JP2003533990A - 百日咳菌、パラ百日咳菌および気管支敗血症菌のペルタクチンの繰返し領域の多型性を有するポリペプチド、ならびに診断および免疫原性組成物におけるその使用 - Google Patents

百日咳菌、パラ百日咳菌および気管支敗血症菌のペルタクチンの繰返し領域の多型性を有するポリペプチド、ならびに診断および免疫原性組成物におけるその使用

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、百日咳菌、パラ百日咳菌および気管支敗血症菌により発現されるペルタクチン（ＰＲＮ）と呼ばれる外膜タンパク質に関する。該タンパク質は、ボルデテラ属の感染に対する防御免疫を誘導する。ペルタクチンの免疫優性および防御的免疫エピトープは、二つの反復領域、第１領域と第２領域を含む。これら２つの反復領域の比較から、パラ百日咳菌のペルタクチンは変異型でないことが示された。一方、百日咳のペルタクチンは、第１領域において最も変異し、気管支敗血症菌のペルタクチンは、反復する第１領域と第２領域の両方で変異していた。これら領域の変異配列を有するペルタクチンおよびペルタクチンフラグメントを含有する組成物は、免疫原性組成物として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、ボルデテラ属（Bordetella）のペルタクチンと呼ばれる外膜タンパ
ク質のタンパク質およびポリペプチド、ならびにそれらをコードしているポリヌ
クレオチドに関する。本発明は、免疫原性組成物、診断方法および診断キット中
のこれらのタンパク質およびポリペプチドの使用にも関する。
【０００２】 ボルデテラという属は、７つの種を包含する。最も研究されている種は、百日
咳菌（Bordetella pertussis）、パラ百日咳菌（Bordetella parapertussis）お
よび気管支敗血症菌（Bordetella bronchiseptica）である。百日咳菌は、ヒト
においてのみ呼吸器感染の原因となるにすぎない。パラ百日咳菌は、ヒトおよび
ヒツジに感染を生じ、気管支敗血症菌は、ヒトを包含する多くの動物種に感染す
る。
【０００３】 これらの病原体は、二成分のｂｖｇＡＳ（２、２１）系によって合成が調節さ
れる、一連の病原因子を産生する。これらの因子は、毒素、たとえば、百日咳菌
に特異的な唯一の毒素である百日咳毒素、気管細胞毒素、アデニル酸シクラーゼ
溶血素、ならびにアドへシン、たとえば繊維状血球凝集素、線毛およびペルタク
チン（ＰＲＮ）を包含する。
【０００４】 ＰＲＮは、百日咳菌では６９kDa、パラ百日咳菌では７０kDa、気管支敗血症菌
では６８kDaの見かけ分子量を有する、外膜タンパク質である（５、１４、１５
）。ＰＲＮの前駆体は、大きさが、それぞれ９１．５kDa、９３kDa、９２．５kD
aである。百日咳菌では、ＰＲＮは、凝集原であって（４）、Arg−Gly−Asp（Ｒ
ＧＤ）のモティーフによる一定の真核細胞への付着を促進することが立証されて
いる（１３）。
【０００５】 気管支敗血症菌ＰＲＮに特異的な抗体は、感作した子ブタで高力価で検出され
るが、非防御動物では、これらの抗体は、あるとしても僅かにのみ検出されるに
すぎない（１９）。気管支敗血症菌によるＰＲＮの合成は、防御と相関する（１
６）。ＰＲＮの調製品によるマウスまたは子ブタの感作は、気管支敗血症菌の感
染に対する防御免疫を誘導し（１２、１９）、受動的に投与されたモノクローナ
ル抗体は、気管支敗血症菌で攻撃された動物の死を予防する（１６）。百日咳菌
ＰＲＮは、マウスにおける百日咳菌による脳内、エアゾルおよび鼻内攻撃に対し
て防御免疫を誘導することも示されている（１１、１８、２０）。
【０００６】 そのため、ＰＲＮは、現在は、いくつかの非細胞性百日咳ワクチン（すなわち
、精製された細菌タンパク質で構成されるワクチン）に包含される（９）。しか
し、これら３種のＰＲＮは、明確に関連付けられるものの、異なる免疫原特性を
有する。たとえば、百日咳菌ＰＲＮの調製品は、百日咳菌の鼻内攻撃からマウス
を防御するが、パラ百日咳菌の鼻内攻撃からは防御しない（１１）。また、百日
咳菌の脳内攻撃からもマウスを防御するが、気管支敗血症菌ＰＲＮタンパク質は
、防御しない（１８）。
【０００７】 ３種類のタンパク質、すなわち百日咳菌ＰＲＮ、パラ百日咳菌ＰＲＮおよび気
管支敗血症菌ＰＲＮの推定されるアミノ酸の比較からは、高度の類似性が明らか
にされていて、気管支敗血症菌とパラ百日咳菌のタンパク質は、互いに、百日咳
菌ＰＲＮタンパク質に対してより類似している（５、１４、１５）。
【０００８】 ３種類のタンパク質の配列では、第１および第２領域における反復の回数が異
なる（図１ａ）。モノクローナル抗体を用いて、Charlesらは、Ｐ．６９−ＰＲ
Ｎタンパク質の防御的免疫優性エピトープを特定かつ特徴付けた（６）。このエ
ピトープは、第２領域に位置する５回反復する配列（Pro−Gln−Pro）にまたが
っている。この領域における相違は、気管支敗血症菌ＰＲＮを認識する子ブタか
らの血清が、これらのタンパク質間の高度の類似性にもかかわらず、百日咳菌Ｐ
ＲＮと反応しないという所見（１２）、および３つのタンパク質が与える交差防
御の欠如（１１、１８、２０）を説明し得る。
【０００９】 最近、百日咳菌の臨床単離体が産生するＰＲＮは、多様であることが示されて
いる。様々な臨床単離体のｐｒｎ遺伝子の配列から、ＰＲＮ変異型の主要な３型
が明らかにされた（１７）。オランダにおける流行は、ＰＲＮおよびＰＴをコー
ドしている遺伝子の配列の変化から生じることが示唆されているが、それは、現
在流行している様々な臨床単離体中に存在するタンパク質は、この国で用いられ
るワクチン株によって観察されるものとは配列が異なるからである（１７）。
【００１０】 百日咳菌のＰＲＮについては、観察されたすべてのアミノ酸の相違は、第１領
域に位置する。対立遺伝子ｐｒｎのＡ＝１型およびＣ＝３型は、非常に似ていて
、二つのアミノ酸で異なるにすぎないが、Ｂ＝２型は、全く異なっていて、同じ
領域に５アミノ酸の挿入がある（１７）。
【００１１】 第２領域では、一つの型が見出されたにすぎない。この型（Ａ*＝６）は、百
日咳菌のＷＨＯ参照株１８３２３、およびフランスの１臨床単離体が産生する（
３）。しかし、唯一の臨床単離体で検出されているにすぎないため、一般的であ
るとは思われない（３）。この百日咳菌株によるＰＲＮのこの異例の型の産生は
、パラ百日咳菌と気管支敗血症菌という種に共有される多くの共通する特性を反
映する。異なるＰＲＮを有する百日咳菌臨床単離体の動物モデルでは、表現型お
よび挙動における相違は全く見出されなかった（３）。
【００１２】 当技術には、ボルデテラ属の感染から防御し、ボルデテラ属に感染した対象者
を処置するための免疫原性組成物に用いることができる、ボルデテラ属ペルタク
チンのタンパク質およびポリペプチドを含有する組成物に対する必要性がある。
理想的には、このタンパク質、ポリペプチド、およびこれらをコードしているポ
リヌクレオチドは、ボルデテラ属の感染の診断、およびそのような感染の診断用
キットにも役立つ。
【００１３】 本発明は、当技術におけるこれらの必要性を満たす助けとなる。一実施態様で
は、本発明は、ボルデテラ属のペルタクチンの混合物を含む免疫原性組成物であ
って、該免疫原性組成物を投与された動物に、パラ百日咳菌および気管支敗血症
菌に対する体液性または細胞性免疫応答を誘導するのに充分な量の （ａ）パラ百日咳菌のペルタクチンと、 （ｂ）気管支敗血症菌のペルタクチンと を含む免疫原性組成物を提供する。この免疫原性組成物は、また、該免疫原性組
成物を投与された動物に、百日咳菌に対する体液性または細胞性免疫応答を誘導
するのに充分な量の百日咳菌のペルタクチンも含むことができる。
【００１４】 もう一つの実施態様では、本発明の免疫原性組成物は、ボルデテラ属のペルタ
クチンまたはそのフラグメントの混合物を含む。具体的には、該混合物は、気管
支敗血症菌ペルタクチンの変異型の混合物を含み、この気管支敗血症菌ペルタク
チンの変異型は、それぞれ、その第２領域に６、７、８または９回反復するＰＱ
Ｐアミノ酸配列を含む。この気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型は、該免疫原
性組成物を投与された動物に気管支敗血症菌に対する体液性または細胞性免疫応
答を誘導するのに充分な量で存在する。この免疫原性組成物は、また、該免疫原
性組成物を投与された動物に、パラ百日咳菌または百日咳菌に対する体液性また
は細胞性免疫応答を誘導するのに充分な量の、パラ百日咳菌もしくは百日咳菌の
ペルタクチンまたはそれらの混合物も含むことができる。
【００１５】 本発明のさらに一つの実施態様では、該免疫原性組成物は、ボルデテラ属のペ
ルタクチンまたはそのフラグメントの混合物を含み、この混合物は、気管支敗血
症菌ペルタクチンの変異型の混合物を含み、この気管支敗血症菌ペルタクチンの
変異型は、それぞれ、その第１領域中に１、２または３回反復するＧＧＸＸＰア
ミノ酸配列を含む。この気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型は、該免疫原性組
成物を投与された動物に、気管支敗血症菌に対する体液性または細胞性免疫応答
を誘導するのに充分な量で存在する。この免疫原性組成物は、該免疫原性組成物
を投与された動物に、パラ百日咳菌または百日咳菌に対する体液性または細胞性
免疫応答を誘導するのに充分な量の、パラ百日咳菌もしくは百日咳菌のペルタク
チン、またはそれらの混合物も含むことができる。
【００１６】 本発明の組成物は、ボルデテラ属のペルタクチンのフラグメントの混合物を含
むことができる。該免疫原性組成物は、免疫原性または防御性応答をインビボで
誘導するのに充分な量の本発明の少なくとも１種類のポリペプチドと、そのため
の薬学的に許容され得る担体とを含むこともできる。加えて、該免疫原性組成物
は、中和量の本発明の少なくとも１種類のポリペプチドも含むことができる。
【００１７】 本発明の好適な免疫原性組成物は、気管支敗血症菌の種のペルタクチンまたは
そのフラグメントの混合物を含み、該ペルタクチンまたはそのフラグメントは、
気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型の混合物を含み、その中において、気管支
敗血症菌ペルタクチンの少なくとも一つの変異型が、６、７、８または９回反復
するＰＱＰアミノ酸配列をその第２領域中に有する気管支敗血症菌のペルタクチ
ンの第２領域を含み、気管支敗血症菌ペルタクチンの少なくとももう一つの変異
型が、１、２または３回反復するＧＧＸＸＰアミノ酸配列をその第１領域中に有
する気管支敗血症菌のペルタクチンの第１領域を含む。
【００１８】 もう一つの好適実施態様では、本発明の免疫原性組成物は、 （Ａ）百日咳菌のペルタクチンの、第１領域および第２領域を含むポリペプチド
、または第１領域を含む一つのポリペプチド、および第２領域を含む一つのポリ
ペプチド； （Ｂ）パラ百日咳菌のペルタクチンの、第１領域および第２領域を含むポリペプ
チド、または第１領域を含む一つのポリペプチドおよび第２領域を含む一つのポ
リペプチド； （Ｃ）気管支敗血症菌９．７３株のペルタクチンの、第１領域および第２領域を
含むポリペプチド、または第１領域を含む一つのポリペプチドおよび第２領域を
含む一つのポリペプチド、ならびに気管支敗血症菌ＳＥＩ株のペルタクチンの、
第１領域および第２領域を含むポリペプチド、または第１領域を含む一つのポリ
ペプチドおよび第２領域を含む一つのポリペプチド から本質的になる。
【００１９】 本発明は、本発明のタンパク質およびポリペプチドをコードしているポリヌク
レオチド、ならびに該タンパク質およびポリペプチドを認識する抗体も提供する
。また、本発明による少なくとも一つのポリヌクレオチド、またはそのフラグメ
ントを含むＤＮＡチップ、あるいは、それぞれ、請求項２８〜３１に記載のポリ
ヌクレオチドまたはそのフラグメントの複数の複製物を担持するマイクロビーズ
を含み、該ポリヌクレオチドまたはそのフラグメントがビーズごとに互いに異な
る、マイクロアレーも提供する。
【００２０】 該抗体は、モノクローナルまたはポリクローナル抗体であることができる。モ
ノクローナル抗体は、ボルデテラ属の感染を処置するのに用いることができる。
また、本発明のタンパク質またはポリペプチドと、該タンパク質またはポリペプ
チドを特異的に認識する抗体とを含む免疫学的複合体も提供される。
【００２１】 さらに、本発明は、ボルデテラ属による感染を検出する方法を提供する。該方
法は、ボルデテラ属に感染していると推測される生物学的材料を含む組成物を提
供する工程と、本発明のタンパク質またはポリペプチドの存在について検定する
工程とを含む。該ポリペプチドは、たとえば、該ポリペプチドとの免疫学的反応
性を有する抗体による電気泳動または免疫アッセイによって検定することができ
る。
【００２２】 該方法は、生物学的流体中の抗原および抗体が、抗原抗体複合体を形成するの
に充分な時間かつ条件で、該抗原を該生物学的流体に接触させる工程と、該複合
体の形成を検出する工程とも含む。該方法は、場合により、該抗原抗体複合体の
形成を測定する工程を包含することができる。好適実施態様では、該抗原抗体複
合体の形成を、ウエスタンブロット手法、ＥＬＩＳＡ、間接免疫蛍光アッセイま
たは免疫沈降アッセイに基づく免疫アッセイによって検出する。
【００２３】 さらに、本発明は、本発明のタンパク質もしくはポリペプチド、またはそれら
の混合物と結合する、抗体の存否を検出するための診断キットを提供する。該キ
ットは、該タンパク質もしくはポリペプチド、またはタンパク質およびポリペプ
チドの混合物を含む抗原と、該抗原と抗体間の免疫複合体の形成を検出するため
の手段とを含むことができる。該手段は、該検出を実施するのに充分な量で存在
する。
【００２４】 ボルデテラ属の存否を検出するための、本発明のもう一つの方法は、 （１）ボルデテラ属の遺伝学的材料を含有すると推測されるサンプルを、少なく
とも１種類のヌクレオチドプローブに接触させる工程と、 （２）該ヌクレオチドプローブと、サンプル中の遺伝学的材料との間のハイブリ
ダイゼーションを検出する工程と を含む。該ヌクレオチドプローブは、本発明のポリヌクレオチド配列と相補的で
ある。
【００２５】 本発明を、図面を参照して、さらに詳しく説明する。従来、ペルタクチンファ
ミリーの種特異的なメンバーは、外膜タンパク質（ＯＭＰ）であることが立証さ
れている。気管支敗血症菌では、ペルタクチンは、ｐｍ遺伝子の産物であり、６
８kDaのＭrのタンパク質として（Ｐ．６８）、百日咳菌では６９kDaのＭrのタン
パク質として（Ｐ．６９）、パラ百日咳菌では７０kDaのＭrのタンパク質として
（Ｐ．７０）表される。これら３種のペルタクチンのヌクレオチド配列は、添付
の配列表に、それぞれ配列番号１、配列番号２および配列番号３として包含され
る。これらのヌクレオチド配列によってコードされる、対応するアミノ酸配列は
、配列表に、それぞれ配列番号４、配列番号５および配列番号６として包含され
る。
【００２６】 Ｐ．６８、Ｐ．６９およびＰ．７０のタンパク質に対して推定されるタンパク
質配列の比較から、該タンパク質間の高度の相同性が立証される。Ｐ．６８とＰ
．７０とのタンパク質間の比較は、１７ヵ所にすぎないアミノ酸の相違を示すの
に対して、Ｐ．６８とＰ．６９との間の同様の比較は８０ヵ所の相違を、またＰ
．６９とＰ．７０との間の比較は７９ヵ所の相違を示す。この三つの推定される
タンパク質配列間のアミノ酸の相違の大部分は、３タンパク質すべてに存在する
反復する配列の２つのファミリー中の反復単位の数に出現する。Ｐ．６８は、Gl
y−Gly−Xaa−Xaa−Proの反復（すなわち、図１ｂのＧＧＸＸＰ）の３つの複製
を有するのに対して、Ｐ．７０は４つの複製、Ｐ．６９は５つの複製を有する。
同様に、Ｐ．６８は、７つのPro−Gln−Proの反復（すなわち、図１ｃのＰＱＰ
）を、Ｐ．７０は９つの、Ｐ．６９は５つ有する。
【００２７】 最近、百日咳菌の臨床単離体が産生するＰＲＮは、多様であることが示されて
いる。様々な臨床単離体のｐｒｎ遺伝子の配列から、ＰＲＮ変異型の主要な３型
が明らかにされた。オランダにおける流行は、ＰＲＮおよびＰＴをコードしてい
る遺伝子の配列の変化から生じることが示唆されているが、それは、現在流行し
ている様々な臨床単離体中に存在するタンパク質は、この国で用いられるワクチ
ン株によって観察されるものとは配列が異なるからである。
【００２８】 研究者の、本発明へと導いた目的は、百日咳菌で観察されたＰＲＮ多型が、パ
ラ百日咳菌および気管支敗血症菌にも出現するか否かを解析することであった。
ヒト起源のパラ百日咳菌の１０種類の単離体、および動物またはヒト起源の気管
支敗血症菌の４０種類の単離体のｐｒｎ遺伝子の２つの反復領域を、配列決定し
、比較した（図１ａ）。
【００２９】 表Ｉは、本発明に用いた単離体、および対応するペルタクチンの型のリストを
示す。
【００３０】
【表１】
【００３１】 本発明を実施するには、以前に記載したとおり、ＤＮＡを抽出し、ＰＣＲによ
って増幅し、配列決定した（３）。増幅されたＰＣＲ産物は、ＥＳＧＳ社（ESGS
, Cybergene group, Evry、フランス国）が精製かつ配列決定した。推定される
アミノ酸配列は、ＧＣＧソフトウエア（Wisconsin Packageバージョン９．１、G
enetics Computer Group, Madison, WI、米国）で解析した。第１および第２領
域の推定アミノ酸配列を比較し、アミノ酸配列のマルチプルアライメントを、Ｇ
ＣＧのCLUSTAL Wプログラム（１０）により、各領域について創出した（図１ｂ
、ｃ）。
【００３２】 パラ百日咳菌の１０単離体が産生したＰＲＮの第１および第２領域の配列、お
よび刊行された配列（１５）の間には、相違が全く見出されなかった。しかし、
解析された気管支敗血症菌の４０個のｐｒｎ遺伝子間には、３種類の異なる型が
見出されて、第１領域の反復の回数（１〜３回）に相違があった（図１ｂ）。最
大の群は、反復配列の３つの複製を有する配列に対応し、以前に報告された配列
と同一であった（１４）。変異のパターンと単離体の起源との間には、相関関係
が全く見出されなかった。
【００３３】 気管支敗血症菌ＰＲＮの第二の反復領域には、高度の可変性が観察された（図
１ｃ）。９種類の変異型が観察された。これら９変異型の間では、反復の回数は
、６〜９回である。
【００３４】 百日咳菌の変異型と同じパターンを示す気管支敗血症菌の変異型は、皆無であ
った。さらに、第１領域の一つの型と第２領域の一つの型との間の独自の関連性
は、全く観察されなかった。百日咳菌、気管支敗血症菌およびパラ百日咳菌の間
の中間体であると見なされる、１８３２３株およびＣＺ単離体のそれに類似する
パターンは、３種のいずれにおいても観察されなかった（３）。これらのデータ
は、百日咳菌のｐｒｎ遺伝子より、互いに類似しているパラ百日咳菌および気管
支敗血症菌のｐｒｎ遺伝子と整合する（１）。ＰＲＮの型に関しては、宿主特異
性は、全く観察されなかった。
【００３５】 第２領域は、防御免疫の誘導に重要な役割を果たすことが示されている（６）
。百日咳菌、パラ百日咳菌および気管支敗血症菌からのＰＲＮの間の交差防御の
欠如は、これらのタンパク質間の大きい相違がこの領域で生じることから、この
ことと整合する。百日咳菌単離体が産生するＰＲＮについては、この領域での変
異は全く観察されなかった。これらのデータは、３０年間の予防接種が、一つの
免疫優性反復領域には変異を誘導したが、防御免疫の誘導に最も関与する領域に
は変異を誘導しなかったらしいことを示唆する。百日咳菌ＰＲＮの第２領域での
変異は、百日咳菌ワクチンの薬効の低下を示す可能性がある。
【００３６】 対照的に、気管支敗血症菌のＰＲＮの分析からは、両領域での多型が示された
。これは、気管支敗血症菌ワクチンが永続的な防御を誘導できないことを説明し
得る。この多型は、気管支敗血症菌が慢性的感染を誘導できることにも関連し得
る（７、８、２２）。それは、この細菌が宿主の免疫応答を免れるための手段を
与える可能性がある。
【００３７】 これらの実験および観察から帰結された本発明は、そのため、一定のボルデテ
ラ属のペルタクチンおよびそのフラグメントを含有する組成物を含む。これらの
ペルタクチンおよびペルタクチンフラグメントは、これらをコードしているポリ
ヌクレオチドとともに、免疫原性組成物に、かつ診断上の用途に役立つ。
【００３８】 特に、本発明は、気管支敗血症菌の完全長ペルタクチンの異なる種、すなわち
、その第２領域に６、７、８または９回反復するＰＱＰアミノ酸配列を含む種、
およびその第１領域に１，２または３回反復するＧＧＸＸＰアミノ酸配列（ここ
で、ＸＸは、ＦＤ、ＦＧまたはＡＶであることができる）を含む、気管支敗血症
菌の完全長ペルタクチンの種が存在することの発見の結果である。したがって、
これらの完全長ペルタクチン、およびこれらの反復配列のいかなる組合せでのペ
ルタクチンの混合物も、本発明によって提供される。
【００３９】 本明細書に用いられる限りで、表現「気管支敗血症菌のペルタクチン」とは、
病原因子であり、約６８kDaの見かけ分子量を有し、気管支敗血症菌ペルタクチ
ンの第１および第２領域として知られる二つの領域を含む、気管支敗血症菌の外
膜タンパク質を意味する。異なるボルデテラ属菌株のペルタクチンの第１および
第２領域は、配列番号１〜６ではかっこ内に特定される。気管支敗血症菌株の異
なる単離体のペルタクチンは、たとえば、第１領域、第２領域、または第１およ
び第２領域の双方はもとより、他の領域でも、互いに異なるアミノ酸配列を有し
てもよい。
【００４０】 本明細書に用いられる限りで、表現「気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型」
とは、気管支敗血症菌のペルタクチン、または気管支敗血症菌ペルタクチンの、
少なくとも第１領域、第２領域、または第１および第２領域の双方を有するフラ
グメントであって、この気管支敗血症菌のペルタクチンまたはそのフラグメント
が、少なくとも第１領域、第２領域、または第１および第２領域の双方で、その
それぞれのアミノ酸配列において互いに異なるものを意味する。下記の独特の気
管支敗血症菌ペルタクチン変異型が、発見され、本発明の一部を構成している。
【００４１】 本明細書に用いられる限りで、表現「気管支敗血症菌ペルタクチンのフラグメ
ント」、「パラ百日咳菌ペルタクチンのフラグメント」および「百日咳菌ペルタ
クチンのフラグメント」とは、完全長ペルタクチンタンパク質の部分であり、ボ
ルデテラ属の感染に対する体液性または免疫応答を誘導できるポリペプチドを意
味する。
【００４２】
【表２】
【００４３】 特定の実施態様では、本発明は、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列
番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番
号１９、配列番号２０、配列番号２１および配列番号２２からなる群より選ばれ
る配列、もしくは該配列のフラグメントを含むポリペプチドを包含する。該ポリ
ペプチドは、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１４、配列番号１
５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０
、配列番号２１もしくは配列番号２２またはそのフラグメント中のアミノ酸から
なることができる。本発明は、これらのポリペプチドの一つをコードしているポ
リヌクレオチド、および該ポリヌクレオチド、または少なくともそのうち１５個
のヌクレオチドと、中程度のか、もしくは高い緊縮度の条件下でハイブリダイズ
する、精製されたＤＮＡまたはＲＮＡも包含する。
【００４４】 本明細書に用いられる限りで、表現「気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型の
混合物」とは、固体、液体、乳濁液または懸濁液形態での混合物をなす、気管支
敗血症菌ペルタクチンの２もしくは３種類の変異型を意味する。該混合物中の気
管支敗血症菌ペルタクチンの少なくとも２種類の変異型は、当然、少なくとも第
１領域、第２領域、または第１および第２領域の双方で、そのそれぞれのアミノ
酸配列において互いに異なる。
【００４５】 本発明が、その第２領域に６、７、８もしくは９回反復するＰＱＰアミノ酸配
列、またはその第１領域に１、２または３回反復するＧＧＸＸＰアミノ酸配列を
含む、気管支敗血症菌ペルタクチンのポリペプチドフラグメントを提供すること
は、直ちに明白である。反復配列のいかなる組合せでの、これらのポリペプチド
フラグメントの混合物も、本発明の対象範囲内にある。
【００４６】 本発明のポリペプチドフラグメントが気管支敗血症菌ペルタクチンの第１領域
のみを含むとき、該ポリペプチドフラグメントは、典型的には、第１領域の反復
配列を包含する、少なくとも約４６〜約５６個のアミノ酸を含む。本発明のポリ
ペプチドフラグメントが第２領域のみを含むとき、該ポリペプチドフラグメント
は、典型的には、第２領域の反復配列を包含する、少なくとも約４８〜約６０個
のアミノ酸を含む。本発明のポリペプチドフラグメントが気管支敗血症菌の第１
および第２領域の双方を含むとき、該フラグメントは、典型的には、第１および
第２領域の反復配列を包含する、少なくとも約９０６〜約９２８個のアミノ酸を
含む。
【００４７】 したがって、例示的な一実施態様では、本発明は、気管支敗血症菌ペルタクチ
ンの変異型の混合物を含む組成物であって、該気管支敗血症菌ペルタクチンの変
異型が、それぞれ、気管支敗血症菌ペルタクチンの第２領域を含み、さらに該気
管支敗血症菌ペルタクチンの変異型が、それぞれ、その第２領域に６、７、８ま
たは９回反復するＰＱＰアミノ酸配列を含み、該気管支敗血症菌ペルタクチンの
変異型が、それに含まれる該ＰＱＰ反復アミノ酸配列の数において異なる、組成
物を提供する。該組成物は、また、パラ百日咳菌もしくは百日咳菌のペルタクチ
ン、またはその混合物も含むことができる。該ポリペプチドは、完全長ペルタク
チンまたはそのフラグメントであることができる。
【００４８】 もう一つの実施態様では、本発明は、気管支敗血症菌のペルタクチンの変異型
の混合物を含む組成物であって、該気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型が、そ
れぞれ、気管支敗血症菌ペルタクチンの第１領域を含み、さらに、該気管支敗血
症菌ペルタクチンの変異型が、それぞれ、その第１領域に１、２または３個のＧ
ＧＸＸＰという反復アミノ酸配列を含み、該気管支敗血症菌ペルタクチンの少な
くとも２種類の変異型が、それに含まれる該ＧＧＸＸＰという反復アミノ酸配列
の数において異なる組成物を提供する。この組成物は、また、パラ百日咳菌もし
くは百日咳菌のペルタクチン、またはその混合物も含むことができる。該気管支
敗血症菌ペルタクチンの変異型は、完全長またはフラグメントであることができ
る。
【００４９】 さらに一つの実施態様では、本発明は、気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型
の混合物を含む免疫原性組成物であって、該気管支敗血症菌ペルタクチンの変異
型の一つが、その第２領域に６、７、８または９回反復するＰＱＰアミノ酸配列
を有する気管支敗血症菌のペルタクチンの第２領域を含み、該気管支敗血症菌ペ
ルタクチンの変異型のもう一つが、その第１領域に１、２または３回反復するＧ
ＧＸＸＰアミノ酸配列を有する、気管支敗血症菌のペルタクチンの第１領域を含
む組成物を提供する。この組成物は、また、パラ百日咳菌もしくは百日咳菌のペ
ルタクチン、またはその混合物も含むことができる。該気管支敗血症菌ペルタク
チンの変異型は、完全長ペルタクチンまたはそのフラグメントであることができ
る。
【００５０】 好適実施態様では、本発明は、配列番号７、配列番号８および配列番号９から
なる群より選ばれる配列を含むポリペプチドを提供する。
【００５１】 もう一つの好適実施態様では、本発明は、配列番号１４、配列番号１５、配列
番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番
号２１および配列番号２２からなる群より選ばれる配列を含むポリペプチドを提
供する。
【００５２】 本発明による組成物は、体液性免疫応答および細胞性免疫応答を生じる。気管
支敗血症菌に感染した後は、百日咳菌およびパラ百日咳菌による感染の場合のよ
うに、体液性免疫および細胞性免疫の誘導が存在する。さらに、本発明の組成物
によるワクチン接種の後は、感染または再感染後に誘導されるのと類似の、体液
性および細胞性の種類の免疫の誘導が存在する。
【００５３】 本発明の一実施態様では、本発明の免疫原性組成物を有効成分として、薬学的
に許容され得る賦形剤、および適切な場合はアジュバントと組み合わせて含む、
ワクチン接種用組成物が提供される。
【００５４】 市場で現在入手できる百日咳ワクチンと同様に、本発明による免疫原性組成物
は、その他のワクチン接種用有効成分、たとえば、ジフテリア、ポリオ、もしく
はヘモフィルス属によって生じる疾病に対するワクチンのそれとか、または一般
的に述べると、いかなる免疫原成分、たとえば特に不活性化された病原性作用因
子もしくは毒素と組み合わせてもよい。
【００５５】 本発明によるワクチン接種用組成物は、種特異的であり、その結果、百日咳菌
もしくはパラ百日咳菌または気管支敗血症菌に対する防御を誘導可能であること
ができる。これに代えて、それは、上に定義されたとおりの気管支敗血症菌に対
する免疫原性組成物、およびパラ百日咳菌および／または百日咳菌に対する免疫
原性組成物を有効成分として含む混合物であることができる。
【００５６】 分子生物学における最近の手法の結果として、百日咳菌の病原性に関与する数
多くの因子が、特徴付けられていて、それらの発現の調節が理解されている。こ
れらの因子は、二つの範疇、すなわち、感染性症候群に関与するもの（アドへシ
ン）と、毒素誘導症候群に役割を果たすもの（毒素）とに分類し得る。ボルデテ
ラ属に関連するアドへシンおよび毒素は、本発明の組成物に含ませることができ
る。アドへシンの例は、
【００５７】 線毛上皮への細菌の付着に大きな役割を演じると考えられる、繊維状血球凝集
素またはＦＨＡ；
【００５８】 菌株が血清型に分類されるのを可能にする、百日咳菌の２種類の凝集原または
ＡＧＧ；および
【００５９】 その細胞病原性効果に加えて、そのＢサブユニットを介して付着に関与する分
泌型Ａ−Ｂ毒素である、百日咳菌毒素またはＰＴＸ である。
【００６０】 本発明に用いるための毒素の例は、 分泌される、百日咳菌毒素またはＰＴＸ；
【００６１】 作用が未だ充分に特徴付けられていない、皮膚壊死性毒素またはＤＮＴ、およ
び細菌のプロテオグリカンに由来する、ムラミルペプチドファミリーの、分泌さ
れる低分子糖タンパク質であって、宿主の呼吸系装置の線毛細胞を破壊するよう
、協力して作用すると思われる、気管細胞毒素またはＴＣＴ；
【００６２】 アデニル酸シクラーゼ活性と溶血活性とを有する二機能性タンパク質であって
、「毒素中の反復」を意味する「ＲＴＸ」と呼ばれる毒素のファミリーに属する
ことが見出された、アデニル酸シクラーゼ−溶血素またはＡｃ−Ｈｌｙ； である。
【００６３】 同様に、パラ百日咳菌および気管支敗血症菌の病原性に関与する因子が、特定
されていて、本発明の組成物に含ませることができる。
【００６４】 刊行された結果は、試験された一価（ＰＴＸ）、二価（ＰＴＸ、ＦＨＡ）、三
価（ＰＴＸ、ＦＨＡ、ＰＲＮ）、または五価（ＰＴＸ、ＦＨＡ、ＰＲＮ、ＡＧＧ
２、ＡＧＧ３）の非細胞性ワクチンは、非常に僅かな副作用を誘導するにすぎず
、すべて免疫原性であり、かつすべてが該疾病に対して、７０％より高いか、ま
たは等しい薬効（ＷＨＯの定義による）を有する。本発明の組成物は、これらの
ワクチンその他の非細胞性ワクチンに含ませることができる。たとえば、該免疫
原性組成物は、ＦＨＡ、ＡＧＧ２、ＡＧＧ３からなる群から選ばれる、ボルデテ
ラ属の少なくとも１種類のアドへシン、ならびに／またはＰＴＸ、ＤＮＴ、ＴＣ
ＴおよびＡｃ−Ｈｌｙからなる群から選ばれる、ボルデテラ属の少なくとも１種
類の毒素をさらに含むことができる。
【００６５】 本発明のタンパク質、ポリペプチドおよび組成物は、精製された形態をなすこ
とができる。用語「精製（された）」は、本明細書に用いられる限りで、ペルタ
クチンまたはそのフラグメントが、たとえば、宿主の組換え細胞培地中の精製生
成物としてか、または組換えではない供給源からの精製生成物として、他のタン
パク質またはポリペプチドとの結合を本質的に含まないことを意味する。本明細
書に用いられる限りでの用語「実質的に精製された」とは、ペルタクチンまたは
そのフラグメントを含有し、特異的な抗体を用いて除去できる既知のタンパク質
の存在以外は、他のタンパク質またはポリペプチドとの結合を本質的に含まず、
その実質的に精製されたペルタクチンというポリペプチドを抗原として用いるこ
とができる、混合物を意味する。
【００６６】 本発明の態様の範囲内で、ペルタクチンおよびそのフラグメントは、ペルタク
チンというポリペプチドに特異的に結合する抗体を調製するのに利用することが
できる。用語「抗体」とは、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、それら
のフラグメント、たとえばＦ（ａｂ′）およびＦａｂフラグメントはもとより、
組換えによって産生された結合パートナー（binding partner）も包含すること
を意味する。抗体は、ペルタクチンおよびそのフラグメントに、約１０7M-1より
大きいか、または等しいＫaで結合するならは、特異的に結合していると定義さ
れる。結合パートナーまたは抗体の親和性は、慣用の手法、たとえばScatchard
ら［Ann. N.Y. Acad., 51:660 (1949)］が、記載したものを用いて、容易に決定
することができる。ポリクローナル抗体は、様々な供給源、たとえばウマ、ウシ
、ヤギ、ヒツジ、イヌ、ニワトリ、ウサギ、マウスまたはラットから、当技術分
野において周知である手順を用いて容易に産生することができる。
【００６７】 本発明は、さらに、単離されたフラグメントおよびオリゴヌクレオチドであっ
て、その第２領域において６、７、８もしくは９回反復するＰＱＰアミノ酸配列
、および／またはその第１領域において１、２もしくは３回反復するＧＧＸＸＰ
アミノ酸配列をコード化している、気管支敗血症菌、百日咳菌およびパラ百日咳
菌のペルタクチンのヌクレオチド配列（配列番号１、配列番号２および配列番号
３）から誘導された、フラグメントおよびオリゴヌクレオチドを包含する。本発
明は、これらのフラグメントおよびオリゴヌクレオチドがコードしているポリペ
プチドも包含する。混合物は、該混合物中の実体が、それぞれ、独立して、本発
明のポリヌクレオチドから選ばれる、反復配列を含むヌクレオチド配列も包含す
ることができる。
【００６８】 本発明の範囲内の核酸配列は、本明細書に開示された未変性のペルタクチン核
酸と、中程度のか、または厳しい緊縮度の条件下でハイブリダイズし、ペルタク
チンというポリペプチドをコードしている、単離されたＤＮＡおよびＲＮＡ配列
を包含する。本明細書に用いられる限りで、中程度の緊縮度の条件は、当業者に
は公知であり、Sambrookら［Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2 ed.,
Vol. 1, pp. 1.101-104, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)］によ
って定義されたとおり、５×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ、１．０mMＥＤＴＡ（pH８
．０）のニトロセルロースフィルター用予洗液、５０％ホルムアミド、６×ＳＳ
Ｃ、４２℃のハイブリダイゼーション条件（または他の類似のハイブリダイゼー
ション液、たとえば５０％ホルムアミド中のスタークス液、４２℃）、および０
．５×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ、約６０℃の洗浄条件の使用を包含する。高い緊
縮度の条件は、上記のとおりであり、かつ６８℃、０．２×ＳＳＣ、０．１％Ｓ
ＤＳでの洗浄を伴うハイブリダイゼーション条件として定義される。当業者は、
温度および洗浄液の塩濃度は、プローブの長さのような因子に応じて必要なとお
りに調整できる。
【００６９】 一つより多くのコドンが同じアミノ酸をコードすることができる、遺伝暗号の
公知の縮重のため、ＤＮＡ配列は、異なりながらも、配列番号７〜配列番号２４
のアミノ酸配列を有するペルタクチンポリペプチドをコードすることができる。
そのような変異型ＤＮＡ配列は、サイレント突然変異（たとえばＰＣＲ増幅の際
に生じる）の結果として生じることができるか、または未変性配列の計画的な突
然変異誘発の産物であることができる。
【００７０】 したがって、本発明は、 （ａ）未変性ペルタクチン遺伝子のコーディング領域に由来するＤＮＡ； （ｂ）配列番号７〜配列番号２４のヌクレオチド配列を含むｃＤＮＡ； （ｃ）中程度の緊縮度の条件下で（ａ）のＤＮＡとハイブリダイズすることがで
き、そしてペルタクチンポリペプチドをコードしているＤＮＡ；および （ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）に定義されたＤＮＡに対する遺伝暗号の結果
として縮重し、そしてペルタクチンポリペプチドをコードしているＤＮＡ から選ばれる、ペルタクチンポリペプチドをコードしている、等価の単離ＤＮＡ
配列を提供する。そのようなＤＮＡ等価配列がコードしているペルタクチンポリ
ペプチドは、本発明に包含される。
【００７１】 本発明は、単離または精製された形態での、前記のタンパク質およびポリペプ
チドを、本明細書に記載された手法を用いて得られたと、他の方法を用いて得ら
れたとを問わず包含するよう意図されていることが理解される。本発明の好適実
施態様では、該ペルタクチンポリペプチドは、ヒトその他の動物の組織、および
ヒトその他の動物の組織成分、核酸、外来タンパク質および脂質、外来性の微生
物、たとえば細菌およびウイルスを実質的に含まない。本発明は、実質的に同じ
生物学的および免疫原性特性有する等価のタンパク質を包含することも理解され
る。したがって、本発明は、本発明のポリペプチドの血清型上の変異型を網羅す
る。
【００７２】 本発明のペルタクチンポリペプチドを利用する用途に応じて、それらを標識化
することが望ましい場合がある。適切な標識の例は、放射性標識、酵素的標識、
蛍光性標識、化学発光性標識および発色団である。標識化の方法は、免疫グロブ
リンを標識化するのに広く用いられるものと本質的に異ならない。標識化する必
要性は、本発明の抗原に対する標識化抗体、または間接的マーカーとしての抗原
に対する抗体に対する抗免疫グロブリンを用いることによって回避してもよい。
【００７３】 本発明のペルタクチンポリペプチドが得られたならば、それらは、それらとの
反応性を有するポリクローナルおよびモノクローナル抗体を生成するのに用いる
ことができる。したがって、本発明のタンパク質またはポリペプチドは、当該技
術分野に公知の手法によって、動物である宿主を感作するのに用いることができ
る。そのような手法は、通常、接種を伴うが、その他の投与方式を伴ってもよい
。充分量のタンパク質またはポリペプチドを投与して、免疫原性応答を動物宿主
に生じさせる。本発明の抗原に対する抗体を生成する、いかなる宿主を用いるこ
ともできる。動物を感作し、それが抗原に対する抗体の生成を開始するのに充分
な時間が経過したならば、ポリクローナル抗体を回収することができる。一般的
な方法は、この動物から血液を取り出し、該血液から血清を分離することを含む
。該抗原に対する抗体を含有するこの血清は、該抗原に対する抗血清として用い
ることができる。これに代えて、抗体を血清から回収することもできる。アフィ
ニティー精製は、抗原に対する精製抗体を血清から回収するのに好適な手法であ
る。
【００７４】 本発明の抗原に対するモノクローナル抗体も調製することができる。抗原と反
応するモノクローナル抗体を生成する一つの方法は、宿主を抗原で感作する工程
と；該宿主の脾臓から抗体産生細胞を回収する工程と；該抗体産生細胞をヒポキ
サンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼという酵素を欠く骨髄腫
細胞と融合させて、ハイブリドーマを形成する工程と；ヒポキサンチン、アミノ
プテリンおよびチミジンを含む培地での増殖によって、少なくとも一つのハイブ
リドーマを選別する工程と；該抗原に対する抗体を産生する少なくとも一つのハ
イブリドーマを特定し、特定されたハイブリドーマを培養して、回収できる量の
抗体を産生させる工程と；培養されたハイブリドーマが産生した抗体を回収する
工程とを含む。
【００７５】 これらのポリクローナルまたはモノクローナル抗体は、様々な用途に用いるこ
とができる。とりわけ、対応するタンパク質の中和がある。それらは、生物学的
調製品中のボルデテラ属の抗原を検出するためにか、またはたとえばアフィニテ
ィークロマトグラフィー用カラムに用いたときに、対応するタンパク質、糖タン
パク質もしくはそれらの混合物を精製するのに用いることもできる。
【００７６】 本発明のペルタクチンポリペプチドは、材料中のボルデテラ属に対する抗体を
特定し、これらの材料中の抗体の濃度を決定するための抗原として用いることが
できる。したがって、該抗原は、材料中のボルデテラ属の定性的または定量的測
定に用いることができる。そのような材料は、当然、ヒトその他の動物組織、お
よびヒトその他の動物細胞はもとより、生物学的流体、たとえば、ヒトの血清を
はじめとする、ヒトその他の動物体液を包含する。ボルデテラ属に対する抗体の
存在または濃度を決定するための免疫アッセイにおける試薬として用いられたと
き、本発明の抗原は、簡便、迅速、鋭敏かつ特異的であるアッセイを提供する。
【００７７】 より詳しくは、本発明の抗原は、流体中の体液性成分を検出または定量する際
の周知の使用である、免疫アッセイの手段によって、ボルデテラ属を検出するの
に用いることができる。したがって、二次反応、たとえば沈降または凝集によっ
て、抗原抗体相互作用を直接観察または決定することができる。加えて、免疫電
気泳動の手法を用いることもできる。たとえば、寒天中で電気泳動を実施した後
に、抗血清と反応させる古典的な組合せはもとより、二次元電気泳動、ロケット
電気泳動、およびポリアクリルアミドゲルパターンの免疫標識化（ウエスタンブ
ロット分析または免疫ブロット分析）も利用することができる。本発明の抗原を
用いることができる、その他の免疫アッセイは、放射性免疫アッセイ、競合免疫
沈降アッセイ、酵素免疫アッセイおよび免疫蛍光アッセイを包含するが、これら
に限定されない。濁度測定、比色分析および比濁分析の手法を用い得ることが理
解される。ウエスタンブロット分析手法に基づく免疫アッセイが好ましい。
【００７８】 免疫アッセイは、本発明の抗原、または該抗原に対する本発明の抗体のいずれ
かの、免疫試薬の一つを、試薬の免疫活性を保持しつつ、担体表面に固定化する
ことによって実施することができる。相反性の免疫試薬は、標識化されないか、
または免疫反応性も保持されるようにして標識化することができる。これらの手
法は、酵素免疫アッセイ、たとえば酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）お
よび競合阻害酵素免疫アッセイ（ＣＩＥＩＡ）に用いるのに特に適する。
【００７９】 本発明の抗原、または該抗原に対する抗体のいずれかを、固体支持体に固着さ
せるときは、該支持体は、通常、ガラスまたはプラスチック材料である。平板、
管状、ビーズ状または円板の形態に成形されたプラスチック材料が好ましい。適
切なプラスチック材料の例は、ポリスチレンおよびポリ塩化ビニルである。免疫
試薬が固体支持体に容易に結合しないならば、試薬と支持体との間に、担体材料
を挿入することができる。適切な担体材料の例は、タンパク質、たとえばウシ血
清アルブミン、化学的試薬、たとえばグルタルアルデヒドまたは尿素である。固
相のコーティングは、慣用の手法を用いて実施することができる。
【００８０】 本発明は、免疫原性ペルタクチンポリペプチド、およびより詳細には、ボルデ
テラ属に対するワクチン組成物の製造に用いるための防御性ポリペプチドを提供
する。したがって、これらのポリペプチドは、ボルデテラ属の感染に犯され易い
哺乳動物に該ポリペプチドを投与することによって、ワクチンとして用いること
ができる。慣用の投与方式が使用できる。たとえば、投与は、経口的、呼吸器ま
たは非経口的経路によって実施することができる。皮内、皮下および筋内の投与
経路は、ワクチンを非経口的に投与するときに好ましい。
【００８１】 ボルデテラ属に感染した哺乳動物における免疫応答の主な目的は、ボルデテラ
属を不活性化し、感染性のウイルスを放出する可能性を有する、ボルデテラ属感
染細胞を排除することである。免疫応答のＢ細胞分枝が、ボルデテラ属の不活性
化の主要な責務を有する。これが達成される第一の方式は、感染性の中和による
。ボルデテラ属感染細胞の破壊のためのもう一つの主要な機構は、細胞表面のク
ラスＩ組織適合性抗原と組み合わせて発現される、ペルタクチン抗原を認識する
細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）によって与えられる。ＣＴＬは、たとえば感染細
胞によって、産生されたか、または食細胞によって取り込まれたペルタクチンと
いうタンパク質から細胞内でプロセシングされた、ペルタクチンポリペプチドを
認識する。したがって、本発明は、ペルタクチンポリペプチドに対するＢ細胞の
応答、ならびに感染後のＣＴＬの応答によって媒介される免疫を刺激するのに用
いることができる。ＣＴＬ応答は、ボルデテラ属初感染からの快復を媒介し、そ
の後の感染の際の回復を加速するのに重要な役割を果たすことができる。
【００８２】 本発明のペルタクチンポリペプチドおよびワクチンが防御レベルの中和抗体を
宿主に誘導できる能力は、アジュバントで乳化すること、リポソームに組み込む
こと、適切な担体に結合すること、またはこれらの手法の組合せによって増強す
ることができる。たとえば、本発明のペルタクチンポリペプチドは、宿主におけ
る体液性または細胞性免疫応答を強化するのに充分な量の、慣用のアジュバント
、たとえばリン酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウムのゲルとともに投与す
ることができる。同様に、ペルタクチンポリペプチドは、脂質膜と結合させるか
、または脂質膜に組み込んで、リポソームを形成することができる。核酸その他
の外来物質を含まない非発熱性脂質の使用を、この目的に採用することができる
。
【００８３】 感作のスケジュールは、いくつかの因子、たとえば、感染に対する宿主の感受
性、および宿主の年齢に依存する。本発明のワクチンの単回用量を、宿主に投与
することができるか、または感作の初期経過の後に、時間的間隔を置いて、数回
投与することができる。ブースターとして用いられる、その後の投与は、初期経
過の後に必要されるとおりに投与することができる。
【００８４】 本発明のペルタクチンのタンパク質、ポリペプチドおよびワクチンは、ボルデ
テラ属の感染、またはインビボでの複製を予防または阻害するのに充分な量で、
宿主に投与することができる。いかなる事態でも、投与される量は、たとえボル
デテラ属の感染を完全に防止し得ないとしても、実質的な免疫抑制に対して宿主
を防御するのに少なくとも充分でなければならない。免疫原性応答は、本発明の
タンパク質またはポリペプチドを、ある量、たとえば体重１kgあたり抗原約１〜
約５０μg、好ましくは体重１kgあたり抗原約５〜約１０mgで宿主に投与するこ
とによって得ることができる。本発明のタンパク質、ポリペプチドおよびワクチ
ンは、生理学的に許容され得る担体とともに投与することができる。たとえば、
希釈剤、たとえば水または生理食塩水を用いることができる。
【００８５】 本発明のもう一つの態様は、ペルタクチンポリペプチドをコードしている核酸
、タンパク質およびポリペプチドそれ自体のいかなる組合せをも、担体分子とと
もにか、またはそれなしに個体に投与することを包含する。該個体は、動物であ
ることができる。本明細書に用いられる限りで、用語「動物」とは、哺乳動物を
意味し、好ましくは、該哺乳動物は、ヒト、ウサギ、マウス、イヌ、ネコ、ウシ
、ブタおよびウマからなる群より選ばれる。特に好適な実施態様では、該哺乳動
物はヒトである。
【００８６】 処置方法は、ペルタクチンタンパク質またはポリペプチドを含む免疫原性組成
物ばかりでなく、ペルタクチンタンパク質またはポリペプチドをコードしている
核酸を含む組成物の投与も包含する。当業者は、核酸ワクチン（たとえばＤＮＡ
ワクチン）および核酸ワクチン技術はもとより、タンパク質およびポリペプチド
に基づく技術の概念、適用および有効性も認識している。核酸に基づく技術は、
ペルタクチンポリペプチドをコードしている、裸であるか、またはカプセル封入
された、核酸を、コードされているタンパク質の投与前の生成を必要とせずに組
織および細胞に直接投与することを可能にする。この技術は、これらの核酸が受
容生物の細胞によって取り込まれ、発現され、受容体の免疫系が応答する免疫原
性決定基を生成できる能力に基づく。典型的には、発現された抗原は、核酸を取
り込み、そして発現させた、細胞の表面に表示されるが、コードされた抗原の発
現および受容個体の循環系内への輸送も、本発明の範囲内にある。そのような核
酸ワクチン技術は、裸のＤＮＡおよびＲＮＡの送達、ならびにペルタクチンポリ
ペプチドをコードしている発現ベクターの送達を包含するが、これらに限定され
ない。この技術は、「ワクチン」と呼ばれてはいるが、防御応答につながらない
免疫原性組成物にも等しく適用可能である。そのような非防御誘導組成物および
方法は、本発明の範囲内に包含される。
【００８７】 ペルタクチンポリペプチドをコードしている核酸および担体分子を、裸の核酸
として送達することは、本発明の範囲内にあるが、本発明は、より大きく、より
複雑な組成物の一部としての核酸の送達も包含する。これらの送達システムには
、ペルタクチンポリペプチドをコードしている核酸を含有する、ウイルス、ウイ
ルス様粒子または細菌が包含される。また、本発明の核酸および担体分子と、細
胞浸透性化合物、たとえばリポソームとの複合体も、本発明の範囲内に包含され
る。その他の化合物、たとえば分子状ベクター（EP 696,191, Samain et al.）
、および核酸ワクチンの送達システムは、当業者には公知であり、たとえばWO 9
3 06223およびWO 90 11092、US 5,580,859およびUS 5,589,466（Vical特許）（
参照によって本明細書に組み込まれる）に例示されており、不当または過剰な実
験なしに製造かつ使用することができる。
【００８８】 目的をさらに達成するため、そして本発明の目的により、ボルデテラ属の感染
を診断できるキットが記載される。このキットは、一実施態様では、細菌ＲＮＡ
または類似のＤＮＡ配列とハイブリダイズして、ボルデテラ属感染の存在を表示
することができる、本発明のＤＮＡ配列を含有する。（１）制限酵素で消化され
得るか、またはされ得ない細胞ＤＮＡを特定するためのサザンブロット分析の手
順；（２）細胞から抽出されたＲＮＡを特定するためのノーザンブロット分析の
手法；（３）ドットブロット手法、すなわち、事前のアガロースゲル上での分離
なしに、膜、たとえばニトロセルロースまたはナイロン越しにサンプルを直接濾
過する手法を包含する、異なる診断手法を用いることができるが、これらに限定
されない。
【００８９】 ドットブロット手法に適する材料は、血清および血漿を包含するが、これらに
限定されない体液、培養細胞からの上清、または細胞溶解と遠心分離による細胞
の膜および核の除去後に得られる細胞質抽出物から得ることができる。
【００９０】 下記は、本発明に関する研究に用いた菌株の参考文献である： ・９．７３Ｈ＋５，ＤＥＬ，ＳＥＩ：Infect. Immun. (1993) 61:4072-4078, Gu
ierard, P & Guiso, N.、1989年５月12日付けでＣＮＣＭにより受理。第８５８
号、 ・ＣＶＨＡＩ２８６，３３５株と同一のＣＶＧＥＯ：Microbiol. (1997) 143: 1
433-1441, Le Blay, K et al.、 ・６３．２：CIP - Lab. Ident., Inst. Pasteur, Paris、フランス国 - J. Cli
n. Microbiol., 1993, 31:2745、 ・ＴＩ：CIP81.32 - Lab. Ident., Inst. Pasteur, Paris、フランス国 - J. Cl
in. Microbiol., 1993, 31:2746、 ・Ｆｒ２８７：Vaccine (1999) 17:2651:2660, Boursaux-Eurde, C. et al.、 ・１８２３２：参照ＯＭＳ：ＡＴＣＣ９７．９７（ＣＩＰ６３．１）
【００９１】
【表３】
【００９２】
【表４】
【図面の簡単な説明】
【図１ａ】 気管支敗血症菌のペルタクチンという外膜タンパク質中の、反復の２領域、す
なわち第１領域および第２領域を示す地図である。
【図１ｂ】 気管支敗血症菌の異なる菌株のペルタクチンという外膜タンパク質の第１領域
のアライメントを示す図である。
【図１ｃ】 気管支敗血症菌の異なる菌株のペルタクチンという外膜タンパク質の第２領域
のアライメントを示す図である。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 16/12 Ｃ１２Ｍ 1/00 Ａ ４Ｈ０４５ 19/00 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｍ 1/00 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｍ Ｇ０１Ｎ 27/447 33/566 33/53 33/569 Ｆ Ｃ１２Ｐ 21/08 33/566 Ｃ１２Ｒ 1:01 33/569 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｆ (Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 27/26 ３０１Ａ Ｃ１２Ｒ 1:01） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＣ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ， ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，Ｉ Ｎ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ， ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，Ｐ Ｌ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ， ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4B024 AA11 BA31 CA04 CA09 CA11 HA12 4B029 AA07 AA23 AA27 CC02 FA01 4B063 QA01 QQ06 QQ41 QR31 QR56 QR83 QS34 QX01 4B064 AG27 CA10 CA20 CC24 DA15 4C085 AA14 BA17 CC07 CC23 4H045 AA10 AA11 AA30 BA10 CA11 DA86 EA31 EA52

Claims (55)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ボルデテラ（Bordetella）属のペルタクチンの混合物を含む
    免疫原性組成物であって、 該免疫原性組成物を投与された動物に、パラ百日咳菌（Bordetella parapertuss
    is）および気管支敗血症菌（Bordetella bronchispetica）に対する体液性また
    は細胞性免疫応答を誘導するのに充分な量の （ａ）パラ百日咳菌のペルタクチンと、 （ｂ）気管支敗血症菌のペルタクチンと を含む免疫原性組成物。
  2. 【請求項２】 免疫原性組成物を投与された動物に、百日咳菌（Bordetella
    pertussis）に対する体液性または細胞性免疫応答を誘導するのに充分な量の百
    日咳菌のペルタクチンも含む、請求項１記載の免疫原性組成物。
  3. 【請求項３】 ボルデテラ属のペルタクチンまたはそのフラグメントの混合
    物を含む免疫原性組成物であって、該ペルタクチンまたはそのフラグメントが、
    気管支敗血症菌ペルタクチンの少なくとも２種類の変異型を含み、該ボルデテラ
    属のペルタクチンまたはそのフラグメントが、該組成物を投与された動物に気管
    支敗血症菌に対する体液性または細胞性免疫応答を誘導するのに充分な量で存在
    する免疫原性組成物。
  4. 【請求項４】 ボルデテラ属のペルタクチンまたはそのフラグメントの混合
    物を含み、該ペルタクチンまたはそのフラグメントが、気管支敗血症菌ペルタク
    チンの少なくとも２種類の変異型を含み、気管支敗血症菌ペルタクチンの該少な
    くとも２種類の変異型が、少なくともその第２領域において互いに異なる、請求
    項３記載の免疫原性組成物。
  5. 【請求項５】 ボルデテラ属のペルタクチンまたはそのフラグメントの混合
    物を含む免疫原性組成物であって、該ペルタクチンまたはそのフラグメントが、
    気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型の混合物を含み、気管支敗血症菌ペルタク
    チンの変異型が、それぞれ、その第２領域に６、７、８または９回反復するＰＱ
    Ｐアミノ酸配列を含み、該気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型が、該免疫原性
    組成物を投与された動物に、気管支敗血症菌に対する体液性または細胞性免疫応
    答を誘導するのに充分な量で存在する免疫原性組成物。
  6. 【請求項６】 気管支敗血症菌ペルタクチンの少なくとも２種類の変異型が
    、少なくともその第２領域中の反復するＰＱＰアミノ酸配列の数において互いに
    異なる、請求項５記載の免疫原性組成物。
  7. 【請求項７】 免疫原性組成物を投与された動物に、パラ百日咳菌または百
    日咳菌に対する体液性または細胞性免疫応答を誘導するのに充分な量の、パラ百
    日咳菌のペルタクチンもしくはそのフラグメント、百日咳菌のペルタクチンもし
    くはそのフラグメント、またはそれらの混合物も含む、請求項５または６に記載
    の免疫原性組成物。
  8. 【請求項８】 ボルデテラ属のペルタクチンまたはそのフラグメントの混合
    物を含み、該ペルタクチンまたはその変異型が、気管支敗血症菌ペルタクチンの
    少なくとも２種類の変異型を含み、気管支敗血症菌ペルタクチンの該少なくとも
    ２種類の変異型が、少なくともその第１領域において互いに異なる、請求項３記
    載の免疫原性組成物。
  9. 【請求項９】 ボルデテラ属のペルタクチンまたはそのフラグメントの混合
    物を含む免疫原性組成物であって、該ペルタクチンまたはそのフラグメントが、
    気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型の混合物を含み、気管支敗血症菌ペルタク
    チンの変異型が、それぞれ、その第１領域に１、２または３回反復するＧＧＸＸ
    Ｐアミノ酸配列を含み、該気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型が、それぞれ、
    該免疫原性組成物を投与された動物に、気管支敗血症菌に対する体液性または細
    胞性免疫応答を誘導するのに充分な量で存在する免疫原性組成物。
  10. 【請求項１０】 気管支敗血症菌ペルタクチンの少なくとも２種類の変異型
    が、少なくともその第１領域中の反復するＧＧＸＸＰアミノ酸配列の数において
    異なる免疫原性組成物。
  11. 【請求項１１】 免疫原性組成物を投与された動物に、パラ百日咳菌または
    百日咳菌に対する体液性または細胞性免疫応答を誘導するのに充分な量の、パラ
    百日咳菌のペルタクチンもしくはそのフラグメント、百日咳菌のペルタクチンも
    しくはそのフラグメント、またはそれらの混合物も含む、請求項９項記載の免疫
    原性組成物。
  12. 【請求項１２】 気管支敗血症菌の種のペルタクチンまたはそのフラグメン
    トの混合物を含む免疫原性組成物であって、該ペルタクチンまたはそのフラグメ
    ントの混合物が、気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型の混合物を含み、該気管
    支敗血症菌ペルタクチンの少なくとも一つの変異型が、その第２領域に６、７、
    ８または９回反復するのＰＱＰアミノ酸配列を有する、気管支敗血症菌のペルタ
    クチンの第２領域を含み、該気管支敗血症菌ペルタクチンの少なくとももう一つ
    の変異型が、その第１領域に１、２または３回反復するＧＧＸＸＰアミノ酸配列
    を有する、気管支敗血症菌のペルタクチンの第１領域を含む免疫原性組成物。
  13. 【請求項１３】 ボルデテラ属のペルタクチンのフラグメントの混合物を含
    む免疫原性組成物であって、 該免疫原性組成物を投与された動物に、パラ百日咳菌および気管支敗血症菌に対
    する体液性または細胞性免疫応答を誘導するのに充分な量の （ａ）パラ百日咳菌のペルタクチンまたはそのフラグメントと、 （ｂ）気管支敗血症菌のペルタクチン、または第１領域、第２領域、もしくは第
    １領域および第２領域の双方を含むそのフラグメントと を含む免疫原性組成物。
  14. 【請求項１４】 免疫原性組成物を投与された動物に、百日咳菌に対する体
    液性または細胞性免疫応答を誘導するのに充分な量の、百日咳菌のペルタクチン
    もしくはそのフラグメントもまた含む、請求項１３記載の免疫原性組成物。
  15. 【請求項１５】 気管支敗血症菌ペルタクチンの少なくとも２種類の変異型
    の混合物を含む組成物であって、該変異型が、それぞれ、気管支敗血症菌のペル
    タクチンの第２領域を含み、かつ少なくともそれぞれに含まれる第２領域におい
    て互いに異なる組成物。
  16. 【請求項１６】 気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型の混合物を含む組成
    物であって、気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型が、それぞれ、その第２領域
    に６、７、８または９回反復するＰＱＰアミノ酸配列を含み、該気管支敗血症菌
    ペルタクチンの少なくとも２種類の変異型が、それに含まれる該反復するＰＱＰ
    アミノ酸配列の数において異なる組成物。
  17. 【請求項１７】 パラ百日咳菌のペルタクチンもしくはそのフラグメント、
    百日咳菌のペルタクチンもしくはそのフラグメント、またはそれらの混合物も含
    む、請求項１６記載の組成物。
  18. 【請求項１８】 気管支敗血症菌ペルタクチンの少なくとも２種類の変異型
    の混合物を含む組成物であって、気管支敗血症菌のペルタクチンの変異型が、そ
    れぞれ、気管支敗血症菌のペルタクチンの第１領域を含み、かつ該変異型が、少
    なくともそれぞれに含まれる第１領域において互いに異なる組成物。
  19. 【請求項１９】 気管支敗血症菌のペルタクチンの変異型の混合物を含む組
    成物であって、該気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型が、それぞれ、その第１
    領域に１、２または３回反復するＧＧＸＸＰアミノ酸配列を含み、該気管支敗血
    症菌ペルタクチンの少なくとも２種類の変異型が、それに含まれる該反復するＧ
    ＧＸＸＰアミノ酸配列の数において異なる組成物。
  20. 【請求項２０】 パラ百日咳菌のペルタクチンもしくはそのフラグメント、
    百日咳菌のペルタクチンもしくはそのフラグメント、またはそれらの混合物も含
    む、請求項１９記載の組成物。
  21. 【請求項２１】 気管支敗血症菌のペルタクチンの変異型の混合物を含む組
    成物であって、該気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型の一つが、気管支敗血症
    菌ペルタクチンの第２領域を含み、該気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型のも
    う一つが、気管支敗血症菌ペルタクチンの第１領域を含む組成物。
  22. 【請求項２２】 第２領域が、６、７、８または９回反復するＰＱＰアミノ
    酸配列を有する、請求項２１記載の組成物。
  23. 【請求項２３】 該第１領域が、１、２または３回反復するＧＧＸＸＰアミ
    ノ酸配列を有する、請求項２１記載の組成物。
  24. 【請求項２４】 気管支敗血症菌のペルタクチンの変異型の混合物を含む組
    成物であって、該気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型の一つが、その第２領域
    中に６、７、８または９回反復するＰＱＰアミノ酸配列を有する気管支敗血症菌
    ペルタクチンの第２領域を含み、該気管支敗血症菌ペルタクチンの変異型のもう
    一つが、その第１領域中に１、２または３回反復するＧＧＸＸＰアミノ酸配列を
    有する気管支敗血症菌ペルタクチンの第１領域を含む組成物。
  25. 【請求項２５】 パラ百日咳菌のペルタクチンもしくはそのフラグメント、
    百日咳菌のペルタクチンもしくはそのフラグメント、またはそれらの混合物も含
    む、請求項２４記載の組成物。
  26. 【請求項２６】 配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１４、配
    列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列
    番号２０、配列番号２１および配列番号２２からなる群より選ばれる配列、また
    は該配列のフラグメントを含むポリペプチド。
  27. 【請求項２７】 配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１４、配
    列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列
    番号２０、配列番号２１または配列番号２２中のアミノ酸からなるポリペプチド
    。
  28. 【請求項２８】 請求項２６に記載のポリペプチドをコードしているポリヌ
    クレオチド。
  29. 【請求項２９】 請求項２８に記載のポリヌクレオチド、またはそのうちの
    少なくとも１５のヌクレオチドと中程度のか、もしくは高い緊縮度の条件下でハ
    イブリダイズする、精製されたＤＮＡもしくはＲＮＡ配列。
  30. 【請求項３０】 請求項２７に記載のポリペプチドをコードしているポリヌ
    クレオチド。
  31. 【請求項３１】 請求項３０に記載のポリヌクレオチド、またはそのうちの
    少なくとも１５のヌクレオチドと中程度のか、もしくは高い緊縮度の条件下でハ
    イブリダイズする、精製されたＤＮＡもしくはＲＮＡ配列。
  32. 【請求項３２】 請求項２６に記載のポリペプチドと結合する、精製された
    抗体。
  33. 【請求項３３】 抗体がモノクローナル抗体である、請求項３２記載の精製
    抗体。
  34. 【請求項３４】 抗体がポリクローナル抗体である、請求項３２記載の精製
    抗体。
  35. 【請求項３５】 請求項２６に記載のポリペプチドと、該ポリペプチドを特
    異的に認識する抗体とを含む免疫学的複合体。
  36. 【請求項３６】 ボルデテラ属による感染を検出する方法であって、ボルデ
    テラ属に感染していると推測される生物学的材料を含む組成物を提供する工程と
    、請求項２６に記載のポリペプチドの存在について検定する工程とを含む方法。
  37. 【請求項３７】 ポリペプチドを、該ポリペプチドと免疫学的反応性である
    抗体を用いる電気泳動または免疫アッセイによって検定する、請求項３６記載の
    方法。
  38. 【請求項３８】 請求項２６に記載のポリペプチドを含む抗原と結合する抗
    体の存否を検出するインビトロ診断の方法であって、生物学的流体中の抗原およ
    び抗体が抗原抗体複合体を形成するのに充分な時間かつ条件で、該抗原を該生物
    学的流体に接触させる工程と、該複合体の形成を検出する工程とを含む方法。
  39. 【請求項３９】 抗原抗体複合体の形成を測定する工程をさらに含む、請求
    項３８記載の方法。
  40. 【請求項４０】 抗原抗体複合体の形成を、ウエスタンブロット手法、ＥＬ
    ＩＳＡ、間接免疫蛍光アッセイまたは免疫沈降アッセイに基づく免疫アッセイに
    よって検出する、請求項３８記載の方法。
  41. 【請求項４１】 請求項２６に記載のポリペプチドまたはその混合物と結合
    する抗体の存否を検出するための診断キットであって、請求項２６に記載のポリ
    ペプチド、または該ポリペプチドの混合物を含む抗原と、抗原と抗体との間の免
    疫複合体の形成を検出するための、該検出を実施するのに充分な量で存在する手
    段とを含むキット。
  42. 【請求項４２】 免疫原性または防御性応答をインビボで誘導するのに充分
    な量の請求項２６に記載の少なくとも１種類のポリペプチドと、そのための薬学
    的に許容され得る担体とを含む免疫原性組成物。
  43. 【請求項４３】 請求項２６に記載の少なくとも１種類のポリペプチドの中
    和量を含む、請求項１〜１４に記載の免疫原性組成物。
  44. 【請求項４４】 請求項２８〜３１のいずれか一項に記載のポリヌクレオチ
    ドを含む免疫原性組成物。
  45. 【請求項４５】 請求項１〜１４、４２、４３または４４のいずれか一項に
    記載の免疫原性組成物を、薬学的に許容され得る賦形剤とともに含むワクチン。
  46. 【請求項４６】 ボルデテラ属の存否を検出する方法であって、 （１）ボルデテラ属の遺伝学的材料を含有すると推測されるサンプルを、少なく
    とも１種類のヌクレオチドプローブに接触させる工程と、 （２）該ヌクレオチドプローブと、サンプル中の遺伝学的材料との間のハイブリ
    ダイゼーションを検出する工程と を含み、該ヌクレオチドプローブが、請求項２８または３０のいずれか一項に記
    載のポリヌクレオチド配列に相補的である方法。
  47. 【請求項４７】 少なくとも請求項１〜１４、または４２〜４４に記載の免
    疫原性組成物と、動物へ該組成物を投与する手段とを含む予防接種用キット。
  48. 【請求項４８】 （Ａ）百日咳菌のペルタクチンの、第１領域および第２領
    域を含むポリペプチド、または第１領域を含む一つのポリペプチドおよび第２領
    域を含む一つのポリペプチド； （Ｂ）パラ百日咳菌のペルタクチンの、第１領域および第２領域を含むポリペプ
    チド、または第１領域を含む一つのポリペプチドおよび第２領域を含む一つのポ
    リペプチドならびに； （Ｃ）気管支敗血症菌９．７３株のペルタクチンの、第１領域および第２領域を
    含むポリペプチド、または第１領域を含む一つのポリペプチド、および第２領域
    を含む一つのポリペプチド、ならびに気管支敗血症菌ＳＥＩ株のペルタクチンの
    、第１領域および第２領域を含むポリペプチド、または第１領域を含む一つのポ
    リペプチドおよび第２領域を含む一つのポリペプチド から本質的になる免疫原性組成物。
  49. 【請求項４９】 （Ａ）気管支敗血症菌のペルタクチン； （Ｂ）気管支敗血症菌のＦＨＡおよび； （Ｃ）パラ百日咳菌のペルタクチン から本質的になる免疫原性組成物。
  50. 【請求項５０】 気管支敗血症菌のペルタクチンが９．７３株に由来する、
    請求項４９記載の免疫原性組成物。
  51. 【請求項５１】 気管支敗血症菌のＦＨＡが９．７３株に由来する、請求項
    ４９記載の免疫原性組成物。
  52. 【請求項５２】 ＦＨＡ、ＡＧＧ２、ＡＧＧ３からなる群より選ばれる、ボ
    ルデテラ属の少なくとも１種類のアドへシン、および／またはＰＴＸ、ＤＮＴ、
    ＴＣＴ、Ａｃ−Ｈｌｙからなる群より選ばれる、ボルデテラ属の少なくとも１種
    類の毒素をさらに含む、請求項１〜１４、４２〜４４、または４８〜５１のいず
    れか一項に記載の免疫原性組成物。
  53. 【請求項５３】 請求項２８〜３１に記載の少なくとも１種類のポリペプチ
    ド、またはそのフラグメントを含むＤＮＡチップ。
  54. 【請求項５４】 ボルデテラ属の感染を処置するための、請求項３３記載の
    モノクローナル抗体の使用。
  55. 【請求項５５】 マイクロビーズを含むマイクロアレーであって、該マイク
    ロアレーが、それぞれ、請求項２８〜３１のいずれか一項に記載のポリヌクレオ
    チドまたはそのフラグメントの複数の複製物を担持し、該ポリヌクレオチドまた
    はそのフラグメントが、マイクロビーズごとに互いに異なるマイクロアレー。
JP2001586330A 2000-05-25 2001-05-23 百日咳菌、パラ百日咳菌および気管支敗血症菌のペルタクチンの繰返し領域の多型性を有するポリペプチド、ならびに診断および免疫原性組成物におけるその使用 Pending JP2003533990A (ja)

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