RU2413224C1 - СПОСОБ И НАБОР ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ КОМПОНЕНТА C1q КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА - Google Patents
СПОСОБ И НАБОР ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ КОМПОНЕНТА C1q КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА Download PDFInfo
- Publication number
- RU2413224C1 RU2413224C1 RU2009128764/15A RU2009128764A RU2413224C1 RU 2413224 C1 RU2413224 C1 RU 2413224C1 RU 2009128764/15 A RU2009128764/15 A RU 2009128764/15A RU 2009128764 A RU2009128764 A RU 2009128764A RU 2413224 C1 RU2413224 C1 RU 2413224C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- component
- activity
- enzyme
- micropanel
- human complement
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии. Проводят сорбцию в лунках микропанели аптечного препарата дерината, представляющего собой дезоксирибонуклеат натрия. Затем в лунки вносят анализируемую пробу, содержащую компонент C1q с неизвестной активностью. Проводят инкубацию и после отмывки и осушения планшета в лунки вносят конъюгат фермента с антителами против компонента C1q и субстрат этого фермента. Проводят расчет активности компонента C1q по количеству образовавшегося продукта ферментативной реакции. Набор содержит плоскодонную микропанель с сорбированным деринатом, конъюгат фермента с антителами к компоненту C1q комплемента человека, субстратный буфер и стандарт с известной активностью C1q. Использование способа позволяет повысить достоверность определения компонента C1q с использованием в качестве активатора доступного и стабильного препарата дерината. 2 н.п. ф-лы, 1 ил.
Description
Изобретение относится к медицинской иммунологии, а именно к способам определения функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах.
Наиболее перспективным из современных методов определения белков сыворотки крови является метод иммуноферментного анализа благодаря своей чувствительности, избирательности и возможности автоматизации аналитического процесса. Известен способ определения функциональной активности компонента C1q, который предусматривает сорбцию в лунках микропланшета иммуноглобулина G или М человека [1]. Количество ковалентно связавшегося в результате активации компонента C1q определяют по продукту ферментативной реакции с помощью антител к C1q, конъюгированных с ферментом.
Недостатками этого способа являются трудность получения иммунохимически чистых препаратов иммуноглобулина G или М человека и плохое сохранение активирующей способности при хранении.
Задачей заявленного изобретения является разработка способа и набора на основе иммуноферментного метода, позволяющего определять функциональную активность компонента C1q классического пути системы комплемента человека с использованием доступного и хорошо сохраняемого в обычных условиях коммерческого препарата для использования в качестве активатора классического пути комплемента.
Поставленная задача достигается путем разработки способа определения и набора. Способ определения предусматривает сорбцию в лунках микропанели аптечного препарата дерината, представляющего собой дезоксирибонуклеат натрия, хорошо сохраняемого в обычных условиях, затем внесение в лунки микропанели анализируемой пробы, содержащей компонент C1q комплемента человека и проведение инкубации, в ходе которой C1q связывается на сорбированном активаторе в количествах, зависящих от концентрации функционально активного определяемого компонента C1q, выливание содержимого лунок, а затем внесение конъюгата фермента с антителами против компонента C1q человека и субстрата этого фермента и проведение расчета активности компонента C1q по количеству образовавшегося продукта ферментативной реакции.
Набор содержит плоскодонную микропанель с сорбированным деринатом, конъюгат фермента с антителами к компоненту C1q комплемента человека, субстратный буфер и донорскую сыворотку крови в качестве стандарта.
Техническим результатом заявленного изобретения является разработка способа и набора для определения функциональной активности компонента C1q, обладающих хорошей воспроизводимостью результатов и отсутствием необходимости использования трудно выделяемого и плохо сохраняющего свою активирующую способность препарата иммуноглобулинов.
Пример 1. Определение функциональной активности препарата компонента C1q. Растворяют аптечный препарат деринат в фосфатном буфере, рН 7,4, содержащем 0,15 М NaCl, в концентрациях 10-100 мкг/мл и вносят по 100 мкл раствора в каждую лунку плоскодонной полистироловой 96-луночной микропанели. Закрывают крышкой и оставляют на ночь при 4°С. Содержимое лунок выливают, трижды отмывают планшет ЗФР-Т (фосфатным буфером, рН 7,4, содержащим 0,15 М NaCl и 0,05% твин-20), затем осушают путем вытряхивания остатка жидкости. В лунки планшета вносят по 100 мкл анализируемой пробы, содержащей C1q в ЗФР-Т. После инкубации в термостате в течение 1 ч при 37°С, трехкратной отмывки ЗФР-Т и осушения планшета в каждую лунку вносят по 100 мкл конъюгата пероксидазы с антителами против компонента C1q человека в том же буфере в подобранном разведении. После инкубации в термостате в течение 1 ч при 37°С, трехкратной отмывки ЗФР-Т и осушения планшета в каждую лунку вносят по 100 мкл субстратного буфера с ТМБ (3,3',5,5'-тетраметилбензидин в 15 мл цитратно-фосфатного буфера, рН 5,0, и 50 мкл 3% перекиси водорода). После 5-10 мин инкубации в темноте реакцию останавливают внесением в каждую лунку 50 мкл 14% серной кислоты. Результаты реакции учитывают с помощью спектрофотометра с вертикальным лучом измерением светопоглощения при 450 нм. Функциональную активность препарата C1q рассчитывают по стандартной кривой (см. чертеж).
Пример 2. Набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента C1q комплемента человека содержит плоскодонную микропанель с сорбированным деринатом, конъюгат пероксидазы с антителами к компоненту C1q комплемента человека, субстратный буфер и стандарт с известной активностью компонента C1q.
Из приведенных на чертеже результатов следует, что измеряемая оптическая плотность линейно зависит от концентрации активного компонента C1q с коэффициентом корреляции R2=0,996, что позволяет достоверно определять функциональную активность компонента C1q описанным способом с использованием описанного набора.
ЛИТЕРАТУРА
1. Козлов Л.В., Дьяков В.Л., Баталова Т.Н., Гузова В.А., Лысакова С.В. Способ определения функциональной активности субкомпонента C1q комплемента человека. 2000. Патент РФ 2144676. // Бюл. №2. 20.01.2000.
Claims (2)
1. Способ определения функциональной активности компонента C1q комплемента человека, предусматривающий сорбцию в лунках микропанели активатора классического пути комплемента, внесение в лунки микропанели анализируемой пробы, содержащей компонент C1q комплемента человека с неизвестной активностью, инкубацию, выливание содержимого лунок, внесение конъюгата фермента с антителами против компонента C1q человека, а затем после инкубации и удаления инкубационного раствора внесение субстрата этого фермента, проведение расчета активности компонента C1q по количеству образовавшегося продукта ферментативной реакции, отличающийся тем, что в качестве активатора классического пути комплемента используют деринат.
2. Набор для определения функциональной активности компонента C1q комплемента человека, характеризующийся тем, что он содержит плоскодонную микропанель с сорбированным деринатом, конъюгат фермента с антителами к компоненту C1q комплемента человека, субстратный буфер и стандарт с известной активностью компонента C1q.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2009128764/15A RU2413224C1 (ru) | 2009-07-28 | 2009-07-28 | СПОСОБ И НАБОР ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ КОМПОНЕНТА C1q КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2009128764/15A RU2413224C1 (ru) | 2009-07-28 | 2009-07-28 | СПОСОБ И НАБОР ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ КОМПОНЕНТА C1q КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2413224C1 true RU2413224C1 (ru) | 2011-02-27 |
Family
ID=46310703
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2009128764/15A RU2413224C1 (ru) | 2009-07-28 | 2009-07-28 | СПОСОБ И НАБОР ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ КОМПОНЕНТА C1q КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2413224C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102207500A (zh) * | 2011-03-11 | 2011-10-05 | 中国兽医药品监察所 | 补体结合酶联免疫吸附试验 |
-
2009
- 2009-07-28 RU RU2009128764/15A patent/RU2413224C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Применение дерината в педиатрии. Пособие для практикующих врачей. Под ред. д.м.н. проф. А.И. КУСЕЛЬМАНА. 2008, с. 18, найдено 04.05.2010 в Интернете: http://www.derinat.ru/media/Pediatrics/Derinat_pediatrii%201.pdf. БИЧУЧЕР A.M. и др. Исследование действия лекарственных веществ на комплемент. Ингибирование связывания субкомпонента C1q с мишенью. Экспериментальная и клиническая фармакология, 2007, т.70, №6, с.25-28. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102207500A (zh) * | 2011-03-11 | 2011-10-05 | 中国兽医药品监察所 | 补体结合酶联免疫吸附试验 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2417375C2 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с3 комплемента человека | |
CN102367270B (zh) | 环孢霉素a半抗原的制备方法及环孢霉素a的酶联免疫定量检测试剂盒 | |
Devlin et al. | Next generation planar waveguide detection of microcystins in freshwater and cyanobacterial extracts, utilising a novel lysis method for portable sample preparation and analysis | |
RU2232991C1 (ru) | Способ определения функциональной активности фактора d комплемента человека | |
RU2380707C1 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с3 комплемента человека по альтернативному пути активации | |
RU2413224C1 (ru) | СПОСОБ И НАБОР ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ КОМПОНЕНТА C1q КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА | |
RU2405042C1 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с2 комплемента человека | |
CN104049090B (zh) | 一种检测丙氨酰氨基肽酶的试剂盒 | |
RU2376606C1 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с4 комплемента человека | |
RU2195662C1 (ru) | Способ определения функциональной активности c1-ингибитора комплемента человека | |
RU2376605C1 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности фактора d комплемента человека | |
CN105988001A (zh) | 一种测定非对称二甲基精氨酸浓度的试剂盒及方法 | |
WO2011149272A9 (ko) | 단백질분해에 의하여 활성화되는 효소의 활성형의 정성적 및 정량적 분석방법 | |
RU2506594C1 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с3 комплемента человека | |
RU2425383C1 (ru) | СПОСОБ И НАБОР ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ СУБКОМПОНЕНТОВ C1r2s2 ПЕРВОГО КОМПОНЕНТА КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА | |
RU2374650C1 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности фактора в комплемента человека | |
RU2457491C1 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с9 комплемента человека по классическому пути | |
RU2571289C1 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с3 комплемента человека по способности связываться с лизоцимом | |
RU2450275C1 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с9 комплемента человека по альтернативному пути | |
CN102368068A (zh) | 检测肺炎衣原体IgM抗体的试剂盒 | |
RU2495432C1 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с4 комплемента человека | |
RU2313094C1 (ru) | СПОСОБ И НАБОР ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДЕЙСТВИЯ ВЕЩЕСТВ НА СВЯЗЫВАНИЕ СУБКОМПОНЕНТОВ C1q КОМПЛЕМЕНТА | |
CN105628942B (zh) | 人尿液α1‑酸性糖蛋白检测试剂盒 | |
RU2195670C1 (ru) | Способ определения функциональной активности компонента c2 комплемента человека | |
RU2232993C1 (ru) | Способ определения функциональной активности фактора b комплемента человека |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20170729 |