JP2004010482A

JP2004010482A - プロポリス抽出物、その製造方法及びそれを含有する血圧降下剤

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Publication number: JP2004010482A
Application number: JP2002161543A
Authority: JP
Inventors: Naoko Takeshima; 竹島　直子; Chie Yoshida; 吉田　千絵; Yoshihiro Futamura; 二村　芳弘; Satoshi Mishima; 三島　敏
Original assignee: API Co Ltd
Current assignee: API Co Ltd
Priority date: 2002-06-03
Filing date: 2002-06-03
Publication date: 2004-01-15
Anticipated expiration: 2022-06-03
Also published as: JP3936245B2

Abstract

【課題】ＡＣＥ阻害作用及びＰＤＥ阻害作用に基づき、高血圧症に対して血圧降下作用を発揮することができるプロポリス抽出物、その製造方法及びそれを含有する血圧降下剤を提供する。
【解決手段】プロポリス抽出物は、フェノール性有機酸類及びカフェオイルキナ酸類から選択される少なくとも一種を含有し、フェノール性有機酸類の含有量は３重量％以上であり、カフェオイルキナ酸類の含有量は５重量％以上のものである。その製造方法はプロポリス原料に、水に対してアルコール１０〜４０容量％を含有する含水アルコールを混合し、フェノール性有機酸類及びカフェオイルキナ酸類から選択される少なくとも一種を抽出することを特徴としている。さらに、血圧降下剤は、前記プロポリス抽出物を有効成分として含有するものである。
【選択図】　　　なし

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、高血圧症等の循環器系疾患の発症及び進展を抑制するために有効な成分を含有するプロポリス抽出物、その製造方法及びそれを含有する血圧降下剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
近年、高血圧症、動脈硬化症、血栓症、心疾患等の循環器系疾患の増加が大きな社会問題となっている。循環器系疾患のうち、高血圧症及びその前段階の症状を呈する人が特に増加している。高血圧症の発症原因としては、体液量の増加、血管の抵抗性の低下、血圧上昇因子の増加又は血圧低下因子の減少等が挙げられる。これらの因子が単独又は複合されることにより、血圧が異常に上昇する。血圧上昇因子としては、アンジオテンシンＩＩ、エンドセリン及びアドレナリン等が存在する。特に、アンジオテンシンＩを基質とし、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）により生成されるアンジオテンシンＩＩは高血圧症の発症に関与している。ＡＣＥを阻害する物質であるカプトプリルやエナラプリルは医薬品として高血圧症の改善に使用されている。ＡＣＥを阻害する天然物質としてはイワシ由来ペプチドの中のＶＹペプチド、鰹節由来ペプチドや乳酸菌の産生するペプチド等が知られている。これらは特定保健用食品の有効成分として使用されている。
【０００３】
一方、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）は、血管平滑筋細胞内で環状アデノシンモノリン酸（ｃＡＭＰ）を分解し、５−アデノシンモノリン酸を生じる酵素である。血圧降下作用を示す一酸化窒素を血管平滑筋細胞に作用させると、ｃＡＭＰが増加し、平滑筋細胞が弛緩する。この平滑筋細胞の弛緩により、血圧が降下する。しかし、ＰＤＥの働きにより、ｃＡＭＰが分解されてしまうと、血圧の降下は生じない。そこで、ＰＤＥを阻害することにより、ｃＡＭＰの分解が抑えられ、血圧の降下が維持される。ＰＤＥの阻害作用を示すパパベリンは、血圧を降下させる医薬品として使用されている。
【０００４】
高血圧症に対する医薬品又は健康食品の試験を行う場合には、自然発症高血圧（ＳＨＲ）ラットが用いられる。このＳＨＲラットはヒトにおける本態性高血圧症のモデルであり、医薬品開発及び食品開発に当たり、高血圧症の実験モデルとして汎用され、その実験成績は豊富である。
【０００５】
プロポリス（プロポリス原塊）は蜂ヤニともいわれ、蜜蜂、ヨーロッパにおいては医薬品あるいは健康食品の素材として古くから用いられてきたが、近年、日本においても健康食品や化粧品の素材として多くの製品に使用されている。プロポリスの主要な生理活性として抗酸化作用及び免疫賦活作用が知られており、健康食品の素材としての効能を裏付けている。また、プロポリス中には、フェノール性有機酸類、カフェオイルキナ酸類、フラボノイド類等の多くの化合物が確認されており、これらの物質が相互に作用し合い、プロポリスの優れた生理活性が形成されると考えられている。
【０００６】
プロポリスの抽出物としては、水を溶媒とする水抽出物、エタノール等の親水性有機溶媒を用いる親水性有機溶媒抽出物、さらに、液化炭酸ガスを用いる超臨界抽出物が知られている。このうち、最も、よく利用されるのが、１００容量％エタノールを用いるエタノール抽出物であるが、この抽出物の血圧降下作用に関する報告はない。また、特開２０００−３２５０３２号公報では、アルコール抽出プロポリスに水抽出プロポリスを徐々に添加・混合するプロポリス製品について開示されているものの、そこでも血圧降下作用については報告されていない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
上記のように水、親水性有機溶媒又は超臨界抽出により得られたプロポリス抽出物には、循環器系疾患、特に、高血圧症の進展の抑制又は予防に関する報告は認められない。
【０００８】
この発明は上記のような従来技術に存在する問題点に着目してなされたものである。その目的とするところは、ＡＣＥ阻害作用及びＰＤＥ阻害作用に基づき、高血圧症に対して血圧降下作用を発揮することができるプロポリス抽出物、その製造方法及びそれを含有する血圧降下剤を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
上記の目的を達成するために、請求項１に記載の発明は、フェノール性有機酸類及びカフェオイルキナ酸類から選択される少なくとも一種を含有し、フェノール性有機酸類の含有量は３重量％以上であり、カフェオイルキナ酸類の含有量は５重量％以上であるプロポリス抽出物である。
【００１０】
請求項２に記載の発明は、プロポリス原料に、水に対してアルコール１０〜４０容量％を含有する含水アルコールを混合し、フェノール性有機酸類及びカフェオイルキナ酸類から選択される少なくとも一種を抽出することを特徴とするプロポリス抽出物の製造方法である。
【００１１】
請求項３に記載の発明は、請求項１に記載のプロポリス抽出物を有効成分として含有する血圧降下剤である。
【００１２】
【発明の実施の形態】
以下、この発明を具体化した実施形態について詳細に説明する。
まず、本実施形態のプロポリス抽出物は、フェノール性有機酸類及びカフェオイルキナ酸類から選択される少なくとも一種を含有し、フェノール性有機酸類の含有量は３重量％以上であり、カフェオイルキナ酸類の含有量は５重量％以上のものである。
【００１３】
プロポリスとは、プロポリス原塊に由来するもので、抗菌作用、抗ウイルス作用、抗酸化作用、抗炎症作用、抗腫瘍作用、抗潰瘍作用、局所麻酔作用、免疫賦活作用、抗アレルギー作用、鎮痛作用等、種々の有用な生理作用を示す有効成分を少なくとも含むものである。これらの有効成分としてフェノール性有機酸類、カフェオイルキナ酸類、フラボノイド類、テルペノイド類等が挙げられる。
【００１４】
フェノール性有機酸類としては、カフェ酸、桂皮酸、フェルラ酸、ｐ−クマル酸等が挙げられる。カフェオイルキナ酸類としては、クロロゲン酸、４−カフェオイルキナ酸、５−カフェオイルキナ酸、４，５−ジカフェオイルキナ酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸、３，４−ジカフェオイルキナ酸等が挙げられる、フラボノイド類としては、ケルセチン、アピゲニン等が挙げられる。これらのうち、フェノール性有機酸類とカフェオイルキナ酸類は、ＡＣＥ阻害作用及びＰＤＥ阻害作用を有する。
【００１５】
従って、本実施形態のプロポリス抽出物においては、血圧降下作用を発揮する有効成分として、フェノール性有機酸類及びカフェオイルキナ酸類のいずれかが含有されることが必要であり、両者が同時に含有されることがより好ましい。各々単独でも良いが、双方を含むことにより、相乗的な効果が得られる。
【００１６】
フェノール性有機酸類の含有量は、３重量％以上であり、５重量％以上であることがより好ましい。フェノール性有機酸類の含有量が３重量％を下回る場合、ＡＣＥ阻害作用及びＰＤＥ阻害作用が得られず、その結果、目的とする血圧降下作用も得られない。
【００１７】
カフェオイルキナ酸類の含有量は、５重量％以上であり、８重量％以上であることがより好ましい。カフェオイルキナ酸類の含有量が５重量％を下回る場合、ＡＣＥ阻害作用及びＰＤＥ阻害作用が得られず、やはり、目的とする血圧降下作用が得られない。
【００１８】
次に、前記プロポリス抽出物の製造方法について詳細に説明する。
本実施形態のプロポリス抽出物の製造方法は、プロポリス原料に、水に対してアルコール１０〜４０容量％を含有する含水アルコールを混合し、フェノール性有機酸類及びカフェオイルキナ酸類から選択される少なくとも一種を抽出するものである。含水アルコールにより抽出されるプロポリス抽出物に含まれる物質としては、フェノール性有機酸類、カフェオイルキナ酸類、フラボノイド類等が挙げられる。
【００１９】
プロポリス原料の産地は、中国、日本等のアジア諸国、ブラジル等の南米諸国、ヨーロッパ諸国、オーストラリア等のオセアニア諸国、アメリカ等の北米諸国、アフリカ諸国等があるが、そのいずれであってもよい。プロポリス原料はそのまま又は粉砕して用いても良いが、ごみやワックス等の夾雑物もあり、また、そのままでは処理が困難な場合には、粉砕後、溶媒によって抽出したプロポリスを用いるのが好ましい。その場合、溶媒を除去し、乾燥等により粉末としたプロポリスを用いるのが好ましい。さらに、水、有機溶媒又は超臨界抽出により抽出が行なわれた後のプロポリス残渣を用いる場合もある。
【００２０】
プロポリスに混合される溶媒は、水に対してアルコール１０〜４０容量％を含有する含水アルコールである。アルコールの種類は、メタノール、エタノール、プロパノール等の低級アルコールが好ましく、食用として利用されるエタノールがさらに好ましい。アルコール濃度は、前述のように水に対してアルコール１０〜４０容量％が用いられ、２０〜３０容量％が好ましい。１０容量％未満のアルコール濃度では、ＰＤＥ阻害作用を有する物質の抽出効率が悪く、かつ、フェノール性有機酸類又はカフェオイルキナ酸類の収率も低下する。一方、４０容量％を上回るアルコール濃度では、ＡＣＥ阻害活性を有する物質の抽出率が低下し、かつ、フェノール性有機酸類又はカフェオイルキナ酸類の収率も低下する。
【００２１】
混合に用いる含水アルコールの量は、重量基準でプロポリスに対して０．５〜５倍量が好ましく、１．５〜２倍量がより好ましい。この含水アルコールの量がプロポリスに対して０．５倍量を下回る場合、抽出の効率が低下し、製造コストが高くなる場合がある。逆に含水アルコールの量がプロポリスに対して５倍量を上回る場合、抽出のための容器が大型となり、濃縮や乾燥に時間と人手を費やす場合がある。
【００２２】
混合時の温度は、４〜４０℃が好ましく、７〜２５℃がより好ましい。この温度が４℃を下回る場合、抽出効率が低下し、十分な抽出が得られない。逆に温度が４０℃を上回る場合、アルコールの蒸発が著しく、かつ、高温による物性の低下が生じ、目的とする抽出が行なわれない場合がある。
【００２３】
混合時間は、通常１〜７２時間であるが、３〜４８時間が好ましく、６〜２４時間がより好ましい。この混合時間が１時間未満である場合、抽出効率が低下し、目的とする抽出物が得られないときがある。一方、この混合時間が７２時間を越える場合には、細菌や微生物の繁殖が生じ、不純物による汚染のおそれがある。
【００２４】
さらに、前記により得られたプロポリス抽出物は製剤化を効率的に行なう目的で以下のような後処理を行なうことが好ましい。前記により得られたプロポリス抽出物は濾過又は遠心分離等の固液分離に供される。濾過の手段としては、濾紙又は珪藻土等を敷いた濾紙を用いた吸引又は真空ポンプによる減圧下での濾過又は常圧下での自然濾過のいずれでも良い。濾過の代わりに遠心分離を利用しても良い。さらに、濾過と遠心分離の組み合わせが好ましい。得られた濾液又は上清は、減圧濃縮機、真空乾燥機又は凍結真空乾燥機により濃縮液又は粉末にされる。以上の後処理により、液体又は粉末状態のプロポリス抽出物が得られる。
【００２５】
次に、前記プロポリス抽出物を有効成分として含有する血圧降下剤について詳細に説明する。得られたプロポリス抽出物は、液体又は粉末状態のまま、血圧降下剤として直接摂取される場合がある。該プロポリス抽出物にはゲル化剤、香料、防腐剤、酸化防止剤、着色剤、清涼剤、殺菌剤、ｐＨ調整剤等の添加剤を適宜添加することも可能であり、カプセル又は錠剤として成形される。また、得られたプロポリス抽出物は、液体としてドリンク剤に添加される。さらに、得られたプロポリス抽出物は、常法に従い、液体又は粉末として食品素材又は医薬品素材に添加され、食品、健康補助食品、特定保健用食品又は医薬品に利用される。これら製剤におけるプロポリス抽出物の含有量としては、０．０１〜２０重量％が好ましい。０．０１重量％未満の場合には摂取量が増加するために摂取が困難になる。また、２０重量％を越える場合には、製剤の安定性が低下する場合がある。
【００２６】
一般的に、水を溶媒として抽出されたプロポリス抽出物は、親水性の物質からなる有効成分を多く含有することから、摂食した場合、有効成分の吸収が良いが、排泄が早い傾向にあり、持続的な血圧降下作用は得られない。一方、９５〜１００容量％アルコール抽出プロポリス抽出物は、親油性の物質からなる有効成分を多く含有することから、摂食した場合、有効成分の吸収が悪いものの、排泄は遅く、血中に留まる時間は長い傾向にあり、持続的な血圧降下作用は得られる。これに対し、本実施形態のプロポリス抽出物は、水に対して１０〜４０容量％のアルコールを含む含水アルコールを用いて製造され、親水性及び親油性の両者の有効成分を含有するため、摂食した場合、有効成分の体内への吸収が容易で、かつ、排泄が抑制され、即効的及び持続的な血圧降下作用が発揮される。
【００２７】
ケルセチン等のフラボノイド類が血圧降下作用を示し、その作用機序には、抗酸化作用が関与している。ＳＨＲラットに対し、１０ｍｇ／ｋｇで血圧降下が認められる。この量をヒトの摂取量に換算すると、３重量％のフラボノイド類に相当する。前記記載のフェノール性有機酸類又はカフェオイルキナ酸類を含有するプロポリス抽出物に、フラボノイド類を加えることは、好ましい。加えられるフラボノイド類としてはケルセチンがより好ましい。さらに、前記フラボノイド類の添加量は３重量％以上がさらに好ましい。添加されるフラボノイド類としてはプロポリス、玉ねぎ等のフラボノイド類を含有する素材から製造されたものが用いられる。以上のように、構成することによってフェノール性有機酸類又はカフェオイルキナ酸類によるＡＣＥ阻害作用及びＰＤＥ阻害作用に加えて、フラボノイド類による抗酸化作用からなる３種類の異なった作用に基づいた血圧降下作用が発揮されるプロポリス抽出物が得られる。
【００２８】
次に、フェノール性有機酸類又はカフェオイルキナ酸類に起因するＰＤＥ阻害作用及びフラボノイド類による抗酸化作用に基づき、動脈硬化症の治療又は予防に用いられるプロポリス抽出物について説明する。動脈硬化症において血管平滑筋細胞内でＰＤＥ阻害作用により維持されるｃＡＭＰは、血管平滑筋細胞の増殖を抑制することから、得られたプロポリス抽出物は動脈硬化症の治療又は発症の予防の目的にも使用される。既に、ｃＡＭＰが動脈血管の平滑筋細胞の増殖を抑制するという事実が知られており、ＰＤＥ阻害作用を示す成分は動脈硬化症の治療又は予防に有効である。さらに、ケルセチン等のフラボノイド類は抗酸化作用により動脈硬化症の発症を予防するという事実が知られている。この場合、フラボノイド類の含有量は３重量％以上が好ましい。したがって、フェノール性有機酸類、カフェオイルキナ酸類及びフラボノイド類を含有するプロポリス抽出物は動脈硬化症の治療又は予防に有効である。
【００２９】
以上、詳述した本実施形態によれば次のような効果が発揮される。
・　本実施形態におけるプロポリス抽出物によれば、フェノール性有機酸類及びカフェオイルキナ酸類から選択される少なくとも一種を含有し、フェノール性有機酸類の含有量は３重量％以上であり、カフェオイルキナ酸類の含有量は５重量％以上という特徴を有し、血圧降下作用を発揮することができる。
・　本実施形態におけるプロポリス抽出物の製造方法によれば、プロポリス原料に、水に対してアルコール１０〜４０容量％を含有する含水アルコールを混合することにより、容易な操作により、目的とするプロポリス抽出物を収率良く製造することができる。
・　本実施形態におけるプロポリス抽出物を有効成分として含有する血圧降下剤によれば、ＡＣＥ阻害作用及びＰＤＥ阻害作用に基づき、高血圧症の進展を抑制し、発症を予防することができる。
・　本実施形態におけるプロポリス抽出物によれば、ＡＣＥ阻害活性及びＰＤＥ阻害活性の両方を有する血圧降下作用を示すことから、発症の原因が異なった高血圧症に対しても効果を発揮することができる。
・　本実施形態におけるプロポリス抽出物によれば、ヒトの本態性高血圧症モデルであるＳＨＲラットの血圧を降下させることから、ヒトの本態性高血圧症にも血圧降下作用を発揮することができる。
・　本実施形態により２０〜３０容量％アルコールで抽出されることにより得られるプロポリス抽出物によれば、その摂取により高血圧症の進展を抑制又は予防することができる。
・　本実施形態におけるプロポリス抽出物によれば、フェノール性有機酸類を５重量％以上及びカフェオイルキナ酸類を８重量％以上から選択される少なくとも一種を含有することにより、ＡＣＥ阻害作用及びＰＤＥ阻害作用に基づき、血圧降下作用を効果的に発揮することができる。
・　本実施形態におけるフェノール性有機酸類及びカフェオイルキナ酸類から選択される少なくとも一種を含有し、さらに、３重量％以上のフラボノイド類を含有するプロポリス抽出物によれば、より強い血圧降下作用を発揮することができる。
・　本実施形態により得られるプロポリス抽出物によれば、体内への吸収が容易で、かつ、排泄が抑制されることにより、有効成分の血中濃度が維持されるために、持続的な血圧降下作用を発揮することができる。
・　本実施形態により得られるプロポリス抽出物によれば、フェノール性有機酸類及びカフェオイルキナ酸類によるＰＤＥ阻害作用並びにフラボノイド類による抗酸化作用に基づき、動脈硬化症の治療又は予防に用いることができる。
【００３０】
【実施例】
以下、前記実施形態を実施例、比較例及び試験例を用いて具体的に説明する。
（実施例１）
ブラジル産プロポリス原塊３００ｇを粉砕機（（株）石崎電機製作所製のこなどん）で粉砕した後、１０容量％エタノール１．５リットルを混合し、２０℃で２４時間攪拌抽出した。次に、前記プロポリス粉砕物を含む抽出液を濾紙（アドバンテック東洋（株）製のＮｏ．２）で濾過して残渣を除去することによって、プロポリスの１０容量％エタノール抽出液１．３３ｋｇ（固形分７．８重量％）を得た。
【００３１】
（実施例２）
ブラジル産プロポリス原塊３００ｇを前記粉砕機で粉砕した後、２０容量％エタノール１．５リットルを混合し、２０℃で２４時間攪拌抽出した。次に、前記プロポリス粉砕物を含む抽出液を前記濾紙で濾過して残渣を除去することによって、プロポリスの２０容量％エタノール抽出液１．３９ｋｇ（固形分８．８重量％）を得た。
【００３２】
（実施例３）
ブラジル産プロポリス原塊３００ｇを前記粉砕機で粉砕した後、２５容量％エタノール１．５リットルを混合し、２０℃で２４時間攪拌抽出した。次に、前記プロポリス粉砕物を含む抽出液を前記濾紙で濾過して残渣を除去することによって、プロポリスの２５容量％エタノール抽出液１．４４ｋｇ（固形分９．１重量％）を得た。
【００３３】
（実施例４）
ブラジル産プロポリス原塊３００ｇを前記粉砕機で粉砕した後、３０容量％エタノール１．５リットルを混合し、２０℃で２４時間攪拌抽出した。次に、前記プロポリス粉砕物を含む抽出液を前記濾紙で濾過して残渣を除去することによって、プロポリスの３０容量％エタノール抽出液１．３８ｋｇ（固形分８．６重量％）を得た。
【００３４】
（実施例５）
ブラジル産プロポリス原塊３００ｇを前記粉砕機で粉砕した後、４０容量％エタノール１．５リットルを混合し、２０℃で２４時間攪拌抽出した。次に、前記プロポリス粉砕物を含む抽出液を前記濾紙で濾過して残渣を除去することによって、プロポリスの４０容量％エタノール抽出液１．３５ｋｇ（固形分８．１重量％）を得た。
【００３５】
（比較例１）
ブラジル産プロポリス原塊３００ｇを前記粉砕機で粉砕した後、９５容量％エタノール１．５リットルを混合し、２０℃で２４時間攪拌抽出した。次に、前記プロポリス粉砕物を含む抽出液を前記濾紙で濾過して残渣を除去することによって、プロポリスの９５容量％エタノール抽出液１．３５ｋｇ（固形分８．９重量％）を得た。
【００３６】
（比較例２）
ブラジル産プロポリス原塊３００ｇを前記粉砕機で粉砕した後、８０容量％エタノール１．５リットルを混合し、２０℃で２４時間攪拌抽出した。次に、前記プロポリス粉砕物を含む抽出液を前記濾紙で濾過して残渣を除去することによって、プロポリスの８０容量％エタノール抽出液１．１３ｋｇ（固形分７．１重量％）を得た。
【００３７】
（比較例３）
ブラジル産プロポリス原塊３００ｇを前記粉砕機で粉砕した後、５０容量％エタノール１．５リットルを混合し、２０℃で２４時間攪拌抽出した。次に、前記プロポリス粉砕物を含む抽出液を前記濾紙で濾過して残渣を除去することによって、プロポリスの５０容量％エタノール抽出液１．０２ｋｇ（固形分５．９重量％）を得た。
【００３８】
以下に、ＡＣＥ活性阻害実験について説明する。
（試験例１）
ＡＣＥ活性阻害実験は、Ｆｏｏｄ　Ｓｃｉ　Ｔｅｃｈｎｏｌ．　Ｉｎｔ．　Ｔｏｋｙｏ，　３　（４）、３３９−３４３（１９９７）の方法に準じて行なった。すなわち、ウシの肺をアセトン中で沈降、乾燥した粉末（シグマ社製）１ユニットに塩化ナトリウムを含有するホウ酸緩衝液８．３３ｍｌを添加して０．１２ユニット／ｍｌのＡＣＥ酵素溶液を調製した。試験管に蒸留水又は試料溶液０．０５ｍｌを添加し、これに５．８３ｍＭのＢｚ−Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕを含有する基質溶液０．１５ｍｌを加えた。３７℃で５分間反応後、ＡＣＥ酵素溶液又はブランクとして１Ｎ塩酸溶液のいずれかを０．０５ｍｌ添加し、さらに、３７℃で３０分間反応させた。これに１Ｎ塩酸溶液０．２５ｍｌを添加後、酢酸エチル１．５ｍｌを加えて攪拌した。この溶液を遠心分離し、酢酸エチル層１ｍｌを採取した。得られた酢酸エチル層を真空乾燥機にて４０℃で蒸発乾燥させた。これに蒸留水２．５ｍｌを添加し、１５分間放置後、２２８ｎｍの吸光度を測定した。なお、陽性対照物質としてＶＹペプチド及びイワシペプチドを用いた。
【００３９】
阻害率（％）は次式により算出した。
阻害率＝［１−（Ｅ_Ｓ−Ｅ_ｂ）／（Ｅ_Ｃ−Ｅ_ｂ）］×　１００％
Ｅ_Ｃ　：　試料溶液の代わりの蒸留水の２２８ｎｍの吸光度
Ｅ_Ｓ　：　試料溶液を含む時の２２８ｎｍの吸光度
Ｅ_ｂ　：　ブランクとしてＡＣＥの代わりに塩酸を加えた時の２２８ｎｍの吸光度
なお、阻害率５０％のときの試料濃度をＩＣ_５０とした。
【００４０】
【表１】

表１に示すように、実施例１〜５のＩＣ_５０が低いことから、ＡＣＥ阻害作用が示唆された。特に、実施例３のＡＣＥ阻害作用は著しく強かった。さらに、比較例３のＡＣＥ阻害作用は軽度であり、比較例１及び比較例２にはＡＣＥ阻害作用は認められなかった。
【００４１】
以下に、ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害実験について説明する。
（試験例２）
ウシの心臓１００ｇをアセトン中で沈降、乾燥した粉末（シグマ社製）を５ｍｌのトリス緩衝液（ｐＨ７）に溶解し、１００００Ｇ、３０分間の遠心分離処理後の上清液を上記緩衝液で３倍に希釈してＰＤＥ酵素液とした。測定法はマラカイトグリーン法に準じた、即ち、１００ｍＭ　トリス緩衝液（３００ｍＭ　塩化ナトリウムを含む）ｐＨ７に、ＰＤＥ酵素液を添加し、３０℃で、３０分間反応させた。これに基質として５ｍＭ　ｃＡＭＰを０．１ｍｌ添加した。試料溶液を添加後、３０℃で１時間反応させた。これを冷却し、マラカイトグリーン液（モリブデン酸アンモニウム、クエン酸緩衝液含有）０．１ｍｌを添加した。攪拌後、測定波長６３０ｎｍにおける吸光度を測定した。各試料のＰＤＥ阻害作用（ＩＣ_５０）を求めた。なお、陽性対照物質としてパパベリンを用いた。
【００４２】
【表２】

表２に示すように、実施例１〜５のＩＣ_５０が低いことから、ＰＤＥ阻害作用が示唆された。特に、実施例３のＰＤＥ阻害作用が著しかった。一方、比較例１〜比較例３のＰＤＥ阻害作用は軽度であった。
【００４３】
以下に、ＳＨＲラットを用いた血圧降下実験について説明する。
（試験例３）
ＳＨＲラットを用いて、１４日間反復経口投与により、収縮期血圧及び心拍数の変化を調べた。すなわち、１６から２０週齢のＳＨＲラットを１週間の予備飼育後、健康状態に異常の認められない動物を試験に用いた。溶媒対照として蒸留水を用い、陽性対照物質としてＶＹペプチドを用いた。試料の投与量を１０ｍｇ／１０ｍｌ／ｋｇ体重／日とし、これを１日あたり午前と午後に分けてラット用経口ゾンデを用いて経口投与した。投与１４日目の動物について収縮期血圧及び心拍数をソフトロンＢＰ−８０（ソフトロン製）を用いて非観血的に測定した。各群の動物数を３例とした。得られた結果を平均値及び標準偏差で示し、ｔ検定により溶媒対照群に対する有意差を調べた。なお、危険率５％未満の場合を有意差あり（＊印）と判定した。
【００４４】
【表３】

表３に示すように、実施例１〜５の収縮期血圧は、溶媒対照群に比して有意に降下しており、血圧降下作用が認められた。一方、比較例１〜比較例３では血圧の降下は認められなかった。ＶＹペプチドについても収縮期血圧の降下が認められた。なお、全ての試料で心拍数に変化は認められなかった。
【００４５】
以上の試験例１〜３に示されるように、血圧降下作用は、実施例３が最も強く、次いで、実施例２及び実施例４が強く、実施例１及び実施例５は中程度であった。
【００４６】
以下に、液体高速クロマトグラフ装置を用いた有効成分の分析について説明する。
（試験例４）
各試料の０．１％固形分をカプセルパックＡＧ１２０（資生堂）を分析カラムとして装着した液体高速クロマトグラフ装置（島津製作所製）に供した。メタノール：水：酢酸の比率が３０：７０：１よりなる混合溶液を移動相として、流速０．８ｍｌ／分、温度４０℃で分析した。得られた分画の２７５ｎｍの吸光度を測定した。各物質のピーク面積を求め、含有量（重量％）を算出した。なお、ｐ−クマル酸及びフェルラ酸をフェノール性有機酸類とし、クロロゲン酸、４，５−ジカフェオイルキナ酸、３，５−ジカフェオイルキナ酸及び３，４−ジカフェオイルキナ酸をカフェオイルキナ酸類としてそれぞれの合計量を算出した。
【００４７】
【表４】

表４に示すように、実施例１〜５のフェノール性有機酸類の含量は３重量％以上であった。また、実施例２〜４のフェノール性有機酸類の含量は５重量％以上であり、これらの値はＡＣＥ阻害活性、ＰＤＥ阻害活性及び血圧降下作用と相関していた。
【００４８】
【表５】

【００４９】
【表６】

表５及び６に示すように、実施例１〜５のカフェオイルキナ酸類の含量は５重量％以上であった。また、実施例２〜４のカフェオイルキナ酸類の含量は８重量％以上であった。これらの値はＡＣＥ阻害活性、ＰＤＥ阻害活性及び血圧降下作用と相関していた。
【００５０】
なお、前記実施形態を次のように変更して構成することもできる。
・　前記記載のプロポリス抽出液にプロポリス以外のポリフェノール素材から抽出若しくは精製された又は化学的に合成されたフェノール性有機酸類及びカフェオイルキナ酸類を配合して目的とするプロポリス抽出物を調製しても良い。
・　前記記載のプロポリス抽出物をフェノール性有機酸類のみを含有するものとしても良い。
・　前記記載のプロポリス抽出物をカフェオイルキナ酸類のみを含有するものとしても良い。
【００５１】
次に、前記実施形態から把握できる技術的思想について以下に記載する。
・　フェノール性有機酸類の含有量は５重量％以上であり、カフェオイルキナ酸類の含有量は８重量％以上である請求項１に記載のプロポリス抽出物。このように構成した場合には、血圧降下作用を発揮することができる。
・　さらに、３重量％以上のフラボノイド類を含有する請求項１に記載のプロポリス抽出物。このように構成した場合には、より強い血圧降下作用を発揮することができる。
・　含水アルコール中のアルコール含有量が２０〜３０容量％である請求項２に記載のプロポリス抽出物の製造方法。このように構成した場合には、請求項１に記載のプロポリス抽出物を効率的に製造することができる。
・　フェノール性有機酸類、カフェオイルキナ酸類及びフラボノイド類を含有する請求項１に記載のプロポリス抽出物。このように構成した場合には、動脈硬化症の治療又は予防に用いることができる。
【００５２】
【発明の効果】
本発明は以上のように構成されているため、次のような効果を奏する。
請求項１に記載のプロポリス抽出物によれば、ＡＣＥ阻害作用及びＰＤＥ阻害作用に基づき、高血圧症に対して血圧降下作用を発揮することができる。
【００５３】
請求項２に記載の製造方法によれば、フェノール性有機酸類及びカフェオイルキナ酸類から選択される少なくとも一種を含有するプロポリス抽出物を容易な操作により、高い収率で製造することができる。
【００５４】
請求項３に記載の血圧降下剤によれば、ＡＣＥ阻害作用及びＰＤＥ阻害作用に基づき、高血圧症に対して血圧降下作用を発揮することができる。

Claims

フェノール性有機酸類及びカフェオイルキナ酸類から選択される少なくとも一種を含有し、フェノール性有機酸類の含有量は３重量％以上であり、カフェオイルキナ酸類の含有量は５重量％以上であるプロポリス抽出物。
プロポリス原料に、水に対してアルコール１０〜４０容量％を含有する含水アルコールを混合し、フェノール性有機酸類及びカフェオイルキナ酸類から選択される少なくとも一種を抽出することを特徴とするプロポリス抽出物の製造方法。
請求項１に記載のプロポリス抽出物を有効成分として含有する血圧降下剤。