JPH05178876A - 抗炎症・抗アレルギー作用を有するオリゴ糖誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】一般式（Ｉ） 【化１】 （式中、Ｒ¹は水素原子、ガラクトサミン誘導体または
特定の基を表し、Ｒ²からＲ⁸は同一または異なって水素
原子または特定の基を表し、Ｒ⁹は、水素原子、グルク
ロン酸誘導体または特定の基を表し、ｎは０から４の整
数を表す）で表される構成単糖単位２〜８個からなるオ
リゴ糖、該オリゴ糖の塩、溶媒和物または塩の溶媒和
物、およびそれらを有効成分として含有する抗アレルギ
ー剤、抗炎症剤またはヒアルロニダーゼ阻害剤。 【効果】本発明のオリゴ糖誘導体は、抗アレルギー作
用、抗炎症作用およびヒアルロニダーゼ阻害作用を有
し、医薬として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、抗炎症・抗アレルギー
作用を有するオリゴ糖誘導体である、構成単糖単位２〜
８個からなるグルクロン酸誘導体およびガラクトサミン
誘導体を有するオリゴ糖、該オリゴ糖の塩、溶媒和物ま
たは塩の溶媒和物に関してであり、さらにそれを有効成
分とするヒアルロニダーゼ阻害剤、アレルギー性疾患剤
および抗炎症剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】既存の抗アレルギー剤、抗炎症剤として
は、例えば、抗ヒスタミン剤であるジフェンヒドラミ
ン、クロルフェニラミンなど、気管支喘息治療剤である
クロモグリク酸ナトリウム、トラニラスト、副腎皮質ス
テロイド剤であるヒドロコルチゾン、プレドニゾロンな
ど、非ステロイド抗炎症剤であるインドメタシン、メフ
ェナム酸などがある。しかし、これらの薬剤は、臨床上
問題となる副作用を有している。例えば抗ヒスタミン剤
は鎮静作用、眠気、口渇、悪心および嘔吐などの副作用
を示すことが知られており、副腎皮質ステロイドは副腎
皮質機能障害などの強い副作用を示すことが知られてい
る。副作用が少なく、活性の強い薬物が望まれているの
が現状である。

【０００３】近年、既存の抗アレルギー剤であるクロモ
グリク酸ナトリウム（以下、ＤＳＣＧと略す）、トラニ
ラスト、既存の抗炎症薬である、アスピリン、インドメ
タシンなどにヒアルロニダーゼ阻害作用があり、その阻
害作用が治療効果の一翼を担っていることが示唆されて
いる［ケミカル ファーマシチカル ブリテン（Ｃｈｅ
ｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．）３３巻、６４２頁（１９
８５年）および炎症４巻、４３７頁（１９８４年）］。
従って、ヒアルロニダーゼの活性を阻害する化合物を探
究することは、新しい抗アレルギー作用、抗炎症作用を
有する化合物を見いだす一つの指標となり得るものであ
る。

【０００４】ヒアルロニダーゼは、ヒアルロン酸を加水
分解する作用を有する酵素である。ヒアルロン酸は、ム
コ多糖の一種で、Ｄ−グルクロン酸とＮ−アセチル−Ｄ
−グルコサミンから構成され、動物組織の細胞間質に多
く、関節液、皮膚その他の結合組織に存在し、微生物や
毒物の侵入、伝播および癌細胞の転移の防止などに役だ
っていると考えられている。また、ヒアルロン酸は脊椎
動物の卵細胞の外膜にも存在し、授精に際してヒアルロ
ニダーゼで分解されると、精子の侵入が可能となる。

【０００５】一方ヒアルロニダーゼは、起炎酵素の一種
であると考えられており、炎症およびアレルギー、特に
Ｉ型アレルギー反応に関与し、肥満細胞からの脱顆粒反
応を支配する酵素であるともいわれている。また、哺乳
動物では精子に存在し、授精に関与していることが知ら
れている。また、ある種の病原菌は、ヒアルロニダーゼ
を分泌し、結合組織のヒアルロン酸を分解しながら組織
に侵入することが知られている。従って、ヒアルロニダ
ーゼを阻害する化合物は、抗アレルギー作用、抗炎症作
用をはじめとして、例えば、避妊作用、癌転移抑制およ
び抗菌作用などの分野での利用が期待できる。

【０００６】本発明は、ヒアルロニダーゼ阻害作用、抗
アレルギー作用および抗炎症作用を有し、医薬として有
用なオリゴ糖に関するものであり、関連する先行技術と
しては次のようなものがある。バイオケミカル アンド
バイオフィジカル リサーチ コミュニケーション
（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ
ｕｎ）２５巻、２３９頁（１９６６年）は、ＮＭＲによ
る糖のコンホメーション同定に関するものであり、グル
クロン酸（以下、適宜ＧｌｃＡと略す）およびＮ−アセ
チルガラクトサミン（以下、適宜ＧａｌＮＡｃと略す）
からなるＧｌｃＡ（β１−３）ＧａｌＮＡｃ（β１−
４）ＧｌｃＡ（β１−３）ＧａｌＮＡｃが開示されてい
るが、医薬としての用途の記載はない。カルボハイドレ
ート リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．）１５
巻、３００頁（１９７０年）は、ＧｌｃＡ（β１−３）
ＧａｌＮＡｃの記載があるが、塩基性条件による加水分
解に関するもので、医薬としての用途の記載はない。西
ドイツ特許ＤＥ２５２１７６５には、Ｄ−グルクロン酸
が鼻および胃などの粘膜の炎症および二次的に生じるア
レルギー性皮膚炎、乾癬などに有効であるとの記載があ
るが、具体的な薬理データの開示はない。さらに、単糖
のみの開示であり、オリゴ糖に関する記載はない。フラ
ンス特許ＦＲ２４４９４５２には、抗アレルギー、抗炎
症および抗ヒスタミン作用を有するガラクツロン酸メチ
ルの記載があるが、具体的な薬理データの開示はない。
また、単糖のみの開示であり、オリゴ糖に関する記載は
ない。特表昭５９−５０１９０６号公報には、血栓症、
動脈硬化症などに有効なガラクトサミンとウロン酸の交
互配列を有するオリゴ糖およびその製法が記載されてい
るが、ヒアルロニダーゼ阻害作用、抗アレルギー作用お
よび抗炎症作用に関する記載はない。特開昭６２−２７
４０２号公報には、ガラクトサミンとウロン酸の交互配
列を有するグリコサミノグリカンの硫酸化方法および該
硫酸化グリコサミノグリカンのうち、特に、構成単糖単
位数が８以下の物質が、糸球体腎炎、リューマチ様関節
炎及びアレルギー症状として現れるある種の遅発感覚過
敏性症状のごとき特定形態の免疫不均衡に起因する障害
の治療に有用である旨の記載がある。しかしながら、ア
レルギー性疾患モデルに対する有効性、ヒアルロニダー
ゼ阻害作用などについては開示がない。また、硫酸化さ
れていないグリコサミノグリカンについては、原料とし
ての記載があるのみで、その薬理活性についても何も開
示がない。特開昭６２−３６３９４号公報には、育毛剤
などとして有効なエステル化ウロン酸とヘキソサミンの
交互配列を有する偶数オリゴ糖の記載があるが、奇数の
オリゴ糖については記載がなく、また、ヒアルロニダー
ゼ阻害作用、抗アレルギー作用および抗炎症作用の記載
はない。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、抗炎
症・抗アレルギー作用を有するオリゴ糖誘導体を提供す
るものである。さらに本発明は、該オリゴ誘導体を少な
くとも１つの有効成分とするヒアルロニダーゼ阻害剤、
アレルギー性疾患治療剤および抗炎症剤を提供するもの
である。

【０００８】

【課題を解決するための手段】前記課題を解決するため
に、本発明者らは化学合成したフラグメントおよび各種
ムコ多糖を切断、単離したフラグメントの性状および薬
理作用について検討した結果、本発明のオリゴ糖誘導体
に、強力な抗アレルギー作用、抗炎症作用およびヒアル
ロニダーゼ阻害作用を見いだし、本発明を完成するに至
った。

【０００９】すなわち、本発明の第１態様は、下記式
（Ｉ）で表される構成単糖単位２〜８個からなる、グル
クロン酸誘導体およびガラクトサミン誘導体を有するオ
リゴ糖、該オリゴ糖の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物
を提供するものである。式（Ｉ）

【化６】 ［式（Ｉ）中、Ｒ¹ は水素原子、保護基または下記式
（ＩＩ）を表す。（ただし、Ｒ¹ が水素原子または保護
基である場合、ＯＲ¹ はグルクロン酸誘導体のＣＯＯＲ
⁴ に対してトランス結合またはシス結合であってもよ
い。また、Ｒ¹ が式（ＩＩ）である場合、式（ＩＩ）

【化７】 式（ＩＩ）中、Ｒ¹⁰、Ｒ¹²およびＲ¹³は同一または異な
って水素原子または保護基を表し、Ｒ¹¹は、アジド基ま
たは下記式（ＩＩＩ）を表す。式（ＩＩＩ）

【化８】 式（ＩＩＩ）中、Ｒ¹⁴およびＲ¹⁵は、同一または異なっ
て水素原子または保護基を表す）：式（Ｉ）中、Ｒ² か
らＲ⁸ は同一または異なって水素原子または保護基を表
す：式（Ｉ）中、Ｒ⁹は、水素原子、保護基または下記
式（ＩＶ）を表す。式（ＩＶ）

【化９】 （式（ＩＶ）中、Ｒ¹⁶からＲ¹⁹は同一または異なって水
素原子または保護基を表す）：式（Ｉ）中、ｎは０から
４の整数を表す。（ただし、ｎが０のとき、Ｒ¹は式
（ＩＩ）で表される基であり、Ｒ⁹は式（ＩＶ）で表さ
れる基である。ｎが４のとき、Ｒ¹およびＲ⁹は同一また
は異なって水素原子または保護基である。）：式（Ｉ）
〜（ＩＶ）中、保護基は互いに同一または異なっていて
もよく、置換されていてもよい炭素原子数１から８の直
鎖または分枝鎖のアルキル、置換されていてもよい炭素
原子数２から８の直鎖または分枝鎖のアルケニル、置換
されていてもよい炭素原子数１から８の直鎖または分枝
鎖のアシル、置換されていてもよい芳香族アシル、また
は、置換されていてもよい芳香族アルキルである。また
さらに、Ｒ¹¹を除くＲ¹ からＲ¹⁹の任意の保護基２つが
一緒になって、置換されていてもよい炭素原子数３から
８のアルキリデン、置換されていてもよい炭素原子数３
から８の環状アルキリデン、置換されていてもよいベン
ジリデン、または、置換されていてもよいフタロイルで
ある。］

【００１０】特に、前記構成単糖単位が２、３または４
個からなる場合に好適である。

【００１１】本発明の第２態様は、第１態様に記載のグ
ルクロン酸誘導体およびガラクトサミン誘導体を有する
オリゴ糖、該オリゴ糖の塩、溶媒和物または塩の溶媒和
物を少なくとも１つの有効成分とするヒアルロニダーゼ
阻害剤を提供する。

【００１２】さらに、本発明の第３態様は、第１態様に
記載のグルクロン酸誘導体およびガラクトサミン誘導体
を有するオリゴ糖、該オリゴ糖の塩、溶媒和物または塩
の溶媒和物を少なくとも１つの有効成分とするアレルギ
ー性疾患治療剤および抗炎症剤を提供する。

【００１３】以下、本発明の第１態様について詳しく説
明する。

【００１４】本発明の構成単糖単位２〜８個からなる、
グルクロン酸誘導体およびガラクトサミン誘導体を有す
るオリゴ糖は、下記式（Ｉ）で表される化合物である。

【００１５】式（Ｉ）

【化１０】 ［式（Ｉ）中、Ｒ¹ は水素原子、保護基または下記式
（ＩＩ）を表す。（ただし、Ｒ¹ が水素原子または保護
基である場合、ＯＲ¹ はグルクロン酸誘導体のＣＯＯＲ
⁴ に対してトランス結合またはシス結合であってもよ
い。また、Ｒ¹ が式（ＩＩ）である場合、

【００１６】式（ＩＩ）

【化１１】 式（ＩＩ）中、Ｒ¹⁰、Ｒ¹²およびＲ¹³は同一または異な
って水素原子または保護基を表し、Ｒ¹¹は、アジド基ま
たは下記式（ＩＩＩ）を表す。

【００１７】式（ＩＩＩ）

【化１２】 式（ＩＩＩ）中、Ｒ¹⁴およびＲ¹⁵は、同一または異なっ
て水素原子または保護基を表す）：式（Ｉ）中、Ｒ² か
らＲ⁸ は同一または異なって水素原子または保護基を表
す：式（Ｉ）中、Ｒ⁹は、水素原子、保護基または下記
式（ＩＶ）を表す。

【００１８】式（ＩＶ）

【化１３】 （式（ＩＶ）中、Ｒ¹⁶からＲ¹⁹は同一または異なって水
素原子または保護基を表す）：

【００１９】式（Ｉ）中、ｎは０から４の整数を表す。
（ただし、ｎが０のとき、Ｒ¹は式（ＩＩ）で表される
基であり、Ｒ⁹は式（ＩＶ）で表される基である。ｎが
４のとき、Ｒ¹およびＲ⁹は同一または異なって水素原子
または保護基である。）：式（Ｉ）〜（ＩＶ）中、保護
基は互いに同一または異なっていてもよく、置換されて
いてもよい炭素原子数１から８の直鎖または分枝鎖のア
ルキル、置換されていてもよい炭素原子数２から８の直
鎖または分枝鎖のアルケニル、置換されていてもよい炭
素原子数１から８の直鎖または分枝鎖のアシル、置換さ
れていてもよい芳香族アシル、または、置換されていて
もよい芳香族アルキルである。またさらに、Ｒ¹¹を除く
Ｒ¹ からＲ¹⁹の任意の保護基２つが一緒になって、置換
されていてもよい炭素原子数３から８のアルキリデン、
置換されていてもよい炭素原子数３から８の環状アルキ
リデン、置換されていてもよいベンジリデン、または、
置換されていてもよいフタロイルである。］

【００２０】すなわち、本発明のオリゴ糖は、式（Ｉ）
〜（ＩＶ）で表され、下記式（ＶＩ）で示されるＤ−ガ
ラクトサミン誘導体と下記式（ＶＩＩ）で示されるＤ−
グルクロン酸誘導体が交互に直鎖状に結合した構造から
なるオリゴ糖である。具体例としては、２糖類、３糖
類、４糖類をはじめとして、５糖類、６糖類、７糖類、
８糖類がある。

【００２１】式（ＶＩ）

【化１４】 ［式（ＶＩ）中、Ｎ¹ は窒素含有基を表し、Ｒ′は水素
原子または保護基を表す。］

【００２２】式（ＶＩＩ）

【化１５】 ［式（ＶＩＩ）中、Ｒ′は水素原子または保護基を表
す。］式（Ｉ）において、ｎは０から４の整数を表す
が、ｎが０のときＲ¹ は式（ＩＩ）で表される基であ
り、Ｒ⁹ は式（ＩＶ）で表される基である。すなわち、
下記式（ＶＩＩＩ）で表されるオリゴ糖である。

【００２３】式（ＶＩＩＩ）

【化１６】

【００２４】本発明で言う保護基とは、セオドラ ダブ
リュー グリーン（Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎ
ｅ）著、プロテクティブ グループ イン オルガニッ
クシンセシス（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ
ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）（第２
版、１９９１年）に表されている各種の保護基を含むも
のである。

【００２５】上記式（Ｉ）〜（ＩＶ）中で示される保護
基は、置換されていてもよい炭素原子数１から８の直鎖
または分枝鎖のアルキルとしては例えば、メチル、エチ
ル、プロピル、イソプロピル、ブチル、第三級ブチル、
ペンチル、オクチル、メトキシメチル（ＭＯＭ）、第三
級ブチルチオメチル、１−エトキシエチル、シロキシメ
チルまたは２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）など
を表し、置換されていてもよい炭素原子数２から８の直
鎖または分枝鎖のアルケニルとしては例えば、エテニ
ル、１−プロペニル、２−プロペニル、ブテニルまたは
オクテニルなどを表し、置換されていてもよい炭素原子
数１から８の直鎖または分枝鎖のアシルとしては例え
ば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、バ
レリルまたはピバロイル、またはハロゲン化アシルなど
を表し、ハロゲン化アシルとしては例えば、クロロアセ
チル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフ
ルオロアセチルなどを表し、置換されていてもよい芳香
族アシルとしては例えば、ベンゾイル、パラクロロベン
ゾイルなどを表し、置換されていてもよい芳香族アルキ
ルとしては例えば、置換されていてもよいベンジル、置
換されていてもよいジフェニルメチルまたは置換されて
いてもよいトリフェニルメチルなどを表し、置換されて
いてもよいベンジルとしては例えば、４−メトキシベン
ジルなどを表す。さらに、式（Ｉ）〜（ＩＶ）中で示さ
れる保護基は、Ｒ¹¹を除くＲ¹ からＲ¹⁹の任意の保護基
２つが一緒になって、１つの保護基を表してもよく、そ
の時、保護基は、置換されていてもよい炭素原子数３か
ら８のアルキリデンとしては例えば、プロピリデン、ブ
チリデンまたはオクチリデンなどを表し、置換されてい
てもよい炭素原子数３から８の環状アルキリデンとして
は例えば、シクロペンチリデン、シクロヘキシリデンま
たはシクロヘブチリデンなどを表し、加えて、置換され
ていてもよいベンジリデンまたは置換されていてもよい
フタロイルなどを表す。水酸基の保護基としては置換さ
れていてもよい炭素原子数１から８の直鎖または分枝鎖
のアシル、置換されていてもよい芳香族アルキル、置換
されていてもよい炭素原子数２から８の直鎖または分枝
鎖のアルケニルまたは置換されていてもよいベンジリデ
ンなどが好ましく、さらに好ましくはアセチル、ベンジ
ル、１−プロペニルまたはベンジリデンなどを表し、ア
ミノ基の保護基としては、置換されていてもよい炭素原
子数１から８の直鎖または分枝鎖のアシルまたは置換さ
れていてもよいフタロイルなどが好ましく、さらに好ま
しくはアセチルまたはフタロイルなどを表し、カルボキ
シル基の保護基としては、置換されていてもよい炭素原
子数１から８の直鎖または分枝鎖のアルキルまたは置換
されていてもよい芳香族アルキルなどが好ましく、さら
に好ましくは、メトキシメチル、メチルまたはジフェニ
ルメチルなどを表す。上記保護基は、同一のオリゴ糖中
で互いに同一でも異なっていてもよく、任意に選ばれ
る。

【００２６】本発明のオリゴ糖は、構成単糖単位、すな
わち糖鎖を構成する六員環構造をもつ糖残基が２〜８個
であるオリゴ糖であるが、構成単糖単位は２、３および
４個である場合が好ましい。

【００２７】具体例として、構成単糖単位が２個である
１−プロペニル ４−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−ア
セチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−ガ
ラクトピラノシル）−２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−α−
Ｄ−グルコピランウロン酸メチルエステル、１−プロペ
ニル ４−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２
−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−ガラクトピラ
ノシル）−２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコ
ピランウロン酸ジフェニルメチルエステルおよびＯ−β
−Ｄ−グルコピランウロノシル−（１→３）−２−アセ
タミド−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノース；［Ｇ
ｌｃＡ（β１−３）ＧａｌＮＡｃ］Ｎ−アセチルコンド
ロシン等があり、さらに、構成単糖単位が４個であるＯ
−β−Ｄ−グルコピランウロノシル−（１→３）−Ｏ−
２−アセタミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラ
ノシル−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピランウロノ
シル−（１→３）−２−アセタミド−２−デオキシ−Ｄ
−ガラクトピラノース；［ＧｌｃＡ（β１−３）Ｇａｌ
ＮＡｃ（β１−４）−ＧｌｃＡ（β１−３）ＧａｌＮＡ
ｃ］等がある。

【００２８】また、本発明のオリゴ糖は前記式（Ｉ）に
おいて、Ｒ¹ が前記式（ＩＩ）で表される基であり、Ｒ
² からＲ⁴ およびＲ⁶ からＲ⁸ が水素原子であり、Ｒ⁵
がアセチル基であり、Ｒ⁹ が水素原子または前記式（Ｉ
Ｖ）で表される基であり、かつ、前記式（ＩＩ）におい
て、Ｒ¹⁰、Ｒ¹²、Ｒ¹³が水素原子であり、かつ、前記式
（ＩＩＩ）において、Ｒ¹⁴がアセチル基であり、Ｒ¹⁵が
水素原子であり、かつ、前記式（ＩＶ）において、Ｒ¹⁶
からＲ¹⁹が水素原子である場合、すなわち、下記式（Ｉ
Ｘ）または（Ｘ）で表されるオリゴ糖である場合に好適
である。

【００２９】式（ＩＸ）

【化１７】 ［式（ＩＸ）中、Ａｃはアセチル基を表す。ｎは式
（Ｉ）で定義した通りである。］

【００３０】式（Ｘ）

【化１８】 ［式（Ｘ）中、Ａｃはアセチル基を表し、ｎは式（Ｉ）
で定義した通りである。］

【００３１】また本発明のオリゴ糖は、前記式（Ｉ）に
おいて、Ｒ⁹ が水素原子または保護基であり、ｎが１で
ある場合、すなわち下記式（XI）で表されるオリゴ糖で
ある場合、好適である。

【００３２】式（XI）

【化１９】 ［式（XI）中、Ｒ¹ からＲ⁹ は前記式（Ｉ）に定義した
通りである。］

【００３３】さらにこの場合、式（XI）において、Ｒ¹
が水素原子または下記式（Ｖ）で表される基であり、Ｒ
² からＲ⁴ およびＲ⁶ からＲ⁹ が水素原子であり、Ｒ⁵
がアセチル基である場合、すなわち下記式（XII ）また
は（XIII）で表されるオリゴ糖である場合、特に好適で
ある。式（XII ）は４−Ｏ−（２−アセタミド−２−デ
オキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−Ｄ−グルコピ
ランウロン酸；［ＧａｌＮＡｃ（β１−４）ＧｌｃＡ］
を表し、式（XIII）はＯ−２−アセタミド−２−デオキ
シ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−Ｏ−β
−Ｄ−グルコピランウロノシル−（１→３）−２−アセ
タミド−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノース；［Ｇ
ａｌＮＡｃ（β１−４）ＧｌｃＡ（β１−３）ＧａｌＮ
Ａｃ］である。

【００３４】式（XII ）

【化２０】

【００３５】式（XIII）

【化２１】

【００３６】本発明のオリゴ糖は、金属イオン、例え
ば、ナトリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウ
ムイオン等や、アンモニウムイオン、ハロゲン化イオ
ン、例えば塩素イオン、臭素イオン等や、錯イオン、例
えば六シアノ鉄（ＩＩＩ）イオン等との塩であってもよ
い。またさらに、該オリゴ糖および該オリゴ糖の塩は、
溶媒例えば水、有機溶媒、緩衝液などとの溶媒和物であ
ってもよい。本発明の第１態様のオリゴ糖は、強力なヒ
アロニダーゼ阻害作用を示す特徴がある。さらに、ヒス
タミン遊離抑制作用、アナフィラキシー気道収縮抑制作
用、受動皮膚アナフィラキシー（ＰＣＡ）反応抑制作用
などが認められる。

【００３７】以下に本発明のオリゴ誘導体の製造方法の
一例を述べるが、さらなる具体例は実施例で記載する。
本発明のオリゴ誘導体は、単糖を出発原料として、以下
のような方法で、化学的に合成することができる。オリ
ゴ糖の合成に用いられる化合物は、Ｄ−ガラクトサミン
構造を有する下記式（XIV ）：

【００３８】式（XIV ）

【化２２】 （式（XIV ）中、Ｒは脱離基またはＯＲ′で表される基
を表し、Ｒ′は水素原子または保護基を表し、Ｎ¹ は窒
素含有基を表す）で表される基本単位およびＤ−グルク
ロン酸構造を有する、下記式（XV）：

【００３９】式（XV）

【化２３】 （式中（XV）中、Ｒは脱離基またはＯＲ′で表される基
を表し、Ｒ′は水素原子または保護基を表す）で表され
る基本単位とするものであり、これら基本単位を適宜反
応させ、必要に応じてさらに適宜処理することにより本
発明のオリゴ糖が合成される。

【００４０】合成に用いる基本単位のいずれか一つはア
ルコールであり、このアルコール官能基の水酸基が式
（XIV ）の場合には３、４または６位のいずれかに存在
し、式（XV）の場合には２、３または４位のいずれかに
存在している。残りの基本単位の一方は、活性化された
アノマー炭素を有している。これら２つの基本単位を用
いることにより、本発明の構造を有するグリコシル結合
を形成させ、二糖類を得ることができる。同様にして、
さらに式（XIV ）の化合物または式（XV）の化合物を適
宜反応させることにより、本発明の構成単糖単位数を有
するオリゴ糖を合成することができる。式（XIV ）中の
窒素含有基Ｎ¹ は、好ましくはＮ−フタルイミドもしく
はアジド基を有しているか、または、アミンの官能基前
駆体またはアミン誘導体、特に、Ｎ−アシル、より詳細
にはＮ−アセチル等を有している方がよい。式（XV）の
化合物のカルボキシル基は、グリコシル反応の際にはア
ルキル、置換アルキル、置換されていてもよい芳香族ア
ルキル等で保護されていることが望ましい。また、この
カルボキシル基は、中性糖をグリコシル化に用い、グリ
コシル結合を形成後、第一級アルコールの選択的脱保護
および酸化によっても得ることができるカルボキシル基
でもよい。

【００４１】基本単位のうち、グリコシル反応に関与す
る、活性化されたアノマー炭素を有する基本単位は、そ
のアノマー炭素以外のすべての位置が、水酸基、アミノ
基、カルボキシル基またはこれらの前駆体を保持し、こ
れらが同一または異なる保護基によって保護されている
ものを用いる。また一方、グリコシル結合形成に関与す
る水酸基を有する基本単位は、その水酸基以外のすべて
の位置が水酸基、アミノ基、カルボキシル基またはこれ
らの前駆体を保持し、これらが同一または異なる保護基
によって保護されているものを用いる。グリコシル反応
に用いるアノマー炭素の活性化された基本単位には、ハ
ロゲン化グリコシル誘導体、イミドエステル糖誘導体、
１，２−Ｏ−（１−アルコキシアルキリデン）糖誘導
体、１−Ｏ−アセチル誘導体、１−Ｏ−スルホニル糖誘
導体、グリカール糖誘導体等があり、これらは常法によ
り合成することができ、もう一方の基本単位の水酸基
と、無水条件下、縮合反応を行うことができる。ハロゲ
ン化糖誘導体とアルコールとの間の縮合反応は、コーニ
ングス−クノール（Ｋｏｅｎｉｇｓ−Ｋｎｏｒｒ）法が
有利であり、最も適している。ハロゲン化物としては、
臭化物または塩化物が適している。グリコシル反応の際
の溶媒は、有機溶媒で処理し、特にジクロロエタン、ジ
クロロメタン、ニトロメタン等が適している。

【００４２】使用する触媒は、一般に、銀塩または水銀
塩、例えばトリフルオロメタンスルホン酸銀（銀トリフ
ラート）、炭酸銀、酸化銀、臭化水銀、シアン化水銀を
使用する。また、２，４，６−コリジンのような陽子受
容体も使用され、存在し得る水および／または形成され
たハロゲン化水素酸の捕捉体、例えばモレキュラーシー
ブ４Ａも使用される。グリコシル反応は、０℃以下で、
窒素またはアルゴンのような不活性ガス雰囲気下に、２
種の基本単位を混合し、室温〜４０℃の範囲で反応させ
るのが適当である。これらの条件に従い、２種の基本単
位を化学量論に従って縮合し、グリコシル化生成体を得
ることができる。得られたグリコシル化生成体は、好ま
しい条件下で脱保護もしくはアミノ基、カルボキシル基
の前駆体をアミノ基、カルボキシル基に変換し、目的と
するオリゴ糖を得る。オリゴ糖の遊離のカルボキシル基
は陽イオン交換樹脂を用いて容易に塩化することができ
る。一般的にはナトリウム塩であるが、カリウム、リチ
ウム、マグネシウムおよびカルシウム等の塩の形成も可
能である。脱離基とは、縮合反応により脱離する基を表
し、例えば、ハロゲン原子、アセチル基、トリフリル基
などを表す。水酸基およびカルボキシル基の保護に使用
する保護基については、前述したが、一般にエーテル、
アセタール、環状アセタールおよびエステル等が用いら
れる。具体例として、エーテルとはＯ−アルキル、Ｏ−
アルケニル、Ｏ−アラルキルなどであり、いずれも置換
されていてもよい。環状アセタールとは２つの水酸基を
保護するもので、Ｏ−アルキリデン、Ｏ−環状アルキリ
デン、Ｏ−ベンジリデンなどであり、いずれも置換され
ていてもよい。エステルとは、Ｏ−アシル、Ｏ−ハロゲ
ン化アシル、Ｏ−スルホニル、有機ホウ素酸エステル、
リン酸化合物、炭素エステル、オルトエステル等で、例
えばＯ−アセチル、Ｏ−ベンゾイル、Ｏ−クロロアセチ
ル、トシル、メシル等である。アミノ基の保護基は、こ
れらに加えて、フタロイルなどがある。

【００４３】また、本発明のオリゴ糖は、コンドロイチ
ン、コンドロイチン硫酸または、哺乳動物の軟骨基質、
血管内皮細胞、肥満細胞または脳などに含まれるコンド
ロイチン硫酸プロテオグリカン、尿中トリプシンインヒ
ビター（以下ＵＴＩと記す。）などの、コンドロイチン
またはコンドロイチン硫酸を有するグリコサミノグリカ
ンなどを出発原料として以下の方法によっても得ること
ができる。例えば、ＵＴＩを出発原料とする場合には、
ＵＴＩを、メタロエンドペプチダーゼで処理することに
より糖ペプチドであるフラグメント１が得られる。この
フラグメント１をアルカリ処理することにより、糖鎖フ
ラグメント２が得られる。さらに、フラグメント２をノ
イラミニダーゼ処理することによりフラグメント３が得
られる。このフラグメント３をさらに低分子量化する目
的で、適当な条件でヒアルロニダーゼ処理することによ
り、非還元末端にＤ−グルクロン酸を有し、構成単糖単
位の数が偶数（例えば４、６、８個など）であるフラグ
メント４が得られる。フラグメント４を、β−グルクロ
ニダーゼ処理することにより、非還元末端にＮ−アセチ
ル−Ｄ−グルコサミンを有し、構成単糖単位の数が奇数
（例えば３、５、７個など）であるフラグメント５が得
られる。フラグメント５を、Ｎ−アセチル−β−ヘキソ
サミニダーゼ処理することにより、非還元末端にＤ−グ
ルクロン酸を有し、構成単糖単位の数が偶数（例えば
２、４、６個など）であるフラグメント６が得られる。
なお上記の各工程で得られるフラグメントは、常法によ
るゲル濾過の手法を用いて、容易に精製し、目的とする
オリゴ糖を得ることができる。

【００４４】これらのオリゴ糖は、コンドロイチン硫
酸、コンドロイチンなどのムコ多糖を出発原料として
も、同様に得ることができる。なお、出発原料となるコ
ンドロイチン硫酸は、市販のものを購入するか、また
は、例えばバイオケミカル プレパレーションス（Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ）１０巻、５２
頁（１９６３年）に記載された方法により、軟骨から抽
出して得ることもできる。コンドロイチンは、市販のも
のを購入するか、または例えばカルボハイドレートリサ
ーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄ．Ｒｅｓ．）４６巻、８７頁
（１９７６年）に記載の方法に準じて、コンドロイチン
硫酸を脱硫することにより得ることができる。また、こ
れらのムコ多糖の化学的分解により、あるいは単糖から
化学的に合成することにより得ることもできる。また、
得られたフラグメントを適宜化学処理することにより、
任意の置換基を有するオリゴ糖を合成することもでき
る。例えば、Ｎ−アセチルコンドロシンは、ジャーナル
オブ バイオロジカル ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．）２４０巻、９９２頁（１９６５年）に
記載された方法によりコンドロイチン硫酸から得られた
コンドロシンまたは市販のコンドロシンを出発原料とし
て、同文献に記載された方法により合成することができ
る。一般に、ムコ多糖をヒアルロニダーゼで処理した場
合、その主生成物は非還元末端にＤ−グルクロン酸を有
し、構成単糖単位が偶数個のフラグメントであり、ヒア
ルロニダーゼ処理のみでは、構成単糖単位が奇数個のフ
ラグメントを定量的に得ることはできない。本発明で
は、ヒアルロニダーゼ処理に、β−グルクロニダーゼお
よびＮ−アセチル−β−ヘキソサミニダーゼを適宜組み
合わせることにより、任意の構成糖数を有する偶数個お
よび奇数個のフラグメントを得る方法をも開示するもの
である。また、ムコ多糖を、上記の方法で処理して得ら
れたフラグメントは、酵素の認識部位の特異性から、還
元末端はＤ−ガラクトサミン残基となる。還元末端がＤ
−グルクロン酸のフラグメントは、単糖から化学合成す
ることにより得ることができる。また、化学合成では、
単糖または二糖を適宜縮合させることにより、適当な鎖
長を有するオリゴ糖を定量的に得ることができる。

【００４５】本発明のオリゴ糖誘導体は、コンドロイチ
ン硫酸、ヒト尿由来の物質であるＵＴＩなどを出発原料
として得ることができる。コンドロイチン硫酸は、腎
炎、腰痛などの治療薬として上市されており、ＵＴＩ
は、急性膵炎、急性循環不全などの治療薬として上市さ
れている。本発明のオリゴ糖は、これらを分解、精製す
ることによっても得られるものであり、その際、本発明
のオリゴ糖の安全性は高い。

【００４６】次に、本発明の第２態様について述べる。
本発明の第２態様は第１態様に記載のグルクロン酸誘導
体およびガラクトサミン誘導体を有するオリゴ糖、該オ
リゴ糖の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも
１つの有効成分とするヒアルロニダーゼ阻害剤である。
第２態様の阻害剤中に含まれる、第１態様のオリゴ糖の
含有量は、目的とする阻害作用の効果により適宜選択さ
れる。第２態様に含まれてもよい他の成分については、
阻害剤の作用を失活しないものであればよい。本発明の
第２態様である阻害剤のヒアルロニダーゼ阻害作用は、
以下に示す実験例などにより確認することができる。

【００４７】また、本発明の第３態様は第１態様に記載
のグルクロン酸誘導体およびガラクトサミン誘導体を有
するオリゴ糖、該オリゴ糖の塩、溶媒和物または塩の溶
媒和物を少なくとも１つの有効成分とするアレルギー性
疾患治療剤および抗炎症剤である。第３態様のアレルギ
ー性疾患治療剤および抗炎症剤中に含まれる、第１態様
のオリゴ糖の含有量は、目的とする抗アレルギー性作用
および抗炎症作用の効果により適宜選択される。第３態
様に含まれてもよい他の成分については、抗アレルギー
性作用および抗炎症作用を失活しないものであればよ
い。本発明の第３態様の抗アレルギー性作用および抗炎
症作用は、以下に示す実験例などにより確認することが
できる。

【００４８】本発明の第２態様のヒアルロニダーゼ阻害
剤および第３態様のアレルギー性疾患治療剤および抗炎
症剤は、本発明の第１態様のオリゴ糖を、一般的に用い
られる適当な担体または溶媒の類、例えば必要に応じて
滅菌水や植物油、更には生理学的に許容し得る溶媒や溶
解補助剤（例えばアルコール、グリセリン、プロピレン
グリコール）などを用い、賦形剤、結合剤、潤沢剤、着
色剤、香味剤、懸濁化剤または乳化剤（例えばポリソル
ベート８０やアラビアゴムなど）、等を適宜選択組み合
わせて種々の剤形としてもよい。こうした剤形として
は、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、坐剤、
シロップ剤、吸入剤、軟膏剤、乳濁剤、懸濁剤、点眼用
液剤、水性若しくは非水性の注射剤、乳濁性若しくは懸
濁性の注射剤、用時溶解または懸濁して用いる注射用製
剤などが挙げられる。

【００４９】また、本発明の第２態様のヒアルロニダー
ゼ阻害剤および第３態様のアレルギー性疾患治療剤およ
び抗炎症剤は、経口または非経口（例えば静脈内投与、
筋肉内投与、皮下投与、直腸内投与、経皮吸収または経
粘膜吸収等）を問わず患者に投与される。成人における
一日投与量は、前記オリゴ糖に換算して０．１ｍｇ〜５
０００ｍｇ、好ましくは、０．５ｍｇ〜１０００ｍｇ、
さらに好ましくは５〜５００ｍｇであるが、患者の体
重、症状あるいは投与経路に応じて適宜増減することが
でき、また全量を１回ないし２〜６回に分割して投与す
ることや点滴静注なども可能である。

【００５０】以下に本発明の代表化合物のいくつかを例
示し、第２態様に記載のヒアルロニダーゼ阻害作用およ
び第３態様に記載の抗アレルギー性作用および抗炎症作
用を実験例１〜５によって示す。実施例１、２、３、
７、８、９で合成され、実験例１〜５で用いられる化合
物名および式と、比較化合物を列挙する。

【００５１】実施例１の化合物：式（XII ）

【化２４】 ［式（XII ）中、Ａｃはアセチル基を表す。］４−Ｏ−
（２−アセタミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノシル）−Ｄ−グルコピランウロン酸；［ＧａｌＮＡ
ｃ（β１−４）ＧｌｃＡ］

【００５２】実施例２の化合物：式（XVI ）

【化２５】 ［式（XVI ）中、Ａｃはアセチル基、Ｍｅはメチル基、
Ｂｎはベンジル基、Ｐｈｔはフタロイル基を表す。］１
−プロペニル４−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチ
ル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−ガラク
トピラノシル）−２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−
グルコピランウロン酸メチルエステル

【００５３】実施例３の化合物：式（XVII）

【化２６】 ［式（XVII）中、Ａｃはアセチル基、Ｂｎはベンジル
基、Ｐｈｔはフタロイル基、Ｐｈはフェニル基を表
す。］１−プロペニル ４−Ｏ−（３，４，６−トリ−
Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−
Ｄ−ガラクトピラノシル）−２，３−ジ−Ｏ−ベンジル
−α−Ｄ−グルコピランウロン酸ジフェニルメチルエス
テル

【００５４】実施例７の化合物：式（XVIII ）

【化２７】 ［式（XVIII ）中、Ａｃはアセチル基を表す。］Ｏ−β
−Ｄ−グルコピランウロノシル−（１→３）−Ｏ−２−
アセタミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピランウロノシル
−（１→３）−２−アセタミド−２−デオキシ−Ｄ−ガ
ラクトピラノース；［ＧｌｃＡ（β１−３）ＧａｌＮＡ
ｃ（β１−４）−ＧｌｃＡ（β１−３）ＧａｌＮＡｃ］

【００５５】実施例８の化合物：式（XIII）

【化２８】 ［式（XIII）中、Ａｃはアセチル基を表す。］Ｏ−２−
アセタミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピランウロノシル
−（１→３）−２−アセタミド−２−デオキシ−Ｄ−ガ
ラクトピラノース；［ＧａｌＮＡｃ（β１−４）Ｇｌｃ
Ａ（β１−３）ＧａｌＮＡｃ］

【００５６】実施例９の化合物：式（XIX ）

【化２９】 ［式（XIX ）中、Ａｃはアセチル基を表す。］Ｏ−β−
Ｄ−グルコピランウロノシル−（１→３）−２−アセタ
ミド−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノース；［Ｇｌ
ｃＡ（β１−３）ＧａｌＮＡｃ］；Ｎ−アセチルコンド
ロシン 比較化合物：クロモグリク酸ナトリウム（ＤＳＣＧ）

【００５７】実験例１：ヒアルロニダーゼ阻害作用 本発明のオリゴ糖誘導体である実施例１、７、８、９の
化合物を含む０．１５Ｍ塩化ナトリウム添加５０ｍＭ酢
酸緩衝液（ｐＨ４．０）０．１ｍｌにヒアルロン酸１．
６７ｍｇ／ｍｌを含む同緩衝液０．３ｍｌを加え、３７
℃、５分間、ついでヒアルロニダーゼ（スプラーゼ；持
田製薬社製）３０００Ｕ／ｍｌを含む同緩衝液０．１ｍ
ｌを加え、１０分間インキュベートした後、０．８Ｍホ
ウ酸緩衝液（ｐＨ９．７）０．１ｍｌを加え、沸騰水浴
上で、３分間煮沸した。この液に１％ジメチルアミノベ
ンズアルデヒドを含む酢酸３ｍｌを加え、３７℃、２０
分間インキュベートし、３０００ｒｐｍ、５分間遠心分
離した上清の、波長５８５ｎｍにおける吸光度（ｔｅｓ
ｔＡ５８５ｎｍ）を測定した。前記オリゴ糖を同量含有
する０．１５Ｍ塩化ナトリウム添加５０ｍＭ酢酸緩衝液
（ｐＨ４．０）０．１ｍｌを３７℃、５分間、ついでヒ
アルロニダーゼ３０００Ｕ／ｍｌを含む同緩衝液０．１
ｍｌを加え、１０分間インキュベートした後、ヒアルロ
ン酸１．６７ｍｇ／ｍｌを含む同緩衝液０．３ｍｌおよ
び０．８Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ９．７）０．１ｍｌを加
え、沸騰水浴上で、３分間煮沸した。この液に１％ジメ
チルアミノベンズアルデヒドを含む酢酸３ｍｌを加え、
３７℃、２０分間インキュベートし、３０００ｒｐｍ、
５分間遠心分離した上清の、波長５８５ｎｍにおける吸
光度（ｂｌａｎｋＡ５８５ｎｍ）を測定した。ｔｅｓｔ
Ａ５８５ｎｍとｂｌａｎｋＡ５８５ｎｍとの差をｓａｍ
ｐｌｅΔＡ５８５ｎｍ、本発明の化合物を添加しないで
同様に測定した場合の値をｃｏｎｔｒｏｌΔＡ５８５ｎ
ｍとし、次式により本発明の化合物のヒアルロニダーゼ
に対する阻害率（％）を算出した。 阻害率＝｛（ｃｏｎｔｒｏｌΔＡ５８５ｎｍ−ｓａｍｐ
ｌｅΔＡ５８５ｎｍ）／ｃｏｎｔｒｏｌΔＡ５８５ｎ
ｍ｝×１００ 種々濃度の本発明の化合物を用いて、ヒアルロニダーゼ
阻害活性を測定した。前記オリゴ糖を１．５ｍｇ／ｍｌ
を適用したときの阻害率（％）を表１に示した。

【００５８】 表１に示すように、本発明の化合物は、ヒアルロニダー
ゼ阻害作用を示した。

【００５９】実験例２：ヒスタミン遊離抑制作用 体重２５０〜３００ｇの雄性ウィスター系ラットにジャ
ーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．）
１１４巻、１４７３頁（１９７５年）に記載された方法
により調製したヘパリン１０Ｕ／ｍｌを含むマストセル
・カルチャード・メディウム（以下ＭＣＭと略す）１０
ｍｌを腹腔内投与し、約９０秒間腹部をマッサージした
後、腹腔からＭＣＭを回収し、６００ｒｐｍ、４℃、３
分間遠心分離して細胞を集めた。細胞を０．０５％トル
イジンブルーにて染色した後、光学顕微鏡下で計数し、
肥満細胞数が５×１０⁴個／ｍｌになるようにＭＣＭを
加え、肥満細胞浮遊液とした。肥満細胞浮遊液１ｍｌに
種々の濃度の本発明の化合物を含むＭＣＭ０．５ｍｌお
よびコンパウンド（Ｃｏｍｐｏｕｎｄ）４８／８０
０．３μｇ／ｍｌを含むＭＣＭ０．５ｍｌを加え、３７
℃、１０分間インキュベートした後、冷生理食塩液３ｍ
ｌを加え、６００ｒｐｍ、４℃、１０分間遠心分離し
た。上清１．５ｍｌに１Ｍ過塩素酸１．０ｍｌを加え、
氷冷下、１５分間インキュベートした後、１２０００ｒ
ｐｍ、０℃、２０分間遠心分離し、上清を採取した。上
清２ｍｌに塩化ナトリウム３ｇを加え、６Ｍ水酸化ナト
リウムにてｐＨを１３．０に調整した後、ｎ−ブタノー
ル：クロロホルム＝３：２の溶液３．５ｍｌを加え、１
５分間振盪した。３０００ｒｐｍ、５分間遠心分離し、
上層を採取した。上層３ｍｌにヘプタン３ｍｌおよび
０．１Ｍ塩酸１．５ｍｌを加え、１５分間振盪し、３０
００ｒｐｍ、５分間遠心分離した後、下層を採取した。
下層１ｍｌを１Ｍ水酸化ナトリウムにてｐＨを１２．６
に調整し、０．２％オルトフタルアルデヒドを含むメタ
ノール０．１ｍｌを加えて、０℃、４０分間インキュベ
ートした後、０．２５Ｍ硫酸にてｐＨを３．０に調整し
た。ついで、励起波長３６０ｎｍ、測定波長４４０ｎｍ
の蛍光強度を測定した後、ヒスタミン１０〜２７０ｎｇ
／ｍｌを含む塩化ナトリウム溶液（ｐＨ１２．６）のオ
ルトフタルアルデヒド反応液の蛍光強度より、作成した
標準曲線により、ヒスタミン含量を算出した。種々の濃
度の本発明の実施例７、８、９の化合物を含むＭＣＭを
用いて算出したヒスタミン含量を［Ｔｅｓｔ］、本発明
の化合物を添加しないで同様に測定した場合の値を［Ｃ
ｏｎｔｒｏｌ］とし、次式によりヒスタミン遊離抑制率
を算出した。 ヒスタミン遊離抑制率（％）＝１００×（［Ｃｏｎｔｒ
ｏｌ］−［Ｔｅｓｔ］）／［Ｃｏｎｔｒｏｌ］ ヒスタミン遊離抑制率を縦軸に、本発明の化合物の濃度
の対数値を横軸にとり、阻害曲線を作成した後、ヒスタ
ミン遊離に対する５０％抑制濃度を算出し、ＩＣ５０値
とした。結果を表２に示した。

【００６０】 表２に示すように、本発明の化合物は、肥満細胞からの
ヒスタミン遊離抑制作用を示した。本発明の化合物のヒ
スタミン遊離抑制作用は、いずれもＤＳＣＧよりも強力
であった。

【００６１】実験例３：気道収縮抑制作用（ラット） 体重２００〜２５０ｇ雄性ウィスター系ラットに抗オボ
アルブミン（以下ＯＡと略す）マウス血清５．０ｍｌ／
ｋｇを静脈内投与し、１日後、ペントバルビタールナト
リウム麻酔下に、気管にカニューレを挿入した。気管カ
ニューレに小動物用人工呼吸器（ＳＮ４８０−７、シナ
ノ製作所）およびトランスジューサー（ＬＰＵ−０．１
−３５０−０−ＩＩ，日本光電）を連結して人工呼吸を
行なった。ＯＡ４ｍｇ／ｋｇを静脈内投与した後、カニ
ューレ側枝からの余剰空気圧を測定した。測定終了時に
気管を閉塞し、この時の空気圧を１００％とした時の余
剰空気圧の割合を算出し、気道収縮率とした。本発明の
実施例１、７、８、９の化合物もしくはＤＳＣＧは生理
食塩水に溶解して種々の濃度に調製し、ＯＡ投与の１分
前に大腿静脈より投与した。結果を表３に示した。

【００６２】 表３に示すように、本発明の化合物は、ラットにおいて
気道収縮抑制作用を示した。

【００６３】実験例４：気道収縮抑制作用（モルモッ
ト） 体重２５０〜３５０ｇの雄性ハートレー系モルモットに
抗ＯＡモルモット血清１ｍｌ／ｋｇを腹腔内投与し、１
日後ウレタン麻酔下に気管にカニューレを挿入した。気
管カニューレに小動物人工呼吸器（ＳＮ４８０−７、シ
ナノ製作所）およびブロンコスパスム・トランスジュー
サー（７０２０、Ｕｇｏ Ｂａｓｉｌｅ）を連結して人
工呼吸を行った。臭化パンクロニウム１ｍｇ／ｋｇの静
注により自発呼吸を停止させた後、ＯＡ１０ｍｇ／ｍｌ
生理食塩水溶液をネブライザー（ＴＵＲ−３２００、日
本光電）により３０秒間吸入させアナフィラキシー性気
道収縮反応を惹起させ、側路よりのエアー・オーバーフ
ロー量をトランスジューサーを介して記録した。測定終
了後に気管を閉塞し、これを最大反応として被験薬によ
る反応の百分率を求めた。なお、本発明の化合物は５％
アラビアゴム水溶液に懸濁し、ＯＡ投与の１時間前に経
口投与した。結果を表４に示した。

【００６４】 表４に示すように、本発明の化合物は、モルモットにお
いて気道収縮抑制作用を示した。

【００６５】実験例５：マウス受動皮膚アナフィラキシ
ー（以下ＰＣＡと略す）反応抑制作用 体重２０〜４０ｇの雄性ｄｄｙ系マウスの背部皮内に抗
ＯＡマウス血清５０μｌを投与し、２時間後にＯＡ０．
５ｍｇを含む０．５％エバンスブルー溶液０．５ｍｌを
静脈内投与した。３０分後にマウスを屠殺し、抗体投与
部位に生じる色素漏出部位の直径が５ｍｍ以上のものを
ＰＣＡ反応陽性として判定した。なお、本発明の化合物
は５％アラビアゴム水溶液に懸濁し、ＯＡ投与の１時間
前に経口投与した。本発明の実施例２の化合物および実
施例３の化合物に、ＰＣＡ反応抑制作用が認められた。

【００６６】以上の実験例１〜５から明らかなように、
本発明の化合物は、ヒアルロニダーゼ阻害作用、ラット
肥満細胞からのヒスタミン遊離抑制作用、ラットおよび
モルモットアナフィラキシー気道収縮抑制作用、マウス
ＰＣＡ反応抑制作用を示し、安全性も高い。従って、本
発明の化合物は、慢性関節リウマチ、変形性関節症、腰
痛症、気管支喘息、結膜炎、アレルギー性鼻炎、アトピ
ー性皮膚炎、過敏症、枯草熱（花粉症）、血管神経性浮
腫、蕁麻疹、中耳炎、アレルギー性胃腸炎、食物アレル
ギーおよび薬物アレルギーなどの各種炎症性疾患および
アレルギー性疾患の治療に極めて有用である。なお、本
発明の化合物は、動物実験において、最大１００ｍｇ／
ｋｇまで投与しても、死亡例および毒性学的異常所見は
認められなかった。従って、本発明の化合物は、安全性
の高い、強力なヒアルロニダーゼ阻害剤、ひいては強力
な抗アレルギー剤、抗炎症剤を提供するものである。

【００６７】

【実施例】以下に本発明の抗炎症・抗アレルギー作用を
有するオリゴ糖誘導体のオリゴ糖の製造方法を実施例に
よって具体的に示すが、本発明は以下の実施例に限定さ
れるものではない。各例について、必要に応じて ¹Ｈ−
ＮＭＲスペクトル（δ値、ｐｐｍ）、¹³Ｃ−ＮＭＲスペ
クトル（δ値、ｐｐｍ）、ＭＡＳＳスペクトル、ＩＲス
ペクトルデータ（ＫＢｒ錠剤法）などを記載した。な
お、ＮＭＲスペクトルデータは、特記しない限り、ＣＤ
Ｃｌ₃ 中、ＴＭＳを内部標準物質として測定した数値を
記載した。

【００６８】実施例１： ４−Ｏ−（２−アセタミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガ
ラクトピラノシル）−Ｄ−グルコピランウロン酸の製造 工程１ ハンス・ポールセン（Ｈａｎｓ Ｐａｕｌｓｅｎ）らの
方法［カーボハイドレート・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙ
ｄｒａｔｅ Ｒｅｓ．）１００巻、１４３頁（１９８２
年）］に従い、３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−
デオキシ−２−フタルイミド−α−Ｄ−ガラクトピラノ
シルブロミドを合成した。

【００６９】工程２ ジョセフ・キス（Ｊｏｓｅｐｈ Ｋｉｓｓ）らの方法
［ジャーナル・オブ・カーボハイドレーツ・ヌクレオシ
ド・ヌクレオチド（Ｊ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ
Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ）４
巻、１０１頁（１９７７年）］に従い、ベンジル２，３
−ジ−Ｏ−ベンジル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−α−
Ｄ−グルコピラノシドを合成した。

【００７０】工程３ 工程２で合成した化合物１８８ｇ、パラトルエンスルホ
ン酸一水和物３９ｇ、メタノール１．７５ｌ、水０．７
５ｌを混合し、３時間還流した。反応液を放冷後、減圧
下に濃縮し、反応液を約１／３量とし、クロロホルム５
００ｍｌで３回抽出した。クロロホルム層を合わせ、
水、飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し
た。溶媒のクロロホルムを減圧下に留去し、残渣をヘキ
サンで洗浄し、結晶を得た。さらに酢酸エチル−ヘキサ
ンより再結晶して、ベンジル２，３−ジ−Ｏ−ベンジル
−α−Ｄ−グルコピラノシド３２ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．３５−７．２５（１５Ｈ），
５．１１−４．４５（７Ｈ），３．９−３．４（６Ｈ）

【００７１】工程４ パラメトキシベンジルアルコール２７．２ｇと４７％臭
化水素酸５４．６ｍｌを混合し、室温で１５分間撹拌し
た。反応液をジエチルエーテル２００ｍｌで３回抽出し
た。ジエチルエーテル層を合わせ、冷飽和炭酸水素ナト
リウム溶液、冷水で洗浄後、塩化カルシウムで乾燥し
た。溶媒のジエチルエーテルを減圧下留去し、無色の油
状のパラメトキシベンジルブロミドを得た。工程３で得
た化合物２０ｇをトルエン５８０ｍｌに懸濁し、酸化ビ
ス［トリ−ｎ−ブチルすず（ＩＶ）］１５．３ｇを加
え、２時間還流した。その間、ディーンスターク管で水
を除きながら約３００ｍｌのトルエンを留去した。反応
液の温度を８０℃に放冷し、上記調製したパラメトキシ
ベンジルブロミドおよび臭化テトラ−ｎ−ブチルアンモ
ニウム１０ｇを加え、アルゴン雰囲気下に８０℃で３時
間撹拌した。放冷後、クロロホルム２ｌで希釈した後、
１０％炭酸水素カリウム水溶液、水で洗浄し、無水硫酸
マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、得られた
油状の残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（エ
ーテル−ヘキサン）で精製し、ベンジル２，３−ジ−Ｏ
−ベンジル−６−Ｏ−（４′−メトキシベンジル）−α
−Ｄ−グルコピラノシド１３．５ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．３６−７．１９（１７Ｈ），
６．８５（ｄ，２Ｈ），５．０８−４．４５（９Ｈ），
３．７９（Ｓ，３Ｈ）３．７７−３．４６（６Ｈ），
２．４６（ｄｄ，１Ｈ）

【００７２】工程５ 工程４で得られた化合物７．１ｇを無水１，２−ジクロ
ロエタン４５ｍｌに溶解し、モレキュラーシーブ４Ａ
６．２ｇおよび２，４，６−コリジン１．６８ｍｌを加
え、室温で１．５時間撹拌した。銀トリフラート３．５
２ｇを加えた後、反応液を−２５℃に冷却し、工程１で
得た化合物６．８ｇの１，２−ジクロロエタン溶液３５
ｍｌを滴加した。反応液を室温に戻し、２時間撹拌し
た。さらに４０℃で２時間撹拌した。放冷後、反応液を
ジクロロメタンで希釈し、不溶物を濾去後、１０％チオ
硫酸ナトリウム溶液、冷水、１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナ
トリウム溶液で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾
燥した。溶媒を減圧下留去し、得られた残渣１５．９ｇ
をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（エーテル−ヘ
キサン）で精製し、ベンジル２，３−ジ−Ｏ−ベンジル
−４−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デ
オキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル）−６−Ｏ−（４′−メトキシベンジル）−α−Ｄ−
グルコピラノシド９．２ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．９−７．６（４Ｈ），７．４
２−７．１３（１７Ｈ），６．８５（ｄ，２Ｈ），５．
７５−３．３（２２Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），２．
１０（ｓ，３Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），１．８１
（ｓ，３Ｈ）Ｍａｓｓ（Ｍ⁺＋１）：９８８

【００７３】工程６ 工程５で得られた化合物１４ｇを無水メタノール１．２
ｌに溶解し、アルゴン雰囲気下、氷冷し、０〜２℃とし
た。１Ｍナトリウムメトキシド／メタノール溶液１２．
８ｍｌを滴加した。反応液を４℃で１時間撹拌後、反応
液をダウエックス５０Ｗで中和した。ダウエックス５０
Ｗを濾去後、溶媒を減圧留去し、ベンジル２，３−ジ−
Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−（２−デオキシ−２−フタルイ
ミド−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−６−Ｏ−（４′
−メトキシベンジル）−α−Ｄ−グルコピラノシドを得
た。本化合物は未精製のまま工程７に用いた。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．９−７．６（４Ｈ），７．４
１−７．１９（１７Ｈ），６．８３（ｄ，２Ｈ），５．
３−３．０（２２Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ）

【００７４】工程７ 工程６で得られた化合物８６１ｍｇをメタノール７５ｍ
ｌに溶解し、ヒドラジン一水和物３９５ｍｇを加え、２
８時間還流した。溶媒を減圧下留去し、残渣にピリジン
１０ｍｌ、無水酢酸７ｍｌを加えて、室温で１６時間撹
拌した。溶媒を減圧下留去し、残渣をジクロロメタンで
希釈し、１０％硫酸水素カリウム水溶液で２回洗浄後、
水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を
減圧下留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー（ジクロロメタン）で精製し、ベンジル２，３−ジ
−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−（２−アセタミド−３，４，
６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラ
クトピラノシル）−６−Ｏ−（４′−メトキシベンジ
ル）−α−Ｄ−グルコピラノシド７７３ｍｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．３６−７．２２（１７Ｈ），
６．９６（ｄ，２Ｈ），５．２２（ｄ，１Ｈ），５．０
−４．２（１４Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），３．８
（１Ｈ），３．７−３．４（７Ｈ），２．０７（ｓ，３
Ｈ），１．９８（ｓ，３Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），
１．７３（ｓ，３Ｈ）

【００７５】工程８ 工程７で得られた化合物１２．６ｇをジクロロメタン１
８７ｍｌに溶解し、水９．４ｍｌを加えた後、２，３−
ジクロロ−５，６−ジシアノ−ｐ−ベンゾキノン４．１
２ｇを加えた。室温で２時間撹拌した後、反応液をジク
ロロメタン６３０ｍｌで希釈し、水１９ｍｌ（２回）、
飽和炭酸水素ナトリウム溶液１９０ｍｌ（２回）、水１
２５ｍｌで順次洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾
燥した。溶媒を減圧下留去し、残渣をシリカゲルカラム
クロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル）で精製
し、ベンジル２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−（２
−アセタミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−
デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−Ｄ−グ
ルコピラノシド８ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．４３−７．１６（１５Ｈ），
５．８−５．６（１Ｈ），５．２−４．４（１１Ｈ），
４．１−３．５（１０Ｈ），２．１０（ｓ，３Ｈ），
１．９８（ｓ，３Ｈ），１．９３（ｓ，３Ｈ），１．９
１（ｓ，３Ｈ）Ｍａｓｓ（Ｍ⁺＋１）：７８０

【００７６】工程９ 工程８で得られた化合物４ｇをアセトン１１５ｍｌに溶
解し、−５℃に冷却した後、三酸化クロム１．４ｇの
３．５Ｍ硫酸溶液６．９ｍｌを徐々に加えた。−５℃で
１時間撹拌後、室温で２．５時間撹拌した。反応液に水
５０ｍｌを加え、クロロホルムで抽出した。クロロホル
ム層を合わせ、洗液が中性になるまで水で洗浄し、無水
硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、ベ
ンジル２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−（２−アセ
タミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキ
シ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−Ｄ−グルコピ
ラノシドウロン酸３．７ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．５１−７．１４（１５Ｈ），
６．４−３．４（１９Ｈ），２．１７−１．９４（１２
Ｈ）

【００７７】工程１０ 工程９で得られた化合物３．７ｇをジメチルホルムアミ
ド６ｍｌに溶解し、クロロメチルメチルエーテル０．３
５ｍｌ、トリエチルアミン０．６４ｍｌを加え、室温で
１時間撹拌した。さらに、クロロメチルメチルエーテル
０．１７ｍｌ、トリエチルアミン０．３２ｍｌを加え、
室温で３０分間撹拌した。反応液に水を加え、ジクロロ
メタンで抽出した。ジクロロメタン層を飽和炭酸水素ナ
トリウム溶液、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾
燥した。溶媒を減圧下留去し、ベンジル２，３−ジ−Ｏ
−ベンジル−４−Ｏ−（２−アセタミド−３，４，６−
トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクト
ピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸メト
キシメチルエステル４ｇを得た。本化合物には、溶媒の
ジメチルホルムアミドがわずかに残存しているが、その
まま工程１１に用いた。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．４−７．２（１５Ｈ），５．
９５（ｄ，１Ｈ），５．５−３．７（２０Ｈ），３．５
５（ｓ，３Ｈ），２．１０（ｓ，３Ｈ），１．９７（６
Ｈ），１．９３（ｓ，３Ｈ）

【００７８】工程１１ 工程１０で得られた化合物４ｇをメタノール２７０ｍｌ
に溶解し、１０％パラジウム−炭素３．７ｇを加えた。
水素ガスを吹き込みながら、室温で３時間撹拌した後、
３８℃で５時間撹拌した。さらに、水素ガス雰囲気下で
室温で終夜撹拌した。反応液からパラジウム−炭素を濾
去後、溶媒を減圧下留去した。残渣を減圧乾燥し、４−
Ｏ−（２−アセタミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチ
ル−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−Ｄ
−グルコピランウロン酸メトキシメチルエステル２ｇを
得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：５．５−３．０（１８Ｈ），３．
４９（ｓ，３Ｈ），２．１４（ｓ，３Ｈ），２．０８
（ｓ，３Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），１．８９（ｓ，
３Ｈ）

【００７９】工程１２ 工程１１で得られた化合物１．９ｇをピリジン２０ｍｌ
に溶解し、無水酢酸１４ｍｌを加え、室温で１６時間撹
拌した。溶媒を減圧下留去し、残渣をジクロロメタンに
溶解し、１０％硫酸水素カリウム溶液で２回、水で１回
洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下
溶媒を留去し、アセチル２，３−ジ−Ｏ−アセチル−４
−Ｏ−（２−アセタミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセ
チル−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−
Ｄ−グルコピラノシドウロン酸メトキシメチルエステル
１．９ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：６．３２（ｄ，１Ｈ），５．８−
３．８（１４Ｈ），３．５６（ｓ，３Ｈ），２．１７−
１．９４（２１Ｈ）

【００８０】工程１３ 工程１２で得られた化合物０．４ｇをメタノール４０ｍ
ｌに溶解し、１Ｍ塩酸を８滴加えた後４０℃で６．５時
間撹拌した。溶媒を減圧下留去し、アセチル２，３−ジ
−Ｏ−アセチル−４−Ｏ−（２−アセタミド−３，４，
６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラ
クトピラノシル）−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸０．
２８ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：５．３５（１Ｈ），４．２−３．
４（１２Ｈ），２．２−１．９（２１Ｈ）

【００８１】工程１４ 工程１３で得られた化合物０．２８ｇを無水メタノール
２８ｍｌに溶解し、１Ｍナトリウムメトキシド−メタノ
ール溶液０．３９ｍｌを氷冷下加えた。さらに１Ｍナト
リウムメトキシド−メタノール溶液０．３９ｍｌを加
え、５〜１０℃で２．５時間撹拌した。反応液をダウエ
ックス５０Ｗで中和した後、ダウエックス５０Ｗを濾去
し、減圧下溶媒を留去した。残渣をバイオゲルＰ−２を
用いたカラムクロマトグラフィーにより精製し、本発明
のオリゴ糖である表題化合物４−Ｏ−（２−アセタミド
−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−Ｄ−
グルコピランウロン酸７７ｍｇを得た。 ＮＭＲ（Ｄ₂Ｏ；δｐｐｍ）：５．２３−３．１（１９
Ｈ），１．９７（ｓ，３Ｈ）¹³ ＣＮＭＲ（Ｄ₂Ｏ；δｐｐｍ）：１７７．４，１０
４．０，９８．７，９４．７，８２．５，６３．５，５
４．９，２４．９ Ｍａｓｓ（Ｍ⁺ −１）：３９６ ＩＲ（ｃｍ^-1）：３３５０，２９００，１７４０，１６
３０，１３７０，１０４０

【００８２】実施例２： １−プロペニル２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−
（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２
−フタルイミド−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−
Ｄ−グルコピラノシドウロン酸メチルエステルの製造 工程１ 実施例１工程１と同様にして、３，４，６−トリ−Ｏ−
アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−α−Ｄ−
ガラクトピラノシルブロミドを合成した。

【００８３】工程２ 特開昭５９−１０５９９号公報に記載の方法に従って、
１−プロペニル２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グ
ルコピラノシドウロン酸メチルエステルを合成した。

【００８４】工程３ 工程１で得られた化合物３．０７ｇ、工程２で得られた
化合物２．４ｇ、銀トリフラート１．５９ｇ、２，３，
６−コリジン０．７６ｍｌ、モレキュラーシーブ４Ａ
２．８ｇを無水１，２−ジクロロエタン３５ｍｌに懸濁
し、実施例１工程５と同様の方法により、本発明のオリ
ゴ糖である表題化合物１．７ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．９１−７．６６（４Ｈ），
７．４０−７．１５（１０Ｈ），５．９４−３．８２
（１８Ｈ），３．５７（ｓ，３Ｈ），２．１１（ｓ，３
Ｈ），１．９５（ｓ，３Ｈ），１．８０（ｓ，３Ｈ），
１．５２（ｄｔ，３Ｈ）¹³ ＣＮＭＲ（δｐｐｍ）：１７０．０，１６９．９，１
６９．５，１６８．９，１３４．０，１３１．７，１２
８．３，１２８．１，１２７．９，１２７．８，１２
７．１，１２６．６，９７．８，９７．２，７４．７，
７３．２，６０．７，５２．４，５１．９，２０．４，
２０．３，１２．２，９．３

【００８５】実施例３： １−プロペニル２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−
（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２
−フタルイミド−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−α−
Ｄ−グルコピラノシドウロン酸ジフェニルメチルエステ
ルの製造 工程１ 実施例１工程１と同様にして、３，４，６−トリ−Ｏ−
アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−α−Ｄ−
ガラクトピラノシルブロミドを合成した。

【００８６】工程２ 特開昭５９−１０５９９号公報に記載の方法に従って、
アリル４−Ｏ−アセチル−２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−
α−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸を合成した。

【００８７】工程３ 工程２で得られた化合物４４．６ｇをジエチルエーテル
１５０ｍｌに溶解し、室温で撹拌しながら、原料が消失
するまでジフェニルジアゾメタンを加えた。シリカゲル
を加え、２〜３分撹拌し、過剰のジフェニルジアゾメタ
ンを分解した後、シリカゲルを除去した。溶媒を減圧下
留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
（ヘキサン−ジエチルエーテル）で精製し、アリル４−
Ｏ−アセチル−２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グ
ルコピラノシドウロン酸ジフェニルメチルエステル３
８．４ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．３５−７．２（２０Ｈ），
６．２−５．７（１Ｈ），５．４−３．５（１４Ｈ），
１．４７（ｓ，３Ｈ）

【００８８】工程４ 工程３で得られた化合物３６．９ｇをエタノール８３０
ｍｌ、ベンゼン３５５ｍｌおよび水１１８ｍｌの混液に
溶解し、１，４−ジアザビシクロ［２，２，２］オクタ
ン１．１８ｇを加え、還流した。還流下に塩化トリフェ
ニルホスフィンロジウム（Ｉ）３．８２ｇを加え、４時
間還流した。反応終了後、不溶物を濾去し、溶媒を減圧
下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー（ヘキサン−ジエチルエーテル）で精製し、１−プロ
ペニル４−Ｏ−アセチル−２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−
α−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸ジフェニルメチルエ
ステル３０．２ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．３−７．１５（２０Ｈ），
６．０（１Ｈ），５．３−３．５（１１Ｈ），１．６
（ｄｔ，３Ｈ），１．５（ｄ，３Ｈ）

【００８９】工程５ 工程４で得られた化合物２９．６ｇをメタノール３２０
ｍｌに溶解し、室温撹拌下、２Ｍナトリウムメトキシド
−メタノール溶液１２．８ｍｌを加え、室温で１時間撹
拌した。ダウエックス５０Ｗを約３０ｍｌ加え、室温で
１０分間撹拌し、反応を停止させた。ダウエックス５０
Ｗを濾去後、濾液を減圧下濃縮した。残渣をシリカゲル
カラムクロマトグラフィー（ヘキサン−ジエチルエーテ
ル）で精製し、１−プロペニル２，３−ジ−Ｏ−ベンジ
ル−α−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸ジフェニルメチ
ルエステル１１．４ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．４−７．２（２０Ｈ），６．
２−６．０（１Ｈ），５．４５−３．１（１１Ｈ），
１．６５（ｄｄ，３Ｈ）

【００９０】工程６ 工程１で得られた化合物、工程５で得られた化合物を用
い、実施例１工程５と同様の方法で、本発明のオリゴ糖
である表題化合物０．３ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．９−７．７（４Ｈ），７．４
−７．２（２０Ｈ），６．０−３．５（１９Ｈ），２．
１１（ｓ，３Ｈ），１．９７（ｓ，３Ｈ），１．８１
（ｓ，３Ｈ），１．５（ｄｔ，３Ｈ）

【００９１】実施例４： ベンジル２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−（３，
４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタ
ルイミド−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−Ｄ−グルコ
ピラノシドウロン酸ベンジルエステルの製造 工程１ 実施例１工程１と同様にして、３，４，６−トリ−Ｏ−
アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−α−Ｄ−
ガラクトピラノシルブロミドを合成した。

【００９２】工程２ 実施例１工程２および工程３と同様にして、ベンジル
２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−グルコピラノシドを合
成した。

【００９３】工程３ 工程２で得られた化合物４２ｇを無水ピリジン２００ｍ
ｌに溶解し、室温で撹拌しながらトリチルクロライド２
９．９ｇを加えた。１００℃で２時間撹拌後、室温まで
放冷し、無水酢酸１５５．８ｍｌを加え、室温で終夜撹
拌した。溶媒を減圧下留去し、残渣にクロロホルム５０
０ｍｌを加え、１０％硫酸水素カリウム、水、飽和食塩
水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶
媒を減圧下留去し、油状のベンジル４−Ｏ−アセチル−
２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−６−Ｏ−トリチル−Ｄ−グ
ルコピラノシド８３ｇを得た。

【００９４】工程４ 工程３で得られた化合物６８．５ｇをクロロホルム５０
０ｍｌに溶解し、氷浴で０℃に冷却した。三フッ化ホウ
素−メタノール錯体の２０％メタノール溶液９４ｍｌを
３０分かけて滴加し、０〜１０℃で５時間撹拌した。反
応液を水に注ぎ、有機層を分取した。有機層を水で２
回、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で１回、さらに洗液
が中性になるまで水で洗浄し、続いて飽和食塩水で洗浄
し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留
去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ジ
クロロメタン−ヘキサン）で精製し、ベンジル４−Ｏ−
アセチル−２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−グルコピラ
ノシド３７ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．４−７．２（１５Ｈ），５．
０−４．５（９Ｈ），３．７−３．５（４Ｈ），１．９
５（ｓ，３Ｈ）

【００９５】工程５ 工程４で得られた化合物３７ｇをアセトン６００ｍｌに
溶解し、塩化ナトリウム−氷浴で−５℃まで冷却した。
撹拌下、三酸化クロム２１ｇを３．５Ｍ硫酸９４ｍｌに
溶解した溶液を滴加した。滴加終了後、反応液を室温に
戻し、室温で３時間撹拌した。反応液に水５００ｍｌを
加え、クロロホルム５００ｍｌで３回抽出した。クロロ
ホルム層を合わせ、洗液が中性を示すまで洗浄し、続い
て飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾
燥した。溶媒を減圧下留去し、ベンジル４−Ｏ−アセチ
ル−２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−グルコピラノシド
ウロン酸４０ｇを得た。

【００９６】工程６ 工程５で得られた化合物２０ｇをジエチルエーテル２０
０ｍｌに溶解し、フェニルジアゾメタン溶液を加えた。
溶媒を減圧下留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマト
グラフィー（ヘキサン−ジエチルエーテル）で精製し、
ベンジル４−Ｏ−アセチル−２，３−ジ−Ｏ−ベンジル
−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸ベンジルエステル１
１．２ｇを得た。

【００９７】工程７ 工程６で得られた化合物１１．２ｇをメタノール１３０
ｍｌに溶解し、１Ｍナトリウムメトキシド−メタノール
溶液１３．７ｍｌを加えた。室温で１．５時間撹拌した
後、ダウエックス５０を加え中和した。ダウエックス５
０Ｗを濾去し、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−ジエチルエー
テル）で精製し、ベンジル２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−
Ｄ−グルコピラノシドウロン酸ベンジルエステル２．０
ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．３５−７．２（２０Ｈ），
５．３−２．８（１４Ｈ）

【００９８】工程８ 工程１で得られた化合物３．８ｇ、工程７で得られた化
合物３．８ｇ、銀トリフラート１．９４ｇ、２，３，６
−コリジン０．９３ｍｌ、モレキュラーシーブ４Ａ
３．４ｇを、無水１，２−ジクロロエタン４５ｍｌに懸
濁し、実施例１工程５と同様の方法により本発明のオリ
ゴ糖である表題化合物１．１ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．８−７．７（４Ｈ），７．４
−７．１（２０Ｈ），５．８−３．５（２０Ｈ），２．
１（ｓ，３Ｈ），１．９５（ｓ，３Ｈ），１．８（ｓ，
３Ｈ）

【００９９】実施例５： ベンジル２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−（２−デ
オキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル）−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸ベンジルエステル
の製造 実施例４で得られたベンジル２，３−ジ−Ｏ−ベンジル
−４−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デ
オキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ル）−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸ベンジルエステル
１．０ｇを無水メタノール４３０ｍｌに溶解し、食塩−
氷浴を用いて０℃まで冷却後、１Ｍナトリウムメトキシ
ド−メタノール溶液１．３ｍｌを加え、５時間撹拌し
た。ダウエックス５０Ｗを加えて中和後、ダウエックス
５０Ｗを濾別し、濾液を減圧下濃縮した。残渣をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン−ジエ
チルエーテル）で精製し、本発明のオリゴ糖である表題
化合物０．９ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．８−７．７（４Ｈ），７．４
−７．２（２０Ｈ），５．０−３．４（２０Ｈ）

【０１００】実施例６： Ｏ−（２−アセタミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチ
ル−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−
（１→４）−Ｏ−（２，３−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ
−グルクロン酸メチル）−（１→３）ベンジル ２−ア
ジド−４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−β−
Ｄ−ガラクトピラノシドの製造 工程１ 実施例１工程８と同様にして、ベンジル２，３−ジ−Ｏ
−ベンジル−４−Ｏ−（２−アセタミド−３，４，６−
トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクト
ピラノシル）−α−Ｄ−グルコピラノシド８ｇを合成し
た。

【０１０１】工程２ 工程２で得られた化合物３．６５ｇを用い、実施例１工
程９と同様の条件で酸化反応を行った。反応液に水１５
０ｍｌを加えて、クロロホルムで抽出した。クロロホル
ム層を合わせ、洗液が中性になるまで水で洗浄し、無水
硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去した
後、残渣をジエチルエーテル１００ｍｌに溶解し、室温
で、ジアゾメタンのジエチルエーテル溶液を適量加え
た。過剰のジアゾメタンを、酢酸を小量加えて分解した
後、溶媒を減圧下留去し、残渣をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチル）で精製し、ベ
ンジル４−Ｏ−（２−アセタミド−３，４，６−トリ−
Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノ
シル）−２，３−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−グルコピ
ラノシドウロン酸メチルエステル２．８ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．４−７．２（１５Ｈ），５．
５（ｄ，１Ｈ），５．２５（ｔ，１Ｈ），５．１−３．
４（１６Ｈ），３．８２（ｓ，３Ｈ），２．１１（ｓ，
３Ｈ），１．９８（ｓ，３Ｈ），１．９５（６Ｈ）

【０１０２】工程３ 工程２で得られた化合物２．７ｇをメタノール１８０ｍ
ｌに溶解し、１０％パラジウム−炭素２．５ｇを加え、
水素ガスを吹き込みながら、４０℃で２．５時間撹拌し
た。反応液からパラジウム−炭素を濾去後、溶媒を減圧
下留去し、残渣１．５ｇを得た。残渣１．３２ｇをピリ
ジン１３ｍｌに溶解し、氷冷下無水酢酸９．１ｍｌを加
えた後、室温で１６時間撹拌した。溶媒を減圧下留去し
た後、残渣をジクロロメタンに溶解し、１０％硫酸水素
カリウム溶液で２回、水で１回洗浄し、無水硫酸マグネ
シウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去し、残渣をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン−酢酸エチ
ル）で精製し、アセチル４−Ｏ−（２−アセタミド−
３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−
Ｄ−ガラクトピラノシル）−２，３−ジ−Ｏ−アセチル
−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸メチルエステル１．５
４ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：６．３−３．９（１３Ｈ），３．
８３（ｓ，３Ｈ），２．１７−１．９２（２１Ｈ）¹³ ＣＮＭＲ（δｐｐｍ）：１７０．２，１６９．９，１
６９．５，１６９．２，１６８．５，１６８．３，１６
７．９，１００．３，９１．６，７５．５，７４．４，
７２．０，７０．６，７０．２，６９．８，６６．５，
６１．１，５３．０，５１．５，２３．１，２０．４

【０１０３】工程４ 工程３で得られた化合物５０ｍｇを無水酢酸４０μｌに
溶解した。氷冷下２５％臭化水素酸−酢酸溶液０．２ｍ
ｌを加え、０〜５℃で１時間、室温で２時間撹拌した。
反応液をクロロホルムで希釈し、冷水、冷飽和炭酸水素
ナトリウム溶液、冷水で順次洗浄後、無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、白色結晶の２，３
−ジ−Ｏ−アセチル−１−ブロモ−１−デオキシ−４−
Ｏ−（２−アセタミド−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチ
ル−２−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β
−Ｄ−グルコピラノシルウロン酸メチルエステル５０ｍ
ｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：６．５７−３．７（１３Ｈ），
３．８５（ｓ，３Ｈ），２．１４−１．９３（１８Ｈ）

【０１０４】工程５ ピエール・シネイ（Ｐｉｅｒｒｅ Ｓｉｎｅｙ）らの方
法［カーボハイドレート・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄ
ｒａｔｅ Ｒｅｓ．）１５５巻、１３１頁（１９８６
年）］に従い、ベンジル ２−アジド−４，６−Ｏ−ベ
ンジリデン−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシ
ドを合成した。

【０１０５】工程６ 工程５で得られた化合物２６５ｍｇ、シアン化水銀８４
０ｍｇ、よう化水銀４４９ｍｇ、モレキュラーシーブ４
Ａ ３．４１ｇおよびベンゼン−ニトロメタン（１：
１）混合溶媒４７ｍｌを混合し、室温で１時間撹拌した
後、工程４で得られた化合物５６８．６ｍｇをベンゼン
−ニトロメタン（１：１）混合溶媒１１．７ｍｌに溶解
した溶液を加えた。反応液を７０℃で１．５時間撹拌
後、反応液中の不溶物を濾去し、不溶物を酢酸エチルで
洗浄した。濾液と洗液を合わせ、１０％よう化カリウム
水溶液で２回、飽和食塩水で１回洗浄し、無水硫酸ナト
リウムで乾燥した。溶媒を減圧下留去し、残渣をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン−メタ
ノール）で精製し、粗精製物を得た。これをさらに、高
速液体クロマトグラフィー（ヘキサン−エタノール）で
精製し、表題化合物６．７ｍｇを得た。 ＮＭＲ（δｐｐｍ）：７．６−７．３（１０Ｈ），５．
５−３．３（２３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），２．０
６−１．９３（１８Ｈ）¹³ ＣＮＭＲ（δｐｐｍ）：１７０．４，１６９．８，１
６８．７，１３６．９，１２９．１，１２８．５，１２
８．３，１２８．１，１２６．１，１２２．１，１０
３．０，１０１．０，１００．６，１００．４，９７．
２，９６．２，６６．５，６１．７，６１．３，５３．
０，５１．２，５１．１，２９．８，，２０．７，２
０．５ ＩＲ（ｃｍ^-1）：２８１２，２１１７，１６１０，１３
７０，１２４０，１０６６，１０５０

【０１０６】実施例７： Ｏ−β−Ｄ−グルコピランウロノシル−（１→３）−Ｏ
−２−アセタミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピ
ラノシル−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピランウロ
ノシル−（１→３）−２−アセタミド−２−デオキシ−
Ｄ−ガラクトピラノース；［ＧｌｃＡ（β１−３）Ｇａ
ｌＮＡｃ（β１−４）−ＧｌｃＡ（β１−３）ＧａｌＮ
Ａｃ］の製造 ＵＴＩ（ウリナスタチン；持田製薬社製）１１６０００
Ｕ／ｍｌを含む生理食塩液５１．８ｍｌにメタロエンド
ペプチダーゼ（生化学工業社製）０．７２Ｕ／ｍｌを含
む０．１Ｍグリシン−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ１
０．０）６３．６ｍｌを加え、３７℃、３時間インキュ
ベートした後、０．１Ｍ重炭酸アンモニウムにて平衡化
したセファクリルＳ−２００（ファルマシア社製）を充
填したカラム（５×８７ｃｍ）を用いてゲル濾過した画
分のヒアルロニダーゼ阻害活性を測定し、ヒアルロニダ
ーゼ阻害画分を集めて凍結乾燥し、フラグメント１とし
た。フラグメント１、１１２４ｍｇに０．５Ｍ水酸化ナ
トリウム１１２．４ｍｌを加え、２５℃、２４時間イン
キュベートした後、６Ｍ塩酸にてｐＨ７．０に調整し
た。この液を凍結乾燥によって、２０ｍｌに濃縮した
後、０．１Ｍ重炭酸アンモニウムにて平衡化したセファ
デックスＧ−７５（ファルマシア社製）を充填したカラ
ム（５×８７ｃｍ）を用いてゲル濾過した画分のヒアル
ロニダーゼ阻害活性を測定し、ヒアルロニダーゼ阻害活
性を有する画分を集めて凍結乾燥し、フラグメント２と
した。フラグメント２、２１．２ｍｇ／ｍｌを含む０．
１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）２４．１ｍｌにノイラミ
ニダーゼ（シグマ社製）２０Ｕ／ｍｌを含む同緩衝液
１．５ｍｌを加え、３７℃、２４時間インキュベートし
た後、０．１Ｍ重炭酸アンモニウムにて平衡化したセフ
ァデックスＧ−５０（ファルマシア社製）を充填したカ
ラム（５×８８ｃｍ）を用いてゲル濾過した。各画分の
ヒアルロニダーゼ阻害活性を測定し、ヒアルロニダーゼ
阻害活性画分を集めて凍結乾燥し、フラグメント３とし
た。フラグメント３、１０ｍｇ／ｍｌを含む０．１５Ｍ
塩化ナトリウム添加５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）
４０ｍｌにヒアルロニダーゼ（スプラーゼ；持田製薬社
製）１０００００Ｕ／ｍｌを含む同緩衝液１．２ｍｌを
加え、３７℃、２４時間インキュベート、ついで、沸騰
水浴上で、１０分間加熱した後、０．１Ｍ重炭酸アンモ
ニウムにて平衡化したバイオゲルＰ−６（バイオラッド
社製）を充填したカラム（２．６×１００ｃｍ）を用い
てゲル濾過した。各画分のヒアルロニダーゼ阻害活性を
測定し、分子量５００〜１５００のヒアルロニダーゼ阻
害画分を集めて凍結乾燥した。凍結乾燥粉末１５０ｍｇ
を超純水３．０ｍｌにて溶解し、超純水にて平衡化し、
高速液体クロマトグラフィーシステム（ＡＬＣ／ＧＰＣ
２０４，ウォータース社製）に装着させたモノＱ（ファ
ルマシア社製）を充填したカラム（１．０×１０ｃｍ）
に吸着させた後、０−０．２Ｍ塩化ナトリウムによる直
線濃度勾配溶出を行なった。０．０７５Ｍ塩化ナトリウ
ム溶出画分をバイオゲルＰ−２（バイオラッド社製）を
充填したカラムにて脱塩した後、凍結乾燥し、本発明の
オリゴ糖である表題化合物７７．６ｍｇを得た（フラグ
メント３からの収率；１９．４％）。 分子量：７７６

【０１０７】ウロン酸含量およびガラクトサミン含量
を、以下の方法で測定した。得られた表題化合物５０も
しくは１００μｇ／ｍｌを含む超純水０．５ｍｌに０．
０２５Ｍホウ酸ナトリウムを含む硫酸２．５ｍｌを加
え、沸騰水浴上で、１０分間、さらに、カルバゾール
１．２５ｍｇ／ｍｌを含む無水メタノール０．１ｍｌを
加え、１５分間加熱した後、波長５３０ｎｍにおける吸
光度を測定し、Ｄ−グルクロン酸４〜４０μｇ／ｍｌを
含む超純水を標準物質とした時の吸光度より、ウロン酸
含量を算出した。表題化合物０．２ｍｇに６Ｍ塩酸０．
４ｍｌを加え、減圧封管中、１１０℃、６時間加熱し
た。塩酸を減圧留去し、残渣を超純水０．５ｍｌに溶解
した後、アミノ酸自動分析機を用いて、ガラクトサミン
含量を測定した。測定結果は以下の通りであった。 ［結果］ウロン酸含量（％）：４４．５ ガラクトサミン含量（％）：４８．８ ウロン酸について、以下の確認試験を行った。得られた
表題化合物０．５ｍｇに４Ｍ塩酸０．２ｍｌを加え、減
圧封管中、１１０℃、６時間加熱した。塩酸を減圧留去
し、超純水０．１ｍｌに溶解した後、その液１０μｌを
用い、ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４４：１６：４０を
展開液として、シリカゲル薄層クロマトグラフィーを行
った後、アニスアルデヒド−硫酸発色法によって、糖の
検出を行った。得られた結果を以下にＲｆ値として示し
た。なお、標準物質として、Ｄ−ガラクトサミン（シグ
マ社製）、Ｄ−ガラクツロン酸（半井化学社製）、Ｄ−
グルクロン酸（半井化学社製）およびＤ−グルクロノラ
クトン（半井化学社製）を用いた。 表題化合物０．２４（Ｄ−グルクロン酸） ０．３２（Ｄ−ガラクトサミン） ０．４３（Ｄ−グルクロノラクトン） 標準物質 Ｄ−グルクロン酸：０．２４ Ｄ−ガラクトサミン：０．３１ Ｄ−ガラクツロン酸：０．２６ Ｄ−グルクロノラクトン：０．４４

【０１０８】実施例８： Ｏ−２−アセタミド−２−デオキシ−β−Ｄ−ガラクト
ピラノシル−（１→４）−Ｏ−β−Ｄ−グルコピランウ
ロノシル−（１→３）−２−アセタミド−２−デオキシ
−Ｄ−ガラクトピラノース；［ＧａｌＮＡｃ（β１−
４）ＧｌｃＡ（β１−３）ＧａｌＮＡｃ］の製造 実施例７の化合物１０．５ｍｇ／ｍｌを含む０．１Ｍ酢
酸緩衝液（ｐＨ５．０）５２２５μｌにβ−グルクロニ
ダーゼ（シグマ社製）１０００００Ｕ／ｍｌを含む同緩
衝液２７５μｌを加え、３７℃、４８時間インキュベー
トした後、０．１Ｍ重炭酸アンモニウムにて平衡化した
バイオゲルＰ−２（バイオラッド社製）を充填したカラ
ム（２．６×１００ｃｍ）を用いてゲル濾過し、分子量
８００〜４００の画分を集めて凍結乾燥した。凍結乾燥
粉末４０ｍｇを超純水０．８ｍｌにて溶解し、超純水に
て平衡化し、高速液体クロマトグラフィーシステム（Ａ
ＬＣ／ＧＰＣ ２０４、ウォータース社製）に装着させ
たポリアニオンＳＩ（ファルマシア社製）を充填したカ
ラム（０．５×５．０ｃｍ）に吸着させた後、０−０．
２Ｍ塩化ナトリウムによる直線濃度勾配溶出を行なっ
た。０．１Ｍ塩化ナトリウム溶出画分をバイオゲルＰ−
２（バイオラッド社製）を充填したカラムを用いて脱塩
した後、凍結乾燥し、本発明のオリゴ糖である表題化合
物を得た（実施例７の化合物からの収率；３４．７
％）。 分子量：６００ 実施例７と同様の方法により、ウロン酸含量およびガラ
クトサミン含量を測定した。 ウロン酸含量（％）：２５．２ ガラクトサミン含量（％）：６４．８

【０１０９】実施例９： Ｏ−β−Ｄ−グルコピランウロノシル−（１→３）−２
−アセタミド−２−デオキシ−Ｄ−ガラクトピラノー
ス；［ＧｌｃＡ（β１−３）ＧａｌＮＡｃ］の製造 実施例８の化合物３ｍｇ／ｍｌを含む超純水６０μｌに
Ｎ−アセチル−β−ヘキソサミニダーゼ１２５Ｕ／ｍｌ
を含む０．１Ｍクエン酸−燐酸緩衝液（ｐＨ４．０）２
４０μｌを加え、３７℃、４８時間インキュベートした
後、０．１Ｍ重炭酸アンモニウムにて平衡化したバイオ
ゲルＰ−２（バイオラッド社製）を充填したカラム
（２．６×１００ｃｍ）を用いてゲル濾過した。分子量
２００〜６００の画分を集めて凍結乾燥し、本発明のオ
リゴ糖である表題化合物を得た（実施例８の化合物から
の収率；５０．０％）。 分子量：３９７ 実施例７と同様の方法により、ウロン酸含量およびガラ
クトサミン含量を測定した。 ウロン酸含量（％）：３９．８ ガラクトサミン含量（％）：３５．４

【０１１０】次に、本発明の化合物を含有する製剤の実
施例を実施例Ａ〜Ｄにおいて示すが、本発明は以下の実
施例に限定されるものではない。各実施例Ａ〜Ｄに用い
られる本発明のオリゴ誘導体である化合物は、上述の実
施例１、７、８、９の表題化合物である。

【０１１１】実施例Ａ：錠剤 実施例７の化合物 １０ｇ ポリエチレングリコール６０００ １０ｇ ラウリル硫酸ナトリウム １．５ｇ コーンスターチ ３ｇ 乳糖 ２５ｇ ステアリン酸マグネシウム ０．５ｇ 上記成分を秤量した後、ポリエチレングリコール６００
０を７０〜８０℃に加温し、これに実施例７の化合物、
ラウリル硫酸ナトリウム、コーンスターチおよび乳糖を
加え混合後そのまま冷却する。固化した混合物を粉砕器
にかけ造粒する。本顆粒をステアリン酸マグネシウムと
混合後圧縮打錠して重量２５０ｍｇの錠剤とする。

【０１１２】実施例Ｂ：錠剤 実施例８の化合物 ３０ｇ 乳糖 ５５ｇ ポテト澱粉 １２ｇ ポリビニルアルコール １．５ｇ ステアリン酸マグネシウム １．５ｇ 上記成分を秤量した後、実施例８の化合物、乳糖、ポテ
ト澱粉を均一に混合する。この混合物にポリビニルアル
コールの水溶液を加え、湿式顆粒造粒法により顆粒を調
製する。この顆粒を乾燥し、ステアリン酸マグネシウム
を混合した後圧縮打錠して重量２００ｍｇの錠剤とす
る。

【０１１３】実施例Ｃ：カプセル剤 実施例１の化合物 １０ｇ 乳糖 ２５ｇ コーンスターチ ５ｇ 微結晶セルロース ９．５ｇ ステアリン酸マグネシウム ０．５ｇ 上記成分をそれぞれ秤量した後、ステアリン酸マグネシ
ウム以外の４成分を均一に混合する。ステアリン酸マグ
ネシウムを加えた後さらに数分間混合する。混合粉体を
Ｎｏ．１のハードカプセルに２００ｍｇずつ充填し、カ
プセル剤とする。

【０１１４】実施例Ｄ：散剤 実施例９の化合物 ２０ｇ 乳糖 ７９ｇ ステアリン酸マグネシウム １ｇ 上記成分をそれぞれ秤量した後、均一に混合して２０％
散剤とする。

【０１１５】実施例Ｅ：坐剤 実施例１の化合物 １００ｇ ポリエチレングリコール１５００ １８０ｇ ポリエチレングリコール４０００ ７２０ｇ 実施例１の化合物を乳鉢でよく研磨して微細な粉末とし
た後、熔融法によって１ｇの直腸坐剤とする。

【０１１６】実施例Ｆ：注射剤 実施例８の化合物 ０．１ｇ 塩化ナトリウム ０．９ｇ 水酸化ナトリウム 適量 注射用滅菌蒸留水 １００ｍｌ 上記成分をそれぞれ秤量した後、注射用滅菌蒸留水に溶
解し、濾過滅菌後１０ｍｌアンプルに５ｍｌずつ分注
し、熔封して注射剤とする。

【０１１７】

【発明の効果】本発明のオリゴ誘導体は、強力なヒアル
ロニダーゼ阻害作用を示し、また、ラット肥満細胞から
のヒスタミン遊離抑制作用、ラットおよびモルモットに
おけるアナフィラキシー気道収縮抑制作用、マウスＰＣ
Ａ反応抑制作用など、炎症、アレルギーおよび喘息など
の実験動物モデルにおいて顕著な治療効果を示し、安全
性も高い。従って、これらのオリゴ誘導体は、慢性関節
リウマチ、変形性関節症、腰痛症、気管支喘息、結膜
炎、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、過敏症、枯
草熱（花粉症）、血管神経性浮腫、蕁麻疹、中耳炎、ア
レルギー性胃腸炎、食物アレルギーおよび薬物アレルギ
ーなどの各種炎症性疾患およびアレルギー性疾患の治療
に極めて有用である。また、本発明は、このような優れ
たオリゴ誘導体を製造するうえで有用な製造方法を提供
するものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 // Ｃ０７Ｈ 13/06 15/10 (72)発明者 西 島 和 三 東京都新宿区四谷一丁目７番地 持田製薬 株式会社内

Claims (24)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記式（Ｉ）で表される構成単糖単位２〜
   ８個からなる、グルクロン酸誘導体およびガラクトサミ
   ン誘導体を有するオリゴ糖、該オリゴ糖の塩、溶媒和物
   または塩の溶媒和物。式（Ｉ） 【化１】 ［式（Ｉ）中、Ｒ¹ は水素原子、保護基または下記式
   （ＩＩ）を表す。（ただし、Ｒ¹ が水素原子または保護
   基である場合、ＯＲ¹ はグルクロン酸誘導体のＣＯＯＲ
   ⁴ に対してトランス結合またはシス結合であってもよ
   い。また、Ｒ¹ が式（ＩＩ）である場合、式（ＩＩ） 【化２】 式（ＩＩ）中、Ｒ¹⁰、Ｒ¹²およびＲ¹³は同一または異な
   って水素原子または保護基を表し、Ｒ¹¹は、アジド基ま
   たは下記式（ＩＩＩ）を表す。式（ＩＩＩ） 【化３】 式（ＩＩＩ）中、Ｒ¹⁴およびＲ¹⁵は、同一または異なっ
   て水素原子または保護基を表す）：式（Ｉ）中、Ｒ² か
   らＲ⁸ は同一または異なって水素原子または保護基を表
   す：式（Ｉ）中、Ｒ⁹は、水素原子、保護基または下記
   式（ＩＶ）を表す。式（ＩＶ） 【化４】 （式（ＩＶ）中、Ｒ¹⁶からＲ¹⁹は同一または異なって水
   素原子または保護基を表す）：式（Ｉ）中、ｎは０から
   ４の整数を表す。（ただし、ｎが０のとき、Ｒ¹は式
   （ＩＩ）で表される基であり、Ｒ⁹は式（ＩＶ）で表さ
   れる基である。ｎが４のとき、Ｒ¹およびＲ⁹は同一また
   は異なって水素原子または保護基である。）：式（Ｉ）
   〜（ＩＶ）中、保護基は互いに同一または異なっていて
   もよく、置換されていてもよい炭素原子数１から８の直
   鎖または分枝鎖のアルキル、置換されていてもよい炭素
   原子数２から８の直鎖または分枝鎖のアルケニル、置換
   されていてもよい炭素原子数１から８の直鎖または分枝
   鎖のアシル、置換されていてもよい芳香族アシル、また
   は、置換されていてもよい芳香族アルキルである。また
   さらに、Ｒ¹¹を除くＲ¹ からＲ¹⁹の任意の保護基２つが
   一緒になって、置換されていてもよい炭素原子数３から
   ８のアルキリデン、置換されていてもよい炭素原子数３
   から８の環状アルキリデン、置換されていてもよいベン
   ジリデン、または、置換されていてもよいフタロイルで
   ある。］
2. 【請求項２】前記式（Ｉ）〜（ＩＶ）において、Ｒ¹が
   水素原子または前記式（ＩＩ）で表される基であり、Ｒ
   ²からＲ⁴およびＲ⁶からＲ⁸が水素原子であり、Ｒ⁹が水
   素原子または前記式（ＩＶ）で表される基であり、
   Ｒ¹⁰、Ｒ¹²、Ｒ¹³およびＲ¹⁵からＲ¹⁹が水素原子であ
   り、Ｒ⁵およびＲ¹⁴がアセチル基である請求項１に記載
   のグルクロン酸誘導体およびガラクトサミン誘導体を有
   するオリゴ糖、該オリゴ糖の塩、溶媒和物または塩の溶
   媒和物。
3. 【請求項３】前記構成単糖単位が２個である請求項１に
   記載のグルクロン酸誘導体およびガラクトサミン誘導体
   を有するオリゴ糖、該オリゴ糖の塩、溶媒和物または塩
   の溶媒和物。
4. 【請求項４】前記構成単糖単位が３個である請求項１に
   記載のグルクロン酸誘導体およびガラクトサミン誘導体
   を有するオリゴ糖、該オリゴ糖の塩、溶媒和物または塩
   の溶媒和物。
5. 【請求項５】前記構成単糖単位が４個である請求項１に
   記載のグルクロン酸誘導体およびガラクトサミン誘導体
   を有するオリゴ糖、該オリゴ糖の塩、溶媒和物または塩
   の溶媒和物。
6. 【請求項６】前記式（Ｉ）において、Ｒ⁹が水素原子ま
   たは保護基であり、ｎが１である請求項１に記載のグル
   クロン酸誘導体およびガラクトサミン誘導体を有するオ
   リゴ糖、該オリゴ糖の塩、溶媒和物または塩の溶媒和
   物。
7. 【請求項７】前記式（Ｉ）において、Ｒ¹からＲ⁴および
   Ｒ⁶からＲ⁹が水素原子であり、Ｒ⁵がアセチル基である
   請求項６に記載のグルクロン酸誘導体およびガラクトサ
   ミン誘導体を有するオリゴ糖、該オリゴ糖の塩、溶媒和
   物または塩の溶媒和物。
8. 【請求項８】前記式（Ｉ）において、Ｒ¹が下記式
   （Ｖ）：式（Ｖ） 【化５】 で表される基であり、Ｒ²からＲ⁴およびＲ⁶からＲ⁹が水
   素原子であり、Ｒ⁵がアセチル基である請求項６に記載
   のグルクロン酸誘導体およびガラクトサミン誘導体を有
   するオリゴ糖、該オリゴ糖の塩、溶媒和物または塩の溶
   媒和物。
9. 【請求項９】請求項１に記載のオリゴ糖、該オリゴ糖の
   塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも１つの有
   効成分とするヒアロニダーゼ阻害剤。
10. 【請求項１０】請求項２に記載のオリゴ糖、該オリゴ糖
    の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも１つの
    有効成分とするヒアルロニダーゼ阻害剤。
11. 【請求項１１】請求項３に記載のオリゴ糖、該オリゴ糖
    の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも１つの
    有効成分とするヒアルロニダーゼ阻害剤。
12. 【請求項１２】請求項４に記載のオリゴ糖、該オリゴ糖
    の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも１つの
    有効成分とするヒアルロニダーゼ阻害剤。
13. 【請求項１３】請求項５に記載のオリゴ糖、該オリゴ糖
    の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも１つの
    有効成分とするヒアルロニダーゼ阻害剤。
14. 【請求項１４】請求項６に記載のオリゴ糖、該オリゴ糖
    の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも１つの
    有効成分とするヒアルロニダーゼ阻害剤。
15. 【請求項１５】請求項７に記載のオリゴ糖、該オリゴ糖
    の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも１つの
    有効成分とするヒアルロニダーゼ阻害剤。
16. 【請求項１６】請求項８に記載のオリゴ糖、該オリゴ糖
    の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも１つの
    有効成分とするヒアルロニダーゼ阻害剤。
17. 【請求項１７】請求項１に記載のオリゴ糖、該オリゴ糖
    の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも１つの
    有効成分とするアレルギー性疾患治療剤および抗炎症
    剤。
18. 【請求項１８】請求項２に記載のオリゴ糖、該オリゴ糖
    の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも１つの
    有効成分とするアレルギー性疾患治療剤および抗炎症
    剤。
19. 【請求項１９】請求項３に記載のオリゴ糖、該オリゴ糖
    の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも１つの
    有効成分とするアレルギー性疾患治療剤および抗炎症
    剤。
20. 【請求項２０】請求項４に記載のオリゴ糖、該オリゴ糖
    の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも１つの
    有効成分とするアレルギー性疾患治療剤および抗炎症
    剤。
21. 【請求項２１】請求項５に記載のオリゴ糖、該オリゴ糖
    の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも１つの
    有効成分とするアレルギー性疾患治療剤および抗炎症
    剤。
22. 【請求項２２】請求項６に記載のオリゴ糖、該オリゴ糖
    の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも１つの
    有効成分とするアレルギー性疾患治療剤および抗炎症
    剤。
23. 【請求項２３】請求項７に記載のオリゴ糖、該オリゴ糖
    の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも１つの
    有効成分とするアレルギー性疾患治療剤および抗炎症
    剤。
24. 【請求項２４】請求項８に記載のオリゴ糖、該オリゴ糖
    の塩、溶媒和物または塩の溶媒和物を少なくとも１つの
    有効成分とするアレルギー性疾患治療剤および抗炎症
    剤。