことができる。トリクロロアセトイ
ミド基からベンジル基への置き換え（化合物１０）、脱
アセチル化（化合物１１）、ベンジル化（化合物１
２）、脱アリル化（化合物１３）、ピバロイル化（化合
物１４）。これらの工程の条件は、当業者が適宜設定す
ることができる。

【００６３】一般式(1)の単糖の製造方法としては、図
３に概略を示したような方法が挙げられる。すなわち、
化合物１６から化合物２０までの合成は、グルコサミン
（化合物１５）から仲野らの報告している合成経路(Tet
rahedron Lett., 31, 1597(1990))に従って行うことが
できる。化合物２１から化合物２４までの合成は、以下
の合成経路に従って行うことができる。４位および６位
の間のベンジリデン基の開環（化合物２１）、アセチル
化（化合物２２）、脱メトキシフェニル化（化合物２
３）、フッ素化（化合物２４）。これらの工程の条件
は、当業者が適宜設定することができる。

【００６４】一般式(1)の単糖と一般式(2)の単糖とをグ
リコシド結合反応させた後、アラルキル基およびアシル
基又はシリル基を除去し、アミノ基保護基をアセチル基
に置き換えることで、一般式(3)のオリゴ糖を得る。グ
リコシド結合反応、およびこのような基の除去および置
換は公知の方法によって行うことができる（例えば、Sy
nthesis, 384 (1989)等）。これらの具体例は、後述の
実施例において詳述する。

【００６５】一般式(3)において、Ｒ¹⁰およびＲ¹¹の少
なくとも一方が−ＳＯ₃Ｍを示す場合には、上記一般式
(1)で示される単糖と、上記一般式(2)で示される単糖と
をグリコシド結合反応させる工程の後に、Ｒ³およびＲ⁷
（アシル基又はシリル基）の少なくとも一方を選択的に
除去して水素原子で置換し（これによりヒドロキシル基
が生じる）、次いで当該水素原子を−ＳＯ₃Ｍに置換す
る（硫酸化）。

【００６６】アシル基又はシリル基の選択的な除去（お
よび水素原子への置換）は、アシル基又はシリル基を、
アラルキル基およびアミノ基保護基に対して適切に選択
することによって行うことができる。このような組み合
わせとしては、アラルキル基としてベンジル基、アミノ
基保護基としてフタロイル基、アシル基又はシリル基と
してアセチル基又はピバロイル基の組み合わせ等が挙げ
られる。硫酸化の方法も特に限定されず、公知の方法を
用いることができる。これらの具体例は、後述の実施例
において詳述する。

【００６７】具体的には、図４に概略を示したような方
法によって一般式(3)のオリゴ糖を得ることができる。
すなわち、アセチル基およびピバロイル基の除去（およ
び水素原子への置換）ならびにフタロイル基のアセチル
基への置換（化合物２６）、硫酸化（化合物２７）、脱
ベンジル化（化合物２８）である。これらの工程の条件
は、当業者が適宜設定することができる。

【００６８】Ｒ¹⁰およびＲ¹¹のいずれか一方が−ＳＯ₃
Ｍを示す場合には、Ｒ³およびＲ⁷のアシル基又はシリル
基のいずれか一方を選択的に除去できるように選択す
る。例えば、Ｒ³としてレブリノイル基（式(7)又は(10)
の単糖）、Ｒ⁷としてｔ−ブチルジフェニルシリル基
（式(8)又は(11)の単糖）を選択する。レブリノイル基
を選択的に除去（および水素原子に置換）してから硫酸
化を行い、次いでその他のヒドロキシル基の保護基を除
去することで、グルコサミン残基の６位のヒドロキシル
基のみが硫酸化されたオリゴ糖（式(9)のオリゴ糖）を
得ることができ、ｔ−ブチルジフェニルシリル基を選択
的に除去（および水素原子に置換）してから硫酸化を行
い、次いでその他のヒドロキシル基の保護基を除去する
ことで、ガラクトース残基の６位のヒドロキシル基のみ
が硫酸化されたオリゴ糖（式(12)のオリゴ糖）を得るこ
とができる。

【００６９】アシル基又はシリル基の選択的な除去（お
よび水素原子への置換）、これにより生じるヒドロキシ
ル基の硫酸化、アラルキル基の除去、および、アミノ基
保護基のアセチル基への置換は、公知の方法によって行
うことができる。

【００７０】一般式(1)の単糖と一般式(2)の単糖とをグ
リコシド結合反応等させて一般式(3)のオリゴ糖を得る
方法の、他の例を図５〜図７に示す。

【００７１】図５は、一般式(2)中のＲ⁹がＯ−アルキル
グリセロール残基(2,3-ジ-O-テトラデシル-sn-グリセロ
ール残基)の例であり、図６は、一般式(2)中のＲ⁹がア
ルキル基(オクチル基)の例であり、図７は、一般式(2)
中のＲ⁹がコレスタニル基の例である。これらはいずれ
も上記と同様の方法で行うことができる。Ｒ⁹が他の基
の場合も同様の方法で行うことができる。

【００７２】得られる硫酸化されたオリゴ糖は塩となっ
ていてもよく（すなわち該オリゴ糖中のＭが１価のカチ
オンであってもよく）、塩となっていなくてもよい（す
なわち該オリゴ糖中のＭがプロトンであってもよい）。
塩としては、後述の＜３＞本発明医薬の説明中に例示し
たものを挙げることができるが、アルカリ金属塩が好ま
しく、ナトリウム塩がより好ましい。また該オリゴ糖は
電離した状態であってもよい。

【００７３】本発明製造方法によれば、上記のオリゴ糖
を収率よく、かつ少ない工程で製造することができる。

【００７４】＜２＞本発明オリゴ糖 本発明オリゴ糖は、一般式(13)で表されるオリゴ糖であ
る。一般式(13)における置換基は以下のとおりである。

【００７５】Ｒ¹⁶およびＲ¹⁷はそれぞれ独立して水素原
子又は−ＳＯ₃Ｍを示す（ただし、Ｒ¹⁶およびＲ¹⁷がい
ずれも水素原子であり、かつＺが酸素原子でＲ¹⁸が水素
原子又はコレスタニル基であるもの、並びにＲ¹⁶が−Ｓ
Ｏ₃ＭでありかつＺが酸素原子でＲ¹⁷とＲ¹⁸がいずれも
水素原子であるものを除く）。

【００７６】またＲ¹⁸は水素原子、６−Ｏ−硫酸化Ｎ−
アセチルグルコサミン残基、アルキル基、グリセロール
残基、Ｏ−アルキルグリセロール残基、Ｏ−アシルグリ
セロール残基、コレステロール残基、コレスタニル基、
セラミド残基、リン脂質残基、ビオチン残基又はペプチ
ド残基を示すが、水素原子、６−Ｏ−硫酸化Ｎ−アセチ
ルグルコサミン残基、アルキル基、Ｏ−アルキルグリセ
ロール残基又はコレスタニル基が好ましい。これらの基
及び残基はＲ⁹について記載したのと同様である。一般
式(13)においてＲ¹⁸が水素原子の場合、Ｒ¹⁸により構成
されるヒドロキシル基はβ位にあってもα位にあっても
よい。またＲ¹⁸が６−Ｏ−硫酸化Ｎ−アセチルグルコサ
ミン残基の場合、そのグリコシド結合はβ−グリコシド
結合であることが好ましく、β−１,４グリコシド結合
であることがより好ましい。Ｒ¹⁸が他の基又は残基の場
合はβグリコシド結合であることが好ましい。また、Ｚ
は酸素原子又は−ＮＨＣＯ−を示す。Ｒ¹⁸がビオチン残
基又はペプチド残基である場合には、Ｚは−ＮＨＣＯ−
であることが好ましく、Ｒ¹⁸がそれ以外の基である場合
には、Ｚは酸素原子であることが好ましい。

【００７７】本発明オリゴ糖は塩となっていてもよく
（すなわち該オリゴ糖中のＭが１価のカチオンであって
もよく）、塩となっていなくてもよい（すなわち該オリ
ゴ糖中のＭがプロトンであってもよい）。塩としては、
後述の＜３＞本発明医薬の説明中に例示したものを挙げ
ることができるが、アルカリ金属塩が好ましく、ナトリ
ウム塩がより好ましい。また該オリゴ糖は電離した状態
であってもよい。

【００７８】Ｒ¹⁸が水素原子である本発明オリゴ糖は、
上記本発明製造方法によって得ることができる。また、
図５〜７に示すように、アルキル基、グリセロール残
基、Ｏ−アルキルグリセロール残基、Ｏ−アシルグリセ
ロール残基、コレステロール残基、コレスタニル基、セ
ラミド残基、リン脂質残基、ビオチン残基又はペプチド
残基を保持する単糖を他の単糖と結合させたり、Ｒ¹⁸が
水素原子である本発明オリゴ糖と、グリセロール、コレ
ステロール、セラミド、ビオチン又はペプチドとを公知
のグリコシル化法により結合させたりすることによっ
て、Ｒ¹⁸が水素原子以外の本発明オリゴ糖を得ることが
できる。

【００７９】またＲ¹⁸が６−Ｏ−硫酸化Ｎ−アセチルグ
ルコサミン残基である本発明オリゴ糖は、例えば公知の
ケラタン硫酸オリゴ糖に酸加水分解や酵素処理等の処理
を施すことによって製造することができる。例えば公知
のケラタン硫酸オリゴ糖であるNeuAc〜Galβ1-4GlcNAc
(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)（式中、Galはガラク
トース残基を、GlcNAcはＮ−アセチルグルコサミン残基
を、NeuAcはＮ−アセチルノイラミン酸残基を、6Sは6-O
-硫酸エステルをそれぞれ表す。また〜はα2,3結合又は
α2,6結合を表す；ＷＯ９６／１６９７３参照）を、0.2
Ｎ程度の強酸と共にインキュベートすることによりＮ−
アセチルノイラミン酸(シアル酸)残基を除去し、次いで
ラクターゼ（β−ガラクトシダーゼ）と共にインキュベ
ートすることによってガラクトース残基を除去すること
により製造することができる。詳細は後述の実施例にお
いて詳述する。

【００８０】本発明オリゴ糖又はその薬学的に許容され
る塩は、薬理作用を有し、医薬として使用できる。

【００８１】＜３＞本発明医薬本発明医薬は、本発明オ
リゴ糖又はその薬学的に許容される塩を有効成分とす
る。

【００８２】薬学的に許容される塩とは、例えば、ナト
リウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のアルカリ金属
塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アンモニウ
ム塩等の無機塩基との塩、又はジエタノールアミン塩、
シクロヘキシルアミン塩、アミノ酸塩等の有機塩基との
塩のうち、薬学的に許容されるものであるが、これらに
限定されるものではない。

【００８３】本発明医薬は特に抗アレルギー剤として利
用できる。抗アレルギー剤として利用する場合、本発明
オリゴ糖のＮ−アセチルグルコサミン残基の６位のヒド
ロキシル基が硫酸化されている（すなわち一般式(13)に
おけるＲ¹⁶が−ＳＯ₃Ｍである）ことが好ましく、ガラ
クトース残基の６位のヒドロキシル基およびＮ−アセチ
ルグルコサミン残基の６位のヒドロキシル基の両方が硫
酸化されている（すなわち一般式(13)におけるＲ¹⁶およ
びＲ¹⁷がいずれも−ＳＯ₃Ｍである）ことがより好まし
い。

【００８４】本発明の抗アレルギー剤は、アレルギーが
関与するあらゆる疾患に対して有効であり、具体的に
は、気管支喘息、アレルギ−性間質性肺炎、アレルギ−
性鼻炎、アレルギ−性結膜炎、アトピ−性皮膚炎などの
予防または治療を目的として適用することができる。

【００８５】また、本発明オリゴ糖のガラクトース残基
の６位のヒドロキシル基およびＮ−アセチルグルコサミ
ン残基の６位のヒドロキシル基の両方が硫酸化されてい
る場合、本発明医薬は特に抗炎症剤として利用できる。

【００８６】本発明の抗炎症剤は、炎症が関与するあら
ゆる疾患に対して有効であり、具体的には、慢性関節リ
ウマチ、全身性エリテマトーデス、変形性脊椎症、変形
性関節症、腰痛症、手術後及び外傷後の炎症及び腫張の
緩解、肩甲関節周囲炎、顎関節症、腱腱鞘炎、腱周囲
炎、上腕骨顆炎（テニス肘）、筋肉痛、角結膜炎などの
治療を目的として適用することができる。本発明の抗炎
症剤は、その有効成分の作用により、これらの疾患に対
して、鎮痛、消炎、解熱等の抗炎症作用を有する。

【００８７】なお本発明医薬は、純然とした治療目的の
みならず、疾患の予防、維持（悪化防止）、軽減（症状
の改善）等を目的として適用することができる。

【００８８】本発明においては、対象となる疾患の性質
や進行状況、投与方法などに応じて、任意の剤形を適宜
選択することができる。

【００８９】すなわち、本発明医薬は注射（静脈内、筋
肉内、皮下、皮内、腹腔内等）、経口、経皮、吸入など
により投与することができ、これらの投与方法に応じて
適宜製剤化することができる。選択し得る剤形も特に限
定されず、例えば注射剤（溶液、懸濁液、乳濁液、用時
溶解用固形剤等）、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、
液剤、リポ化剤、軟膏剤、ゲル剤、外用散剤、スプレー
剤、吸入散剤等から広く選択することができる。また、
これらの製剤調製にあたり、慣用の賦形剤、安定化剤、
結合剤、滑沢剤、乳化剤、浸透圧調整剤、pH調整剤、そ
の他着色剤、崩壊剤等、通常医薬に用いられる成分を使
用することができる。

【００９０】本発明医薬中の有効成分であるケラタン硫
酸オリゴ糖の配合量ならびに本発明医薬の投与量は、そ
の製剤の投与方法、投与形態、使用目的、患者の具体的
症状、患者の体重等に応じて個別的に決定されるべき事
項であり、特に限定はされない。

【００９１】アレルギ−性疾患では、気道や肺にあるＩ
ｇＥ抗体をもった感作肥満細胞から抗原に誘導されて化
学伝達物質が遊離される。化学伝達物質にはヒスタミン
や好酸球走化性因子、ＳＲＳ−Ａなどがある。これらに
より喘息では、呼吸困難、咳、発作が起き、また肺疾患
では出血性肺炎、浮腫、間質性肺炎、血管炎などの症状
がみられる。まれに肉芽腫もみられ、この疾患は後に肺
線維症になることが多い。アレルギ−性疾患に対しては
抗ヒスタミン剤やステロイド剤、抗アレルギ−剤（化学
伝達物質遊離抑制薬）による治療が行われている。しか
し、副作用として抗ヒスタミン剤では、脱力感、倦怠
感、頭痛、嘔吐、頭重感、食欲不振等が報告されてい
る。気管支喘息においては、抗コリン作用により気道分
泌が抑制され、喀痰の喀出を困難とするため、軽症例を
除いては使用されない。また緑内障、排尿困難の者にも
禁忌である。一方、ステロイド剤の主たる作用は抗炎症
作用と考えられ、通常アレルギ−疾患の治療には大量・
連続投与が必要である。ステロイド剤は重篤な副作用が
あるため、一般的な治療方法でコントロ−ルできない場
合に用いるのが原則とされている。また抗アレルギ−薬
は、肝障害、出血性膀胱炎、胃腸障害を起こすこともあ
るので、定期的な検査を必要とする。

【００９２】このように特にアレルギ−疾患の領域で
は、より副作用の少ない有効な治療法が求められている
が、本発明医薬によれば、このような治療法を提供する
ことができる。

【００９３】なお、本発明医薬（本発明の抗アレルギー
剤及び本発明の抗炎症剤を含む）において、一般式(13)
における好ましいＲ¹⁸及びＺは前記と同様である。

【００９４】

【実施例】以下に本発明を、実施例により具体的に説明
する。しかしながら、これらにより本発明の技術的範囲
が限定されるべきものではない。なお、実施例における
溶媒の混合液の比率は、特記しない限り、容量比であ
る。

【００９５】

【実施例１】 O-(2-アセトアミド-2-デオキシ-6-O-ス
ルホ-β-D-グルコピラノシル)-(1→3)-O-6-O-スルホ-β
-D-ガラクトピラノース二ナトリウム塩の合成図２〜４
に概略を示す手順によりO-(2-アセトアミド-2-デオキシ
-6-O-スルホ-β-D-グルコピラノシル)-(1→3)-O-6-O-ス
ルホ-β-D-ガラクトピラノース二ナトリウム塩を合成し
た。なお、以下の実施例における各合成段階で共通して
用いた方法は、以下の通りである。シリカゲルカラムク
ロマトグラフィーは、Kiesegel60(MERCK)を用いて行っ
た。薄層クロマトグラフィーは HPTLC-Fertigplatten K
ieselgel 60 F₂₅₄ (MERCK)を使用した。¹H-NMR スペク
トルおよび¹³C-NMR スペクトルは、JNM-EX-400（日本電
子株式会社製）を用いて測定した。測定溶媒 CDCl₃, CD
₃ODにおいてはテトラメチルシランを、またD₂Oにおいて
はt-ブタノールを内部標準とした。

【００９６】（１）化合物２から化合物１４の合成 ガラクトースシントン２−９は、ガラクトース（化合物
１）から伊藤らの報告している合成経路(Agric. Biol.
Chem., 50, 3227(1986))に従い合成を行った。化合物１
０〜１４の合成は以下のようにして行った。なお、以
下、物質名の後の番号は、図２〜４における化合物の番
号を示す。

【００９７】(a) ベンジル2,4-ジ-O-アセチル-3,6-ジ-O
-アリル-β-D-ガラクトピラノシド(benzyl 2,4-di-O-ac
etyl-3,6-di-O-allyl-β-D-galactopyranoside)１０ 窒素ガス雰囲気下、事前に乾燥したモレキュラーシーブ
ス４Ａ(30.0 g)の入った反応容器にベンジルアルコール
(18.4 ml, 178.8 mmol)および化合物９(2,4-ジ-O-アセ
チル-3,6-ジ-O-アリル-D-ガラクトピラノシルトリクロ
ロアセトイミデート(2,4-di-O-acetyl-3,6-di-O-allyl-
D-galactopyranosyl trichloroacetimidate)；21.84 g,
44.67 mmol)を加えた後、氷冷下で15分間撹拌した。反
応混合物に氷冷下でトリメチルシリルトリフルオロメタ
ンスルホネート(1.7 ml, 8.93 mmol)を加えた後、同温
で4時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、氷冷
下、トリエチルアミンを加え中和後、減圧下溶媒を留去
した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(ト
ルエン：酢酸エチル＝6:1)にて精製し、化合物１０(18.
6g, 96%)を得た。

【００９８】Rf: 0.51 (トルエン：酢酸エチル=3:1) C₂₃H₃₀O₈ MW: 434.47 400 MHz ¹H-NMR (CDCl₃,TMS) δ：2.037(s, 3H, OAc)
2.146(s, 3H, OAc) 4.445(d, 1H, J=7.8 Hz, H-1) 5.46
1(d,1H, J=2.9 Hz, H-4) 5.715-5.914(m, 2H, CH₂=CH x
2) 7.200-7.400(m, 5H, aromatic)

【００９９】(b) ベンジル3,6-ジ-O-アリル-β-D-ガラ
クトピラノシド(benzyl 3,6-di-O-allyl-β-D-galactop
yranoside)１１ 化合物１０(10.84 g, 24.9 mmol)のメタノール溶液(30
ml)にナトリウムメトキシド(134 mg, 2.5 mmol)を加え
窒素ガス雰囲気下室温で48時間撹拌した。反応混合物を
酢酸にて中和後、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー(トルエン：酢酸エチル
＝4:1)にて精製し、化合物１１(6.8 g, 78%)を得た。

【０１００】Rf: 0.27 (トルエン：酢酸エチル=2:1) C₁₉H₂₆O₆ MW: 350.40

【０１０１】(c) ベンジル3,6-ジ-O-アリル-2,4-ジ-O-
ベンジル-β-D-ガラクトピラノシド(benzyl 3,6-di-O-a
llyl-2,4-di-O-benzyl-β-D-galactopyranoside)１２ 窒素ガス雰囲気および氷冷下、60%水素化ナトリウム(3.
8 g, 95.5 mmol)、化合物１１(6.7 g, 19.1 mmol)およ
びＤＭＦ20 mlの混合物にベンジルブロミド(11.4 ml, 9
5.5 mmol)を加え18時間撹拌した。反応混合物に氷冷下
でメタノールを加え1時間撹拌後、減圧下溶媒を留去し
た。残渣をジエチルエーテルにて希釈後、水、飽和食塩
水にて順次洗浄し、硫酸マグネシウムにて乾燥後、溶媒
を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィー(n-ヘキサン：酢酸エチル＝10:1〜9:
1)にて精製し、化合物１２(9.1 g, 90%)を得た。

【０１０２】Rf: 0.27 (トルエン：酢酸エチル=10:1) C₃₃H₃₈O₆ MW: 530.63 400 MHz ¹H-NMR (CDCl₃,TMS) δ：3.424(dd, 1H, J=2.
9,9.8 Hz, H-3) 3.829(dd, 1H, J=7.8,9.8 Hz, H-2) 3.
861(d, 1H, J=2.9 Hz, H-4) 4.453(d, 1H, J=7.8 Hz, H
-1) 5.805-5.984(m, 2H, CH₂=CH x2) 7.200-7.450(m, 1
5H, aromatic)

【０１０３】(d) ベンジル2,4-ジ-O-ベンジル-β-D-ガ
ラクトピラノシド(benzyl 2,4-di-O-benzyl-β-D-galac
topyranoside)１３ 水素ガス雰囲気下、活性化されたイリジウムコンプレッ
クス[Iｒ(CoD)(PMePh₂)₂PF₆(287 mg, 0.34 mmol)のテト
ラヒドロフラン溶液(60 ml)に室温で化合物１２(8.9 g,
16.7 mmol)のテトラヒドロフラン溶液(80 ml)を加え7
時間撹拌した。次いで、水(100 ml)およびヨウ素(8.5
g, 67.1 mmol)を加え15時間撹拌した。反応混合物を酢
酸エチルにて希釈後、飽和チオ硫酸ナトリウム溶液、飽
和重曹水、飽和食塩水にて順次洗浄し、硫酸マグネシウ
ムにて乾燥後、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣を
再結晶(エタノール−ジクロロメタン−ジエチルエーテ
ル)し、化合物１３(7.4 g, 97%)を得た。

【０１０４】Rf: 0.34 (n-ヘキサン:酢酸エチル=1:1) C₂₇H₃₀O₆ MW: 450.51

【０１０５】(e) ベンジル2,4-ジ-O-ベンジル-6-O-ピバ
ロイル-β-D-ガラクトピラノシド(benzyl 2,4-di-O-ben
zyl-6-O-pivaloyl-β-D-galactopyranoside)１４ 窒素ガス雰囲気下、0℃で、化合物１３(7.3 g, 16.2 mm
ol)のピリジン溶液(50ml)にピバロイルクロリド(4.2 m
l, 35.7 mmol)を加え70分間撹拌した。反応液にメタノ
ールを加え40分間撹拌した後に減圧下溶媒を留去し、残
渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(トルエン：
酢酸エチル＝6:1)にて精製し、化合物１４(7.81 g, 90
%)を得た。

【０１０６】Rf: 0.45 (トルエン：酢酸エチル=6:1) C₃₂H₃₈O₇ MW: 534.62 400 MHz ¹H-NMR (CDCl₃,TMS) δ：1.202(s, 9H, OPiv)
2.326(bs, 1H, OH) 3.628-3.708(m, 3H, H-2, H-3 and
H-5)3.786(d, 1H, J=3.9 Hz, H-4) 4.142(dd, 1H, J=6.
4,10.7 Hz, H-6) 4.352(dd,1H, J=6.8,11.2 Hz, H-6')
4.448(d, 1H, J=7.3 Hz, H-1) 6.650-7.150(m, 15H, ar
omatic)

【０１０７】（２）化合物１６から化合物２４の合成 グルコサミンシントン１６−２０は、グルコサミン（化
合物１５）から仲野らの報告している合成経路(Tetrahe
dron Lett., 31, 1597(1990))に従い合成を行った。化
合物２１〜２４の合成は以下のようにして行った。

【０１０８】(f) p-メトキシフェニル3,4-ジ-O-ベンジ
ル-2-デオキシ-2-フタルイミド-β-D-グルコピラノシド
(p-methoxyphenyl 3,4-di-O-benzyl-2-deoxy-2-phthali
mido-β-D-glucopyranoside)２１ 窒素ガス雰囲気下、事前に乾燥したモレキュラーシーブ
ス４Ａ(60.0 g)の入った反応容器にボラン-トリメチル
アミンコンプレックス(75.0 g, 1028 mmol)、化合物２
０(21.0 g, 35.4 mmol)のジクロロメタン溶液(200 m
l)、および、ジエチルエーテル(80 ml)を加え15分間撹
拌した。反応容器を0℃に冷却し、無水塩化アルミニウ
ム(20.0 g, 150 mmol)を少量ずつ1.5時間で加え、0℃で
2.5時間撹拌した。反応混合物をセライトで濾過し、濾
液を酢酸エチルで希釈後、1N硫酸水溶液、水、飽和重曹
水、飽和食塩水にて順次洗浄し、硫酸マグネシウムにて
乾燥後、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー(トルエン：酢酸エチル
＝4:1)にて精製し、化合物２１(14.5 g, 69%)を得た。

【０１０９】Rf: 0.40 (トルエン：酢酸エチル=3:1) C₃₅H₃₃N₁O₈ MW: 595.62 400 MHz ¹H-NMR (CDCl₃+CD₃OD,TMS) δ：3.620-3.662
(m, 1H, H-5) 3.706(s, 3H, OMe) 3.783-3.849(m, 2H,
H-4 and H-6) 3.939(dd, 1H, J=2.4,12.2 Hz, H-6') 4.
351(dd, 1H, J=8.3,10.7 Hz, H-2) 4.435(dd, 1H, J=8.
3,10.7 Hz, H-3) 5.693(d, 1H, J=8.3 Hz, H-1) 6.650-
7.900(m, 18H, aromatic)

【０１１０】(g) p-メトキシフェニル6-O-アセチル-3,4
-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-2-フタルイミド-β-D-グル
コピラノシド(p-methoxyphenyl 6-O-acetyl-3,4-di-O-b
enzyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranoside)
２２窒素ガス雰囲気下、化合物２１(10.5 g, 17.6 mmo
l)のピリジン溶液(200 ml)に無水酢酸(200 ml)およびDM
AP(触媒量)を加え20時間撹拌した。反応液にエタノール
を加え20分間撹拌した後に減圧下溶媒を留去し、残渣を
シリカゲルカラムクロマトグラフィー(トルエン：酢酸
エチル＝4:1)にて精製し、化合物２２(9.6 g,85%)を得
た。

【０１１１】Rf: 0.51 (トルエン：酢酸エチル=4:1) C₃₇H₃₅N₁O₉ MW: 637.66 400 MHz ¹H-NMR (CDCl₃,TMS) δ：2.062(s, 3H, OAc)
3.680(s, 3H, OMe) 3.759-3.817(m, 2H, H-4 and H-5)
4.296(dd, 1H, J=4.4, 12.2 Hz, H-6) 5.631(d, 1H, J=
7.8 Hz, H-1) 6.650-7.900(m, 18H, aromatic)

【０１１２】(h) 6-O-アセチル-3,4-ジ-O-ベンジル-2-
デオキシ-2-フタルイミド-D-グルコピラノース(6-O-ace
tyl-3,4-di-O-benzyl-2-deoxy-2-phthalimido-D-glucop
yranose)２３ 化合物２２(9.0 g, 14.1 mmol)をアセトニトリル：水
(4:1; 400 ml)に溶解し、硝酸第二セリウムアンモニウ
ム(20.1 g, 36.7 mmol)を加え室温下、40分間激しく撹
拌した。反応混合物を酢酸エチルにて希釈し、水、飽和
重曹水、飽和食塩水にて順次洗浄後、硫酸マグネシウム
にて乾燥し減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー(トルエン：酢酸エチル＝2.5:
1)にて精製し、化合物２３(6.1 g, 81%)を得た。

【０１１３】Rf: 0.23 (トルエン：酢酸エチル=2:1) C₃₀H₂₉N₁O₈ MW: 531.54 400 MHz ¹H-NMR (CDCl₃+D₂O,TMS) δ：2.074(s, 3H, O
Ac) 3.680(t, 3H, J=9.3 Hz, H-4) 3.739-3.772(m, 1H,
H-5) 4.100(dd, 1H, J=8.8,10.8 Hz, H-2) 4.240(dd,
1H, J=3.9,11.2 Hz, H-6) 5.386(d, 1H, J=8.3 Hz, H-
1) 6.650-7.900(m, 14H, aromatic)

【０１１４】(i) 6-O-アセチル-3,4-ジ-O-ベンジル-2-
デオキシ-2-フタルイミド-β-D-グルコピラノシルフル
オライド(6-O-acetyl-3,4-di-O-benzyl-2-deoxy-2-phth
alimido-β-D-glucopyranosyl fluoride)２４ 窒素ガス雰囲気下、化合物２３(5.95 g, 11.2 mmol)の
1,2−ジクロロエタン溶液(50 ml)に氷冷下で、ジエチル
アミノサルファートリフルオリド(5.8 ml, 43.9mmol)を
加え2時間撹拌した。反応混合物を酢酸エチルにて希釈
し、飽和重曹水、飽和食塩水にて順次洗浄後、硫酸マグ
ネシウムにて乾燥し溶媒を減圧下留去した。残渣をシリ
カゲルカラムクロマトグラフィー(トルエン：酢酸エチ
ル＝4:1)にて精製し、化合物２４(5.9 g, 99%)を得た。

【０１１５】Rf: 0.68 (トルエン：酢酸エチル=2:1) C₃₀H₂₈N₁O₇F₁ MW: 533.53 400 MHz ¹H-NMR (CDCl₃,TMS) δ：2.097(s, 3H, OAc)
3.859(dd, 1H, J=8.3,9.8 Hz, H-4) 3.800-3.840(m, 1
H, H-5) 5.810(d, 0.5H, J=7.8 Hz, H-1β) 5.943(d,
0.5H, J=7.8 Hz, H-1β) 6.800-7.800(m, 14H, aromati
c)

【０１１６】（３）化合物１４および化合物２４からの
化合物２８の合成 化合物２５〜２８の合成は以下のように行った。

【０１１７】(j) ベンジルO-(6-O-アセチル-3,4-ジ-O-
ベンジル-2-デオキシ-2-フタルイミド-β-D-グルコピラ
ノシル)-(1→3)-O-2,4-ジ-O-ベンジル-6-O-ピバロイル-
β-D-ガラクトピラノシド(benzyl O-(6-O-acetyl-3,4-d
i-O-benzyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranos
yl)-(1→3)-O-2,4-di-O-benzyl-6-O-pivaloyl-β-D-gal
actopyranoside)２５ 窒素ガス雰囲気下、事前に乾燥したモレキュラーシーブ
ス４Ａ(20.0 g)の入った反応容器にシルバートリフレー
ト(7.23 g, 28.2 mmol)、ハフノセンジクロリド(5.4 g,
14.1 mmol)および1,2−ジクロロエタン(20 ml)を加え
た後、氷冷下20分間撹拌した。反応容器を-23℃に冷却
し、化合物２４(5.8 g, 10.8 mmol)および化合物１４
(5.4 g, 10.0 mmol)の1,2−ジクロロエタン溶液(45 ml)
を加え、-23℃で1.5時間撹拌した。反応液を酢酸エチル
で希釈し氷冷下、トリエチルアミンを加え20分間撹拌し
た後にセライトで濾過した。濾液を酢酸エチルで希釈
し、飽和重曹水、飽和食塩水にて順次洗浄後、硫酸マグ
ネシウムにて乾燥し減圧下溶媒を留去した。残渣をシリ
カゲルカラムクロマトグラフィー(トルエン：酢酸エチ
ル＝9:1)にて精製後、再結晶を行い化合物２５(9.3 g,
82%)を得た。

【０１１８】Rf: 0.39 (トルエン：酢酸エチル=8:1) C₆₂H₆₅N₁O₁₄ MW: 1048.15 400 MHz ¹H-NMR (CDCl₃,TMS) δ：1.173(s, 9H, OPiv)
1.986(s, 3H, OAc) 3.859(bd, 1H, J=2.5 Hz, H-4) 4.0
63(dd, 1H, J=5.9,11.2 Hz) 5.454(d, 1H, J=8.3 Hz, H
-1) 6.800-7.800(m, 24H, aromatic)

【０１１９】(k) ベンジルO-(2-アセトアミド-3,4-ジ-O
-ベンジル-2-デオキシ-β-D-グルコピラノシル)-(1→3)
-O-2,4-ジ-O-ベンジル-β-D-ガラクトピラノシド(benzy
l O-(2-acetamido-3,4-di-O-benzyl-2-deoxy-β-D-gluc
opyranosyl)-(1→3)-O-2,4-di-O-benzyl-β-D-galactop
yranoside)２６ 化合物２５(8.0 g, 7.6 mmol)の1-ブタノール溶液(200
ml)に、エチレンジアミン(170 ml)を加え98℃にて46時
間撹拌した。反応混合物の溶媒を減圧下留去し、残渣に
トルエンおよびメタノールを加え減圧下溶媒を留去し
た。残渣をピリジン(200 ml)に溶解しＤＭＡＰ(触媒量)
と無水酢酸(150 ml)を加え室温で2日間撹拌した。反応
混合物の溶媒を留去し、トルエンおよびエタノールにて
共沸を行った。得られた残渣をシリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝4:1）にて精製
し、2成分の混合物(6.84 g)を得た。さらにこの混合物
のメタノール溶液 (100 ml)にナトリウムメトキシド(76
9 mg, 14.3 mmol)を加え窒素ガス雰囲気下室温で60時間
撹拌した。アンバーリスト15で中和し濾過後、濾液を減
圧下溶媒留去した。得られた残渣を再結晶(ジクロロメ
タン−イソプロピルエーテル）し化合物２６(6.0 g, 94
%)を得た。

【０１２０】Rf: 0.33 (トルエン：酢酸エチル=1:3) C₄₉H₅₅N₁O₁₁ MW: 833.94 400 MHz ¹H-NMR (CDCl₃+CD₃OD,TMS) δ：1.557(s, 3H,
NAc) 4.438(d, 1H, J=7.3 Hz, H-1) 4.784(d, 1H, J=8.
3 Hz, H-1) 7.200-7.450(m, 20H, aromatic) 100 MHz ¹³C-NMR (CDCl₃+CD₃OD,TMS) δ：22.92(Me-C
O) 61.44,61.64(C-6 x2) 101.73(C-1),102.60(C-1) 17
0.29(Me-CO)

【０１２１】(l) ベンジルO-(2-アセトアミド-3,4-ジ-O
-ベンジル-2-デオキシ-6-O-スルホ-β-D-グルコピラノ
シル)-(1→3)-O-2,4-ジ-O-ベンジル-6-O-スルホ-β-D-
ガラクトピラノシド二ナトリウム塩(benzyl O-(2-aceta
mido-3,4-di-O-benzyl-2-deoxy-6-O-sulfo-β-D-glucop
yranosyl)-(1→3)-O-2,4-di-O-benzyl-6-O-sulfo-β-D-
galactopyranoside disodium salt)２７ 窒素ガス雰囲気下、化合物２６(212.5 mg, 0.255 mmol)
とサルファートリオキシドトリエチルアミンコンプレッ
クス(184.7 mg, 1.02 mmol)の混合物をDMF(1.0ml)に溶
解し、50℃で1時間撹拌した。反応液をそのままセファ
デックス LH-20(クロロホルム：メタノール＝1:1)にて
精製し、糖画分を濃縮した。得られた残渣をメタノール
(4 ml)に溶解後、Dowex 50(Na⁺, 4 g)を加え12時間撹拌
し、対カチオンをナトリウムに変換した。更に得られた
残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(クロロホ
ルム：メタノール＝4:1)にて精製した後に、シリカゲル
を除く目的でセファデックス LH-20(クロロホルム：メ
タノール＝1:1)にて精製し、化合物２７(252 mg, 95%)
を得た。

【０１２２】 Rf: 0.53 (クロロホルム：メタノール=3:1) C₄₉H₅₃N₁O₁₇S₂Na₂ MW: 1038.03 400 MHz ¹H-NMR (CDCl₃+CD₃OD,TMS) δ：1.621(s, 3H,
NAc) 7.200-7.450(m, 20H, aromatic) 100 MHz ¹³C-NMR (CDCl₃+CD₃OD,TMS) δ：22.14(Me-C
O) 66.25,66.61(C-6 x2) 102.04(C-1 x2) 170.98(Me-C
O)

【０１２３】(m) O-(2-アセトアミド-2-デオキシ-6-O-
スルホ-β-D-グルコピラノシル)-(1→3)-O-6-O-スルホ-
β-D-ガラクトピラノース二ナトリウム塩(O-(2-acetami
do-2-deoxy-6-O-sulfo-β-D-glucopyranosyl)-(1→3)-O
-6-O-sulfo-β-D-galactopyranose disodium salt)２８ 化合物２７(236.8 mg,0.228 mmol)のメタノール−水
(2:1, 6 ml)溶液に、20%水酸化パラジウム炭素(268 mg)
を加え、反応系内を水素で置換し室温で17時間撹拌し
た。反応混合物をセライトで濾過し、残渣を水にて洗浄
後、濾液と洗浄液を併せて減圧下溶媒を留去した。得ら
れた残渣をセファデックスG−25(水)にて精製し、化合
物２８(131 mg, 98%)を得た。

【０１２４】 Rf: 0.28 (1-ブタノール：エタノール：水=2:2:1) C₁₄H₂₃N₁O₁₇S₂Na₂ MW: 587.44 400 MHz¹H-NMR (D₂O, t-BuOH, at 50℃) δ：2.029(s,
3H, NAc) 4.580(d, 0.55H, J=8.3 Hz, H-1aβ) 4.727
(d, 0.55H, J=8.3 Hz, H-1bβ) 4.742(d, 0.45H, J=8.3
Hz, H-1bα) 5.232(d, 0.45H, J=3.4 Hz, H-1aα) 100 MHz ¹³C-NMR (D₂O, t-BuOH, at 50℃) δ： 25.04(Me-CO) 69.81(C-6 b) 70.70(C-6 aβ) 70.94(C-6
aα) 95.21(C-1aα) 99.21(C-1aβ) 105.39(C-1b) 17
7.74(Me-CO)

【０１２５】

【実施例２】 O-(2-アセトアミド-2-デオキシ-6-O-ス
ルホ-β-D-グルコピラノシル)-(1→3)-O-(6-O-スルホ-
β-D-ガラクトピラノシル)-(1→4)-O-2-アセトアミド-2
-デオキシ-6-O-スルホ-β-D-グルコピラノース三ナトリ
ウム塩（以下、Ｇ４Ｌ４のナトリウム塩という）の製造 NeuAc〜Galβ1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6
S)（式中、Galはガラクトース残基を、GlcNAcはＮ−ア
セチルグルコサミン残基を、NeuAcはＮ−アセチルノイ
ラミン酸残基を、6Sは6-O-硫酸エステルをそれぞれ表
す。また〜はα2,3結合又はα2,6結合を表す；ＷＯ９６
／１６９７３参照）１ｇを0.1 M 硫酸 10mlに溶解さ
せ、50℃で22時間保温することによりＮ−アセチルノイ
ラミン酸残基(シアル酸残基)を切断した。反応後の溶液
に1 M NaOHを少量加えてpH5に調整した後、0.5 M 酢酸
ナトリウム緩衝液pH4.5を１ml、20％アジ化ナトリウム
を25μl加えた。ラクターゼ(ケイアイ化成製) 5000 Uを
加えて37℃で22時間保温することによりガラクトース残
基を切断した。反応溶液を蒸留水で５倍希釈し、1 M Na
Clで平衡化したムロマックカラム(室町化学工業)(2.5×
24 cm)にアプライした。1 M NaCl(500ml)から2.5 M NaC
l(500ml)の塩濃度勾配をカラムに負荷し、溶出液を５ml
づつ分取した。溶出画分をキャピラリー電気泳動で分析
し、Ｇ４Ｌ４の溶出位置を確認した。Ｇ４Ｌ４を含む画
分を集めてロータリーエバポレーターで約10 mlに濃縮
した。濃縮溶液を蒸留水で平衡化したセルロファインGC
L25sfカラム(生化学工業)(3×60 cm)にアプライし、蒸
留水で溶出した。10 mlづつ分取した溶出画分をキャピ
ラリー電気泳動で分析し、Ｇ４Ｌ４の溶出位置を確認し
た。Ｇ４Ｌ４を含む画分を集めてロータリーエバポレー
ターで約20 mlに濃縮した。分子量カット10000の限外ろ
過膜でろ過してエンドトキシンを除去した後、凍結乾燥
して最終サンプルとした。

【０１２６】最終サンプルはキャピラリー電気泳動で単
一ピークを示した。ヘキソース含量と硫酸含量の測定を
おこなった結果、理論値１に対して各0.84、0.91の値を
得た。

【０１２７】また、最終サンプルを下記条件で高速液体
クロマトグラフィーにかけた結果、保持時間１６．４分
に単一ピークを示した。

【０１２８】カラム：YMC-Pack PolyamineII (4.6×250
mm)((株)ワイエムシイ製) カラム温度：３５℃ 溶出液：150 mMリン酸二水素ナトリウム 流速：１ ml/分 測定波長：210 nm サンプル：10 mg/mlＧ４Ｌ４(最終サンプル)

【０１２９】また、最終サンプルのＮＭＲ測定の結果を
以下に示す。

【０１３０】400 MHz ¹H-NMR(D₂O, t-BuOH, at 22.9℃)
δ：2.024(s, 3H, NAc) 2.030(s, 3H, NAc) 4.526(d,
1H, J_1,2=7.8 Hz, H-1b) 4.699(d, 1H, J_1,2=8.8 Hz, H
-1c) 4.729(d, 0.4H, J_1,2=7.8 Hz, H-1aβ) 5.211(d,
0.6H, J_1,2=2.5 Hz, H-1aα) 100 MHz ¹³C-NMR(D₂O, t-BuOH, at 26.0℃) δ：24.74
(NHCOCH₃), 25.05(NHCOCH₃), 69.62(C-6a or b or c),
69.77(C-6b or c or a), 70.57(C-6c or a or b), 93.3
1(C-1aα), 97.82(C-1aβ), 105.80(C-1b or c), 105.9
1(C-1c or b)

【０１３１】

【実施例３】2-アセトアミド-2-デオキシ-6-O-スルホ-
β-D-グルコピラノシル-(1→3)-6-O-スルホ-β-D-ガラ
クトピラノシル-(1→1)-2,3-ジ-O-テトラデシル-sn-グ
リセロール二ナトリウム塩の合成 図５に概略を示す手順により、2-アセトアミド-2-デオ
キシ-6-O-スルホ-β-D-グルコピラノシル-(1→3)-6-O-
スルホ-β-D-ガラクトピラノシル-(1→1)-2,3-ジ-O-テ
トラデシル-sn-グリセロール二ナトリウム塩を合成し
た。物質名の後の番号は、図５における化合物の番号を
示す。

【０１３２】(a) 2,4-ジ-O-アセチル-3,6-ジ-O-アリル-
β-D-ガラクトピラノシル-(1→1)-2,3-ジ- O-テトラデ
シル-sn-グリセロール(2,4-di-O-acetyl-3,6-di-O-ally
l-β-D-galactopyranosyl-(1→1)-2,3-di-O-tetradecyl
-sn-glycerol)３ 2,3-ジ- O-テトラデシル-sn-グリセロール(500 mg, 1.0
3 mmol)、シクロペンタジエンハフノニウムダイクロラ
イド(782 mg, 2.68 mmol)、シルバートリフレート(1.06
g, 5.36 mmol)、モレキュラーシーブ4A(1.8 g)を１,2-
ジクロロエタン(3.0 ml)に懸濁し、アルゴンガス気流下
室温で攪拌後、-15℃に冷却し 化合物１(536 mg, 1.55
mmol)を加え2.5時間攪拌した。反応液をトリエチルア
ミンを加え中和し、酢酸エチル(AcOEt)で希釈後、セラ
イトでろ過し、飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄し
た。酢酸エチル層を硫酸マグネシウムにて乾燥後、減圧
下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー(トルエン:AcOEt=10:1)にて精製し、化合物３
(716.7 mg, 85.8%)を得た。

【０１３３】Rf 0.58(トルエン:AcOEt=6:1) C₄₇H₈₅O₁₀ MW : 810.179¹ H-NMR (CDCl₃) δ：5.887 (m, 1H, Allyl), 5.816
(m, 1H, Allyl), 5.500 (d, 1H, J = 2.4Hz, H-4), 5.
108 (dd, 1H, J = 8.3, 9.9Hz, H-2), 4.474 (d, 1H, J
= 8.3Hz, H-1),2.165, 2.015 (2s, 6H, 2Ac), 0.912
(t, 6H, J = 6.3Hz, 2CH₃)

【０１３４】(b) 3,6-ジ-O-アリル-2,4-ジ-O-ベンジル-
β-D-ガラクトピラノシル-(1→1)-2,3-ジ-O-テトラデシ
ル-sn-グリセロール(3,6-di-O-allyl-2,4-di-O-benzyl-
β-D-galactopyranosyl-(1→1)-2,3-di-O-tetradecyl-s
n-glycerol)５ 化合物３(430 mg, 0.531 mmol)をメタノールとテトラヒ
ドロフランとの混合液(1:1、4 mL)に溶解し、1 N水酸化
ナトリウム溶液(0.8 mL)を加え室温で1日間攪拌後、そ
の反応液をアンバーリスト15E (H⁺)タイプで中和し、セ
ライトでろ過後、ろ液を留去した。残渣をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー (トルエン:AcOEt=5:2)にて精
製し、化合物４(377.9 mg, 98.0%)を得た。[Rf 0.4
3(トルエン:AcOEt=2:1)]

【０１３５】続いて、化合物４(778 mg, 1.072 mmol)
を、N,N-ジメチルホルムアミド(3 ml)に溶解し、アルゴ
ンガス気流下-15℃で、水素化ナトリウム(308 mg, 6.99
mmol)を加え攪拌した。続いてベンジルブロマイド(0.8
4 ml, 6.99 mmol)を加え、徐々に室温にしながら3時間
攪拌した。反応液にメタノールを加え中和し、酢酸エチ
ルで希釈後、飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄した。
酢酸エチル層を硫酸マグネシウムにて乾燥後、減圧下溶
媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー(ヘキサン:AcOEt=12:1)にて精製し、化合物５(864
mg, 89%)を得た。

【０１３６】Rf 0.67(ヘキサン:AcOEt=6:1) C₅₇H₉₃O₈ MW : 906.354¹ H-NMR (CDCl₃) δ：5.845 (m, 1H, Allyl), 5.771
(m, 1H, Allyl), 4.859 (d, 1H, J = 11.7 Hz,Bn), 4.8
16 (d, 1H, J = 10.8 Hz, Bn), 4.665 (d, 1H, J = 10.
7 Hz, Bn), 4.572 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.272
(d, 1H, J = 7.3 Hz, H-1), 3.773 (d,1H, J = 2.5 Hz,
H-4), 3.660 (dd, 1H, J = 7.8, 9.8 Hz, H-2), 0.801
(t, 6H, J = 6.4 Hz, 2CH₃).

【０１３７】(c) 2,4-ジ-O-ベンジル-β-D-ガラクトピ
ラノシル-(1→1)-2,3-ジ-O-テトラデシル-sn-グリセロ
ール(2,4-di-O-benzyl-β-D-galactopyranosyl-(1→1)-
2,3-di-O-tetradecyl-sn-glycerol)６ イリジウムコンプレックス (1,5-シクロオクタジエンビ
ス(メチルジフェニルホスフィン)イリジウムヘキサフル
オロホスフェート) (112 mg, 0.096 mmol)をテトラヒド
ロフラン(5 mL)に懸濁し、H₂気流下攪拌し活性化させ
た。その溶液に化合物５(864 mg, 0.95 mmol)をテトラ
ヒドロフラン(5 mL)に溶解させて加え、アルゴンガス気
流下室温で2時間攪拌後、ヨウ素(484 mg)、水(24.7 m
L)、テトラヒドロフラン(15 mL)を加えさらに2時間室温
で攪拌した。反応液をクロロホルムで希釈後、飽和チオ
硫酸ナトリウム溶液、飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗
浄した。クロロホルム層を硫酸マグネシウムにて乾燥
後、減圧下溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィー(トルエン:EtOAc=5:2) にて精製し、化
合物６(686.6 mg, 87.1%)を得た。

【０１３８】Rf 0.32(トルエン:AcOEt=2:1) C₅₁H₈₅O₈ MW: 826.225¹ H-NMR (CDCl₃) δ：4.991 (d, 1H, J = 11.2 Hz, Bn),
4.834 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.658 (d, 2H, J =
11.2 Hz, 2Bn), 4.385 (d, 1H, J = 7.3 Hz, H-1), 3.
778 (d, 1H, J= 2.4 Hz, H-4), 0.881 (t, 6H, J = 6.8
Hz, 2CH₃)

【０１３９】(d) 2,4-ジ-O-ベンジル-6-O-ピバロイル-
β-D-ガラクトピラノシル-(1→1)-2,3-ジ- O-テトラデ
シル-sn-グリセロール(2,4-di-O-benzyl-6-O-pivaloyl-
β-D-galactopyranosyl-(1→1)-2,3-di- O-tetradecyl-
sn-glycerol)７ 化合物６(687 mg, 0.831 mmol)をピリジン(12 mL)を加
え溶解させ、その溶液にピバロイルクロライド(130μL,
1.08 mmol)を加え-5℃にて1時間攪拌後、さらにピバロ
イルクロライド(130μL, 1.08 mmol)を加え-5℃にて1時
間攪拌した。反応液を、酢酸エチルで希釈後、セライト
でろ過し、飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄した。酢
酸エチル層を硫酸マグネシウムにて乾燥後、減圧下溶媒
を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー (トルエン:AcOEt=10:1)にて精製し、化合物７(716.6
mg, 94.7%)を得た。

【０１４０】Rf 0.57(トルエン:AcOEt=6:1) C₅₆H₉₃O₉ MW : 910.342¹ H-NMR (CDCl₃) δ：4.991 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn),
4.855 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.650 (d, 1H, J =
11.2 Hz, Bn), 4.646 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.3
65 (d, 1H, J= 7.3 Hz, H-1), 4.302 (dd, 1H, J = 6.
8, 11.8 Hz, H-6), 4.109 (dd, 1H, J= 6.4, 11.2 Hz,
H-6'), 3.775 (d, 1H, J = 2.4 Hz, H-4), 1.179 (s, 9
H, piv), 0.879 (t, 6H, J = 6.8 Hz, 2CH₃)

【０１４１】(e) 3-O-アセチル-2,4-ジ-O-ベンジル-6-O
-ピバロイル-β-D-ガラクトピラノシル-(1→1)-2,3-ジ-
O-テトラデシル-sn-グリセロール(3-O-acetyl-2,4-di-O
-benzyl-6-O-pivaloyl-β-D-galactopyranosyl-(1→1)-
2,3-di-O-tetradecyl-sn-glycerol)８ 化合物７(10.8 mg, 11.9μmol)をピリジン(1 mL)を加え
溶解させ、その溶液に無水酢酸(0.5 mL)を加え室温で1
時間攪拌した。溶媒をトルエンで共沸後、残渣をセファ
デックスLH-20(CHCl₃:MeOH=1:2)にて精製し、化合物８
(11.3 mg, qu.)を得た。

【０１４２】Rf 0.46(トルエン:AcOEt=8:1) C₅₈H₉₅O₁₀ MW : 952.379¹ H-NMR (CDCl₃) δ：4.900 (dd, 1H, J = 3.4, 10.3 H
z, H-3), 4.882 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.634 (d,
2H, J = 12.2 Hz, 2Bn), 4.543 (d, 1H, J = 11.2 Hz,
Bn), 4.437 (d, 1H, J = 7.3 Hz, H-1), 4.299 (dd, 1
H, J = 6.8, 11.2 Hz, H-6), 4.087 (dd, 1H, J = 6.8,
11.2 Hz, H-6'), 3.850 (d, 1H, J = 2.9 Hz, H-4),
3.765 (dd, 1H, J = 7.8, 10.3 Hz, H-2), 1.926 (s, 3
H, Ac), 1.188 (s, 9H, piv), 0.881 (t, 6H, J = 6.8
Hz, 2CH₃)

【０１４３】(f) 3,4-ジ-O-ベンジル-2-デオキシ-6-O-
レブロイル-2-フタルイミド-β-D-グルコピラノシル-(1
→3)-2,4-ジ-O-ベンジル-6-O-ピバロイル-β-D-ガラク
トピラノシル-(1→1)-2,3-ジ-O-テトラデシル-sn-グリ
セロール(3,4-di-O-benzyl-2-deoxy-6-O-levloyl-2-pht
alimido-β-D-gulcopyranosyl-(1→3)-2,4-di-O-benzyl
-6-O-pivaloyl-β-D-galactopyranosyl-(1→1)-2,3-di-
O-tetradecyl-sn-glycerol)９ 化合物７(685 mg, 0.752 mmol)、シクロペンタジエンハ
フノニウムダイクロライド(571 mg, 1.96 mmol)、シル
バートリフレート(771 g, 3.91 mmol)、モレキュラーシ
ーブ4A(2.5 g)を１,2-ジクロロエタン(10 ml)に懸濁
し、アルゴンガス気流下室温で攪拌後、-15℃に冷却し
化合物２(563 mg, 0.98 mmol)を加え1時間攪拌した。反
応液をトリエチルアミンを加え中和し、酢酸エチルで希
釈後、セライトでろ過し、飽和重曹水、飽和食塩水で順
次洗浄した。酢酸エチル層を硫酸マグネシウムにて乾燥
後、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィー(トルエン:AcOEt=9:1)にて精製し、化
合物９(1.01 g, 91.5%)を得た。

【０１４４】Rf 0.44(トルエン:AcOEt=6:1) C₈₉H₁₂₄O₁₇N MW : 1479.949¹ H-NMR (CDCl₃) δ：5.461 (d, 1H, J = 8.3 Hz, H-1
b), 4.941 (d, 1H, J = 11.2 Hz, Bn), 4.874(d, 1H, J
= 10.7 Hz, Bn), 4.789 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn),
4.648 (d, 1H,J = 11.2 Hz, Bn), 4.536 (d, 1H, J = 1
1.7 Hz, Bn), 4.460 (d, 1H, J = 11.7Hz, Bn), 4.414
(d, 2H, J = 11.7 Hz, 2Bn), 4.223 (d, 1H, J = 7.8 H
z, H-1a), 3.897 (d, 1H, J = 3.2 Hz, H-4a), 2.130
(s, 3H, CH₃), 1.153 (s, 9H, piv), 0.881 (t, 6H, J
= 6.6 Hz, 2CH₃)

【０１４５】(g) 2-アセトアミド-3,4-ジ-O-ベンジル-2
-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→3)-2,4-ジ-O-ベ
ンジル-β-D-ガラクトピラノシル-(1→1)-2,3-ジ-O-テ
トラデシル-sn-グリセロール(2-acetamido-3,4-di-O-be
nzyl-2-deoxy-β-D-gulcopyranosyl-(1→3)-2,4-di-O-b
enzyl-β-D-galactopyranosyl-(1→1)-2,3-di-O-tetrad
ecyl-sn-glycerol)１０ 化合物９(977.4 mg, 0.667 mmol)をエタノール(33.5 m
L)に懸濁し、ヒドラジン水和物(3.35 mL)を加え、110℃
で18時間攪拌した。溶媒を留去し、得られたアミノ体を
ピリジン (6.0 mL)に溶解し、無水酢酸(5.0 mL)を加え
室温で17時間攪拌後、溶媒を留去した。残渣をメタノー
ルとテトラヒドロフランとの混合液(1:1、20.0 mL)に溶
解し、ナトリウムメトキシド(108 mg, 2.0 mmol)を加
え、60℃で1時間攪拌した。その反応液をアンバーリス
ト15E (H⁺)タイプで中和し、セライトでろ過後、ろ液を
留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
(トルエン:アセトン:CHCl₃=5:2:1)にて精製し、さらに
セファデックスLH-20(CHCl₃:MeOH=2:3)による精製を行
い、化合物１０(756 mg, 94.8%)を得た。

【０１４６】 Rf 0.18(トルエン:アセトン:CHCl₃=6:2:1) C₇₃H₁₁₀O₁₃N MW : 1209.666¹ H-NMR (CDCl₃) δ：4.823 (d, 1H, J = 8.3 Hz, H-1
b), 4.354 (d, 1H, J = 6.8 Hz, H-1a), 1.497(s, 3H,
NHAc), 0.881 (t, 6H, J = 6.4 Hz, 2CH₃)¹³ C-NMR (CDCl₃+CD₃OD) δ： 173.06 (Me-CO), 105.51, 104.01 (C-1x2), 62.80, 62.
51 (C-6x2)

【０１４７】(h) 2-アセトアミド-3,4-ジ-O-ベンジル-2
-デオキシ-6-O-スルホ-β-D-グルコピラノシル-(1→3)-
2,4-ジ-O-ベンジル-6-O-スルホ-β-D-ガラクトピラノシ
ル-(1→1)-2,3-ジ-O-テトラデシル-sn-グリセロール二
ナトリウム塩(2-acetamido-3,4-di-O-benzyl-2-deoxy-6
-O-sulfo-β-D-gulcopyranosyl-(1→3)-2,4-di-O-benzy
l-6-O-sulfo-β-D-galactopyranosyl-(1→1)-2,3-di-O-
tetradecyl-sn-glyceroldisodium salt)１１ 化合物１０(200 mg, 0.165 mmol)をN,N-ジメチルホルム
アミド(1.5 mL)に溶解し、(C₂H₅)₃NSO₃(300 mg, 1.65 m
mol)を加え、50℃で0.5時間攪拌した。その反応液を直
接セファデックスLH-20(CHCl₃:MeOH=2:3)にて精製し
た。その溶媒をある程度留去し、残渣に水(2.0 mL)及び
Dowex-50 (Na⁺)タイプを加え、一昼夜攪拌し、セライト
でろ過後、ろ液を留去した。残渣をDowex-50 (Na⁺)タイ
プのカラム(CHCl₃:MeOH:H₂O=5:10:3)にて精製し、化合
物１１(215 mg, 92.2%)を得た。

【０１４８】Rf 0.38(CHCl₃:MeOH=6:1) C₇₃H₁₀₈O₁₉NS₂Na₂ MW : 1413.74¹ H-NMR (CDCl₃+CD₃OD) δ：4.403 (d, 1H, J = 7.8 Hz,
H-1a), 1.593 (s, 3H, NHAc), 0.889 (t, 6H, J =6.4
Hz, 2CH₃)¹³ C-NMR (CDCl₃+CD₃OD) δ：172.93 (Me-CO), 105.24,
104.01 (C-1x2), 68.13, 68.00 (C-6x2)

【０１４９】(i) 2-アセトアミド-2-デオキシ-6-O-スル
ホ-β-D-グルコピラノシル-(1→3)-6-O-スルホ-β-D-ガ
ラクトピラノシル-(1→1)-2,3-ジ-O-テトラデシル-sn-
グリセロール二ナトリウム塩(2-acetamido-2-deoxy-6-O
-sulfo-β-D-gulcopyranosyl-(1→3)-6-O-sulfo-β-D-g
alactopyranosyl-(1→1)-2,3-di-O-tetradecyl-sn-glyc
erol disodium salt)１２ 化合物１１(200 mg, 0.141 mmol)をメタノールと水との
混合液(3:1、15 mL)に溶解し、水酸化パラジウム-カー
ボン(200 mg)を加え、水素ガスで置換し室温で4時間接
触還元を行った。反応液をセライトでろ過し、ろ液を留
去した。残渣をセファデックスLH-20(CHCl₃:MeOH:H₂O=
5:10:3)のカラムにて精製した。さらにDowex-50 (Na⁺)
タイプのカラム(CHCl₃:MeOH:H₂O=1:3:1)による精製を行
い、最後にセファデックスLH-20 (CHCl₃:MeOH:H₂O=5:1
0:3)による再カラム精製を行い、化合物１２(119.6 mg,
80.5%)を得た。

【０１５０】Rf 0.52(CHCl₃:MeOH:H₂O=12:8:1) C₄₅H₈₄O₁₉NS₂Na₂ MW : 1053.24¹ H-NMR (DMSO+D₂O)δ：4.666 (d, 1H, J = 8.3 Hz, H-1
b), 4.162 (d, 1H, J = 7.3 Hz, H-1a), 4.067(b.dd, 1
H, H-6b), 4.006-3.924 (b.dd, 1H, H-6a), 1.882 (s,
3H, NHAc), 0.861 (t, 6H, J = 6.8 Hz, 2CH₃)¹³ C-NMR (DMSO+D₂O)δ：171.32 (Me-CO), 103.49, 102.
37 (C-1x2), 65.91, 65.85 (C-6x2)

【０１５１】

【実施例４】オクチル 2-アセトアミド-2-デオキシ-6-O
-スルホ-β-D-グルコピラノシル-(1→3)-6-O-スルホ-β
-D-ガラクトピラノシド二ナトリウム塩の合成 図６に概略を示す手順により、オクチル 2-アセトアミ
ド-2-デオキシ-6-O-スルホ-β-D-グルコピラノシル-(1
→3)-6-O-スルホ-β-D-ガラクトピラノシド二ナトリウ
ム塩を合成した。物質名の後の番号は、図６における化
合物の番号を示す。

【０１５２】(a) オクチル 2,4-ジ-O-アセチル-3,6-ジ-
O-アリル-β-D-ガラクトピラノシド(octyl 2,4-di-O-ac
etyl-3,6-di-O-allyl-β-D-galactopyranoside)１３ オクタノール(300 mg, 2.30 mmol)、シクロペンタジエ
ンハフノニウムダイクロライド(1.75 g, 5.99 mmol)、
シルバートリフレート(2.36 g, 12.0 mmol)、モレキュ
ラーシーブ4A(2.3 g)を１,2-ジクロロエタン(5.0 ml)に
懸濁し、アルゴンガス気流下室温で攪拌後、-15℃に冷
却し化合物１(1.2 g, 3.47 mmol)を加え2.5時間攪拌し
た。反応液をトリエチルアミンを加えて中和し、酢酸エ
チルで希釈後、セライトでろ過し飽和重曹水、飽和食塩
水で順次洗浄した。酢酸エチル層を硫酸マグネシウムに
て乾燥後、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー(トルエン:AcOEt=10:1)にて精
製し、化合物１３(0.8 g, 76%)を得た。

【０１５３】Rf 0.46(トルエン:AcOEt=6:1) 0.34(ヘキサン:AcOEt=5:1) C₂₄H₄₀O₈ MW : 456.572¹ H-NMR (CDCl₃) δ：5.855 (m, 1H, Allyl), 5.784 (m,
1H, Allyl), 5.472 (d, 1H, J = 3.4 Hz, H-4), 5.086
(dd, 1H, J = 7.8, 9.8 Hz, H-2), 4.394 (d, 1H, J =
7.8 Hz, H-1), 2.125, 2.066 (2s, 6H, 2Ac), 0.879
(t, 3H, J = 6.8 Hz, CH₃)

【０１５４】(b) オクチル 3,6-ジ-O-アリル-2,4-ジ-O-
ベンジル-β-D-ガラクトピラノシド(octyl 3,6-di-O-al
lyl-2,4-di-O-benzyl-β-D-galactopyranoside)１５ 化合物１３ (0.8 g, 1.75 mmol)をメタノールとテトラ
ヒドロフランとの混合液(1:1、5 mL)に溶解し、1N-水酸
化ナトリウム溶液(1.0 mL)を加え室温で1日間攪拌後、
その反応液をアンバーリスト15E (H⁺)タイプで中和し、
セライトでろ過後、ろ液を留去した。残渣をシリカゲル
カラムクロマトグラフィー (トルエン:AcOEt=5:2)にて
精製し、化合物１４(585 g, 89.7%)を得た。 [Rf 0.32(トルエン:AcOEt=2:1)]

【０１５５】続いて、化合物１４(585 mg, 1.57 mmo
l)、N,N-ジメチルホルムアミド(3 ml)に溶解し、アルゴ
ンガス気流下-15℃で、水素化ナトリウム(451 mg, 10.2
mmol)を加え攪拌した。続いてベンジルブロマイド(1.2
2 ml, 10.2 mmol)を加え、徐々に室温にしながら3時間
攪拌した。反応液にメタノールを加え中和し、酢酸エチ
ルで希釈後、飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄した。
酢酸エチル層を硫酸マグネシウムにて乾燥後、減圧下溶
媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー(ヘキサン:AcOEt=15:1)にて精製し、化合物１５(81
1 mg, 93.5%)を得た。

【０１５６】Rf 0.79(ヘキサン:AcOEt=6:1) C₃₄H₄₈O₆ MW : 552.747¹ H-NMR (CDCl₃) δ：5.947 (m, 1H, Allyl), 5.849 (m,
1H, Allyl), 4.959 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.915
(d, 1H, J = 10.7 Hz, Bn), 4.765 (d, 1H, J = 10.7
Hz, Bn), 4.660 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.346 (d,
1H, J = 7.6 Hz, H-1), 0.887 (t, 3H, J = 6.4 Hz, C
H₃)

【０１５７】(c) オクチル 2,4-ジ-O-ベンジル-β-D-ガ
ラクトピラノシド(octyl 2,4-di-O-benzyl-β-D-galact
opyranoside)１６ イリジウムコンプレックス (1,5-シクロオクタジエンビ
ス(メチルジフェニルホスフィン)イリジウムヘキサフル
オロホスフェート) (172 mg, 0.15 mmol) をテトラヒド
ロフラン(5 mL)に懸濁し、H₂気流下攪拌し活性化させ
た。その溶液に化合物１５(811 mg, 1.47 mmol)をテト
ラヒドロフラン(5 mL)に溶解させて加え、アルゴンガス
気流下室温で1時間攪拌後、ヨウ素(745 mg)、水(38 mL)
及びテトラヒドロフラン(15 mL)を加えさらに1時間室温
で攪拌した。反応液をクロロホルムで希釈後、飽和チオ
硫酸ナトリウム溶液、飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗
浄した。クロロホルム層を硫酸マグネシウムにて乾燥
後、減圧下溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィー(トルエン:EtOAc=5:2) にて精製し、化
合物１６を(589 mg, 82.1%)得た。

【０１５８】Rf 0.35(トルエン:AcOEt=2:1) C₂₈H₄₀O₆ MW : 472.618¹ H-NMR (CDCl₃) δ：5.000 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn),
4.843 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.674 (d, 1H, J =
11.7 Hz, Bn), 4.662 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.3
60 (d, 1H, J= 7.3 Hz, H-1), 3.776 (d, 1H, J = 2.0
Hz, H-4), 0.868 (t, 3H, J = 6.8 Hz, CH₃)

【０１５９】(d) オクチル 2,4-ジ-O-ベンジル-6-O-ピ
バロイル-β-D-ガラクトピラノシド(octyl 2,4-di-O-be
nzyl-6-O-pivaloyl-β-D-galactopyranoside)１７ 化合物１６(569 mg, 1.20 mmol)をピリジン(17 mL)を加
えて溶解させ、その溶液にピバロイルクロライド(188μ
L, 1.57 mmol)を加え-5℃にて1時間攪拌後、さらにピバ
ロイルクロライド(188μL, 1.57mmol)を加え-5℃にて1
時間攪拌した。反応液を、酢酸エチルで希釈後、セライ
トでろ過し飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄した。酢
酸エチル層を硫酸マグネシウムにて乾燥後、減圧下溶媒
を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー (トルエン:AcOEt=10:1)にて精製し、化合物１７(648
mg, 96.7%)を得た。

【０１６０】Rf 0.56(トルエン:AcOEt=6:1) C₃₃H₄₈O₇ MW : 556.735¹ H-NMR (CDCl₃) δ：4.986 (d, 1H, J = 11.2 Hz, Bn),
4.838 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.664 (d, 1H, J =
11.7 Hz, Bn), 4.653 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.3
32 (d, 1H, J= 7.3 Hz, H-1), 4.316 (dd, 1H, J = 6.
8, 11.7 Hz, H-6), 4.113 (dd, 1H, J= 6.7, 11.0 Hz,
H-6'), 3.772 (d, 1H, J = 2.4 Hz, H-4), 1.180 (s, 9
H, piv), 0.867 (t, 3H, J = 6.8 Hz, CH₃)

【０１６１】(e) オクチル 3-O-アセチル-2,4-ジ-O-ベ
ンジル-6-O-ピバロイル-β-D-ガラクトピラノシド(octy
l 3-O-acetyl-2,4-di-O-benzyl-6-O-pivaloyl-β-D-gal
actopyranoside)１８ 化合物１７(10 mg, 18.0μmol)をピリジン(1 mL)を加え
て溶解させ、その溶液に無水酢酸(0.5 mL)を加え室温で
2時間攪拌した。溶媒をトルエンで共沸後、残渣をセフ
ァデックスLH-20(CHCl₃:MeOH=1:2)にて精製し、化合物
１８(11 mg, qu.)を得た。

【０１６２】Rf 0.58(トルエン:AcOEt=8:1) C₃₅H₅₀O₈ MW : 598.772¹ H-NMR (CDCl₃) δ：4.903 (dd, 1H, J = 3.2, 10.0 H
z, H-3), 4.883 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.645 (d,
1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.638 (d, 1H, J = 11.7 Hz,
Bn), 4.545 (d,1H, J = 11.2 Hz, Bn), 4.405 (d, 1H,
J = 7.3 Hz, H-1), 4.311 (dd, 1H, J= 6.8, 10.8 Hz,
H-6), 4.087 (dd, 1H, J = 6.8, 10.7 Hz, H-6'), 3.84
7 (d,1H, J = 2.9 Hz, H-4), 3.769 (dd, 1H, J = 7.8,
10.3 Hz, H-2), 1.937 (s, 3H, Ac), 1.188 (s, 9H, p
iv), 0.870 (t, 3H, J = 6.8 Hz, CH₃)

【０１６３】(f) オクチル 3,4-ジ-O-ベンジル-2-デオ
キシ-6-O-レブロイル-2-フタルイミド-β-D-グルコピラ
ノシル-(1→3)-2,4-ジ-O-ベンジル-6-O-ピバロイル-β-
D-ガラクトピラノシド(octyl 3,4-di-O-benzyl-2-deoxy
-6-O-levloyl-2-phtalimido-β-D-glucopyranosyl-(1→
3)-2,4-di-O-benzyl-6-O-pivaloyl-β-D-galactopyrano
side)１９ 化合物１７(624 mg, 1.12 mmol)、シクロペンタジエン
ハフノニウムダイクロライド(850 mg, 2.91 mmol)、シ
ルバートリフレート(1.15 g, 5.82 mmol)、モレキュラ
ーシーブ4A(3.2 g)を１,2-ジクロロエタン(10 ml)に懸
濁し、アルゴンガス気流下室温で攪拌後、-15℃に冷却
し 化合物２(838 mg, 1.46 mmol)を加え1時間攪拌し
た。反応液をトリエチルアミンを加え中和し、酢酸エチ
ルで希釈後、セライトでろ過し飽和重曹水、飽和食塩水
で順次洗浄した。酢酸エチル層を硫酸マグネシウムにて
乾燥後、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー(トルエン:AcOEt=10:1)にて精製
し、化合物１９(1.03 g, 82.9%)を得た。

【０１６４】Rf 0.47(トルエン:AcOEt=6:1) C₆₆H₇₉O₁₅N MW : 1126.342¹ H-NMR (CDCl₃) δ：5.475 (d, 1H, J = 8.3 Hz, H-1
b), 4.189 (d, 1H, J = 7.8 Hz, H-1a), 3.874(d, 1H,
J = 2.4 Hz, H-4a), 2.133 (s, 3H, CH₃), 1.153 (s, 9
H, piv), 0.826(t, 3H, J = 7.1 Hz, CH₃)

【０１６５】(g) オクチル 2-アセトアミド-3,4-ジ-O-
ベンジル-2-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→3)-
2,4-ジ-O-ベンジル-β-D-ガラクトピラノシド(octyl 2-
acetamido-3,4-di-O-benzyl-2-deoxy-β-D-glucopyrano
syl-(1→3)-2,4-di-O-benzyl-β-D-galactopyranoside)
２０化合物１９(1.0 g, 0.899 mmol)をエタノール(45 m
L)に懸濁し、ヒドラジン水和物(4.5 mL)を加え、110℃
で18時間攪拌した。溶媒を留去し、得られたアミノ体を
ピリジン (5.0 mL)に溶解し、無水酢酸(4.0 mL)を加え
室温で17時間攪拌後、溶媒を留去した。残渣をメタノー
ルとテトラヒドロフランとの混合液(1:1、20.0 mL)に溶
解し、ナトリウムメトキシド(146 mg, 2.7 mmol)を加
え、60℃で1時間攪拌した。その反応液をアンバーリス
ト15E (H⁺)タイプで中和し、セライトでろ過後、ろ液を
留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
(トルエン:アセトン=2.3:1)にて精製し、さらにセファ
デックスLH-20(CHCl₃:MeOH=2:3)による精製を行い、化
合物２０(739 mg, 96%)を得た。

【０１６６】Rf 0.49(トルエン:アセトン=3:2) C₅₀H₆₅O₁₁N MW : 856.06¹ H-NMR (CDCl₃) δ：4.840 (d, 1H, J = 8.3 Hz, H-1
b), 4.329 (d, 1H, J = 6.8 Hz, H-1a), 1.515(s, 3H,
NHAc), 0.848 (t, 3H, J = 6.8 Hz, CH₃)¹³ C-NMR (CDCl₃+CD₃OD) δ：173.17 (Me-CO), 105.32,
104.01 (C-1x2), 62.82, 62.55 (C-6x2)

【０１６７】(h) オクチル 2-アセトアミド-3,4-ジ-O-
ベンジル-2-デオキシ-6-O-スルホ-β-D-グルコピラノシ
ル-(1→3)-2,4-ジ-O-ベンジル-6-O-スルホ-β-D-ガラク
トピラノシド二ナトリウム塩(octyl 2-acetamido-3,4-d
i-O-benzyl-2-deoxy-6-O-sulfo-β-D-glucopyranosyl-
(1→3)-2,4-di-O-benzyl-6-O-sulfo-β-D-galactopyran
oside disodium salt)２１ 化合物２０(150 mg, 0.175 mmol)をN,N-ジメチルホルム
アミド(1.5 mL)に溶解し、(C₂H₅)₃NSO₃(319 mg, 1.75 m
mol)を加え、50℃で0.5時間攪拌した。その反応液を直
接セファデックスLH-20(CHCl₃:MeOH=2:3)にて精製し
た。溶出液の溶媒をある程度留去し、残渣に水(2.0 m
L)、Dowex-50 (Na⁺)タイプを加え、一昼夜攪拌し、セラ
イトでろ過後、ろ液を留去した。残渣をDowex-50 (Na⁺)
タイプのカラム(CHCl₃:MeOH:H₂O=5:10:3)にて精製し、
化合物２１(185 mg, 99.6%)を得た。

【０１６８】Rf 0.23(CHCl₃:MeOH=6:1) C₅₀H₆₃O₁₇NS₂Na₂ MW : 1060.134¹ H-NMR (CDCl₃+CD₃OD) δ：4.382 (d, 1H, J = 7.3 Hz,
H-1a), 1.634 (s, 3H, NHAc), 0.854 (t, 3H, J =6.8
Hz, CH₃)¹³ C-NMR (CDCl₃+CD₃OD) δ：173.03 (Me-CO), 105.10,
103.99 (C-1x2), 68.18 (C-6x2)

【０１６９】(i) オクチル 2-アセトアミド-2-デオキシ
-6-O-スルホ-β-D-グルコピラノシル-(1→3)-6-O-スル
ホ-β-D-ガラクトピラノシド二ナトリウム塩(octyl 2-a
cetamido-2-deoxy-6-O-sulfo-β-D-glucopyranosyl-(1
→3)-6-O-sulfo-β-D-galactopyranoside disodium sal
t)２２ 化合物２１(170 mg, 0.160 mmol)をメタノールと水との
混合液(3:1、15 mL)に溶解し、水酸化パラジウム-カー
ボン(180 mg)を加え、水素ガスで置換し室温で4時間接
触還元を行った。反応液をセライトでろ過し、ろ液を留
去した。残渣をセファデックスLH-20 (CHCl₃:MeOH:H₂O=
5:10:3)のカラムにて精製した。さらにDowex-50 (Na⁺)
タイプのカラム(CHCl₃:MeOH:H₂O=1:3:1)による精製を行
い、最後にセファデックスLH-20 (CHCl₃:MeOH:H₂O=5:1
0:3)による再カラム精製を行い、化合物２２(101.4 mg,
90.6%)を得た。

【０１７０】Rf 0.30(CHCl₃:MeOH:H₂O=12:6:1) C₂₂H₃₉O₁₇NS₂Na₂ MW : 699.636¹ H-NMR (DMSO+D₂O)δ：4.655 (d, 1H, J = 8.3 Hz, H-1
b), 4.136 (d, 1H, J = 7.8 Hz, H-1a), 4.053(dd, 1H,
J = 2.0, 11.7 Hz, H-6b), 3.956-3.851 (b.dd, 1H, H
-6a), 1.869 (s, 3H, NHAc), 0.861 (t, 3H, J = 7.1 H
z, CH₃)¹³ C-NMR (DMSO+D₂O)δ：171.19 (Me-CO), 102.98, 102.
30 (C-1x2), 66.09, 65.87 (C-6x2)

【０１７１】

【実施例５】コレスタニル 2-アセトアミド-2-デオキシ
-6-O-スルホ-β-D-グルコピラノシル-(1→3)-6-O-スル
ホ-β-D-ガラクトピラノシド二ナトリウム塩、およびコ
レスタニル 2-アセトアミド-2-デオキシ-β-D-グルコピ
ラノシル-(1→3)-β-D-ガラクトピラノシドの合成 図７に概略を示す手順により、コレスタニル 2-アセト
アミド-2-デオキシ-6-O-スルホ-β-D-グルコピラノシル
-(1→3)-6-O-スルホ-β-D-ガラクトピラノシド二ナトリ
ウム塩、およびコレスタニル 2-アセトアミド-2-デオキ
シ-β-D-グルコピラノシル-(1→3)-β-D-ガラクトピラ
ノシドを合成した。物質名の後の番号は、図７における
化合物の番号を示す。

【０１７２】(a) コレスタニル 2,4-ジ-O-アセチル-3,6
-ジ-O-アリル-β-D-ガラクトピラノシド(cholestanyl
2,4-di-O-acetyl-3,6-di-O-allyl-β-D-galactopyranos
ide)２３ コレスタノール(700 mg, 1.80 mmol)、シクロペンタジ
エンハフノニウムダイクロライド(1.37 g, 4.68 mmo
l)、シルバートリフレート(1.85 g, 9.37 mmol)、モレ
キュラーシーブ4A(2.7 g)を１,2-ジクロロエタン(7.0 m
l)に懸濁し、アルゴンガス気流下室温で攪拌後、-10℃
に冷却し、化合物１(936 mg, 2.70 mmol)を加え2.5時間
攪拌した。反応液を、トリエチルアミンを加えて中和
し、酢酸エチルで希釈後、セライトでろ過し、飽和重曹
水、飽和食塩水で順次洗浄した。酢酸エチル層を硫酸マ
グネシウムにて乾燥後、減圧下溶媒を留去した。残渣を
シリカゲルカラムクロマトグラフィー(トルエン:AcOEt=
10:1)にて精製し、化合物２３(970 mg, 75.3%)を得た。

【０１７３】Rf 0.57(トルエン:AcOEt=6:1) C₄₃H₇₀O₈ MW : 715.018¹ H-NMR (CDCl₃) δ：5.880 (m, 1H, Allyl), 5.802 (m,
1H, Allyl), 5.480 (d, 1H, J = 3.4 Hz, H-4), 5.072
(dd, 1H, J = 8.3, 10.3 Hz, H-2), 4.510 (d, 1H, J
= 8.3 Hz, H-1), 2.150, 2.095 (2s, 6H, 2Ac), 0.922
(d, 3H, J = 6.4 Hz, CH₃), 0.890 (d,3H, J = 6.8 Hz,
CH₃), 0.885 (d, 3H, J = 6.4 Hz, CH₃), 0.800, 0.66
7 (2s,6H, 2CH₃)

【０１７４】(b) コレスタニル 3,6-ジ-O-アリル-2,4-
ジ-O-ベンジル-β-D-ガラクトピラノシド(cholestanyl
3,6-di-O-allyl-2,4-di-O-benzyl-β-D-galactopyranos
ide)２５ 化合物２３(0.98 g, 1.37 mmol)をメタノールとテトラ
ヒドロフランとの混合液 (1:1、10 mL)に溶解し、1 N
水酸化ナトリウム溶液(1.0 mL)を加え室温で1日間攪拌
後、さらにナトリウムメトキサイド (74 mg, 1.37 mmo
l) を加え室温で2時間攪拌した。その反応液をアンバー
リスト15E (H⁺)タイプで中和し、セライトでろ過後、ろ
液を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー (トルエン:AcOEt=5:2)にて精製し、化合物２４(0.
83 g, 96%)を得た。 [Rf 0.33(トルエン:AcOEt=2:1)]

【０１７５】続いて、化合物２４(838 mg, 1.32 mmol)
を、N,N-ジメチルホルムアミド(8 ml)に溶解し、アルゴ
ンガス気流下0℃で、水素化ナトリウム(378 mg, 8.58 m
mol)を加え攪拌した。続いてベンジルブロマイド(1.02
ml, 8.58 mmol)を加え、徐々に室温にしながら3時間攪
拌した。さらに水素化ナトリウム(378 mg, 8.58 mmol)
及びベンジルブロマイド(1.02 ml, 8.58 mmol)を加え、
18時間攪拌した。反応液にメタノールを加え中和し、酢
酸エチルで希釈後、飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄
した。酢酸エチル層を硫酸マグネシウムにて乾燥後、減
圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマト
グラフィー(ヘキサン:AcOEt=13:1)にて精製し、化合物
２５(0.94 g, 88.1%)を得た。

【０１７６】Rf 0.72(ヘキサン:AcOEt=6:1) C₅₃H₇₈O₆ MW : 811.193¹ H-NMR (CDCl₃) δ：5.935 (m, 1H, Allyl), 5.836 (m,
1H, Allyl), 4.931 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.903
(d, 1H, J = 10.7 Hz, Bn), 4.739 (d, 1H, J = 10.7
Hz, Bn), 4.639 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.438 (d,
1H, J = 7.8 Hz, H-1), 3.829 (d, 1H, J = 2.9 Hz, H
-4), 3.719 (dd, 1H, J = 7.8, 9.8 Hz, H-2), 3.397
(dd, 1H,J = 2.9, 9.8 Hz, H-3), 0.893 (d, 3H, J =
6.4 Hz, CH₃), 0.862 (d, 3H, J= 6.8 Hz, CH₃), 0.858
(d, 3H, J = 6.4 Hz, CH₃), 0.799, 0.641 (2s, 6H, 2
CH₃)

【０１７７】(c) コレスタニル 2,4-ジ-O-ベンジル-β-
D-ガラクトピラノシド(cholestanyl 2,4-di-O-benzyl-
β-D-galactopyranoside)２６ イリジウムコンプレックス (1,5-シクロオクタジエンビ
ス(メチルジフェニルホスフィン)イリジウムヘキサフル
オロホスフェート) (136 mg, 0.12 mmol) をテトラヒド
ロフラン(5 mL)に懸濁し、H₂気流下攪拌し活性化させ
た。その溶液に、化合物２５(940 mg, 1.16 mmol)をテ
トラヒドロフラン(5 mL)に溶解させて加え、アルゴンガ
ス気流下室温で1時間攪拌後、ヨウ素(588 mg)、水(30 m
L)及びテトラヒドロフラン(15 mL)を加えさらに1.5時間
室温で攪拌した。反応液をクロロホルムで希釈後、飽和
チオ硫酸ナトリウム溶液、飽和重曹水、飽和食塩水で順
次洗浄した。クロロホルム層を硫酸マグネシウムにて乾
燥後、減圧下溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィー(トルエン:アセトン=6:1)にて精製
し、化合物２６を(748 mg, 88.2%)得た。

【０１７８】Rf 0.49(トルエン:アセトン=4:1) C₄₇H₇₀O₆ MW : 731.064¹ H-NMR (CDCl₃) δ：5.006 (d, 1H, J = 11.2 Hz, Bn),
4.823 (d, 1H, J = 11.2 Hz, Bn), 4.678 (d, 1H, J =
10.7 Hz, Bn), 4.650 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.4
76 (d, 1H, J= 6.8 Hz, H-1)

【０１７９】(d) コレスタニル 2,4-ジ-O-ベンジル-6-O
-ピバロイル-β-D-ガラクトピラノシド(cholestanyl 2,
4-di-O-benzyl-6-O-pivaloyl-β-D-galactopyranoside)
２７ 化合物２６(647 mg, 0.885 mmol)をピリジン(13 mL)に
溶解させ、その溶液にピバロイルクロライド(138μL,
1.15 mmol)を加え-5℃から0℃にて0.5時間攪拌後、さら
にピバロイルクロライド(138μL, 1.15 mmol)を加え-5
℃から0℃にて1時間攪拌した。反応液を、酢酸エチルで
希釈後、セライトでろ過し飽和重曹水、飽和食塩水で順
次洗浄した。酢酸エチル層を硫酸マグネシウムにて乾燥
後、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムク
ロマトグラフィー (トルエン:AcOEt=10:1)にて精製し、
化合物２７(663 mg, 91.9%)を得た。

【０１８０】Rf 0.56(トルエン:AcOEt=6:1) C₅₂H₇₈O₇ MW : 815.181¹ H-NMR (CDCl₃) δ：4.993 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn),
4.821 (d, 1H, J = 11.2 Hz, Bn), 4.667 (d, 1H, J =
11.2 Hz, Bn), 4.642 (d, 1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.4
50 (d, 1H, J= 7.3 Hz, H-1), 4.293 (dd, 1H, J = 6.
8, 11.2 Hz, H-6), 4.083 (dd, 1H, J= 6.3, 10.8 Hz,
H-6'), 3.746 (d, 1H, J = 2.0 Hz, H-4), 1.176 (s, 9
H, piv)

【０１８１】(e) コレスタニル 3-O-アセチル-2,4-ジ-O
-ベンジル-6-O-ピバロイル-β-D-ガラクトピラノシド(c
holestanyl 3-O-acetyl-2,4-di-O-benzyl-6-O-pivaloyl
-β-D-galactopyranoside)２８ 化合物２７(10 mg, 12.3μmol)をピリジン(1 mL)に溶解
させ、その溶液に無水酢酸(0.5 mL)を加え室温で1時間
攪拌した。溶媒をトルエンで共沸後、残渣をセファデッ
クスLH-20(CHCl₃:MeOH=1:2)にて精製し、化合物２８(9
mg, 85.4%)を得た。

【０１８２】Rf 0.65(トルエン:AcOEt=8:1) C₅₄H₈₀O₈ MW : 857.218¹ H-NMR (CDCl₃) δ：4.889 (dd, 1H, J = 2.7, 10.5 H
z, H-3), 4.885 (d, 1H, J = 11.2 Hz, Bn), 4.647 (d,
1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.625 (d, 1H, J = 11.2 Hz,
Bn), 4.533 (d,1H, J = 11.7 Hz, Bn), 4.518 (d, 1H,
J = 7.3 Hz, H-1), 4.289 (dd, 1H, J= 6.8, 11.2 Hz,
H-6), 4.061 (dd, 1H, J = 6.3, 11.2 Hz, H-6'), 3.76
6 (d,1H, J = 2.4 Hz, H-4), 3.753 (dd, 1H, J = 7.3,
10.3 Hz, H-2), 1.924 (s, 3H, Ac), 1.185 (s, 9H, p
iv)

【０１８３】(f) コレスタニル 3,4-ジ-O-ベンジル-2-
デオキシ-6-O-レブロイル-2-フタルイミド-β-D-グルコ
ピラノシル-(1→3)-2,4-ジ-O-ベンジル-6-O-ピバロイル
-β-D-ガラクトピラノシド(cholestanyl 3,4-di-O-benz
yl-2-deoxy-6-O-levloyl-2-phtalimido-β-D-glucopyra
nosyl-(1→3)-2,4-di-O-benzyl-6-O-pivaloyl-β-D-gal
actopyranoside)２９ 化合物２７(737 mg, 0.904 mmol)、シクロペンタジエン
ハフノニウムダイクロライド(686 mg, 2.35 mmol)、シ
ルバートリフレート(927 mg, 4.70 mmol)及びモレキュ
ラーシーブ4A(2.5 g)を１,2-ジクロロエタン(10 ml)に
懸濁し、アルゴンガス気流下室温で攪拌後、-15℃に冷
却し 化合物２(676.5 mg, 1.18 mmol)を加え1時間攪拌
した。反応液を、トリエチルアミンを加えて中和し、酢
酸エチルで希釈後、セライトでろ過し飽和重曹水、飽和
食塩水で順次洗浄した。酢酸エチル層を硫酸マグネシウ
ムにて乾燥後、減圧下溶媒を留去した。残渣をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー(トルエン:AcOEt=10:1)に
て精製し、化合物２９(982.1mg, 79.3%)を得た。

【０１８４】 C₈₅H₁₀₉O₁₅N MW : 1384.788¹ H-NMR (CDCl₃) δ：5.475 (d, 1H, J = 8.3 Hz, H-1
b), 4.453 (d, 1H, J = 7.8 Hz, H-1a), 3.852(d, 1H,
J = 2.9 Hz, H-4a), 2.133 (s, 3H, CH₃), 1.146 (s, 9
H, piv)

【０１８５】(g) コレスタニル 2-アセトアミド-3,4-ジ
-O-ベンジル-2-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→
3)-2,4-ジ-O-ベンジル-β-D-ガラクトピラノシド(chole
stanyl2-acetamido-3,4-di-O-benzyl-2-deoxy-β-D-glu
copyranosyl-(1→3)-2,4-di-O-benzyl-β-D-galactopyr
anoside)３０ 化合物２９(668 mg, 0.488 mmol)をエタノール(24.5 m
L)に懸濁し、ヒドラジン水和物(2.45 mL)を加え、110℃
で18時間攪拌した。溶媒を留去し、得られたアミノ体を
ピリジン (5.0 mL)に溶解し、無水酢酸(4.0 mL)を加え
室温で17時間攪拌後、溶媒を留去した。残渣をメタノー
ルとテトラヒドロフランとの混合液(1:1、10.0 mL)に溶
解し、ナトリウムメトキシド(78.8 mg, 1.46 mmol)を加
え、60℃で1時間攪拌した。その反応液をアンバーリス
ト15E (H⁺)タイプで中和し、セライトでろ過後、ろ液を
留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
(トルエン:アセトン=3:1)にて精製し、さらにセファデ
ックスLH-20(CHCl₃:MeOH=2:3)による精製を行い、化合
物３０(534.2 mg, 99.6%)を得た。

【０１８６】Rf 0.34(トルエン:アセトン=3:1) C₆₉H₉₅O₁₁N MW : 1114.506¹ H-NMR (CDCl₃) δ：5.044 (d, 1H, J = 12.2 Hz, NH),
4.875 (d, 1H, J = 11.2 Hz, Bn), 4.851 (d, 1H, J =
7.8 Hz, H-1b), 4.809 (d, 1H, J = 11.2 Hz, Bn), 4.
740 (d, 1H, J= 11.7 Hz, Bn), 4.696 (d, 1H, J = 11.
7 Hz, Bn), 4.672 (d, 1H, J = 12.2Hz, Bn), 4.642
(d, 1H, J = 10.7 Hz, Bn), 4.571 (d, 1H, J = 11.2 H
z, Bn),4.562 (d, 1H, J = 12.2 Hz, Bn), 4.439 (d, 1
H, J = 6.4 Hz, H-1a), 1.524(s, 3H, NHAc), 0.892
(d, 3H, J = 6.3 Hz, CH₃), 0.860 (d, 3H, J = 6.8 H
z,CH₃), 0.856 (d, 3H, J = 6.8 Hz, CH₃), 0.760, 0.6
35 (2s, 6H, 2CH₃)¹³ C-NMR (CDCl₃+CD₃OD) δ：173.00 (Me-CO), 103.79,
103.06 (C-1x2), 62.77, 62.40 (C-6x2)

【０１８７】(h) コレスタニル 2-アセトアミド-3,4-ジ
-O-ベンジル-2-デオキシ-6-O-スルホ-β-D-グルコピラ
ノシル-(1→3)-2,4-ジ-O-ベンジル-6-O-スルホ-β-D-ガ
ラクトピラノシド二ナトリウム塩(cholestanyl 2-aceta
mido-3,4-di-O-benzyl-2-deoxy-6-O-sulfo-β-D-glucop
yranosyl-(1→3)-2,4-di-O-benzyl-6-O-sulfo-β-D-gal
actopyranoside disodium salt)３１ 化合物３０(150 mg, 0.136 mmol)をN,N-ジメチルホルム
アミド(1.5 mL)に溶解し、(C₂H₅)₃NSO₃(247 mg, 1.36 m
mol)を加え、50℃で0.5時間攪拌した。その反応液を直
接セファデックスLH-20(CHCl₃:MeOH=2:3)にて精製し
た。溶出液の溶媒をある程度留去し、残渣に水(2.0 m
L)、Dowex-50 (Na⁺)タイプを加え、一昼夜攪拌し、セラ
イトでろ過後、ろ液を留去した。残渣をDowex-50 (Na⁺)
タイプのカラム(CHCl₃:MeOH:H₂O=5:10:3)にて精製し、
化合物３１(175 mg, 97.3%)を得た。

【０１８８】Rf 0.22(CHCl₃:MeOH=8:1) C₆₉H₉₃O₁₇NS₂Na₂ MW : 1318.58¹ H-NMR (CD₃OD) δ：4.523 (d, 1H, J = 7.3 Hz, H-1
a), 4.384 (dd, 1H, J = 2.0, 10.8 Hz, H-6b),4.290
(dd, 1H, J = 4.4, 10.7 Hz, H-6a), 1.645 (s, 3H, NH
Ac), 0.910 (d,3H, J = 6.8 Hz, CH₃), 0.873 (d, 3H,
J = 6.4 Hz, CH₃), 0.868 (d, 3H, J =6.8 Hz, CH₃),
0.730, 0.658 (2s, 6H, 2CH₃)¹³ C-NMR (CDCl₃+CD₃OD) δ：102.97, 102.55 (C-1x2),
68.47, 67.22 (C-6x2)

【０１８９】(i) コレスタニル 2-アセトアミド-2-デオ
キシ-6-O-スルホ-β-D-グルコピラノシル-(1→3)-6-O-
スルホ-β-D-ガラクトピラノシド二ナトリウム塩(chole
stanyl2-acetamido-2-deoxy-6-O-sulfo-β-D-glucopyra
nosyl-(1→3)-6-O-sulfo-β-D-galactopyranoside diso
dium salt)３２ 化合物３１(170 mg, 0.129 mmol)をメタノールと水との
混合液(3:1、15 mL)に溶解し、水酸化パラジウム-カー
ボン(180 mg)を加え、水素ガスで置換し室温で4時間接
触還元を行った。反応液をセライトでろ過し、ろ液を留
去した。残渣をセファデックスLH-20 (CHCl₃:MeOH:H₂O=
5:10:3)のカラムにて精製した。さらにDowex-50 (Na⁺)
タイプのカラム(CHCl₃:MeOH:H₂O=1:3:1)による精製を行
い、最後にセファデックスLH-20 (CHCl₃:MeOH:H₂O=5:1
0:3)による再カラム精製を行い、化合物３２(109.4 mg,
88.6%)を得た。

【０１９０】Rf 0.47(CHCl₃:MeOH:H₂O=12:8:1) C₄₁H₆₉O₁₇NS₂Na₂ MW : 958.08¹ H-NMR (CDCl₃) δ：4.727 (d, 1H, J = 7.8 Hz, H-1
b), 4.310 (d, 1H, J = 7.8 Hz, H-1a), 4.093(b.dd, 1
H, H-6b), 4.010-3.924 (b.dd, 1H, H-6a), 1.926 (s,
3H, NHAc), 0.945 (d, 3H, J = 6.4 Hz, CH₃), 0.909
(d, 3H, J = 6.4 Hz, CH₃), 0.905 (d, 3H, J = 6.8 H
z, CH₃), 0.827, 0.689 (2s, 6H, 2CH₃)¹³ C-NMR (DMSO+D₂O)δ：170.88 (Me-CO), 102.21, 100.
73 (C-1x2), 65.85, 65.65 (C-6x2)

【０１９１】(j) コレスタニル 2-アセトアミド-2-デオ
キシ-β-D-グルコピラノシル-(1→3)-β-D-ガラクトピ
ラノシド(cholestanyl 2-acetamido-2-deoxy-β-D-gluc
opyranosyl-(1→3)-β-D-galactopyranoside)３３ 化合物３０(230 mg, 0.209 mmol)をメタノールと水と酢
酸エチルとの混合液(4:1:1、25 mL)に溶解し、水酸化パ
ラジウム-カーボン(230 mg)を加え、水素ガスで置換し
室温で20時間接触還元を行った。反応液をセライトでろ
過し、ろ液を留去した。残渣をセファデックスLH-20 (C
HCl₃:MeOH=1:1)のカラムにて精製し、化合物３３(126.1
mg, 81.5%)を得た。

【０１９２】Rf 0.51(CHCl₃:MeOH=3:1) C₄₁H₇₁O₁₁N MW : 754.008¹ H-NMR (C₅D₅N+D₂O)δ：5.383 (d, 1H, J = 8.3 Hz, H-
1b), 4.825 (d, 1H, J = 7.3 Hz, H-1a), 2.059(s, 3H,
NHAc)

【０１９３】

【実施例６】 安全性試験および薬効薬理試験本実施例
においてはケラタン硫酸オリゴ糖として、Ｌ４のナトリ
ウム塩、２つのＬ４がβ１−３結合により結合したケラ
タン硫酸４糖（Ｌ４Ｌ４）のナトリウム塩、Ｋ４のナト
リウム塩（実施例１の化合物２８）、Ｋ２のナトリウム
塩、及びＧ４Ｌ４のナトリウム塩を使用した（略号によ
り示すオリゴ糖の構造については図８参照）。Ｌ４およ
びＬ４Ｌ４は、国際公開パンフレット第ＷＯ９６／１６
９７３号に記載の方法により得た。

【０１９４】なおＫ２のナトリウム塩は、以下の方法に
より得た。牛角膜由来のケラタン硫酸１０ｇを１２０ｍ
ｌの０．１Ｍトリス塩酸緩衝液(pH 7.5)に溶解した。こ
の液にシュードモナス(Pseudomonas sp.)由来ケラタナ
ーゼ(生化学工業株式会社製)を１，０００ユニット加え
て３７℃で５０時間分解を行った。反応終了後、１．３
倍量のエタノールを加えて攪拌し、室温で一晩放置し
た。翌日、遠心分離（10,000rpm、２０分）により上清
と沈殿を分離し、上清を減圧濃縮し、濃縮液を凍結乾燥
して、乾燥物９ｇを得た。得られた凍結乾燥物を少量の
蒸留水に溶解し、セルロファインＧＣＬ−９０ｍ(チッ
ソ株式会社製)(4.5cmｘ125cm)を用い、食塩濃度０．２
Ｍ液を溶出溶媒としてゲルクロマトグラフィーを行い、
Ｋ２を含む画分を分取した。得られたＫ２画分を減圧濃
縮し、セルロファインＧＣＬ−２５ｍ(チッソ株式会社
製)(4.0cmｘ120cm)を用い蒸留水を溶出溶媒とし、ゲル
濾過クロマトグラフィーにより脱塩し、凍結乾燥した。

【０１９５】このＫ２を含む画分を少量の蒸留水に溶解
し、予め蒸留水で平衡化したムロマック 1x4(200-400)
(室町化学工業(株)製)(2.0cmｘ32cm)を用い、溶出溶媒
に食塩を用い、食塩濃度を直線的に０から２Ｍに上昇さ
せ、さらに精製したＫ２画分を分離溶出させた。得られ
たＫ２画分を減圧濃縮後、セルロファインＧＣＬ−２５
ｍ(4.0cmｘ120cm)を用いたゲル濾過クロマトグラフィー
により脱塩し、凍結乾燥し、Ｋ２の乾燥物を１．９ｇを
得た。

【０１９６】（１）安全性試験 １．マウスを用いた単回投与毒性試験 正常マウス（１群５匹）にＫ４またはＧ４Ｌ４を２，０
００ｍｇ／ｋｇの用量で単回静脈内投与し、１４日間一
般症状を観察した。

【０１９７】雌雄各群に死亡例は認められなかった。Ｋ
４またはＧ４Ｌ４投与により雌雄の全例に投与直後から
麻痺性歩行がみられたが、投与後約３分には全例が正常
に回復した。体重では投与翌日に雄の投与群に軽微な体
重減少がみられたが、その後は全例とも順調な体重増加
を示した。剖検では全例ともＫ４またはＧ４Ｌ４投与に
起因した異常は認められなかった。以上の結果から、Ｋ
４およびＧ４Ｌ４の単回静脈内投与における最小死亡用
量は２，０００ｍｇ／ｋｇ以上であると考えられる。従
って、Ｋ４およびＧ４Ｌ４の単回静脈内投与におけるＬ
Ｄ₅₀値は、雌雄ともに２，０００ｍｇ／ｋｇを超えるも
のである。

【０１９８】２．モルモットを用いた抗原性試験 モルモットの背部皮下にＫ４またはＧ４Ｌ４を単独、あ
るいは免疫補助剤であるフロイント完全アジュバント
（ＦＣＡ）との乳化物を３回注射して感作した。最終感
作から１２日後にＫ４またはＧ４Ｌ４を静脈内投与して
能動的全身性アナフィラキシー反応を惹起した。また、
陽性対照として卵白アルブミン（ＯＶＡ）についても同
様に試験した。

【０１９９】以上の結果を投与量とともに表１に示し
た。Ｋ４またはＧ４Ｌ４で惹起したモルモットにアナフ
ィラキシー反応は認められなかった。また試験系の陽性
対照である卵白アルブミンではアナフィラキシー反応が
認められた。以上の結果より、Ｋ４およびＧ４Ｌ４はモ
ルモットにおける能動的全身性アナフィラキシー反応を
誘発しないと考えられる。

【０２００】

【表１】

【０２０１】（２）薬効薬理試験 １．Ｃａ-イオノフォアーで誘発される血管透過性亢進
に対する効果の検討エーテル麻酔下でラットの背部を剃
毛後、２％ＤＭＳＯに溶解したＣａ-イオノフォアー（A
23187、和光純薬）溶液（１０μｇ／ｍｌ）０.１ｍｌを
皮内の１カ所に投与した。陰性対照(control)として２
％ＤＭＳＯ溶液０.１ｍｌを皮内の１カ所に投与した。
被験物質は、Ｃａ-イオノフォアー溶液に溶解し、その
０.１ｍｌを皮内の数カ所に投与した。直後に０.５％エ
バンスブルー１ｍｌを静脈内投与し、その３０分後にエ
ーテル麻酔下で放血致死した。皮膚を剥離し、エバンス
ブルー漏出部位をトレパンで打ち抜き、これを色素漏出
量の測定に供した。色素漏出量は Katayamaらの方法（M
icrobiol. Immunol., 22, 89-101 (1978)）に従って行
った。すなわち採取した皮膚に１ＮＫＯＨを加えて一晩
加水分解し、その後０.６ＮＨ₃ＰＯ₄含有アセトン溶液
（５:１３の割合で混合）を加えて中和し遠心分離後、
上清の吸光度（６２０ｎｍ）から色素漏出量を求めた。

【０２０２】Ｌ４、Ｌ４Ｌ４、Ｋ４およびＫ２を被験物
質としたときの結果を図９に示す。またＬ４およびＧ４
Ｌ４を被験物質としたときの結果を図１０に示す。

【０２０３】Ｌ４Ｌ４、Ｋ４およびＫ２は用量依存的に
血管透過性の亢進を抑制し、それぞれ２.５〜１０ｍｇ
／部位(site)、０.６３〜５ｍｇ／site、１.２５〜５ｍ
ｇ／siteの濃度で有意な抑制効果を示した。抑制効果は
Ｋ４が最も強く、次いでＫ２、Ｌ４Ｌ４の順であった。
また、Ｇ４Ｌ４も血管透過性亢進の有意な抑制効果を示
した。一方、Ｌ４は本モデルにおいて血管透過性の亢進
をほとんど抑制しなかった。この結果から、Ｋ４、Ｋ
２、Ｌ４Ｌ４およびＧ４Ｌ４は、血管透過性の亢進を抑
制することにより抗アレルギー作用を発揮することが示
唆される。特に、Ｋ４は優れた作用を発揮することが示
唆される。

【０２０４】本試験において、Ｌ４Ｌ４、Ｋ４、Ｋ２お
よびＧ４Ｌ４がＣａ-イオノフォアーによる血管透過性
の亢進を有意に抑制したことから、その活性発現にはＫ
２構造が重要で、さらにＫ４構造ではその作用が増すこ
とが示唆された。またＬ４は抑制効果を示さなかったこ
とから、本モデルではＬ４構造はあまり重要でないこと
が示唆された。一方、Ｌ４Ｌ４は２つのＬ４構造がβ-
（１-３）結合したものだが、Ｋ４構造を有しているた
め本モデルにおいて抑制効果が認められたものと推察さ
れた。Ｌ４Ｌ４、Ｋ４、Ｋ２およびＧ４Ｌ４は膜安定化
によるＣａ²⁺の細胞内への流入、もしくは脱顆粒化を阻
害したことにより、または肥満細胞から分泌されたヒス
タミン等を抑制したことにより、血管透過性の亢進を抑
制することが示唆された。

【０２０５】２．ＦＭＬＰ（N-ホルミル-Met-Leu-Phe）
刺激によるモルモット好中球Ｏ₂ ^-産生に対する効果の検
討 生理食塩液に溶解したグリコーゲンの０.２％水溶液を
高圧蒸気滅菌後、ハートレー系雌性モルモットの腹腔内
に２０ｍｌ投与した。１６時間後脱血死させ、ヘパリン
１０Ｕ／ｍｌを含む生理食塩液２０ｍｌを腹腔内に注入
し、腹腔浸出液を回収した。回収液を卓上遠心機を用い
て１０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、沈査に精製水
を加えて３０秒間溶血させ、２倍濃度のハンクス液で等
張にもどし、１０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。
沈査をハンクス液に再懸濁し、遠心分離の操作を２回繰
り返し好中球を得た。採取したモルモット好中球をハン
クス液に懸濁し、血球測定装置（Sysmex K-2000）を用
いて白血球数を測定し、ハンクス液で２×１０⁶個／ｍ
ｌに希釈したものを細胞浮遊液として実験に用いた。

【０２０６】細胞浮遊液１ｍｌと既知濃度の被験物質の
溶液１０μｌ（対照(control)としては、ケラタン硫酸
オリゴ糖を加えないものを用いた）とを混和し、３７℃
で１時間プレインキュベートした後、１.６ｍＭのチト
クロームＣ液５０μｌおよび０.１ｍＭのＦＭＬＰ１０
０μｌを順次加え混和した。これを３７℃で１０分間イ
ンキュベートし、氷冷して反応を停止し、３０００ｒｐ
ｍで５分間遠心分離後、上清の吸光度を波長５５０ｎｍ
で測定した。なお上記の操作はインキュベートを除いて
全て氷冷下で行った。

【０２０７】Ｌ４、Ｌ４Ｌ４、Ｋ４およびＫ２を被験物
質としたときの結果を図１１に示す。またＬ４およびＧ
４Ｌ４を被験物質としたときの結果を図１２に示す。

【０２０８】Ｌ４Ｌ４、Ｋ４およびＧ４Ｌ４は、０.０
１〜１ｍｇ／ｍｌの濃度で、ＦＭＬＰ刺激による好中球
からのＯ₂ ^-産生(O₂ ^- generation)を顕著に抑制した。１
ｍｇ／ｍｌでの抑制率は、それぞれ対照に対して５０.
６％、４４.７％および５７.１％であった。Ｌ４とＫ２
ではＯ₂ ^-産生抑制効果はほとんど認められなかった。こ
の結果から、Ｌ４Ｌ４、Ｋ４およびＧ４Ｌ４は、好中球
の活性酸素の産生を抑制することにより、抗炎症作用を
発揮することが示唆される。

【０２０９】本試験において、Ｌ４とＫ４は電荷、組成
式および構成糖が等しいにもかかわらず、Ｋ４で抑制効
果が認められ、さらにＬ４Ｌ４が抑制効果を示すのに対
して構成糖であるＬ４では活性は認められなかった。Ｌ
４Ｌ４、Ｋ４およびＧ４Ｌ４がＦＭＬＰ刺激によるモル
モット好中球Ｏ₂ ^-産生を有意に抑制したことから、その
活性発現にはＫ４構造が重要であることが示唆された。
またＫ２は抑制効果を示さなかったことから、本モデル
では硫酸化の程度が重要であることが示唆された。Ｋ４
構造を有するＬ４Ｌ４、Ｋ４およびＧ４Ｌ４はＧＴＰ結
合蛋白質あるいはホスホリパーゼＣ等の刺激伝達系を阻
害しているか、あるいはＦＭＬＰレセプターに直接拮抗
して作用を発現している可能性が示唆された。

【０２１０】

【発明の効果】本発明によれば、還元末端にガラクトー
ス残基を有するケラタン硫酸オリゴ糖を効率よく製造す
ることができる。特に、ガラクトース残基及び／又はＮ
−アセチルグルコサミン残基の６位のヒドロキシル基が
硫酸化されたケラタン硫酸オリゴ糖を提供できる。還元
末端に、６位のヒドロキシル基が硫酸化されたガラクト
ース残基を有するケラタン硫酸オリゴ糖等は、優れた薬
理効果を有し、安全で有効な新規医薬組成物を提供でき
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】ケラタン硫酸の構造から予想されるケラタン硫
酸二糖の構造を示す。

【図２】本発明のオリゴ糖の製造における出発材料の製
造方法の一例の概略を示す。

【図３】本発明のオリゴ糖の製造における出発材料の製
造方法の一例の概略を示す。

【図４】本発明のオリゴ糖の製造方法の一例の概略を示
す。

【図５】本発明のオリゴ糖の製造方法の一例の概略を示
す。

【図６】本発明のオリゴ糖の製造方法の一例の概略を示
す。

【図７】本発明のオリゴ糖の製造方法の一例の概略を示
す。

【図８】ケラタン硫酸オリゴ糖の構造を示す。

【図９】ケラタン硫酸オリゴ糖の血管透過性亢進に対す
る効果を示す。

【図１０】ケラタン硫酸オリゴ糖の血管透過性亢進に対
する効果を示す。

【図１１】ケラタン硫酸オリゴ糖の好中球Ｏ₂ ^-産生に対
する効果を示す。

【図１２】ケラタン硫酸オリゴ糖の好中球Ｏ₂ ^-産生に対
する効果を示す。

フロントページの続き (72)発明者 堀 祐輔 東京都杉並区桃井２−24−８ (72)発明者 多和田 明 埼玉県狭山市北入曽536−29 (72)発明者 望月 秀雄 東京都小平市仲町289−６ パレーシャル Ａ202 (72)発明者 飯田 真已 神奈川県横浜市港北区日吉５−15−15

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記一般式(1)で示される単糖と、下記
   一般式(2)で示される単糖とをグリコシド結合反応させ
   る工程を少なくとも含む、下記一般式(3)で示されるオ
   リゴ糖の製造方法。 【化１】 （式中、Ｒ¹およびＲ²はそれぞれ独立してアラルキル基
   を示し、Ｒ³はアシル基又はシリル基を示し、Ｒ⁴はアミ
   ノ基保護基を示し、Ｒ⁵は脱離基を示す。） 【化２】 （式中、Ｒ⁶およびＲ⁸はそれぞれ独立してアラルキル基
   を示し、Ｒ⁷はアシル基又はシリル基を示し、Ｒ⁹はアラ
   ルキル基、６−Ｏ−硫酸化Ｎ−アセチルグルコサミン残
   基、アルキル基、グリセロール残基、Ｏ−アルキルグリ
   セロール残基、Ｏ−アシルグリセロール残基、コレステ
   ロール残基、コレスタニル基、セラミド残基、リン脂質
   残基、ビオチン残基又はペプチド残基を示す。また、Ｚ
   は酸素原子又は−ＮＨＣＯ−を示す。） 【化３】 （式中、Ｒ¹⁰およびＲ¹¹はそれぞれ独立して水素原子ま
   たは−ＳＯ₃Ｍ（Ｍはプロトン又は１価のカチオンを示
   す。）を示し、Acはアセチル基を示す。また、Ｒ ¹²は水
   素原子、６−Ｏ−硫酸化Ｎ−アセチルグルコサミン残
   基、アルキル基、グリセロール残基、Ｏ−アルキルグリ
   セロール残基、Ｏ−アシルグリセロール残基、コレステ
   ロール残基、コレスタニル基、セラミド残基、リン脂質
   残基、ビオチン残基又はペプチド残基を示す。また、Ｚ
   は酸素原子又は−ＮＨＣＯ−を示す。）
2. 【請求項２】 Ｒ¹⁰およびＲ¹¹の少なくとも一方が−Ｓ
   Ｏ₃Ｍ（Ｍはプロトン又は１価のカチオンを示す。）で
   あり、上記一般式(1)で示される単糖と、上記一般式(2)
   で示される単糖とをグリコシド結合反応させる工程の後
   に、Ｒ³およびＲ⁷の少なくとも一方を水素原子に置換
   し、次いで当該水素原子を−ＳＯ₃Ｍに置換する工程を
   含むことを特徴とする、請求項１記載の製造方法。
3. 【請求項３】 上記一般式(1)〜(3)が、それぞれ下記式
   (4)〜(6)で示されることを特徴とする、請求項２記載の
   製造方法。 【化４】 （式中、Bnはベンジル基を、Ｒ¹³はアセチル基又はレブ
   リノイル基を、Phthはフタロイル基を、Ｘはハロゲン原
   子を示す。） 【化５】 （式中、Bnはベンジル基を、Ｒ¹⁴はベンジル基、６−Ｏ
   −硫酸化Ｎ−アセチルグルコサミン残基、アルキル基、
   グリセロール残基、Ｏ−アルキルグリセロール残基、Ｏ
   −アシルグリセロール残基、コレステロール残基、コレ
   スタニル基、セラミド残基、リン脂質残基、ビオチン残
   基又はペプチド残基を示す。また、Ｚは酸素原子又は−
   ＮＨＣＯ−を示す。Pivはピバロイル基を示す。） 【化６】 （式中、Acはアセチル基を、Ｍはプロトン又は１価のカ
   チオンを示す。また、Ｒ ¹⁵は水素原子、６−Ｏ−硫酸化
   Ｎ−アセチルグルコサミン残基、アルキル基、グリセロ
   ール残基、Ｏ−アルキルグリセロール残基、Ｏ−アシル
   グリセロール残基、コレステロール残基、コレスタニル
   基、セラミド残基、リン脂質残基、ビオチン残基又はペ
   プチド残基を示す。また、Ｚは酸素原子又は−ＮＨＣＯ
   −を示す。）
4. 【請求項４】 上記一般式(1)〜(3)が、それぞれ下記式
   (7)〜(9)で示されることを特徴とする、請求項２記載の
   製造方法。 【化７】 （式中、Bnはベンジル基を、Levはレブリノイル基を、P
   hthはフタロイル基を、Ｘはハロゲン原子を示す。） 【化８】 （式中、Bn、Ｒ¹⁴及びＺは前記と同義である。また、Ph
   はフェニル基を、Meはメチル基を示す。） 【化９】 （式中、Ｒ¹⁵及びＺは前記と同義である。また、Acはア
   セチル基を、Ｍはプロトン又は１価のカチオンを示
   す。）
5. 【請求項５】 上記一般式(1)〜(3)が、それぞれ下記式
   (10)〜(12)で示されることを特徴とする、請求項２記載
   の製造方法。 【化１０】 （式中、Bnはベンジル基を、Levはレブリノイル基を、P
   hthはフタロイル基を、Ｘはハロゲン原子を示す。） 【化１１】 （式中、Bn、Ｒ¹⁴及びＺは前記と同義である。また、Ph
   はフェニル基を、Meはメチル基を示す。） 【化１２】 （式中、Ｒ¹⁵及びＺは前記と同義である。また、Acはア
   セチル基を、Ｍはプロトン又は１価のカチオンを示
   す。）
6. 【請求項６】 下記一般式(13)で示されるオリゴ糖。 【化１３】 （式中、Ｒ¹⁶およびＲ¹⁷はそれぞれ独立して水素原子又
   は−ＳＯ₃Ｍ（Ｍはプロトン又は１価のカチオンを示
   す）を示し、Acはアセチル基を示す。またＲ¹⁸は水素原
   子、６−Ｏ−硫酸化Ｎ−アセチルグルコサミン残基、ア
   ルキル基、グリセロール残基、Ｏ−アルキルグリセロー
   ル残基、Ｏ−アシルグリセロール残基、コレステロール
   残基、コレスタニル基、セラミド残基、リン脂質残基、
   ビオチン残基又はペプチド残基を示す。また、Ｚは酸素
   原子又は−ＮＨＣＯ−を示す。ただし、Ｒ¹⁶およびＲ¹⁷
   がいずれも水素原子であり、かつＺが酸素原子でＲ¹⁸が
   水素原子又はコレスタニル基であるもの、並びにＲ¹⁶が
   −ＳＯ₃Ｍ（Ｍはプロトン又は１価のカチオンを示す）
   でありかつＺが酸素原子でＲ¹⁷とＲ¹⁸がいずれも水素原
   子であるものを除く。）
7. 【請求項７】 Ｒ¹⁶およびＲ¹⁷がいずれも−ＳＯ₃Ｍ
   （Ｍはプロトン又は１価のカチオンを示す）である、請
   求項６記載のオリゴ糖。
8. 【請求項８】 Ｒ¹⁶が水素原子であり、かつＲ¹⁷が−Ｓ
   Ｏ₃Ｍ（Ｍはプロトン又は１価のカチオンを示す）であ
   る、請求項６記載のオリゴ糖。
9. 【請求項９】 Ｒ¹⁸が水素原子、６−Ｏ−硫酸化Ｎ−ア
   セチルグルコサミン残基、アルキル基、Ｏ−アルキルグ
   リセロール残基又はコレスタニル基であり、かつＺが酸
   素原子である、請求項６〜８のいずれか１項記載のオリ
   ゴ糖。
10. 【請求項１０】 下記一般式(13)で示されるオリゴ糖又
    はその薬学的に許容される塩を有効成分とする医薬。 【化１４】 （式中、Ｒ¹⁶およびＲ¹⁷はそれぞれ独立して水素原子又
    は−ＳＯ₃Ｍ（Ｍはプロトン又は１価のカチオンを示
    す）を示し、Acはアセチル基を示す。またＲ¹⁸は水素原
    子、６−Ｏ−硫酸化Ｎ−アセチルグルコサミン残基、ア
    ルキル基、グリセロール残基、Ｏ−アルキルグリセロー
    ル残基、Ｏ−アシルグリセロール残基、コレステロール
    残基、コレスタニル基、セラミド残基、リン脂質残基、
    ビオチン残基又はペプチド残基を示す。また、Ｚは酸素
    原子又は−ＮＨＣＯ−を示す。ただし、Ｒ¹⁶およびＲ¹⁷
    がいずれも水素原子であり、かつＺが酸素原子でＲ¹⁸が
    水素原子又はコレスタニル基であるものを除く。）
11. 【請求項１１】 下記一般式(14)で示されるオリゴ糖又
    はその薬学的に許容される塩を有効成分とする抗アレル
    ギー剤。 【化１５】 （式中、Ｍはプロトン又は１価のカチオンを示し、Ｒ¹⁷
    は水素原子又は−ＳＯ₃Ｍ（Ｍはプロトン又は１価のカ
    チオンを示す）を示し、Acはアセチル基を示す。またＲ
    ¹⁸は水素原子、６−Ｏ−硫酸化Ｎ−アセチルグルコサミ
    ン残基、アルキル基、グリセロール残基、Ｏ−アルキル
    グリセロール残基、Ｏ−アシルグリセロール残基、コレ
    ステロール残基、コレスタニル基、セラミド残基、リン
    脂質残基、ビオチン残基又はペプチド残基を示す。ま
    た、Ｚは酸素原子又は−ＮＨＣＯ−を示す。）
12. 【請求項１２】 請求項７記載のオリゴ糖又はその薬学
    的に許容される塩を有効成分とする抗炎症剤。