JP2004061431A

JP2004061431A - 長期間保存可能なヒト・クロモグラニンａ測定キット

Info

Publication number: JP2004061431A
Application number: JP2002223588A
Authority: JP
Inventors: Chizuko Yanaihara; 矢内原　千鶴子; Shingo Nagasawa; 長澤　晋吾
Original assignee: YANAIHARA KENKYUSHO KK
Current assignee: YANAIHARA KENKYUSHO KK
Priority date: 2002-07-31
Filing date: 2002-07-31
Publication date: 2004-02-26

Abstract

【課題】長期間保存可能なヒト・クロモグラニンＡの測定キットを提供する。
【解決手段】ａ）抗ＩｇＧ抗体を固定化した複数のウェルを有する測定プレート２と、ｂ）ヒト・クロモグラニンＡの３４４〜３７４残基に相当するアミノ酸配列を有するペプチドを凍結乾燥して得られる標準抗原３と、ｃ）ヒト・クロモグラニンＡの３４４〜３７４残基に相当するアミノ酸配列のＮ末端側にビオチニル基および二つのグリシン残基が結合したアミノ酸配列を有するペプチドを凍結乾燥して得られるビオチン標識抗原４、ｄ）ヒト・クロモグラニンＡの３４４〜３７４残基に相当するアミノ酸配列を有するペプチドを免疫して得られる抗血清から得られるＩｇＧ抗体画分を凍結乾燥して得られる特異抗体５と、ｅ）ペルオキシダーゼ共役安定保存液で希釈したストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ溶液６と、ｆ）発色剤７と、ｇ）反応停止液８と、ｈ）緩衝液９からなるヒト・クロモグラニンＡ測定キット１。
【選択図】　図１

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ヒト・クロモグラニンＡ（以下、ＣｇＡと表記する。）の測定キットに関する。より詳しくは、ヒトＣｇＡのアミノ酸配列の一部と同一のアミノ酸配列を有するペプチドを用いて、酵素イムノアッセイによりヒトＣｇＡを定量するためのキットに関する。
【０００２】
【従来の技術】
ＣｇＡは、可溶性の酸性タンパク質であるクロモグラニン類の一種であり、クロム親和性細胞中に見出すことができる。またＣｇＡはカテコールアミンおよびペプチドホルモンを分泌する様々なニューロンおよびパラニューロン中の分泌腺細胞中にも貯蔵されており、内臓への刺激に応答してアドレナリンおよびノルアドレナリンと共に放出される。さらに、激しい運動が血漿中のＣｇＡ濃度を増加させることも知られている。
【０００３】
ＣｇＡが果たす生体中での機能の詳細については未だ不明な点もあるが、近年、唾液検体中のＣｇＡ濃度が生物のストレスを反映するという知見が得らた。この知見に基づくと、唾液検体中のＣｇＡ濃度を測定することができれば、該測定の結果から生物のストレスの状態を簡便に評価できると考えられ、産業の様々な分野での応用が注目されつつある。
【０００４】
ヒトＣｇＡの測定方法としては、例えば特開平１１−１５３５９８号公報に記載のものが挙げられる。該方法は、ヒトＣｇＡのアミノ酸配列のうちの一部、具体的には３４４〜３７４残基に相当する配列を有するペプチドを抗原としてヒトを除く温血動物に免疫し、産出したヒトＣｇＡに特異的な反応を有する抗体を用いたイムノアッセイからなる。この方法により、ヒトの組織、血液、尿、骨髄液、唾液等の中に存在するＣｇＡおよびその関連ペプチドを有効に測定および検出することができる。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら該方法を採用した従来の測定系は、その感度、特異性等の面については満足すべきものであったが、抗体、酵素等について煩雑な測定前処理を必要とし、また使用する調製済試薬の安定性が低く、その保存寿命は凡そ２ヶ月程度と短かった。従って、該測定系に基づいて作製された測定キットの市販品は、保存等の面で十分なものとは言えず、ヒトＣｇＡ測定キットとしてなお一層の改良が求められていた。
【０００６】
従って本発明の目的は、ヒトＣｇＡに対する良好な感度、特異性等を維持しつつ、長期間保存が可能で、長い使用可能期間を有するヒトＣｇＡ測定キットを提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は上記の要求に鑑み鋭意開発を行った結果、多岐にわたる調剤処理の中から最適なものを選択して、ヒトＣｇＡの３４４〜３７４残基に相当する配列を有するペプチドを抗原としたヒトＣｇＡの測定系を構築すると、１年またはそれ以上にわたる長期間保存が可能で、使用可能期間の長いヒトＣｇＡ測定キットとなり、また該測定キットは、従来の測定系と同等以上の優れた測定性能を有し、かつ使用時の操作も大変簡便であることを見出して本発明を完成させた。
【０００８】
従って、本願請求項１に係る発明のヒト・クロモグラニンＡ測定キットは、
ａ）抗ＩｇＧ抗体を固定化した複数のウェルを有する測定プレートと、
ｂ）アミノ酸配列（Ｉ）
ＥＥＥＥＤ　ＮＲＤＳＳ　ＭＫＬＳＦ　ＲＡＲＡＹ
ＧＦＲＧＰ　ＧＰＱＬＲ　Ｒ　　　　　　　　　　　（Ｉ）
を有するペプチドを緩衝液に溶解し、そしてこれを凍結乾燥して得られる標準抗原と、
ｃ）アミノ酸配列（ＩＩ）
ビオチニル−ＧＧ　ＥＥＥＥＤ　ＮＲＤＳＳ　ＭＫＬＳＦ
ＲＡＲＡＹ　ＧＦＲＧＰ　ＧＰＱＬＲ　Ｒ　　　　　（ＩＩ）
を有するペプチドを緩衝液に溶解し、そしてこれを凍結乾燥して得られるビオチン標識抗原と、
ｄ）前記アミノ酸配列（Ｉ）を有するペプチドを温血動物に免疫して得られる抗血清からＩｇＧ抗体を精製し、該ＩｇＧ抗体画分を緩衝液に溶解し、そしてこれを凍結乾燥して得られる特異抗体と、
ｅ）ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼを緩衝液に溶解し、そしてペルオキシダーゼ共役安定保存液で希釈して得られるストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ溶液と、
ｆ）発色剤と、
ｇ）反応停止液と、
ｈ）緩衝液
からなることを特徴とする。
【０００９】
本願請求項２に係るヒト・クロモグラニン測定キットは、請求項１記載の測定キットにおいて、前記測定プレートａ）は、抗体の固定化後に乾燥させられていることを特徴とする。
本発明では、測定プレートａ）に乾燥操作を行うことにより、測定の感度が上昇した測定キットとすることができる。
【００１０】
本願請求項３に係るヒト・クロモグラニンＡ測定キットは、請求項１記載の測定キットにおいて、前記特異抗体ｄ）におけるＩｇＧ抗体の精製は、プロテインＡ結合多孔性セルロースゲルを充填したカラムで行うことを特徴とする。
本発明では、特異抗体ｄ）の精製方法を最適なものに変更することにより、測定の感度が上昇した測定キットとすることができる。
【００１１】
本願請求項４に係るヒト・クロモグラニンＡ測定キットは、請求項１記載の測定キットにおいて、前記ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ溶液ｅ）の希釈率は４，０００〜６，０００倍であることを特徴とする。
本発明では、ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ溶液ｅ）をペルオキシダーゼ共役安定保存液で希釈する際の希釈率を上記の範囲内とすることにより、測定の感度が上昇した測定キットとすることができる。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明のヒト・クロモグラニンＡ測定キット１は、図１に図示するように、ａ）測定プレート２と、ｂ）標準抗原３と、ｃ）ビオチン標識抗原４と、ｄ）特異抗体５と、ｅ）ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ溶液６と、ｆ）発色剤７と、ｇ）反応停止液８と、ｈ）緩衝液９からなる。これらの各キット要素のうち、なかんずくキット要素ａ）〜ｅ）の短い保存寿命が、従来の測定キットの保存寿命が２ヶ月程度と短い主な原因であったけれども、詳細には以下に記載する最適な調剤方法を採用することにより、測定キット全体として長期間保存が可能となり、保存寿命は１年またはそれ以上とすることができた。
【００１３】
本発明のヒト・クロモグラニンＡ測定キット１における測定プレート２は、複数のウェル、例えば１２×８の９６ウェルを有する樹脂製で使い捨て可能な多穴プレートであり、予め抗ＩｇＧ抗体が固定化されている。固定化処理は、先ず始めに緩衝液に溶解させた抗ＩｇＧ抗体を各ウェルに分注し、そして静置してウェル内に抗ＩｇＧ抗体の層を形成して行う。次いでウェル内の上清を捨て、ブロッキング剤を該抗ＩｇＧ抗体層の上に分注し、例えば４℃の低温で静置して抗ＩｇＧ抗体をブロッキングする。さらにウェル内の上清を捨て、スクロース含有緩衝液を各ウェルに分注し、ブロッキング剤の分注の際と同様の低温で静置する。そして好ましくは、最後に上清を捨て、測定プレート２の天地を逆転させて乾燥を行う。こうして抗ＩｇＧ抗体を固定化した測定プレートを、例えばアルミ製の袋に密封して測定キット１に添付する。
【００１４】
本発明のヒト・クロモグラニンＡ測定キット１における標準抗原３は、ヒトＣｇＡの３４４〜３７４残基に相当する以下のアミノ酸配列（Ｉ）
ＥＥＥＥＤ　ＮＲＤＳＳ　ＭＫＬＳＦ　ＲＡＲＡＹ
ＧＦＲＧＰ　ＧＰＱＬＲ　Ｒ　　　　　　　　　　　（Ｉ）
を有するペプチドからなる。標準抗原３は緩衝液に溶解させ、小ビンに溶液を分注し、そして小ビン中で凍結乾燥して測定キット１に添付する。添付する標準抗原３の量は例えば、１００ｐｍｏｌ／ビンである。測定キット１の使用時には、小ビンに緩衝液を加えて溶解させ、溶液として用いる。
【００１５】
本発明のヒト・クロモグラニンＡ測定キット１におけるビオチン標識抗原４は、ヒトＣｇＡの３４４〜３７４残基に相当するアミノ酸配列のＮ末端側にビオチニル基および二つのグリシン残基を結合してなる以下のアミノ酸配列（ＩＩ）
ビオチニル−ＧＧ　ＥＥＥＥＤ　ＮＲＤＳＳ　ＭＫＬＳＦ
ＲＡＲＡＹ　ＧＦＲＧＰ　ＧＰＱＬＲ　Ｒ　　　　　（ＩＩ）
を有するペプチドからなる。ビオチン標識抗原４も標準抗原３と同様に緩衝液に溶解させ、小ビンに分注し、そして小ビン中で凍結乾燥して測定キット１に添付する。測定キット１の使用時には、小ビンに蒸留水を加えて溶解させ、溶液として用いる。
【００１６】
本発明のヒト・クロモグラニンＡ測定キットにおける特異抗体５は、前記アミノ酸配列（Ｉ）を有するペプチドに対する抗血清のＩｇＧ抗体画分を精製して得られる。特異抗体５は、アミノ酸配列（Ｉ）を有するペプチドを温血動物に免疫して抗血清を入手して精製し、ＩｇＧ抗体画分のみを分別することにより得ることができる。この際、該精製をプロテインＡ結合多孔性セルロースゲルを充填したカラムに抗血清を通すことにより行うと、測定キットの感度を上昇させることができる。こうして得られた該ＩｇＧ画分を緩衝液に溶解させ、小ビンに分注し、小ビン中で凍結乾燥して特異抗体５とし、測定キット１に添付する。測定キット１の使用時には、小ビンに蒸留水を加えて溶解させ、溶液として用いる。
【００１７】
本発明のヒト・クロモグラニンＡ測定キットにおけるストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＳＡ−ＨＲＰ）溶液６は、先ずストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼを緩衝液に溶解させ、そしてペルオキシダーゼ共役安定保存液により希釈して得られる。希釈率は４，０００〜６，０００倍、例えば５，０００倍が好ましく、この程度に希釈することにより、測定キット１の感度を上昇させることができる。
【００１８】
本発明のヒト・クロモグラニンＡ測定キットにおける発色剤７は例えば、ｏ−フェニレンジアミンの錠剤と、その溶解液としての緩衝液からなる。また毒性を有するｏ−フェニレンジアミンに代えて、無毒な他の発色剤を用いることも可能である。
【００１９】
本発明のヒト・クロモグラニンＡ測定キットにおける反応停止液８はイムノアッセイにおける呈色反応を停止させるための薬剤であり、例えば２Ｎの硫酸を用いることができ、小ビンに分注して測定キット１に添付する。
【００２０】
本発明のヒト・クロモグラニンＡ測定キットにおける緩衝液９は、凍結乾燥されている標準抗原３、ビオチン標識抗原４および特異抗体５を使用時に溶解して溶液とするため、また該溶液を希釈するために用いられる緩衝液である。使用時には数倍に希釈して使用する濃縮緩衝液を用いることもできる。
【００２１】
前記の要素ａ）〜ｈ）からなる測定キット１は長期間保存が可能であるが、該保存は例えば冷蔵庫（約４℃）中等の低温環境下で行うことが好ましい。冷蔵庫中での保存は、従来品の２ヶ月程度の保存寿命と比較して、１年またはそれ以上にわたる長い保存寿命を可能にする。
【００２２】
【実施例】
以下の実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されることはない。
【００２３】
実施例１：ヒト・クロモグラニンＡ測定キットの作製
ａ）測定プレート、ｂ）標準抗原、ｃ）ビオチン標識抗原、ｄ）特異抗体、ｅ）ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ溶液、ｆ）発色剤、ｇ）反応停止液、およびｈ）緩衝液を以下のように調製し、本発明のヒト・クロモグラニンＡ測定キットを得た。
ａ）測定プレート
９６ウェルプレート（ＭａｘｉＳｏｒｐ　Ｎｕｎｃ社製）の各ウェルに０．０１Ｍリン酸緩衝液で２００倍に希釈したヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体（ＩＣＮ／ＣＡＰＰＥＬ社製）を１００μＬずつ分注した。２５℃で２０時間静置した後、上清を捨て、蒸留水で４倍に希釈したブロッキング剤（商品名：ブロックエース、大日本製薬株式会社製）を各ウェルに３５０μＬずつ分注した。４℃で２日間静置した後、上清を捨て、３％スクロース含有緩衝液を各ウェルに２００μＬずつ分注した。４℃で２日間静置した後、上清を捨て、プレートを転倒させて３日間乾燥させた。得られた抗体固定化プレートをアルミ製の袋に密封し、測定プレートとした。
ｂ）標準抗原
ヒトＣｇＡの３４４〜３７４残基に相当するアミノ酸配列（前記アミノ酸配列（Ｉ））を有するペプチドを合成し、該合成ペプチドをリン酸緩衝液に溶解して４μｍｏｌ／ｍＬの溶液を調製した。該溶液を２５μＬずつ小ビンに分注して凍結乾燥し、１００ｐｍｏｌ／ビンの標準抗原とした。
ｃ）ビオチン標識抗原
ヒトＣｇＡの３４４〜３７４残基に相当するアミノ酸配列のＮ末端側にビオチニル基および二つのグリシン残基が結合したアミノ酸配列（前記アミノ酸配列（ＩＩ））を有するペプチドを合成し、該合成ペプチドをリン酸緩衝液に溶解して３０ｎｇ／ｍＬの溶液を調製した。該溶液を１ｍＬずつ小ビンに分注して凍結乾燥しビオチン標識抗原とした。
ｄ）特異抗体
ヒトＣｇＡの３４４〜３７４残基に相当するアミノ酸配列（前記アミノ酸配列（Ｉ））を有するペプチドを合成し、該合成ペプチドを抗原としてウサギに免疫して得られた血清（ウサギ抗ヒトＣｇＡ（３４４〜３７４）血清ＲＹ７６、株式会社矢内原研究所製）を、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ由来のプロテインＡを結合させた多孔性セルロースゲル（商品名：プロテインＡ−セルロファイン、チッソ株式会社製）を充填したカラムに通して精製し、ＩｇＧ抗体をセルロースゲルに吸着させた。次いで該カラムに０．１Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ４．０）を通し、ＩｇＧ抗体を溶離させ、得られたＩｇＧ抗体画分を限外濾過により濃縮して精製前と等量とし、その後リン酸緩衝液で４倍に希釈した。こうして得られたＩｇＧ抗体画分を３ｍＬずつ小ビンに分注して凍結乾燥し特異抗体とした。
ｅ）ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ溶液
ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ社製）を１ｍＬのリン酸緩衝液に溶解させ、さらにペルオキシダーゼ共役安定保存液（商品名：Ｇｕａｒｄｉａｎ、Ｐｉｅｒｃｅ社製）で５，０００倍に希釈した。該溶液を１２ｍＬずつ小ビンに分注してストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ溶液とした。
ｆ）発色剤
１０ｍｇのｏ−フェニレンジアミン錠剤を用意し、該錠剤のための溶解液として０．０１５％の過酸化水素水を含む０．１Ｍリン酸ナトリウム−クエン酸緩衝液を１３ｍＬずつ小ビンに分注して発色剤とした。
ｇ）反応停止液
２Ｎ硫酸を１２ｍＬずつ小ビンに分注して酵素の反応停止液とした。
ｈ）緩衝液
４倍に希釈することにより、０．５％のウシ血清アルブミン、０．０２５ＭのＥＤＴＡおよび０．１５ＭのＮａＣｌを含有する０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を生成し得る濃縮緩衝液を小ビンに１２ｍＬずつ分注し緩衝液とした。
【００２４】
実施例２：ヒト・クロモグラニンＡの測定
実施例１で作製した測定キットを用いて、以下の手順に従いヒト・クロモグラニンＡを定量した。
１）希釈標準抗原溶液の調製
標準抗原ｂ）を４倍に希釈した緩衝液ｈ）１ｍＬに溶解させ、標準抗原溶液を作製した。この標準抗原溶液０．１ｍＬと該希釈緩衝液０．２ｍＬとを混合し、３３．３３ｐｍｏｌ／ｍＬの希釈標準抗原溶液を得た。さらにこの溶液について同様の３倍希釈の操作を６回行い、１１．１１、３．７０、１．２３、０．４１、０．１４、０．０５ｐｍｏｌ／ｍＬの希釈標準抗原溶液を得た。また０ｐｍｏｌ／ｍＬの希釈標準抗原溶液として、希釈緩衝液をそのまま使用した。
２）測定プレートの前処理
測定プレートａ）を０．０５％のＴｗｅｅｎ２０および０．９％のＮａＣｌを含有する生理食塩水で３回洗浄した。
３）抗体反応
前処理した測定プレートの各ウェルに、４倍に希釈した緩衝液ｈ）５０μＬ、希釈標準抗原溶液または検体２５μＬ、ビオチン標識抗原ｃ）を蒸留水６ｍＬに溶解させて得たビオチン標識抗原溶液５０μＬ、および特異抗体ｄ）を蒸留水１２ｍＬに溶解させて得た特異抗体溶液１００μＬを順に分注し、２５℃で一晩（１６〜２０時間）静置した。
４）ヒト・クロモグラニンＡの定量
抗体反応の完了後、測定プレートを前記生理食塩水で３回洗浄し、次いでストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ溶液１００μＬを各ウェルに分注し、室温で２時間プレート振盪機を用いて混和した。その後、測定プレートを前記生理食塩水で４回洗浄し、溶解液１２ｍＬにｏ−フェニレンジアミン錠剤を溶解させて得た発色剤ｆ）１００μＬを各ウェルに分注し、室温で３０分間静置した。３０分経過後、反応停止液ｇ）１００μＬを各ウェルに分注した。こうして処理した測定プレートについてプレートリーダーにより波長４９２ｎｍでの吸光度を測定した。希釈標準抗原溶液についての測定値より検量線を作成し、そして該検量線に基づいて検体中のヒト・クロモグラニンＡの量を定量した。
【００２５】
実施例３：測定キットの保存寿命の評価
Ａ）冷蔵庫中で１年間保存した測定キット、Ｂ）冷蔵庫中で２ヶ月間保存した測定キット、および作製直後の測定キットＣ）についてそれぞれ、実施例２と同様にして、希釈標準抗原溶液中のヒト・クロモグラニンＡの濃度を測定した。測定結果を図２に図示する。
図２から明らかなように、１年間保存した測定キット（上段）は、２ヶ月間保存した測定キット（中段）および作製直後の測定キット（下段）とほとんど変わらない検量線を示し、この結果は測定キットの長期間にわたる安定な保存が可能となったことを表す。
【００２６】
【発明の効果】
本発明によれば、標準抗原、ビオチン標識抗原および特異抗体の調剤方法並びにストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼの希釈液について、多岐にわたる選択肢の中から特定のものを選択・採用したことにより、長期間保存が可能で、使用可能期間の長いヒト・クロモグラニンＡ測定キットを提供できる。また、測定プレートの乾燥操作、特異抗体の精製操作、およびストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼの希釈率を最適化することにより、測定の感度を上昇させることもできる。従って、本発明のヒト・クロモグラニンＡ測定キットは、組織、血液、尿、骨髄液、唾液等の生物検体中のＣｇＡの簡便な定量により、生物の様々な状態を評価する手段として有効である。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、本発明のヒト・クロモグラニンＡ測定キットの斜視図である。
【図２】図２は、Ａ）１年間保存した測定キット、Ｂ）２ヶ月間保存した測定キット、および作製直後の測定キットＣ）を用いたヒト・クロモグラニンＡの測定結果を図示するグラフである。
【符号の説明】
１　　測定キット
２　　測定プレート
３　　標準抗原
４　　ビオチン標識抗原
５　　特異抗体
６　　ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ溶液
７　　発色剤
８　　反応停止液
９　　緩衝液

Claims

ａ）抗ＩｇＧ抗体を固定化した複数のウェルを有する測定プレートと、
ｂ）アミノ酸配列（Ｉ）
ＥＥＥＥＤ　ＮＲＤＳＳ　ＭＫＬＳＦ　ＲＡＲＡＹ
ＧＦＲＧＰ　ＧＰＱＬＲ　Ｒ　　　　　　　　　　　（Ｉ）
を有するペプチドを緩衝液に溶解し、そしてこれを凍結乾燥して得られる標準抗原と、
ｃ）アミノ酸配列（ＩＩ）
ビオチニル−ＧＧ　ＥＥＥＥＤ　ＮＲＤＳＳ　ＭＫＬＳＦ
ＲＡＲＡＹ　ＧＦＲＧＰ　ＧＰＱＬＲ　Ｒ　　　　　（ＩＩ）
を有するペプチドを緩衝液に溶解し、そしてこれを凍結乾燥して得られるビオチン標識抗原と、
ｄ）前記アミノ酸配列（Ｉ）を有するペプチドを温血動物に免疫して得られる抗血清からＩｇＧ抗体を精製し、該ＩｇＧ抗体画分を緩衝液に溶解し、そしてこれを凍結乾燥して得られる特異抗体と、
ｅ）ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼを緩衝液に溶解し、そしてペルオキシダーゼ共役安定保存液で希釈して得られるストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ溶液と、
ｆ）発色剤と、
ｇ）反応停止液と、
ｈ）緩衝液
からなることを特徴とする、ヒト・クロモグラニンＡ測定キット。
前記測定プレートａ）は、抗体の固定化後に乾燥させられていることを特徴とする、請求項１記載のヒト・クロモグラニンＡ測定キット。
前記特異抗体ｄ）におけるＩｇＧ抗体の精製は、プロテインＡ結合多孔性セルロースゲルを充填したカラムで行うことを特徴とする、請求項１記載のヒト・クロモグラニンＡ測定キット。
前記ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ溶液ｅ）の希釈率は４，０００〜６，０００倍であることを特徴とする、請求項１記載のヒト・クロモグラニンＡ測定キット。