JP2004533414A5

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Publication number: JP2004533414A5
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Filing date: 2002-02-25
Publication date: 2006-01-05

Description

図１は、α−クロロアセチルシクロスポリンＡ誘導体の調製のための反応スキームを示す。図２は、システイン含有ペプチドの、α−クロロアセチルシクロスポリンＡ誘導体へのカップリングのための一般的手順を示す。図３は、シクロスポリンＡ誘導体の、ビオチン標識ペプチド（配列番号８３〜８５）へのカップリングのための反応スキームを示す。図４は、シクロスポリンＡ誘導体の、未標識ペプチドＮ（配列番号７）へのカップリングのための反応スキームを示す。図５Ａは、送達増強輸送体を生物学的に活性な薬剤または目的の他の分子へと連結するために用いられ得る種々の型の切断可能リンカーを示す。図５Ａは、ジスルフィド結合の例を示す。図５Ｂは、送達増強輸送体を生物学的に活性な薬剤または目的の他の分子へと連結するために用いられ得る種々の型の切断可能リンカーを示す。図５Ｂは、電磁照射に曝露した際に切断される、光切断可能なリンカーを示す。図５Ｃは、送達増強輸送体を生物学的に活性な薬剤または目的の他の分子へと連結するために用いられ得る種々の型の切断可能リンカーを示す。図５Ｃは、切断可能リンカーとして用いられる改変リシル残基を示す。図５Ｄは、送達増強輸送体を生物学的に活性な薬剤または目的の他の分子へと連結するために用いられ得る種々の型の切断可能リンカーを示す。図５Ｄは、送達増強輸送体Ｔが、抗癌剤であるパクリタキセルの２’−酸素へと連結されている結合体を示す。連結部分は、（ｉ）送達増強輸送体に結合した窒素原子、（ｉｉ）窒素原子に対してパラ位に存在するリン酸モノエステル、および（ｉｉｉ）窒素原子に対してメタの、カルボキシルメチル基（これは、カルボン酸エステル結合によってパクリタキセルの２’−酸素に連結されている）を含む。図５Ｅは、送達増強輸送体を生物学的に活性な薬剤または目的の他の分子へと連結するために用いられ得る種々の型の切断可能リンカーを示す。図５Ｅは、アミノアルキルカルボン酸による、生物学的に活性な薬剤（例えば、パクリタキセル）への送達増強輸送体の連結である；リンカーアミノ基は、アミド結合によって送達増強輸送体へと連結されており、そしてエステル結合によってパクリタキセル部分へと連結されている。図５Ｆは、送達増強輸送体を生物学的に活性な薬剤または目的の他の分子へと連結するために用いられ得る種々の型の切断可能リンカーを示す。図５Ｆは、パクリタキセルおよび「ＴＡＸＯＴＥＲＥ^ＴＭ」（Ｒ’＝Ｈ、Ｒ”＝ＢＯＣ）に関する化学構造および構成要素骨格原子の従来の番号付けを示す。図５Ｇは、送達増強輸送体を生物学的に活性な薬剤または目的の他の分子へと連結するために用いられ得る種々の型の切断可能リンカーを示す。図５Ｇは、パクリタキセルおよび「ＴＡＸＯＴＥＲＥ^ＴＭ」（Ｒ’＝Ｈ、Ｒ”＝ＢＯＣ）に関する化学構造および構成要素骨格原子の従来の番号付けを示す。図５Ｇは、タキソイド（ｔａｘｏｉｄ）化合物に関する一般的化学構造および環原子番号付けを示す。図５Ｈは、送達増強輸送体を生物学的に活性な薬剤または目的の他の分子へと連結するために用いられ得る種々の型の切断可能リンカーを示す。図６は、Ｌ−アルギニンのへプタマー（配列番号３）とシクロスポリンＡとの間の化学結合体に関する合成スキーム（パネルＡ）およびそのｐＨ依存性化学物質遊離（配列番号６）（パネルＢ）を提示する。α−クロロエステル（６ｉ）を、ヨウ化ナトリウムの存在下でベンジルアミンで処理して置換をもたらして、二級アミン（６ｉｉ）を得た。アミン（６ｉｉ）を無水物（６）で処理し、そして得られる粗製の酸（６ｉｉｉ）を、その対応するＮＨＳエステル（６ｉｖ）へと変換した。次いで、エステル（６ｉｖ）を、ヘプタ−Ｌ−アルギニン（配列番号３）のアミノ末端とカップリングさせて、Ｎ−Ｂｏｃ保護ＣｓＡ結合体（６ｖ）を得た。最後に、ギ酸でのＢｏｃ保護基の除去によって、ＨＰＬＣ精製後、結合体（６ｖｉ）をそのオクタトリフルオロ酢酸塩として提供した。図７は、遊離可能なＲ７ＣｓＡによる、マウスの接触性皮膚炎における炎症の阻害を提示する。Ｂａｌｂ／ｃ（６〜７週）マウスの腹部に、アセトンオリーブオイル（９５：５）中の０．７％ＤＮＦＢ（１００μｌ）を塗布した。３日後、この動物の両方の耳を、アセトン中の０．５％ＤＮＦＢで再刺激した。マウスを、再刺激の１時間後、５時間後および２０時間後に、ビヒクル単独、１％Ｒ７ペプチド（配列番号３）単独、１％ＣｓＡ、１％非遊離可能Ｒ７ＣｓＡ、０．０１％／０．１％／１．０％遊離可能Ｒ７ＣｓＡ、およびフッ化ステロイドポジティブコントロールである０．１％トリアムシノロンアセトニドのいずれかで処置した。耳の炎症を、再刺激の２４時間後に、バネ付きカリパスを用いて測定した。炎症低減パーセントを、以下の式を用いて算出した：（ｔ−ｎ）／（ｕ−ｎ）（ここで、ｔ＝処置した耳の厚さ、ｎ＝正常な未処置耳の厚さ、そしてｕ＝何の処置もしない、炎症した耳の厚さ）。Ｎ＝各群において２０動物。図８は、銅−ジエチレントリアミン五酢酸錯体（Ｃｕ−ＤＴＰＡ）の調製のための手順を示す。図９は、アミノカプロン酸を介してＣｕ−ＤＴＰＡを輸送体（配列番号７０〜７２）へと連結するための手順を示す。図１０は、クロロ酢酸無水物でのヒドロコルチゾンのアシル化のための反応を示す。図１１は、アシル化ヒドロコルチゾンを輸送体へと連結するための反応を示す。図１２は、タキソールのＣ−２’誘導体の調製のための反応を示す。図１３は、タキソール誘導体の、ビオチン標識ペプチドへのカップリングのための反応の模式図を示す。図１４は、未標識ペプチドの、タキソールのＣ−２’誘導体へのカップリングのための反応を示す。図１５Ａは、他のＣ−２’タキソール−ペプチド結合体（配列番号３、７４および７５）の形成のための反応スキームを示す。図１５Ｂは、他のＣ−２’タキソール−ペプチド結合体（配列番号３、７４および７５）の形成のための反応スキームを示す。図１５Ｃは、他のＣ−２’タキソール−ペプチド結合体（配列番号３、７４および７５）の形成のための反応スキームを示す。図１６は、薬物または他の生物学的薬剤がｐＨ遊離可能リンカーによって送達増強輸送体へと連結している結合体の合成のための一般的ストラテジーを示す。図１７は、タキソール２’−クロロアセチル誘導体を合成するためのプロトコルの模式図を示す。図１８は、タキソールの２’−クロロアセチル誘導体がアルギニンへプタマー送達増強輸送体へと連結されるストラテジーを示す。図１９は、図１８に図示される反応条件を用いて作製され得る３つのさらなるタキソール−ｒ７結合体を示す。図２０は、タキソールおよび２つの異なるリンカーを用いた３日ＭＴＴ細胞傷害性アッセイの結果を示す。図２１は、Ｔａｔ_{４９−５７}（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ；配列番号８）：Ｔａｔ_{４９−５６}（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＲＲＱＲＲ；配列番号９）、Ｔａｔ_{４９−５５}（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＲＲＱＲ；配列番号１０）、Ｔａｔ_{５０−５７}（Ｆｌ−ａｈｘ−ＫＫＲＲＱＲＲＲ；配列番号１１）およびＴａｔ_{５１−５７}（Ｆｌ−ａｈｘ−ＫＲＲＱＲＲＲ；配列番号１２）という短縮型アナログのＦＡＣＳ細胞取り込みアッセイを示す。Ｊｕｒｋａｔ細胞を、種々の濃度（１２．５μＭを示す）のペプチドとともに２３℃で１５分間にわたってインキュベートした。図２２は、Ｔａｔ_{４９−５７}のアラニン置換アナログ：Ａ−４９（Ｆｌ−ａｈｘ−ＡＫＫＲＲＱＲＲＲ；配列番号１３）、Ａ−５０（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＡＫＲＲＱＲＲＲ；配列番号１４）、Ａ−５１（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＡＲＲＱＲＲＲ；配列番号１５）、Ａ−５２（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＡＲＱＲＲＲ；配列番号１６）、Ａ−５３（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＲＡＱＲＲＲ；配列番号１７）、Ａ−５４（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＲＲＡＲＲＲ；配列番号１８）、Ａ−５５（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＲＲＱＡＲＲ；配列番号１９）、Ａ−５６（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＲＲＱＲＡＲ；配列番号２０）およびＡ−５７（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＡ；配列番号２１）のＦＡＣＳ細胞取り込みアッセイを示す。Ｊｕｒｋａｔ細胞を、種々の濃度（１２．５μＭを示す）のペプチドとともに２３℃で１２分間にわたってインキュベートした。図２３は、Ｔａｔ_{４９−５７}のｄ−異性体およびレトロ−異性体（ｄ−Ｔａｔ４９−５７（Ｆｌ−ａｈｘ−ｒｋｋｒｒｑｒｒｒ）、Ｔａｔ５７−４９（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＲＲＱＲＲＫＫＲ；配列番号２２）およびｄ−Ｔａｔ５７−４９（Ｆｌ−ａｈｘ−ｒｒｒｑｒｒｋｋｒ））のＦＡＣＳ細胞取り込みアッセイを示す。Ｊｕｒｋａｔ細胞を、種々の濃度（１２．５μＭを示す）のペプチドとともに２３℃にて１５分間にわたってインキュベートした。図２４は、一連のアルギニンオリゴマーおよびＴａｔ_{４９−５７}（Ｒ５（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＲＲＲＲ；配列番号２３）、Ｒ６（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＲＲＲＲＲ；配列番号２４）、Ｒ７（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＲＲＲＲＲＲ；配列番号２５）、Ｒ８（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＲＲＲＲＲＲＲ；配列番号２６）、Ｒ９（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＲＲＲＲＲＲＲＲ；配列番号２７）、ｒ５（Ｆｌ−ａｈｘ−ｒｒｒｒｒ）、ｒ６（ＦＩ−ａｈｘ−ｒｒｒｒｒｒ）、ｒ７（Ｆｌ−ａｈｘ−ｒｒｒｒｒｒｒ）、ｒ８（Ｆｌ−ａｈｘ−ｒｒｒｒｒｒｒｒ）、ｒ９（Ｆｌ−ａｈｘ−ｒｒｒｒｒｒｒｒｒ））のＦＡＣＳ細胞取り込みを示す。Ｊｕｒｋａｔ細胞を、種々の濃度（１２．５μＭを示す）のペプチドとともに２３℃で４分間にわたってインキュベートした。図２５は、グアニジン置換ペプトイド（配列番号７６〜８０）の調製を提示する。図２６は、ポリグアニジンペプトイド（配列番号７６、７８および８０）およびｄ−アルギニンオリゴマーのＦＡＣＳ細胞取り込みを提示する。Ｊｕｒｋａｔ細胞を、種々の濃度（１２．５μＭを示す）のペプトイドおよびペプチドとともに２３℃で４分間にわたってインキュベートした。図２７は、ｄ−アルギニンオリゴマーおよびポリグアニジンペプトイドのＦＡＣＳ細胞取り込みを提示する。Ｊｕｒｋａｔ細胞を、種々の濃度（１２．５μＭを示す）の蛍光標識ペプトイドおよびペプチドとともに２３℃で４分間にわたってインキュベートした。図２８は、ｄ−アルギニンオリゴマーおよびＮ−ｈｘｇペプトイドのＦＡＣＳ細胞取り込みを提示する。Ｊｕｒｋａｔ細胞を、種々の濃度（６．３μＭを示す）の蛍光標識ペプトイドおよびペプチドとともに２３℃で４分間にわたってインキュベートした。図２９は、ｄ−アルギニンオリゴマーおよびＮ−ｃｈｇペプトイドのＦＡＣＳ細胞取り込みを示す。Ｊｕｒｋａｔ細胞を、種々の濃度（１２．５μＭを示す）の蛍光標識ペプトイドおよびペプチドとともに２３℃で４分間にわたってインキュベートした。図３０は、送達増強輸送体を、トリアゾール環構造を含む薬物へと結合するための一般的ストラテジーを示す。図３１Ａは、ＦＫ５０６が送達増強輸送体（配列番号８１および８２）へと結合している結合体を作製するための合成スキームを示す。図３１Ｂは、ＦＫ５０６が送達増強輸送体（配列番号８１および８２）へと結合している結合体を作製するための合成スキームを示す。図３２は、Ｎ末端システイン基を介した、アシクロビルの、ｒ７−アミドへの結合体化を図示する。ビオチン含有輸送体を用いた結合体化もまた示す。図３３は、レチナールとｒ９との間で形成された結合体を図示する（スペーシングアミノ酸なしで示す）。図３４は、レチン酸−ｒ９結合体を調製する際の切断可能リンカーの使用を図示する。図３５は、活性薬剤（例えば、アシクロビル）を輸送部分へと連結する方法を図示する。図３６は、活性薬剤（例えば、アシクロビル）を輸送部分へと連結する方法を図示する。図３７は、活性薬剤（例えば、コルチコイドステロイド）を輸送部分に連結する方法を図示する。

本明細書中で使用される場合、用語「ペプチド」とは、ペプチド結合によって結合した、Ｄ−アミノ酸もしくはＬ−アミノ酸またはＤ−アミノ酸とＬ−アミノ酸との混合物の単鎖から作製される化合物をいう。一般的に、ペプチドは、少なくとも２つのアミノ酸残基を含み、そして約５０アミノ酸未満の長さである。本明細書中でＤ−アミノ酸は、小文字の１文字アミノ酸記号（例えば、Ｄ−アルギニンに対しては、ｒ）で表され、一方、Ｌ−アミノ酸は、大文字の１文字アミノ酸記号（例えば、Ｌ−アルギニンに対しては、Ｒ）で表される。ホモポリマーペプチドは、１文字アミノ酸記号、続いてそのペプチド中のそのアミノ酸の連続した出現の数によって表される（例えば、Ｒ７（配列番号３）は、Ｌ−アルギニン残基で構成されるヘプタマーを表す）。

送達増強輸送体は、この送達増強輸送体の非存在下での化合物の送達と比較して、１以上のインタクトな上皮組織層または内皮組織層へ、および１以上のインタクトな上皮組織層または内皮組織層を横切る、結合体の送達を増加させる。いくつかの実施形態においては、この送達増強輸送体は、ＨＩＶ−１のｔａｔタンパク質を用いて得られる送達増強輸送体（Ｆｒａｎｋｅｌら（１９９１）ＰＣＴ公開ＷＯ９１／０９９５８）よりも、結合体の送達を有意に増加させる。送達はまた、ｔａｔ基本領域（配列ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ；（配列番号２８）を有する残基４９〜５７）を含むｔａｔタンパク質のより短いフラグメント（Ｂａｒｓｏｕｍら（１９９４）ＷＯ９４／０４６８６およびＦａｗｅｌｌら（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９１：６６４−６６８）の使用よりも、有意に増加される。好ましくは、本発明の輸送体を用いて得られる送達は、ｔａｔ残基４９〜５７を用いて得られる送達よりも、２倍よりも多く増加され、なおより好ましくは、６倍よりも多く、なおより好ましくは、１０倍よりも多く、そしてなおより好ましくは２０倍よりも多く増加される。

同様に、本発明の送達増強輸送体は、培養されたニューロンによって容易にインターナライズされるＡｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａホメオドメイン由来の１６アミノ酸のペプチド−コレステロール結合体（Ｂｒｕｇｉｄｏｕら（１９９５）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２１４：６８５−９３）と比較して、増加した送達を提供し得る。この領域（最小で残基４３〜５８）は、アミノ酸配列ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ；（配列番号２９）を有する。Ｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘタンパク質ＶＰ２２は、ｔａｔおよびＡｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａドメインと同様に、細胞への輸送を増強させることが以前に知られていたが、上皮膜および内皮膜へ、ならびに上皮膜および内皮膜を横切る輸送を増強させることは知られていなかった（ＥｌｌｉｏｔおよびＯ’Ｈａｒｅ（１９９７）Ｃｅｌｌ８８：２２３−３３；Ｄｉｌｂｅｒら（１９９９）ＧｅｎｅＴｈｅｒ．６：１２−２１；Ｐｈｅｌａｎら（１９９８）ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：４４０−３）。いくつかの実施形態においては、この送達増強輸送体は、ＡｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａホメオドメインおよびＶＰ２２タンパク質と比較して、有意に増加した送達を提供する。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａホメオドメインも、ＶＰ２２タンパク質も、８つ連続したアルギニン（配列番号４）も含まない。

好ましい実施形態の１つの群において、輸送部分は、式（ＺＹＺ）_ｎＺ（配列番号３３〜３６）を有し、ここで、各「Ｙ」は、グリシン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸およびε−アミノカプロン酸から独立して選択され、「Ｚ」は、好ましくはＬ−アルギニンであり、そしてｎは、好ましくは、２〜５の範囲の整数である。より好ましくは、各「Ｙ」は、グリシンまたはε−アミノカプロン酸であり、そしてｎは３である（配列番号３７）。実施形態のこの群において、グリシンの使用は、輸送部分が、組成物全体が、組換え方法によって調製され得るような、ポリペプチド生物学的薬剤に直接融合されるか、または共有結合される組成物にとって好ましい。例えば、固相方法を用いて輸送部分が収集される実施形態において、ε−アミノカプロン酸が好ましい。

別の好ましい実施形態において、輸送部分は式（ＺＹ）_ｎＺ（配列番号３８〜４４）を有し、ここで各「Ｙ」は、好ましくはグリシン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸およびε−アミノカプロン酸から選択され、「Ｚ」は、好ましくはＬ−アルギニンであり、そしてｎは、好ましくは、４〜１０の範囲の整数である。より好ましくは、各「Ｙ」は、グリシンまたはε−アミノカプロン酸であり、そしてｎは６である（配列番号４５）。特定の実施形態の上記の群と同様に、グリシンの使用は、輸送部分が、組成物全体が組換え方法によって調製され得るような、ポリペプチド生物学的薬剤に直接融合されるか、または共有結合される組成物にとって好ましい。輸送部分の溶液または固相構築物について、ε−アミノカプロン酸が好ましい。

好ましい実施形態のなお別の群において、輸送部分は、式（ＺＹＹ）_ｎＺ（配列番号４６〜５２）を有し、ここで、各「Ｙ」は、好ましくは、グリシン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸およびε−アミノカプロン酸から選択され、「Ｚ」は、好ましくは、Ｌ−アルギニンであり、そしてｎは、好ましくは、４〜１０の範囲の整数である。より好ましくは、各「Ｙ」は、グリシンまたはε−アミノカプロン酸であり、そしてｎは６である（配列番号５３）。

好ましい実施形態のなお別の群において、輸送部分は、式（ＺＹＹＹ）_ｎＺ（配列番号５４〜６０）を有し、ここで、各「Ｙ」は、好ましくは、グリシン、β−アラニン、γ−アミノ酪酸およびε−アミノカプロン酸から選択され、「Ｚ」は、好ましくはＬ−アルギニンであり、そしてｎは、好ましくは、４〜１０の範囲の整数である。より好ましくは、「Ｙ」はグリシンであり、そしてｎは６である（配列番号６１）。

当業者は、輸送部分が、より大きいポリペプチド内のポリペプチドフラグメントであり得ることを理解する。例えば、輸送部分は、この部分に隣接するさらなるアミノ酸をなお有する式（ＺＹＹ）_ｎＺ（配列番号４６〜５２）（例えば、Ｘ_ｍ（ＺＹＹ）_ｎＺ−Ｘ_ｐ（配列番号６２〜６８）、ここで添え字ｍおよびｐは、０〜約１０の整数を表し、そして各Ｘは、独立して天然のアミノ酸または非天然のアミノ酸である）であり得る。

１つのアプローチにおいて、結合体は、ＰＣＴ出願ＵＳ００／２３４４０（公開番号ＷＯ０１／１３９５７）（ＰＣＴ出願ＵＳ９８／１０５７１（公開番号ＷＯ９８５２６１４）もまた参照のこと）の図５Ａ中に図示されるように、ジスルフィド結合を含み得、この出願は、リンカーとして役立つＮ−アセチル保護されたシステイン基により、細胞傷害性薬剤の６−メルカプトプリンと連結された輸送ポリマーＴを含む、結合体（Ｉ）を示す。従って、この細胞傷害性薬剤はジスルフィド結合により６−メルカプト基と結合され、そしてこの輸送ポリマーはアミド結合を介してシステインカルボニル部分と結合される。還元またはジスルフィド交換によるジスルフィド結合の切断は、遊離した細胞傷害性薬剤の放出を生じる。ジスルフィド含有結合体を合成する方法は、ＰＣＴ出願ＵＳ９８／１０５７１の実施例９Ａ中に提供される。そこで記載される生成物は、Ｎ−アセチル−Ｃｙｓ−Ａｌａ−Ａｌａリンカーにより６−メルカプトプリンと連結されるＡｒｇ残基の七量体（配列番号３）を含み、ここでこのＡｌａ残基は、そのジスルフィドをチオールにより接近させるためのさらなるスペーサー、そして細胞内の切断のための還元剤として含まれる。この実施例におけるリンカーもまた、アミド結合の使用を例示し、そしてこの結合は細胞内で酵素的に切断され得る。

放出可能Ｒ７ＣｓＡ結合体を、接触皮膚炎のマウスモデルを使用して機能的活性についてインビボでアッセイした。１％の放出可能Ｒ７ＣＳＡ結合体での処理は、耳の炎症において７３．９％±４．０の減少を生じた（図７）。炎症の減少は、未処置の耳では全く見られず、処置された耳において見られた効果が、局所的でありかつ全身的ではないということを示していた。０．１％および０．０１％のＲ７−ＣｓＡで処置されたマウスの耳においてより低い阻害が観察され（それぞれ、６４．８％±４．０および４０．９％±３．３）、この効果が滴定可能であることを実証した。フッ素化コルチコステロイドポジティブコントロールでの処置は、耳腫大における減少（３４．１％±６．３）を生じたが、０．１％の放出可能Ｒ７ＣｓＡについて観察された減少より有意に低かった（図７）。未修飾のシクロスポリンＡ、ビヒクル単独、Ｒ７（配列番号３）、または非放出性Ｒ７ＣｓＡで処置されたマウスのいずれにおいても炎症の減少は観察されなかった。

ＤＴＰＡ−ａｃａ−Ｒ７−ＣＯ２Ｈ（配列番号３１）（１０ｍｇ、０．００６３ｍｍｏｌ）および硫酸銅（１．６ｍｇ、０．００６３ｍｍｏｌ）を、水（１ｍＬ）に溶解した。１８時間穏やかに攪拌させ、そして凍結乾燥して生成物を白色粉末（１０ｍｇ）として得た。

ペプチド合成の一般的手順。Ｔａｔ_{４９〜５７}（ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ；配列番号２８）、Ｔａｔ_{４９〜５７}に由来する短縮されたアラニン置換ペプチド、アンテナペディア_{４３〜５８}（ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫ；配列番号２９）、およびアルギニンのホモポリマー（Ｒ５〜Ｒ９；配列番号１〜５）およびｄ−アルギニン（ｒ５〜ｒ９）を、自動ペプチド合成機（ＡＢＩ４３３）を用いて、ペプチドカップリング試薬としてＨＡＴＵを用いる標準的な固相Ｆｍｏｃ化学（３５）を使用して調製した。フルオレセイン部分を、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中１２時間フルオレセインイソチオシアネート（１．０ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（５ｍｍｏｌ）で樹脂結合ペプチド（１．０ｍｍｏｌ）を処理することにより、アミノヘキサン酸スペーサーを介して結合した。樹脂からの切断を、９５：５のＴＦＡ／トリイソプロピルシランを使用して達成した。真空での溶媒の除去により、粗製油状物を得、これを冷エーテルで粉砕した。このようにして得た粗製混合物を、遠心分離し、エーテルをデカンテーションにより除去し、そして得られた橙色固体を、逆相ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ中Ｈ_２Ｏ／ＣＨ_３ＣＮ）により精製した。この生成物を、凍結乾燥により単離し、そしてエレクトロスプレー質量分析法により特徴付けした。このペプチドの純度は、分析用逆相ＨＰＬＣ（Ｈ_２Ｏ／ＣＨ_３ＣＮ、０．１％ＴＦＡ中）により決定した場合＞９５％であった。

（結果）
短いアルギニンリッチなペプチドの細胞取り込みの構造的要件を決定するために、Ｔａｔ_{４９〜５７}の一連の蛍光標識短縮アナログを、標準の固相化学を使用して合成した。例えば、Ａｔｈｅｒｔｏｎ，Ｅ．ら、ＳＯＬＩＤ−ＰＨＡＳＥＰＥＰＴＩＤＥＳＹＮＴＨＥＳＩＳ（ＩＲＬ：Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌ．１９８９）を参照のこと。フルオレセイン部分を、アミノへキサン酸スペーサーを介してアミノ末端上に結合した。次いで、これらの蛍光標識ペプチドの、Ｊｕｒｋａｔ細胞に進入する能力を、蛍光活性化細胞選別器（ＦＡＣＳ）を使用して分析した。試験したペプチド構築物は、Ｔａｔ_{４９〜５７}（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＲ；配列番号８）：Ｔａｔ_{４９〜５６}（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＲＲＱＲＲ；配列番号９）、Ｔａｔ_{４９〜５５}（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＲＲＱＲ；配列番号１０）、Ｔａｔ_{５０〜５７}（Ｆｌ−ａｈｘ−ＫＫＲＲＱＲＲＲ配列番号１１）、およびＴａｔ_{５１〜５７}（Ｆｌ−ａｈｘ−ＫＲＲＱＲＲＲ；配列番号１２）であった。細胞表面結合と内在化との間の区別は、アジ化ナトリウムの存在下および非存在下におけるアッセイの並行セットを実行することにより全体にわたって達成された。アジ化ナトリウムは、エネルギー依存性細胞取り込みを阻害するが細胞表面結合を阻害しないので、２つのアッセイ間の蛍光の差異は、内在化から生じる蛍光の量を与えた。

個々のアミノ酸残基の細胞取り込みに対する寄与を決定するために、Ｔａｔ_{４９−５７}の各部位にアラニン置換を含むアナログを、合成し、そしてＦＡＣＳ分析によりアッセイした（図２２）。以下の構築物を試験した：Ａ−４９（Ｆｌ−ａｈｘ−ＡＫＫＲＲＱＲＲＲ；配列番号１３）、Ａ−５０（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＡＫＲＲＱＲＲＲ；配列番号１４）、Ａ−５１（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＡＲＲＱＲＲＲ；配列番号１５）、Ａ−５２（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＡＲＱＲＲＲ；配列番号１６）、Ａ−５３（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＲＡＱＲＲＲ；配列番号１７）、Ａ−５４（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＲＲＡＲＲＲ；配列番号１８）、Ａ−５５（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＲＲＱＡＲＲ；配列番号１９）、Ａ−５６（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＲＲＱＲＡＲ；配列番号２０）、およびＡ−５７（Ｆｌ−ａｈｘ−ＲＫＫＲＲＱＲＲＡ；配列番号２１）。Ｔａｔ_{４９〜５７}の非荷電グルタミン残基のアラニンとの置換（Ａ−５４）は、細胞内在化において中程度の減少を生じた。他方、各々のカチオン性残基のアラニン置換は、個々に細胞取り込みの７０〜９０％の損失を生じた。これらの場合、リジンのアラニンとの置換（Ａ−５０、Ａ−５１）またはアルギニンのアラニンとの置換（Ａ−４９、Ａ−５２、Ａ−５５、Ａ−５６、Ａ−５７）は、取り込みの減少において同様の効果を有していた。

これらの最初の結果は、アルギニン含量が、Ｔａｔ_{４９−５７}の細胞取り込みの主な原因であることを示していた。さらに、これらの結果は、本発明者らが実証した本発明者らの以前の結果（アルギニンの短いオリゴマーが、リジン、オルニチン、およびヒスチジンの対応する短いオリゴマーよりも細胞への進入においてより有効であることを）と一致していた。確立されていないことは、どのアルギニンホモオリゴマーがＴａｔ_{４９〜５７}よりも効果的であるかということである。この点に取り組むために、Ｔａｔ_{４９〜５７}を、ｌ−アルギニン（Ｒ５〜Ｒ９;配列番号１〜５）オリゴマーおよびｄ−アルギニン（ｒ５〜ｒ９）オリゴマーと比較した。Ｔａｔ_{４９〜５７}は、８つのカチオン性残基を含むが、その細胞内在化は、Ｒ６（配列番号２）とＲ７（配列番号３）との間であり（図２４）、６つのアルギニン残基の存在が、細胞取り込みに最も重要な因子であることを実証する。意味深いことに、７〜９のアルギニン残基を含む結合体は、Ｔａｔ_{４９〜５７}より良好な取り込みを示した。

これらのアルギニンオリゴマーおよびＴａｔ_{４９〜５７}の細胞に入る能力を定量的に比較するために、ミカエリス−メンテン速度分析を行なった。細胞の取り込みの速度は、３０、６０、１２０および２４０秒間の、Ｊｕｒｋａｔ細胞におけるペプチドのインキュベーション（３℃）後に決定した（表１）。結果のＫ_ｍ値は、ｒ９およびＲ９（配列番号５）が、Ｔａｔ_{４９〜５９}よりもそれぞれ、約１００倍および２０倍速い速度で、細胞に入ることを明らかにした。比較のために、Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ_{４３〜５９}をまた分析し、そして、Ｔａｔ_{４７〜５９}より約２倍速く細胞に入るが、ｒ９およびＲ９（配列番号５）よりも有意に遅いことを示した。

（実施例６）
（Ｔａｔ_{４９−５７}のペプチド模倣アナログの設計および合成）
（方法）
（ペプトイドポリアミン合成の一般的手順）
ペプトイドを、Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎによって開発された文献の手順に従って、樹脂を混合するために、フリッティングしたガラス器具および窒素の陽圧を使用して、手動で合成した。例えば、Ｍｕｒｐｈｙ，Ｊ．Ｅら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５，１５１７−１５２２（１９９８）；Ｓｉｍｏｎ，Ｒ．Ｊら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９，９３６７−９３７１（１９９２）；Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎ，Ｒ．Ｎら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４，１０６４６−１０６４７（１９９２）を参照のこと。Ｆｍｏｃ置換Ｒｉｎｋアミド樹脂（０．２ｍｍｏｌ）と２０％ピペリジン／ＤＭＦ（５ｍＬ）での３０分間（２×）の処理により、遊離樹脂結合アミンを得、これをＤＭＦ（３×５ｍＬ）で洗浄した。この樹脂を、ＤＭＦ（５ｍＬ）中のブロモ酢酸（２．０ｍｍｏｌ）の溶液で３０分間処理した。この手順を繰り返した。次いで、この樹脂を洗浄し（３×５ｍＬＤＭＦ）、そしてＤＭＦ（５ｍＬ）中のモノ−Ｂｏｃジアミン（８．０ｍｍｏｌ）の溶液で１２時間処理した。これら２つの工程を、必要とされる長さのオリゴマーが得られるまで繰り返した（注記：ＤＭＦ中のモノ−Ｂｏｃジアミンの溶液を、収率を明らかに低下させることなく再利用し得た）。次いで、この樹脂を、ＤＭＦ中のＮ−Ｆｍｏｃ−アミノヘキサン酸（２．０ｍｍｏｌ）およびＤＩＣ（２．０ｍｍｏｌ）で１時間処理し、そしてこれを繰り返した。次いで、Ｆｍｏｃを、２０％ピペリジン／ＤＭＦ（５ｍＬ）で３０分間処理することによって、除去した。この工程を繰り返し、そしてこの樹脂をＤＭＦ（３×５ｍＬ）で洗浄した。次いで、遊離アミン樹脂を、ＤＭＦ（５ｍＬ）中のフルオレセインイソチオシアネート（０．２ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（２．０ｍｍｏｌ）で１２時間処理した。次いで、この樹脂をＤＭＦ（３×５ｍＬ）およびジクロロメタン（５×５ｍＬ）で洗浄した。この樹脂からの切断を、９５：５ＴＦＡ／トリイソプロピルシラン（８ｍＬ）を使用して達成した。減圧下での溶媒の除去により、粗製油状物を得、これを冷エーテル（２０ｍＬ）で粉砕した。このように得た粗製混合物を遠心分離し、エーテルをデカンテーションによって除去し、そして得られる橙色固体を、逆相ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ中Ｈ_２Ｏ／ＣＨ_３ＣＮ）により精製した。この生成物を、凍結乾燥によって単離し、そして電子スプレー質量分析によって、そして選択された場合には^１ＨＮＭＲ分光法によって、特徴付けた。

蛍光標識されたポリグアニジンＮ−ａｒｇ５ペプトイド（配列番号７６）、ポリグアニジンＮ−ａｒｇ７ペプトイド（配列番号７８）、ポリグアニジンＮ−ａｒｇ９ペプトイド（配列番号８０）の細胞取り込みを、Ｊｕｒｋａｔ細胞およびＦＡＣＳ分析を使用して、対応するｄ−アルギニンペプチドｒ５、ｒ７、ｒ９（類似のタンパク分解性特性）と比較した。Ｎ−ａｒｇ５（配列番号７６）、Ｎ−ａｒｇ７（配列番号７８）、Ｎ−ａｒｇ９（配列番号８０）を含む細胞の内側で測定した蛍光の量は、ｒ５、ｒ７、ｒ９に関して見出される量に類似して、グアニジン残基の数に比例した：Ｎ−ａｒｇ９＞Ｎ−ａｒｇ７＞Ｎ−ａｒｇ５（それぞれ、配列番号８０、配列番号７８、配列番号７６）（図２６）。さらに、Ｎ−ａｒｇ５ペプトイド（配列番号７６）、Ｎ−ａｒｇ７ペプトイド（配列番号７８）、Ｎ−ａｒｇ９ペプトイド（配列番号８０）は、対応するペプチドｒ５、ｒ７、ｒ９と比較して、わずかに低い量の細胞侵入のみを示した。これらの結果は、Ｔａｔ_{４９−５７}またはアルギニンオリゴマーのペプチド骨格に沿った水素結合が、細胞取り込みのために必要とされる構造的エレメントではなく、そしてオリゴマーのグアニジン置換ペプトイドが、アルギニンリッチなペプチドの代わりに、分子輸送体として利用され得ることを実証する。アジ化ナトリウムの添加は、内在化を阻害し、このことは、ペプトイドの細胞取り込みもまたエネルギー依存性であることを示した。

（実施例７）
（細胞取り込みに対する側鎖長の効果）
Ｎ−ａｒｇペプトイドが効果的に細胞膜を横切ることを確立した後に、細胞取り込みにおける側鎖長（メチレンの数）の効果を研究した。所定の数のグアニジン残基（５、７、９）については、細胞取り込みは、側鎖長に比例した。より長い側鎖を有するペプトイドは、より効率的な細胞取り込みを示した。グアニジンヘッド基と骨格との間にメチレンが６つのスペーサーを有する９マーペプトイドアナログ（Ｎ−ｈｘｇ９）は、対応するｄ−アルギニンオリゴマー（ｒ９）よりも顕著により高い細胞取り込みを示した。取り込みの相対的順序は、Ｎ−ｈｘｇ９（６メチレン）＞Ｎ−ｂｔｇ９（４メチレン）＞ｒ９（３メチレン）＞Ｎ−ａｒｇ９（配列番号８０）（３メチレン）＞Ｎ−ｅｔｇ９（２メチレン）であった（図２７）。注記として、Ｎ−ｈｘｇペプトイドは、対応するｄ−アルギニンオリゴマーよりさらに大きな、顕著に高い細胞取り込みを示した。対応するヘプタマーおよびペンタマーの細胞取り込みもまた、同じ相対的傾向を示した。Ｎ−ｈｘｇペプトイドに含まれる側鎖がより長いほど、内在化の量がさらに１つ多いグアニジン残基を含む対応するｄ−アルギニンオリゴマーに匹敵するような程度まで、細胞取り込みが改善された（図２８）。例えば、Ｎ−ｈｘｇ７ペプトイドは、ｒ８に匹敵する細胞取り込みを示した。

（考察）
ノナペプチドＴａｔ_{４９−５７}は、以前に、原形質膜を介して効率的に転座することが示された。この研究の目的は、この効果のための構造的基礎を決定すること、およびこの情報を使用してより単純かつより効果的な分子輸送体を開発することであった。この目的のために、フルオレセイン標識に結合体化した、Ｔａｔ_{４９−５７}の短縮型誘導体およびアラニン置換誘導体を調製した。これらの誘導体は、Ｔａｔ_{４９−５７}と比較して非常に減少した細胞取り込みを示し、このことは、Ｔａｔ_{４９−５７}のカチオン性残基の全てが、効率的な細胞取り込みのために必要とされることを示す。カチオン性オリゴマーの短いオリゴマーについての本発明者らの以前の研究と比較した場合に、これらの知見は、アルギニンのオリゴマーが、Ｔａｔ_{４９−５７}より優れており、そして確かにより容易かつ費用効率的に調製され得ることを示唆した。短いアルギニンオリゴマーとＴａｔ_{４９−５７}との比較は、前者のメンバーが、実際に、より効率的に細胞に取り込まれることを示した。これは、初めて、ミカエリス−メンテンの速度論分析によって、さらに定量され、この分析は、Ｒ９（配列番号５）およびｒ９オリゴマーが、Ｔａｔ_{４９−５７}について見出される値より３０倍および１００倍高いＫｍ値を有することを示した。

本発明者らのペプチドの研究において明らかとなった、グアニジノヘッド基の重要性およびオリゴマーキラリティーの明らかな不感受性を考慮して、本発明者らは、新規な一連のポリグアニジンペプトイドを設計し、そして合成した。アルギニン側鎖を組み込むペプトイドであるＮ−ａｒｇ５（配列番号７６）、Ｎ−ａｒｇ７（配列番号７８）、Ｎ−ａｒｇ９（配列番号８０）は、対応するｄ−アルギニンペプチドｒ５、ｒ７、ｒ９に匹敵する細胞取り込みを示した。このことは、ペプチド骨格に沿った水素結合および骨格キラリティーが、細胞取り込みのために必須ではないことを示す。この観察は、これらのペプトイド、アルギニンオリゴマー、およびＴａｔ_{４９−５７}（これらは全て、深く埋め込まれた骨格およびグアニジニウム優性表面を有する）の分子モデルと一致する。分子モデルは、これらの構造的特性が、ペプトイド骨格とグアニジノヘッド基との間に異なるアルキルスペーサーを有するオリゴマーにおいて、様々な程度で保持されることを、さらに明らかにする。従って、骨格と側鎖との間に２−（Ｎ−ｅｔｇ）、４−（Ｎ−ｂｔｇ）、および６−原子（Ｎ−ｈｘｇ）のスペーサーを組み込む一連のペプトイドを調製し、そして細胞取り込みについて、Ｎ−ａｒｇペプトイド（３原子スペーサー）およびｄ−アルギニンオリゴマーと比較した。側鎖の長さは、細胞侵入に対して、劇的な影響を有した。細胞取り込みの量は、Ｎ−ｈｘｇ＞Ｎ−ｂｔｇ＞Ｎ−ａｒｇ＞Ｎ−ｅｔｇの順で、側鎖の長さに比例した。細胞取り込みは、グアニジンヘッド基と骨格との間のアルキルスペーサーユニットの数が増加する場合に、改善された。重要なことに、Ｎ−ｈｘｇ９は、ｒ９より優れており、後者は、Ｔａｔ_{４９−５７}より１００倍良好であった。この結果により、本発明者らは、グアニジノ基と骨格との間により長いオクチルスペーサー（Ｎ−ｏｃｇ）を含むペプトイド誘導体を調製した。溶解度に関する問題点に起因して、本発明者らは、これらの化合物を試験しなかった。

無水ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中の上記のヒドラゾン（３）（０．０２５ｇ、２４．７μｍｏｌ）、輸送体（１×、Ｂａｃａｒ_９ＣＣＯＮＨ_２．９ＴＦＡ、Ｂａｃａｒ_７ＣＣＯＮＨ_２．７ＴＦＡ、ＢａｃａＣＣＯＮＨ_２、ＮＨ_２ｒ_７ＣＣＯＮＨ_２．８ＴＦＡ、ＮＨ_２Ｒ_７ＣＣＯＮＨ_２．８ＴＦＡ；（配列番号３２））およびジイソプロピルエチルアミン（１×）の溶液を、室温で３６時間（この時点で、ＴＬＣが開始ヒドラゾンの完全な消失を示した）、窒素下で撹拌した。溶媒を、この反応混合物からエバポレートし、そして、残渣を、トリフルオロ酢酸で緩衝化した水およびアセトニトリルを使用して、逆相ＨＰＬＣで精製した。

全ての生成物の構造を、１Ｈ−ＮＭＲスペクトルおよびＴＯＦＭＳ分析によって確認した。

本実施例において、シクロスポリンを、無水クロロ酢酸を使用して、そのα−クロロ酢酸エステルに転化し、６ｉを提供する（図６を参照のこと）。次いで、エステル６ｉを、ベンジルアミンで処理し、６ｉｉを提供する。Ｂｏｃ−保護イミノジ酢酸無水物とこのアミンの反応により、酸６ｉｉｉを提供し、これを次いで、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドを用いて活性化エステル（６ｉｖ）に転化する。Ｌ−アルギニンンヘプタマー（配列番号３）と６ｉｖとのカップリングにより、ＢＯＣ−保護結合体６ｖを提供し、これを、確立された方法に従って、ＢＯＣ保護基の除去により、結合体６ｖｉに転化し得る。

例えば、グリシン、ε−アミノカプロン酸、またはγ−アミノ酪酸により分離されたアルギニン基を有する輸送部分を、オリゴアルギニン輸送基を示す本実施例および以下の実施例において、アルギニンヘプタマー（配列番号３）の代わりに使用し得る。

ｒ５結合体−１２ｍｇ獲得（２９％単離収率）
ｒ７結合体−２２ｍｇ獲得（５５％単離収率）
Ｒ７結合体（配列番号７３）−１３ｍｇ獲得（３３％単離収率）

得られたクロロアセチルエステルを、窒素雰囲気下で、乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに溶解した。この溶液に、Ｈｕｎｉｇ塩基（１当量）およびＡｃＨＮ−Ｃ−ａｃａ−Ｒ８−ＣＯＮＨ２＊８ＨＣｌ（配列番号６９）を、急速に撹拌しながら添加した。この反応系を、ＴＬＣ分析により、全ての開始物質が消費されることが同定されるまで続けた（約２時間）。この反応系を、減圧下、溶媒の除去によって停止した。この残渣を、ＲＰ−ＨＰＬＣによって精製し、所望のアシクロビル結合体を得た。

Claims

化合物の、動物の眼の組織への送達および動物の眼の組織を横切る送達を増強する組成物であって、該化合物および送達増強輸送体を含む結合体を含み、ここで：
ｉ．該化合物が、リンカーを介して該送達増強輸送体に結合され；そして、
ｉｉ．該送達増強輸送体が、５０未満のサブユニットを含み、そして、少なくとも５つのグアニジノ部分またはアミジノ部分を含み、これによって、該送達増強輸送体の非存在下での該化合物の輸送と比較して、該眼の組織への該結合体の送達が増大される、
組成物。
請求項１に記載の組成物であって、ここで、前記結合体の前記眼の組織への送達が、前記送達増強輸送体の非存在下における前記化合物の送達と比較して、少なくとも２倍増大される、組成物。
請求項１に記載の組成物であって、ここで、前記結合体の前記眼の組織への送達が、前記送達増強輸送体の非存在下における前記化合物の送達と比較して、少なくとも１０倍増大される、組成物。
請求項１に記載の組成物であって、ここで、前記眼の組織が、上皮組織または内皮組織の１以上の層である、組成物。
請求項１に記載の組成物であって、ここで、前記眼の組織が網膜である、組成物。
請求項１に記載の組成物であって、ここで、前記眼の組織が視神経である、組成物。
前記リンカーが、放出可能なリンカーである、請求項１に記載の組成物。
請求項７に記載の組成物であって、ここで、前記リンカーが、ｐＨ７の生理食塩水中で安定であるが、細胞に輸送されると切断される、組成物。
前記サブユニットがアミノ酸である、請求項１に記載の組成物。
請求項１に記載の組成物であって、ここで、前記結合体が、以下：

のような構造３、４または５からなる群より選択される構造を有し、ここで：
Ｒ^１は、前記化合物を含み；
Ｘは、生物学的活性化合物上の官能基と連結部分上の末端官能基との間で形成された結合であり；
Ｙは、輸送部分上の官能基および連結部分上の官能基から形成された結合であり；
Ａは、ＮまたはＣＨであり；
Ｒ^２は、水素、アルキル、アリール、アシルまたはアリルであり；
Ｒ^３は、前記送達増強輸送体を含み、
Ｒ^４は、Ｓ、Ｏ、ＮＲ^６またはＣＲ^７Ｒ^８であり；
Ｒ^５は、Ｈ、ＯＨ、ＳＨまたはＮＨＲ_６であり；
Ｒ^６は、水素、アルキル、アリール、アシルまたはアリルであり；
ｋおよびｍは１および２から各々独立して選択され；ならびに
ｎは１〜１０である、
組成物。
請求項１０に記載の組成物であって、ここで、Ｘは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｃ（Ｓ）Ｏ−、−Ｃ（Ｓ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨ−、−ＳＯＮＨ−、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、およびＣＲ^７Ｒ^８からなる群より選択され、ここで、Ｒ^７およびＲ^８は、各々、Ｈおよびアルキルからなる群より独立して選択される、組成物。
前記結合体が構造３を含み、ＹはＮであり、そして、Ｒ^２はメチル、エチル、プロピル、ブチル、アリル、ベンジルまたはフェニルである、請求項１０に記載の組成物。
Ｒ^２はベンジルであり；ｋ、ｍおよびｎが各々１であり、そして、Ｘが−ＯＣ（Ｏ）−である、請求項１０に記載の組成物。
前記結合体は構造４を含み；Ｒ^４はＳであり；Ｒ^５はＮＨＲ^６であり；そして、Ｒ^６は水素、メチル、アリル、ブチルまたはフェニルである、請求項１０に記載の組成物。
前記結合体は構造４を含み；Ｒ^５はＮＨＲ^６であり；Ｒ^６は水素、メチル、アリル、ブチルまたはフェニルであり；そして、ｋおよびｍは各々１である、請求項１０に記載の組成物
。
請求項１に記載の組成物であって、ここで、前記結合体が、以下：

のような構造６を含み、ここで：
Ｒ^１は、前記化合物を含み；
Ｘは、生物学的活性化合物上の官能基と連結部分上の末端官能基との間で形成された結合であり；
Ｙは、輸送部分上の官能基および連結部分上の官能基から形成された結合であり；
Ａｒは、オルト位またはパラ位に配置された結合化遊離基を有するアリール基であり、該アリール基は置換されてもよいし、置換されなくてもよく；
Ｒ^３は、前記送達増強輸送体を含み、
Ｒ^４は、Ｓ、Ｏ、ＮＲ^６またはＣＲ^７Ｒ^８であり；
Ｒ^５は、Ｈ、ＯＨ、ＳＨまたはＮＨＲ_６であり；
Ｒ^６は、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、アシルまたはアリルであり；
Ｒ^７およびＲ^８は、水素またはアルキルから独立して選択され；そして
ｋおよびｍは、１および２から各々独立して選択される、
組成物。
請求項１６に記載の組成物であって、ここで、Ｘは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−、−Ｓ−Ｓ−、−Ｃ（Ｓ）Ｏ−、−Ｃ（Ｓ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨ−、−ＳＯＮＨ−、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、およびＣＲ^７Ｒ^８からなる群より選択され、ここで、Ｒ^７およびＲ^８は、各々、Ｈおよびアルキルからなる群より独立して選択される、組成物。
Ｒ^４はＳであり；Ｒ^５はＮＨＲ^６であり；そして、Ｒ^６は水素、メチル、アリル、ブチルまたはフェニルである、請求項１６に記載の組成物。
前記結合体が、少なくとも２つの送達増強輸送体を含む、請求項１に記載の組成物。
前記結合体が、点眼剤中に処方される、請求項１に記載の組成物。
前記結合体が、注入のための溶液中に処方される、請求項１に記載の組成物。
前記送達増強輸送体が、非ペプチド骨格を含む、請求項１に記載の組成物。
請求項１に記載の組成物であって、ここで、前記送達増強輸送体は、該送達増強輸送体分子が天然に存在するタンパク質中で結合されるアミノ酸配列に結合されない、組成物。
前記送達増強輸送体が、５〜２５のグアニジノ部分またはアミジノ部分を含む、請求項１に記載の組成物。
前記送達増強輸送体が、７と１５の間のグアニジノ部分を含む、請求項２４に記載の組成物
。
前記送達増強輸送体が、少なくとも６つの連続したグアニジノ部分および／またはアミジノ部分を含む、請求項２４に記載の組成物。
請求項１に記載の組成物であって、前記送達増強輸送体が、本質的に５〜５０のアミノ酸からなり、これらのアミノ酸の少なくとも５０％がアルギニンまたはそのアナログである、組成物。
前記送達増強輸送体が、５〜２５のアルギニン残基またはそのアナログを含む、請求項２７に記載の組成物。
少なくとも１つのアルギニンが、Ｄ−アルギニンである、請求項２８に記載の組成物。
前記アルギニンの全てがＤ−アルギニンである、請求項２９に記載の組成物。
前記送達増強輸送体を含む前記アミノ酸の少なくとも７０％が、アルギニンまたはアルギニンアナログである、請求項２７に記載の組成物。
前記送達増強輸送体が、７つの連続したＤ−アルギニンである、請求項２７に記載の組成物。
請求項１に記載の組成物であって、前記化合物は、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染、緑内障、前部ブドウ膜炎、中間部ブドウ膜炎、後部ブドウ膜炎、視神経炎、星芒状網膜炎、網膜炎、偽腫瘍／筋炎、眼窩筋炎、血管腫／リンパ管腫、トキソカラ症、ベーチェット汎ブドウ膜炎、炎症性網脈絡膜症、脈管炎、眼乾燥症候群（シェーグレン症候群）、角膜浮腫、調節性内斜視、毛様体筋麻痺、散瞳、逆散瞳、および黄斑変性からなる群より選択される疾患のための治療薬である、組成物。
請求項１に記載の組成物であって、前記化合物は、抗菌化合物、抗ウイルス化合物、抗真菌化合物、抗原生動物化合物、抗ヒスタミン剤、瞳孔を拡大する化合物、麻酔化合物、ステロイド系抗炎症剤、抗炎症性鎮痛薬、化学療法剤、ホルモン、抗白内障化合物、新生血管形成インヒビター、免疫抑制剤、プロテアーゼインヒビター、アルドースレダクターゼインヒビター、コルチコステロイド、免疫抑制剤、コリン作用薬、抗コリンエステラーゼ剤、ムスカリンアンタゴニスト、交感神経作用剤、αアドレナリン作動性アンタゴニスト、βアドレナリン作動性アンタゴニスト、ならびに抗脈管形成因子からなる群より選択される、組成物。
前記化合物が、アシクロビルおよびシクロスポリンからなる群より選択される、請求項３４に記載の組成物。
前記化合物が、血液脳関門を横切って輸送される、請求項１に記載の組成物。