JP2005517380A5

JP2005517380A5 -

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Publication number: JP2005517380A5
Application number: JP2002519606A
Authority: JP
Filing date: 2001-08-16
Publication date: 2008-10-02

Description

【特許請求の範囲】
【請求項１】長さが約５１５までのアミノ酸残基のリコンビナントキメラＢ型肝炎コア（ＨＢｃ）タンパク質分子であって、
（ａ）ＨＢｃイムノドミナントループ内に存在するペプチド結合異種エピトープもしくは共役エピトープのための異種リンカー残基を含む前記ＨＢｃ分子のＮ−末端１５０アミノ酸残基の少なくとも１３０残基のＨＢｃ配列、またはＮ−末端１５０ＨＢｃアミノ酸残基の少なくとも約１３５残基の配列を含み、
（ｂ）前記ＨＢｃ配列のＣ−末端残基から前記分子のＣ−末端に向かって、さらに前記キメラ分子のＣ−末端から約３０残基内に１つから１０のシステイン残基（Ｃ−末端システイン残基）を含み、
（ｃ）ＨＢｃ１３５位からＨＢｃＣ−末端の少なくとも５つのアミノ酸残基の配列を含み、
前記キメラ分子が、（ｉ）２０％以下の保存的置換アミノ酸残基を前記ＨＢｃ配列中に含み、（ｉｉ）ホスト細胞内で発現されるとき実質的に核酸と結合しない粒子に自己会合し、さらに前記粒子が、前記Ｃ−末端システイン残基を欠くか、またはキメラ分子内に存在するＣ−末端システイン残基が別の残基に置換されてあるがその他の点では同一のＨＢｃキメラから生成される粒子よりも安定である、前記リコンビナントキメラＢ型肝炎コアタンパク質分子。
【請求項２】前記ペプチド結合異種エピトープまたは共役エピトープのための異種リンカー残基が異種エピトープである、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３】前記異種エピトープがＢ細胞エピトープである、請求項２に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項４】ＨＢｃのアミノ酸残基１−４の１つとペプチド結合した第二の異種エピトープを含む、請求項３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項５】前記Ｂ細胞エピトープが、アミノ酸残基７６と８５との間のＨＢｃ配列内のある位置でペプチド結合し、さらに７６位から８５位のＨＢｃ配列の少なくとも５残基が存在する、請求項３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項６】アミノ酸残基７６から８５の間の前記ＨＢｃ配列は存在するが、前記Ｂ細胞エピトープによって中断されている、請求項５に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項７】さらにペプチド結合異種Ｔ細胞エピトープを含む、請求項２に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項８】前記Ｔ細胞エピトープがＣ−末端ＨＢｃアミノ酸残基とペプチド結合する、請求項７に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項９】前記Ｃ−末端システイン残基が、ＨＢｃキメラタンパク質分子のＣ−末端の５アミノ酸残基内に存在する、請求項８に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１０】前記キメラが、中断されていない１位から少なくとも１４０位のＨＢｃアミノ酸残基配列、およびＨＢｃキメラタンパク質分子のＣ−末端にシステイン残基を含む、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１１】前記キメラが、中断されていない１位から１４９位のＨＢｃアミノ酸残基配列を含む、請求項１０に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１２】前記キメラが、共役エピトープのための異種リンカー残基を含む、請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１３】前記共役エピトープのための異種リンカー残基が、アミノ酸残基７６と８５との間のＨＢｃ配列内のある位置でペプチド結合し、さらに７６位から８５位のＨＢｃ配列の少なくとも４残基が存在する、請求項１２に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１４】アミノ酸残基７６から８５の間の前記ＨＢｃ配列は存在するが、共役エピトープのための前記異種リンカー残基によって中断されている、請求項１３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１５】１位から少なくとも１４０位の前記ＨＢｃアミノ酸残基配列、およびＣ−末端にただ１つのシステイン残基を含む、請求項１４に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１６】前記キメラが、１位から１４９位の前記ＨＢｃアミノ酸残基配列を含む、請求項１５に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１７】共役エピトープのための前記異種リンカー残基が、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システインおよびチロシン残基から成る群から選択される、請求項１６に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項１８】Ｎ−末端からドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶと称される４つのペプチド結合アミノ酸残基配列ドメインを含む、長さが約１３５から約５１５のアミノ酸残基のリコンビナントＢ型肝炎ウイルスコア（ＨＢｃ）タンパク質キメラ分子であって、
（ａ）ドメインＩは約７１から約１００アミノ酸残基を含み、前記アミノ酸残基の配列は少なくともＨＢｃの５位から７５位の残基配列を含み、さらに場合によってＨＢｃ残基１−４の１つとペプチド結合した約３０までのアミノ酸残基を含む異種エピトープを含み；
（ｂ）ドメインＩＩはドメインＩのＨＢｃ残基７５とペプチド結合した約５から約２５０のアミノ酸残基を含み、ここで、（ｉ）ＨＢｃの７６位から８５位の配列中の０から全ての残基がＨＢｃにとって異種である１つから約２４５アミノ酸残基とペプチド結合して存在し、異種エピトープまたは共役エピトープのための異種リンカー残基を構成するか、または（ｉｉ）７６位から８５位のＨＢｃの配列は異種残基とは結合せずに存在するか、または（ｉｉｉ）残基７６から８５の１つまたは２つ以上が存在せず；
（ｃ）ドメインＩＩＩはドメインＩＩの残基８５とペプチド結合した８６位から１３５位のＨＢｃ配列であり；さらに、
（ｄ）ドメインＩＶは、（ｉ）ドメインＩＩＩの１３５位の残基とペプチド結合した１３６位から１４９位のＨＢｃアミノ酸残基配列の０から１４残基、（ｉｉ）キメラ分子のＣ−末端から約３０残基以内に１つから１０のシステイン残基（Ｃ−末端システイン残基）、および（ｉｉｉ）１５０位からＣ−末端のＨＢｃにとって異種である配列中に０から約１００アミノ酸残基を含み、ここで、ドメインＩＶは前記（ｉｉ）の１つから１０のシステイン残基を含む少なくとも６つのアミノ酸残基を含むことを条件とし、
前記キメラはホスト細胞内で発現されるとき自己会合して粒子を生成し、前記粒子は実質的に核酸と結合せず、さらに前記のＣ−末端システイン残基を欠くか、またはキメラ分子内に存在するＣ−末端システイン残基が別の残基に置換されてあるがその他の点では同一のＨＢｃキメラから生成される粒子よりも安定であり、さらに、前記キメラのＨＢｃ配列でそのアミノ酸残基の約１０％以下が置換されてあるアミノ酸残基配列を有する、前記リコンビナントＢ型肝炎ウイルスコアタンパク質キメラ分子。
【請求項１９】２つの異種エピトープを含む、請求項１８に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２０】前記２つの異種エピトープが、ドメインＩおよびＩＩ、ＩＩおよびＩＶ、またはＩおよびＩＶに存在する、請求項１９に記載の請求項１９に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２１】前記２つの異種エピトープの１つがＢ細胞エピトープである、請求項１９に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２２】前記２つの異種エピトープの１つがＴ細胞エピトープである、請求項１９に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２３】前記２つの異種エピトープの１つがＢ細胞エピトープであり、さらに他方がＴ細胞エピトープである、請求項１９に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２４】前記ドメインＩが、ＨＢｃ残基１−４の１つとペプチド結合した異種エピトープを含む、請求項１８に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２５】ドメインＩＩの前記異種エピトープがＢ細胞エピトープである、請求項２４に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２６】１５０位からＣ−末端のＨＢｃにとって異種である前記配列が、ＨＢｃ残基１４０−１４９の１つとペプチド結合したＴ細胞エピトープである、請求項２５に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２７】共役エピトープまたは異種エピトープのための前記異種リンカー残基が異種エピトープである、請求項１８に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２８】前記異種エピトープが約２４５までのアミノ酸残基を含む、請求項２７に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項２９】前記異種エピトープがＢ細胞エピトープである、請求項２８に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３０】前記異種エピトープが６から約５０アミノ酸残基を含む、請求項２７に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３１】前記異種エピトープが２０から約３０のアミノ酸残基を含む請求項２７に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３２】前記ドメインＩＶが、キメラ分子のＣ−末端から約３０残基内に１つから約５つのシステイン残基を含む、請求項２７に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３３】アミノ酸残基７６から８５の間のＨＢｃ配列は存在するが、前記異種エピトープによって中断される、請求項２７に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３４】前記Ｃ−末端システイン残基が、前記キメラタンパク質分子のＣ−末端の約５つのアミノ酸残基内に位置する、請求項１８に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３５】１５０位からＣ−末端のＨＢｃにとって異種である前記配列が、ＨＢｃ残基１４０−１４９の１つとペプチド結合したＴ細胞エピトープである、請求項１８に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３６】共役エピトープまたは異種エピトープのための前記異種リンカー残基が、共役エピトープのための異種リンカー残基である、請求項１８に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３７】共役エピトープのための前記異種リンカーが、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システインおよびチロシン残基から成る群から選択される、請求項３６に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３８】前記ＨＢｃキメラタンパク質分子のＣ−末端にただ１つのシステイン残基を含む、請求項３７に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項３９】前記キメラが、から少なくとも１４０位まで中断されないＨＢｃアミノ酸残基配列を含む、請求項１８に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項４０】前記非中断ＨＢｃアミノ酸残基配列が残基１を含む、請求項３９に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項４１】前記非中断ＨＢｃアミノ酸残基配列が残基１４９を含む、請求項３９に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項４２】Ｎ−末端からドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶと称される４つのペプチド結合アミノ酸残基配列ドメインを含む、約１７５から約２４０アミノ酸残基の長さを有するリコンビナントＢ型肝炎ウイルスコア（ＨＢｃ）タンパク質キメラ分子であって、
（ａ）ドメインＩが、ＨＢｃの１位から７５位の残基配列を含み；
（ｂ）ドメインＩＩがドメインＩのＨＢｃ残基７５とペプチド結合した約５から約５５のアミノ酸残基を含み、ここでＨＢｃの７６位から８５位の配列中の少なくとも４つの残基がＨＢｃにとって異種である６から約５０アミノ酸残基とペプチド結合して存在し、異種エピトープを構成し；
（ｃ）ドメインＩＩＩはドメインＩＩの残基８５とペプチド結合した８６位から１３５位のＨＢｃ配列であり；さらに、
（ｄ）ドメインＩＶは、（ｉ）ドメインＩＩＩの１３５位の残基とペプチド結合した１３６位から１４９位のＨＢｃアミノ酸残基配列の５から１４残基、（ｉｉ）キメラ分子のＣ−末端から約３０残基以内に１つのシステイン残基（Ｃ−末端システイン残基）、および（ｉｉｉ）１５０位からＣ−末端のＨＢｃにとって異種である配列内に０から約５０アミノ酸残基を含み、
前記キメラはホスト細胞内で発現されるとき自己会合して粒子を生成し、前記粒子は、２８０ｎｍ対２６０ｎｍ吸収比が約１．２から約１．６を示し、さらに前記のＣ−末端システイン残基を欠くか、またはキメラ分子内に存在するＣ−末端システイン残基が別の残基に置換されてあるがその他の点では同一のＨＢｃキメラから生成される粒子よりも安定であり、さらに前記キメラのＨＢｃ配列で約５％以下のアミノ酸残基が置換されてあるアミノ酸残基配列を有する、前記リコンビナントＢ型肝炎ウイルスコアタンパク質キメラ分子。
【請求項４３】ドメインＩＩの前記異種エピトープがＢ細胞エピトープである、請求項４２に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項４４】前記異種エピトープが１５から約５０アミノ酸残基を含む、請求項４３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項４５】前記異種エピトープが２０から約３０アミノ酸残基を含む、請求項４３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項４６】アミノ酸残基７６から８５の間のＨＢｃ配列は存在するが、前記異種エピトープで中断される、請求項４３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項４７】前記Ｂ細胞エピトープが下記から成る群から選択される病原体に存在するアミノ酸配列である、請求項４３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子：肺炎連鎖球菌（Streptococcus pneumonia）、クリプトスポリジウム・パルブム（Cryptosporidium parvum）、ＨＩＶ、口蹄疫ウイルス、インフルエンザウイルス、ペスト菌（Yersinia pestis）、インフルエンザ菌（Haemophilus influenzae）、モラクセラ・カタラーリス（Moraxella catarrhalis）、ポルフィロモナス・ギンギバリス（Porphyromonas gingivalis）、クルーズトリパノソーマ（Trypanosoma cruzi）、熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）、三日熱マラリア原虫（Plasmodium vivax）、げっ歯類住血胞子虫（Plasmodium berghi）、プラスモジウム・ヨエリー（Plasmodium yoelli）、ストレプトコッカス・ソブリヌス（Streptococcus sobrinus）、フレキシナー菌（Shigella flexneri）、ＲＳＶ、プラスモジウム・エントアメーバ・ヒストリティカ（Plasmodium Entamoeba histolytica）、日本住血吸虫（Schistosoma japonicum）、マンソニ住血吸虫（Schistosoma mansoni）、ウシインヒビンおよびエボラウイルス。
【請求項４８】前記１５０位からＣ−末端までのＨＢｃにとって異種の配列がＨＢｃ残基１４０−１４９の１つとペプチド結合したＴ細胞エピトープである、請求項４３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項４９】前記Ｔ細胞エピトープが、目的のキメラを免疫原として用いようとしている対象生物に由来する、請求項４８に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項５０】前記Ｃ−末端システイン残基が、前記キメラタンパク質分子のＣ−末端の約５つのアミノ酸残基内に位置する、請求項４３に記載のリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質分子。
【請求項５１】リコンビナントＢ型肝炎コア（ＨＢｃ）キメラタンパク質分子で構成された免疫原性粒子であって、前記キメラタンパク質が（ｉ）そのＮ−末端、ＨＢｃ免疫原性ループまたはＣ−末端に１つまたは２つ以上の免疫原性エピトープを提示するか、または（ｉｉ）共役エピトープのための異種リンカー残基を前記ＨＢｃ免疫原性ループ内に有し、さらにシステイン残基を前記Ｃ−末端またはＣ−末端近傍に含み、前記粒子は実質的に核酸と結合せず、さらに前記システイン残基を含まないことを除いて他の点では同一のタンパク質で構成された粒子と比較して安定性の強化を示す前記免疫原性粒子。
【請求項５２】約１．２から約１．７の２８０／２６０吸収比を示す請求項５１に記載の免疫原性粒子。
【請求項５３】そのリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質が前記Ｎ−末端に免疫原性エピトープを提示する請求項５１に記載の免疫原性粒子。
【請求項５４】そのリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質が前記Ｃ−末端に免疫原性エピトープを提示する請求項５１に記載の免疫原性粒子。
【請求項５５】そのリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質が前記免疫原性ループ内に免疫原性エピトープを提示する請求項５１に記載の免疫原性粒子。
【請求項５６】そのリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質がＢ細胞免疫原性エピトープを提示する請求項１に記載の免疫原性粒子。
【請求項５７】そのリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質がＴ細胞免疫原性エピトープを提示する請求項５１に記載の免疫原性粒子。
【請求項５８】そのリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質が別々にＢ細胞およびＴ細胞免疫原性エピトープを提示する請求項５１に記載の免疫原性粒子。
【請求項５９】そのリコンビナントＨＢｃキメラタンパク質が、共役エピトープのための異種リンカー残基を前記ＨＢｃ免疫原性ループ内に有する請求項５１に記載の免疫原性粒子。
【請求項６０】前記共役エピトープのための異種リンカー残基が、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、システインおよびチロシン残基から成る群から選択される、請求項５９に記載の免疫原性粒子。
【請求項６１】前記共役エピトープのための異種リンカー残基がハプテンに共役される、請求項６０に記載の免疫原性粒子。
【請求項６２】前記ハプテンがオリゴ糖である請求項６１に記載の免疫原性粒子。
【請求項６３】多数のリコンビナントキメラＢ型肝炎コア（ＨＢｃ）タンパク質分子で構成される免疫原性粒子であって、
前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子が、約５１５までのアミノ酸残基の長さを有し、残基アミノ酸残基が、
（ａ）ＨＢｃイムノドミナントループ内に存在するペプチド結合異種エピトープもしくは共役エピトープのための異種リンカー残基を含む前記ＨＢｃ分子のＮ−末端１５０アミノ酸残基の少なくとも１３０残基のＨＢｃ配列、またはＮ−末端１５０ＨＢｃアミノ酸残基の少なくとも約１３５残基の配列を含み、
（ｂ）前記ＨＢｃ配列のＣ−末端残基から前記分子のＣ−末端に向かって、さらに前記キメラ分子のＣ−末端から約３０残基内に１つから１０のシステイン残基（Ｃ−末端システイン残基）を含み、
（ｃ）ＨＢｃ１３５位からＨＢｃＣ−末端の少なくとも６つのアミノ酸残基配列を含み、
前記キメラ分子は、前記ＨＢｃ配列中に１０％以下の保存的置換アミノ酸残基を含み、さらに
前記粒子は実質的に核酸と結合せず、さらに前記粒子は、前記Ｃ−末端システイン残基を欠くか、またはキメラ分子内に存在するＣ−末端システイン残基が別の残基に置換されてあるがその他の点では同一のＨＢｃキメラから生成される粒子よりも安定であり、さらに、前記キメラのＨＢｃ配列で約２０％以下のアミノ酸残基が置換されてあるアミノ酸残基を有する、前記免疫原性粒子。
【請求項６４】約１．４から約１．６の２８０ｎｍ対２６０ｎｍ吸収比を示す請求項６３に記載の免疫原性粒子。
【請求項６５】前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子の長さが約１７５から約２４０アミノ酸残基である請求項６３に記載の免疫原性粒子。
【請求項６６】前記ペプチド結合異種エピトープまたは共役エピトープのための異種リンカーが、異種エピトープである請求項６３に記載の免疫原性粒子。
【請求項６７】前記異種エピトープがＢ細胞エピトープである、請求項６６に記載の免疫原性粒子。
【請求項６８】前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子の長さが約４３５までのアミノ酸残基である請求項６３に記載の免疫原性粒子。
【請求項６９】ＨＢｃのアミノ酸残基１−４の１つとペプチド結合した第二の異種エピトープを含む請求項６３に記載の免疫原性粒子。
【請求項７０】前記Ｂ細胞エピトープが、アミノ酸残基７６から８５の間のＨＢｃ配列内のある位置でペプチド結合されてあり、さらに７６位から８５位のＨＢｃ配列の少なくとも５残基が存在する、請求項６８に記載の免疫原性粒子。
【請求項７１】前記アミノ酸残基７６から８５の間のＨＢｃ配列は存在するが、前記Ｂ細胞エピトープによって中断されている請求項７０に記載の免疫原性粒子。
【請求項７２】さらにペプチド結合させた異種Ｔ細胞エピトープを含む、請求項６８に記載の免疫原性粒子。
【請求項７３】前記Ｔ細胞エピトープが、Ｃ−末端のＨＢｃアミノ酸残基とペプチド結合されてある請求項７２に記載の免疫原性粒子。
【請求項７４】前記Ｃ−末端システイン残基が、前記ＨＢｃキメラタンパク質分子のＣ−末端の５アミノ酸残基内に存在する請求項７３に記載の免疫原性粒子。
【請求項７５】前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子が、約１３５から約５１５のアミノ酸残基の長さを有し、さらにＮ−末端からドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶと称される４つのペプチド結合アミノ酸残基配列ドメインを含み、ここで、
（ａ）ドメインＩは約７１から約１００アミノ酸残基を含み、前記アミノ酸残基の配列は少なくともＨＢｃの５位から７５位の残基配列を含み、場合によってＨＢｃ残基１−４の１つとペプチド結合した約３０までのアミノ酸残基を含む異種エピトープを含み；
（ｂ）ドメインＩＩはドメインＩのＨＢｃ残基７５とペプチド結合した約５から約２５０アミノ酸残基を含み、ここで、（ｉ）ＨＢｃの７６位から８５位の配列中の０から全ての残基がＨＢｃにとって異種である１つから約２４５アミノ酸残基とペプチド結合して存在し、異種エピトープまたは共役エピトープのための異種リンカー残基を構成するか、または（ｉｉ）７６位から８５位のＨＢｃの配列は異種残基とは結合せずに存在し；
（ｃ）ドメインＩＩＩはドメインＩＩの残基８５とペプチド結合した８６位から１３５位のＨＢｃ配列であり；さらに、
（ｄ）ドメインＩＶは、（ｉ）ドメインＩＩＩの１３５位の残基とペプチド結合した１３６位から１４９位のＨＢｃアミノ酸残基配列の０から１４残基、（ｉｉ）キメラ分子のＣ−末端から約３０残基以内に１つから１０のシステイン残基（Ｃ−末端システイン残基）、および（ｉｉｉ）１５０位からＣ−末端のＨＢｃにとって異種である配列内に０から約１００アミノ酸残基を含み、ここで、ドメインＩＶは前記（ｉｉ）の１つから１０のシステイン残基を含む少なくとも６アミノ酸残基を含むことを条件とし、
前記キメラタンパク質が、ＨＢｃ配列で約１０％以下のアミノ酸残基が置換されてあるアミノ酸残基配列を有する、請求項６３に記載の免疫原性粒子。
【請求項７６】ドメインＩＩに共役エピトープのための異種リンカー残基を含み、さらに前記異種リンカー残基と結合したハプテンを含む請求項７５に記載の免疫原性粒子。
【請求項７７】前記ハプテンがＢ細胞免疫原である請求項７６に記載の免疫原性粒子。
【請求項７８】前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子が、約１７５から約２４０のアミノ酸残基を有し、さらにＮ−末端からドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶと称される４つのペプチド結合アミノ酸残基配列ドメインを含み、ここで、
（ａ）ドメインＩは、ＨＢｃの１位から７５位の残基配列を含み；
（ｂ）ドメインＩＩは、ドメインＩのＨＢｃ残基７５とペプチド結合した約５から約５５アミノ酸残基を含み、ここで、ＨＢｃの７６位から８５位の配列中の少なくとも４残基が、ＨＢｃにとって異種である６から約５０アミノ酸残基とペプチド結合して存在し、異種エピトープを構成し；
（ｃ）ドメインＩＩＩは、ドメインＩＩの残基８５とペプチド結合した８６位から１３５位のＨＢｃ配列であり；さらに、
（ｄ）ドメインＩＶは、（ｉ）ドメインＩＩＩの１３５位の残基とペプチド結合した１３６位から１４９位のＨＢｃアミノ酸残基配列の５から１４残基、（ｉｉ）キメラ分子のＣ−末端から約３０残基以内に１つから約５つのシステイン残基（Ｃ−末端システイン残基）、および（ｉｉｉ）１５０位からＣ−末端のＨＢｃにとって異種である配列内に０から約５０アミノ酸残基を含み、
前記粒子が、約１．４から約１．６の２８０ｎｍ対２６０ｎｍ吸収比を示し、さらに前記キメラＨＢｃタンパク質が、ＨＢｃ配列で約５％以下のアミノ酸残基が置換されてあるアミノ酸残基配列を有する請求項６３に記載の免疫原性粒子。
【請求項７９】医薬として許容できる希釈剤に溶解または分散された免疫誘発に有効な量の免疫原性粒子を含むワクチンまたは接種物であって、前記免疫原性粒子が多数のリコンビナントキメラＢ型肝炎コア（ＨＢｃ）タンパク質分子で構成され、ここで、前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子が、約５１５までのアミノ酸残基の長さを有し、前記アミノ酸残基が、
（ａ）ＨＢｃイムノドミナントループ内に存在するペプチド結合異種エピトープもしくは共役エピトープのための異種リンカー残基を含む前記ＨＢｃ分子のＮ−末端１５０アミノ酸残基の少なくとも約１３０残基の配列、またはＮ−末端１５０ＨＢｃアミノ酸残基の少なくとも約１３５残基の配列を含み、
（ｂ）前記ＨＢｃ配列のＣ−末端残基から前記分子のＣ−末端に向かって、さらに前記キメラ分子のＣ−末端から約３０残基内に１つから１０のシステイン残基（Ｃ−末端システイン残基）を含み、
（ｃ）ＨＢｃ１３５位からＨＢｃＣ−末端の少なくとも６つのアミノ酸残基配列を含み、
前記キメラ分子は、前記ＨＢｃ配列内に２０％以下の保存的置換アミノ酸残基を含み、さらに
前記粒子は実質的に核酸と結合せず、さらに前記粒子は、前記Ｃ−末端システイン残基を欠くか、またはキメラ分子内に存在するＣ−末端システイン残基が別の残基に置換されてあるがその他の点では同一のＨＢｃキメラから生成される粒子よりも安定である前記ワクチンまたは接種物。
【請求項８０】前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子が、約１３５から約５１５のアミノ酸残基の長さを有し、さらにＮ−末端からドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶと称される４つのペプチド結合アミノ酸残基配列ドメインを含み、ここで、
（ａ）ドメインＩは、約７１から約１００アミノ酸残基を含み、前記アミノ酸残基の配列が少なくともＨＢｃの５位から７５位の残基配列を含み、場合によってＨＢｃ残基１−４の１つとペプチド結合した約３０までのアミノ酸残基を含む異種エピトープを含み；
（ｂ）ドメインＩＩは、ドメインＩのＨＢｃ残基７５とペプチド結合した約５から約２５０アミノ酸残基を含み、ここで、（ｉ）ＨＢｃの７６位から８５位の配列中の少なくとも４つの残基はＨＢｃにとって異種である１つから約２４５アミノ酸残基とペプチド結合して存在し、異種エピトープまたは共役エピトープのための異種リンカー残基を構成するか、または（ｉｉ）７６位から８５位のＨＢｃの配列は異種残基とは結合せずに存在し；
（ｃ）ドメインＩＩＩはドメインＩＩの残基８５とペプチド結合した８６位から１３５位のＨＢｃ配列であり；さらに、
（ｄ）ドメインＩＶは、（ｉ）ドメインＩＩＩの１３５位の残基とペプチド結合した１３６位から１４９位のＨＢｃアミノ酸残基配列の０から１４残基、（ｉｉ）キメラ分子のＣ−末端から約３０残基以内に１つから１０のシステイン残基（Ｃ−末端システイン残基）、および（ｉｉｉ）１５０位からＣ−末端のＨＢｃにとって異種である配列内に０から約１００アミノ酸残基を含み、ここで、ドメインＩＶは前記（ｉｉ）の１つから１０のシステイン残基を含む少なくとも６つのアミノ酸残基を含むことを条件とし、
前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子が、前記ＨＢｃ配列で約５％以下のアミノ酸残基が置換されてあるアミノ酸残基配列を有する、請求項７９に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項８１】ドメインＩＩに共役エピトープのための異種リンカー残基を含み、さらに前記異種リンカー残基に結合したハプテンを含む、請求項８０に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項８２】前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子が、約１７５から約２４０のアミノ酸残基の長さを有し、さらにＮ−末端からドメインＩ、ＩＩ、ＩＩＩおよびＩＶと称される４つのペプチド結合アミノ酸残基配列ドメインを含み、ここで、
（ａ）ドメインＩは、ＨＢｃの１位から７５位の残基配列を含み；
（ｂ）ドメインＩＩは、ドメインＩのＨＢｃ残基７５とペプチド結合した約５から約５５アミノ酸残基を含み、ここで、ＨＢｃの７６位から８５位の配列中の少なくとも４つの残基が、ＨＢｃにとって異種である６から約５０アミノ酸残基とペプチド結合して存在し、異種エピトープを構成し；
（ｃ）ドメインＩＩＩは、ドメインＩＩの残基８５とペプチド結合した８６位から１３５位のＨＢｃ配列であり；さらに、
（ｄ）ドメインＩＶは、（ｉ）ドメインＩＩＩの１３５位の残基とペプチド結合した１３６位から１４９位のＨＢｃアミノ酸残基配列の５から１４の残基、および（ｉｉ）１５０位からＣ−末端のＨＢｃにとって異種である配列内に０から約５０アミノ酸残基を含み、
前記粒子が、約１．４から約１．６の２８０ｎｍ対２６０ｎｍ吸収比を示す、請求項７９に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項８３】非経口投与用に適用させた請求項７９に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項８４】粘膜免疫用に適用させた請求項７９に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項８５】前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子粒子が、腸チフス菌（S. typhi）、ネズミチフス菌（S. typhimurium）またはネズミチフス菌−大腸菌ハイブリッドの弱毒株に存在する、請求項７９に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項８６】前記リコンビナントキメラＨＢｃタンパク質分子粒子が植物組織に存在する、請求項７９に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項８７】さらにアジュバントを含む請求項７９に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項８８】前記アジュバントがミョウバンである請求項８７に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項８９】前記アジュバントが、ムラミルジペプチド、７−置換−８−オキソ−もしくは８−スルホ−グアノシン誘導体、モノホスホリル脂質Ａ、アルミニウムもしくはカルシウム塩から成る群から選択される小分子である、請求項８７に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項９０】前記アジュバントが、前記免疫原性粒子および前記医薬として許容できる希釈剤とともに乳化される油である、請求項８７に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項９１】前記乳剤が水相および油相を有する油中水である、請求項９０に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項９２】前記乳剤が水相および油相を有する水中油である、請求項９０に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項９３】前記乳剤の油相がスクァレンを含む、請求項９２に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項９４】前記乳剤の油相がスクァレンを含む、請求項９２に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項９５】前記乳剤の水相および油相が、ソルビタンまたはマンニッドＣ₁₂−Ｃ₂₄脂肪酸エステルである乳化剤によって乳化される、請求項９０に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項９６】前記乳化剤がマンニッドＣ₁₂−Ｃ₂₄脂肪酸エステルである、請求項９５に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項９７】前記マンニッドＣ₁₂−Ｃ₂₄脂肪酸エステルの前記Ｃ₁₂−Ｃ₂₄脂肪酸がオレイン酸である、請求項９６に記載のワクチンまたは接種物。
【請求項９８】請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃタンパク質分子をコードする核酸、またはその変種、類似体もしくは相補物。
【請求項９９】請求項１８に記載のリコンビナントＨＢｃタンパク質分子をコードする核酸、またはその変種、類似体もしくは相補物。
【請求項１００】請求項４２に記載のリコンビナントＨＢｃタンパク質分子をコードする核酸、またはその変種、類似体もしくは相補物。
【請求項１０１】請求項１に記載のリコンビナントＨＢｃタンパク質分子をコードする遺伝子を規定する核酸セグメント、またはその変種、類似体もしくは相補物に機能できるように連結されたベクター、および適合ホスト生物中で前記遺伝子の発現を駆動させるために適したプロモーターを含むリコンビナント核酸分子。
【請求項１０２】請求項１８に記載のリコンビナントＨＢｃタンパク質分子をコードする遺伝子を規定する核酸セグメント、またはその変種、類似体もしくは相補物に機能できるように連結されたベクター、および適合ホスト生物中で前記遺伝子の発現を駆動させるために適したプロモーターを含むリコンビナント核酸分子。
【請求項１０３】請求項４２に記載のリコンビナントＨＢｃタンパク質分子をコードする遺伝子を規定する核酸セグメント、またはその変種、類似体もしくは相補物に機能できるように連結されたベクター、および適合ホスト生物中で前記遺伝子の発現を駆動させるために適したプロモーターを含むリコンビナント核酸分子。
【請求項１０４】請求項１０１に記載のリコンビナント核酸分子で形質転換されたホスト細胞。
【請求項１０５】前記ホスト細胞が、ＣＨＯ、ＶＥＲＯもしくはＣＯＳ細胞、大腸菌、ビール酵母菌、ピキア・パストリス・ティフィー（Pichia pastoris typhi）、ネズミチフス菌およびネズミチフス菌−大腸菌ハイブリッドから成る群から選択される、請求項１０４に記載の形質転換ホスト細胞。
【請求項１０６】請求項１０２に記載のリコンビナント核酸分子で形質転換されたホスト細胞。
【請求項１０７】前記ホスト細胞が、ＣＨＯ、ＶＥＲＯもしくはＣＯＳ細胞、大腸菌、ビール酵母菌、ピキア・パストリス・ティフィー（Pichia pastoris typhi）、ネズミチフス菌およびネズミチフス菌−大腸菌ハイブリッドから成る群から選択される、請求項１０６に記載の形質転換ホスト細胞。
【請求項１０８】請求項１０２に記載のリコンビナント核酸分子で形質転換されたホスト細胞。
【請求項１０９】前記ホスト細胞が、ＣＨＯ、ＶＥＲＯもしくはＣＯＳ細胞、大腸菌、ビール酵母菌、ピキア・パストリス・ティフィー（Pichia pastoris typhi）、ネズミチフス菌およびネズミチフス菌−大腸菌ハイブリッドから成る群から選択される、請求項１０８に記載の形質転換ホスト細胞。
【請求項１１０】請求項７９に記載のワクチンまたは接種物をホスト動物に接種し、さらに前記接種動物が免疫反応を発達させるために十分な期間前記動物を維持する工程を含む、接種ホスト動物で免疫反応を誘発する方法。
【請求項１１１】請求項８０に記載のワクチンまたは接種物をホスト動物に接種し、さらに前記接種動物が免疫反応を発達させるために十分な期間前記動物を維持する工程を含む、接種ホスト動物で免疫反応を誘発する方法。
【請求項１１２】請求項８２に記載のワクチンまたは接種物をホスト動物に接種し、さらに前記接種動物が免疫反応を発達させるために十分な期間前記動物を維持する工程を含む、接種ホスト動物で免疫反応を誘発する方法。
【請求項１１３】請求項８７に記載のワクチンまたは接種物をホスト動物に接種し、さらに前記接種動物が免疫反応を発達させるために十分な期間前記動物を維持する工程を含む、接種ホスト動物で免疫反応を誘発する方法。
【請求項１１４】請求項８８に記載のワクチンまたは接種物をホスト動物に接種し、さらに前記接種動物が免疫反応を発達させるために十分な期間前記動物を維持する工程を含む、接種ホスト動物で免疫反応を誘発する方法。
【請求項１１５】請求項９２に記載のワクチンまたは接種物をホスト動物に接種し、さらに前記接種動物が免疫反応を発達させるために十分な期間前記動物を維持する工程を含む、接種ホスト動物で免疫反応を誘発する方法。

本発明のキメラ分子は、（ｉ）ＨＢｃ配列中に２０％以下の置換アミノ酸残基を含み、さらに（ｉｉ）ホスト細胞中での発現に際して、実質的に核酸と結合しないで、自己会合して粒子を形成する。前記粒子は、実質的に核酸との結合を伴わず、さらに、上記のＣ−末端システイン残基を欠くか、または前記キメラにＣ−末端システインは存在するが分子内で別の残基（例えばアラニン残基）によって置換されてあるがその他の点では同一であるＨＢｃキメラから生成される粒子よりも安定である。

上記のような本発明のキメラ分子のＨＢｃ部分が、１位から１４９位に対応する哺乳類ＨＢｃ分子以外を有する場合は、配列番号：２４７の１位から１４９位と比較して前記アミノ酸残基の約２０％以下が置換されてある。好ましくは約１０％以下、より好ましくは約５％以下、もっとも好ましくは約３％以下のアミノ酸残基が配列番号：２４７の１位から１４９位と比較して置換されてある。
１４９ＨＢｃ残基を有する目的のキメラは、したがって、配列番号：２４７の１位から１４９位の残基と異なる約３０までの残基、好ましくは約１５までの残基を含むことができる。より好ましくは、約７または８残基が、もっとも好ましくは約４または５残基が、１−１４９のａｙｗ配列（配列番号：２４７）と異なっている。ドメインＩＩのイムノドミナトループまたは末端以外の置換は、好ましくは前記キメラ分子の非らせん部分に存在し、典型的には残基１から約１５、および残基２４から約５０の間に存在し、粒子形成を担保する。例えば以下の文献を参照されたい：Koschel et al., J. Virol., 73(3):2153-2160(Mar. 1999)。
ＨＢｃ配列が１４９位を越えてＣ−末端で、もしくはＮ−末端で切断されているか、または１つもしくは２つ以上の欠失が免疫原性ループ内に存在する場合、置換される残基の数は、前記配列の全長が１４９未満であるので比例的に相違する。前記分子のそれ以外の場合の欠失は、計算のためには保存的欠失と考える。