JP2004026775A

JP2004026775A - 抗鶏コクシジウム症組成物

Info

Publication number: JP2004026775A
Application number: JP2002189137A
Authority: JP
Inventors: Yoshikatsu Kodama; 兒玉　義勝; Hideaki Yokoyama; 横山　英明; Sa Van Nguyen; ヌグエン　サー　バン
Original assignee: Ghen Corp
Current assignee: Ghen Corp
Priority date: 2002-06-28
Filing date: 2002-06-28
Publication date: 2004-01-29
Anticipated expiration: 2022-06-28
Also published as: KR100617415B1; WO2004002527A1; ATE411816T1; EP1552848B1; TW200410712A; AU2003243999A1; EP1552848A1; US20060057150A1; EP1552848A4; JP3995541B2; DE60324299D1; KR20050024400A; CN1678349A

Abstract

【課題】鶏コクシジウム症を予防又は治療することを目的とする。
【解決手段】鶏コクシジウム症に関与するＥｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ、Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ及びＥｉｍｅｒｉａ　ｍａｘｉｍａのスポロゾイト及びメロゾイトに共通の免疫原性を有する外膜蛋白質抗原又はその免疫原性断片で免疫された鶏の卵より得られた抗体、又は該抗体と、乳酸菌及び／又はクロストリジウム・パーフリンジェンスで免疫された鶏の卵より得た抗体とを鳥類に経口投与することにより鶏コクシジウム症を予防又は治療する。
【選択図】　なし

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、鶏コクシジウム症の予防及び治療に有効な組成物に関する。更に詳しくは、鶏などの鳥類の鶏コクシジウム症に対して優れた予防効果及び治療効果を有し、鶏コクシジウム症からの感染防御や鶏コクシジウム症に伴う体重減少といった臨床症状の改善、又は鶏コクシジウム症の治療に極めて有効な組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
鶏コクシジウム症（ｃｏｃｃｉｄｉｏｓｉｓ　ｉｎ　ｃｈｉｃｋｅｎｓ）はアイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）属の原虫の感染によって起こる。鶏では寄生のアイメリア属は種によって症状、寄生部位、病変が異なる。特に病原体として重視されているものは、Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ、Ｅ．　ｎｅｃａｔｒｉｘ、Ｅ．　ｍａｘｉｍａ、Ｅ．　ｂｒｕｎｅｔｔｉ、Ｅ．　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａの５種類で、他にＥ．　ｍｉｔｉｓ、Ｅ．　ｐｒａｅｃｏｘ、Ｅ．　ｈａｇａｎｉ、Ｅ．　ｍｉｖａｔｉなどが知られている。鶉ではＥ．　ｕｚｕｒａ、Ｅ．　ｔｓｕｎｏｄａｉなど、七面鳥ではＥ．　ｍｅｌｅａｇｒｉｍｉｔｉｓ、Ｅ．　ａｄｅｎｏｉｄｅｓ、Ｅ．　ｇａｌｌｏｐｏｖｏｎｉｓなど、ほろほろ鳥ではＥ．　ｇｒｅｎｉｅｒｉ、Ｅ．　ｎｕｍｉｄａｅなどの感染により起こることが知られている。鶏の疾病のなかで最も被害が大きいものの一つである。オーシストの経口的摂取によって感染が成立する。種々の下痢、食欲不振、廃絶、体重減少などの症状を呈し、死亡も認められる。鶏の日齢、性別、品種に関係なく発生する。平飼いの鶏舎で発生しやすいが、近年多段式ケージの採卵鶏でも発生が報告されている。また、クロストリジウム・パーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）との混合感染により症状は重篤化する。オーシストによる鶏舎の汚染防止やコクシジウム予防剤の使用で対応する。予防には、各種合成抗鶏コクシジウム剤及びイオノフォラス抗生物質がコクシジウム予防剤として使用できる。治療には、サルファ剤又はサルファ剤とピリミジン系薬剤との合剤が用いられる。ワクチンも実用化されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
鶏は孵化後１０週間以内しかコクシジウム予防剤を使用できず、またブロイラーでは出荷前７日間の休薬期間が義務づけられている。これは、投薬した場合、一定期間は卵、肉の出荷が禁止されているためである。このコクシジウム予防剤の使用できない期間に鶏コクシジウム症が発生しやすい。更に、薬剤耐性鶏コクシジウムが増加しているため各農場に有効な予防剤を選択する必要がある。鶏コクシジウム症のコクシジウム予防剤は一時期極めて多くのものが開発されたが、その後、残留、人間を含む他の生物への悪影響、薬剤耐性鶏コクシジウムの出現などにより、使用できなくなってきている。欧州では２００７年以降コクシジウム予防剤の使用が禁止になる。わが国でも飼料添加物に対する規制法が実施されてから、その使用は著しく制限されるようになった。
【０００４】
生ワクチンは、経口投与するもので、病原性の弱い種類で計画免疫し、強毒種の感染を防止しようとする試みがなされている。また、数種類のオーシストの混合したものを雛に与えて、死亡しない程度に感染させ免疫を得させようとする鶏コクシジウム生ワクチンは、実際的には養鶏場が汚染されるので、むしろマイナスの点が多い。不活化ワクチンでは感染阻止抗体の産生が低く、また効果も低い。また、ワクチンを雛に免疫しても感染防御抗体が産生されるまでに数週間かかるため、ブロイラーにおける利用価値は低い。
【０００５】
一方、鶏コクシジウム症になると腸内の菌叢が崩れ、下痢などの症状を引き起こし、特に下痢は長期に亘る。また、これにより体力が消耗し、免疫力が低下することにより壊死性腸炎にかかりやすくなる。
【０００６】
特許第２５４８１１５号、特許第２６９８７７８号、特許第２６９８７７９号のトリ抗体を用いた哺乳動物の受動免疫化は、受動免疫のための異種抗体（鶏卵由来）を投与（特に、注射などの非経口投与）する際に、アナフィラキシーショックや血清病などが起こるのを防止するため、予防、治療のための抗体投与の前に予め、抗体を含有する食物を哺乳動物に与えておき経口免疫耐性（免疫寛容）の状態にしておくものであり、本発明の経口受動免疫防御効果とは全く着想は異なる。また、本発明者らは、ブタの大腸菌症の原因となる腸管毒素原性大腸菌の９８７Ｐ、Ｋ８８及びＫ９９抗原、及びウシの大腸菌症の原因となる腸管毒素原性大腸菌のＫ９９抗原のいずれか１種以上の抗原で鶏を免疫し、この免疫鶏が産生した卵の少なくとも卵黄を含む部分から抗体を回収することにより得られる、前記抗原に特異的なポリクローナル抗体を含有する、ブタ又はウシの哺乳期における大腸菌症の経口予防剤及び治療剤（特許第２０３４００５号）や、予め食中毒菌を接種した鶏が免疫獲得後に産生した卵の全卵、卵黄もしくは抗体含有画分からなり、該食中毒菌に特異的な抗体を含有する、食鳥の食中毒菌抑制材料（特許第２６１５６７３号）について出願している。これらは、鶏卵抗体の有用性を示しているが、細菌に対する鶏卵抗体の経口受動免疫防御効果を示したもので、原虫に対する防御効果は提示していない。現在でも、細菌又はウイルスなどに対する経口受動免疫能の考え方はあるが、原虫に対する経口受動免疫能の考え方は示されていない。
【０００７】
一方、鶏コクシジウム症の各種抗原を用いたワクチンに対する報告は多数あるが、受動免疫を用いた報告は少ない。鶏コクシジウムのＥｉｍｅｒｉａ　ｍａｘｉｍａのｇａｍｅｔｏｃｙｔｅｓに対するマウスモノクローナル抗体を作製し、鶏コクシジウム症における受動免疫を確認した論文（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，　５６：　９７２−９７６，　１９８８、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，　５８：　５５７−５６２，　１９９０）があるが、マウスモノクローナル抗体を経口でなく静脈内注射する投与方法で試験を行っており、全く実用的でない。
【０００８】
本発明者らは前記の問題点を解決すべく鋭意検討した結果、鶏コクシジウム症に関与するＥｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ、Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ及びＥｉｍｅｒｉａ　ｍａｘｉｍａのスポロゾイト及びメロゾイトに共通の免疫原性を有する外膜蛋白質抗原又はその免疫原性断片を抗原として鶏、鶉又は他の鳥類を免疫して得られた卵に含まれる抗鶏コクシジウム症抗体を鶏などの鳥類に投与することにより、アイメリア属のスポロゾイト又はメロゾイトに抗体が付着し、スポロゾイト又はメロゾイトが上皮細胞に付着及び侵入するのを阻止することにより、その病原性を消失せしめることを見出した。更に、本抗鶏コクシジウム症抗体を投与するに際して乳酸菌を併せて給与することによって、腸内菌叢の改善や免疫増強と同時に本抗体がより有効に作用し、鶏コクシジウム症の予防及び治療に優れた効果を発揮することを見出した。また、本抗鶏コクシジウム症抗体を投与するに際してクロストリジウム・パーフリンジェンスで免疫された鶏の卵より得た抗体を併せて給与することによって、クロストリジウム・パーフリンジェンスとの混合感染による症状の重篤化を抑えることにより本抗体がより有効に作用し、鶏コクシジウム症の予防及び治療に優れた効果を発揮することを見出し、発明を完成するに至った。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明は、以下の発明を包含する。
（１）鶏コクシジウム症に関与するＥｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ、Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ及びＥｉｍｅｒｉａ　ｍａｘｉｍａのスポロゾイト及びメロゾイトに共通の免疫原性を有する外膜蛋白質抗原又はその免疫原性断片で免疫された鶏の卵より得られた抗体を含有する経口用抗鶏コクシジウム症組成物。
（２）更に、乳酸菌を含有する前記（１）に記載の組成物。
（３）更に、クロストリジウム・パーフリンジェンスで免疫された鶏の卵より得た抗体を含有する前記（１）又は（２）に記載の組成物。
（４）鶏コクシジウム症の予防又は治療に用いられる前記（１）〜（３）のいずれかに記載の組成物。
（５）前記（１）〜（４）のいずれかに記載の組成物を含有する鳥類用飼料。
（６）前記（１）に記載の抗体、又は該抗体と、乳酸菌及び／又はクロストリジウム・パーフリンジェンスで免疫された鶏の卵より得た抗体とを鳥類に経口投与することを特徴とする鶏コクシジウム症の予防又は治療方法。
【００１０】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００１１】
本発明は、抗原として、鶏コクシジウム症に関与するＥｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ、Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ及びＥｉｍｅｒｉａ　ｍａｘｉｍａのスポロゾイト及びメロゾイトに共通の免疫原性を有する外膜蛋白質抗原又はその免疫原性断片を用いる。
【００１２】
前記抗原は、Ｅｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ、Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ及びＥｉｍｅｒｉａ　ｍａｘｉｍａのスポロゾイト及びメロゾイトに共通の抗原であるため、病原体がＥｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ、Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ及びＥｉｍｅｒｉａ　ｍａｘｉｍａのいずれの場合にも有効に作用する。
【００１３】
前記抗原としては、例えば、Ａｖｉａｎ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，　４４：　３７９−３８９，　２０００に記載の１８〜２７キロダルトンの可溶性蛋白（Ｆ３）又は３−１Ｅ蛋白、Ｊ．　Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．，　８４：　６５４−６５６，　１９９８に記載の２１キロダルトンのメロゾイト蛋白、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，　５９：　１２７１−１２７７，　１９９１に記載の防御フラクション蛋白（ＦＶ）を用いることができる。
【００１４】
「免疫原性断片」としては、１つ又はそれ以上のエピトープを含有し、免疫原として使用し得るものであれば、特に制限はない。
【００１５】
抗体は、３個のアミノ酸からなるアミノ酸配列を認識できるとの報告（Ｆ．　Ｈｕｄｅｃｚ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ，　１４７：　２０１−２１０　（１９９２））があることから、前記免疫原性断片の最小単位としては、アミノ酸残基数３以上のペプチドが考えられ、好ましくはアミノ酸残基数５以上、更に好ましくはアミノ酸残基数１０以上のペプチド又はポリペプチドが挙げられる。
【００１６】
また、前記の外膜蛋白質抗原又はその免疫原性断片は、液相法及び固相法等のペプチド合成の方法により合成することもでき、更にペプチド自動合成装置を用いてもよく、日本生化学会編「生化学実験講座１　タンパク質の化学ＩＶ」，東京化学同人，１９７５年、泉屋ら「ペプチド合成の基礎と実験」，丸善，１９８５年、日本生化学会編「続生化学実験講座２　タンパク質の化学　下」，東京化学同人，１９８７年等に記載された方法に従い合成することができる。
【００１７】
更に、前記の外膜蛋白質抗原又はその免疫原性断片は、対応する塩基配列を有するＤＮＡ又はＲＮＡより遺伝子工学技術（例えば、日本生化学会編「続生化学実験講座１　遺伝子研究法Ｉ」，東京化学同人，１９８６年、日本生化学会編「続生化学講座１　遺伝子研究法ＩＩ」，東京化学同人，１９８６年、日本生化学会編「続生化学実験講座１　遺伝子研究法ＩＩＩ」，東京化学同人，１９８７年参照）を用いて調製してもよい。
【００１８】
前記免疫原性断片が低分子物質の場合には、通常、該断片に担体を結合させたものを用いる。前記担体としては、スカシガイのヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ニワトリ血清アルブミン、ポリ−Ｌ−リシン、ポリアラニルリシン、ジパルミチルリシン、破傷風トキソイド又は多糖類等を用いることができる。前記免疫原性断片と担体の結合には、グルタルアルデヒド法、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド法、マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシサクシニミドエステル法、ビスジアゾ化ペンジジン法、Ｎ−サクシミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸法等の公知の方法を用いることができる。また、ニトロセルロース粒子、ポリビニルピロリドン、リポソーム等の担体に前記免疫原性断片を吸着させたものを免疫原とすることもできる。
【００１９】
免疫方法は、免疫原（前記外膜蛋白質抗原又はその免疫原性断片）の皮下注射や筋肉内注射、経口投与などが用いられる。接種免疫原量は蛋白質又はペプチドとして０．０１〜１０ｍｇが好適である。初回免疫から２〜１０週後に追加免疫を行うことにより、より高い抗体価が得られる。追加免疫から２週間目以降には鶏コクシジウム抗原に特異的に反応する抗体が、鶏の血清中のみならず卵にも生成される。こうして免疫された抗体は、通常４ヶ月にわたって高い抗体価が維持される。たとえ、抗体価が低下してきた場合でも、同様の手技で追加免疫を行えば高い抗体価が持続できる。この卵の抗体活性は、蛍光抗体法又は酵素抗体法によって測定できる。
【００２０】
前記免疫原は、アジュバントと混合して免疫注射することが好ましい。アジュバントとしては、フロイント完全アジュバント、フロイント不完全アジュバント、水酸化アルミニウムアジュバント、百日咳菌アジュバント等の公知のものを用いることができる。
【００２１】
前記のようにして得られた卵の抗体は全卵又は卵黄として溶液にして、又は噴霧乾燥機等により乾燥し粉にして使用することができ、また全卵又は卵黄より脱脂して卵水溶性蛋白質を使用することもでき、更に抗体を精製又は粗精製して用いてもよい。
【００２２】
本発明の組成物は、鳥類、特に鶏に適用される。前記抗体の投与量は、一般には、１日当り１羽に対し抗体価で１〜１０^６倍であるが、鳥類の週齢、性別、品種等により適宜増減することが好ましい。
【００２３】
また、前記抗体を投与するに際して、乳酸菌を併用すると、鶏コクシジウム症に伴う体重減少等の症状がより改善される。乳酸菌は、通常、前記抗体１ｇに対して乳酸菌１０〜１０^９個の割合で用いられる。乳酸菌は、前記抗体と同時に投与してもよいし、間隔をおいて投与してもよい。
【００２４】
ここで使用される乳酸菌としては、ラクトバチルス、ビフィドバクテリウム、ストレプトコッカス、エンテロコッカス、ラクトコッカスなどの属に属する乳酸菌で種は問わず、単独又は複数株を混合してもよい。ラクトバチルス属に属する乳酸菌としては、例えばＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ，　Ｌ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ，　Ｌ．ｃａｓｅｉ，　Ｌ．ｆｅｒｎｅｎｔｕｍ，　Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ，　Ｌ．ｐａｒａｃａｓｅｉ，　Ｌ．ｌａｃｔｉｓ，　Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ，　Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ，Ｌ．ｒｈａｍｎｏｓｕｓ，　Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、ビフィドバクテリウム属に属する乳酸菌としては、例えばＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ，　Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ，　Ｂ．ｂｒｅｖｅ，　Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ，　Ｂ．ｌｏｎｇｕｍ，　Ｂ．ｐｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ，　Ｂ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ、ストレプトコッカス属に属する乳酸菌としては、例えばＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ａｇａｌａｃｔｉａｅ，　Ｓ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ，　Ｓ．ｔｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、エンテロコッカス属に属する乳酸菌としては、例えばＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ，Ｅ．ｆａｅｃｉｕｍ、ラクトコッカス属に属する乳酸菌としては、例えばＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｌａｃｔｉｓが挙げられる。
【００２５】
また、前記抗体を投与するに際して、クロストリジウム・パーフリンジェンスで免疫された鶏の卵より得た抗体（以下「抗クロストリジウム・パーフリンジェンス抗体」という。）を併用すると、鶏コクシジウム症に伴う体重減少等の症状がより改善される。抗クロストリジウム・パーフリンジェンス抗体は、通常、抗鶏コクシジウム症抗体１ｇに対して０．０１〜１００ｇの割合で用いられる。抗クロストリジウム・パーフリンジェンス抗体は、前記抗鶏コクシジウム症抗体と同時に投与してもよいし、間隔をおいて投与してもよい。
【００２６】
抗クロストリジウム・パーフリンジェンス抗体は、免疫原としてクロストリジウム・パーフリンジェンスを用いる以外は、前記の抗鶏コクシジウム症抗体と同様の方法により調製することができる。また、免疫原としてクロストリジウム・パーフリンジェンスと、前記外膜蛋白質抗原又はその免疫原性断片とを同時に使用することにより、抗クロストリジウム・パーフリンジェンス抗体及び抗鶏コクシジウム症抗体を同時に調製することもできる。
【００２７】
クロストリジウム・パーフリンジェンスとしては、例えば、Ｊ．　Ａｎｉｍ．　Ｓｃｉ．，　７５：　１９−２５，　１９９７に記載の蛋白、Ａｖｉａｎ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，　２１：　２４１−２５５，　１９７７に記載のトキシン、Ｖｅｔ．　Ｒｅｃ．，　１２０：　４３５−４３９，　１９８７に記載の蛋白、Ｖａｃｃｉｎｅ，　１１：　１２５３−１２５８，　１９９３に記載の蛋白、ＦＥＭＳ　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　Ｍｅｄ．　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，　７：　３２１−３３６，　１９９３に記載の蛋白を抗原として用いることができる。
【００２８】
本発明の抗鶏コクシジウム症組成物は、各有効成分の濃度が０．００１％〜１０％の溶液として、更に粉末、顆粒、錠剤又はペースト状で飼料に対して各有効成分の濃度が０．００１％〜１０％の範囲で給与される。また、抗鶏コクシジウム症抗体の給与に際しては、胃での消化分解を防ぐために、腸溶性の剤形にしてもよい。
【００２９】
【実施例】
［実施例１］
鶏コクシジウムのＥｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ　ＮＡ株（ＰＥ０１０１）、Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ　ＮＭ株（ＰＥ０１０２）、Ｅｉｍｅｒｉａ　ｍａｘｉｍａ　ＮＴ株（ＰＥ０１０３）のオーシストを４週齢の鶏に各々２×１０^６個経口感染させ、感染後４日目に剖検し、腸管及び腸管内容物を得た。各スポロゾイト及びメロゾイトの精製は、Ａｖｉａｎ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，　３９：　５３８−５４７，　１９９５にしたがって行った。Ｅｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ　ＮＡ株のメロゾイトの可溶性外膜蛋白質をＳＤＳ−ＰＡＧＥで泳動することにより１８〜２７ｋＤの外膜蛋白質を得た（Ａｖｉａｎ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，　４４：　３７９−３８９，　２０００）。この外膜蛋白質０．５ｍｇ／ｍｌを含有する溶液とフロイント不完全アジュバントとを乳化し、１２週齢の雌鶏に、左右の胸筋に１ｍｌずつ注射し１回目の免疫を行った。同様にして、６週間後に２回目の免疫を同様に行った。２回目の免疫から２週間後、この鶏の血液中の抗鶏コクシジウム症抗体の酵素抗体測定法（ＥＬＩＳＡ）（Ａｖｉａｎ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，　４４：　３７９−３８９，　２０００）による抗体価は、３０，０００〜１２０，０００倍であった。この鶏が産んだ卵の抗体価は３０，０００〜１２０，０００倍であった。この抗体価は４ヶ月間持続した。この卵を集め、噴霧乾燥により全卵粉末の鶏卵抗体を作成した。この粉末の抗体価は６０，０００倍であった。また、本抗体のスポロゾイト及びメロゾイトに対する交差性を間接免疫蛍光染色（Ａｖｉａｎ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，　４４：　３７９−３８９，　２０００）で検討した結果、本抗体はアイメリア属のＥｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ、Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ、Ｅｉｍｅｒｉａ　ｍａｘｉｍａのスポロゾイト及びメロゾイトの表面を特異的に蛍光染色し、共通の抗体であることが確認できた。
【００３０】
［実施例２］
実施例１で得た抗鶏コクシジウム症抗体をブロイラーの飼料に添加して鶏コクシジウム症実験感染鶏（Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ）（Ａｖｉａｎ　Ｄｉｓｅａｓｅ，　３１：　１１２−１１９，　１９８７）に対する効果を検討した。供試動物はブロイラー専用種チャンキーとし、抗体はブロイラー肥育前期用標準飼料（ＳＤＢ　Ｎｏ．１：財団法人畜産生物安全研究所）に０．１％、１％及び１０％となるように添加して投与した。Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ　ＥＴ株のオーシスト感染は１０００個／羽（Ｊ．　Ｐｒｏｔｏｚｏｏｌ，　９：　１５４−１６１，　１９６２）とし、各群１０羽ずつ割付け設定した。また感染後の観察期間は、２週間とした。検査項目は、増体量及び飼料要求率を主な検査項目とし、その他にＯ．Ｐ．Ｇ．（Ｏｏｃｙｓｔｓ　Ｐｅｒ　Ｇｒａｍ　ｏｆ　ｆａｅｃｅｓ）及び盲腸病変観察を実施した（角田清監修「鶏コクシジウム症」、チクサン出版社、１９８３年）。その結果、増体量で０．１％投与群でも効果が確認され、飼料要求率では１．０％投与で効果が確認された。
【００３１】
以上のことから、鶏コクシジウム症の攻撃に対して抗鶏コクシジウム症抗体を飼料に０．１％以上投与することにより増体量及び飼料要求率を含めた改善が認められた。総合判定は、得られた各観察項目の数値を元に被験物質の効果を判定し、極めて有効な効果が得られた。
【００３２】
【表１】

【００３３】
^ａ）：相対増体率（％）＝感染群の増体率÷非感染群の増体率×１００
^ｂ）：飼料要求率＝平均飼料摂取量÷平均増体量
^ｃ）：対照群に対するＯ．Ｐ．Ｇ．の割合＝投薬群のＯ．Ｐ．Ｇ．÷感染無投薬対照群のＯ．Ｐ．Ｇ．×１００より、基準を元に各試験群のオーシスト値を求めた。０：０〜１％、＋５：１．１〜２５％、＋１０：２６〜５０％、＋２０：５１〜７５、＋４０：７６〜１００％。
^ｄ）：盲腸病変値は、０：病変認められず；＋１：盲腸壁に極めて少数の点状出血斑が散在しているが、内容物は正常である；＋２：内容物にわずかな血液を混じり、多数の出血病巣が見られる；＋３：多量の血液、あるいは盲腸コアー（凝血または灰白色チーズ状、バナナ型の塊）を盲腸内に含み、盲腸壁の肥厚、および盲腸の変形、萎縮が明瞭である；＋４：盲腸は著しく萎縮し、病変は直腸部まで達する。壁は極度に肥厚し、盲腸内には凝血あるいは盲腸コアーを含んでいる；の判定基準にしたがって１羽平均値を求め、１０羽に換算した値を表１に示した。
^ｅ）：ＡＣＩ値（Ａｎｔｉｃｏｃｃｉｄｉａｌ　Ｉｎｄｅｘ：抗鶏コクシジウム指数）＝（相対増体率＋生存率）−（オーシスト値＋病変値）
ＡＣＩ値：１８０以上…極めて有効、１６０〜１７９…中程度有効、
１２０〜１６１…少し有効、１２０未満…効力なし
【００３４】
［実施例３］
実施例１で得た抗鶏コクシジウム症抗体と乳酸菌のラクトバチルス・アシドフィルスを混合した飼料を用いて鶏コクシジウム症実験感染鶏（Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ）に対する効果を検討した。乳酸菌のラクトバチルス・アシドフィルスＡＴＣＣ４３５６株はＭＲＳ培地で培養後、凍結乾燥により１×１０^１１個／ｇの粉末を作製した。供試動物はブロイラー専用種チャンキーとし、ブロイラー肥育前期用標準飼料（ＳＤＢ　Ｎｏ．１）に前記抗体０．１％と乳酸菌１０^６個／ｇを添加して投与した。Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ　ＥＴ株のオーシスト感染は１０００個／羽とし、各群１０羽ずつ割付け設定した。また感染後の観察期間は、２週間とした。検査項目は、増体量及び飼料要求率を主な検査項目とし、その他にＯ．Ｐ．Ｇ．及び盲腸病変観察を実施した。その結果、増体量で抗体と乳酸菌の投与群で効果が確認され、飼料要求率でも効果が確認された。
【００３５】
以上のことから、鶏コクシジウム症の攻撃に対して抗鶏コクシジウム症抗体と乳酸菌のラクトバチルス・アシドフィルスを飼料に投与することにより増体量及び飼料要求率を含めた改善が認められた。総合判定は、得られた各観察項目の数値を元に被験物質の効果を判定したところ、極めて有効な効果が認められた。
【００３６】
【表２】

【００３７】
［実施例４］
実施例１で得た抗鶏コクシジウム症抗体とクロストリジウム・パーフリンジェンスで免疫された鶏の卵より得た抗クロストリジウム・パーフリンジェンス抗体を混合した飼料を用いて鶏コクシジウム症（Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ）とクロストリジウム・パーフリンジェンスの混合感染実験鶏（Ａｖｉａｎ　Ｄｉｓｅａｓｅ，　２４：　３２４−３３３，　１９８０）に対する効果を検討した。
【００３８】
抗クロストリジウム・パーフリンジェンス抗体は、クロストリジウム・パーフリンジェンスＡＴＣＣ３６２４株をチオグリコレート培地で培養し、この１×１０^１０個／ｍｌを含有する菌液とフロイント不完全アジュバントとを乳化し、１２週齢の雌鶏に、左右の胸筋に１ｍｌずつ注射し１回目の免疫を行った。同様にして、６週間後に２回目の免疫を同様に行った。２回目の免疫から２週間後、この鶏の血液中の抗クロストリジウム・パーフリンジェンス抗体の菌体凝集反応法による抗体価は、３００〜１２００倍であった。この鶏が産んだ卵の抗体価は３００〜１２００倍であった。この抗体価は４ヶ月間持続した。この卵を集め、噴霧乾燥により全卵粉末の鶏卵抗体を作成した。この粉末の抗体価は６００倍であった。
【００３９】
供試動物はブロイラー専用種チャンキーとし、ブロイラー肥育前期用標準飼料（ＳＤＢ　Ｎｏ．１）に抗鶏コクシジウム症抗体０．１％と抗クロストリジウム・パーフリンジェンス抗体０．１％を添加して投与した。Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ　ＥＴ株のオーシスト感染は１０００個／羽とし、クロストリジウム・パーフリンジェンス　ＡＴＣＣ３６２４株の感染は１０^７個／羽とし、各群１０羽ずつ割付け設定した。また感染後の観察期間は、２週間とした。検査項目は、増体量及び飼料要求率を主な検査項目とし、その他にＯ．Ｐ．Ｇ．及び盲腸病変観察を実施した。その結果、増体量で抗鶏コクシジウム症抗体と抗クロストリジウム・パーフリンジェンス抗体の混合投与群で効果が確認され、飼料要求率でも効果が確認された。
【００４０】
以上のことから、鶏コクシジウム症とクロストリジウム・パーフリンジェンスの混合攻撃に対して抗鶏コクシジウム症抗体０．１％と抗クロストリジウム・パーフリンジェンス抗体０．１％を飼料に併用して投与することにより増体量及び飼料要求率を含めた改善が認められた。総合判定は、得られた各観察項目の数値を元に被験物質の効果を判定したところ、極めて有効な効果が認められた。
【００４１】
【表３】

【００４２】
［実施例５］
実施例１で得た抗鶏コクシジウム症抗体を飼料に添加して鶏コクシジウム実験感染鶏（Ｅｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ）（Ａｖｉａｎ　Ｄｉｓｅａｓｅ，　３１：　１１２−１１９，　１９８７）に対する効果を検討した。供試動物はブロイラー専用種チャンキーとし、抗体はブロイラー肥育前期用標準飼料（ＳＤＢ　Ｎｏ．１）に０．１％、１％及び１０％となるように添加して投与した。Ｅｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ　ＥＡ株のオーシスト感染は１０００個／羽とし、各群１０羽ずつ割付けた。また感染後の観察期間は、２週間とした。検査項目は、増体量及び飼料要求率を主な検査項目とし、その他にＯ．Ｐ．Ｇ．及び小腸病変観察を実施した。その結果、増体量で０．１％投与群でも効果が確認された。
【００４３】
以上のことから、鶏コクシジウム症の攻撃に対して抗鶏コクシジウム症抗体を飼料に０．１％以上投与することにより増体量の改善が認められた。
【００４４】
【表４】

【００４５】
^ａ）：小腸病変値は、０：病変認められず；＋１：十二指腸にオーシストを含んだ白色壊死病巣が散在してみられる；＋２：白色壊死病巣の数が増加し、かつ小腸上部にまで病巣が延長する；＋３：病巣は増加し融合する。小腸壁は肥厚し、内容物は水様である；＋４：お互いに融合した多数の病巣により、十二指腸ならびに小腸上部は灰色を呈する。壁は強度に肥厚し、クリーム状の粘液を内部に含む；の判定基準にしたがって１羽平均値を求め、１０羽に換算した値を表４に示した。
【００４６】
実施例２、３及び５において、抗鶏コクシジウム症抗体、又は該抗体と乳酸菌を鶏に対して飼料に混ぜて連続して給与したとき、鶏コクシジウム症実験感染させたところ発症が軽減され、増体効果が見られた。また、鶏コクシジウム症に感染した鶏に抗鶏コクシジウム症抗体と乳酸菌を飼料に混合して給与したとき、その症状は著しく改善され、増体量及び飼料要求率を含めた改善が認められた。また、抗クロストリジウム・パーフリンジェンス抗体を併用すると鶏コクシジウム症の発症を予防し、増体量及び飼料要求率を含めた改善が認められた。
【００４７】
【発明の効果】
本発明における抗鶏コクシジウム症抗体と乳酸菌又は抗クロストリジウム・パーフリンジェンス抗体から成る抗鶏コクシジウム症組成物は、鶏コクシジウムに対して特異的に作用するので、抗鶏コクシジウム剤又はワクチンの代わりに鶏コクシジウム症に対して極めて有効な予防効果を発揮するとともに、鶏コクシジウム症の症状軽減及び体重増加に極めて有効に働く。

Claims

鶏コクシジウム症に関与するＥｉｍｅｒｉａ　ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ、Ｅｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅｌｌａ及びＥｉｍｅｒｉａ　ｍａｘｉｍａのスポロゾイト及びメロゾイトに共通の免疫原性を有する外膜蛋白質抗原又はその免疫原性断片で免疫された鶏の卵より得られた抗体を含有する経口用抗鶏コクシジウム症組成物。
更に、乳酸菌を含有する請求項１記載の組成物。
更に、クロストリジウム・パーフリンジェンスで免疫された鶏の卵より得た抗体を含有する請求項１又は２記載の組成物。
鶏コクシジウム症の予防又は治療に用いられる請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物を含有する鳥類用飼料。
請求項１に記載の抗体、又は該抗体と、乳酸菌及び／又はクロストリジウム・パーフリンジェンスで免疫された鶏の卵より得た抗体とを鳥類に経口投与することを特徴とする鶏コクシジウム症の予防又は治療方法。