JP2003512017A - クラミジア抗原および対応するｄｎａ断片ならびにその使用 - Google Patents
クラミジア抗原および対応するｄｎａ断片ならびにその使用Info
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Abstract
(57)【要約】
本発明はクラミジア感染を予防、治療および診断する方法に使用できる、クラミジアポリペプチドをコードする精製および単離されたポリヌクレオチド分子を提供する。本発明の１つの態様では、ポリヌクレオチド分子は、ポリペプチドＣＰＮ１００６８６ＲＹ５４（配列番号１および１４）、ＣＰＮ１００６９６ＲＹ−５５（配列番号２および１５）、ＣＰＮ１００７０９ＲＹ−５７（配列番号３および１６）、ＣＰＮ１００７１０ＲＹ−５８（配列番号４および１７）、ＣＰＮ１００７１１ＲＹ−５９（配列番号５および１８）、ＣＰＮ１００８７７ＲＹ−６１（配列番号６および１９）、ＣＰＮ１００３２５ＲＹ−６２（配列番号７および２０）、ＣＰＮ１００３６８ＲＹ−６３（配列番号８および２１）、ＣＰＮ１００６２４ＲＹ−６４（配列番号９および２２）、ＣＰＮ１００６３３ＲＹ−６５（配列番号１０および２３）、ＣＰＮ１００９８５ＲＹ−６６（配列番号１１および２４）、ＣＰＮ１００９８７ＲＹ−６７（配列番号１２および２５）ならびにＣＰＮ１００９８８ＲＹ−６８（配列番号１３および２６）をコードするＤＮＡから選択される。
Description
【０００１】
発明の分野
本発明はヒトなどの哺乳類におけるクラミジア感染症の予防および治療に使用
できるクラミジア（Chlamydia）抗原および対応するＤＮＡ分子に関する。
できるクラミジア（Chlamydia）抗原および対応するＤＮＡ分子に関する。
【０００２】
発明の背景
クラミジアは原核生物である。それらは、リポ多糖および大腸菌(E coli)で見
られるタンパク質と構造的および機能的に類似するいくつかの膜タンパク質を含
む三層の外膜をはじめ、グラム陰性菌との形態的および構造的類似性を示す。そ
れらは、代謝上不活性であるが感染力のある細胞外段階と、複製はするが感染力
のない細胞内段階からなる独自の二相性生活環を有する偏性細胞内寄生体である
。生活環の複製段階は感染した宿主細胞の細胞質からこの細菌を隔離する膜に結
合した封入体内で起こる。
られるタンパク質と構造的および機能的に類似するいくつかの膜タンパク質を含
む三層の外膜をはじめ、グラム陰性菌との形態的および構造的類似性を示す。そ
れらは、代謝上不活性であるが感染力のある細胞外段階と、複製はするが感染力
のない細胞内段階からなる独自の二相性生活環を有する偏性細胞内寄生体である
。生活環の複製段階は感染した宿主細胞の細胞質からこの細菌を隔離する膜に結
合した封入体内で起こる。
【０００３】
肺炎クラミジア(C.pneumonia)は一般的なヒト病原体で、初めにオウム病クラ
ミジア(Chlamydia psittaci)のTWAR株として記載されていたが、その後は新種で
あると認識されている。肺炎クラミジアは他のクラミジア種（トラコーマクラミ
ジア(C. trachomatis)、Ｃ．ペコラム(C. pecorum)およびオウム病クラミジアと
は抗原的、遺伝的および形態的に異なっている。それはトラコーマクラミジアま
たはオウム病クラミジアといずれかとＤＮＡ配列において１０％以下の相同性し
か示さない。
ミジア(Chlamydia psittaci)のTWAR株として記載されていたが、その後は新種で
あると認識されている。肺炎クラミジアは他のクラミジア種（トラコーマクラミ
ジア(C. trachomatis)、Ｃ．ペコラム(C. pecorum)およびオウム病クラミジアと
は抗原的、遺伝的および形態的に異なっている。それはトラコーマクラミジアま
たはオウム病クラミジアといずれかとＤＮＡ配列において１０％以下の相同性し
か示さない。
【０００４】
Ｃ．ニューモニアはコミュニティ獲得性の肺炎の一般的な原因であり、肺炎球
菌(Streptococcus pneumoniae)および肺炎マイコプラズマ(Mycoplasma pneumoni
ae)よりもわずかに低い頻度である(Grayston et al. (1995) Journal of nfecti
ous Diseases 168:1231; Campos et al. (1995) Investigation of Ophthalmolo
gy and Visual Science 36:1477)。それはまた気管支炎および副鼻腔炎をはじめ
とする上気道症状および疾患を引き起こす(Grayston et al. (1990) Journal of
Infectious Diseases 168:1231; Grayston et al (1990) Journal of Infectio
us Diseases 161:618; Marrie (1993) Clinical Infectious Diseases, 18:501;
Wang et al (1986) Chlamydial infectious, Cambridge University Press, Ca
mbridge, p.329)。大部分の成人集団（６０％を超える）は肺炎クラミジアに対
する抗体を持っており(Wang et al (1986) Chlamydial infection, Cambridge U
niversity Press, Cambridge, p.329)、これはまだ認識されていないか、または
無症候性である過去の感染を示している。
菌(Streptococcus pneumoniae)および肺炎マイコプラズマ(Mycoplasma pneumoni
ae)よりもわずかに低い頻度である(Grayston et al. (1995) Journal of nfecti
ous Diseases 168:1231; Campos et al. (1995) Investigation of Ophthalmolo
gy and Visual Science 36:1477)。それはまた気管支炎および副鼻腔炎をはじめ
とする上気道症状および疾患を引き起こす(Grayston et al. (1990) Journal of
Infectious Diseases 168:1231; Grayston et al (1990) Journal of Infectio
us Diseases 161:618; Marrie (1993) Clinical Infectious Diseases, 18:501;
Wang et al (1986) Chlamydial infectious, Cambridge University Press, Ca
mbridge, p.329)。大部分の成人集団（６０％を超える）は肺炎クラミジアに対
する抗体を持っており(Wang et al (1986) Chlamydial infection, Cambridge U
niversity Press, Cambridge, p.329)、これはまだ認識されていないか、または
無症候性である過去の感染を示している。
【０００５】
肺炎クラミジア感染は通常には急性呼吸器系疾患（すなわち、咳、咽頭炎、嗄
声、および発熱；聴診での異常な胸部音）として示される。ほとんどの患者では
咳が２〜６週間持続し、回復が遅い。このようなケースの約１０％で、上気道感
染の後に気管支炎または肺炎が起こる。さらに肺炎クラミジア流行の際には、次
ぎにこれらの肺炎患者の約半数、特に虚弱者や高齢者で肺炎球菌の同時感染が認
めれた。上記で示されたように、肺炎クラミジア感染が呼吸器系感染以外の疾患
にも関連するさらに多くの証拠がある。
声、および発熱；聴診での異常な胸部音）として示される。ほとんどの患者では
咳が２〜６週間持続し、回復が遅い。このようなケースの約１０％で、上気道感
染の後に気管支炎または肺炎が起こる。さらに肺炎クラミジア流行の際には、次
ぎにこれらの肺炎患者の約半数、特に虚弱者や高齢者で肺炎球菌の同時感染が認
めれた。上記で示されたように、肺炎クラミジア感染が呼吸器系感染以外の疾患
にも関連するさらに多くの証拠がある。
【０００６】
この生物の貯蔵庫はおそらくヒトである。オウム病クラミジアとは対照的に、
鳥類または動物の貯蔵庫は知られていない。伝染については明らかには定義され
ていない。それは分泌物との直接的な接触、媒介物、または風媒拡散によると考
えられる。長い潜伏期間があり、それは何ヶ月も持続する。流行の分析に基づけ
ば、感染者はその生物の効率の悪い媒介者であるので、肺炎クラミジアはある集
団にゆっくり拡散すると考えられる（患者から患者の間隔は平均３０日）。肺炎
クラミジア罹病率は普遍的である。小児期に最初に感染した後、成人期に再感染
が起こる。肺炎クラミジアは、２〜３年持続する高い発病率（流行病）間隔を重
ね合わせると著しくは世界中の伝染病であると考えられる。トラコーマクラミジ
ア感染は肺炎クラミジアに対する交差免疫を付与しない。感染症は経口抗せ物質
テトラサイクリンまたはエリスロマイシン（２ｇ／ｄ、少なくとも１０〜１４日
間）で容易に治療される。最近開発された薬剤アジスロマイジンはクラミジア感
染症に対して単回投与として極めて有効である。
鳥類または動物の貯蔵庫は知られていない。伝染については明らかには定義され
ていない。それは分泌物との直接的な接触、媒介物、または風媒拡散によると考
えられる。長い潜伏期間があり、それは何ヶ月も持続する。流行の分析に基づけ
ば、感染者はその生物の効率の悪い媒介者であるので、肺炎クラミジアはある集
団にゆっくり拡散すると考えられる（患者から患者の間隔は平均３０日）。肺炎
クラミジア罹病率は普遍的である。小児期に最初に感染した後、成人期に再感染
が起こる。肺炎クラミジアは、２〜３年持続する高い発病率（流行病）間隔を重
ね合わせると著しくは世界中の伝染病であると考えられる。トラコーマクラミジ
ア感染は肺炎クラミジアに対する交差免疫を付与しない。感染症は経口抗せ物質
テトラサイクリンまたはエリスロマイシン（２ｇ／ｄ、少なくとも１０〜１４日
間）で容易に治療される。最近開発された薬剤アジスロマイジンはクラミジア感
染症に対して単回投与として極めて有効である。
【０００７】
ほとんどの場合、肺炎クラミジア感染は軽いことが多く、合併症もなく、感染
症の９０％までは亜急性であるか、認識されない。工業国の小児の間では感染は
５才まではまれであると考えられていたが、最近の研究(E Normann et al, Chla
mydia pneumoniae in children with acute respiratory tract infections, Ac
ta Paediatrica, 1998, Vol 87, Iss 1, pp 23-27)では、この世代の子供の多く
は血清反応陰性であるにもかかわらず感染のＰＣＲ証拠を示し、２〜４才の１７
〜１９％有病率と見積もられることが報告されている。発展途上国では、幼児の
間の肺炎クラミジア抗体の血清有病率は上昇し、肺炎クラミジアは急性下気道疾
患、ならびに世界の熱帯地方の幼児よび小児の死亡率の重要な原因であり得ると
疑われる。
症の９０％までは亜急性であるか、認識されない。工業国の小児の間では感染は
５才まではまれであると考えられていたが、最近の研究(E Normann et al, Chla
mydia pneumoniae in children with acute respiratory tract infections, Ac
ta Paediatrica, 1998, Vol 87, Iss 1, pp 23-27)では、この世代の子供の多く
は血清反応陰性であるにもかかわらず感染のＰＣＲ証拠を示し、２〜４才の１７
〜１９％有病率と見積もられることが報告されている。発展途上国では、幼児の
間の肺炎クラミジア抗体の血清有病率は上昇し、肺炎クラミジアは急性下気道疾
患、ならびに世界の熱帯地方の幼児よび小児の死亡率の重要な原因であり得ると
疑われる。
【０００８】
血清有病率の研究および地方の流行病の研究によれば、肺炎クラミジアの一次
感染は通常、５才から２０才の間で起こる。米国では例えば、肺炎クラミジアに
よって引き起こされる毎年の小児肺炎の３０，０００症例であると見積もられる
。感染は小児または若年（例えば、学生や徴兵）群の中で集団発生する。
感染は通常、５才から２０才の間で起こる。米国では例えば、肺炎クラミジアに
よって引き起こされる毎年の小児肺炎の３０，０００症例であると見積もられる
。感染は小児または若年（例えば、学生や徴兵）群の中で集団発生する。
【０００９】
肺炎クラミジアはコミュニティ獲得性の下気道感染症の１０〜２５％を起こす
（スェーデン、イタリア、フィンランドおよび米国から報告）。流行中、肺炎ク
ラミジアは感染は肺炎の症例の５０〜６０％にのぼると考えられる。このような
期間にはまた、さらに肺炎球菌による混合感染があることが報告されている。
（スェーデン、イタリア、フィンランドおよび米国から報告）。流行中、肺炎ク
ラミジアは感染は肺炎の症例の５０〜６０％にのぼると考えられる。このような
期間にはまた、さらに肺炎球菌による混合感染があることが報告されている。
【００１０】
成人期の再感染もよくあり、臨床徴候はより軽い傾向にある。集団血清有病率
の研究に基づけば、年齢とともに曝露が増す傾向にあり、これは特にヒトにおい
て明らかである。何人かの研究者が、持続性、無症候性の肺炎クラミジア感染状
態がよくあることであると推測している。
の研究に基づけば、年齢とともに曝露が増す傾向にあり、これは特にヒトにおい
て明らかである。何人かの研究者が、持続性、無症候性の肺炎クラミジア感染状
態がよくあることであると推測している。
【００１１】
中年または高年者では、肺炎クラミジア感染は慢性気管支炎および副鼻腔炎へ
と進行する可能性がある。米国での研究は、６０才より若い人において肺炎クラ
ミジアによって引き起こされた発病率は年間１，０００人につき１症例であるが
、若年層では発病率は３倍に上昇していたことを明らかにした。肺炎クラミジア
感染は病床中にある患者を除いては入院につながることはまれである。
と進行する可能性がある。米国での研究は、６０才より若い人において肺炎クラ
ミジアによって引き起こされた発病率は年間１，０００人につき１症例であるが
、若年層では発病率は３倍に上昇していたことを明らかにした。肺炎クラミジア
感染は病床中にある患者を除いては入院につながることはまれである。
【００１２】
極めて重要なのは、アテローム性動脈硬化症と肺炎クラミジア感染との関連で
ある。従来の肺炎クラミジア感染と心臓発作、冠動脈疾患および頸動脈疾患との
関係を示すいくつかの疫学研究がある(Saikku et al. (1988) Lanet; ii:983; T
hom et al. (1992) JAMA 268:68; Linnanmaki et al. (1993), Circulation 87:
1030; Saikku et al. (1992) Annals Internal Medicine 116:273; Melnick et
al (1993) American Journal of Medicine 95:499)。さらに、この微生物は冠動
脈、頸動脈、末梢動脈および大動脈のアテロームおよび脂肪索で検出されている
(Shor et al. (1992) South African. Medical Journal 82:158; Kuo et al. (1
993) Journal of Infectious Diseases 167:841; Kuo et al. (1993) Arteriosc
lerosis and Thrombosis 13:1500; Campbell et al (1995) Journal of Infecti
ous Diseases 172:585; Chiu et al. Circulation, 1997 (In Press))。種々の
肺炎クラミジアは冠動脈および頸動脈から回収されている(Ramirez et al (1996
) Annals of Internal Medicine 125:979; Jackson et al. Abst. K121, p272,
36ｔｈ ICAAC, 15-18 Sept. 1996, New Orleans)。さらに肺炎クラミジアはウサ
ギモデルにおけるアテローム性動脈硬化症の変化を誘導することが示されている
(Fong et al (1997) Journal of Clinical Microbiology 35:48)。考え併せると
これらの結果は、、クラミジア性のアテローム性動脈硬化症の疫学的重要性は依
然証明されてはいないが、肺炎クラミジアがヒトにおいてアテローム性動脈硬化
症を引き起こし得るという高い可能性があることを示している。
ある。従来の肺炎クラミジア感染と心臓発作、冠動脈疾患および頸動脈疾患との
関係を示すいくつかの疫学研究がある(Saikku et al. (1988) Lanet; ii:983; T
hom et al. (1992) JAMA 268:68; Linnanmaki et al. (1993), Circulation 87:
1030; Saikku et al. (1992) Annals Internal Medicine 116:273; Melnick et
al (1993) American Journal of Medicine 95:499)。さらに、この微生物は冠動
脈、頸動脈、末梢動脈および大動脈のアテロームおよび脂肪索で検出されている
(Shor et al. (1992) South African. Medical Journal 82:158; Kuo et al. (1
993) Journal of Infectious Diseases 167:841; Kuo et al. (1993) Arteriosc
lerosis and Thrombosis 13:1500; Campbell et al (1995) Journal of Infecti
ous Diseases 172:585; Chiu et al. Circulation, 1997 (In Press))。種々の
肺炎クラミジアは冠動脈および頸動脈から回収されている(Ramirez et al (1996
) Annals of Internal Medicine 125:979; Jackson et al. Abst. K121, p272,
36ｔｈ ICAAC, 15-18 Sept. 1996, New Orleans)。さらに肺炎クラミジアはウサ
ギモデルにおけるアテローム性動脈硬化症の変化を誘導することが示されている
(Fong et al (1997) Journal of Clinical Microbiology 35:48)。考え併せると
これらの結果は、、クラミジア性のアテローム性動脈硬化症の疫学的重要性は依
然証明されてはいないが、肺炎クラミジアがヒトにおいてアテローム性動脈硬化
症を引き起こし得るという高い可能性があることを示している。
【００１３】
いくつかの最近の研究はまた、肺炎クラミジア感染と喘息との間の関連も示し
ている。感染は喘鳴性の喘息性気管支炎、成人発症喘息および成人における喘息
の急性再燃に結びつけられており、小規模研究では何人かで長期抗生物質治療が
効果的にゆっくりと疾病の重篤度を軽減することが示されている(Hahn DL, et a
l. Evidence for Chlamydia pneumoniae infection in steroid-dependent asth
ma. Ann Allergy Asthma Immunol. 1998 Jan; 80(1): 45-49; Hahn DL, et al.
Association of Chlamydia pneumoniae IgA antibodies with recently symptom
itic asthma. Epidemiol Infect. 1996 Dec; 117(3): 513-517; Bjornsson E, e
t al. Serology of chlamydia in relation to asthma and bronchial hyperres
ponsiveness. Scand J Infect Dis. 1996; 28(1): 63-69; Hahn DL. Treatment
of Chlamydia pneumoniae infection in adult asthma: a befor-after trial.
J Fam Pract. 1995 Oct; 41(4): 345-351; Allegra L, et al. Acute exacerbat
ions of asthma in adults: role of Chlamydia pneumoniae infection. Eur Re
spir J. 1994 Dec; 7(12): 2165-2168; Hahn DL, et al. Association of Chlam
ydia pneumoniae (strain TWAR) infection with wheezng, asthmatic bronchit
is, and adult-onset asthma. JAMA. 1991 Jul 10; 266(2): 225-230)。
ている。感染は喘鳴性の喘息性気管支炎、成人発症喘息および成人における喘息
の急性再燃に結びつけられており、小規模研究では何人かで長期抗生物質治療が
効果的にゆっくりと疾病の重篤度を軽減することが示されている(Hahn DL, et a
l. Evidence for Chlamydia pneumoniae infection in steroid-dependent asth
ma. Ann Allergy Asthma Immunol. 1998 Jan; 80(1): 45-49; Hahn DL, et al.
Association of Chlamydia pneumoniae IgA antibodies with recently symptom
itic asthma. Epidemiol Infect. 1996 Dec; 117(3): 513-517; Bjornsson E, e
t al. Serology of chlamydia in relation to asthma and bronchial hyperres
ponsiveness. Scand J Infect Dis. 1996; 28(1): 63-69; Hahn DL. Treatment
of Chlamydia pneumoniae infection in adult asthma: a befor-after trial.
J Fam Pract. 1995 Oct; 41(4): 345-351; Allegra L, et al. Acute exacerbat
ions of asthma in adults: role of Chlamydia pneumoniae infection. Eur Re
spir J. 1994 Dec; 7(12): 2165-2168; Hahn DL, et al. Association of Chlam
ydia pneumoniae (strain TWAR) infection with wheezng, asthmatic bronchit
is, and adult-onset asthma. JAMA. 1991 Jul 10; 266(2): 225-230)。
【００１４】
これらの結果に照らして、肺炎クラミジア感染に対する防御ワクチンが極めて
重要であると考えられる。いずれのヒトクラミジア感染にも有用なワクチンはま
だない。有効なワクチンは物理的または化学的に不活化したクラミジアを用いて
開発できると考えられる。しかしながらかかるワクチンは高い安全域がない。一
般に、安全なワクチンはその微生物の遺伝子操作のよって弱毒化するか、または
組換えによって作出される。従って、ヒトクラミジア感染に対する有効かつ安全
なワクチンを作出する主な障壁は、クラミジア、特に肺炎クラミジアに関する遺
伝情報が不十分であることであった。
重要であると考えられる。いずれのヒトクラミジア感染にも有用なワクチンはま
だない。有効なワクチンは物理的または化学的に不活化したクラミジアを用いて
開発できると考えられる。しかしながらかかるワクチンは高い安全域がない。一
般に、安全なワクチンはその微生物の遺伝子操作のよって弱毒化するか、または
組換えによって作出される。従って、ヒトクラミジア感染に対する有効かつ安全
なワクチンを作出する主な障壁は、クラミジア、特に肺炎クラミジアに関する遺
伝情報が不十分であることであった。
【００１５】
肺炎クラミジアおよびオウム病クラミジアを用いた研究では、クラミジアに対
する安全かつ有効なワクチンが達成可能な目標であることを示している。例えば
、トラコーマクラミジアの肺感染から回復したマウスはその後の膣攻撃によって
誘導される不妊症から保護される(Pal et al. (1996) Infection and Immunity.
64:5341)。同様に、不活化したオウム病クラミジアで免疫化したヒツジはその
後のクラミジア誘発性の流産および死産から保護された(Jones et al. (1995) V
accine 13:715)。クラミジア感染症からの保護はＴｈ１免疫応答、特にＩＮＦｇ
（ＣＤ４＋Ｔ細胞を産生する）の誘導と関連づけられている(Igietsemes et al.
(1993) Immunology 5:317)。ＣＤ４＋細胞系統またはクローンの、ヌードマウ
スまたはＳＣＩＤマウスへの養子移入は攻撃または明らかな慢性疾患からの防御
を付与し(Igietseme et al (1993) Regional Immunology 5:317; Magee et al (
1993) Regional Immunology 5: 305)、またＣＤ４＋Ｔ細胞のin vivo涸渇は攻撃
後の疾病を悪化させた(Lander et al. (1991) Ynfection & Immunity 59:3774;
Magee et al (1995) Infection & Immunity 63:516)。しかしながら、粘膜表面
の十分高力価の中和抗体の存在も保護作用を発揮し得る(Cotter et al. (1995)
Infection and Immunity 63:4704)。
する安全かつ有効なワクチンが達成可能な目標であることを示している。例えば
、トラコーマクラミジアの肺感染から回復したマウスはその後の膣攻撃によって
誘導される不妊症から保護される(Pal et al. (1996) Infection and Immunity.
64:5341)。同様に、不活化したオウム病クラミジアで免疫化したヒツジはその
後のクラミジア誘発性の流産および死産から保護された(Jones et al. (1995) V
accine 13:715)。クラミジア感染症からの保護はＴｈ１免疫応答、特にＩＮＦｇ
（ＣＤ４＋Ｔ細胞を産生する）の誘導と関連づけられている(Igietsemes et al.
(1993) Immunology 5:317)。ＣＤ４＋細胞系統またはクローンの、ヌードマウ
スまたはＳＣＩＤマウスへの養子移入は攻撃または明らかな慢性疾患からの防御
を付与し(Igietseme et al (1993) Regional Immunology 5:317; Magee et al (
1993) Regional Immunology 5: 305)、またＣＤ４＋Ｔ細胞のin vivo涸渇は攻撃
後の疾病を悪化させた(Lander et al. (1991) Ynfection & Immunity 59:3774;
Magee et al (1995) Infection & Immunity 63:516)。しかしながら、粘膜表面
の十分高力価の中和抗体の存在も保護作用を発揮し得る(Cotter et al. (1995)
Infection and Immunity 63:4704)。
【００１６】
肺炎クラミジア種内の抗原のバリエーションは遺伝情報が不十分であるために
十分記載されていないが、バリエーションはトラコーマクラミジアに基づいて存
在しているものと予測される。トラコーマクラミジアの血清学的亜型は主要外膜
タンパク質（ＭＯＭＰ）における抗原バリエーションに基づいて定義されている
が、公表されている肺炎クラミジアＭＯＭＰ遺伝子配列はこの微生物のいくつか
の異なる単離物の間ではバリエーションを示していない(Campbell et al (1990)
Infection and Immunity 58:93; McCafferty et al (1995) Infection and Imm
unity 63:2387-9; Knudsen et al (1996) Third Meeting of the European Soci
ety for Chlamydia Research, Vienna)。他のクラミジアのＭＯＭＰで保存され
ていることが知られているタンパク質領域は、肺炎クラミジアでも保存されてい
る(Campbell et al (1990) Infection and Immunity 58:93; McCafferty et al
(1995) Infection and Immunity 63:2387-9)。ある研究では通常の分子量よりも
大きいＭＯＭＰを有する肺炎クラミジア株が記載されているが、これについては
この遺伝子は配列決定されていない(Grayston et al. (1995) Journal of Infec
tious Diseases 168:1231)。異なる９種の単離物由来の外膜タンパク質２の部分
配列もまた不変であることが分かっている(Ramirez et al (1996) Annals of In
ternal Medicine 125:979)。予期されたようにＨＳＰ６０およびＨＳＰ７０の遺
伝子は他のクラミジア種とはほとんど変動していない。７６ｋＤａの抗原をコー
ドする遺伝子は肺炎クラミジアのただ１つの株からクローニングされたものであ
る。その他の既知のクラミジア遺伝子との有意な類似性はない(Marrie (1993) C
linical Infectious Diseases. 18:501)。
十分記載されていないが、バリエーションはトラコーマクラミジアに基づいて存
在しているものと予測される。トラコーマクラミジアの血清学的亜型は主要外膜
タンパク質（ＭＯＭＰ）における抗原バリエーションに基づいて定義されている
が、公表されている肺炎クラミジアＭＯＭＰ遺伝子配列はこの微生物のいくつか
の異なる単離物の間ではバリエーションを示していない(Campbell et al (1990)
Infection and Immunity 58:93; McCafferty et al (1995) Infection and Imm
unity 63:2387-9; Knudsen et al (1996) Third Meeting of the European Soci
ety for Chlamydia Research, Vienna)。他のクラミジアのＭＯＭＰで保存され
ていることが知られているタンパク質領域は、肺炎クラミジアでも保存されてい
る(Campbell et al (1990) Infection and Immunity 58:93; McCafferty et al
(1995) Infection and Immunity 63:2387-9)。ある研究では通常の分子量よりも
大きいＭＯＭＰを有する肺炎クラミジア株が記載されているが、これについては
この遺伝子は配列決定されていない(Grayston et al. (1995) Journal of Infec
tious Diseases 168:1231)。異なる９種の単離物由来の外膜タンパク質２の部分
配列もまた不変であることが分かっている(Ramirez et al (1996) Annals of In
ternal Medicine 125:979)。予期されたようにＨＳＰ６０およびＨＳＰ７０の遺
伝子は他のクラミジア種とはほとんど変動していない。７６ｋＤａの抗原をコー
ドする遺伝子は肺炎クラミジアのただ１つの株からクローニングされたものであ
る。その他の既知のクラミジア遺伝子との有意な類似性はない(Marrie (1993) C
linical Infectious Diseases. 18:501)。
【００１７】
肺炎クラミジアに対して血清を免疫化することによって認識される多くの抗原
は総てのクラミジアにわたって保存されているが、９８ｋＤａ、７６ｋＤａおよ
び５４ｋＤａタンパク質は肺炎クラミジア特異的であると思われる(Campos et a
l. (1995) Investigation of Ophthalmology and Visual Science 36: 1477; Ma
rrie (1993) Clinical Infectious Diseases, 18:501; Wiedmann-Al-Ahmad M, e
t al. Reactions of polyclonal and neutralizing anti-p54 monoclonal antib
odies with an isolated, species-specific 54-kilodalton protein od Chlamy
dia pneumoniae, Clin Diagn Lab Immunil. 1997 Nov; 4(6): 700-704)。患者由
来の血清による単離物の免疫ブロッティングは、単離物間でブロッティングパタ
ーンにバリエーションがあることを示し、血清型肺炎クラミジアが存在し得るこ
と示している（Grayston et al.(1995)Journal of Infectious Diseases 168:12
31;Ramirez et al(1996)Annals of Internal Medicine 125:979）。しかしなが
らこの結果は、患者の血清の免疫ブロットプロフィールが感染後経時的に変化す
るので、患者の感染状態によって混乱しているかもしれない。血清型の数および
相対頻度の評価、ならびに抗原の定義は依然として可能ではない。
は総てのクラミジアにわたって保存されているが、９８ｋＤａ、７６ｋＤａおよ
び５４ｋＤａタンパク質は肺炎クラミジア特異的であると思われる(Campos et a
l. (1995) Investigation of Ophthalmology and Visual Science 36: 1477; Ma
rrie (1993) Clinical Infectious Diseases, 18:501; Wiedmann-Al-Ahmad M, e
t al. Reactions of polyclonal and neutralizing anti-p54 monoclonal antib
odies with an isolated, species-specific 54-kilodalton protein od Chlamy
dia pneumoniae, Clin Diagn Lab Immunil. 1997 Nov; 4(6): 700-704)。患者由
来の血清による単離物の免疫ブロッティングは、単離物間でブロッティングパタ
ーンにバリエーションがあることを示し、血清型肺炎クラミジアが存在し得るこ
と示している（Grayston et al.(1995)Journal of Infectious Diseases 168:12
31;Ramirez et al(1996)Annals of Internal Medicine 125:979）。しかしなが
らこの結果は、患者の血清の免疫ブロットプロフィールが感染後経時的に変化す
るので、患者の感染状態によって混乱しているかもしれない。血清型の数および
相対頻度の評価、ならびに抗原の定義は依然として可能ではない。
【００１８】
従って、クラミジア感染を予防および治療するのに用いられる治療する肺炎ク
ラミジアのポリヌクレオチド配列を同定および単離する必要性がある。
ラミジアのポリヌクレオチド配列を同定および単離する必要性がある。
【００１９】
発明の概要
本発明は、クラミジア感染を予防、治療および診断する方法に使用できる、ク
ラミジアポリペプチドをコードする精製および単離されたポリヌクレオチド分子
を提供する。本発明の１つの態様では、ポリヌクレオチド分子はポリペプチドＣ
ＰＮ１００６８６ＲＹ５４（配列番号１）、ＣＰＮ１００６９６ＲＹ−５５（配
列番号２）、ＣＰＮ１００７０９ＲＹ−５７（配列番号３）、ＣＰＮ１００７１
０ＲＹ−５８（配列番号４）、ＣＰＮ１００７１１ＲＹ−５９（配列番号５）、
ＣＰＮ１００８７７ＲＹ−６１（配列番号６）、ＣＰＮ１００３２５ＲＹ−６２
（配列番号７）、ＣＰＮ１００３６８ＲＹ−６３（配列番号８）、ＣＰＮ１００
６２４ＲＹ−６４（配列番号９）、ＣＰＮ１００６３３ＲＹ−６５（配列番号１
０）、ＣＰＮ１００９８５ＲＹ−６６（配列番号１１）、ＣＰＮ１００９８７Ｒ
Ｙ−６７（配列番号１２）およびＣＰＮ１００９８８ＲＹ−６８（配列番号１３
）をコードするＤＮＡから選択される。本発明のもう１つの態様は、単離された
ＤＮＡ分子に対応するポリペプチドを提供する。対応するコードポリペプチドの
アミノ酸配列はＣＰＮ１００６８６ＲＹ５４については配列番号１４で、ＣＰＮ
１００６９６ＲＹ−５５については配列番号１５で、ＣＰＮ１００７０９ＲＹ−
５７については配列番号１６で、ＣＰＮ１００７１０ＲＹ−５８については配列
番号１７で、ＣＰＮ１００７１１ＲＹ−５９については配列番号１８で、ＣＰＮ
１００８７ＲＹ−６１については配列番号１９で、ＣＰＮ１００３２５ＲＹ−６
２については配列番号２０で、ＣＰＮ１００３６８ＲＹ−６３については配列番
号２１で、ＣＰＮ１００６２４ＲＹ−６４については配列番号２２で、ＣＰＮ１
００６３３ＲＹ−６５については配列番号２３で、ＣＰＮ１００９８５ＲＹ−６
６については配列番号２４で、ＣＰＮ１００９８７ＲＹ−６７については配列番
号２４で、またＣＰＮ１００９８８ＲＹ−６８については配列番号２６で示され
ている。
ラミジアポリペプチドをコードする精製および単離されたポリヌクレオチド分子
を提供する。本発明の１つの態様では、ポリヌクレオチド分子はポリペプチドＣ
ＰＮ１００６８６ＲＹ５４（配列番号１）、ＣＰＮ１００６９６ＲＹ−５５（配
列番号２）、ＣＰＮ１００７０９ＲＹ−５７（配列番号３）、ＣＰＮ１００７１
０ＲＹ−５８（配列番号４）、ＣＰＮ１００７１１ＲＹ−５９（配列番号５）、
ＣＰＮ１００８７７ＲＹ−６１（配列番号６）、ＣＰＮ１００３２５ＲＹ−６２
（配列番号７）、ＣＰＮ１００３６８ＲＹ−６３（配列番号８）、ＣＰＮ１００
６２４ＲＹ−６４（配列番号９）、ＣＰＮ１００６３３ＲＹ−６５（配列番号１
０）、ＣＰＮ１００９８５ＲＹ−６６（配列番号１１）、ＣＰＮ１００９８７Ｒ
Ｙ−６７（配列番号１２）およびＣＰＮ１００９８８ＲＹ−６８（配列番号１３
）をコードするＤＮＡから選択される。本発明のもう１つの態様は、単離された
ＤＮＡ分子に対応するポリペプチドを提供する。対応するコードポリペプチドの
アミノ酸配列はＣＰＮ１００６８６ＲＹ５４については配列番号１４で、ＣＰＮ
１００６９６ＲＹ−５５については配列番号１５で、ＣＰＮ１００７０９ＲＹ−
５７については配列番号１６で、ＣＰＮ１００７１０ＲＹ−５８については配列
番号１７で、ＣＰＮ１００７１１ＲＹ−５９については配列番号１８で、ＣＰＮ
１００８７ＲＹ−６１については配列番号１９で、ＣＰＮ１００３２５ＲＹ−６
２については配列番号２０で、ＣＰＮ１００３６８ＲＹ−６３については配列番
号２１で、ＣＰＮ１００６２４ＲＹ−６４については配列番号２２で、ＣＰＮ１
００６３３ＲＹ−６５については配列番号２３で、ＣＰＮ１００９８５ＲＹ−６
６については配列番号２４で、ＣＰＮ１００９８７ＲＹ−６７については配列番
号２４で、またＣＰＮ１００９８８ＲＹ−６８については配列番号２６で示され
ている。
【００２０】
当業者ならば、クラミジアポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を
提供する限り、本発明はまたかかるペプチドに由来する断片をコードするポリヌ
クレオチドを提供することが分かるであろう。さらに、本発明は、本明細書に記
載の非必須アミノ酸の付加、欠失または置換によって生じるかかるペプチドおよ
びそれらに由来する断片の変異体および誘導体、ならびにを提供するものと理解
される。当業者ならば、本発明はクラミジアポリペプチドをコードするポリヌク
レオチド配列が提供される限り、さらにかかるポリペプチドと特異的に結合する
単一特異性抗体を提供することが容易に分かるであろう。
提供する限り、本発明はまたかかるペプチドに由来する断片をコードするポリヌ
クレオチドを提供することが分かるであろう。さらに、本発明は、本明細書に記
載の非必須アミノ酸の付加、欠失または置換によって生じるかかるペプチドおよ
びそれらに由来する断片の変異体および誘導体、ならびにを提供するものと理解
される。当業者ならば、本発明はクラミジアポリペプチドをコードするポリヌク
レオチド配列が提供される限り、さらにかかるポリペプチドと特異的に結合する
単一特異性抗体を提供することが容易に分かるであろう。
【００２１】
本発明は広い応用を有し、発現カセット、ベクターおよび本発明のポリヌクレ
オチドで形質転換またはトランスフェクトされた細胞を含む。従って、本発明は
さらに（ｉ）組換え宿主系において本発明のポリペプチドを製造する方法、なら
びに関連の発現カセット、ベクター、および形質転換またはトランスフェクト細
胞；（ii）希釈剤または担体と組み合わせた、本発明のポリヌクレオチドを含有
するワクチン、またはポックスウイルス、ネズミチフス菌(Salmonella typhimur
ium)またはコレラ菌(Viblerae cholerae)ベクターなどの生ワクチン（かかるワ
クチンおよびワクチンベクターは、例えばクラミジア感染を予防および治療する
のに有用である）、ならびに関連の医薬組成物および関連の治療および／または
予防方法；（iii）裸の形態もしくは送達ビヒクルと配合した本発明のＲＮＡま
たはＤＮＡ分子、本発明のポリペプチドもしくはポリペプチドの組合せ、または
単一特異性抗体、ならびに関連の医薬組成物の治療的および／または予防的使用
；（iv）ＤＮＡまたはＲＮＡ分子、単一特異性抗体、または本発明のポリペプチ
ドの使用を含み得る、生物学的サンプルにおけるクラミジアの存在の診断方法；
および（ｖ）抗体に基づくアフィニティークロマトグラフィーによる本発明のポ
リペプチドの精製方法を提供する。
オチドで形質転換またはトランスフェクトされた細胞を含む。従って、本発明は
さらに（ｉ）組換え宿主系において本発明のポリペプチドを製造する方法、なら
びに関連の発現カセット、ベクター、および形質転換またはトランスフェクト細
胞；（ii）希釈剤または担体と組み合わせた、本発明のポリヌクレオチドを含有
するワクチン、またはポックスウイルス、ネズミチフス菌(Salmonella typhimur
ium)またはコレラ菌(Viblerae cholerae)ベクターなどの生ワクチン（かかるワ
クチンおよびワクチンベクターは、例えばクラミジア感染を予防および治療する
のに有用である）、ならびに関連の医薬組成物および関連の治療および／または
予防方法；（iii）裸の形態もしくは送達ビヒクルと配合した本発明のＲＮＡま
たはＤＮＡ分子、本発明のポリペプチドもしくはポリペプチドの組合せ、または
単一特異性抗体、ならびに関連の医薬組成物の治療的および／または予防的使用
；（iv）ＤＮＡまたはＲＮＡ分子、単一特異性抗体、または本発明のポリペプチ
ドの使用を含み得る、生物学的サンプルにおけるクラミジアの存在の診断方法；
および（ｖ）抗体に基づくアフィニティークロマトグラフィーによる本発明のポ
リペプチドの精製方法を提供する。
【００２２】
発明の詳細な説明
クラミジアポリペプチドをコードするオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ
）を肺炎クラミジアゲノムから同定した。これらのポリペプチドには細菌膜構造
に常に見られるポリペプチド、細菌膜の表面付近に存在するポリペプチド、封入
膜構造に常に見られるポリペプチド、封入膜の表面付近に存在するポリペプチド
、および感染細胞の細胞質に放出されるポリペプチドが含まれる。これらのポリ
ペプチドを用いてクラミジア感染症を予防および治療することができる。
）を肺炎クラミジアゲノムから同定した。これらのポリペプチドには細菌膜構造
に常に見られるポリペプチド、細菌膜の表面付近に存在するポリペプチド、封入
膜構造に常に見られるポリペプチド、封入膜の表面付近に存在するポリペプチド
、および感染細胞の細胞質に放出されるポリペプチドが含まれる。これらのポリ
ペプチドを用いてクラミジア感染症を予防および治療することができる。
【００２３】
アミノ酸配列が配列番号１４で示されるポリペプチドＣＰＮ１００６８６ＲＹ
−５４は推定９８ｋＤａの外膜タンパク質であり、ポリペプチドＣＰＮ１００６
９６ＲＹ−５５（配列番号１５）は硫黄が豊富なタンパク質からなっており、ポ
リペプチドＣＰＮ１００７０９ＲＹ−５７（配列番号１６）はＡＢＣ輸送体であ
り、ポリペプチドＣＰＮ１００７１０ＲＹ−５８（配列番号１７）は付着タンパ
ク質であり、ポリペプチドＣＰＮ１００７１１ＲＹ−５９（配列番号１８）は推
定される外膜タンパク質であり、ポリペプチドＣＰＮ１００８７７ＲＹ−６１（
配列番号１９）は推定９８ｋＤａの外膜タンパク質であり、またポリペプチドＣ
ＰＮ１００３２５ＲＹ−６２（配列番号２０）、ＣＰＮ１００３６８ＲＹ−６３
（配列番号２１）、ＣＰＮ１００６２４ＲＹ−６４（配列番号２２）およびＣＰ
Ｎ１００６３３ＲＹ−６５（配列番号２３）もそうであり、ポリペプチドＣＰＮ
１００９８５ＲＹ−６６（配列番号２４）はｙｓｃＴであり、またＣＰＮ１００
９８８ＲＹ−６８（配列番号２６）はべん毛タンパク質である。
−５４は推定９８ｋＤａの外膜タンパク質であり、ポリペプチドＣＰＮ１００６
９６ＲＹ−５５（配列番号１５）は硫黄が豊富なタンパク質からなっており、ポ
リペプチドＣＰＮ１００７０９ＲＹ−５７（配列番号１６）はＡＢＣ輸送体であ
り、ポリペプチドＣＰＮ１００７１０ＲＹ−５８（配列番号１７）は付着タンパ
ク質であり、ポリペプチドＣＰＮ１００７１１ＲＹ−５９（配列番号１８）は推
定される外膜タンパク質であり、ポリペプチドＣＰＮ１００８７７ＲＹ−６１（
配列番号１９）は推定９８ｋＤａの外膜タンパク質であり、またポリペプチドＣ
ＰＮ１００３２５ＲＹ−６２（配列番号２０）、ＣＰＮ１００３６８ＲＹ−６３
（配列番号２１）、ＣＰＮ１００６２４ＲＹ−６４（配列番号２２）およびＣＰ
Ｎ１００６３３ＲＹ−６５（配列番号２３）もそうであり、ポリペプチドＣＰＮ
１００９８５ＲＹ−６６（配列番号２４）はｙｓｃＴであり、またＣＰＮ１００
９８８ＲＹ−６８（配列番号２６）はべん毛タンパク質である。
【００２４】
本発明の第１の態様によれば、アミノ酸配列が配列番号１４〜２６からなる群
から選択されるクラミジアポリペプチド前駆体および成熟形をコードする単離さ
れたポリヌクレオチドを提供する。
から選択されるクラミジアポリペプチド前駆体および成熟形をコードする単離さ
れたポリヌクレオチドを提供する。
【００２５】
「単離されたポリヌクレオチド」とは、天然に存在する環境から取り出された
ポリヌクレオチドと定義される。例えば生細菌のゲノム中、または遺伝子バンク
の一部として存在する天然ＤＮＡ分子は単離されないが、細菌ゲノムの残存部分
から同分子は分離される、例えばクローニング（増幅）の結果として単離される
。典型的には単離されたＤＮＡ分子は天然に存在するゲノムの５’または３’末
端にすぐ隣接するＤＮＡ領域（例えばコドン領域）から遊離している。かかる単
離ポリヌクレオチドはベクターまたは組成物の一部であってよいが、かかるベク
ターまたは組成物がかかるポリヌクレオチドの自然環境の一部ではないというこ
とから「単離された」と定義される。
ポリヌクレオチドと定義される。例えば生細菌のゲノム中、または遺伝子バンク
の一部として存在する天然ＤＮＡ分子は単離されないが、細菌ゲノムの残存部分
から同分子は分離される、例えばクローニング（増幅）の結果として単離される
。典型的には単離されたＤＮＡ分子は天然に存在するゲノムの５’または３’末
端にすぐ隣接するＤＮＡ領域（例えばコドン領域）から遊離している。かかる単
離ポリヌクレオチドはベクターまたは組成物の一部であってよいが、かかるベク
ターまたは組成物がかかるポリヌクレオチドの自然環境の一部ではないというこ
とから「単離された」と定義される。
【００２６】
本発明のポリヌクレオチドはＲＮＡまたはＤＮＡ（ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡま
たは合成ＤＮＡ）のいずれか、またはその改変体、変異体、相同体もしくは断片
である。ＤＮＡは二本鎖または一本鎖のいずれかであり、一本鎖であれば、コー
ド鎖または非コード（アンチセンス）鎖のいずれかである。配列番号１〜１３で
示される本発明のポリペプチドをコードする配列のいずれか１つが、（ａ）コー
ド配列、（ｂ）（ａ）の転写により誘導されるリボヌクレオチド配列、または（
ｃ）遺伝子コードの重複または縮重により同じポリペプチドをコードするコード
配列である。「ポリペプチド」または「タンパク質」とは、長さまたは翻訳後修
飾（例えばグリコシル化またはリン酸化）にかかわらず、いずれのアミノ酸鎖を
も意味する。本願では両用語を相互に使用してもよい。
たは合成ＤＮＡ）のいずれか、またはその改変体、変異体、相同体もしくは断片
である。ＤＮＡは二本鎖または一本鎖のいずれかであり、一本鎖であれば、コー
ド鎖または非コード（アンチセンス）鎖のいずれかである。配列番号１〜１３で
示される本発明のポリペプチドをコードする配列のいずれか１つが、（ａ）コー
ド配列、（ｂ）（ａ）の転写により誘導されるリボヌクレオチド配列、または（
ｃ）遺伝子コードの重複または縮重により同じポリペプチドをコードするコード
配列である。「ポリペプチド」または「タンパク質」とは、長さまたは翻訳後修
飾（例えばグリコシル化またはリン酸化）にかかわらず、いずれのアミノ酸鎖を
も意味する。本願では両用語を相互に使用してもよい。
【００２７】
本発明の第１の態様によれば、配列番号１４〜２６のいずれか１つと相同なア
ミノ酸配列が提供される。本明細書において使用される「相同アミノ酸配列」と
は、臨界融解温度（Ｔｍ）を超えない２５〜３５℃において、配列番号１〜１３
の核酸配列のいずれの部分ともハイブリダイズする核酸配列によって総てまたは
一部がコードされるいずれかのポリペプチドである。相同アミノ酸配列は配列番
号１３〜２６のいずれか１つで示されるアミノ酸配列と１つ以上の保存的アミノ
酸置換に関して異なるものである。またかかる配列は血清型変異体（下記）なら
びに免疫原性などのポリペプチド本来の特徴を維持する、欠失または挿入を含む
配列も包含する。かかる配列は配列番号１４〜２６のいずれか１つと好ましくは
少なくとも７５％、さらに好ましくは８０％、および最も好ましくは９０％同一
である。 相同アミノ酸配列には配列番号１４〜２６と同一または実質的に同一の配列が
挙げられる。「実質的に同一のアミノ酸配列」とは、参照アミノ酸配列と少なく
とも９０％、好ましくは９５％、さらに好ましくは９７％、および最も好ましく
は９９％同一であり、かつ好ましくは参照配列と大部分の保存的アミノ酸置換に
関して異なる配列を意味する。
ミノ酸配列が提供される。本明細書において使用される「相同アミノ酸配列」と
は、臨界融解温度（Ｔｍ）を超えない２５〜３５℃において、配列番号１〜１３
の核酸配列のいずれの部分ともハイブリダイズする核酸配列によって総てまたは
一部がコードされるいずれかのポリペプチドである。相同アミノ酸配列は配列番
号１３〜２６のいずれか１つで示されるアミノ酸配列と１つ以上の保存的アミノ
酸置換に関して異なるものである。またかかる配列は血清型変異体（下記）なら
びに免疫原性などのポリペプチド本来の特徴を維持する、欠失または挿入を含む
配列も包含する。かかる配列は配列番号１４〜２６のいずれか１つと好ましくは
少なくとも７５％、さらに好ましくは８０％、および最も好ましくは９０％同一
である。 相同アミノ酸配列には配列番号１４〜２６と同一または実質的に同一の配列が
挙げられる。「実質的に同一のアミノ酸配列」とは、参照アミノ酸配列と少なく
とも９０％、好ましくは９５％、さらに好ましくは９７％、および最も好ましく
は９９％同一であり、かつ好ましくは参照配列と大部分の保存的アミノ酸置換に
関して異なる配列を意味する。
【００２８】
保存的アミノ酸置換は同種類のアミノ酸間の置換である。これらの種類には、
例えばアスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、およびチロシンのよう
な非荷電極性側鎖を有するアミノ酸；リジン、アルギニン、およびヒスチジンの
ような塩基性側鎖を有するアミノ酸；アスパラギン酸、およびグルタミン酸のよ
うな酸性側鎖を有するアミノ酸；およびグリシン、アラニン、バリン、ロイシン
、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、
およびシステインのような非極性側鎖を有するアミノ酸が挙げられる。
例えばアスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、およびチロシンのよう
な非荷電極性側鎖を有するアミノ酸；リジン、アルギニン、およびヒスチジンの
ような塩基性側鎖を有するアミノ酸；アスパラギン酸、およびグルタミン酸のよ
うな酸性側鎖を有するアミノ酸；およびグリシン、アラニン、バリン、ロイシン
、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、
およびシステインのような非極性側鎖を有するアミノ酸が挙げられる。
【００２９】
相同性はGenetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology
Center, 1710 University Avenue, Madison, WI 53705のSequence Analysis So
ftware Packageのような配列解析ソフトウェアを用いて求められる。アミノ酸配
列を同一性が最大となるように配列する。配列に人為的にギャップを挿入し適当
な配列を得てもよい。ひと度最適なアライメントが設定されれば、全位置数に対
し、両配列のアミノ酸が一致する位置を総て記録することにより相同性の程度が
確認される。
Center, 1710 University Avenue, Madison, WI 53705のSequence Analysis So
ftware Packageのような配列解析ソフトウェアを用いて求められる。アミノ酸配
列を同一性が最大となるように配列する。配列に人為的にギャップを挿入し適当
な配列を得てもよい。ひと度最適なアライメントが設定されれば、全位置数に対
し、両配列のアミノ酸が一致する位置を総て記録することにより相同性の程度が
確認される。
【００３０】
同様に相同ポリヌクレオチド配列も定義される。相同配列はコード配列配列番
号１〜１３のいずれか１つと好ましくは少なくとも４５％、さらに好ましくは６
０％、および最も好ましくは８５％同一のものである。
号１〜１３のいずれか１つと好ましくは少なくとも４５％、さらに好ましくは６
０％、および最も好ましくは８５％同一のものである。
【００３１】
本発明の第１の態様によれば、配列番号１４〜２６のいずれか１つと相同な配
列を有するポリペプチドには、天然に存在する対立遺伝子変異体、ならびに配列
番号１４〜２６のポリペプチド本来の特徴を維持する変異体または天然には存在
しないいずれの他の変異体も包含される。
列を有するポリペプチドには、天然に存在する対立遺伝子変異体、ならびに配列
番号１４〜２６のポリペプチド本来の特徴を維持する変異体または天然には存在
しないいずれの他の変異体も包含される。
【００３２】
当技術分野では公知であるように、対立遺伝子変異体はポリペプチドの生物学
的機能を変更しない、１つ以上のアミノ酸の置換、欠失または付加を有すること
を特徴とするポリペプチドのもう１つの形態である。「生物学的機能」とは、た
とえその機能が細胞の増殖または生存に必要でなくとも、それが天然に存在する
細胞におけるポリペプチドの機能を意味する。例えばポーリンの生物学的機能は
細胞外媒質に存在する化合物を細胞へ侵入させることである。生物学的機能は抗
原性特性とは性質が異なる。ポリペプチドは１以上の生物学的機能を有し得る。
的機能を変更しない、１つ以上のアミノ酸の置換、欠失または付加を有すること
を特徴とするポリペプチドのもう１つの形態である。「生物学的機能」とは、た
とえその機能が細胞の増殖または生存に必要でなくとも、それが天然に存在する
細胞におけるポリペプチドの機能を意味する。例えばポーリンの生物学的機能は
細胞外媒質に存在する化合物を細胞へ侵入させることである。生物学的機能は抗
原性特性とは性質が異なる。ポリペプチドは１以上の生物学的機能を有し得る。
【００３３】
対立遺伝子変異体は本来極めて一般的なものである。例えば肺炎クラミジアな
どの細菌種は通常対立遺伝子の小さな変化に関し互いに異なる種々の株で表され
る。実際、異なる株において同じ生物学的機能を果たすポリペプチドはそれぞれ
の株で同一でないアミノ酸配列（およびポリヌクレオチド配列）を有していても
よい。この変動にかかわらず、一般に多くの対立遺伝子変異体に対して向けられ
た免疫応答が実証されている。クラミジアＭＯＭＰ抗原の研究では、株間のＭＯ
ＭＰのアミノ酸配列の変化にかかわらず、雑種株抗体結合が起こるとともに感染
力の中和がなされ、免疫原として用いた際に、ＭＯＭＰがアミノ酸変化を許容す
ることが示される。
どの細菌種は通常対立遺伝子の小さな変化に関し互いに異なる種々の株で表され
る。実際、異なる株において同じ生物学的機能を果たすポリペプチドはそれぞれ
の株で同一でないアミノ酸配列（およびポリヌクレオチド配列）を有していても
よい。この変動にかかわらず、一般に多くの対立遺伝子変異体に対して向けられ
た免疫応答が実証されている。クラミジアＭＯＭＰ抗原の研究では、株間のＭＯ
ＭＰのアミノ酸配列の変化にかかわらず、雑種株抗体結合が起こるとともに感染
力の中和がなされ、免疫原として用いた際に、ＭＯＭＰがアミノ酸変化を許容す
ることが示される。
【００３４】
相同ポリペプチドまたは対立遺伝子変異体をコードするポリヌクレオチドは、
常法により抽出されたゲノム細菌ＤＮＡのポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）増幅法
によって回収される。これにはコードドメインの５’および３’末端の上流およ
び下流に適合する合成オリゴヌクレオチドプライマーの使用が含まれる。好適な
プライマーは配列番号１〜１３で提供されるヌクレオチド配列情報により設計さ
れる。その工程は次の通りである：１０〜４０個、好ましくは１５〜２５個のヌ
クレオチドからなるプライマーを選択する。効率的なハイブリダイゼーションを
確実にするのに十分な比率でＣおよびＧを含有する、すなわちＣおよびＧヌクレ
オチド量が全ヌクレオチド含量の少なくとも４０％、好ましくは５０％である、
プライマーを選択することが有利である。標準的なＰＣＲ反応には典型的には１
００μＬにつき０．５〜５単位のＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼ、２０〜２００μ
Ｍの各デオキシヌクレオチド（好ましくは同濃度）、全デオキシヌクレオチド濃
度にわたって０．５〜２．５ＭＭのマグネシウム、１０５〜１０６の標的分子、
および約２０ｐｍｏｌの各プライマーが含まれる。ＰＣＲサイクルは約２５〜５
０回行い、アニーリング温度は１５℃〜プライマーの真の温度より５℃低い温度
とした。よりストリンジェントなアニーリング温度にすると誤ってアニーリング
したプライマーの識別が向上し、プライマーの３’末端への誤ったヌクレオチド
の組み込みが少なくなる。変性温度は９５℃〜９７℃が典型であるが、Ｇ＋Ｃ豊
富な標的の変性についてはより高い温度が適当であろう。実施するサイクル数は
最初の標的分子の濃度にもよるが、典型的には特異的でないバックグラウンド産
物が集積する傾向にあるので、４０サイクルを超えない方がよい。
常法により抽出されたゲノム細菌ＤＮＡのポリメラーゼ鎖反応（ＰＣＲ）増幅法
によって回収される。これにはコードドメインの５’および３’末端の上流およ
び下流に適合する合成オリゴヌクレオチドプライマーの使用が含まれる。好適な
プライマーは配列番号１〜１３で提供されるヌクレオチド配列情報により設計さ
れる。その工程は次の通りである：１０〜４０個、好ましくは１５〜２５個のヌ
クレオチドからなるプライマーを選択する。効率的なハイブリダイゼーションを
確実にするのに十分な比率でＣおよびＧを含有する、すなわちＣおよびＧヌクレ
オチド量が全ヌクレオチド含量の少なくとも４０％、好ましくは５０％である、
プライマーを選択することが有利である。標準的なＰＣＲ反応には典型的には１
００μＬにつき０．５〜５単位のＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼ、２０〜２００μ
Ｍの各デオキシヌクレオチド（好ましくは同濃度）、全デオキシヌクレオチド濃
度にわたって０．５〜２．５ＭＭのマグネシウム、１０５〜１０６の標的分子、
および約２０ｐｍｏｌの各プライマーが含まれる。ＰＣＲサイクルは約２５〜５
０回行い、アニーリング温度は１５℃〜プライマーの真の温度より５℃低い温度
とした。よりストリンジェントなアニーリング温度にすると誤ってアニーリング
したプライマーの識別が向上し、プライマーの３’末端への誤ったヌクレオチド
の組み込みが少なくなる。変性温度は９５℃〜９７℃が典型であるが、Ｇ＋Ｃ豊
富な標的の変性についてはより高い温度が適当であろう。実施するサイクル数は
最初の標的分子の濃度にもよるが、典型的には特異的でないバックグラウンド産
物が集積する傾向にあるので、４０サイクルを超えない方がよい。
【００３５】
相同ポリペプチドまたは対立遺伝子変異体をコードするポリヌクレオチドを回
収する別法としては、ＤＮＡまたはＲＮＡライブラリーのハイブリダイゼーショ
ンスクリーニングによるものがある。ハイブリダイゼーション手順は当技術分野
では十分に知られており、Ausubel et al., (Ausubel et al., Current Protoco
ls in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc., 1994), Silhavy et al. (
Silhavy et al., Experiments with Gene Fusions, Cold Spring harbor Labora
tory press, 1984)、およびDavis et al. (Davis et al. A Manual for Genetic
Engineering: Advanced Bacterial Genetics, Cold Spring harbor Laboratory
Press, 1980)に記載されている。ハイブリダイゼーション条件を至適化する重
要なパラメーターは、その温度を超えると２本の相補ＤＮＡ鎖が互いに分離する
臨界融解温度を得るのに用いる式で表される(Casey & Davidson, nucl. Acid Re
s. (1977)4:1539)。約６００個以上のヌクレオチドでなるポリヌクレオチドの場
合、この式は次の通りである：Ｔｍ＝８１．５＋０．５ｘ（％Ｇ＋Ｃ）＋１．６
ｌｏｇ（陽イオン濃度）−０．６ｘ（％ホルムアミド）。
収する別法としては、ＤＮＡまたはＲＮＡライブラリーのハイブリダイゼーショ
ンスクリーニングによるものがある。ハイブリダイゼーション手順は当技術分野
では十分に知られており、Ausubel et al., (Ausubel et al., Current Protoco
ls in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc., 1994), Silhavy et al. (
Silhavy et al., Experiments with Gene Fusions, Cold Spring harbor Labora
tory press, 1984)、およびDavis et al. (Davis et al. A Manual for Genetic
Engineering: Advanced Bacterial Genetics, Cold Spring harbor Laboratory
Press, 1980)に記載されている。ハイブリダイゼーション条件を至適化する重
要なパラメーターは、その温度を超えると２本の相補ＤＮＡ鎖が互いに分離する
臨界融解温度を得るのに用いる式で表される(Casey & Davidson, nucl. Acid Re
s. (1977)4:1539)。約６００個以上のヌクレオチドでなるポリヌクレオチドの場
合、この式は次の通りである：Ｔｍ＝８１．５＋０．５ｘ（％Ｇ＋Ｃ）＋１．６
ｌｏｇ（陽イオン濃度）−０．６ｘ（％ホルムアミド）。
【００３６】
好適なストリンジェント条件下では、ハイブリダイゼーション温度（Ｔｈ）は
約２０〜４０℃、２０〜２５℃、または好ましくは計算値Ｔｍを超えない３０〜
４０℃である。最適温度および塩条件が容易に求め得ることは当業者には明らか
であろう。
約２０〜４０℃、２０〜２５℃、または好ましくは計算値Ｔｍを超えない３０〜
４０℃である。最適温度および塩条件が容易に求め得ることは当業者には明らか
であろう。
【００３７】
本発明のポリヌクレオチドに関しては（ｉ）４２℃で４〜１６時間以内、６×
５０％ホルムアミド含有ＳＳＣにおける、または（ii）６５℃で４〜１６時間以
内、６×ＳＳＣ水溶液（１Ｍ ＮａＣｌ、０．１Ｍクエン酸ナトリウム（ｐＨ７
．０））における、プレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイズインキュ
ベーション双方の間にストリンジェント条件に達する。
５０％ホルムアミド含有ＳＳＣにおける、または（ii）６５℃で４〜１６時間以
内、６×ＳＳＣ水溶液（１Ｍ ＮａＣｌ、０．１Ｍクエン酸ナトリウム（ｐＨ７
．０））における、プレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイズインキュ
ベーション双方の間にストリンジェント条件に達する。
【００３８】
天然には存在しない有用な相同体およびその断片は、アミノ酸配列変化および
／または欠失を許容すると思われる抗原の領域を同定する公知の方法を用いて設
計される。例として、異なる種由来の相同ポリペプチドを比較し、保存された配
列を同定することを挙げる。さらに分岐した配列が最も配列変化を許容すると考
えられる。配列間の相同性は、Altschul et al., Nucleic Acids Res.25:3389-3
402(1997)のＢＬＡＳＴホモロジーサーチアルゴリズムを用いて解析してもよい
。別法としては、配列がＴおよび／またはＢ細胞とより反応性を有するようにそ
れらを改変する。（ＴおよびＢエピトープの同定に関する図１１〜１５参照）さ
らにもう１つの別法ではin vitroにおいてポリペプチド内のある特定のアミノ酸
残基または配列を変異させ、次いでのその変異ポリペプチドを、以下に概略を記
した方法によりクラミジア感染症を予防または治療する能力についてスクリーニ
ングする。
／または欠失を許容すると思われる抗原の領域を同定する公知の方法を用いて設
計される。例として、異なる種由来の相同ポリペプチドを比較し、保存された配
列を同定することを挙げる。さらに分岐した配列が最も配列変化を許容すると考
えられる。配列間の相同性は、Altschul et al., Nucleic Acids Res.25:3389-3
402(1997)のＢＬＡＳＴホモロジーサーチアルゴリズムを用いて解析してもよい
。別法としては、配列がＴおよび／またはＢ細胞とより反応性を有するようにそ
れらを改変する。（ＴおよびＢエピトープの同定に関する図１１〜１５参照）さ
らにもう１つの別法ではin vitroにおいてポリペプチド内のある特定のアミノ酸
残基または配列を変異させ、次いでのその変異ポリペプチドを、以下に概略を記
した方法によりクラミジア感染症を予防または治療する能力についてスクリーニ
ングする。
【００３９】
当業者ならば、本発明のスクリーニングプロセスに従うことによって配列番号
１４〜２６のいずれかのある特定の相同体がクラミジア感染症の予防または治療
に有用であるかを過度な実験を行うことなく求められることが容易に理解される
であろう。
１４〜２６のいずれかのある特定の相同体がクラミジア感染症の予防または治療
に有用であるかを過度な実験を行うことなく求められることが容易に理解される
であろう。
【００４０】
スクリーニング手順は
（ｉ）動物、好ましくはマウスを試験相同体または断片により免疫化し；
（ii）免疫化した動物にクラミジアを接種し；さらに
（iii）クラミジアに対する感染防御を付与するそれらの相同体または断片を
選択する 工程を含んでなる。
選択する 工程を含んでなる。
【００４１】
「感染防御を付与する」とは、試験相同体または断片で免疫化していない対照
動物と比べた場合のクラミジア感染症のいずれかの影響の重篤度の軽減を意味す
る。
動物と比べた場合のクラミジア感染症のいずれかの影響の重篤度の軽減を意味す
る。
【００４２】
マウスが肺炎クラミジアの異なる単離体によって鼻腔内感染しやすいことはす
でに実証されている(Yang et al., Z.P.,Chi, E.Y., Kuo, C.C. and Grayston,
J.T.1993. A mouse model of C. pneumoniae strain TWAR pneumonitis. 61(5):
2037-2040)。攻撃感染モデルとしてＡＲ−３９株(Chi, E.Y., Kuo, C.C. and Gr
ayston, J.T.1987. Unique ultrastructure in the elementary body of Chlamy
dia sp. strain TWAR. J. Bacteriol. 169(8):3757-63)をＢａｌｂ／ｃマウスに
用い、裸のＤＮＡとして送達されるクラミジア遺伝子産物の、致死下肺炎クラミ
ジア肺感染に対する防御応答を誘導する能力を調べた。感染防御免疫とは、肺感
染の加速されたクリアランスであると定義される。
でに実証されている(Yang et al., Z.P.,Chi, E.Y., Kuo, C.C. and Grayston,
J.T.1993. A mouse model of C. pneumoniae strain TWAR pneumonitis. 61(5):
2037-2040)。攻撃感染モデルとしてＡＲ−３９株(Chi, E.Y., Kuo, C.C. and Gr
ayston, J.T.1987. Unique ultrastructure in the elementary body of Chlamy
dia sp. strain TWAR. J. Bacteriol. 169(8):3757-63)をＢａｌｂ／ｃマウスに
用い、裸のＤＮＡとして送達されるクラミジア遺伝子産物の、致死下肺炎クラミ
ジア肺感染に対する防御応答を誘導する能力を調べた。感染防御免疫とは、肺感
染の加速されたクリアランスであると定義される。
【００４３】
７〜９週齢雄Ｂａｌｂ／ｃマウスの群（各群６〜１０匹）を、肺炎クラミジア
ポリペプチドのコード配列を含有するプラスミドＤＮＡにより筋肉内（ｉ．ｍ．
）および鼻腔内（ｉ．ｎ．）にて免疫化した。対照動物群には塩水または挿入し
たクラミジア遺伝子を欠いたプラスミドベクターを与えた。
ポリペプチドのコード配列を含有するプラスミドＤＮＡにより筋肉内（ｉ．ｍ．
）および鼻腔内（ｉ．ｎ．）にて免疫化した。対照動物群には塩水または挿入し
たクラミジア遺伝子を欠いたプラスミドベクターを与えた。
【００４４】
筋肉内免疫化では左右四頭筋に交互に、ＰＢＳ ５０μｌ中のＤＮＡ１００μ
ｇを０、３および６週目に３度注入した。
ｇを０、３および６週目に３度注入した。
【００４５】
鼻腔内免疫化では麻酔をかけたマウスにＤＮＡ５０μｇを含有するＰＢＳ ５
０μｌを０、３および６週目に３度吸引させた。８週目、免疫化したマウスにＳ
ＰＧバッファー１００μｌ中の肺炎クラミジア、ＡＲ３９株５×１０５ＩＦＵを
接種して致死下肺炎クラミジア抗原投与の増殖を制限する能力を調べた。
０μｌを０、３および６週目に３度吸引させた。８週目、免疫化したマウスにＳ
ＰＧバッファー１００μｌ中の肺炎クラミジア、ＡＲ３９株５×１０５ＩＦＵを
接種して致死下肺炎クラミジア抗原投与の増殖を制限する能力を調べた。
【００４６】
抗原投与９日目にマウスから肺を摘出し、直ちにＳＰＧバッファー（７．５％
スクロース、５ｍＭグルタミン酸塩、１２．５ｍＭリン酸塩 ｐＨ７．５）でホ
モジネートした。このホモジネートはアッセイまで−７０℃で凍結保存した。ホ
モジネートの希釈物を感受性細胞の単層へ接種して感染性クラミジアの存在につ
いてアッセイした。接種物を３０００ｒｐｍで１時間、細胞上へ遠心分離し、次
いでこの細胞をシクロヘキシミド１μｇ／ｍｌの存在下、３５℃で３日間インキ
ュベートした。インキュベーション後、単層をホルマリンおよびメタノールで固
定し、次いで肺炎クラミジアに感染したウサギ由来の回復期血清とペルオキシダ
ーゼ基質としての金属により増強されたＤＡＢを用いてクラミジア封入体の存在
を免疫ペルオキシダーゼ染色した。
スクロース、５ｍＭグルタミン酸塩、１２．５ｍＭリン酸塩 ｐＨ７．５）でホ
モジネートした。このホモジネートはアッセイまで−７０℃で凍結保存した。ホ
モジネートの希釈物を感受性細胞の単層へ接種して感染性クラミジアの存在につ
いてアッセイした。接種物を３０００ｒｐｍで１時間、細胞上へ遠心分離し、次
いでこの細胞をシクロヘキシミド１μｇ／ｍｌの存在下、３５℃で３日間インキ
ュベートした。インキュベーション後、単層をホルマリンおよびメタノールで固
定し、次いで肺炎クラミジアに感染したウサギ由来の回復期血清とペルオキシダ
ーゼ基質としての金属により増強されたＤＡＢを用いてクラミジア封入体の存在
を免疫ペルオキシダーゼ染色した。
【００４７】
本発明の第１の態様によれば、配列番号１４〜２６の部分配列、配列番号１４
〜２６と相同なポリペプチド配列の部分配列、内部欠失により全長ポリペプチド
から誘導されたポリペプチド、および融合タンパク質であるポリペプチド誘導体
が提供される。
〜２６と相同なポリペプチド配列の部分配列、内部欠失により全長ポリペプチド
から誘導されたポリペプチド、および融合タンパク質であるポリペプチド誘導体
が提供される。
【００４８】
タンパク質に対する免疫応答を誘導するのに必要とされるものは総てタンパク
質の小さな（例えば８〜１０個のアミノ酸）免疫原性領域であるため、ワクチン
としてタンパク質免疫原の断片および変異体を使用することは免疫学の分野では
一般に認られた慣例である。クラミジア以外の病原体の表面に曝された抗原に対
応する種々の短い合成ペプチドがそれぞれの病原体、例えばネズミ乳癌ウイルス
の１１残基ペプチド(Casey & Davidson, Mucl. Acid Res.(1977)4:1539)、セム
リキ森林ウイルスの１６残基ペプチド(Snijders et al., 1991. J. Gen.Virol.
72:557-565)、およびイヌパルボウイルス由来の１５残基各々の２つの重複ペプ
チド(Langeveld et al., Vaccine 12(15):1473-1480(1994))に対する有効なワク
チン抗原であることが分かっている。
質の小さな（例えば８〜１０個のアミノ酸）免疫原性領域であるため、ワクチン
としてタンパク質免疫原の断片および変異体を使用することは免疫学の分野では
一般に認られた慣例である。クラミジア以外の病原体の表面に曝された抗原に対
応する種々の短い合成ペプチドがそれぞれの病原体、例えばネズミ乳癌ウイルス
の１１残基ペプチド(Casey & Davidson, Mucl. Acid Res.(1977)4:1539)、セム
リキ森林ウイルスの１６残基ペプチド(Snijders et al., 1991. J. Gen.Virol.
72:557-565)、およびイヌパルボウイルス由来の１５残基各々の２つの重複ペプ
チド(Langeveld et al., Vaccine 12(15):1473-1480(1994))に対する有効なワク
チン抗原であることが分かっている。
【００４９】
従って本記載により、配列番号１４〜２６の部分配列またはその相同アミノ酸
配列が全長配列固有のものであり、本発明により教示されることは当業者には容
易に理解されるであろう。かかるポリペプチド断片の長さは少なくとも１２個の
アミノ酸であることが好ましい。それらの長さが少なくとも２０個のアミノ酸、
好ましくは少なくとも５０個のアミノ酸、さらに好ましくは少なくとも７５個の
アミノ酸、およびさらに好ましくは少なくとも１００個のアミノ酸であることが
有利である。
配列が全長配列固有のものであり、本発明により教示されることは当業者には容
易に理解されるであろう。かかるポリペプチド断片の長さは少なくとも１２個の
アミノ酸であることが好ましい。それらの長さが少なくとも２０個のアミノ酸、
好ましくは少なくとも５０個のアミノ酸、さらに好ましくは少なくとも７５個の
アミノ酸、およびさらに好ましくは少なくとも１００個のアミノ酸であることが
有利である。
【００５０】
配列番号１４〜２６と相同な配列の部分配列をコードする３０〜６００個のヌ
クレオチドからなるポリヌクレオチドは、以下に概略を記したパラメーターを用
い、かつ増幅される断片の５’および３’末端の上流および下流の配列に適合す
るプライマーを使用するＰＣＲ増幅法により回収される。かかる増幅物の鋳型ポ
リヌクレオチドは配列番号１〜１３の１つと相同な全長ポリヌクレオチド、また
はＤＮＡまたはＲＮＡライブラリーなどのポリヌクレオチド混合物に含まれるポ
リヌクレオチドのいずれかである。部分配列を回収する別法としては、上記の条
件下においてＴｍの計算式を用いてスクリーニングハイブリダイゼーションを行
う。３０〜６００個のヌクレオチドからなる断片を回収する場合、計算値Ｔｍを
減法（６００／塩基対のポリヌクレオチドサイズ）により補正し、ストリンジェ
ント条件をＴｍを超えない５〜１０℃であるハイブリダイゼーション温度で定義
する。２０〜３０塩基より短いオリゴヌクレオチドを得る場合、Ｔｍの計算式は
次の通りである：Ｔｍ＝４ｘ（Ｇ＋Ｃ）＋２（Ａ＋Ｔ）。例えば、５０％Ｃ＋Ｇ
の１８個のヌクレオチド断片は約５４℃のＴｍを有するであろう。配列番号１４
〜２６の断片またはその相同配列である短いペプチドは化学合成(E. Gross and
H. J. Meinhofer, 4 The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology; Modern Te
chniques of Peptide Synthesis, John Wiley & Sons (1981)、およびM. Bodanz
ki, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag (1984))により直接得
られる。
クレオチドからなるポリヌクレオチドは、以下に概略を記したパラメーターを用
い、かつ増幅される断片の５’および３’末端の上流および下流の配列に適合す
るプライマーを使用するＰＣＲ増幅法により回収される。かかる増幅物の鋳型ポ
リヌクレオチドは配列番号１〜１３の１つと相同な全長ポリヌクレオチド、また
はＤＮＡまたはＲＮＡライブラリーなどのポリヌクレオチド混合物に含まれるポ
リヌクレオチドのいずれかである。部分配列を回収する別法としては、上記の条
件下においてＴｍの計算式を用いてスクリーニングハイブリダイゼーションを行
う。３０〜６００個のヌクレオチドからなる断片を回収する場合、計算値Ｔｍを
減法（６００／塩基対のポリヌクレオチドサイズ）により補正し、ストリンジェ
ント条件をＴｍを超えない５〜１０℃であるハイブリダイゼーション温度で定義
する。２０〜３０塩基より短いオリゴヌクレオチドを得る場合、Ｔｍの計算式は
次の通りである：Ｔｍ＝４ｘ（Ｇ＋Ｃ）＋２（Ａ＋Ｔ）。例えば、５０％Ｃ＋Ｇ
の１８個のヌクレオチド断片は約５４℃のＴｍを有するであろう。配列番号１４
〜２６の断片またはその相同配列である短いペプチドは化学合成(E. Gross and
H. J. Meinhofer, 4 The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology; Modern Te
chniques of Peptide Synthesis, John Wiley & Sons (1981)、およびM. Bodanz
ki, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag (1984))により直接得
られる。
【００５１】
有用なポリペプチド誘導体、例えばポリペプチド断片をアミノ酸配列のコンピ
ューター支援解析を用いて設計する。これにより表面に曝された有望な抗原性領
域が同定される(Hughes et al., 1992. Infect.Immun.60(9):3497)。プログラム
ＳＥＱＳＥＥ(Wishart DS, et al., “ＳＥＱＳＥＥ：タンパク質配列解析に適
した総合プログラム” Comput Appl Biosci. 1994 Apr; 10 (2): 121-32)を使用
する、産物の順応性および疎水性に基づく配列番号２７〜４５にある１３個のア
ミノ酸配列の解析では、有用な免疫原性断片および変異体を選択する基準として
使用してもよい、可能性ある多数のＢおよびＴ細胞エピトープが明らかとなる。
この結果は図１１〜１５に示す。この解析では抗体により認識されると考えられ
る外面特徴の適当な組合せを使用する。ＨＬＡ−Ａ０２０１ ＭＨＣサブクラス
の有望なＴ細胞エピトープがＮＩＨで開発されたアプローチとエミュレートする
、Connaught Laboratoriesで記録されたアルゴリズムにより明らかとなった(Par
ker KC, et al. "Peptide binding to MHC class I molecules: implications f
or antigenic peptide prediction." Immunol Res 1995; 14 (1) 34-57)。
ューター支援解析を用いて設計する。これにより表面に曝された有望な抗原性領
域が同定される(Hughes et al., 1992. Infect.Immun.60(9):3497)。プログラム
ＳＥＱＳＥＥ(Wishart DS, et al., “ＳＥＱＳＥＥ：タンパク質配列解析に適
した総合プログラム” Comput Appl Biosci. 1994 Apr; 10 (2): 121-32)を使用
する、産物の順応性および疎水性に基づく配列番号２７〜４５にある１３個のア
ミノ酸配列の解析では、有用な免疫原性断片および変異体を選択する基準として
使用してもよい、可能性ある多数のＢおよびＴ細胞エピトープが明らかとなる。
この結果は図１１〜１５に示す。この解析では抗体により認識されると考えられ
る外面特徴の適当な組合せを使用する。ＨＬＡ−Ａ０２０１ ＭＨＣサブクラス
の有望なＴ細胞エピトープがＮＩＨで開発されたアプローチとエミュレートする
、Connaught Laboratoriesで記録されたアルゴリズムにより明らかとなった(Par
ker KC, et al. "Peptide binding to MHC class I molecules: implications f
or antigenic peptide prediction." Immunol Res 1995; 14 (1) 34-57)。
【００５２】
感染防御Ｔ細胞依存性免疫応答を誘導するエピトープはポリペプチドの長さの
範囲全体に存在する。しかしながら、いくつかのエピトープはポリペプチドの２
次および３次構造によりマスクされる。かかるマスクされたエピトープを明らか
にするため、大きな内部欠失を引き起こし、それによってもとのタンパク質構造
の大部分を取り除いてマスクされたエピトープを露出させる。かかる内部欠失は
時に株間の高変異性の免疫優性領域を取り去るという付加的な利点をもたらす。
ポリペプチド断片をコードするポリヌクレオチドおよび大きな内部欠失を有する
およびポリペプチドを常法により構築する(Ausubel et al., Current Protocols
in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc., 1994)。かかる方法には標準
ＰＣＲ、逆ＰＣＲ、クローニングしたＤＮＡ分子の制限酵素処理、またはKunkel
et al.(Kunkel et al., Proc. Natl. Acad.Sci.USA (1985)82:448)の方法が挙
げられる。これらの方法の成分およびその使用説明書はStratageneなどの様々な
販売元から容易に入手可能である。ひと度欠失変異体を構築すれば、それらを上
記のようにクラミジア感染症を予防または治療する能力について調べる。
範囲全体に存在する。しかしながら、いくつかのエピトープはポリペプチドの２
次および３次構造によりマスクされる。かかるマスクされたエピトープを明らか
にするため、大きな内部欠失を引き起こし、それによってもとのタンパク質構造
の大部分を取り除いてマスクされたエピトープを露出させる。かかる内部欠失は
時に株間の高変異性の免疫優性領域を取り去るという付加的な利点をもたらす。
ポリペプチド断片をコードするポリヌクレオチドおよび大きな内部欠失を有する
およびポリペプチドを常法により構築する(Ausubel et al., Current Protocols
in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc., 1994)。かかる方法には標準
ＰＣＲ、逆ＰＣＲ、クローニングしたＤＮＡ分子の制限酵素処理、またはKunkel
et al.(Kunkel et al., Proc. Natl. Acad.Sci.USA (1985)82:448)の方法が挙
げられる。これらの方法の成分およびその使用説明書はStratageneなどの様々な
販売元から容易に入手可能である。ひと度欠失変異体を構築すれば、それらを上
記のようにクラミジア感染症を予防または治療する能力について調べる。
【００５３】
本明細書において使用される「融合ポリペプチド」は、他のいずれかのポリペ
プチドとＮまたはＣ末端で融合した本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘
導体を含有するものである（以後ペプチドテールと記す）。かかる融合ペプチド
を得る簡便な方法はポリヌクレオチド配列のインフレーム融合物、すなわちハイ
ブリッド遺伝子の翻訳による。融合ポリペプチドをコードするハイブリッド遺伝
子を発現ベクターに挿入し、それを用いて宿主細胞を形質転換またはでトランス
フェクトする。そうでなければ、ポリペプチドまたはポリペプチド誘導体をコー
ドするポリヌクレオチド配列を、ペプチドテールをコードするポリヌクレオチド
が既に存在する発現ベクターに挿入する。かかるベクターおよびその使用説明書
は商業的に入手可能である、例えばペプチドテールがマルトース結合タンパク質
である、New England BiolabsのｐＭａｌ−ｃ２またはｐＭａｌ−ｐ２系、Pharm
aciaのグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ系、またはNovagenから入手可能
なＨｉｓ−Ｔａｇ系。これらおよび他の発現系により本発明のポリペプチドおよ
び誘導体のさらなる単離のための便宜な手段が提供される。
プチドとＮまたはＣ末端で融合した本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘
導体を含有するものである（以後ペプチドテールと記す）。かかる融合ペプチド
を得る簡便な方法はポリヌクレオチド配列のインフレーム融合物、すなわちハイ
ブリッド遺伝子の翻訳による。融合ポリペプチドをコードするハイブリッド遺伝
子を発現ベクターに挿入し、それを用いて宿主細胞を形質転換またはでトランス
フェクトする。そうでなければ、ポリペプチドまたはポリペプチド誘導体をコー
ドするポリヌクレオチド配列を、ペプチドテールをコードするポリヌクレオチド
が既に存在する発現ベクターに挿入する。かかるベクターおよびその使用説明書
は商業的に入手可能である、例えばペプチドテールがマルトース結合タンパク質
である、New England BiolabsのｐＭａｌ−ｃ２またはｐＭａｌ−ｐ２系、Pharm
aciaのグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ系、またはNovagenから入手可能
なＨｉｓ−Ｔａｇ系。これらおよび他の発現系により本発明のポリペプチドおよ
び誘導体のさらなる単離のための便宜な手段が提供される。
【００５４】
融合ポリペプチドの有利な例としては、本発明のポリペプチドまたは相同体も
しくは断片と、コレラ毒素または大腸菌(E. coli)易熱性毒素のいずれかのサブ
ユニットＢのようなアジュバント活性を有するポリペプチドとを融合したもので
ある。もう１つの有利な融合物はポリペプチド、相同体または断片と、強力なＴ
細胞エピトープまたはＢ細胞エピトープとを融合したものである。かかるエピト
ープは当技術分野で公知のもの（例えば、Ｂ型肝炎コア抗原、D. R. Millich et
al., "Antibody production to the nucleocapsid and envelope of the Hepat
itis B virus primed by a single synthetic T cell site", Nature. 1987. 32
9: 547-549)、または本発明のもう１つのポリペプチドにおいて同定されたもの
であってよい（図１１〜１５）。本発明のこの態様に従い、融合ポリペプチドは
配列番号１４〜２６の１つ、またはその相同体もしくは断片由来のＴまたはＢ細
胞エピトープを含んでなる（ここで、エピトープはそのポリペプチドまたは相同
体もしくは断片の多様な変異体から誘導され、各々のエピトープはそのエピトー
プのポリペプチド内の位置および配列において他とは異なっている）。かかる融
合物は全ポリペプチド、相同体または断片に対するＴまたはＢ細胞応答を最適に
するため、それはクラミジア感染症の予防および治療に有効である。
しくは断片と、コレラ毒素または大腸菌(E. coli)易熱性毒素のいずれかのサブ
ユニットＢのようなアジュバント活性を有するポリペプチドとを融合したもので
ある。もう１つの有利な融合物はポリペプチド、相同体または断片と、強力なＴ
細胞エピトープまたはＢ細胞エピトープとを融合したものである。かかるエピト
ープは当技術分野で公知のもの（例えば、Ｂ型肝炎コア抗原、D. R. Millich et
al., "Antibody production to the nucleocapsid and envelope of the Hepat
itis B virus primed by a single synthetic T cell site", Nature. 1987. 32
9: 547-549)、または本発明のもう１つのポリペプチドにおいて同定されたもの
であってよい（図１１〜１５）。本発明のこの態様に従い、融合ポリペプチドは
配列番号１４〜２６の１つ、またはその相同体もしくは断片由来のＴまたはＢ細
胞エピトープを含んでなる（ここで、エピトープはそのポリペプチドまたは相同
体もしくは断片の多様な変異体から誘導され、各々のエピトープはそのエピトー
プのポリペプチド内の位置および配列において他とは異なっている）。かかる融
合物は全ポリペプチド、相同体または断片に対するＴまたはＢ細胞応答を最適に
するため、それはクラミジア感染症の予防および治療に有効である。
【００５５】
融合を達成するために、本発明のポリペプチドと、アジュバント活性を有する
ポリペプチドのＮ、または好ましくはＣ末端、またはＴもしくはＢ細胞エピトー
プとを融合する。そうでなければ、本発明のポリペプチド断片をアジュバント活
性を有するポリペプチドのアミノ酸配列内に挿入する。またＴまたはＢ細胞エピ
トープを本発明のポリペプチドのアミノ酸配列内に挿入してもよい。
ポリペプチドのＮ、または好ましくはＣ末端、またはＴもしくはＢ細胞エピトー
プとを融合する。そうでなければ、本発明のポリペプチド断片をアジュバント活
性を有するポリペプチドのアミノ酸配列内に挿入する。またＴまたはＢ細胞エピ
トープを本発明のポリペプチドのアミノ酸配列内に挿入してもよい。
【００５６】
第１の態様によれば、本発明のポリヌクレオチドは異種シグナルペプチドを含
有する、本発明のポリペプチドへと成熟するハイブリッド前駆体ポリペプチドも
コードする。「異種シグナルペプチド」とは、本発明のポリペプチドの天然に存
在する前駆体には見られないシグナルペプチドを意味する。
有する、本発明のポリペプチドへと成熟するハイブリッド前駆体ポリペプチドも
コードする。「異種シグナルペプチド」とは、本発明のポリペプチドの天然に存
在する前駆体には見られないシグナルペプチドを意味する。
【００５７】
ＲＮＡ、ＤＮＡ、または改変体もしくはその組合せを包含する本発明のポリヌ
クレオチド分子は多方面に適用される。ＤＮＡ分子は例えば（ｉ）組換え宿主系
においてコードされたポリペプチドを生産するプロセスにおいて、（ii）クラミ
ジア感染症を予防および／または治療する方法および組成物においてさらに用い
られる、ポックスウイルスなどのワクチンベクターの構築において、（iii）裸
の形態で、または送達ビヒクルと配合したワクチン薬剤として（ＲＮＡ分子と同
様）、および（iv）本発明のポリヌクレオチドを過剰発現できる、またはそれを
無毒性、変異型で発現する弱毒クラミジア株の構築において用いられる。
クレオチド分子は多方面に適用される。ＤＮＡ分子は例えば（ｉ）組換え宿主系
においてコードされたポリペプチドを生産するプロセスにおいて、（ii）クラミ
ジア感染症を予防および／または治療する方法および組成物においてさらに用い
られる、ポックスウイルスなどのワクチンベクターの構築において、（iii）裸
の形態で、または送達ビヒクルと配合したワクチン薬剤として（ＲＮＡ分子と同
様）、および（iv）本発明のポリヌクレオチドを過剰発現できる、またはそれを
無毒性、変異型で発現する弱毒クラミジア株の構築において用いられる。
【００５８】
従って本発明の第２の態様は、（ｉ）発現に必要なエレメントの制御下、特に
適当なプロモーターの制御下に置かれた本発明のＤＮＡ分子を含有する発現カセ
ット；（ii）本発明の発現カセットを含有する発現ベクター；（iii）本発明の
発現カセットおよび／またはベクターで形質転換またはトランスフェクトした原
核生物または真核生物細胞、ならびに（iv）本発明のＤＮＡ分子の発現を可能に
する条件下において、本発明の発現カセットおよび／またはベクターで形質転換
またはトランスフェクトした原核生物または真核生物細胞を培養し、細胞培養物
からコードされたポリペプチドまたはポリペプチド誘導体を回収することを含む
、本発明のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドまたはポリペプチ
ド誘導体を生産する方法を含む。
適当なプロモーターの制御下に置かれた本発明のＤＮＡ分子を含有する発現カセ
ット；（ii）本発明の発現カセットを含有する発現ベクター；（iii）本発明の
発現カセットおよび／またはベクターで形質転換またはトランスフェクトした原
核生物または真核生物細胞、ならびに（iv）本発明のＤＮＡ分子の発現を可能に
する条件下において、本発明の発現カセットおよび／またはベクターで形質転換
またはトランスフェクトした原核生物または真核生物細胞を培養し、細胞培養物
からコードされたポリペプチドまたはポリペプチド誘導体を回収することを含む
、本発明のポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドまたはポリペプチ
ド誘導体を生産する方法を含む。
【００５９】
組換え発現系は原核生物および真核生物宿主から選択される。真核生物宿主に
は、酵母細胞（例えばサッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)
またはピキア・パストリス(Pichia pastoris)）、哺乳類細胞（例えばＣＯＳＩ
、ＮＩＨ３Ｔ３、またはＪＥＧ３細胞）、節足動物細胞（例えばスポドプテラ・
フルギペルダ(Spodoptera frugiperda)（ＳＦ９）細胞）、および植物細胞が挙
げられる。好ましい発現系としては大腸菌のような原核生物宿主がある。当業者
には細菌および真核生物細胞は商業的供給者をはじめいくつかの異なる供給者、
例えばAmerican Type Culture Collection (ATCC; Rockville, Maryland)から入
手可能である。組換えタンパク質発現に用いる細胞の商業的供給者は細胞の使用
説明書も提供する。
は、酵母細胞（例えばサッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)
またはピキア・パストリス(Pichia pastoris)）、哺乳類細胞（例えばＣＯＳＩ
、ＮＩＨ３Ｔ３、またはＪＥＧ３細胞）、節足動物細胞（例えばスポドプテラ・
フルギペルダ(Spodoptera frugiperda)（ＳＦ９）細胞）、および植物細胞が挙
げられる。好ましい発現系としては大腸菌のような原核生物宿主がある。当業者
には細菌および真核生物細胞は商業的供給者をはじめいくつかの異なる供給者、
例えばAmerican Type Culture Collection (ATCC; Rockville, Maryland)から入
手可能である。組換えタンパク質発現に用いる細胞の商業的供給者は細胞の使用
説明書も提供する。
【００６０】
発現系の選択は発現されるポリペプチドに望まれる特徴によって異なる。例え
ば、特定の脂質化形態(lipidated form)または他のいずれかの形で本発明のポリ
ヌクレオチドを生産するのが有用であると考えられる。
ば、特定の脂質化形態(lipidated form)または他のいずれかの形で本発明のポリ
ヌクレオチドを生産するのが有用であると考えられる。
【００６１】
総てのベクターおよび発現制御配列ならびに宿主が本発明のポリヌクレオチド
を等しく十分に発現するとは考えられないことは当業者には容易に理解されるで
あろう。しかしながら、下記の指針により、過度な実験を行うことなく、かつ本
発明の範囲を逸脱することなく、ベクター、発現制御配列および宿主が選択でき
よう。
を等しく十分に発現するとは考えられないことは当業者には容易に理解されるで
あろう。しかしながら、下記の指針により、過度な実験を行うことなく、かつ本
発明の範囲を逸脱することなく、ベクター、発現制御配列および宿主が選択でき
よう。
【００６２】
ベクターを選択する場合、そこに存在し、かつ可能な限り複製し得るベクター
と適合する宿主を選択する必要がある。ベクターコピー数、コピー数を調節する
能力、抗生物質耐性などの他のタンパク質の発現が考慮される。発現制御配列を
選択する場合、いくつかの変数が考慮される。重要な変数には配列の相対強度（
例えば、種々の条件下において発現を駆動する能力）、配列の機能を調節する能
力、発現されるポリヌクレオチドと制御配列間の適合性（例えば二次構造は効率
的な転写を妨げるヘアピン構造を回避すると考えられる）がある。宿主を選択す
る場合、所望のコンホメーションで産物を発現でき、スケールアップが容易で、
さらにそれが最終産物の精製を容易にすることが望むならば、選択されたベクタ
ーと適合し、発現産物のいずれかの起こりうる有毒作用に耐性であり、発現産物
を効率的に分泌できる単細胞宿主を選択する。
と適合する宿主を選択する必要がある。ベクターコピー数、コピー数を調節する
能力、抗生物質耐性などの他のタンパク質の発現が考慮される。発現制御配列を
選択する場合、いくつかの変数が考慮される。重要な変数には配列の相対強度（
例えば、種々の条件下において発現を駆動する能力）、配列の機能を調節する能
力、発現されるポリヌクレオチドと制御配列間の適合性（例えば二次構造は効率
的な転写を妨げるヘアピン構造を回避すると考えられる）がある。宿主を選択す
る場合、所望のコンホメーションで産物を発現でき、スケールアップが容易で、
さらにそれが最終産物の精製を容易にすることが望むならば、選択されたベクタ
ーと適合し、発現産物のいずれかの起こりうる有毒作用に耐性であり、発現産物
を効率的に分泌できる単細胞宿主を選択する。
【００６３】
発現カセットの選択は発現されるポリペプチドに望まれる特徴だけでなく選択
される宿主系にもよっても異なる。典型的には発現カセットは選択された宿主系
において機能し得るものであり、かつ構成的または誘導性であり得るプロモータ
ー；リボソーム結合部位；要すれば開始コドン（ＡＴＧ）；シグナルペプチド、
例えば脂質化(lipidation)シグナルペプチドをコードする領域；本発明のＤＮＡ
分子；停止コドン；および所望により３’末端領域（翻訳および／または転写タ
ーミネーター）を含む。シグナルペプチドコード領域は本発明のポリヌクレオチ
ドに隣接し、適当なリーディングフレームに存在する。シグナルペプチドコード
領域は成熟ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子と相同または異種であり、発現
に用いられる宿主の分泌機構と適合する。本発明のＤＮＡ分子により単独または
シグナルペプチドとともに構成されるリーディングフレームは転写および翻訳が
宿主系において起こるようにプロモーターの制御下に置かれる。プロモーターお
よびシグナルペプチドコード領域は広く知られており、当業者ならば入手可能で
ある。例えばアラビノースにより誘導可能であり（プロモーターａｒａＢ）かつ
大腸菌などのグラム陰性菌において機能し得る、ネズミチフス菌(Salmonella ty
phimurium)（および誘導体）のプロモーター（米国特許第５，０２８，５３０号
およびCagnon et al., (Cagnon et al., Protein Engineering (1991)4(7):843)
に記載）；Ｔ７ポリメラーゼを発現する数多くの大腸菌株において機能し得る、
ＲＮＡポリメラーゼをコードするバクテリオファージＴ７遺伝子のプロモーター
（米国特許第４，９５２，４９６号に記載）；ＯｓｐＡ脂質化シグナルペプチド
；およびＲｌｐＢ脂質化シグナルペプチド(Takase et al., J. Bact.(1987)169:
5692)が挙げられる。
される宿主系にもよっても異なる。典型的には発現カセットは選択された宿主系
において機能し得るものであり、かつ構成的または誘導性であり得るプロモータ
ー；リボソーム結合部位；要すれば開始コドン（ＡＴＧ）；シグナルペプチド、
例えば脂質化(lipidation)シグナルペプチドをコードする領域；本発明のＤＮＡ
分子；停止コドン；および所望により３’末端領域（翻訳および／または転写タ
ーミネーター）を含む。シグナルペプチドコード領域は本発明のポリヌクレオチ
ドに隣接し、適当なリーディングフレームに存在する。シグナルペプチドコード
領域は成熟ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子と相同または異種であり、発現
に用いられる宿主の分泌機構と適合する。本発明のＤＮＡ分子により単独または
シグナルペプチドとともに構成されるリーディングフレームは転写および翻訳が
宿主系において起こるようにプロモーターの制御下に置かれる。プロモーターお
よびシグナルペプチドコード領域は広く知られており、当業者ならば入手可能で
ある。例えばアラビノースにより誘導可能であり（プロモーターａｒａＢ）かつ
大腸菌などのグラム陰性菌において機能し得る、ネズミチフス菌(Salmonella ty
phimurium)（および誘導体）のプロモーター（米国特許第５，０２８，５３０号
およびCagnon et al., (Cagnon et al., Protein Engineering (1991)4(7):843)
に記載）；Ｔ７ポリメラーゼを発現する数多くの大腸菌株において機能し得る、
ＲＮＡポリメラーゼをコードするバクテリオファージＴ７遺伝子のプロモーター
（米国特許第４，９５２，４９６号に記載）；ＯｓｐＡ脂質化シグナルペプチド
；およびＲｌｐＢ脂質化シグナルペプチド(Takase et al., J. Bact.(1987)169:
5692)が挙げられる。
【００６４】
典型的には発現カセットは選択された発現系で複製する能力が選択される発現
ベクターの一部である。発現ベクター（例えばプラスミドまたはウイルスベクタ
ー）は、例えばPouwels et al. (Cloning Vectors: A Laboratory Manual 1985,
Supp. 1987)に記載されるものから選択することができる。好適な発現ベクター
は商業的供給者から購入することができる。
ベクターの一部である。発現ベクター（例えばプラスミドまたはウイルスベクタ
ー）は、例えばPouwels et al. (Cloning Vectors: A Laboratory Manual 1985,
Supp. 1987)に記載されるものから選択することができる。好適な発現ベクター
は商業的供給者から購入することができる。
【００６５】
宿主細胞を発現ベクターで形質転換／トランスフェクトする方法は当技術分野
では十分に公知であり、Ausubel et al., (Ausubel et al., Current Protocols
in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc., 1994)に記載されるように選
択した宿主系によって異なる。
では十分に公知であり、Ausubel et al., (Ausubel et al., Current Protocols
in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc., 1994)に記載されるように選
択した宿主系によって異なる。
【００６６】
発現の際、本発明の組換えポリペプチド（またはポリペプチド誘導体）は生産
され細胞内コンパートメントに留まり、細胞外媒質または原形質膜空間に分泌／
放出されるか、または細胞膜に埋め込まれる。ポリペプチドは組換え細胞培養物
の遠心分離後の細胞抽出物からまたは上清から実質的に精製された形で回収され
る。典型的には組換えポリペプチドは抗体に基づくアフィニティー精製により、
またはポリペプチドまたはその誘導体をコードするポリヌクレオチドとアフィニ
ティー結合小ドメインとの融合などの当業者によって容易に適合できる十分に公
知な他の方法により精製する。本発明のポリペプチドを免疫アフィニティーによ
り精製するのに有用な抗体は下記のようにして得られる。
され細胞内コンパートメントに留まり、細胞外媒質または原形質膜空間に分泌／
放出されるか、または細胞膜に埋め込まれる。ポリペプチドは組換え細胞培養物
の遠心分離後の細胞抽出物からまたは上清から実質的に精製された形で回収され
る。典型的には組換えポリペプチドは抗体に基づくアフィニティー精製により、
またはポリペプチドまたはその誘導体をコードするポリヌクレオチドとアフィニ
ティー結合小ドメインとの融合などの当業者によって容易に適合できる十分に公
知な他の方法により精製する。本発明のポリペプチドを免疫アフィニティーによ
り精製するのに有用な抗体は下記のようにして得られる。
【００６７】
本発明のポリヌクレオチドはまたワクチンとしても有用である。遺伝子送達ビ
ヒクル（生ワクチンベクター）としてウイルスまたは細菌宿主を用いるか、また
は遺伝子を遊離型で、例えばプラスミドに挿入して投与するかの２つの主要な経
路がある。本発明のポリヌクレオチドの治療または予防効力は下記のようにして
評価される。
ヒクル（生ワクチンベクター）としてウイルスまたは細菌宿主を用いるか、また
は遺伝子を遊離型で、例えばプラスミドに挿入して投与するかの２つの主要な経
路がある。本発明のポリヌクレオチドの治療または予防効力は下記のようにして
評価される。
【００６８】
従って、本発明の第３の態様によれば、（ｉ）発現に必要なエレメントの制御
下に置かれた本発明のＤＮＡ分子を含有するポックスウイルスなどのワクチンベ
クター；（ii）本発明のワクチンベクターとともに希釈剤または担体を含んでな
る材料の組成物；とりわけ（iii）治療または予防上有効な量の本発明のワクチ
ンベクターを含有する医薬組成物；（iv）哺乳類に免疫原性上有効な量の本発明
のワクチンベクターを投与してクラミジアに対する感染防御または治療免疫応答
を誘導することを含む、哺乳類（例えばヒト）のクラミジアに対する免疫応答を
誘導する方法；またこの方法は動物（例えばネコまたは鳥）のクラミジア感染症
を治療または予防する獣医学的適用に用いることができる；さらに詳しくは（ｖ
）感染した個体に予防または治療量の本発明のワクチンベクターを投与すること
を含む、クラミジア（例えばＣ．トラチョマチス(C. trachomatis)、Ｃ．プシタ
チ(C. psittaci)、肺炎クラミジア、Ｃ．ペコラム(C. pecorum)）感染症を予防
および／または治療する方法が提供される。さらに本発明の第３の態様によれば
、クラミジア感染症を予防および／または治療する医薬の製造における本発明の
ワクチンベクターの使用が含まれる。
下に置かれた本発明のＤＮＡ分子を含有するポックスウイルスなどのワクチンベ
クター；（ii）本発明のワクチンベクターとともに希釈剤または担体を含んでな
る材料の組成物；とりわけ（iii）治療または予防上有効な量の本発明のワクチ
ンベクターを含有する医薬組成物；（iv）哺乳類に免疫原性上有効な量の本発明
のワクチンベクターを投与してクラミジアに対する感染防御または治療免疫応答
を誘導することを含む、哺乳類（例えばヒト）のクラミジアに対する免疫応答を
誘導する方法；またこの方法は動物（例えばネコまたは鳥）のクラミジア感染症
を治療または予防する獣医学的適用に用いることができる；さらに詳しくは（ｖ
）感染した個体に予防または治療量の本発明のワクチンベクターを投与すること
を含む、クラミジア（例えばＣ．トラチョマチス(C. trachomatis)、Ｃ．プシタ
チ(C. psittaci)、肺炎クラミジア、Ｃ．ペコラム(C. pecorum)）感染症を予防
および／または治療する方法が提供される。さらに本発明の第３の態様によれば
、クラミジア感染症を予防および／または治療する医薬の製造における本発明の
ワクチンベクターの使用が含まれる。
【００６９】
本明細書において、ワクチンベクターは本発明の１つまたはいくつかのポリペ
プチドまたは誘導体を発現する。ワクチンベクターはさらに免疫応答を増大する
（アジュバント効果）インターロイキン−２（ＩＬ−２）またはインターロイキ
ン−１２（ＩＬ−１２）などのサイトカインを発現すると考えられる。発現され
る各成分が哺乳類細胞における発現に必要なエレメントの制御下に置かれている
ことは明らかである。
プチドまたは誘導体を発現する。ワクチンベクターはさらに免疫応答を増大する
（アジュバント効果）インターロイキン−２（ＩＬ−２）またはインターロイキ
ン−１２（ＩＬ−１２）などのサイトカインを発現すると考えられる。発現され
る各成分が哺乳類細胞における発現に必要なエレメントの制御下に置かれている
ことは明らかである。
【００７０】
本発明の第３の態様によれば、組成物はそれぞれが本発明のポリペプチドまた
は誘導体を発現し得るいくつかのワクチンベクターを含んでなる。組成物はまた
、付加的なクラミジア抗原、またはそのサブユニット、断片、相同体、変異体も
しくは誘導体；または場合によっては、ＩＬ−２もしくはＩＬ−１２などのサイ
トカインとともに発現し得るワクチンベクターを含んでいてもよい。
は誘導体を発現し得るいくつかのワクチンベクターを含んでなる。組成物はまた
、付加的なクラミジア抗原、またはそのサブユニット、断片、相同体、変異体も
しくは誘導体；または場合によっては、ＩＬ−２もしくはＩＬ−１２などのサイ
トカインとともに発現し得るワクチンベクターを含んでいてもよい。
【００７１】
哺乳類における感染症を治療または予防する予防接種方法は、いずれかの一般
的な経路により、特に粘膜（例えば目、鼻腔内、口腔、胃、肺、腸、直腸、膣、
または尿管）表面にまたは非経口（例えば皮下、皮内、筋肉内、静脈内、または
腹膜内）経路により投与される本発明のワクチンベクターの使用を含んでなる。
好ましい経路はワクチンベクターの選択による。１回の投与で治療を果たしても
よいし、または間隔をおいて反復してもよい。好適な用量は当業者に理解されて
いる、ワクチンベクター自体、投与経路または予防接種する哺乳類の条件（重量
、年齢など）といった種々のパラメーターによって異なる。
的な経路により、特に粘膜（例えば目、鼻腔内、口腔、胃、肺、腸、直腸、膣、
または尿管）表面にまたは非経口（例えば皮下、皮内、筋肉内、静脈内、または
腹膜内）経路により投与される本発明のワクチンベクターの使用を含んでなる。
好ましい経路はワクチンベクターの選択による。１回の投与で治療を果たしても
よいし、または間隔をおいて反復してもよい。好適な用量は当業者に理解されて
いる、ワクチンベクター自体、投与経路または予防接種する哺乳類の条件（重量
、年齢など）といった種々のパラメーターによって異なる。
【００７２】
当技術分野で入手可能な生ワクチンベクターには、アデノウイルスおよびポッ
クスウイルスなどのウイルスベクター、ならびに細菌ベクター（例えば赤痢菌属
(Shigella)、サルモネラ菌(Salmonella)、コレラ菌(Vibrio cholerae)、乳酸桿
菌(Lactobacillus)、カルメットーゲラン菌(Bacille bilie de Calmette-Guerin
)（ＢＣＧ）、および連鎖球菌(Streptococcus)）が挙げられる。
クスウイルスなどのウイルスベクター、ならびに細菌ベクター（例えば赤痢菌属
(Shigella)、サルモネラ菌(Salmonella)、コレラ菌(Vibrio cholerae)、乳酸桿
菌(Lactobacillus)、カルメットーゲラン菌(Bacille bilie de Calmette-Guerin
)（ＢＣＧ）、および連鎖球菌(Streptococcus)）が挙げられる。
【００７３】
アデノウイルスベクター例、ならびに本発明のＤＮＡ分子を発現し得るアデノ
ウイルスベクターの構築方法が米国特許第４，９２０，２０９号に記載されてい
る。ポックスウイルスベクターにはワクシニアおよびカナリヤポックスウイルス
があり、それぞれ米国特許第４，７２２，８４８号および米国特許第５，３６４
，７７３号に記載されている。例えばワクシニアウイルスベクターの記載はTart
aglia et al., Virology (1992) 188:217、カナリヤポックスの参照文献はTaylo
r et al. Vaccine (1995) 13:539も参照。哺乳類細胞における発現に好適な条件
下で本発明のポリヌクレオチドをウイルスゲノムに挿入するために、本発明のポ
リヌクレオチドを発現し得るポックスウイルスベクターをKieny et al., Nature
(1984) 312:163に記載される相同組換えにより得る。一般に治療または予防に
使用するワクチンウイルスベクターの用量はキログラム当たりのプラーク形成単
位が、約１×１０４〜約１×１０１１、有利には約１×１０７〜約１×１０１０ 、好ましくは約１×１０７〜約１×１０９であってよい。好ましくは、ウイルス
ベクターを、例えば４週間おきに３回で、非経口投与する。本発明のウイルスベ
クターを含有する組成物に化学アジュバントを加えることを避け、それによって
ウイルスベクター自身に対する免疫応答を最小にすることが好ましい。
ウイルスベクターの構築方法が米国特許第４，９２０，２０９号に記載されてい
る。ポックスウイルスベクターにはワクシニアおよびカナリヤポックスウイルス
があり、それぞれ米国特許第４，７２２，８４８号および米国特許第５，３６４
，７７３号に記載されている。例えばワクシニアウイルスベクターの記載はTart
aglia et al., Virology (1992) 188:217、カナリヤポックスの参照文献はTaylo
r et al. Vaccine (1995) 13:539も参照。哺乳類細胞における発現に好適な条件
下で本発明のポリヌクレオチドをウイルスゲノムに挿入するために、本発明のポ
リヌクレオチドを発現し得るポックスウイルスベクターをKieny et al., Nature
(1984) 312:163に記載される相同組換えにより得る。一般に治療または予防に
使用するワクチンウイルスベクターの用量はキログラム当たりのプラーク形成単
位が、約１×１０４〜約１×１０１１、有利には約１×１０７〜約１×１０１０ 、好ましくは約１×１０７〜約１×１０９であってよい。好ましくは、ウイルス
ベクターを、例えば４週間おきに３回で、非経口投与する。本発明のウイルスベ
クターを含有する組成物に化学アジュバントを加えることを避け、それによって
ウイルスベクター自身に対する免疫応答を最小にすることが好ましい。
【００７４】
経口生ワクチンとして有用な無毒性コレラ菌変異株が知られている。Mekalano
s et al., Nature (1983) 306:551および米国特許第４，８８２，２７８号では
、機能し得るコレラ毒素が生産されないように欠失させた、２つのｃｔｘＡ対立
遺伝子それぞれの実在する量のコード配列を有する株が記載されている。ＷＯ９
２／１１３５４では、変異（この変異を単一株においてｃｔｘＡ変異と組み合わ
せてもよい）によりｉｒｇＡ遺伝子座を不活性化した株が記載されている。ＷＯ
９４／０１５３３では、機能し得るｃｔｘＡおよびａｔｔＲＳ１ ＤＮＡ配列を
欠いた欠失変異体が記載されている。ＷＯ９４／１９４８２に記載されるように
、これらの変異株を遺伝子操作して非対応抗原を発現させる。本発明のＤＮＡ分
子によりコードされるポリペプチドまたはポリペプチド誘導体を発現し得るコレ
ラ菌株の有効なワクチン用量は、選択された投与経路に適した用量中の生存細菌
数、約１×１０５〜約１×１０９、好ましくは約１×１０６〜約１×１０８を含
有する。好ましい投与経路としてはあらゆる粘膜経路が挙げられ、最も好ましく
はこれらのベクターは鼻腔内または経口投与される。
s et al., Nature (1983) 306:551および米国特許第４，８８２，２７８号では
、機能し得るコレラ毒素が生産されないように欠失させた、２つのｃｔｘＡ対立
遺伝子それぞれの実在する量のコード配列を有する株が記載されている。ＷＯ９
２／１１３５４では、変異（この変異を単一株においてｃｔｘＡ変異と組み合わ
せてもよい）によりｉｒｇＡ遺伝子座を不活性化した株が記載されている。ＷＯ
９４／０１５３３では、機能し得るｃｔｘＡおよびａｔｔＲＳ１ ＤＮＡ配列を
欠いた欠失変異体が記載されている。ＷＯ９４／１９４８２に記載されるように
、これらの変異株を遺伝子操作して非対応抗原を発現させる。本発明のＤＮＡ分
子によりコードされるポリペプチドまたはポリペプチド誘導体を発現し得るコレ
ラ菌株の有効なワクチン用量は、選択された投与経路に適した用量中の生存細菌
数、約１×１０５〜約１×１０９、好ましくは約１×１０６〜約１×１０８を含
有する。好ましい投与経路としてはあらゆる粘膜経路が挙げられ、最も好ましく
はこれらのベクターは鼻腔内または経口投与される。
【００７５】
非対応抗原の組換え発現用に遺伝子操作した、またはしない弱毒ネズミチフス
菌株、および経口ワクチンとしてのそれらの使用はNakayama et al. (Bio/Techn
ology (1988) 6:693)およびＷＯ９２／１１３６１に記載されている。
菌株、および経口ワクチンとしてのそれらの使用はNakayama et al. (Bio/Techn
ology (1988) 6:693)およびＷＯ９２／１１３６１に記載されている。
【００７６】
好ましい投与経路としてはあらゆる粘膜経路が挙げられ、最も好ましくはこれ
らのベクターは鼻腔内または経口投与される。
らのベクターは鼻腔内または経口投与される。
【００７７】
本発明においてワクチンベクターとして用いられるその他の細菌株としては、
フレクスナー赤痢菌(Shigella flexneri)に関してはHigh et al., EMBO (1992)
11:1991およびSizemore et al., Science (1995) 270:299に、ストレプトコッカ
ス・ゴルドニフ(Streptococcus gordonif)に関してはMedaglini et al., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA (1995) 92:6868、ならびにカルメット・ゲランウシ結核
菌(Bacille Calmette Guerin)に関してはFlynn J.L., Cell. Mol. Biol. (1994)
40 (Suppl. I):31, WO 88/06626, WO 90/00594, WO 91/13157, WO 92/01796,
およびWO 92/21376に記載されている。
フレクスナー赤痢菌(Shigella flexneri)に関してはHigh et al., EMBO (1992)
11:1991およびSizemore et al., Science (1995) 270:299に、ストレプトコッカ
ス・ゴルドニフ(Streptococcus gordonif)に関してはMedaglini et al., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA (1995) 92:6868、ならびにカルメット・ゲランウシ結核
菌(Bacille Calmette Guerin)に関してはFlynn J.L., Cell. Mol. Biol. (1994)
40 (Suppl. I):31, WO 88/06626, WO 90/00594, WO 91/13157, WO 92/01796,
およびWO 92/21376に記載されている。
【００７８】
細菌ベクターでは本発明のポリヌクレオチドを細菌ゲノムに挿入するか、また
は遊離状態でプラスミドの一部として残す。
は遊離状態でプラスミドの一部として残す。
【００７９】
本発明のワクチン細菌ベクターを含んでなる組成物はアジュバントをさらに含
有してもよい。いくつかのアジュバントが当業者に公知である。好ましいアジュ
バントは以下から選択される。
有してもよい。いくつかのアジュバントが当業者に公知である。好ましいアジュ
バントは以下から選択される。
【００８０】
従って、本発明の第４の態様によれば、（ｉ）本発明のポリヌクレオチドとと
もに希釈剤または担体を含んでなる材料の組成物；（ii）治療または予防上有効
な量の本発明のポリヌクレオチドを含有する医薬組成物；（iii）免疫原性上有
効な量の本発明のポリヌクレオチドを投与してクラミジアに対する感染防御免疫
応答を誘導することにより哺乳類のクラミジアに対する免疫応答を誘導する方法
；さらに詳しくは（iv）感染した個体に予防または治療量の本発明のポリヌクレ
オチドを投与することにより、クラミジア（例えばＣ．トラチョマチス、Ｃ．プ
シタチ、肺炎クラミジア、またはＣ．ペコラム）感染症を予防および／または治
療する方法が提供される。さらに本発明の第４の態様によれば、クラミジア感染
症を予防および／または治療する医薬の製造における本発明のポリヌクレオチド
の使用が含まれる。好ましい使用には哺乳類細胞における、特に哺乳類細胞にお
いて複製できず、かつ哺乳類ゲノムに実質的に組み込むことのできないプラスミ
ドにおける発現の条件下に置かれたＤＮＡ分子の使用が挙げられる。
もに希釈剤または担体を含んでなる材料の組成物；（ii）治療または予防上有効
な量の本発明のポリヌクレオチドを含有する医薬組成物；（iii）免疫原性上有
効な量の本発明のポリヌクレオチドを投与してクラミジアに対する感染防御免疫
応答を誘導することにより哺乳類のクラミジアに対する免疫応答を誘導する方法
；さらに詳しくは（iv）感染した個体に予防または治療量の本発明のポリヌクレ
オチドを投与することにより、クラミジア（例えばＣ．トラチョマチス、Ｃ．プ
シタチ、肺炎クラミジア、またはＣ．ペコラム）感染症を予防および／または治
療する方法が提供される。さらに本発明の第４の態様によれば、クラミジア感染
症を予防および／または治療する医薬の製造における本発明のポリヌクレオチド
の使用が含まれる。好ましい使用には哺乳類細胞における、特に哺乳類細胞にお
いて複製できず、かつ哺乳類ゲノムに実質的に組み込むことのできないプラスミ
ドにおける発現の条件下に置かれたＤＮＡ分子の使用が挙げられる。
【００８１】
本発明のポリヌクレオチドの使用には、治療または予防目的での哺乳類へのワ
クチンとしての投与が挙げられる。かかるポリヌクレオチドは哺乳類細胞におい
て複製できず、かつ哺乳類ゲノムに組み込むことのできないプラスミドの一部と
してＤＮＡの形で用いられる。典型的には、かかるＤＮＡ分子は哺乳類細胞の発
現に好適なプロモーターの制御下に置かれる。プロモーターは遍在して、または
組織特異的のいずれかで機能する。非組織特異的プロモーターの例としては、初
期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（米国特許第４，１６８，０６
２号に記載される）およびラウス肉腫ウイルスプロモーター（Norton & Coffin,
Molec. Cell Biol. (1985) 5:281に記載される）が挙げられる。組織特異的プ
ロモーターの例としては、筋肉細胞における発現を駆動するデスミンプロモータ
ー（Li et al., Gene (1989) 78:243、Li & Paulin, J. Biol. Chem. (1991) 26
6:6562およびLi & Paulin, J. Biol. Chem. (1993) 268:10403に記載される）で
ある。プロモーターの使用については当業者は十分に公知である。有用なベクタ
ーは多くの公報、特にＷＯ９４／２１７９７およびMartikka et al., Human Gen
e Therapy (1996) 7: 1205で記載されている。
クチンとしての投与が挙げられる。かかるポリヌクレオチドは哺乳類細胞におい
て複製できず、かつ哺乳類ゲノムに組み込むことのできないプラスミドの一部と
してＤＮＡの形で用いられる。典型的には、かかるＤＮＡ分子は哺乳類細胞の発
現に好適なプロモーターの制御下に置かれる。プロモーターは遍在して、または
組織特異的のいずれかで機能する。非組織特異的プロモーターの例としては、初
期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター（米国特許第４，１６８，０６
２号に記載される）およびラウス肉腫ウイルスプロモーター（Norton & Coffin,
Molec. Cell Biol. (1985) 5:281に記載される）が挙げられる。組織特異的プ
ロモーターの例としては、筋肉細胞における発現を駆動するデスミンプロモータ
ー（Li et al., Gene (1989) 78:243、Li & Paulin, J. Biol. Chem. (1991) 26
6:6562およびLi & Paulin, J. Biol. Chem. (1993) 268:10403に記載される）で
ある。プロモーターの使用については当業者は十分に公知である。有用なベクタ
ーは多くの公報、特にＷＯ９４／２１７９７およびMartikka et al., Human Gen
e Therapy (1996) 7: 1205で記載されている。
【００８２】
ワクチンとして用いられる本発明のポリヌクレオチドは対応するポリペプチド
の前駆体または成熟型のいずれかをコードする。前駆体型ではシグナルペプチド
は相同または異種のいずれかである。後者の場合、組織型プラスミノゲン因子（
ｔＰＡ）のリーダー配列などの真核生物リーダー配列が好ましい。
の前駆体または成熟型のいずれかをコードする。前駆体型ではシグナルペプチド
は相同または異種のいずれかである。後者の場合、組織型プラスミノゲン因子（
ｔＰＡ）のリーダー配列などの真核生物リーダー配列が好ましい。
【００８３】
本明細書において、本発明の組成物は１つまたはいくつかのポリヌクレオチド
とともに所望によりウレアーゼサブユニットＡ、Ｂもしくはその両方などの別の
クラミジア抗原、またはその断片、誘導体、変異体もしくは類似体をコードする
少なくとも１つの付加的なポリヌクレオチドを含有する。また組成物は免疫応答
を増強するためにインターロイキン−２（ＩＬ−２）またはインターロイキン−
１２（ＩＬ−１２）などのサイトカインをコードする付加的なポリヌクレオチド
を含有してもよい。これらの付加的なポリヌクレオチドは発現に好適な制御下に
置かれている。
とともに所望によりウレアーゼサブユニットＡ、Ｂもしくはその両方などの別の
クラミジア抗原、またはその断片、誘導体、変異体もしくは類似体をコードする
少なくとも１つの付加的なポリヌクレオチドを含有する。また組成物は免疫応答
を増強するためにインターロイキン−２（ＩＬ−２）またはインターロイキン−
１２（ＩＬ−１２）などのサイトカインをコードする付加的なポリヌクレオチド
を含有してもよい。これらの付加的なポリヌクレオチドは発現に好適な制御下に
置かれている。
【００８４】
同じ組成物に含まれる本発明のＤＮＡ分子および／または付加的なＤＮＡ分子
は同じプラスミドに存在することが有利である。
は同じプラスミドに存在することが有利である。
【００８５】
本発明のポリヌクレオチド治療薬の製造に分子生物学におけるポリヌクレオチ
ドの調製および精製標準手法を用いる。ワクチンとして用いるための本発明のポ
リヌクレオチドは以下に概略を記した種々の方法により処方される。
ドの調製および精製標準手法を用いる。ワクチンとして用いるための本発明のポ
リヌクレオチドは以下に概略を記した種々の方法により処方される。
【００８６】
１つの方法ではポリヌクレオチドはいずれの送達ビヒクルも用いない裸の形態
で使用される。かかるポリヌクレオチドは単に滅菌生理食塩水または滅菌緩衝溶
液などの生理学上許容される溶液に、担体を用いてまたは用いずに希釈する。担
体が存在する場合には、担体が等張性、低張性、または弱高張性であることが好
ましく、スクロース溶液、例えば２０％スクロース含有溶液により得られるよう
な比較的低いイオン強度を有する。
で使用される。かかるポリヌクレオチドは単に滅菌生理食塩水または滅菌緩衝溶
液などの生理学上許容される溶液に、担体を用いてまたは用いずに希釈する。担
体が存在する場合には、担体が等張性、低張性、または弱高張性であることが好
ましく、スクロース溶液、例えば２０％スクロース含有溶液により得られるよう
な比較的低いイオン強度を有する。
【００８７】
別法では細胞の取り込みを助ける薬剤と結合したポリヌクレオチドを使用する
。かかる薬剤の例は（ｉ）ブピバカインなどの細胞透過性を改変する化学物質（
例えばＷＯ９４／１６７３７参照）、（ii）ポリヌクレオチドをカプセル封入す
るリポソーム、または（iii）それ自身がポリヌクレオチドと結合する陽イオン
脂質またはシリカ、金、もしくはタングステン微粒子である。
。かかる薬剤の例は（ｉ）ブピバカインなどの細胞透過性を改変する化学物質（
例えばＷＯ９４／１６７３７参照）、（ii）ポリヌクレオチドをカプセル封入す
るリポソーム、または（iii）それ自身がポリヌクレオチドと結合する陽イオン
脂質またはシリカ、金、もしくはタングステン微粒子である。
【００８８】
陰イオンおよび中性リポソームは当技術分野では十分に公知であり（例えばリ
ポソーム作製方法の詳細な説明に関する、Liposomes: A Practical Approach, R
pc New Ed, IRL press (1990)参照）、ポリヌクレオチドをはじめとする広範囲
の産物を送達するのに有用である。 陽イオン脂質もまた当技術分野では公知であり、遺伝子送達には常用されてい
る。かかる脂質には、ＤＯＴＭＡ（Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プ
ロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド）としても知られるリ
ポフェクチン（商標）、ＤＯＴＡＰ（１，２−ビス（オレイルオキシ）−３−（
トリメチルアンモニオ）プロパン）、ＤＤＡＢ（ジメチルジオクタデシルアンモ
ニウムブロミド）、ＤＯＧＳ（ジオクタデシルアミドログリシルスペルミン）お
よびＤＣ−Ｃｈｏｌ（３β−（Ｎ−（Ｎ’、Ｎ’−ジメチルアミノメタン）−カ
ルバモイル）コレステロール）などのコレステロール誘導体が挙げられる。これ
らの陽イオン脂質の記載はＥＰ１８７，７０２、ＷＯ９０／１１０９２、米国特
許第５，２８３，１８５号、ＷＯ９１／１５５０１、ＷＯ９５／２６３５６、お
よび米国特許第５，５２７，９２８号に見出すことができる。遺伝子送達用の陽
イオン脂質は、例えばＷＯ９０／１１０９２に記載されるようにＤＯＰＥ（ジオ
レイルホスファチジルエタノールアミン）のような中性脂質と結合させて用いる
ことが好ましい。
ポソーム作製方法の詳細な説明に関する、Liposomes: A Practical Approach, R
pc New Ed, IRL press (1990)参照）、ポリヌクレオチドをはじめとする広範囲
の産物を送達するのに有用である。 陽イオン脂質もまた当技術分野では公知であり、遺伝子送達には常用されてい
る。かかる脂質には、ＤＯＴＭＡ（Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プ
ロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド）としても知られるリ
ポフェクチン（商標）、ＤＯＴＡＰ（１，２−ビス（オレイルオキシ）−３−（
トリメチルアンモニオ）プロパン）、ＤＤＡＢ（ジメチルジオクタデシルアンモ
ニウムブロミド）、ＤＯＧＳ（ジオクタデシルアミドログリシルスペルミン）お
よびＤＣ−Ｃｈｏｌ（３β−（Ｎ−（Ｎ’、Ｎ’−ジメチルアミノメタン）−カ
ルバモイル）コレステロール）などのコレステロール誘導体が挙げられる。これ
らの陽イオン脂質の記載はＥＰ１８７，７０２、ＷＯ９０／１１０９２、米国特
許第５，２８３，１８５号、ＷＯ９１／１５５０１、ＷＯ９５／２６３５６、お
よび米国特許第５，５２７，９２８号に見出すことができる。遺伝子送達用の陽
イオン脂質は、例えばＷＯ９０／１１０９２に記載されるようにＤＯＰＥ（ジオ
レイルホスファチジルエタノールアミン）のような中性脂質と結合させて用いる
ことが好ましい。
【００８９】
陽イオンリポソームを含有する製剤は所望により他のトランスフェクション促
進化合物を含有してもよい。それらの多くはＷＯ９３／１８７５９、ＷＯ９３／
１９７６８、ＷＯ９４／２５６０８、およびＷＯ９５／０２３９７に記載されて
いる。それらには核膜を通るＤＮＡの輸送を促進するのに有用なスペルミン誘導
体（例えばＷＯ９３／１８７５９参照）およびＧＡＬＡ、グラミシジンＳ、なら
びに陽イオン胆汁酸塩などの膜透過性化合物（例えばＷＯ９３／１９７６８参照
）が挙げられる。
進化合物を含有してもよい。それらの多くはＷＯ９３／１８７５９、ＷＯ９３／
１９７６８、ＷＯ９４／２５６０８、およびＷＯ９５／０２３９７に記載されて
いる。それらには核膜を通るＤＮＡの輸送を促進するのに有用なスペルミン誘導
体（例えばＷＯ９３／１８７５９参照）およびＧＡＬＡ、グラミシジンＳ、なら
びに陽イオン胆汁酸塩などの膜透過性化合物（例えばＷＯ９３／１９７６８参照
）が挙げられる。
【００９０】
金またはタングステン微粒子はＷＯ９１／００３５９、ＷＯ９３／１７７０６
、およびTang et al. (Nature (1992) 356:152)に記載されるように遺伝子送達
に用いられる。米国特許第４，９４５，０５０号、米国特許第５，０１５，５８
０号、およびＷＯ９４／２４２６３に記載されるもののように、微粒子で被覆し
たポリヌクレオチドを無針注入装置（「遺伝子銃」）を用いて皮内または表皮内
経路で注入する。
、およびTang et al. (Nature (1992) 356:152)に記載されるように遺伝子送達
に用いられる。米国特許第４，９４５，０５０号、米国特許第５，０１５，５８
０号、およびＷＯ９４／２４２６３に記載されるもののように、微粒子で被覆し
たポリヌクレオチドを無針注入装置（「遺伝子銃」）を用いて皮内または表皮内
経路で注入する。
【００９１】
ワクチン受容者に用いるＤＮＡ量は、例えばＤＮＡ構築に用いるプロモーター
の強さ、発現遺伝子産物の免疫原性、投与をしようとする哺乳類の条件（例えば
哺乳類の体重、齢、および全身の健康状態）、投与様式、および剤型による。一
般に、治療または予防上有効な量、約１μｇ〜約１ｍｇ、好ましくは約１０μｇ
〜約８００μｇ、およびさらに好ましくは約２５μｇ〜約２５０μｇをヒト成人
に投与してもよい。１回の投与で投与を果たしてもよいし、または間隔をおいて
反復してもよい。
の強さ、発現遺伝子産物の免疫原性、投与をしようとする哺乳類の条件（例えば
哺乳類の体重、齢、および全身の健康状態）、投与様式、および剤型による。一
般に、治療または予防上有効な量、約１μｇ〜約１ｍｇ、好ましくは約１０μｇ
〜約８００μｇ、およびさらに好ましくは約２５μｇ〜約２５０μｇをヒト成人
に投与してもよい。１回の投与で投与を果たしてもよいし、または間隔をおいて
反復してもよい。
【００９２】
投与経路はワクチン分野で用いるいずれの便宜な経路であってもよい。一般的
な指針として、本発明のポリヌクレオチドは粘膜表面、例えば目、鼻腔内、肺、
口腔、腸、直腸、膣、および尿管表面により；または非経口経路、例えば静脈内
、皮下、腹膜内、皮内、表皮内、または筋肉内経路により投与する。投与経路の
選択は選択される製剤による。ブピバカインと結合させて処方したポリヌクレオ
チドは筋肉投与が有利である。中性もしくは陰イオンリポソームまたはＤＯＴＭ
ＡまたはＤＣ−Ｃｈｏｌなどの陽イオン脂質を用いる場合、製剤は静脈内、鼻腔
内（エアゾル化）、筋肉内、皮内、および皮下経路により注入することが有利で
あろう。裸の形態のポリヌクレオチドは筋肉内、皮内、または皮下経路により投
与することが有利であろう。
な指針として、本発明のポリヌクレオチドは粘膜表面、例えば目、鼻腔内、肺、
口腔、腸、直腸、膣、および尿管表面により；または非経口経路、例えば静脈内
、皮下、腹膜内、皮内、表皮内、または筋肉内経路により投与する。投与経路の
選択は選択される製剤による。ブピバカインと結合させて処方したポリヌクレオ
チドは筋肉投与が有利である。中性もしくは陰イオンリポソームまたはＤＯＴＭ
ＡまたはＤＣ−Ｃｈｏｌなどの陽イオン脂質を用いる場合、製剤は静脈内、鼻腔
内（エアゾル化）、筋肉内、皮内、および皮下経路により注入することが有利で
あろう。裸の形態のポリヌクレオチドは筋肉内、皮内、または皮下経路により投
与することが有利であろう。
【００９３】
必ずしも必要ではないが、かかる組成物はアジュバントを含有していてもよい
。もしそうであれば、アジュバント作用を示すために同時投与する必要のない浸
透性アジュバント、例えば米国特許第５，０５７，５４６号に記載されるＱＳ２
１などが好ましい。
。もしそうであれば、アジュバント作用を示すために同時投与する必要のない浸
透性アジュバント、例えば米国特許第５，０５７，５４６号に記載されるＱＳ２
１などが好ましい。
【００９４】
本願で提供される配列情報により診断目的で用いる特異的なヌクレオチドプロ
ーブおよびプライマーの設計が可能になる。従って、本発明の第５の態様によれ
ば、配列番号１〜１３のいずれか１つに示される配列の遺伝子コードの縮重で見
られる、または縮重により誘導された配列を有するヌクレオチドプローブまたは
プライマーが提供される。
ーブおよびプライマーの設計が可能になる。従って、本発明の第５の態様によれ
ば、配列番号１〜１３のいずれか１つに示される配列の遺伝子コードの縮重で見
られる、または縮重により誘導された配列を有するヌクレオチドプローブまたは
プライマーが提供される。
【００９５】
本願において使用される「プローブ」とは、上記のように、ストリンジェント
条件下で、配列番号１〜１３を有する核酸分子と、または配列番号１〜１３と相
同な配列と、またはその相補もしくはアンチセンス配列とハイブリダイズするＤ
ＮＡ（好ましくは一本鎖）またはＲＮＡ分子（または改変体もしくはその組合せ
）をいう。一般に、プローブは全長配列よりかなり短い。かかるプローブは約５
〜約１００個、好ましくは約１０〜約８０個のヌクレオチドを含有する。特にプ
ローブは配列番号１〜１３のいずれかの一部と少なくとも７５％、好ましくは少
なくとも８５％、さらに好ましくは９５％相同である、またはかかる配列と相補
的である配列を有する。プローブはイノシン、メチル−５−デオキシシチジン、
デオキシウリジン、ジメチルアミノ−５−デオキシウリジン、またはジアミノ−
２，６−プリンなどの改変塩基を含有してもよい。糖またはリン酸残基も改変ま
たは置換してもよい。例えばデオキシリボース残基をポリアミドで置き換えても
よく(Nielsen et al., Science (1991) 254:1497)、リン酸残基をジホスフェー
ト、アルキル、アリールホスホネートおよびホスホロチオエートエステルなどの
エステル基で置き換えてもよい。さらにリボヌクレオチドの２’−ヒドロキシ基
をアルキル基のような官能基などで改変してもよい。
条件下で、配列番号１〜１３を有する核酸分子と、または配列番号１〜１３と相
同な配列と、またはその相補もしくはアンチセンス配列とハイブリダイズするＤ
ＮＡ（好ましくは一本鎖）またはＲＮＡ分子（または改変体もしくはその組合せ
）をいう。一般に、プローブは全長配列よりかなり短い。かかるプローブは約５
〜約１００個、好ましくは約１０〜約８０個のヌクレオチドを含有する。特にプ
ローブは配列番号１〜１３のいずれかの一部と少なくとも７５％、好ましくは少
なくとも８５％、さらに好ましくは９５％相同である、またはかかる配列と相補
的である配列を有する。プローブはイノシン、メチル−５−デオキシシチジン、
デオキシウリジン、ジメチルアミノ−５−デオキシウリジン、またはジアミノ−
２，６−プリンなどの改変塩基を含有してもよい。糖またはリン酸残基も改変ま
たは置換してもよい。例えばデオキシリボース残基をポリアミドで置き換えても
よく(Nielsen et al., Science (1991) 254:1497)、リン酸残基をジホスフェー
ト、アルキル、アリールホスホネートおよびホスホロチオエートエステルなどの
エステル基で置き換えてもよい。さらにリボヌクレオチドの２’−ヒドロキシ基
をアルキル基のような官能基などで改変してもよい。
【００９６】
本発明のプローブは捕捉または検出プローブとして診断試験に用いられる。便
宜にはかかる捕捉プローブは共有結合手段によりまたは受動的吸着により固相支
持体に直接的または間接的に固定する。検出プローブは放射性同位元素、ペルオ
キシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、ならびに発色性、蛍光性、または発光
性基質を加水分解し得る酵素、発色性、蛍光性、または発光性化合物、ヌクレオ
チド塩基類似体、およびビオチンから選択される検出マーカーで標識する。
宜にはかかる捕捉プローブは共有結合手段によりまたは受動的吸着により固相支
持体に直接的または間接的に固定する。検出プローブは放射性同位元素、ペルオ
キシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼ、ならびに発色性、蛍光性、または発光
性基質を加水分解し得る酵素、発色性、蛍光性、または発光性化合物、ヌクレオ
チド塩基類似体、およびビオチンから選択される検出マーカーで標識する。
【００９７】
本発明のプローブをドットブロット法(Maniatis et al., Molecular Cloning:
A Laboratory Manual (1982) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Sp
ring Habor, New York)、サザンブロット法(Southern, J. Mol. Biol. (1975) 9
8:503)、ノーザンブロット法（ＲＮＡを標的として用いることを除いて、サザン
ブロットと同じ）、またはサンドイッチ手法(Dunn et al., Cell (1977) 12:23)
などのいずれの通常のハイブリダイゼーション手法にも用いてよい。後の手法で
は互いに少なくとも部分的に異なるヌクレオチド配列を有する特異的な捕捉プロ
ーブおよび／または特異的な検出プローブの使用が含まれる。
A Laboratory Manual (1982) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Sp
ring Habor, New York)、サザンブロット法(Southern, J. Mol. Biol. (1975) 9
8:503)、ノーザンブロット法（ＲＮＡを標的として用いることを除いて、サザン
ブロットと同じ）、またはサンドイッチ手法(Dunn et al., Cell (1977) 12:23)
などのいずれの通常のハイブリダイゼーション手法にも用いてよい。後の手法で
は互いに少なくとも部分的に異なるヌクレオチド配列を有する特異的な捕捉プロ
ーブおよび／または特異的な検出プローブの使用が含まれる。
【００９８】
プライマーは増幅プロセス（例えばＰＣＲ）、伸長プロセス、または逆転写法
における酵素的ＤＮＡ重合を開始するのに用いる、通常約１０〜約４０個のヌク
レオチドのプローブである。ＰＣＲをはじめとする診断法に用いるプライマーを
当技術分野で公知な方法で標識する。
における酵素的ＤＮＡ重合を開始するのに用いる、通常約１０〜約４０個のヌク
レオチドのプローブである。ＰＣＲをはじめとする診断法に用いるプライマーを
当技術分野で公知な方法で標識する。
【００９９】
本明細書において記載されるように、本発明はまた（ｉ）生物学的材料におい
てクラミジアの存在を検出および／または同定する本発明のプローブを含んでな
る試薬；（ii）（ａ）該生物学的材料からサンプルを採取または誘導し、（ｂ）
該材料からＤＮＡまたはＲＮＡを抽出して変性させ、さらに（ｃ）ストリンジェ
ントハイブリダイゼーション条件下で、ハイブリダイゼーションが検出されるよ
うに本発明のプローブ、例えば捕捉、検出プローブもしくはその両方に曝す、生
物学的材料においてクラミジアの存在を検出および／または同定する方法；およ
び（iii）（ａ）該生物学的材料からサンプルを採取または誘導し、（ｂ）そこ
からＤＮＡを抽出し、（ｃ）抽出したＤＮＡに少なくとも１つ、および好ましく
は２つの本発明のプライマーを提供してポリメラーゼ鎖反応により増幅し、さら
に（ｄ）増幅したＤＮＡ断片を生産する、生物学的材料においてクラミジアの存
在を検出および／または同定する方法も包含する。
てクラミジアの存在を検出および／または同定する本発明のプローブを含んでな
る試薬；（ii）（ａ）該生物学的材料からサンプルを採取または誘導し、（ｂ）
該材料からＤＮＡまたはＲＮＡを抽出して変性させ、さらに（ｃ）ストリンジェ
ントハイブリダイゼーション条件下で、ハイブリダイゼーションが検出されるよ
うに本発明のプローブ、例えば捕捉、検出プローブもしくはその両方に曝す、生
物学的材料においてクラミジアの存在を検出および／または同定する方法；およ
び（iii）（ａ）該生物学的材料からサンプルを採取または誘導し、（ｂ）そこ
からＤＮＡを抽出し、（ｃ）抽出したＤＮＡに少なくとも１つ、および好ましく
は２つの本発明のプライマーを提供してポリメラーゼ鎖反応により増幅し、さら
に（ｄ）増幅したＤＮＡ断片を生産する、生物学的材料においてクラミジアの存
在を検出および／または同定する方法も包含する。
【０１００】
配列番号１〜１３のポリヌクレオチド配列、それらの相同体、および各々の部
分配列の開示によりそれらの対応するアミノ酸配列が使用可能になることは明ら
かである。従って本発明の第６の態様によれば、本発明のポリヌクレオチドによ
りコードされるアミノ酸配列を有する、実質的に精製されたポリペプチドまたは
ポリペプチド誘導体が提供される。
分配列の開示によりそれらの対応するアミノ酸配列が使用可能になることは明ら
かである。従って本発明の第６の態様によれば、本発明のポリヌクレオチドによ
りコードされるアミノ酸配列を有する、実質的に精製されたポリペプチドまたは
ポリペプチド誘導体が提供される。
【０１０１】
本明細書において使用される「実質的に精製されたポリペプチド」はそれが天
然に存在する環境から選別されたポリヌクレオチド、および／またはそれが合成
される環境に存在する多数のポリヌクレオチドから遊離したポリペプチドと定義
される。例えば、実質的に精製されたポリペプチドは細胞質ポリペプチドから遊
離したものである。本発明のポリペプチドが天然源、すなわちクラミジア株から
精製され得る、または組換え手段により生産され得ることは当業者には容易に理
解されよう。
然に存在する環境から選別されたポリヌクレオチド、および／またはそれが合成
される環境に存在する多数のポリヌクレオチドから遊離したポリペプチドと定義
される。例えば、実質的に精製されたポリペプチドは細胞質ポリペプチドから遊
離したものである。本発明のポリペプチドが天然源、すなわちクラミジア株から
精製され得る、または組換え手段により生産され得ることは当業者には容易に理
解されよう。
【０１０２】
本発明の第６の態様によれば、ポリペプチド、相同体または断片がクラミジア
に対する感染防御をすると考えられる標的動物において、その免疫原性を向上さ
せるために改変されたまたは処理されたポリペプチド、相同体または断片が提供
される。かかる改変または処理には：３−メチルヒスチジン、４−ヒドロキシプ
ロリン、５−ヒドロキシリジンなどのアミノ酸誘導体によるアミノ酸置換、アミ
ノ酸の遊離アミノ、カルボキシルまたはヒドロキシル側基の改変などのポリペプ
チド、相同体または断片の調整後に行われる改変または欠失が挙げられる。 特異的抗原性を有する本発明のポリヌクレオチドによりコードされる相同ポリ
ペプチドまたはポリペプチド誘導体の同定は、配列番号１４〜２６のいずれか１
つのアミノ酸配列を有する参照ポリペプチドに対して作製した抗血清との交差反
応性によるスクリーニングにより達成される。この手順は次の通りである：単一
特異性高度免疫抗血清を、精製参照ポリペプチド、融合ポリペプチド（例えばＭ
ＢＰ、ＧＳＴ、またはＨｉｓ−ｔａｇ系の発現産物）、または抗原性であると推
測される合成ペプチドに対して作製する。抗血清を融合ポリペプチドに対して作
製する場合、２つの異なる融合系を使用する。特異性抗原性は以下のようにウエ
スタンブロット法(Towbin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1979) 76:435
0)、ドットブロット法、およびＥＬＩＳＡ法などのいくつかの方法により求める
ことができる。
に対する感染防御をすると考えられる標的動物において、その免疫原性を向上さ
せるために改変されたまたは処理されたポリペプチド、相同体または断片が提供
される。かかる改変または処理には：３−メチルヒスチジン、４−ヒドロキシプ
ロリン、５−ヒドロキシリジンなどのアミノ酸誘導体によるアミノ酸置換、アミ
ノ酸の遊離アミノ、カルボキシルまたはヒドロキシル側基の改変などのポリペプ
チド、相同体または断片の調整後に行われる改変または欠失が挙げられる。 特異的抗原性を有する本発明のポリヌクレオチドによりコードされる相同ポリ
ペプチドまたはポリペプチド誘導体の同定は、配列番号１４〜２６のいずれか１
つのアミノ酸配列を有する参照ポリペプチドに対して作製した抗血清との交差反
応性によるスクリーニングにより達成される。この手順は次の通りである：単一
特異性高度免疫抗血清を、精製参照ポリペプチド、融合ポリペプチド（例えばＭ
ＢＰ、ＧＳＴ、またはＨｉｓ−ｔａｇ系の発現産物）、または抗原性であると推
測される合成ペプチドに対して作製する。抗血清を融合ポリペプチドに対して作
製する場合、２つの異なる融合系を使用する。特異性抗原性は以下のようにウエ
スタンブロット法(Towbin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1979) 76:435
0)、ドットブロット法、およびＥＬＩＳＡ法などのいくつかの方法により求める
ことができる。
【０１０３】
ウエスタンブロットアッセイでは、スクリーニングする産物を精製調製物また
は大腸菌全抽出物のいずれかとして、Laemmli(Nature (1970) 227:680)により記
載されたＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動法に付す。ニトロセルロース膜に移した後、
この材料を約１：５〜約１：５０００、好ましくは約１：１００〜約１：５００
の希釈範囲で、希釈した単一特異性高度免疫抗血清とともにさらにインキュベー
トする。その産物に対応する１つのバンドが上記の希釈範囲のいずれかで反応性
を呈すれば、特異的抗原性が示される。
は大腸菌全抽出物のいずれかとして、Laemmli(Nature (1970) 227:680)により記
載されたＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動法に付す。ニトロセルロース膜に移した後、
この材料を約１：５〜約１：５０００、好ましくは約１：１００〜約１：５００
の希釈範囲で、希釈した単一特異性高度免疫抗血清とともにさらにインキュベー
トする。その産物に対応する１つのバンドが上記の希釈範囲のいずれかで反応性
を呈すれば、特異的抗原性が示される。
【０１０４】
ＥＬＩＳＡ法では、スクリーニングする産物を被覆抗原として用いることが好
ましい。全細胞抽出物を用いてもよいが、精製調製物が好ましい。要するに、約
１０μｇタンパク質／ｍｌの調製物約１００μｌを９６−ウェルポリカーボネー
トＥＬＩＳＡプレートに分注する。このプレートを３７℃で２時間、次いで４℃
で一晩インキュベートする。プレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０含有リン酸緩
衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎバッファー）で洗浄する。ウェル
を１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）含有ＰＢＳ２５０μｌで飽和させ、非特異
的抗体結合を妨げる。３７℃で１時間インキュベーションした後、プレートをＰ
ＢＳ／Ｔｗｅｅｎバッファーで洗浄する。抗血清は０．５％ＢＳＡ含有ＰＢＳ／
Ｔｗｅｅｎバッファーで連続的に希釈する。各ウェルに希釈物１００μｌを加え
る。プレートを３７℃で９０分間インキュベートし、洗浄して標準法により評価
する。例えば、特異的抗体をウサギで生産した場合、ヤギ抗ウサギペルオキシダ
ーゼ複合体をウェルに加える。インキュベーションを３７℃で９０分間で行い、
プレートを洗浄する。適当な基質により反応物を顕出させ、この反応物を比色定
量（分光光度計により測定された吸光度）により測定する。上記の試験条件下で
、Ｏ．Ｄ．値が非免疫対照血清より大きい場合に陽性反応を示す。
ましい。全細胞抽出物を用いてもよいが、精製調製物が好ましい。要するに、約
１０μｇタンパク質／ｍｌの調製物約１００μｌを９６−ウェルポリカーボネー
トＥＬＩＳＡプレートに分注する。このプレートを３７℃で２時間、次いで４℃
で一晩インキュベートする。プレートを０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０含有リン酸緩
衝生理食塩水（ＰＢＳ）（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎバッファー）で洗浄する。ウェル
を１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）含有ＰＢＳ２５０μｌで飽和させ、非特異
的抗体結合を妨げる。３７℃で１時間インキュベーションした後、プレートをＰ
ＢＳ／Ｔｗｅｅｎバッファーで洗浄する。抗血清は０．５％ＢＳＡ含有ＰＢＳ／
Ｔｗｅｅｎバッファーで連続的に希釈する。各ウェルに希釈物１００μｌを加え
る。プレートを３７℃で９０分間インキュベートし、洗浄して標準法により評価
する。例えば、特異的抗体をウサギで生産した場合、ヤギ抗ウサギペルオキシダ
ーゼ複合体をウェルに加える。インキュベーションを３７℃で９０分間で行い、
プレートを洗浄する。適当な基質により反応物を顕出させ、この反応物を比色定
量（分光光度計により測定された吸光度）により測定する。上記の試験条件下で
、Ｏ．Ｄ．値が非免疫対照血清より大きい場合に陽性反応を示す。
【０１０５】
ドットブロット法でも、全細胞抽出物を用いてもよいが、精製産物が好ましい
。要するに、約１００μｇ／ｍｌの産物の溶液を５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（
ｐＨ７．５）で連続的に２倍希釈する。各希釈物１００μｌを９６−ウェルドッ
トブロット装置(Biorad)にセットしたニトロセルロース膜０．４５μｍに塗布す
る。系を減圧してバッファーを除去する。５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７
．５）を加えてウェルを洗浄し、膜を風乾する。膜をブロッキングバッファー（
５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１０ｇ／
Ｌ脱脂乳）で飽和させ、約１：５０〜約１：５０００、好ましくは約１：５００
の抗血清希釈物とともにインキュベートする。反応物を標準手順により調べる。
例えば、ウサギ抗体を用いる場合、ヤギ抗ウサギペルオキシダーゼ複合体をウェ
ルに加える。インキュベーションを３７℃で９０分間で行い、ブロットを洗浄す
る。適当な基質により反応物を顕出させて停止させる。この反応物を発色スポッ
トの様子から、例えば比色定量により視覚的に測定する。上記の試験条件下で、
発色スポットが少なくとも約１：５、好ましくは少なくとも約１：５００の希釈
物と結合する場合に陽性反応を示す。
。要するに、約１００μｇ／ｍｌの産物の溶液を５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（
ｐＨ７．５）で連続的に２倍希釈する。各希釈物１００μｌを９６−ウェルドッ
トブロット装置(Biorad)にセットしたニトロセルロース膜０．４５μｍに塗布す
る。系を減圧してバッファーを除去する。５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７
．５）を加えてウェルを洗浄し、膜を風乾する。膜をブロッキングバッファー（
５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、１０ｇ／
Ｌ脱脂乳）で飽和させ、約１：５０〜約１：５０００、好ましくは約１：５００
の抗血清希釈物とともにインキュベートする。反応物を標準手順により調べる。
例えば、ウサギ抗体を用いる場合、ヤギ抗ウサギペルオキシダーゼ複合体をウェ
ルに加える。インキュベーションを３７℃で９０分間で行い、ブロットを洗浄す
る。適当な基質により反応物を顕出させて停止させる。この反応物を発色スポッ
トの様子から、例えば比色定量により視覚的に測定する。上記の試験条件下で、
発色スポットが少なくとも約１：５、好ましくは少なくとも約１：５００の希釈
物と結合する場合に陽性反応を示す。
【０１０６】
本発明のポリペプチドまたは誘導体の治療または予防効力は下記のように評価
できる。本発明の第７の態様によれば、（ｉ）本発明のポリペプチドとともに希
釈剤または担体を含んでなる材料の組成物；とりわけ（ii）治療または予防上有
効な量の本発明のポリペプチドを含有する医薬組成物；（iii）免疫上有効な量
の本発明のポリペプチドを哺乳類に投与してクラミジアに対する感染防御免疫応
答を誘導することにより哺乳類のクラミジアに対する免疫応答を誘導する方法；
さらに詳しくは（iv）感染した個体に予防または治療量の本発明のポリペプチド
を投与することにより、クラミジア（例えばＣ．トラチョマチス、Ｃ．プシタチ
、肺炎クラミジア、またはＣ．ペコラム）感染症を予防および／または治療する
方法が提供される。さらに本発明の第７の態様によれば、クラミジア感染症を予
防および／または治療する医薬の製造における本発明のポリペプチドの使用が含
まれる。
できる。本発明の第７の態様によれば、（ｉ）本発明のポリペプチドとともに希
釈剤または担体を含んでなる材料の組成物；とりわけ（ii）治療または予防上有
効な量の本発明のポリペプチドを含有する医薬組成物；（iii）免疫上有効な量
の本発明のポリペプチドを哺乳類に投与してクラミジアに対する感染防御免疫応
答を誘導することにより哺乳類のクラミジアに対する免疫応答を誘導する方法；
さらに詳しくは（iv）感染した個体に予防または治療量の本発明のポリペプチド
を投与することにより、クラミジア（例えばＣ．トラチョマチス、Ｃ．プシタチ
、肺炎クラミジア、またはＣ．ペコラム）感染症を予防および／または治療する
方法が提供される。さらに本発明の第７の態様によれば、クラミジア感染症を予
防および／または治療する医薬の製造における本発明のポリペプチドの使用が含
まれる。
【０１０７】
本明細書において、本発明の免疫原性組成物はワクチン分野で知られる便宜な
経路、特に粘膜（例えば目、鼻腔内、肺、口腔、胃、腸、直腸、膣、または尿管
）表面にまたは非経口（例えば皮下、皮内、筋肉内、静脈内、または腹膜内）経
路により投与する。投与経路の選択はポリペプチドと結合したアジュバントなど
のいくつかのパラメーターによる。粘膜アジュバントを用いる場合には鼻腔内ま
たは口腔経路が好ましい。脂質処方またはアルミニウム化合物を用いる場合には
非経口経路が好ましく、皮下または筋肉内経路が最も好ましい。この選択もまた
ワクチン薬剤の性質による。例えば、ＣＴＢまたはＬＴＢと融合した本発明のポ
リペプチドは粘膜表面に投与することが最もよい。
経路、特に粘膜（例えば目、鼻腔内、肺、口腔、胃、腸、直腸、膣、または尿管
）表面にまたは非経口（例えば皮下、皮内、筋肉内、静脈内、または腹膜内）経
路により投与する。投与経路の選択はポリペプチドと結合したアジュバントなど
のいくつかのパラメーターによる。粘膜アジュバントを用いる場合には鼻腔内ま
たは口腔経路が好ましい。脂質処方またはアルミニウム化合物を用いる場合には
非経口経路が好ましく、皮下または筋肉内経路が最も好ましい。この選択もまた
ワクチン薬剤の性質による。例えば、ＣＴＢまたはＬＴＢと融合した本発明のポ
リペプチドは粘膜表面に投与することが最もよい。
【０１０８】
本明細書において、本発明の組成物は１つまたはいくつかの本発明のポリペプ
チドまたは誘導体を含有する。所望により組成物は少なくとも１つの付加的なク
ラミジア抗原、またはそのサブユニット、断片、相同体、変異体もしくは誘導体
を含有してもよい。
チドまたは誘導体を含有する。所望により組成物は少なくとも１つの付加的なク
ラミジア抗原、またはそのサブユニット、断片、相同体、変異体もしくは誘導体
を含有してもよい。
【０１０９】
本発明の組成物における使用では、ポリペプチドまたはその誘導体をリポソー
ム、好ましくは中性または陰イオンリポソーム、ミクロスフェア、ＩＳＣＯＭＳ
、またはウイルス様粒子（ＶＬＰ）中にまたはそれとともに処方して、送達を促
進および／または免疫応答を増強する。当業者はこれらの化合物を容易に入手で
きる；例えばLiposomes: A Practical Approach,RPC New Ed, IRL press(1990)
参照。
ム、好ましくは中性または陰イオンリポソーム、ミクロスフェア、ＩＳＣＯＭＳ
、またはウイルス様粒子（ＶＬＰ）中にまたはそれとともに処方して、送達を促
進および／または免疫応答を増強する。当業者はこれらの化合物を容易に入手で
きる；例えばLiposomes: A Practical Approach,RPC New Ed, IRL press(1990)
参照。
【０１１０】
リポソームなど以外のアジュバントも用いられ、当技術分野では公知である。
アジュバントは抗原を局所デポジットに封鎖することにより、それを急速な分散
から守る、またはそれらは宿主を刺激して免疫系のマクロファージまたは他の成
分に対し化学走性である因子を分泌する物質を含有すると考えられる。一般的に
は当業者によって、例えば以下（本発明による第十一の態様を参照）に記載され
るものから適当な選択がなされるであろう。
アジュバントは抗原を局所デポジットに封鎖することにより、それを急速な分散
から守る、またはそれらは宿主を刺激して免疫系のマクロファージまたは他の成
分に対し化学走性である因子を分泌する物質を含有すると考えられる。一般的に
は当業者によって、例えば以下（本発明による第十一の態様を参照）に記載され
るものから適当な選択がなされるであろう。
【０１１１】
当業者ならば容易に決定できるが、治療は１回の投与で果たしてもよいし、ま
たは必要に応じて間隔をおいて反復してもよい。例えば、開始用量の後、週単位
または１ヶ月単位の間隔をおいて３回の追加免疫抗原投与を続ける。好適な用量
は当業者には容易に決定できるが、受容者（例えば成人または小児）、個々のワ
クチン抗原、投与経路または頻度、アジュバントの有無またはタイプ、および所
望の効果（例えば感染防御および／または治療）を含む種々のパラメーターによ
って異なる。一般に、本発明のワクチン抗原を粘膜経路によって約１０μｇ〜約
５００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ〜約２００ｍｇの量を投与する。投与が非経口
経路の場合、通常用量は約１ｍｇ、好ましくは約１００μｇの限度を超えない。
たは必要に応じて間隔をおいて反復してもよい。例えば、開始用量の後、週単位
または１ヶ月単位の間隔をおいて３回の追加免疫抗原投与を続ける。好適な用量
は当業者には容易に決定できるが、受容者（例えば成人または小児）、個々のワ
クチン抗原、投与経路または頻度、アジュバントの有無またはタイプ、および所
望の効果（例えば感染防御および／または治療）を含む種々のパラメーターによ
って異なる。一般に、本発明のワクチン抗原を粘膜経路によって約１０μｇ〜約
５００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ〜約２００ｍｇの量を投与する。投与が非経口
経路の場合、通常用量は約１ｍｇ、好ましくは約１００μｇの限度を超えない。
【０１１２】
ワクチン薬剤として用いる場合、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドを多段階免疫化プロセスの要素として連続的に用いてもよい。例えば、まず哺
乳類にポックスウイルスなどの本発明のワクチンベクターを、例えば非経口経路
によりに注入し、次いでワクチンベクターによりコードされるポリペプチドで２
回、例えば粘膜経路により追加免疫抗原を加える。また別の例では本発明のポリ
ペプチドまたは誘導体と結合したリポソームを開始に用い、粘膜アジュバント（
例えばＬＴ）と組み合わせた本発明の可溶性ポリペプチドまたは誘導体を用いて
粘膜により追加免疫抗原刺激を行う。
ドを多段階免疫化プロセスの要素として連続的に用いてもよい。例えば、まず哺
乳類にポックスウイルスなどの本発明のワクチンベクターを、例えば非経口経路
によりに注入し、次いでワクチンベクターによりコードされるポリペプチドで２
回、例えば粘膜経路により追加免疫抗原を加える。また別の例では本発明のポリ
ペプチドまたは誘導体と結合したリポソームを開始に用い、粘膜アジュバント（
例えばＬＴ）と組み合わせた本発明の可溶性ポリペプチドまたは誘導体を用いて
粘膜により追加免疫抗原刺激を行う。
【０１１３】
本発明の第７の態様によれば、本発明のポリペプチド誘導体はまた、例えば血
液サンプルにおいて抗クラミジア抗体の存在を検出する診断試薬として用いられ
る。かかるポリペプチドの長さは約５〜約８０個、好ましくは約１０〜約５０個
のアミノ酸である。診断方法により、それらを標識するまたは標識しないのいず
れかである。かかる試薬を含む診断方法を以下に記載する。
液サンプルにおいて抗クラミジア抗体の存在を検出する診断試薬として用いられ
る。かかるポリペプチドの長さは約５〜約８０個、好ましくは約１０〜約５０個
のアミノ酸である。診断方法により、それらを標識するまたは標識しないのいず
れかである。かかる試薬を含む診断方法を以下に記載する。
【０１１４】
公知の実験室手法を用い、本発明のＤＮＡ分子の発現においてポリペプチドま
たはポリペプチド誘導体を生産し精製する。以下に記載されるように、ポリペプ
チドまたはポリペプチド誘導体は精製を促進する融合テールを有した融合タンパ
ク質として生産される。融合産物を用いて小型哺乳類、例えばマウスまたはウサ
ギを免疫化し、ポリペプチドまたはポリペプチド誘導体に対する抗体（単一特異
性抗体）を作製する。よって本発明の第８の態様によれば、本発明のポリペプチ
ドまたはポリペプチド誘導体と結合する単一特異性抗体が提供される。
たはポリペプチド誘導体を生産し精製する。以下に記載されるように、ポリペプ
チドまたはポリペプチド誘導体は精製を促進する融合テールを有した融合タンパ
ク質として生産される。融合産物を用いて小型哺乳類、例えばマウスまたはウサ
ギを免疫化し、ポリペプチドまたはポリペプチド誘導体に対する抗体（単一特異
性抗体）を作製する。よって本発明の第８の態様によれば、本発明のポリペプチ
ドまたはポリペプチド誘導体と結合する単一特異性抗体が提供される。
【０１１５】
「単一特異性抗体」とは特異な天然に存在するクラミジアポリペプチドと反応
し得る抗体を意味する。本発明の抗体はポリクローナルまたはモノクローナル抗
体のいずれかである。単一特異性抗体は組換え体、例えばキメラ（例えば、ヒト
不変部と結合したネズミ由来の可変部により構成された）、ヒト化型（動物、例
えばネズミ由来の超可変部とともにあるヒト免疫グロブリン不変主鎖）および／
または一本鎖であってよい。ポリクローナルおよび単一特異性抗体は双方とも免
疫グロブリン断片、例えばＦ（ａｂ）’２またはＦａｂフラグメントの形であっ
てもよい。本発明の抗体はいずれのイソ型のもの、例えばＩｇＧまたはＩｇＡで
あってよいが、ポリクローナル抗体は単一イソ型またはイソ型の混合物ある。
し得る抗体を意味する。本発明の抗体はポリクローナルまたはモノクローナル抗
体のいずれかである。単一特異性抗体は組換え体、例えばキメラ（例えば、ヒト
不変部と結合したネズミ由来の可変部により構成された）、ヒト化型（動物、例
えばネズミ由来の超可変部とともにあるヒト免疫グロブリン不変主鎖）および／
または一本鎖であってよい。ポリクローナルおよび単一特異性抗体は双方とも免
疫グロブリン断片、例えばＦ（ａｂ）’２またはＦａｂフラグメントの形であっ
てもよい。本発明の抗体はいずれのイソ型のもの、例えばＩｇＧまたはＩｇＡで
あってよいが、ポリクローナル抗体は単一イソ型またはイソ型の混合物ある。
【０１１６】
本発明のポリペプチド、相同体または断片に対する抗体はそのポリペプチド、
相同体または断片を含んでなる組成物による哺乳類の免疫化により産生される。
かかる抗体はポリクローナルまたはモノクローナル抗体であってよい。ポリクロ
ーナルまたはモノクローナル抗体の産生方法は当技術分野では十分に公知である
。例えば、"Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laborator
y, Eds. E. Harlow and D. Lane (1988)、およびD. E. Yelton et al., 1981. A
nn. Rev. Biochem. 50: 657-680参照。モノクローナル抗体についてはKohl and
Milstein(1975) Nature.256:495-497参照。
相同体または断片を含んでなる組成物による哺乳類の免疫化により産生される。
かかる抗体はポリクローナルまたはモノクローナル抗体であってよい。ポリクロ
ーナルまたはモノクローナル抗体の産生方法は当技術分野では十分に公知である
。例えば、"Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laborator
y, Eds. E. Harlow and D. Lane (1988)、およびD. E. Yelton et al., 1981. A
nn. Rev. Biochem. 50: 657-680参照。モノクローナル抗体についてはKohl and
Milstein(1975) Nature.256:495-497参照。
【０１１７】
本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体に対して作製される本発明の
抗体を標準免疫学的アッセイ法、例えばウエスタンブロット解析法、ドットブロ
ットアッセイ法、またはＥＬＩＳＡ法(例えばColigan et al., Current Protoco
ls in Immunology (1994) John Wiley & Sons, Inc., New York, NY参照)を用い
て作製して同定する。抗体は生物学的サンプルなどのサンプルにおいてクラミジ
ア抗原の存在を検出する診断法に用いられる。また抗体は本発明のポリペプチド
またはポリペプチド誘導体を精製するアフィニティークロマトグラフィーにも用
いられる。以下でさらに考察するように、かかる抗体を予防および治療的受動的
免疫化方法に用いてもよい。
抗体を標準免疫学的アッセイ法、例えばウエスタンブロット解析法、ドットブロ
ットアッセイ法、またはＥＬＩＳＡ法(例えばColigan et al., Current Protoco
ls in Immunology (1994) John Wiley & Sons, Inc., New York, NY参照)を用い
て作製して同定する。抗体は生物学的サンプルなどのサンプルにおいてクラミジ
ア抗原の存在を検出する診断法に用いられる。また抗体は本発明のポリペプチド
またはポリペプチド誘導体を精製するアフィニティークロマトグラフィーにも用
いられる。以下でさらに考察するように、かかる抗体を予防および治療的受動的
免疫化方法に用いてもよい。
【０１１８】
よって本発明の第９の態様によれば、本発明の抗体、ポリペプチド、またはポ
リペプチド誘導体を含有する生物学的サンプルにおいてクラミジアの存在を検出
する試薬；および（ii）免疫複合体が形成されるように生物学的サンプルと本発
明の抗体、ポリペプチド、またはポリペプチド誘導体とを接触させて、かかる複
合体を検出してサンプルまたはサンプルが誘導される生物体においてクラミジア
の存在を示すことにより、生物学的サンプルにおいてクラミジアの存在を検出す
る方法が提供される。
リペプチド誘導体を含有する生物学的サンプルにおいてクラミジアの存在を検出
する試薬；および（ii）免疫複合体が形成されるように生物学的サンプルと本発
明の抗体、ポリペプチド、またはポリペプチド誘導体とを接触させて、かかる複
合体を検出してサンプルまたはサンプルが誘導される生物体においてクラミジア
の存在を示すことにより、生物学的サンプルにおいてクラミジアの存在を検出す
る方法が提供される。
【０１１９】
いずれを用いるとしても免疫複合体がサンプルの成分と抗体、ポリペプチド、
またはポリペプチド誘導体とで形成されること、および結合していない材料がい
ずれも複合体の検出前に除去されることは当業者には容易に理解されるであろう
。ポリペプチド試薬がサンプル、例えば血液サンプルにおいて抗クラミジア抗体
の存在を検出するのに有用であり、本発明の抗体が胃抽出物または生検などのサ
ンプルをクラミジアポリペプチドの存在についてスクリーニングするのに有用で
あることは明らかである。
またはポリペプチド誘導体とで形成されること、および結合していない材料がい
ずれも複合体の検出前に除去されることは当業者には容易に理解されるであろう
。ポリペプチド試薬がサンプル、例えば血液サンプルにおいて抗クラミジア抗体
の存在を検出するのに有用であり、本発明の抗体が胃抽出物または生検などのサ
ンプルをクラミジアポリペプチドの存在についてスクリーニングするのに有用で
あることは明らかである。
【０１２０】
診断適用では、試薬（すなわち本発明の抗体、ポリペプチド、またはポリペプ
チド誘導体）は遊離状態にあるか、またはチューブ、ビーズ、または当分野にお
いて用いられるいずれかの他の通常の支持体などの固相支持体に固定されている
かである。固定は直接的または間接的手段によりなし遂げられる。直接的手段と
しては受動的吸着（非共有結合）または支持体と試薬との共有結合が挙げられる
。「間接的手段」とは試薬と相互作用する抗試薬化合物が固相支持体に最初に付
着することを意味する。例えば、ポリペプチド試薬を用いる場合に、それが生物
学的サンプルにおいて抗体の認識に関係していないエピトープと結合するのであ
れば、それに結合する抗体が抗試薬として作用し得る。間接的手段にはまた、例
えばビタミンなどの分子がポリペプチド試薬に接合され、その対応する受容体が
固相に固定されるリガンド−受容体系も用いられる。これはビオチン−ストレプ
トアビジン系によって例示される。あるいは、ペプチドテールを化学的にまたは
遺伝子操作により試薬に加え、接合または融合された産物をペプチドテールの受
動的吸着または共有結合により固定する。
チド誘導体）は遊離状態にあるか、またはチューブ、ビーズ、または当分野にお
いて用いられるいずれかの他の通常の支持体などの固相支持体に固定されている
かである。固定は直接的または間接的手段によりなし遂げられる。直接的手段と
しては受動的吸着（非共有結合）または支持体と試薬との共有結合が挙げられる
。「間接的手段」とは試薬と相互作用する抗試薬化合物が固相支持体に最初に付
着することを意味する。例えば、ポリペプチド試薬を用いる場合に、それが生物
学的サンプルにおいて抗体の認識に関係していないエピトープと結合するのであ
れば、それに結合する抗体が抗試薬として作用し得る。間接的手段にはまた、例
えばビタミンなどの分子がポリペプチド試薬に接合され、その対応する受容体が
固相に固定されるリガンド−受容体系も用いられる。これはビオチン−ストレプ
トアビジン系によって例示される。あるいは、ペプチドテールを化学的にまたは
遺伝子操作により試薬に加え、接合または融合された産物をペプチドテールの受
動的吸着または共有結合により固定する。
【０１２１】
使用説明書も含んでなるキットにかかる診断薬が含まれていてもよい。この試
薬はそれがその標的と結合した場合に試薬の検出がなされる検出手段によって標
識される。検出手段はフルオレセインイソシアネートまたはフルオレセインイソ
チオシアネートなどの蛍光剤、またはセイヨウワサビペルオキシダーゼもしくは
ルシフェラーゼ、またはアルカリ性ホスファターゼなどの酵素、または１２５Ｉ
または５１Ｃｒなどの放射性元素であってよい。
薬はそれがその標的と結合した場合に試薬の検出がなされる検出手段によって標
識される。検出手段はフルオレセインイソシアネートまたはフルオレセインイソ
チオシアネートなどの蛍光剤、またはセイヨウワサビペルオキシダーゼもしくは
ルシフェラーゼ、またはアルカリ性ホスファターゼなどの酵素、または１２５Ｉ
または５１Ｃｒなどの放射性元素であってよい。
【０１２２】
従って本発明の第１０の態様によれば、生物学的サンプルについて本発明の単
一特異性抗体に基づくアフィニティークロマトグラフィーを行うことを含む、生
物学的サンプルから、本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体を精製す
る方法が提供される。
一特異性抗体に基づくアフィニティークロマトグラフィーを行うことを含む、生
物学的サンプルから、本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体を精製す
る方法が提供される。
【０１２３】
本発明の精製法における使用に関し、抗体はポリクローナルまたは単一特異性
抗体のいずれか、および好ましくはＩｇＧ型である。精製ＩｇＧは常法により抗
血清から調製する(Coligan et al.,Current Protocols in Immunology (1994)Jo
hn Wiley & Sons, Inc., New York, NY参照)。一般的なクロマトグラフィー支持
体、ならびに抗体を接合する標準方法については、例えばAntibodies: A Labora
tory Manual, D. Lane, E. Harlow, Eds. (1988)に記載されている。以下に概略
を記す。
抗体のいずれか、および好ましくはＩｇＧ型である。精製ＩｇＧは常法により抗
血清から調製する(Coligan et al.,Current Protocols in Immunology (1994)Jo
hn Wiley & Sons, Inc., New York, NY参照)。一般的なクロマトグラフィー支持
体、ならびに抗体を接合する標準方法については、例えばAntibodies: A Labora
tory Manual, D. Lane, E. Harlow, Eds. (1988)に記載されている。以下に概略
を記す。
【０１２４】
要するに、好ましくはバッファー溶液中の肺炎クラミジア抽出物などの生物学
的サンプルを、本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体（すなわち抗原
）をクロマトグラフィー材に吸着させるように、好ましくは生物学的サンプルの
希釈に用いるバッファーで平衡化した材料に適用する。本発明の抗体と結合した
ゲルまたは樹脂などのクロマトグラフィー材はバッチ型またはカラムのいずれか
である。結合しない成分を洗い流し、次いで抗原をグリシンバッファー、または
カオトロピック剤、例えばグアニジンＨＣｌ、もしくは高塩濃度（例えば、３Ｍ
ＭｇＣｌ２）を含有するバッファーなどの好適な溶出バッファーで溶出する。
溶出画分を回収し、例えば２８０ｎｍにおける吸光度を測定することにより抗原
の存在を検出する。
的サンプルを、本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体（すなわち抗原
）をクロマトグラフィー材に吸着させるように、好ましくは生物学的サンプルの
希釈に用いるバッファーで平衡化した材料に適用する。本発明の抗体と結合した
ゲルまたは樹脂などのクロマトグラフィー材はバッチ型またはカラムのいずれか
である。結合しない成分を洗い流し、次いで抗原をグリシンバッファー、または
カオトロピック剤、例えばグアニジンＨＣｌ、もしくは高塩濃度（例えば、３Ｍ
ＭｇＣｌ２）を含有するバッファーなどの好適な溶出バッファーで溶出する。
溶出画分を回収し、例えば２８０ｎｍにおける吸光度を測定することにより抗原
の存在を検出する。
【０１２５】
本発明の第１１の態様によれば、（ｉ）本発明の単一特異性抗体とともに希釈
剤または担体を含んでなる材料の組成物；（ii）治療または予防上有効な量の本
発明の単一特異性抗体を含んでなる医薬組成物；および（iii）感染した個体に
治療または予防量の本発明の単一特異性抗体を投与することにより、クラミジア
（例えばＣ．トラチョマチス、Ｃ．プシタチ、肺炎クラミジア、またはＣ．ペコ
ラム）感染症を治療または予防する方法が提供される。さらに本発明の第１１の
態様によれば、クラミジア感染症を治療または予防する医薬の製造における本発
明の単一特異性抗体の使用が含まれる。
剤または担体を含んでなる材料の組成物；（ii）治療または予防上有効な量の本
発明の単一特異性抗体を含んでなる医薬組成物；および（iii）感染した個体に
治療または予防量の本発明の単一特異性抗体を投与することにより、クラミジア
（例えばＣ．トラチョマチス、Ｃ．プシタチ、肺炎クラミジア、またはＣ．ペコ
ラム）感染症を治療または予防する方法が提供される。さらに本発明の第１１の
態様によれば、クラミジア感染症を治療または予防する医薬の製造における本発
明の単一特異性抗体の使用が含まれる。
【０１２６】
単一特異性抗体はポリクローナルまたはモノクローナルのいずれか、好ましく
はＩｇＡイソ型のもの（優勢）である。受動的免疫化では抗体を重炭酸バッファ
ーの存在下で哺乳類の粘膜表面、例えば胃粘膜に、例えば経口または胃内投与す
ることが有利である。また全身投与は重炭酸バッファーを用いずに行われる。本
発明の単一特異性抗体を単一有効成分として、または異なるクラミジアポリペプ
チドに対して特異的な少なくとも１つの単一特異性抗体との混合物として投与す
る。用いる抗体量および特定の管理方法は当業者により容易に決定される。大部
分の目的には、例えば抗体約１００〜１，０００ｍｇを１週間毎日投与、または
抗体約１００〜１，０００ｍｇを２または３日間１日当たり３回投与が有効な管
理法である。
はＩｇＡイソ型のもの（優勢）である。受動的免疫化では抗体を重炭酸バッファ
ーの存在下で哺乳類の粘膜表面、例えば胃粘膜に、例えば経口または胃内投与す
ることが有利である。また全身投与は重炭酸バッファーを用いずに行われる。本
発明の単一特異性抗体を単一有効成分として、または異なるクラミジアポリペプ
チドに対して特異的な少なくとも１つの単一特異性抗体との混合物として投与す
る。用いる抗体量および特定の管理方法は当業者により容易に決定される。大部
分の目的には、例えば抗体約１００〜１，０００ｍｇを１週間毎日投与、または
抗体約１００〜１，０００ｍｇを２または３日間１日当たり３回投与が有効な管
理法である。
【０１２７】
治療または予防効力を当技術分野の常法を用いて、例えば粘膜免疫応答の誘導
または感染防御および／または治療的免疫の誘導を、例えば肺炎クラミジアマウ
スモデルを用いて測定することにより評価する。モデルの肺炎クラミジア株を別
のクラミジア株と置き換えてもよいことは当業者に容易に理解されるであろう。
例えば、肺炎クラミジア由来のＤＮＡ分子およびポリペプチドの効果は、好まし
くはマウスモデルにおいて肺炎クラミジア株を用いて評価する。感染防御はクラ
ミジア感染症の程度を対照群のものと比較して求める。感染症が対照群に比べて
軽減されている場合に感染防御を示す。本発明のポリヌクレオチド、ワクチンベ
クター、ポリペプチドおよびその誘導体、ならびに抗体に対してかかる評価がな
される。上記のいずれのワクチン組成物においても有用なアジュバントは以下の
通りである。
または感染防御および／または治療的免疫の誘導を、例えば肺炎クラミジアマウ
スモデルを用いて測定することにより評価する。モデルの肺炎クラミジア株を別
のクラミジア株と置き換えてもよいことは当業者に容易に理解されるであろう。
例えば、肺炎クラミジア由来のＤＮＡ分子およびポリペプチドの効果は、好まし
くはマウスモデルにおいて肺炎クラミジア株を用いて評価する。感染防御はクラ
ミジア感染症の程度を対照群のものと比較して求める。感染症が対照群に比べて
軽減されている場合に感染防御を示す。本発明のポリヌクレオチド、ワクチンベ
クター、ポリペプチドおよびその誘導体、ならびに抗体に対してかかる評価がな
される。上記のいずれのワクチン組成物においても有用なアジュバントは以下の
通りである。
【０１２８】
非経口投与用アジュバントには、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、
およびヒドロキシリン酸アルミニウムなどのアルミニウム化合物が挙げられる。
標準プロトコールに従い、抗原をアルミニウム化合物で沈降させる、またはそれ
に吸着させる。ＲＩＢＩ(ImmunoChem, Hamilton, MT)などの他のアジュバントも
非経口投与に用いられる。
およびヒドロキシリン酸アルミニウムなどのアルミニウム化合物が挙げられる。
標準プロトコールに従い、抗原をアルミニウム化合物で沈降させる、またはそれ
に吸着させる。ＲＩＢＩ(ImmunoChem, Hamilton, MT)などの他のアジュバントも
非経口投与に用いられる。
【０１２９】
粘膜投与用アジュバントには細菌毒、例えばコレラ毒（ＣＴ）、大腸菌易熱性
毒（ＬＴ）、クロストリジウム・ディフィシル(Clostridium difficile)毒Ａお
よび百日咳毒（ＰＴ）、もしくはその組合せ、サブユニット、変性毒素、または
天然コレラ毒サブユニットＢ（ＣＴＢ）の精製製剤などのその変異体が挙げられ
る。これらの毒素のいずれに対する断片、相同体、誘導体、および融合物もアジ
ュバント活性を保有している場合にはそれらもまた適当である。好ましくは弱毒
化した変異体を用いる。好適な変異体は、例えばＷＯ９５／１７２１１（Ａｒｇ
−７−Ｌｙｓ ＣＴ変異体）、ＷＯ９６／０６６２７（Ａｒｇ−１９２−Ｇｌｙ
ＬＴ変異体）、およびＷＯ９５−３４３２３（Ａｒｇ−９−ＬｙｓおよびＧｌ
ｕ−１２９−Ｇｌｙ ＰＴ変異体）に記載される。本発明の方法および組成物に
おいて用いられるさらなるＬＴ変異体には、例えばＳｅｒ−６３−Ｌｙｓ、Ａｌ
ａ−６９−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−１１０−Ａｓｐ、およびＧｌｕ−１１２−Ａｓｐ変
異体が挙げられる。例えば大腸菌、サルモネラ・ミネソタ(Salmonella minnesot
a)、ネズミチフス菌、またはシゲラ・フレクスネリ(Shigella Flexneri)の細菌
モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）；サポニン、またはポリアクチドグリコリド
（ＰＬＧＡ）ミクロスフェアなどの他のアジュバントも粘膜投与に用いられる。
毒（ＬＴ）、クロストリジウム・ディフィシル(Clostridium difficile)毒Ａお
よび百日咳毒（ＰＴ）、もしくはその組合せ、サブユニット、変性毒素、または
天然コレラ毒サブユニットＢ（ＣＴＢ）の精製製剤などのその変異体が挙げられ
る。これらの毒素のいずれに対する断片、相同体、誘導体、および融合物もアジ
ュバント活性を保有している場合にはそれらもまた適当である。好ましくは弱毒
化した変異体を用いる。好適な変異体は、例えばＷＯ９５／１７２１１（Ａｒｇ
−７−Ｌｙｓ ＣＴ変異体）、ＷＯ９６／０６６２７（Ａｒｇ−１９２−Ｇｌｙ
ＬＴ変異体）、およびＷＯ９５−３４３２３（Ａｒｇ−９−ＬｙｓおよびＧｌ
ｕ−１２９−Ｇｌｙ ＰＴ変異体）に記載される。本発明の方法および組成物に
おいて用いられるさらなるＬＴ変異体には、例えばＳｅｒ−６３−Ｌｙｓ、Ａｌ
ａ−６９−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−１１０−Ａｓｐ、およびＧｌｕ−１１２−Ａｓｐ変
異体が挙げられる。例えば大腸菌、サルモネラ・ミネソタ(Salmonella minnesot
a)、ネズミチフス菌、またはシゲラ・フレクスネリ(Shigella Flexneri)の細菌
モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ）；サポニン、またはポリアクチドグリコリド
（ＰＬＧＡ）ミクロスフェアなどの他のアジュバントも粘膜投与に用いられる。
【０１３０】
粘膜および非経口投与の双方に有用なアジュバントには、ポリホスファゼン（
ＷＯ９５／０２４１５）、ＤＣ−ｃｈｏｌ（３ｂ−（Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチ
ルアミノメタン）−カルバモイル）コレステロール；米国特許第５，２８３，１
８５号およびＷＯ９６／１４８３１）およびＱＳ−２１（ＷＯ８８／０９３３６
）が挙げられる。
ＷＯ９５／０２４１５）、ＤＣ−ｃｈｏｌ（３ｂ−（Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチ
ルアミノメタン）−カルバモイル）コレステロール；米国特許第５，２８３，１
８５号およびＷＯ９６／１４８３１）およびＱＳ−２１（ＷＯ８８／０９３３６
）が挙げられる。
【０１３１】
本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、ポリペプチド誘導体、または抗体
を含有する本発明の医薬組成物は常法で製造される。特に医薬上許容される希釈
剤または担体、例えば水またはリン酸緩衝生理食塩水などの生理食塩水とともに
処方される。一般に希釈剤または担体は投与形ならびに経路、および医薬上の標
準法に基づき選択される。好適な医薬上の担体または希釈剤、ならびに医薬製剤
における使用に医薬上必要不可欠なものは、Remington's Pharmaceutical Scien
ces、当分野における標準的な参照文献およびＵＳＰ／ＮＦに記載されている。
を含有する本発明の医薬組成物は常法で製造される。特に医薬上許容される希釈
剤または担体、例えば水またはリン酸緩衝生理食塩水などの生理食塩水とともに
処方される。一般に希釈剤または担体は投与形ならびに経路、および医薬上の標
準法に基づき選択される。好適な医薬上の担体または希釈剤、ならびに医薬製剤
における使用に医薬上必要不可欠なものは、Remington's Pharmaceutical Scien
ces、当分野における標準的な参照文献およびＵＳＰ／ＮＦに記載されている。
【０１３２】
本発明はまた、本発明のクラミジアポリペプチドおよび粘膜アジュバントと抗
生物質、制酸剤、スクラルファート、またはその組合せとを併用した経口投与に
よりクラミジア感染症を治療する方法も含む。ワクチン抗原およびアジュバント
とともに投与し得るかかる化合物の例としては、例えばマクロライド、テトラサ
イクリン、およびその誘導体（用い得る抗生物質の特異例として、アジトロマイ
シンもしくはドキシサイクリンまたはサイトカインもしくはステロイド類などの
免疫調節剤が挙げられる）などの抗生物質がある。さらにともに結合した１種を
超える上記成分を含有する化合物を用いる。本発明はまたこれらの方法を行うた
めの組成物、すなわち医薬上許容される担体または希釈剤中に本発明のクラミジ
ア抗原（または抗体）、アジュバント、および１種以上の上記の化合物を含有す
る組成物も含む。
生物質、制酸剤、スクラルファート、またはその組合せとを併用した経口投与に
よりクラミジア感染症を治療する方法も含む。ワクチン抗原およびアジュバント
とともに投与し得るかかる化合物の例としては、例えばマクロライド、テトラサ
イクリン、およびその誘導体（用い得る抗生物質の特異例として、アジトロマイ
シンもしくはドキシサイクリンまたはサイトカインもしくはステロイド類などの
免疫調節剤が挙げられる）などの抗生物質がある。さらにともに結合した１種を
超える上記成分を含有する化合物を用いる。本発明はまたこれらの方法を行うた
めの組成物、すなわち医薬上許容される担体または希釈剤中に本発明のクラミジ
ア抗原（または抗体）、アジュバント、および１種以上の上記の化合物を含有す
る組成物も含む。
【０１３３】
本発明の方法および組成物において用いられる上記化合物の量については当業
者ならば容易に求められる。治療／免疫化計画についても公知であり、当業者に
よって容易に計画される。例えば、非ワクチン成分を１〜１４日目に投与して、
ワクチン抗原＋アジュバントを７、１４、２１、および２８日目に投与すること
が可能である。
者ならば容易に求められる。治療／免疫化計画についても公知であり、当業者に
よって容易に計画される。例えば、非ワクチン成分を１〜１４日目に投与して、
ワクチン抗原＋アジュバントを７、１４、２１、および２８日目に投与すること
が可能である。
【配列表】
【図１】
本発明の核酸配列の制限酵素解析を示す。
【図２】
本発明の核酸配列の制限酵素解析を示す。
【図３】
本発明の核酸配列の制限酵素解析を示す。
【図４】
本発明の核酸配列の制限酵素解析を示す。
【図５】
本発明の核酸配列の制限酵素解析を示す。
【図６】
本発明の核酸配列の制限酵素解析を示す。
【図７】
本発明の核酸配列の制限酵素解析を示す。
【図８】
本発明の核酸配列の制限酵素解析を示す。
【図９】
本発明の核酸配列の制限酵素解析を示す。
【図１０】
本発明の核酸配列の制限酵素解析を示す。
【図１１】
本発明の核酸配列の制限酵素解析を示す。
【図１２】
本発明の核酸配列の制限酵素解析を示す。
【図１３】
本発明の核酸配列の制限酵素解析を示す。
【図１４】
配列番号１４のアミノ酸配列からのＴおよびＢ細胞エピトープの同定を示す。
【図１５】
配列番号１５のアミノ酸配列からのＴおよびＢ細胞エピトープの同定を示す。
【図１６】
配列番号１６のアミノ酸配列からのＴおよびＢ細胞エピトープの同定を示す。
【図１７】
配列番号１７のアミノ酸配列からのＴおよびＢ細胞エピトープの同定を示す。
【図１８】
配列番号１８のアミノ酸配列からのＴおよびＢ細胞エピトープの同定を示す。
【図１９】
配列番号１９のアミノ酸配列からのＴおよびＢ細胞エピトープの同定を示す。
【図２０】
配列番号２０のアミノ酸配列からのＴおよびＢ細胞エピトープの同定を示す。
【図２１】
配列番号２１のアミノ酸配列からのＴおよびＢ細胞エピトープの同定を示す。
【図２２】
配列番号２２のアミノ酸配列からのＴおよびＢ細胞エピトープの同定を示す。
【図２３】
配列番号２３のアミノ酸配列からのＴおよびＢ細胞エピトープの同定を示す。
【図２４】
配列番号２４のアミノ酸配列からのＴおよびＢ細胞エピトープの同定を示す。
【図２５】
配列番号２５のアミノ酸配列からのＴおよびＢ細胞エピトープの同定を示す。
【図２６】
配列番号２６のアミノ酸配列からのＴおよびＢ細胞エピトープの同定を示す。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 48/00 ４Ｃ０８４
45/00 Ａ６１Ｐ 31/04 ４Ｃ０８５
48/00 Ｃ０７Ｋ 14/295 ４Ｃ０８６
Ａ６１Ｐ 31/04 16/12 ４Ｈ０４５
Ｃ０７Ｋ 14/295 Ｃ１２Ｎ 1/15
16/12 1/19
Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21
1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ
1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ
5/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ
Ｃ１２Ｐ 21/02 33/50 Ｚ
Ｃ１２Ｑ 1/68 33/53 Ｄ
Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｍ
33/50 33/566
33/53 33/569 Ａ
Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ
33/566 5/00 Ａ
33/569 Ａ６１Ｋ 37/02
(31)優先権主張番号 ６０／１１３，２８２
(32)優先日 平成10年12月23日(1998．12．23)
(33)優先権主張国 米国（ＵＳ）
(31)優先権主張番号 ６０／１１３，２８３
(32)優先日 平成10年12月23日(1998．12．23)
(33)優先権主張国 米国（ＵＳ）
(31)優先権主張番号 ６０／１１３，２８４
(32)優先日 平成10年12月23日(1998．12．23)
(33)優先権主張国 米国（ＵＳ）
(31)優先権主張番号 ６０／１１３，２８５
(32)優先日 平成10年12月23日(1998．12．23)
(33)優先権主張国 米国（ＵＳ）
(31)優先権主張番号 ６０／１１３，３８５
(32)優先日 平成10年12月23日(1998．12．23)
(33)優先権主張国 米国（ＵＳ）
(31)優先権主張番号 ６０／１１４，０５０
(32)優先日 平成10年12月28日(1998．12．28)
(33)優先権主張国 米国（ＵＳ）
(31)優先権主張番号 ６０／１１４，０５６
(32)優先日 平成10年12月28日(1998．12．28)
(33)優先権主張国 米国（ＵＳ）
(31)優先権主張番号 ６０／１１４，０５７
(32)優先日 平成10年12月28日(1998．12．28)
(33)優先権主張国 米国（ＵＳ）
(31)優先権主張番号 ６０／１１４，０５８
(32)優先日 平成10年12月28日(1998．12．28)
(33)優先権主張国 米国（ＵＳ）
(31)優先権主張番号 ６０／１１４，０５９
(32)優先日 平成10年12月28日(1998．12．28)
(33)優先権主張国 米国（ＵＳ）
(31)優先権主張番号 ６０／１１４，０６１
(32)優先日 平成10年12月28日(1998．12．28)
(33)優先権主張国 米国（ＵＳ）
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，
ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ
Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ
，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，
ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ
Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ
)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，
ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，
ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ
Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ
，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，
ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ
Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ
，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，
ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ
Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ
，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ
(72)発明者 ジョー、ワン
カナダ国オンタリオ州、トロント、アスペ
ン、ドライブ、51
Ｆターム(参考） 2G045 AA28 BB20 CB21 DA12 DA13
DA14 DA20 DA36 FB02 FB03
FB06 FB07 FB15
4B024 AA01 AA11 BA31 CA02 CA07
CA09 CA20 DA01 DA02 DA05
DA12 FA02 GA11 HA11 HA13
HA14 HA17
4B063 QA19 QQ06 QQ43 QQ53 QQ79
QR08 QR32 QR35 QR39 QR42
QR48 QR56 QR62 QS16 QS25
QS33 QS34 QX02 QX10
4B064 AG01 AG31 CA02 CA05 CA06
CA10 CA11 CA19 CC01 CC24
DA01 DA15
4B065 AA01X AA01Y AA58X AA72X
AA87X AB01 AC14 BA01
BA02 CA24 CA45
4C084 AA02 AA06 AA07 AA13 AA17
BA02 BA08 BA22 BA23 CA04
MA01 NA14 ZB352
4C085 AA03 AA13 AA14 BA45 CC32
DD86 EE01 FF19 GG01
4C086 AA01 AA02 AA03 AA04 EA16
MA01 MA04 NA14 ZB35
4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10
BA41 CA11 DA86 EA29 EA50
FA71 FA74
Claims (30)
- 【請求項１】 （ａ）配列番号１４〜２６； （ｂ）（ａ）のポリペプチド由来の少なくとも１２個の連続するアミノ酸を含
んでなる免疫原性断片；および （ｃ）その免疫原性を向上させるために改変された（ａ）または（ｂ）のポリ
ペプチド（この改変ポリペプチドは対応する（ａ）または（ｂ）のポリペプチド
とアミノ酸配列において少なくとも７５％の同一性を有する） のいずれかから選択されるポリペプチドをコードする核酸配列を含んでなる核酸
分子。 - 【請求項２】 （ａ）配列番号１〜１３； （ｂ）配列番号１〜１３のいずれか１つによってコードされるポリペプチドを
コードする配列； （ｃ）（ａ）および（ｂ）の核酸配列のいずれか１つに由来する少なくとも３
８個の連続するヌクレオチドを含んでなる配列； （ｄ）配列番号１〜１３によってコードされるポリペプチドのいずれか１つと
アミノ酸配列において少なくとも７５％の同一性を有するポリペプチドをコード
する配列 のいずれかから選択される核酸配列を含んでなる核酸分子。 - 【請求項３】 請求項１または２に記載の核酸分子に対してアンチセンスである核酸配列を含
んでなる核酸分子。 - 【請求項４】 請求項１に記載の核酸分子によってコードされるポリペプチドと付加的なポリ
ペプチドとを含んでなる融合タンパクをコードする核酸配列を含んでなる核酸分
子。 - 【請求項５】 付加的なポリペプチドが異種シグナルペプチドである、請求項４に記載の核酸
分子。 - 【請求項６】 付加的なポリペプチドがアジュバント活性を有する、請求項４に記載の核酸分
子。 - 【請求項７】 １以上の発現制御配列に作動可能に連結された、請求項１〜６のいずれか一項
に記載の核酸分子。 - 【請求項８】 請求項１、２、および４〜７のいずれか一項に記載の少なくとも１つの第１の
核酸とワクチンベクターとを含んでなり（ここで、各々の第１の核酸はポリペプ
チドとして発現する）、所望によりこの第１の核酸によって発現されるポリペプ
チドに対する免疫応答を増強する付加的なポリペプチドをコードする第２の核酸
を含んでなる、ワクチン。 - 【請求項９】 第２の核酸が付加的なクラミジアポリペプチドをコードしている、請求項８に
記載のワクチン。 - 【請求項１０】 請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸と医薬上許容される担体とを含んで
なる医薬組成物。 - 【請求項１１】 請求項８または９に記載のワクチンと医薬上許容される担体とを含んでなる医
薬組成物。 - 【請求項１２】 請求項７に記載の核酸分子で形質転換された単細胞宿主。
- 【請求項１３】 ストリンジェント条件下で、配列番号１〜１３のいずれか１つの核酸分子、ま
たはその核酸分子の相同体または相補もしくはアンチセンス配列とハイブリダイ
ズする５〜１００個のヌクレオチドからなる核酸プローブ。 - 【請求項１４】 ストリンジェント条件下で、配列番号１〜１３のいずれか１つの核酸分子、ま
たはその核酸分子の相同体または相補もしくはアンチセンス配列とハイブリダイ
ズする１０〜４０個のヌクレオチドからなるプライマー。 - 【請求項１５】 請求項１、２、および４〜７のいずれか一項に記載の核酸配列によってコード
されているポリペプチド。 - 【請求項１６】 （ａ）配列番号１４〜２６； （ｂ）（ａ）のポリペプチド由来の少なくとも１２個の連続するアミノ酸を含
んでなる免疫原性断片；および （ｃ）その免疫原性を向上させるために改変された（ａ）または（ｂ）のポリ
ペプチド（この改変ポリペプチドは対応する（ａ）または（ｂ）のポリペプチド
とアミノ酸配列において少なくとも７５％の同一性を有する） のいずれかから選択されるアミノ酸配列を含んでなるポリペプチド。 - 【請求項１７】 請求項１５または１６のポリペプチドと付加的なポリペプチドとを含んでなる
融合ポリペプチド。 - 【請求項１８】 付加的なポリペプチドが異種シグナルペプチドである、請求項１７に記載の融
合ポリペプチド。 - 【請求項１９】 付加的なポリペプチドがアジュバント活性を有する、請求項１７に記載の融合
ポリペプチド。 - 【請求項２０】 請求項１５または１６のポリペプチドを生産する方法であって、請求項１２に
記載の単細胞宿主を培養する工程を含んでなる、方法。 - 【請求項２１】 請求項１５〜１９のいずれか一項に記載のポリペプチドに対する抗体。
- 【請求項２２】 請求項１５〜１９のいずれか一項に記載の少なくとも１つの第１のポリペプチ
ドと医薬上許容される担体とを含んでなり、所望によりこの第１のポリペプチド
に対する免疫応答を増強する第２のポリペプチドを含んでなる、ワクチン。 - 【請求項２３】 第２のポリペプチドが付加的なクラミジアポリペプチドを含んでなる、請求項
２２に記載のワクチン。 - 【請求項２４】 請求項１５〜１９のいずれか一項に記載のポリペプチドと医薬上許容される担
体とを含んでなる医薬組成物。 - 【請求項２５】 請求項２２または２３に記載のワクチンと医薬上許容される担体とを含んでな
る医薬組成物。 - 【請求項２６】 請求項２１に記載の抗体と医薬上許容される担体とを含んでなる医薬組成物。
- 【請求項２７】 （ａ）請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸； （ｂ）請求項８、９、２２、および２３のいずれか一項に記載のワクチン； （ｃ）請求項１０、１１、および２４〜２６のいずれか一項に記載の医薬組成
物； （ｄ）請求項１５〜１９のいずれか一項に記載のポリペプチド；または （ｅ）請求項２１に記載の抗体 を用いて、クラミジア感染症を予防または治療する方法。 - 【請求項２８】 （ａ）請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸； （ｂ）請求項１５〜１９のいずれか一項に記載のポリペプチド；および （ｃ）請求項２１に記載の抗体 のいずれか１つから選択される成分を用いて、試験される哺乳類の体液をアッセ
イする工程を含んでなる、クラミジア感染症の検出方法。 - 【請求項２９】 使用説明書と、 （ａ）請求項１〜７のいずれか一項に記載の核酸； （ｂ）請求項１５〜１９のいずれか一項に記載のポリペプチド；および （ｃ）請求項２１に記載の抗体 のいずれか１つから選択される成分とを含んでなる診断キット。
- 【請求項３０】 予めポリペプチドで免疫化した哺乳類においてクラミジア感染を予防する、ま
たはその重篤度を軽減するのに有効な免疫応答を誘導する請求項１５〜１９に記
載のポリペプチドを同定する方法であって、 （ａ）ポリペプチドでマウスを免疫化し；さらに （ｂ）その免疫化したマウスにクラミジアを接種する ステップを含んでなり、 非免疫化対照マウスに比べて免疫化マウスでクラミジア感染を予防、またはそ
の重篤度を軽減するポリペプチドを同定する、方法。
Applications Claiming Priority (27)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US11328298P | 1998-12-23 | 1998-12-23 | |
| US11328598P | 1998-12-23 | 1998-12-23 | |
| US11338598P | 1998-12-23 | 1998-12-23 | |
| US11328098P | 1998-12-23 | 1998-12-23 | |
| US11328398P | 1998-12-23 | 1998-12-23 | |
| US11328498P | 1998-12-23 | 1998-12-23 | |
| US11328198P | 1998-12-23 | 1998-12-23 | |
| US60/113,284 | 1998-12-23 | ||
| US60/113,282 | 1998-12-23 | ||
| US60/113,385 | 1998-12-23 | ||
| US60/113,281 | 1998-12-23 | ||
| US60/113,285 | 1998-12-23 | ||
| US60/113,280 | 1998-12-23 | ||
| US60/113,283 | 1998-12-23 | ||
| US11405898P | 1998-12-28 | 1998-12-28 | |
| US11405098P | 1998-12-28 | 1998-12-28 | |
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