JP4644500B2 - 細胞分化誘導剤及びその製造方法 - Google Patents
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Description
本実施形態の細胞増殖抑制剤は、癌細胞又は異常細胞に対する増殖抑制作用を有する有効成分としてキナ酸誘導体を含有している。この細胞増殖抑制剤は、癌細胞や異常細胞の発生を予防可能な健康食品等の飲食品や、癌の治療に有用な医薬品に添加して使用される。この細胞増殖抑制剤は、急性白血病(AML)や慢性白血病(CML)等を引き起こす血球系癌細胞の増殖や、大腸癌細胞等の固形癌細胞の増殖を抑制する作用を有するとともに、正常細胞からそのような癌細胞や異常細胞へと変化する際の癌化を抑制する作用も有し得る。なお、前記異常細胞としては、ポリープや良性腫瘍等の前癌状態にある細胞が主に挙げられる。また、この細胞増殖抑制剤は、足場依存的な増殖の有無に関わらず、あらゆる種類の正常細胞に由来する癌細胞又は異常細胞の増殖を抑制する。
・ 細胞増殖抑制剤、細胞分化誘導剤及びアポトーシス誘導剤は、いずれも有効成分としてキナ酸誘導体を含有している。本発明者らは、鋭意研究の結果、キナ酸誘導体に、癌細胞や異常細胞に対する増殖抑制作用、細胞分化誘導作用及びアポトーシス誘導作用を見出した。従って、細胞増殖抑制剤、細胞分化誘導剤及びアポトーシス誘導剤はいずれも、癌の縮小や癌化の予防に優れた効果を発揮し得る。このため、癌の予防や治療に有用な飲食品及び医薬品の原料となり得る。
まず、抽出工程を行った。即ち、ブラジルのミナスジェライス州原産のグリーン・プロポリス原塊300gに25容量%含水メタノール1500mLを加え、40℃で4時間撹拌することにより抽出工程を行った後、得られた抽出液を2000rpmで5分間遠心することにより上清を得た。この上清を濃縮した後に凍結乾燥することにより、プロポリス抽出物53.1gを得た。
得られた各溶出画分A〜Cについて、急性前骨髄球性白血病細胞株であるHL60細胞に対する細胞増殖抑制効果及び細胞分化誘導効果を調べた。HL60細胞は、分化能を有し、種々の化学物質に反応して増殖が停止し、顆粒球、又は、単球/マクロファージに分化する性質を有する。本試験で用いたHL60細胞は、ヒューマンサイエンス研究資源バンクより供与を受け、非働化ウシ胎児血清(FBS)を10容量%含有するRPMI−1640培地(シグマ社製の♯R8758)中、37℃、5容量%二酸化炭素存在下で継代培養されたものである。
溶出画分Bを核磁気共鳴装置(NMR;バリアン社製、300MHz)にて解析した。その結果、この溶出画分Bには、4,5−ジカフェオイルキナ酸、3,5−ジカフェオイルキナ酸、3,4−ジカフェオイルキナ酸、及び3,4,5−トリカフェオイルキナ酸が豊富に含まれていた。
実施例1の溶出画分BをHPLC(カラム直径20mm、カラム長さ250mm、担体は資生堂製のACRタイプシリカゲル、溶出溶媒は2容量%酢酸を含有する17容量%アセトニトリル水溶液、検出波長は325nm)により、画分B−1、画分B−2及び画分B−3の3つの画分に分画した。各画分B−1〜B−3について細胞増殖率及び分化誘導率を前記と同様に測定したところ、画分B−1及び画分B−2に細胞増殖抑制効果及び細胞分化誘導効果が確認された。
各精製画分α〜δについて、上記実施例1と同様に、HL60細胞に対する細胞増殖抑制効果及び細胞分化誘導効果をそれぞれ調べた。結果を表1に示す。
<固形癌に対する細胞増殖抑制に関するインビトロ試験>
各精製画分α〜δについて、ヒト大腸癌細胞株であるSW480細胞に対する細胞増殖抑制効果をMTTアッセイ法により調べた。MTTアッセイ法とは、生細胞中のミトコンドリア内脱水素酵素活性を測定することにより、生細胞数を相対的に測定する方法である。具体的には、MTT( 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide )を細胞の培地に加えたとき、細胞が生きていればミトコンドリア内脱水素酵素によってMTTが還元され、暗青色のMTTホルマザンを生成する。生成したMTTホルマザンの量は、570nmにおける培地の吸光度を測定することにより求められる。
・ キナ酸誘導体は、プロポリス原塊以外の動物素材又は植物素材(甘藷(カンショ)の葉、ヨモギ、コーヒー豆、ヒマワリの外皮等)から抽出することも可能である。また、キナ酸誘導体は、人為的に有機化学合成されたものであっても構わない。
・ キナ酸誘導体を含有する医薬部外品を製造してもよい。
Claims (2)
- キナ酸誘導体として4,5−ジカフェオイルキナ酸、3,5−ジカフェオイルキナ酸、3,4−ジカフェオイルキナ酸、及び3,4,5−トリカフェオイルキナ酸から選ばれる少なくとも1種を有効成分とし、AML又はCMLに適用される細胞分化誘導剤。
- 請求項1に記載の細胞分化誘導剤の製造方法であって、
該方法は抽出工程と分離工程とを備え、
前記抽出工程は、プロポリス原塊を第1の親水性有機溶媒に浸漬させ、該溶媒中に抽出されるプロポリス抽出物を得る工程であり、
前記分離工程は、前記抽出工程によって得られたプロポリス抽出物を前記第1の親水性有機溶媒を移動相とする逆相液体クロマトグラフィ担体に接触させた後、該担体に吸着した前記有効成分を第2の親水性有機溶媒で溶出する工程であり、
前記第1の親水性有機溶媒は10〜40容量%の含水メタノール又は含水エタノールからなり、前記第2の親水性有機溶媒は50容量%以上の含水メタノール又は含水エタノールからなることを特徴とする細胞分化誘導剤の製造方法。
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