JP2001026602A - エンドトキシンショック抑制剤 - Google Patents
エンドトキシンショック抑制剤Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 エンドトキシンショックを効果的に抑制でき
るエンドトキシンショック抑制剤を提供する。 【解決手段】 ケラタン硫酸オリゴ糖又はその誘導体を
有効成分とする。ケラタン硫酸オリゴ糖は、好ましく
は、少なくとも下記式で表される二糖を繰返し構成単位
として１単位以上含むことを特徴とする。 Gal(6S)-GlcNAc(6S) （式中、Galはガラクトース残基を、GlcNAcはＮ−アセ
チルグルコサミン残基を、6Sは6位のヒドロキシル基が6
-O-硫酸エステルとなっていることを、-はグリコシド結
合をそれぞれ表す）
るエンドトキシンショック抑制剤を提供する。 【解決手段】 ケラタン硫酸オリゴ糖又はその誘導体を
有効成分とする。ケラタン硫酸オリゴ糖は、好ましく
は、少なくとも下記式で表される二糖を繰返し構成単位
として１単位以上含むことを特徴とする。 Gal(6S)-GlcNAc(6S) （式中、Galはガラクトース残基を、GlcNAcはＮ−アセ
チルグルコサミン残基を、6Sは6位のヒドロキシル基が6
-O-硫酸エステルとなっていることを、-はグリコシド結
合をそれぞれ表す）
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、エンドトキシンシ
ョック抑制剤に関する。
ョック抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】エンドトキシンショックは、敗血症など
の重篤な細菌感染症などが原因となって感染菌によって
産生されるエンドトキシン（リポ多糖；以下、ＬＰＳと
もいう）の作用によって引き起こされるショックであ
る。
の重篤な細菌感染症などが原因となって感染菌によって
産生されるエンドトキシン（リポ多糖；以下、ＬＰＳと
もいう）の作用によって引き起こされるショックであ
る。
【０００３】エンドトキシンショックの治療剤として
は、副腎皮質ステロイド剤、抗生物質、抗凝固剤、スル
ファチドナトリウムなどが知られている。
は、副腎皮質ステロイド剤、抗生物質、抗凝固剤、スル
ファチドナトリウムなどが知られている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、エンドトキ
シンショックを効果的に抑制できるエンドトキシン抑制
剤を提供することを目的とする。
シンショックを効果的に抑制できるエンドトキシン抑制
剤を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、ケラタン
硫酸オリゴ糖およびその誘導体にエンドトキシンショッ
クを抑制する作用があることを見い出し、本発明を完成
した。
硫酸オリゴ糖およびその誘導体にエンドトキシンショッ
クを抑制する作用があることを見い出し、本発明を完成
した。
【０００６】本発明は、ケラタン硫酸オリゴ糖またはそ
の誘導体を有効成分とする、エンドトキシンショック抑
制剤（以下、本発明抑制剤ともいう）を提供する。
の誘導体を有効成分とする、エンドトキシンショック抑
制剤（以下、本発明抑制剤ともいう）を提供する。
【０００７】本発明抑制剤においては、ケラタン硫酸オ
リゴ糖は、好ましくは、少なくとも下記式で表される二
糖を繰返し構成単位として１単位以上含む。 Gal(6S)-GlcNAc(6S) （式中、Galはガラクトース残基を、GlcNAcはＮ−アセ
チルグルコサミン残基を、6Sは6位のヒドロキシル基が6
-O-硫酸エステルとなっていることを、-はグリコシド結
合をそれぞれ表す）
リゴ糖は、好ましくは、少なくとも下記式で表される二
糖を繰返し構成単位として１単位以上含む。 Gal(6S)-GlcNAc(6S) （式中、Galはガラクトース残基を、GlcNAcはＮ−アセ
チルグルコサミン残基を、6Sは6位のヒドロキシル基が6
-O-硫酸エステルとなっていることを、-はグリコシド結
合をそれぞれ表す）
【０００８】さらに好ましくは、ケラタン硫酸オリゴ糖
は、下記式(1)および(2)で表されるものから選ばれるも
のである。
は、下記式(1)および(2)で表されるものから選ばれるも
のである。
【化３】 Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S) 式(1) Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S) 式(2) （式中、Galはガラクトース残基を、GlcNAcはＮ−アセ
チルグルコサミン残基を、6Sは6位のヒドロキシル基が6
-O-硫酸エステルとなっていることを、β1-4はβ1,4グ
リコシド結合を、β1-3はβ1,3グリコシド結合をそれぞ
れ表す）
チルグルコサミン残基を、6Sは6位のヒドロキシル基が6
-O-硫酸エステルとなっていることを、β1-4はβ1,4グ
リコシド結合を、β1-3はβ1,3グリコシド結合をそれぞ
れ表す）
【０００９】本発明抑制剤において、ケラタン硫酸オリ
ゴ糖の誘導体は、好ましくは、式(3)で示されるもので
ある。
ゴ糖の誘導体は、好ましくは、式(3)で示されるもので
ある。
【化４】 （式中、Ｘ1〜Ｘ5は、それぞれ独立して、水素原子また
はアシル基であり、Ｘ1〜Ｘ5の少なくとも一つはアシル
基であり、Ｍは、それぞれ独立して、水素原子、又は電
離していてもよい１もしくは２価の金属もしくは１価の
塩基であり、波線で示した結合はα−グリコシド配位ま
たはβ−グリコシド配位を示す。）
はアシル基であり、Ｘ1〜Ｘ5の少なくとも一つはアシル
基であり、Ｍは、それぞれ独立して、水素原子、又は電
離していてもよい１もしくは２価の金属もしくは１価の
塩基であり、波線で示した結合はα−グリコシド配位ま
たはβ−グリコシド配位を示す。）
【００１０】一般式(3)において、好ましくは、Ｘ1〜Ｘ
5がいずれも炭素数１〜１０のアシル基であり、Ｍがア
ルカリ金属である。
5がいずれも炭素数１〜１０のアシル基であり、Ｍがア
ルカリ金属である。
【００１１】
【発明の実施の形態】本発明抑制剤において用いる「ケ
ラタン硫酸オリゴ糖」は、ケラタン硫酸の基本構造（ガ
ラクトース残基またはガラクトース−６−Ｏ−硫酸残基
と、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−Ｏ−硫酸残基とが
交互にグリコシド結合した構造）を少なくとも含む二糖
以上のオリゴ糖である限りにおいて特に限定されない。
ケラタン硫酸オリゴ糖は、例えばケラタン硫酸を分解し
て得られる生成物であってもよく、また例えばＮ−アセ
チルラクトサミン等を硫酸化して得られる生成物であっ
てもよい。
ラタン硫酸オリゴ糖」は、ケラタン硫酸の基本構造（ガ
ラクトース残基またはガラクトース−６−Ｏ−硫酸残基
と、Ｎ−アセチルグルコサミン−６−Ｏ−硫酸残基とが
交互にグリコシド結合した構造）を少なくとも含む二糖
以上のオリゴ糖である限りにおいて特に限定されない。
ケラタン硫酸オリゴ糖は、例えばケラタン硫酸を分解し
て得られる生成物であってもよく、また例えばＮ−アセ
チルラクトサミン等を硫酸化して得られる生成物であっ
てもよい。
【００１２】このようなケラタン硫酸オリゴ糖の中で
も、ケラタン硫酸を分解して得られるオリゴ糖（ケラタ
ン硫酸由来のオリゴ糖）が好ましく、ケラタン硫酸をエ
ンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ型ケラタン
硫酸分解酵素で分解して得られる分解生成物がより好ま
しい。
も、ケラタン硫酸を分解して得られるオリゴ糖（ケラタ
ン硫酸由来のオリゴ糖）が好ましく、ケラタン硫酸をエ
ンド−β−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼ型ケラタン
硫酸分解酵素で分解して得られる分解生成物がより好ま
しい。
【００１３】なお、このケラタン硫酸オリゴ糖は、シア
ル酸残基及び／又はフコース残基を含んでいてもよい。
通常には、シアル酸残基は、α２，３又はα２，６グリ
コシド結合でガラクトース残基に結合し、フコース残基
は、α１，３グリコシド結合でＮ−アセチルグルコサミ
ン残基に結合する。
ル酸残基及び／又はフコース残基を含んでいてもよい。
通常には、シアル酸残基は、α２，３又はα２，６グリ
コシド結合でガラクトース残基に結合し、フコース残基
は、α１，３グリコシド結合でＮ−アセチルグルコサミ
ン残基に結合する。
【００１４】通常には、ケラタン硫酸オリゴ糖は、硫酸
化されたＮ−アセチルグルコサミン残基を還元末端に有
する二〜十糖のオリゴ糖であり、Ｎ−アセチルグルコサ
ミン残基の６位のヒドロキシル基が硫酸化されているも
のが好ましく、ガラクトース残基の６位のヒドロキシル
基およびＮ−アセチルグルコサミン残基の６位の両方が
硫酸化されているものがより好ましい。
化されたＮ−アセチルグルコサミン残基を還元末端に有
する二〜十糖のオリゴ糖であり、Ｎ−アセチルグルコサ
ミン残基の６位のヒドロキシル基が硫酸化されているも
のが好ましく、ガラクトース残基の６位のヒドロキシル
基およびＮ−アセチルグルコサミン残基の６位の両方が
硫酸化されているものがより好ましい。
【００１５】さらに好ましくは、ケラタン硫酸オリゴ糖
は、少なくとも、Gal(6S)-GlcNAc(6S)（式中、Galはガ
ラクトース残基を、GlcNAcはＮ−アセチルグルコサミン
残基を、6Sは6位のヒドロキシル基が6-O-硫酸エステル
となっていることを、-はグリコシド結合をそれぞれ表
す）で表される二糖を繰返し構成単位として１単位以上
含むケラタン硫酸オリゴ糖である。
は、少なくとも、Gal(6S)-GlcNAc(6S)（式中、Galはガ
ラクトース残基を、GlcNAcはＮ−アセチルグルコサミン
残基を、6Sは6位のヒドロキシル基が6-O-硫酸エステル
となっていることを、-はグリコシド結合をそれぞれ表
す）で表される二糖を繰返し構成単位として１単位以上
含むケラタン硫酸オリゴ糖である。
【００１６】さらに好ましくは、前記ケラタン硫酸オリ
ゴ糖は、式(1)で表されるオリゴ糖（以下、Ｌ４Ｌ４と
もいう）及び式(2)で表されるオリゴ糖（以下、Ｌ４と
もいう）から選ばれる。
ゴ糖は、式(1)で表されるオリゴ糖（以下、Ｌ４Ｌ４と
もいう）及び式(2)で表されるオリゴ糖（以下、Ｌ４と
もいう）から選ばれる。
【化５】 Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S) 式(1) Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S) 式(2) （式中、Galはガラクトース残基を、GlcNAcはＮ−アセ
チルグルコサミン残基を、6Sは6位のヒドロキシル基が6
-O-硫酸エステルとなっていることを、β1-4はβ1,4グ
リコシド結合を、β1-3はβ1,3グリコシド結合をそれぞ
れ表す）
チルグルコサミン残基を、6Sは6位のヒドロキシル基が6
-O-硫酸エステルとなっていることを、β1-4はβ1,4グ
リコシド結合を、β1-3はβ1,3グリコシド結合をそれぞ
れ表す）
【００１７】本発明に用いられるケラタン硫酸オリゴ糖
は、電離した状態のもの、プロトンが付加した構造のも
のを包含する。またケラタン硫酸オリゴ糖の薬学的に許
容される塩も包含する。
は、電離した状態のもの、プロトンが付加した構造のも
のを包含する。またケラタン硫酸オリゴ糖の薬学的に許
容される塩も包含する。
【００１８】本明細書において、ケラタン硫酸オリゴ糖
の「誘導体」とは、ケラタン硫酸オリゴ糖のヒドロキシ
ル基の水素原子の少なくとも一つ（好ましくは１０％以
上）がＯ−アシル基により置換されたもの（部分または
完全Ｏ−アシル化誘導体）を意味し、その薬学的に許容
される塩も包含される。
の「誘導体」とは、ケラタン硫酸オリゴ糖のヒドロキシ
ル基の水素原子の少なくとも一つ（好ましくは１０％以
上）がＯ−アシル基により置換されたもの（部分または
完全Ｏ−アシル化誘導体）を意味し、その薬学的に許容
される塩も包含される。
【００１９】薬学的に許容される塩とは、例えば、ナト
リウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のアルカリ金属
塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アンモニウ
ム塩等の無機塩基との塩、またはジエタノールアミン
塩、シクロヘキシルアミン塩、アミノ酸塩等の有機塩基
との塩のうち、薬学的に許容されるものであるが、これ
らに限定されるものではない。
リウム塩、カリウム塩、リチウム塩等のアルカリ金属
塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アンモニウ
ム塩等の無機塩基との塩、またはジエタノールアミン
塩、シクロヘキシルアミン塩、アミノ酸塩等の有機塩基
との塩のうち、薬学的に許容されるものであるが、これ
らに限定されるものではない。
【００２０】ケラタン硫酸オリゴ糖のヒドロキシル基の
水素原子を置換するアシル基は、好ましくは炭素数１〜
１０のアシル基、より好ましくは炭素数１〜１０の脂肪
族又は芳香族のアシル基、すなわちヘテロ原子を含むこ
ともあるアルカノイル基又はアロイル基であり、その例
としては、アセチル、クロロアセチル、ジクロロアセチ
ル、トリフルオロアセチル、メトキシアセチル、プロピ
オニル、ｎ−ブチリル、（Ｅ）−２−メチルブテノイ
ル、イソブチリル、ペンタノイル、ベンゾイル、ｏ−
（ジブロモメチル）ベンゾイル、ｏ−（メトキシカルボ
ニル）ベンゾイル、２，４，６−トリメチルベンゾイ
ル、ｐ−トルオイル、ｐ−アニソイル、ｐ−クロロベン
ゾイル、ｐ−ニトロベンゾイルなどの基が挙げられる。
ケラタン硫酸オリゴ糖が複数のアシル基を有する場合に
は、それらのアシル基は互いに同一でも異なっていても
よい。
水素原子を置換するアシル基は、好ましくは炭素数１〜
１０のアシル基、より好ましくは炭素数１〜１０の脂肪
族又は芳香族のアシル基、すなわちヘテロ原子を含むこ
ともあるアルカノイル基又はアロイル基であり、その例
としては、アセチル、クロロアセチル、ジクロロアセチ
ル、トリフルオロアセチル、メトキシアセチル、プロピ
オニル、ｎ−ブチリル、（Ｅ）−２−メチルブテノイ
ル、イソブチリル、ペンタノイル、ベンゾイル、ｏ−
（ジブロモメチル）ベンゾイル、ｏ−（メトキシカルボ
ニル）ベンゾイル、２，４，６−トリメチルベンゾイ
ル、ｐ−トルオイル、ｐ−アニソイル、ｐ−クロロベン
ゾイル、ｐ−ニトロベンゾイルなどの基が挙げられる。
ケラタン硫酸オリゴ糖が複数のアシル基を有する場合に
は、それらのアシル基は互いに同一でも異なっていても
よい。
【００２１】ケラタン硫酸オリゴ糖の還元末端糖の１位
のヒドロキシル基の水素原子がアシル基により置換され
ている場合、そのＯ−アシル基の配位は、α−グリコシ
ド配位またはβ−グリコシド配位のいずれでもよいが、
α−グリコシド配位であることが好ましい。
のヒドロキシル基の水素原子がアシル基により置換され
ている場合、そのＯ−アシル基の配位は、α−グリコシ
ド配位またはβ−グリコシド配位のいずれでもよいが、
α−グリコシド配位であることが好ましい。
【００２２】アシル化されたケラタン硫酸オリゴ糖は、
有機溶媒、脂質に対する溶解性の向上、生体膜透過性の
増大、経口投与した場合の消化管吸収量の増大等の利点
を有する。
有機溶媒、脂質に対する溶解性の向上、生体膜透過性の
増大、経口投与した場合の消化管吸収量の増大等の利点
を有する。
【００２３】本発明抑制剤において、ケラタン硫酸オリ
ゴ糖の誘導体は、好ましくは、上記式(3)で示されるも
のである。なお、上記式(3)においてＭは、それぞれ独
立して、水素原子、又は電離していてもよい１もしくは
２価の金属もしくは１価の塩基であり、電離している場
合は、スルホン酸基はマイナスイオンの状態になる。さ
らに好ましくは、Ｘ1〜Ｘ5のすべてがアセチル基であ
る。特に好ましいものは、下記式(4)で示される誘導体
である。
ゴ糖の誘導体は、好ましくは、上記式(3)で示されるも
のである。なお、上記式(3)においてＭは、それぞれ独
立して、水素原子、又は電離していてもよい１もしくは
２価の金属もしくは１価の塩基であり、電離している場
合は、スルホン酸基はマイナスイオンの状態になる。さ
らに好ましくは、Ｘ1〜Ｘ5のすべてがアセチル基であ
る。特に好ましいものは、下記式(4)で示される誘導体
である。
【化６】 （式中、Ａｃはアセチル基、波線で示した結合は、α−
グリコシド配位またはβ−グリコシド配位を示す。）
グリコシド配位またはβ−グリコシド配位を示す。）
【００２４】本発明抑制剤中に含有されるケラタン硫酸
オリゴ糖またはその誘導体は、単一の種からなっていて
も、混合物であってもよい。例えば上記式(4)中の波線
で示した部分がα−グリコシド配位である物質の精製品
であってもよく、β−グリコシド配位である物質の精製
品であってもよく、これらの混合物であってもよい。
オリゴ糖またはその誘導体は、単一の種からなっていて
も、混合物であってもよい。例えば上記式(4)中の波線
で示した部分がα−グリコシド配位である物質の精製品
であってもよく、β−グリコシド配位である物質の精製
品であってもよく、これらの混合物であってもよい。
【００２５】本発明に使用されるケラタン硫酸オリゴ糖
は、例えばケラタン硫酸、好ましくは高硫酸化ケラタン
硫酸の緩衝溶液にエンド-β-N-アセチルグルコサミニダ
ーゼ型ケラタン硫酸分解酵素、例えばバチルス属細菌由
来のケラタナーゼ（II）（特開平２−５７１８２号公
報）、またはバチルス・サーキュランスＫｓＴ２０２株
由来のケラタン硫酸分解酵素（国際公開第WO96/16166
号）を作用させて分解した後、得られた分解物を分画す
ることにより得ることができる。得られたオリゴ糖は通
常の分離精製方法、例えば、エタノール沈殿による濃
縮、ゲル濾過および陰イオン交換クロマトグラフィーに
よる分離精製法により、目的のオリゴ糖を分離精製する
ことができる。このような製造方法の例は、国際公開第
WO96/16973号に記載されている。なお、原料となるケラ
タン硫酸は、主としてガラクトースまたはガラクトース
−６−Ｏ−硫酸とＮ−アセチルグルコサミン−６−Ｏ−
硫酸との二糖の繰り返し構造で構成され、動物種および
器官などによって硫酸含量が異なっているが、通常はサ
メなどの軟骨魚類、クジラ、ウシなどの哺乳動物の軟
骨、骨や角膜などの生原料から製造されるものを用いる
ことができる。
は、例えばケラタン硫酸、好ましくは高硫酸化ケラタン
硫酸の緩衝溶液にエンド-β-N-アセチルグルコサミニダ
ーゼ型ケラタン硫酸分解酵素、例えばバチルス属細菌由
来のケラタナーゼ（II）（特開平２−５７１８２号公
報）、またはバチルス・サーキュランスＫｓＴ２０２株
由来のケラタン硫酸分解酵素（国際公開第WO96/16166
号）を作用させて分解した後、得られた分解物を分画す
ることにより得ることができる。得られたオリゴ糖は通
常の分離精製方法、例えば、エタノール沈殿による濃
縮、ゲル濾過および陰イオン交換クロマトグラフィーに
よる分離精製法により、目的のオリゴ糖を分離精製する
ことができる。このような製造方法の例は、国際公開第
WO96/16973号に記載されている。なお、原料となるケラ
タン硫酸は、主としてガラクトースまたはガラクトース
−６−Ｏ−硫酸とＮ−アセチルグルコサミン−６−Ｏ−
硫酸との二糖の繰り返し構造で構成され、動物種および
器官などによって硫酸含量が異なっているが、通常はサ
メなどの軟骨魚類、クジラ、ウシなどの哺乳動物の軟
骨、骨や角膜などの生原料から製造されるものを用いる
ことができる。
【００２６】原料として使用されるケラタン硫酸は、通
常入手できるものであればよく、特に限定されないが、
構成糖であるガラクトース残基が硫酸化された高硫酸化
ケラタン硫酸（構成二糖あたり１．５〜２分子の硫酸基
を含む高硫酸化ケラタン硫酸をケラタンポリ硫酸という
こともある）を用いることが好ましい。また、ガラクト
ース残基の硫酸基の位置として、６位が好ましい。この
ような高硫酸化ケラタン硫酸は、たとえば、サメなどの
軟骨魚類のプロテオグリカンから取得できる。また、市
販されているものを使用することもできる。
常入手できるものであればよく、特に限定されないが、
構成糖であるガラクトース残基が硫酸化された高硫酸化
ケラタン硫酸（構成二糖あたり１．５〜２分子の硫酸基
を含む高硫酸化ケラタン硫酸をケラタンポリ硫酸という
こともある）を用いることが好ましい。また、ガラクト
ース残基の硫酸基の位置として、６位が好ましい。この
ような高硫酸化ケラタン硫酸は、たとえば、サメなどの
軟骨魚類のプロテオグリカンから取得できる。また、市
販されているものを使用することもできる。
【００２７】ケラタン硫酸オリゴ糖のヒドロキシル基の
水素原子のアシル基による置換は、糖のヒドロキシル基
の保護のために通常に行われるアシル化方法に従って行
うことができる。例えば、導入すべきアシル基の反応性
誘導体（アシル基に対応するカルボン酸の無水物（例え
ば、アセチル基を導入する場合は、無水酢酸、プロパノ
イル基を導入する場合は、無水プロピオン酸）、ハロゲ
ン化物など）と、適当な反応溶媒（ピリジン、ジオキサ
ン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ）、アセトニトリル、クロロホルム、ジクロ
ロメタン、メタノール、エタノール、水、およびこれら
の混合物など）中でケラタン硫酸オリゴ糖を常法によっ
て反応させることによってアシル基を導入することがで
きる。必要に応じて、ピリジン等の塩基触媒の存在下で
反応させることもできる。
水素原子のアシル基による置換は、糖のヒドロキシル基
の保護のために通常に行われるアシル化方法に従って行
うことができる。例えば、導入すべきアシル基の反応性
誘導体（アシル基に対応するカルボン酸の無水物（例え
ば、アセチル基を導入する場合は、無水酢酸、プロパノ
イル基を導入する場合は、無水プロピオン酸）、ハロゲ
ン化物など）と、適当な反応溶媒（ピリジン、ジオキサ
ン、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ）、アセトニトリル、クロロホルム、ジクロ
ロメタン、メタノール、エタノール、水、およびこれら
の混合物など）中でケラタン硫酸オリゴ糖を常法によっ
て反応させることによってアシル基を導入することがで
きる。必要に応じて、ピリジン等の塩基触媒の存在下で
反応させることもできる。
【００２８】必要により、アシル化の程度を調整しても
よく、この調整は、上記のアシル化方法において部分的
にアシル化を行うか、または、アシル化されたケラタン
硫酸オリゴ糖からアシル基を部分的に除去することによ
って行うことができる。
よく、この調整は、上記のアシル化方法において部分的
にアシル化を行うか、または、アシル化されたケラタン
硫酸オリゴ糖からアシル基を部分的に除去することによ
って行うことができる。
【００２９】アシル基の除去は、メタノール性アンモニ
ア、濃アンモニア水、ナトリウムメトキシド、ナトリウ
ムエトキシド、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなど
を用いて加水分解することによって行うことができる。
得られた誘導体は、逆相高速液体クロマトグラフィー等
で精製することができる。
ア、濃アンモニア水、ナトリウムメトキシド、ナトリウ
ムエトキシド、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなど
を用いて加水分解することによって行うことができる。
得られた誘導体は、逆相高速液体クロマトグラフィー等
で精製することができる。
【００３０】本発明抑制剤の有効成分であるケラタン硫
酸オリゴ糖またはその誘導体は、医薬として使用できる
程度に精製され、医薬として混入が許されない物質を含
まないものであることが好ましい。
酸オリゴ糖またはその誘導体は、医薬として使用できる
程度に精製され、医薬として混入が許されない物質を含
まないものであることが好ましい。
【００３１】本発明抑制剤は、エンドトキシンショック
を抑制するのに有効である。エンドトキシンショックに
は、敗血症（例えばグラム陰性菌感染症）に伴うエンド
トキシンショックが包含される。
を抑制するのに有効である。エンドトキシンショックに
は、敗血症（例えばグラム陰性菌感染症）に伴うエンド
トキシンショックが包含される。
【００３２】本発明抑制剤は、エンドトキシンショック
の種々の症状を抑制するのに有効であり、特に致死を抑
制するのに有効である。
の種々の症状を抑制するのに有効であり、特に致死を抑
制するのに有効である。
【００３３】また、本発明抑制剤は、エンドトキシンシ
ョックによる致死の主たる要因である播種性血管内凝固
症候群（ＤＩＣ）の抑制に有効である。従って、本発明
は、ケラタン硫酸オリゴ糖またはその誘導体を有効成分
とする、ＤＩＣ抑制剤も包含する。
ョックによる致死の主たる要因である播種性血管内凝固
症候群（ＤＩＣ）の抑制に有効である。従って、本発明
は、ケラタン硫酸オリゴ糖またはその誘導体を有効成分
とする、ＤＩＣ抑制剤も包含する。
【００３４】本発明抑制剤は、純然とした治療目的のみ
ならず、疾患の予防、維持（悪化防止）、軽減（症状の
改善）等を目的として適用することができる。
ならず、疾患の予防、維持（悪化防止）、軽減（症状の
改善）等を目的として適用することができる。
【００３５】本発明においては、対象となる疾患の性質
や進行状況、投与方法などに応じて、任意の剤形を適宜
選択することができる。
や進行状況、投与方法などに応じて、任意の剤形を適宜
選択することができる。
【００３６】すなわち、本発明抑制剤は注射（静脈内、
筋肉内、皮下、皮内、腹腔内等）、経鼻、経口、経皮、
吸入などにより投与することができ、これらの投与方法
に応じて適宜製剤化することができる。選択し得る剤形
も特に限定されず、例えば注射剤（溶液、懸濁液、乳濁
液、用時溶解用固形剤等）、錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、散剤、液剤、リポ化剤、軟膏剤、ゲル剤、坐剤、外
用散剤、スプレー剤、吸入散剤等から広く選択すること
ができる。また、これらの製剤調製にあたり、慣用の賦
形剤、安定化剤、結合剤、滑沢剤、乳化剤、浸透圧調整
剤、pH調整剤、その他着色剤、崩壊剤等、通常医薬に用
いられる成分を使用することができる。
筋肉内、皮下、皮内、腹腔内等）、経鼻、経口、経皮、
吸入などにより投与することができ、これらの投与方法
に応じて適宜製剤化することができる。選択し得る剤形
も特に限定されず、例えば注射剤（溶液、懸濁液、乳濁
液、用時溶解用固形剤等）、錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、散剤、液剤、リポ化剤、軟膏剤、ゲル剤、坐剤、外
用散剤、スプレー剤、吸入散剤等から広く選択すること
ができる。また、これらの製剤調製にあたり、慣用の賦
形剤、安定化剤、結合剤、滑沢剤、乳化剤、浸透圧調整
剤、pH調整剤、その他着色剤、崩壊剤等、通常医薬に用
いられる成分を使用することができる。
【００３７】本発明抑制剤中の有効成分であるケラタン
硫酸オリゴ糖またはその誘導体の配合量ならびに本発明
抑制剤の投与量は、その製剤の投与方法、投与形態、使
用目的、患者の具体的症状、患者の体重、年齢、性別等
に応じて個別的に決定されるべき事項であり、特に限定
されないが、ケラタン硫酸オリゴ糖の臨床量としては成
人１日１回あたり５０〜５０００mgが例示される。
硫酸オリゴ糖またはその誘導体の配合量ならびに本発明
抑制剤の投与量は、その製剤の投与方法、投与形態、使
用目的、患者の具体的症状、患者の体重、年齢、性別等
に応じて個別的に決定されるべき事項であり、特に限定
されないが、ケラタン硫酸オリゴ糖の臨床量としては成
人１日１回あたり５０〜５０００mgが例示される。
【００３８】なお本発明抑制剤の有効成分であるケラタ
ン硫酸オリゴ糖の安全性については、国際公開第WO96/1
6973号において示されている。
ン硫酸オリゴ糖の安全性については、国際公開第WO96/1
6973号において示されている。
【００３９】
【実施例】以下に本発明を、実施例により具体的に説明
する。しかしながら、これらにより本発明の技術的範囲
が限定されるべきものではない。
する。しかしながら、これらにより本発明の技術的範囲
が限定されるべきものではない。
【００４０】
【実施例１】 Ｌ４のアセチル化物の合成 Ｌ４の二ナトリウム塩（WO96/16973に記載の方法で製造
したもの）を脱イオン水に溶解し、カチオン交換樹脂(D
owex 50W-X4、H+-form；ダウケミカル製)カラムに通し
て酸遊離型とし、直ちに氷冷した。これに対して、引き
続き氷冷下におき、10倍脱イオン水希釈した水酸化テト
ラ−ｎ−ブチルアンモニウムを1.1倍Ｌ４-硫酸基当量滴
下した。約１時間攪拌後、反応系を低温下にて減圧濃縮
し、Sephadex-LH20カラム(ファルマシア社)に通して粗
精製後、水溶液から凍結乾燥し、Ｌ４−テトラブチルア
ンモニウム塩を得た。
したもの）を脱イオン水に溶解し、カチオン交換樹脂(D
owex 50W-X4、H+-form；ダウケミカル製)カラムに通し
て酸遊離型とし、直ちに氷冷した。これに対して、引き
続き氷冷下におき、10倍脱イオン水希釈した水酸化テト
ラ−ｎ−ブチルアンモニウムを1.1倍Ｌ４-硫酸基当量滴
下した。約１時間攪拌後、反応系を低温下にて減圧濃縮
し、Sephadex-LH20カラム(ファルマシア社)に通して粗
精製後、水溶液から凍結乾燥し、Ｌ４−テトラブチルア
ンモニウム塩を得た。
【００４１】乾燥したＬ４−テトラブチルアンモニウム
塩を100mg/mlの濃度でピリジンに溶解し、室温にて攪拌
しながら無水酢酸(L4-総ヒドロキシル基量に対して1.5
倍当量)を滴下して添加した。室温にて２４時間攪拌
後、溶媒を低温下で減圧留去し、メタノール／ジエチル
エーテル溶媒系にて再沈殿して粗Ｌ４アセチル化物−テ
トラブチルアンモニウム塩を得た。これを陰イオン交換
カラムクロマトグラフィー(LiChroprep NH2；メルク社
製)にてナトリウム塩に交換し、引き続きゲル濾過クロ
マトグラフィー(Cellulofine GCL-25；生化学工業株式
会社販売)にて精製後凍結乾燥して、Ｌ４のアセチル化
物（以下、AcL4ともいう）を、α−グリコシド配位体と
β−グリコシド配位体の混合物として得た。またα-グ
リコシド配位体とβ-グリコシド配位体の分離は陰イオ
ン交換クロマトグラフィー(LiChroprep RP-18；メルク
社製)で行い、α−グリコシド配位体を取得した。AcL4
（α−グリコシド配位体）の1H-NMRスペクトルおよび13
C-NMR（DEPT）スペクトルを以下に示す。
塩を100mg/mlの濃度でピリジンに溶解し、室温にて攪拌
しながら無水酢酸(L4-総ヒドロキシル基量に対して1.5
倍当量)を滴下して添加した。室温にて２４時間攪拌
後、溶媒を低温下で減圧留去し、メタノール／ジエチル
エーテル溶媒系にて再沈殿して粗Ｌ４アセチル化物−テ
トラブチルアンモニウム塩を得た。これを陰イオン交換
カラムクロマトグラフィー(LiChroprep NH2；メルク社
製)にてナトリウム塩に交換し、引き続きゲル濾過クロ
マトグラフィー(Cellulofine GCL-25；生化学工業株式
会社販売)にて精製後凍結乾燥して、Ｌ４のアセチル化
物（以下、AcL4ともいう）を、α−グリコシド配位体と
β−グリコシド配位体の混合物として得た。またα-グ
リコシド配位体とβ-グリコシド配位体の分離は陰イオ
ン交換クロマトグラフィー(LiChroprep RP-18；メルク
社製)で行い、α−グリコシド配位体を取得した。AcL4
（α−グリコシド配位体）の1H-NMRスペクトルおよび13
C-NMR（DEPT）スペクトルを以下に示す。
【００４２】1H-NMRスペクトル1 H-NMR（400MHz、D2O、TSP（δH＝0.00ppm）） δH＝1.97ppm（s,3H,COCH3 ）、2.02（s,3H,COCH3 ）、2.
17（s,3H,COCH3 ）、2.18（s,3H,COCH3 ）、2.217（s,3H,
COCH3 ）、2.220（s,3H,COCH3 ）、4.07-4.17（m,4H,H-4
A,H-5A,H-6B,H-6'B）、4.22-4.28（m,3H,H-5B,H-6A,H-
6'A）、4.40-4.44（dd,1H,H-2A）、4.91-4.93（d,1H,H-
1B）、5.00-5.04（dd,1H,H-2B）、5.20-5.23（dd,1H,H-
3B）、5.26-5.31（dd,1H,H-3A）、5.485-5.493（d,1H,H
-4B）、6.09-6.10（d,1H,H-1A）
17（s,3H,COCH3 ）、2.18（s,3H,COCH3 ）、2.217（s,3H,
COCH3 ）、2.220（s,3H,COCH3 ）、4.07-4.17（m,4H,H-4
A,H-5A,H-6B,H-6'B）、4.22-4.28（m,3H,H-5B,H-6A,H-
6'A）、4.40-4.44（dd,1H,H-2A）、4.91-4.93（d,1H,H-
1B）、5.00-5.04（dd,1H,H-2B）、5.20-5.23（dd,1H,H-
3B）、5.26-5.31（dd,1H,H-3A）、5.485-5.493（d,1H,H
-4B）、6.09-6.10（d,1H,H-1A）
【００４３】13C-NMR（DEPT）スペクトル13 C-NMR（100MHz、D2O、TSP（δC＝0.00ppm）） δC＝22.86ppm（2C,OCOCH3）、23.04（OCOCH3）、23.08
（OCOCH3）、23.43（OCOCH3）、24.47（NHCOCH3）、53.
09（C-2A）、67.98（C-6B）、68.36（C-6A）、70.61（C
-4B）、72.62（C-2B）、73.34（C-5B）、73.56（2C,C-3
A,C-5A）、74.27（C-3B）、77.80（C-4A）、93.38（C-1
A）、102.96（C-1B）
（OCOCH3）、23.43（OCOCH3）、24.47（NHCOCH3）、53.
09（C-2A）、67.98（C-6B）、68.36（C-6A）、70.61（C
-4B）、72.62（C-2B）、73.34（C-5B）、73.56（2C,C-3
A,C-5A）、74.27（C-3B）、77.80（C-4A）、93.38（C-1
A）、102.96（C-1B）
【００４４】
【実施例２】 ＬＰＳ惹起エンドトキシンショックの抑
制 マウスエンドトキシンショックに対するＬ４およびＬ４
Ｌ４（いずれも国際公開第WO96/16973号に記載の方法で
製造したもの）の効果を検討した。
制 マウスエンドトキシンショックに対するＬ４およびＬ４
Ｌ４（いずれも国際公開第WO96/16973号に記載の方法で
製造したもの）の効果を検討した。
【００４５】（１）試験方法 1.惹起物質 LPS（Lipopolysaccharide, Salmonella abortus equi由
来; SIGMA社）を1.5 mg/mlの濃度にてリン酸緩衝生理食
塩水(PBS)に溶解し、滅菌濾過後に使用した。
来; SIGMA社）を1.5 mg/mlの濃度にてリン酸緩衝生理食
塩水(PBS)に溶解し、滅菌濾過後に使用した。
【００４６】2.検体 1)被検物質 Ｌ４(二ナトリウム塩)粉末およびL4L4(四ナトリウム塩)
粉末をそれぞれ6.0％の濃度となるよう注射用蒸留水
（大塚製薬）に溶解後、生理食塩液（大塚製薬）にて所
定濃度に希釈して使用した。 2)対照物質 LPSに対する陰性対照物質（惹起陰性対照物質）とし
て、PBSを滅菌濾過して使用した。また、被検物質に対
する陰性対照物質として、生理食塩液を使用した。
粉末をそれぞれ6.0％の濃度となるよう注射用蒸留水
（大塚製薬）に溶解後、生理食塩液（大塚製薬）にて所
定濃度に希釈して使用した。 2)対照物質 LPSに対する陰性対照物質（惹起陰性対照物質）とし
て、PBSを滅菌濾過して使用した。また、被検物質に対
する陰性対照物質として、生理食塩液を使用した。
【００４７】3.使用動物 ８週齢の雌性C57BL/6系マウス（日本エス・エル・シ
ー）を購入し、その２日後に、体重が各群ほぼ均等にな
るように群分けした。
ー）を購入し、その２日後に、体重が各群ほぼ均等にな
るように群分けした。
【００４８】4.検体の投与 以下に示す群構成に従い、所定用量の各検体をマウスに
皮下(s.c.)投与した。検体はエンドトキシンショック惹
起日まで１日１回、計４日間皮下投与した。
皮下(s.c.)投与した。検体はエンドトキシンショック惹
起日まで１日１回、計４日間皮下投与した。
【００４９】5.群構成 表１に示す計７群を設定した。
【００５０】
【表１】
【００５１】6.エンドトキシンショックの惹起 エンドトキシンショック惹起用のLPSは、検体４回目投
与直後に、0.2 ml/匹（300μg/匹）の用量で腹腔内投与
した。非惹起群については、PBSを0.2ml/匹の用量にて
腹腔内投与した。
与直後に、0.2 ml/匹（300μg/匹）の用量で腹腔内投与
した。非惹起群については、PBSを0.2ml/匹の用量にて
腹腔内投与した。
【００５２】7.死亡数の確認 LPS投与から24、48、72時間後に、各群における累積死
亡数を確認した。
亡数を確認した。
【００５３】8.統計処理 生理食塩液群と各Ｌ４投与群並びに各L4L4投与群間をノ
ンパラメトリックなDunnetの多重比較検定にて評価し
た。
ンパラメトリックなDunnetの多重比較検定にて評価し
た。
【００５４】（２）試験結果 結果を表２に示す。
【００５５】
【表２】
【００５６】生理食塩液群では、LPS投与後72時間まで
に93.3％が死亡した。これに対し、Ｌ４またはL4L4を投
与した群ではいずれも死亡率が低下した。特にL4L4高用
量群での死亡率の低下が顕著であった。非惹起群につい
ては、惹起陰性対照物質の投与後に死亡例は見られなか
った。
に93.3％が死亡した。これに対し、Ｌ４またはL4L4を投
与した群ではいずれも死亡率が低下した。特にL4L4高用
量群での死亡率の低下が顕著であった。非惹起群につい
ては、惹起陰性対照物質の投与後に死亡例は見られなか
った。
【００５７】これらのデータから、ケラタン硫酸オリゴ
糖または誘導体によりエンドトキシンショックによる致
死を抑制できることが明らかである。また、予め投与し
ておくことで、その後のエンドトキシンショックによる
致死を抑制できること（予防効果があること）が示唆さ
れた。
糖または誘導体によりエンドトキシンショックによる致
死を抑制できることが明らかである。また、予め投与し
ておくことで、その後のエンドトキシンショックによる
致死を抑制できること（予防効果があること）が示唆さ
れた。
【００５８】
【発明の効果】本発明により、特にエンドトキシンショ
ックによる致死を抑制できるエンドトキシンショック抑
制剤が提供される。本発明のエンドトキシンショック抑
制剤は、天然物由来の物質を素材としており、その安全
性も高い。
ックによる致死を抑制できるエンドトキシンショック抑
制剤が提供される。本発明のエンドトキシンショック抑
制剤は、天然物由来の物質を素材としており、その安全
性も高い。
Claims (5)
- 【請求項１】 ケラタン硫酸オリゴ糖またはその誘導体
を有効成分とする、エンドトキシンショック抑制剤。 - 【請求項２】 ケラタン硫酸オリゴ糖が、少なくとも下
記式で表される二糖を繰返し構成単位として１単位以上
含むことを特徴とする、請求項１記載の抑制剤。 Gal(6S)-GlcNAc(6S) （式中、Galはガラクトース残基を、GlcNAcはＮ−アセ
チルグルコサミン残基を、6Sは6位のヒドロキシル基が6
-O-硫酸エステルとなっていることを、-はグリコシド結
合をそれぞれ表す） - 【請求項３】 ケラタン硫酸オリゴ糖が、下記式(1)お
よび(2)で表されるものから選ばれることを特徴とす
る、請求項２記載の抑制剤。 【化１】 Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S)β1-3Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S) 式(1) Gal(6S)β1-4GlcNAc(6S) 式(2) （式中、Galはガラクトース残基を、GlcNAcはＮ−アセ
チルグルコサミン残基を、6Sは6位のヒドロキシル基が6
-O-硫酸エステルとなっていることを、β1-4はβ1,4グ
リコシド結合を、β1-3はβ1,3グリコシド結合をそれぞ
れ表す） - 【請求項４】 ケラタン硫酸オリゴ糖の誘導体が下記式
(3)で示されることを特徴とする、請求項１記載の抑制
剤。 【化２】 （式中、Ｘ1〜Ｘ5は、それぞれ独立して、水素原子また
はアシル基であり、Ｘ1〜Ｘ5の少なくとも一つはアシル
基であり、Ｍは、それぞれ独立して、水素原子、又は電
離していてもよい１もしくは２価の金属もしくは１価の
塩基であり、波線で示した結合はα−グリコシド配位ま
たはβ−グリコシド配位を示す。） - 【請求項５】 Ｘ1〜Ｘ5がいずれも炭素数１〜１０のア
シル基であり、Ｍがアルカリ金属であることを特徴とす
る請求項４記載の抑制剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20318599A JP4456698B2 (ja) | 1999-07-16 | 1999-07-16 | エンドトキシンショック抑制剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20318599A JP4456698B2 (ja) | 1999-07-16 | 1999-07-16 | エンドトキシンショック抑制剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001026602A true JP2001026602A (ja) | 2001-01-30 |
| JP4456698B2 JP4456698B2 (ja) | 2010-04-28 |
Family
ID=16469876
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20318599A Expired - Fee Related JP4456698B2 (ja) | 1999-07-16 | 1999-07-16 | エンドトキシンショック抑制剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4456698B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013140919A1 (ja) | 2012-03-22 | 2013-09-26 | 一般財団法人化学及血清療法研究所 | Ｌｐｓワクチン |
-
1999
- 1999-07-16 JP JP20318599A patent/JP4456698B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013140919A1 (ja) | 2012-03-22 | 2013-09-26 | 一般財団法人化学及血清療法研究所 | Ｌｐｓワクチン |
| US9345756B2 (en) | 2012-03-22 | 2016-05-24 | The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | LPS vaccine |
| US10279025B2 (en) | 2012-03-22 | 2019-05-07 | The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | LPS vaccine |
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| JP4456698B2 (ja) | 2010-04-28 |
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