JP2002528081A

JP2002528081A - Ｃｈｌａｍｙｄｉａ抗原および対応するＤＮＡフラグメントおよびそれらの使用

Info

Publication number: JP2002528081A
Application number: JP2000578453A
Authority: JP
Inventors: アンドリューデイビッドマーディン，; レイモンドピーターオーメン，; パメラレスリーダン，
Original assignee: コナートラボラトリーズリミテッド
Priority date: 1998-10-28
Filing date: 1999-10-28
Publication date: 2002-09-03
Also published as: US6403101B1; AU6359399A; AU770905B2; US20020091096A1; WO2000024901A1; CA2348989A1; US6642025B2; NZ511886A; MXPA01004356A; EP1124964A1

Abstract

(57)【要約】本開示の要旨において、本発明は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ（詳細には、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の株による感染により引き起こされた疾患に対して、宿主（ヒトを含む）の核酸（ＤＮＡを含む）免疫化の方法を提供し、この方法は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの株のｌｏｒｆ２タンパク質をコードするヌクレオチド配列および宿主においてこのｌｏｒｆ２遺伝子の発現をもたらすプロモーターを含むベクターを使用する。改変は、本発明の範囲内で可能である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（関連米国出願）本特許出願は、以下の米国特許仮出願Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６０／１０６，０３７
（１９９８年１０月２８日出願）および同６０／１５４，６５８（１９９９年９
月２０日出願）に対する優先権を主張する。これらの各々は、本明細書中に参考
として援用される。

【０００２】（発明の分野）本発明は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ抗原および対応するＤＮＡ分子に関し、これら
は、哺乳動物（例えば、ヒト）におけるＣｈｌａｍｙｄｉａ感染によって引き起
こされる疾患を予防および処置する方法において使用され得る。

【０００３】（発明の背景）クラミジアは、原核生物である。これらは、三層外膜（リポ多糖類およびいく
つかの膜タンパク質を含む）を含む、グラム陰性細菌に対する形態学的および構
造的類似性を示す。クラミジアは、その形態学および独特の発生サイクルによっ
て他の細菌とは区別される。これらは、代謝学的に不活性であるが感染性の細胞
外ステージおよび複製するが非感染性の細胞内ステージからなる、独特の二相性
ライフサイクルを有する、偏性細胞内寄生生物である。ライフサイクルの複製ス
テージは、感染した宿主細胞の細胞質から細菌を隔離する膜結合封入体内で起こ
る。

【０００４】クラミジアは小さく、そして感受性細胞内でのみ増幅するので、長い間、ウイ
ルスであると考えられていた。しかし、クラミジアは、他の細菌と共通する多く
の特徴を有する：（１）ＤＮＡおよびＲＮＡの両方を含む、（２）二分裂によっ
て分裂する、（３）その細胞エンベロープが他のグラム陰性細菌と似ている、（
４）他の細菌のリボソームと類似のリボソームを含む、そして（５）様々な抗生
物質に感受性である。クラミジアは、光学顕微鏡において観察され得、そしてそ
のゲノムは、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉゲノムのサイズの約３分の１で
ある。

【０００５】クラミジアの多くの異なる株は、トリ、ヒト、および他の哺乳動物から単離さ
れており、これらの株は、宿主範囲、ビルレンス、病原性、および抗原性組成に
基づいて区別され得る。各種内のＤＮＡの強い相同性が存在するが、驚くべきこ
とに、種間での相同性はわずかであり、このことは、長年にわたる進化的分離を
示唆する。

【０００６】Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓは、高程度の宿主特異性を有し、ほとんど完全に
ヒトに限定される；このことは、幅広く変化する重症度の眼の感染および尿生殖
器感染を引き起こす。対照的に、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ株は、ヒトにおいては稀
であるが、広範な範囲のトリに見出され、そしてまた、野生哺乳動物、家畜哺乳
動物、および研究用哺乳動物において見出され、ここでは、多くの器官の細胞に
おいて増幅する。

【０００７】Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、一般的なヒト病原体であり、もともとは、Ｃ．
ｐｓｉｔｔａｃｉのＴＷＡＲ株として記載されるが、後に、新たな種であると認
識された。Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、他のＣｈｌａｍｙｄｉａ種（Ｃ．ｔｒ
ａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃ．ｐｅｃｏｒｕｍおよびＣ．ｐｓｉｔｔａｃｉ）とは、
抗原的、遺伝的、および形態学的に区別される。これは、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａ
ｔｉｓまたはＣ．ｐｓｉｔｔａｃｉのいずれかと１０％以下のＤＮＡ配列相同性
を示し、そしてこれまでのところ、単一株ＴＷＡＲのみからなるようである。

【０００８】Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、市中肺炎の一般的な原因であり、Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよびＭｙｃｏｐｌａｓｍａｐｎｅｕ
ｍｏｎｉａｅのみより少ない頻度である。Ｇｒａｙｓｔｏｎら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃ
ｔ．Ｄｉｓ．１６８：１２３１（１９９５）；Ｃａｍｐｏｓら、Ｉｎｖｅｓｔ．
Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．３６：１４７７（１９９５）（各々が
、本明細書中で参考として援用される）。これはまた、上気道症状および疾患（
気管支炎および副鼻腔炎を含む）を引き起こし得る。例えば、Ｇｒａｙｓｔｏｎ
ら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６８：１２３１（１９９５）；Ｃａｍｐｏｓ
ら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．３６：１４７７（
１９９５）；Ｇｒａｙｓｔｏｎら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６１：６１８
（１９９０）；Ｍａｒｒｉｅ，Ｃｌｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８：５０１
（１９９３）を参照のこと。成人集団の大部分（６０％を超える）は、Ｃ．ｐｎ
ｅｕｍｏｎｉａｅに対する抗体を有し（Ｗａｎｇら、ＣｈｌａｍｙｄｉａｌＩ
ｎｆｅｃｔｉｏｎｓ，ＣａｍｂｒｉｄｇｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ
，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，３２９ページ（１９８６））、これは、認識されなかっ
たかまたは無症候性の過去の感染を示す。

【０００９】Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染は、通常、急性呼吸性疾患（すなわち、咳、咽
喉炎、嗄声、および発熱；聴診時の異常な胸部音）として現れる。ほとんどの患
者について、咳は、２〜６週間持続し、そして回復は遅い。これらの症例の約１
０％において、上気道感染の後に、気管支炎または肺炎が続く。さらに、Ｃ．ｐ
ｎｅｕｍｏｎｉａｅの流行の間、続く肺炎球菌との同時感染は、これらの肺炎患
者（特に衰弱者および高齢者）の約半分において記載されてきた。上記のように
、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染はまた、呼吸性感染以外の疾患に関連するとい
う一層多くの証拠が存在する。

【００１０】この生物についてのリザーバーは、おそらくヒトである。Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃ
ｉ感染とは対照的に、トリまたは動物のリザーバーは知られていない。伝播は、
明確には規定されていない。これは、分泌物との直接接触、媒介物（ｆｏｒｍｉ
ｔｅｓ）、または空気伝搬性蔓延から生じ得る。潜伏期間は長く、これは、何ヶ
月も続き得る。流行の分析に基づくと、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、集団を通
じてゆっくりと（場合によって、平均３０日間隔）蔓延するようである。なぜな
ら、感染した人々は、この生物の非効率的な伝播者であるからである。Ｃ．ｐｎ
ｅｕｍｏｎｉａｅに対する感受性は普遍的である。再感染は、小児の一次感染に
続いて、成人期の間に起こる。Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、世界中で、増加し
た発生数（流行）の重なった間隔（２〜３年間持続する）が注目される風土病で
あるようである。Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ感染は、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅに対する交叉免疫性を付与しない。感染は、経口抗生物質（テトラサイクリン
またはエリスロマイシン）で容易に処置される（少なくとも１０〜１４日間、２
ｇ／日）。近年開発された薬物であるアジスロマイシンは、クラミジア感染に対
する単回投薬治療として非常に効果的である。

【００１１】ほとんどの場合において、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染は軽度であり、かつ
合併症を伴わず、そして感染の９０％までは、亜急性であるかまたは認識されな
い。先進工業国の小児の間では、感染は、５歳までは珍しいと考えられてきたが
、近年の研究は、この年齢群の多くの子供が、セロネガティブであるにもかかわ
らず、感染のＰＣＲ証拠を示すことを報告しており、そして２〜４歳で１７〜１
９％の有病率と推定する。Ｎｏｒｍａｎｎら、ＡｃｔａＰａｅｄｉａｔｒｉｃ
ａ，８７：２３−２７（１９９８）を参照のこと。発展途上国において、若年の
小児の間のＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗体の血清有病率（ｓｅｒｏｐｒｅｖａｌ
ｅｎｃｅ）は上昇し、そしてＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅが、世界の熱帯地域にお
いて、乳児および小児についての急性下気道疾患および死亡率の重要な原因であ
り得るという疑いが存在する。

【００１２】血清有病率の研究および局所流行の研究から、最初のＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅ感染は、通常、５歳と２０歳との間に起こる。例えば、米国では、Ｃ．ｐｎｅ
ｕｍｏｎｉａｅによって引き起こされる小児期の肺炎は、毎年３０，０００症例
であると推定される。感染は、小児または若年成人の群（例えば、学童または軍
の徴集兵）の間で集団化し得る。

【００１３】Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、地域で獲得される市中下気道感染の１０〜２５
％を引き起こす（スウェーデン、イタリア、フィンランド、および米国から報告
されるように）。流行の間、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ感染は、肺炎の症例の５０
〜６０％を占め得る。これらの期間の間、また、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅとの
混合感染のより多くの発症が報告されている。

【００１４】成人期の間の再感染は一般的である；臨床的提示は、より軽度である傾向があ
る。集団血清有病率研究に基づくと、年齢とともに暴露が増加する傾向があり、
これは、特に、男性の間で明白である。何人かの研究者は、持続性無症候Ｃ．ｐ
ｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染状態が一般的であると推測した。

【００１５】中年以上の成人では、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染は、慢性気管支炎および
副鼻腔炎に進行し得る。米国での研究は、６０歳未満のヒトにおいてＣ．ｐｎｅ
ｕｍｏｎｉａｅによって引き起こされる肺炎の発生数が、１症例／１，０００人
／年であることを明らかにした；しかし高齢者においては、この疾患の発生数は
、３倍に上昇した。Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染は、潜在疾病を有する患者を
除いて、入院をもたらすのは稀である。

【００１６】非常に重要な点は、アテローム性動脈硬化症とＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染
との関連である。Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの以前の感染と、心臓発作、冠状動
脈疾患および頸動脈疾患の相関を示すいくつかの疫学研究が存在する。Ｓａｉｋ
ｋｕら、Ｌａｎｃｅｔ２：９８３（１９８８）；Ｔｈｏｍら、ＪＡＭＡ２６
８：６８（１９９２）；Ｌｉｎｎａｎｍａｋｉら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ８
７：１０３０（１９９３）；Ｓａｉｋｋｕら、ＡｎｎａｌｓＩｎｔ．Ｍｅｄ．
１１６：２７３（１９９２）；Ｍｅｌｎｉｃｋら、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．９５：４
９９（１９９３）を参照のこと。さらに、この生物は、冠状動脈および冠状大動
脈、頸動脈および頸大動脈、末梢動脈および末梢大動脈の、アテロームおよび脂
肪線条において検出されている。Ｓｈｏｒら、ＳｏｕｔｈＡｆｒｉｃａｎＭ
ｅｄ．Ｊ．８２：１５８（１９９２）；Ｋｕｏら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．
１６７：８４１（１９９３）；Ｋｕｏら、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ
ａｎｄＴｈｒｏｍｂｏｓｉｓ１３：１５００（１９９３）；Ｃａｍｐｂｅｌ
ｌら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７２：５８５（１９９５）；Ｃｈｉｕら、
Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ９６：２１４４−２１４８（１９９７）を参照のこと
。生存可能なＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、冠状動脈および頸動脈から回収され
ている。Ｒａｍｉｒｅｚら、ＡｎｎａｌｓＩｎｔ．Ｍｅｄ．１２５：９７９（
１９９６）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ａｂｓｔ．Ｋ１２１、２７２頁、第３６回ＩＣ
ＡＡＣ、ＮｅｗＯｒｌｅａｎｓ（１９９６）。さらに、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉ
ａｅは、ウサギモデルにおけるアテローム性動脈硬化症の変化を誘導し得ること
が示されている。Ｆｏｎｇら、（１９９７）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉ
ｃａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ３５：４８を参照のこと。まとめると、こ
れらの結果は、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅはヒトにおいてアテローム性動脈硬化
症を引き起こし得る蓋然性が高いが、クラミジアアテローム性動脈硬化症の疫学
的重要性が実証されないままであることを示す。

【００１７】近年の多数の研究はまた、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染とぜん息との間の関
連を示している。感染は、ぜん鳴、ぜん息性気管支炎、成人発症ぜん息、および
成人におけるぜん息の急性再燃に関連しており、そして小さな規模の研究は、長
期の抗生物質処置が、何人かの個体における疾患の重症度を大きく減少させるに
有効であることを示した。Ｈａｈｎら、ＡｎｎＡｌｌｅｒｇｙＡｓｔｈｍａ
Ｉｍｍｕｎｏｌ．８０：４５−４９（１９９８）；Ｈａｈｎら、Ｅｐｉｄｅｍ
ｉｏｌＩｎｆｅｃｔ．１１７：５１３−５１７（１９９６）；Ｂｊｏｒｎｓｓ
ｏｎら、ＳｃａｎｄＪＩｎｆｅｃｔＤｉｓ．２８：６３−６９（１９９６
）；Ｈａｈｎ，Ｊ．Ｆａｍ．Ｐｒａｃｔ．４１：３４５−３５１（１９９５）；
Ａｌｌｅｇｒａら、Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．７：２１６５−２１６８（１９
９４）；Ｈａｈｎら、ＪＡＭＡ２６６：２２５−２３０（１９９１）。

【００１８】これらの結果に照らして、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染によって引き起こさ
れる疾患に対する防御的ワクチンは、かなり重要である。ヒトのＣ．ｐｎｅｕｍ
ｏｎｉａｅ感染に有効なワクチンはまだ存在しない。にもかかわらず、Ｃ．ｔｒ
ａｃｈｏｍａｔｉｓおよびＣ．ｐｓｉｔｔａｃｉを用いた研究は、このことが、
達成可能な目標であることを示す。例えば、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓの肺感
染から回復したマウスは、その後の膣チャレンジによって誘導される不妊症から
保護される。Ｐａｌら、ＩｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄＩｍｍｕｎｉｔｙ６４
：５３４１（１９９６）。同様に、不活化Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉで免疫したヒツ
ジは、その後のクラミジア誘導性流産および死産から保護された。Ｊｏｎｅｓら
、Ｖａｃｃｉｎｅ１３：７１５（１９９５）。クラミジア感染からの保護は、
Ｔｈ１免疫応答、特にＩＮＦγ産生ＣＤ４＋Ｔ細胞の誘導と関連している。Ｉｇ
ｉｅｔｓｅｍｅｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ５：３１７（１９９３）。ＣＤ４
＋細胞株またはクローンの、ヌードマウスまたはＳＣＩＤマウスへの養子性移入
は、チャレンジからの保護を付与するか、または慢性疾患を一掃し（Ｉｇｉｅｔ
ｓｅｍｅら、ＲｅｇｉｏｎａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ５：３１７（１９９３
）；Ｍａｇｅｅら、ＲｅｇｉｏｎａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ５：３０５（１
９９３））、そしてインビボでのＣＤ４＋Ｔ細胞の枯渇は、チャレンジ後の疾患
を悪化させた（Ｌａｎｄｅｒｓら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ＆Ｉｍｍｕｎｉｔｙ
５９：３７７４（１９９１）；Ｍａｇｅｅら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ＆Ｉｍ
ｍｕｎｉｔｙ６３：５１６（１９９５））。しかし、粘膜表面の十分な高力価
の中和抗体の存在はまた、保護効果を発揮し得る。Ｃｏｔｔｅｒら、Ｉｎｆｅｃ
ｔｉｏｎａｎｄＩｍｍｕｎｉｔｙ６３：４７０４（１９９５）。

【００１９】Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ種内の抗原の変動の程度は、十分には特徴付けられ
ていない。Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓの血液型亜型は、主要な外膜タンパク質
（ＭＯＭＰ）における抗原の変動に基づいて定義されるが、公開されたＣ．ｐｎ
ｅｕｍｏｎｉａｅのＭＯＭＰ遺伝子配列は、この生物のいくつかの多様な単離体
の間で変動を示さない。Ｃａｍｐｂｅｌｌら、ＩｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄＩ
ｍｍｕｎｉｔｙ５８：９３（１９９０）；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｉｎｆｅ
ｃｔｉｏｎａｎｄＩｍｍｕｎｉｔｙ６３：２３８７−９（１９９５）；Ｋ
ｎｕｄｓｅｎら、ＴｈｉｒｄＭｅｅｔｉｎｇｏｆｔｈｅＥｕｒｏｐｅａ
ｎＳｏｃｉｅｔｙｆｏｒＣｈｌａｍｙｄｉａＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｉｅ
ｎｎａ（１９９６）を参照のこと。他のクラミジアのＭＯＭＰにおいて保存され
ていることが公知のタンパク質の領域は、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅにおいて保
存されている。Ｃａｍｐｂｅｌｌら、ＩｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄＩｍｍｕｎ
ｉｔｙ５８：９３（１９９０）；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏ
ｎａｎｄＩｍｍｕｎｉｔｙ６３：２３８７−９（１９９５）を参照のこと
。ある研究は、通常の分子量より大きなＭＯＭＰを有するＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉ
ａｅの株を記載したが、その遺伝子は、配列決定されていない。Ｇｒａｙｓｔｏ
ｎら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６８：１２３１（１９９５）。９の多様な
単離体からの外膜タンパク質２の部分配列はもまた、不変であることが見出され
た。Ｒａｍｉｒｅｚら、ＡｎｎａｌｓＩｎｔ．Ｍｅｄ．１２５：９７９（１９
９６）。ＨＳＰ６０およびＨＳＰ７０についての遺伝子は、予期されたように、
他のクラミジア種からの変動をほとんど示さない。７６ｋＤａの抗原をコードす
る遺伝子は、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの単一株からクローニングされている。
これは他の既知のクラミジア遺伝子との有意な類似性を有しない。Ｍａｒｒｉｅ
，Ｃｌｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８：５０１（１９９３）。

【００２０】Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対する免疫血清によって認識される多くの抗原は
、全てのクラミジアにわたって保存されているが、９８ｋＤａ、７６ｋＤａおよ
び５４ｋＤａのタンパク質は、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ特異的であり得る。Ｃ
ａｍｐｏｓら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．３６：
１４７７（１９９５）；Ｍａｒｒｉｅ，Ｃｌｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８
：５０１（１９９３）；Ｗｉｅｄｍａｎｎ−Ａｌ−Ａｈｍａｄら、Ｃｌｉｎ．Ｄ
ｉａｇｎ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：７００−７０４（１９９７）。患者か
らの血清を用いた単離体のイムノブロッティングは、単離体間のブロッティング
パターンの変動を示し、このことは、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清型が存在し
得ることを示す。Ｇｒａｙｓｔｏｎら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６８：１
２３１（１９９５）；Ｒａｍｉｒｅｚら、ＡｎｎａｌｓＩｎｔ．Ｍｅｄ．１２
５：９７９（１９９６）。しかし、結果は、患者の感染状態によって混乱する可
能性がある。なぜなら、患者の血清のイムノブロットプロフィールは、感染後の
時間とともに変化するからである。任意の血清型の数および相対頻度の評価、な
らびに抗原の規定は未だ可能ではない。

【００２１】従って、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防、処置および診断するために有効な組
成物の必要性が残存する。

【００２２】（発明の要旨）１つの局面において、本発明は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａをコードする、精製およ
び単離されたＤＮＡ分子を提供し、これらは、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防、
処置および診断するための方法において使用され得る。ｌｏｒｆ２と称される、
コードされるポリペプチドとしては、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有す
るポリペプチドが挙げられ、そしてＤＮＡ分子としては、配列番号１の全長配列
（トップ配列）および成熟ポリペプチドについてのコード配列（ボトム配列）が
挙げられる。当業者は、本発明がまた、本明細書中に記載されるような非必須ア
ミノ酸の付加、欠失または置換から生じる、このようなポリペプチドの変異体、
改変体および誘導体をコードするＤＮＡ分子を含むことを理解する。本発明はま
た、本発明のＤＮＡ分子に対応する、ＲＮＡ分子を含む。

【００２３】ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子に加え、本発明は、その対応するポリペプチドお
よびこのようなポリペプチドに特異的に結合する単一特異性抗体を含む。

【００２４】本発明は、広範な適用を有し、そして発現カセット、発現ベクター、および本
発明のポリヌクレオチドで形質転換またはトランスフェクトされた細胞を含む。
従って、本発明は、以下を提供する：（ｉ）組換え宿主系において本発明のポリ
ペプチドを産生する方法、ならびに関連する発現カセット、発現ベクター、およ
び形質転換またはトランスフェクトされた細胞；（ｉｉ）本発明のポリヌクレオ
チドを含む、生ワクチンベクター（例えば、ウイルス性または細菌性の生ワクチ
ンベクター（ポックスウイルスベクター、アルファウイルスベクター、Ｓａｌｍ
ｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍベクター、またはＶｉｂｒｉｏｃｈｏ
ｌｅｒａｅベクターを含む））（このようなワクチンベクターは、希釈剤または
キャリアと組み合わせて、例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防および処置す
るために有用である、ならびに関連する薬学的組成物および関連する治療方法お
よび／または予防方法）、ならびに関連する薬学的組成物および関連する治療方
法および／または予防方法；（ｉｉｉ）本発明のＲＮＡ分子またはＤＮＡ分子（
裸の形態であるかまたは送達ビビクルとともに処方されるかのいずれか）、本発
明のポリペプチドまたはポリペプチドの組み合わせ、あるいは単一特異性抗体の
投与を含む、治療方法および／または予防方法、ならびに関連する薬学的組成物
；（ｉｖ）本発明のＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子、単一特異性ｓ抗体、あるいは
ポリペプチドの使用を含み得る、生物学的サンプルにおけるＣｈｌａｍｙｄｉａ
の存在を診断するための方法；ならびに（ｖ）抗体ベースのアフィニティークロ
マトグラフィーによって本発明のポリペプチドを精製する方法。本発明は、Ｃｈ
ｌａｍｙｄｉａ感染を予防、処置および診断する方法において使用され得る、Ｃ
ｈｌａｍｙｄｉａをコードする、精製および単離されたＤＮＡ分子を提供する。

【００２５】（発明の詳細な説明）Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅゲノムにおいて、クラミジアポリペプチドをコード
するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が同定されている。これらのポリ
ペプチドは、細菌の膜構造において不変的に見出されるポリペプチド、細菌の膜
の外部近傍に存在するポリペプチド、封入膜構造に不変的に見出されるポリペプ
チド、封入膜の外部近傍に存在するポリペプチド、および感染細胞の細胞質内に
放出されるポリペプチドを含む。これらのポリペプチドは、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ
感染を予防および処置するためのワクチン接種方法において使用され得る。

【００２６】本発明の第１の局面に従って、Ｃｈｌａｍｙｄｉａポリペプチドの前駆体およ
び成熟形態をコードする、単離されたポリヌクレオチドが提供される。

【００２７】本発明の単離されたポリヌクレオチドは、Ｃｈｌａｍｙｄｉａアミノ酸配列に
相同なアミノ酸配列、配列番号１および２に示されるようなアミノ酸配列からな
る群より選択されるＣｈｌａｍｙｄｉａアミノ酸配列を有するポリペプチドをコ
ードする。近年公開されたＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅのゲノム配列に対するこの
遺伝子の配列の比較は、この配列が、少なくとも２つのオープンリーディングフ
レームを実際に含み、第１のオープンリーディングフレームは配列の５’部分に
あり、そして第２のオープンリーディングフレームは３’部分にあることを示す
。配列番号１の末端における停止コドンの存在にもかかわらず、Ｃ．ｐｎｅｕｍ
ｏｎｉａｅは、７６ｋＤａ産物を作製する。従って、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ
はこの停止コドンを読み通しことが可能であり、そして第２のオープンリーディ
ングフレームの末端の停止コドンによって終結する全長産物を生成するようであ
る。さらに、ゲノム配列の分析は、開始コドンの上流に少なくとも１つのインフ
レームなＡＴＧが存在することを示す。このことは、この第１のオープンリーデ
ィングフレームが、１以上のより大きなオープンリーディングフレームの一部を
形成し得ることを示唆する。ｈｔｔｐ：／／ｃｈｌａｍｙｄｉａ−ｗｗｗ．ｂｅ
ｒｋｅｌｅｙ．ｅｄｕ：４２３１／を参照のこと。

【００２８】用語「単離されたポリヌクレオチド」は、その天然に存在する環境から取り出
されたポリヌクレオチドとして定義される。例えば、生存している細菌のゲノム
中にまたは遺伝子バンクの一部として存在する、天然に存在するＤＮＡ分子は、
単離されていないが、例えば、クローニング事象（増幅）の結果として、細菌ゲ
ノムの残りの部分から分離された同じＤＮＡ分子は、単離されている。代表的に
は、単離されたＤＮＡ分子は、天然に存在するゲノムにおいて５’末端または３
’末端においてこのＤＮＡ分子と直接連続するＤＮＡ領域（例えば、コード領域
）を含まない。このような単離されたポリヌクレオチドは、ベクターまたは組成
物の一部であり得、そしてこのようなベクターまたは組成物が、その天然の環境
の一部ではないという点で依然として単離されている。

【００２９】本発明のポリヌクレオチドは、ＲＮＡまたはＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ、ゲノ
ムＤＮＡ、または合成ＤＮＡ）の形態、あるいはその改変体または組み合わせで
あり得る。ＤＮＡは、二本鎖または一本鎖であり得、そして一本鎖である場合、
コード鎖または非コード（アンチセンス）鎖であり得る。配列番号１に示される
ような本発明のポリペプチドをコードする配列は、（ａ）コード配列（ボトム配
列）；（ｂ）（ａ）の転写によって誘導されるリボヌクレオチド配列；または（
ｃ）異なるコード配列であり得る。この後者は、遺伝コードの重複または縮重の
結果として、ヌクレオチド配列が配列番号１または２に示されるＤＮＡ分子と同
じポリペプチドをコードする。

【００３０】「相同アミノ酸配列」とは、配列番号２に示されるアミノ酸配列と、１以上の
保存的アミノ酸置換によってのみ、あるいはポリペプチドの特異的抗原性を破壊
しない位置に位置する１以上の非保存的アミノ酸の置換、欠失または付加によっ
て異なるアミノ酸配列を意味する。

【００３１】好ましくは、このような配列は、配列番号２に示されるアミノ酸配列に、少な
くとも７５％、より好ましくは８０％、そして最も好ましくは９０％同一である
。

【００３２】相同アミノ酸配列は、配列番号２に示されるようなアミノ酸配列に同一または
実質的に同一である配列を含む。「実質的に同一であるアミノ酸配列」とは、参
照のアミノ酸配列に少なくとも９０％、好ましくは９５％、より好ましくは９７
％、そして最も好ましくは９９％同一であり、そして好ましくは、少しでも置換
がある場合、大半が保存的アミノ酸置換によってその参照の配列と異なる配列を
意味する。

【００３３】保存的アミノ酸置換は、代表的に、同じクラスのアミノ酸間での置換を含む。
これらのクラスとしては、例えば、以下が挙げられる：（ａ）非荷電極性側鎖を
有するアミノ酸（例えば、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニンおよ
びチロシン）；（ｂ）塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニ
ンおよびヒスチジン）；（ｃ）酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギ
ン酸およびグルタミン酸）；ならびに（ｄ）非極性側鎖を有するアミノ酸（例え
ば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニ
ルアラニン、メチオニン、トリプトファンおよびシステイン）。

【００３４】相同性は、代表的に、配列分析ソフトウェア（例えば、ＳｅｑｕｅｎｃｅＡ
ｎａｌｙｓｉｓＳｏｆｔｗａｒｅＰａｃｋａｇｅｏｆｔｈｅＧｅｎｅ
ｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏｕｐ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＷｉ
ｓｃｏｎｓｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｅｎｔｅｒ，１７１０Ｕｎ
ｉｖｅｒｓｉｔｙＡｖｅｎｕｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ５３７０５）を使用し
て測定される。類似アミノ酸配列は、最大程度の相同性（すなわち、同一性）を
得るよう整列化される。この目的のために、配列にギャップを人工的に導入する
ことが必要であり得る。一旦、最適なアライメントが設定された場合、相同性（
すなわち、同一性）の程度は、位置の総数に対して、両方の配列のアミノ酸が同
一である全ての位置を、記録することによって確定される。

【００３５】類似性因子としては、類似の大きさ、形状および電荷が挙げられる。アミノ酸
類似性を決定する１つの特に好ましい方法は、Ｄａｙｈｏｆｆら、５ＡＴＬＡ
ＳＯＦＰＲＯＴＥＩＮＳＥＱＵＥＮＣＥＡＮＤＳＴＲＵＣＴＵＲＥ
３４５−３５２（１９７８および補遺）（本明細書中に参考として援用される）
に記載される、ＰＡＭ２５Ｏマトリクスである。類似性スコアは、最初に、整列
化された対合アミノ酸類似性スコアの合計として計算される。挿入および欠失は
、相同性パーセントおよび同一性パーセントの目的のために無視される。従って
、ギャップペナルティーは、この計算に使用されない。次いで、生のスコアを候
補化合物および参照配列のスコアの相乗平均で除算することによって、その生の
スコアが正規化される。相乗平均は、これらのスコアの積の平方根である。正規
化された生のスコアは、相同性パーセントである。

【００３６】好ましくは、相同配列は、配列番号１のコード配列に、少なくとも４５％、よ
り好ましくは６０％、そして最も好ましくは８５％同一である配列である。

【００３７】配列番号１および２に示される配列の１つに相同な配列を有するポリペプチド
としては、天然に存在する対立遺伝子改変体、ならびに配列番号１または２に示
されるような配列を有するポリペプチドに対して、抗原性の点で類似する変異体
および改変体または任意の他の天然に存在しない改変体が挙げられる。

【００３８】対立遺伝子改変体は、ポリペプチドの生物学的機能を実質的に変更しない、１
以上のアミノ酸の置換、欠失または付加を有することで特徴付けられる、ポリペ
プチドの代替形態である。「生物学的機能」とは、たとえその機能が細胞の増殖
または生存に必要ではなくとも、ポリペプチドが天然に存在するところの細胞に
おける、そのポリペプチドの機能を意味する。例えば、ポーリンの生物学的機能
は、細胞外培地中に存在する化合物の細胞への侵入を可能にすることである。生
物学的機能は、抗原性機能とは異なる。ポリペプチドは、１より多い生物学的機
能を有し得る。

【００３９】対立遺伝子改変体は、天然において非常に一般的である。例えば、細菌種（例
えば、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）は、通常、マイナーな対立遺伝子改変によっ
て互いに異なる種々の株によって代表される。実際、異なる株において同じ生物
学的機能を満たすポリペプチドは、各々の株において同一ではないアミノ酸配列
を有し得る。このような対立遺伝子の変動は、ポリヌクレオチドレベルで等しく
反映され得る。

【００４０】ポリペプチド抗原の対立遺伝子改変体の使用の支持は、例えば、Ｃｈｌａｍｙ
ｄｉａｌＭＯＭＰ抗原の研究により生じる。ＭＯＭＰのアミノ酸配列は、株ご
とに変動するが、株を越える（ｃｒｏｓｓ−ｓｔｒａｉｎ）抗体結合および感染
性の中和がなお生じ、これは、ＭＯＭＰが、免疫原として使用される場合、アミ
ノ酸変動に耐性であることを示す。

【００４１】対立遺伝子改変体をコードするポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ分子）は、
従来の方法によって抽出された細菌のゲノムＤＮＡのポリメラーゼ連鎖反応（Ｐ
ＣＲ）増幅によって、容易に回収され得る。これは、コードドメインの５’末端
および３’末端の上流および下流に適合する、合成オリゴヌクレオチドプライマ
ーの使用を含む。適切なプライマーは、配列番号１および２に提供されるヌクレ
オチド配列情報に従って設計され得る。代表的には、プライマーは、１０〜４０
ヌクレオチド、好ましくは１５〜２５ヌクレオチドからなり得る。効率的なハイ
ブリダイゼーションを保証するのに十分な割合で、ＣおよびＧヌクレオチドを含
有する（例えば、総ヌクレオチド量の少なくとも４０％、好ましくは５０％のＣ
およびＧヌクレオチド量）プライマーを選択することもまた、有利であり得る。

【００４２】天然に存在しない有用なホモログは、アミノ酸配列の変化および／または欠失
に耐性であるような抗原の領域を同定するための公知の方法を利用して、設計さ
れ得る。例えば、異なる種由来の抗原の配列が比較されて、保存された配列が同
定され得る。

【００４３】本発明のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド誘導体としては
、例えば、フラグメント、全長ポリペプチドに由来する大きな内部欠失を有する
ポリペプチド、および融合タンパク質が挙げられる。

【００４４】本発明のポリペプチドフラグメントは、このフラグメントがその親ポリペプチ
ドの所望される実質的な抗原性（特異的抗原性）を保持する程度まで、配列番号
１および２に示される配列のいずれかに相同な配列を有するポリペプチドから誘
導され得る。ポリペプチド誘導体はまた、所望の特異的抗原性を保持しながら、
親ポリペプチドの実質的な部分を除去する大きな内部欠失によって構築され得る
。一般に、ポリペプチド誘導体は、その抗原性を維持するために、少なくとも約
１２アミノ酸長であるべきである。有利には、これは、少なくとも２０アミノ酸
長、好ましくは少なくとも５０アミノ酸長、より好ましくは少なくとも７５アミ
ノ酸長、そして最も好ましくは少なくとも１００アミノ酸長であり得る。

【００４５】有用なポリペプチド誘導体（例えば、ポリペプチドフラグメント）は、表面に
露出される抗原性領域としての可能性を有するタンパク質抗原における部位を同
定するために、アミノ酸配列のコンピューター利用解析を使用して設計され得る
。Ｈｕｇｈｅｓら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６０：３４９７（１９９２）。

【００４６】ポリペプチドフラグメントおよび大きな内部欠失を有するポリペプチドは、そ
うでなければ親ポリペプチドにおいてマスクされており、そして、例えば防御Ｔ
細胞依存性免疫応答を誘導するために重要であり得るエピトープを明らかにする
ために使用され得る。欠失はまた、株間の高い可変性の免疫優性領域を除去し得
る。

【００４７】タンパク質免疫原のフラグメントおよび改変体を、ワクチンおよび免疫原とし
て使用することは、免疫学の分野における認められた常套手段である。なぜなら
、タンパク質に対する免疫応答を誘導するために必要とされるのは、そのタンパ
ク質の小さい（例えば、８〜１０アミノ酸）領域であり得るからである。これは
、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ以外の病原体に対する多くのワクチンについてなされてい
る。例えば、病原体の表面露出抗原に対応する短い合成ペプチド（例えば、マウ
ス乳腺癌ウイルスの、１１アミノ酸を含むペプチド（Ｄｉｏｎら、Ｖｉｒｏｌｏ
ｇｙ１７９：４７４−４７７（１９９０））；セムリキ森林ウイルスの、１６
アミノ酸を含むペプチド（Ｓｎｉｊｄｅｒｓら、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７２
：５５７−５６５（１９９１））；およびイヌパルボウイルスの２つの重複ペプ
チド（各々、１５アミノ酸を含む）（Ｌａｎｇｅｖｅｌｄら、Ｖａｃｃｉｎｅ
１２：１４７３−１４８０（１９９４）））は、これらそれぞれの病原体に対す
る有効なワクチン抗原であることが示されている。

【００４８】ポリペプチドフラグメントおよび大きな内部欠失を有するポリペプチドをコー
ドするポリヌクレオチドは、例えば、ＰＣＲ（インバース（ｉｎｖｅｒｓｅ）Ｐ
ＣＲを含む）によるか、クローン化ＤＮＡ分子の制限酵素処理によるか、または
Ｋｕｎｋｅｌら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：４４
８（１９８５））の方法による、標準的な方法（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃ
ＵＲＲＥＮＴＰＲＯＴＯＣＯＬＳＩＮＭＯＬＥＣＵＬＡＲＢＩＯＬＯＧ
Ｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆ＳｏｎｓＩｎｃ．（１９９４）を参照のこと）を
使用して（生物学的材料はＳｔｒａｔａｇｅｎから入手可能）構築され得る。

【００４９】ポリペプチド誘導体はまた、例えば、Ｎ末端またはＣ末端で、任意の他のポリ
ペプチドに融合された本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体を含む、
融合ポリペプチドとして生成され得る。ハイブリッド融合タンパク質に対応する
アミノ酸配列をコードするＤＮＡの構築のため、配列番号１または２）の部分に
対応するアミノ酸配列をコードする第１のＤＮＡは、例えば、米国特許第５，８
４４，０９５号（本明細書中に参考として援用される）に記載される方法を使用
して、第２のＤＮＡに結合される。次いで、産物は、この遺伝子融合物の翻訳に
よって容易に得られ得る。融合ポリペプチドを発現するためのベクターは、市販
されている（例えば、ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓのｐＭａｌ−ｃ
２系またはｐＭａｌ−ｐ２系（ここで、融合ペプチドは、マルトース結合タンパ
ク質である）、Ｐｈａｒｍａｃｉａのグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ系
、またはＮｏｖａｇｅｎから入手可能なＨｉｓ−Ｔａｇ系）。これらおよび他の
発現系は、本発明のポリペプチドおよび誘導体のさらなる精製のための簡便な手
段を提供する。

【００５０】本発明に含まれる融合ポリペプチドの別の特定の例としては、アジュバント活
性を有するポリペプチド（例えば、コレラ毒素またはＥ．ｃｏｌｉ非耐熱性毒素
のいずれかのサブユニットＢのような）に融合された、本発明のポリペプチドま
たはポリペプチド誘導体が挙げられる。いくつかの可能性が、融合を達成するた
めに使用され得る。第１に、本発明のポリペプチドは、アジュバント活性を有す
るポリペプチドのＮ末端、または好ましくはＣ末端に融合され得る。第２に、本
発明のポリペプチドフラグメントは、アジュバント活性を有するポリペプチドの
アミノ酸配列内に融合され得る。

【００５１】上記のように、本発明のポリヌクレオチドは、前駆体形態または成熟形態のＣ
ｈｌａｍｙｄｉａポリペプチドをコードする。これらはまた、異種シグナルペプ
チドを含むハイブリッド前駆体をコードし得、これは、本発明のポリペプチドに
成熟し得る。「異種シグナルペプチド」とは、本発明のポリペプチドの天然に存
在する前駆体に見出されないシグナルペプチドを意味する。

【００５２】相同なコード配列を有する、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１に示さ
れるような配列を有するポリヌクレオチドに、好ましくはストリンジェントな条
件下でハイブリダイズする。ハイブリダイゼーション手順は、例えば、Ａｕｓｕ
ｂｅｌら、ＣＵＲＲＥＮＴＰＲＯＴＯＣＯＬＳＩＮＭＯＬＥＣＵＬＡＲ
ＢＩＯＬＯＧＹ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆ＳｏｎｓＩｎｃ．（１９９４）；Ｓ
ｉｌｈａｖｙら、ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＳＷＩＴＨＧＥＮＥＦＵＳＩＯＮ
Ｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓ
ｓ（１９８４）；Ｄａｖｉｓら、ＡＭＡＮＵＡＬＦＯＲＧＥＮＥＴＩＣ
ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ：ＡＤＶＡＮＣＥＤＢＡＣＴＥＲＩＡＬＧＥＮＥＴ
ＩＣＳ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒ
ｅｓｓ（１９８０）（各々は、本明細書中に参考として援用される）に記載され
る。ハイブリダイゼーション条件を最適化するために考慮され得る重要なパラメ
ーターは、臨界値（２つの相補的ＤＮＡ鎖が互いに離れる融解温度）の算出を可
能にする式に反映される。ＣａｓｅｙおよびＤａｖｉｄｓｏｎ，Ｎｕｃｌ．Ａｃ
ｉｄＲｅｓ．４：１５３９（１９７７）。この式は、以下のとおりである：Ｔｍ＝８１．５＋０．５×（％Ｇ＋Ｃ）＋１．６ｌｏｇ（陽イオン濃度）−０
．６×（％ホルムアミド）。

【００５３】適切なストリンジェンシー条件下で、ハイブリダイゼーション温度（Ｔｈ）は
、算出されたＴｍより約２０〜４０℃、２０〜２５℃、または好ましくは、３０
〜４０℃低い。当業者は、最適の温度および塩条件が、従来の手順を使用した予
備実験において、容易に経験的に決定され得ることを理解する。

【００５４】例えば、ストリンジェント条件は、プレハイブリダイゼーションおよびハイブ
リダイゼーションインキュベーションの両方について、（ｉ）５０％ホルムアミ
ドを含有する６×ＳＳＣ中、４２℃で、４〜１６時間以内、または（ｉｉ）６×
ＳＳＣ水溶液（１ＭＮａＣｌ、０．１Ｍクエン酸ナトリウム（ｐＨ７．０
））中、６５℃で、４〜１６時間以内で、達成され得る。

【００５５】３０〜６００ヌクレオチドを含むポリヌクレオチドについては、上記の式が使
用され、次いで、減算（６００／塩基対中のポリヌクレオチドの大きさ）するこ
とによって補正される。ストリンジェンシー条件は、Ｔｍより５〜１０℃低いＴ
ｈによって定義される。

【００５６】２０〜３０塩基より短いオリゴヌクレオチドに関するハイブリダイゼーション
条件は、上記の規則に正確には従わない。このような場合、Ｔｍを算出するため
の式は、以下のとおりである：Ｔｍ＝４×（Ｇ＋Ｃ）＋２（Ａ＋Ｔ）。例えば、５０％のＧ＋Ｃの１８ヌクレオチドフラグメントは、約５４℃のＴｍを
有する。

【００５７】本発明のポリヌクレオチド分子（ＲＮＡ、ＤＮＡ、あるいはこれらの改変体ま
たは組み合わせを含む）は、種々の適用を有し得る。例えば、ＤＮＡ分子は、（
ｉ）組換え宿主系においてコードされるポリペプチドを生成するためのプロセス
において、（ｉｉ）Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防および／または処置するため
の方法および組成物においてさらに使用される、ポックスウイルスのようなワク
チンベクターの構築において、（ｉｉｉ）裸の形態の、または送達ビヒクルで処
方されたワクチン剤（およびＲＮＡ分子）として、ならびに（ｉｖ）本発明のポ
リヌクレオチドを過剰発現し得るか、または適切ならば、そのポリヌクレオチド
を、改変され、変異された形態（例えば、非毒性形態）で発現し得る、弱毒化Ｃ
ｈｌａｍｙｄｉａ株の構築において、使用され得る。Ｃｈｌａｍｙｄｉａによっ
て引き起こされる疾患に対する防御のための、本発明のタンパク質およびペプチ
ドならびにコードヌクレオチドのワクチン組成物および使用について、このタン
パク質またはペプチドをコードする裸のＤＮＡ、およびこれらのヌクレオチドの
鼻内または筋肉内投与を使用することは好ましくない。これらのタンパク質につ
いて、コード核酸を別の経路によって（例えば、皮内）投与すること、および／
またはコード核酸を免疫応答を改善（または、補助）するように処方することが
好ましい。免疫剤としての使用のために、組換え生ベクター（例えば、ウイルス
ベクターまたは細菌ベクター）の一部としてコード核酸を含むこともまた好まし
い。本発明のタンパク質またはペプチド自体を含むワクチン処方物で免疫するこ
ともまた好ましい。これらのワクチン処方物は、アジュバントの使用を含み得る
。

【００５８】それゆえ、本発明の第２の局面に従って、以下が提供される：（ｉ）発現に必
要とされるエレメントの制御下（特に、適切なプロモーターの制御下）に配置さ
れた本発明のＤＮＡ分子を含む、発現カセット；（ｉｉ）本発明の発現カセット
を含む発現ベクター；（ｉｉｉ）本発明の発現カセットおよび／または発現ベク
ターで形質転換あるいはトランスフェクトされた、原核生物細胞または真核生物
細胞、ならびに（ｉｖ）本発明のポリヌクレオチドによってコードされるポリペ
プチドまたはポリペプチド誘導体を産生するためのプロセスであって、本発明の
発現カセットおよび／または発現ベクターで形質転換あるいはトランスフェクト
された、原核生物細胞または真核生物細胞を、本発明のＤＮＡ分子の発現を可能
にする条件下で培養する工程、およびこの細胞培養物からコードされたポリペプ
チドまたはポリペプチド誘導体を回収する工程を包含する、プロセス。

【００５９】組換え発現系は、原核生物宿主および真核生物宿主から選択され得る。真核生
物宿主には、酵母細胞（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓ
ｉａｅまたはＰｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）、哺乳動物細胞（例えば、ＣＯ
Ｓ１細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、またはＪＥＧ３細胞）、節足動物細胞（例えば、
Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（ＳＦ９）細胞）、および植物細
胞が挙げられる。好ましくは、原核生物宿主（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）が使用さ
れる。細菌細胞および真核生物細胞は、多くの異なる供給源（例えば、Ａｍｅｒ
ｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；Ｒｏ
ｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ））より、当業者に利用可能である。

【００６０】発現系の選択は、発現されるポリペプチドについて所望される特徴に依存する
。例えば、特定の脂質化された形態または任意の他の形態で本発明のポリペプチ
ドを産生することが有用であり得る。

【００６１】発現カセットの選択は、選択される宿主系ならびに発現されるポリペプチドに
ついて所望される特徴に依存する。代表的には、発現カセットは、選択された宿
主系において機能的でありそして構成的または誘導的であり得る、プロモーター
；リボソーム結合部位；必要な場合、開始コドン（ＡＴＧ）；シグナルペプチド
（例えば、脂質化シグナルペプチド）をコードする領域；本発明のＤＮＡ分子；
停止コドン；および必要に応じて３’末端領域（翻訳ターミネーターおよび／ま
たは転写ターミネーター）を含む。このシグナルペプチドコード領域は、本発明
のポリヌクレオチドに隣接し、そして適切なリーディングフレームで配置される
。このシグナルペプチドコード領域は、成熟ポリペプチドをコードするＤＮＡ分
子に対して同種でも異種でもあり得、そして発現のために使用される宿主の分泌
装置に特異的であり得る。本発明のＤＮＡ分子によって構成されるオープンリー
ディングフレームは、単独で、またはシグナルペプチドとともに、プロモーター
の制御下に置かれて、その結果、宿主系において転写および翻訳が起こる。プロ
モーター、シグナルペプチドコード領域は、当業者に広範に公知でありかつ使用
可能であり、そして例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍの
プロモーター（および誘導体）（これは、アラビノースによって誘導可能であり
（プロモーターａｒａＢ）、そしてグラム陰性細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）に
おいて機能的である（米国特許第５，０２８，５３０号において、およびＣａｇ
ｎｏｎら、ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ４：８４３（１９９１）
）において記載されるように）；ＲＮＡポリメラーゼをコードするバクテリオフ
ァージＴ７の遺伝子のプロモーター（これは、Ｔ７ポリメラーゼを発現する多数
のＥ．ｃｏｌｉ株において機能的である（米国特許第４，９５２，４９６号に記
載される））；ＯｓｐＡ脂質化シグナルペプチド；およびＲｌｐＢ脂質化シグナ
ルペプチド（Ｔａｋａｓｅら、Ｊ．Ｂａｃｔ．１６９：５６９２（１９８７））
が挙げられる。

【００６２】発現カセットは、代表的には発現ベクターの一部であり、これは、選択された
発現系においてその複製能力について選択される。発現ベクター（例えば、プラ
スミドまたはウイルスベクター）は、Ｐｏｕｗｅｌｓら（ＣｌｏｎｉｎｇＶｅ
ｃｔｏｒｓ：ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，８５，補遺、１９８７）に
おいて記載されたベクターから選択され得る。これらは、種々の商業的な供給源
から購入され得る。

【００６３】発現ベクターを用いて宿主細胞を形質転換／トランスフェクトするための方法
は、Ａｕｓｕｂｅｌら、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅ
ｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆ＳｏｎｓＩｎｃ．（１
９９４）において記載されるように、選択される宿主系に依存する。

【００６４】発現に際して、本発明の組換えポリペプチド（またはポリペプチド誘導体）は
、細胞内区画において産生されそしてそこに残存するか、細胞外の培地または細
胞周辺腔中に分泌／排出されるか、あるいは細胞膜に埋め込まれる。次いで、こ
のポリペプチドは、細胞抽出物からかまたは組換え細胞培養物の遠心分離後の上
清から、実質的に精製された形態で回収され得る。代表的には、この組換えポリ
ペプチドは、抗体に基づくアフィニティー精製によってか、または当業者によっ
て容易に適合され得る任意の他の方法（例えば、小さなアフィニティー結合ドメ
インへの遺伝子の融合による方法）によって、精製され得る。抗体に基づくアフ
ィニティー精製法もまた、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ株から抽出された本発明のポリペ
プチドを精製するために利用し得る。免疫アフィニティーによって本発明のポリ
ペプチドを精製するために有用な抗体は、下記のようにして得られ得る。

【００６５】本発明のポリヌクレオチドはまた、ワクチンの分野において（例えば、ＤＮＡ
ワクチン投与を達成するために）有用であり得る。２つの主な可能性が存在し、
これらは、ウイルスもしくは細菌宿主を遺伝子送達ビヒクルとして使用する（生
ワクチンベクター）か、または遊離の形態で遺伝子を投与する（例えば、プラス
ミドに挿入して）かのいずれかである。本発明のポリヌクレオチドの治療的効力
または予防的効力は、以下に記載されるように評価され得る。

【００６６】従って、本発明の第３の局面において、以下が提供される：（ｉ）発現のため
に必要であるエレメントの制御下に配置される本発明のＤＮＡ分子を含む、ワク
チンベクター（例えば、ポックスウイルス）；（ｉｉ）希釈剤またはキャリアと
ともに、本発明のワクチンベクターを含む組成物；特に、（ｉｉｉ）本発明のワ
クチンベクターの治療的または予防的に有効な量を含む薬学的組成物；（ｉｖ）
哺乳動物（例えば、ヒト；あるいは、この方法は、動物（例えば、ネコまたは鳥
類）のＣｈｌａｍｙｄｉａ感染を処置または予防するための獣医学的な適用にお
いて使用され得る）においてＣｈｌａｍｙｄｉａに対する免疫応答を誘導するた
めの方法（この方法は、哺乳動物に、免疫原的に有効な量の本発明のワクチンベ
クターを投与して、免疫応答（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｉａに対する予防的また
は治療的免疫応答）を誘発する工程を包含する）；および、特に、（ｖ）Ｃｈｌ
ａｍｙｄｉａ（例えば、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ、
Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｃ．ｐｅｃｏｒｕｍ）感染を予防および／または処置
するための方法（この方法は、必要がある個体に本発明のワクチンベクターの予
防的または治療的な量を投与する工程を包含する）。さらに、本発明の第３の局
面は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防および／または処置するための医薬の調製
における本発明のワクチンベクターの使用を包含する。

【００６７】本発明のワクチンベクターは、本発明の１つまたはいくつかのポリペプチドま
たは誘導体、ならびに少なくとも１つのさらなるＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原、その
フラグメント、ホモログ、変異体、または誘導体を発現し得る。さらに、このベ
クターは、免疫応答を増強する（アジュバント効果）、サイトカイン（例えば、
インターロイキン−２（ＩＬ−２）またはインターロイキン−１２（ＩＬ−１２
））を発現し得る。従って、ワクチンベクターは、哺乳動物細胞における発現の
ために必要とされるエレメントの制御下に配置された、例えば、クラミジア抗原
またはサイトカインをコードするさらなるＤＮＡ配列を含み得る。

【００６８】あるいは、本発明の組成物は、いくつかのワクチンベクターを含み得、このベ
クターの各々は、本発明のポリペプチドまたは誘導体を発現し得る。組成物はま
た、さらなるＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原あるいはそのサブユニット、フラグメント
、ホモログ、変異体、または誘導体；あるいはサイトカイン（例えば、ＩＬ−２
もしくはＩＬ−１２）を発現し得る、ワクチンベクターを含み得る。

【００６９】哺乳動物における感染を処置または予防するためのワクチン投与方法において
、本発明のワクチンベクターは、ワクチンの分野における使用における任意の従
来的な経路によって、特に粘膜（例えば、眼、鼻内、口、胃、肺、腸、直腸、膣
、または尿路）表面に、または非経口（例えば、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、
または腹腔内）経路を介して、投与され得る。好ましい経路は、ワクチンベクタ
ーの選択に依存する。この投与は、単回用量において、または間隔をあけて反復
して、達成され得る。適切な投薬量は、当業者によって理解される種々のパラメ
ーター（例えば、ワクチンベクターそれ自体、投与の経路、またはワクチン投与
される哺乳動物の状態（体重、齢など））に依存する。

【００７０】当該分野において利用可能な生ワクチンベクターには、ウイルスベクター（例
えば、アデノウイルス、アルファウイルス、およびポックスウイルス）、ならび
に細菌ベクター（例えば、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｖｉｂｒ
ｉｏｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｅｂｉ
ｌｉｅｄｅＣａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）、およびＳｔｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓ）が含まれる。

【００７１】アデノウイルスベクターの例、ならびに本発明のＤＮＡ分子を発現し得るアデ
ノウイルスベクターを構築するための方法は、米国特許第４，９２０，２０９号
に記載される。使用され得るポックスウイルスベクターには、例えば、ワクシニ
アウイルスおよびカナリア痘ウイルスが含まれ、これらはそれぞれ、米国特許第
４，７２２，８４８号および米国特許第５，３６４，７７３号に記載される（例
えば、ワクシニアウイルスベクターの記載については、Ｔａｒｔａｇｌｉａら、
Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１８８：２１７（１９９２）；およびカナリア痘の参考文献
については、Ｔａｙｌｏｒら、Ｖａｃｃｉｎｅ１３：５３９（１９９５）もま
た参照のこと）。本発明のポリヌクレオチドを発現し得るポックスウイルスベク
ターは、Ｋｉｅｎｙら、Ｎａｔｕｒｅ３１２：１６３（１９８４）に記載され
るように、相同組換えによって得られ得、その結果、本発明のポリヌクレオチド
は、哺乳動物細胞における発現に適切な条件下でウイルスゲノムに挿入される。
一般的に、ワクチンウイルスベクターの用量は、治療的または予防的使用につい
ては、１キログラム当たり、約１×１０⁴〜約１×１０¹¹、有利には、約１×１
０⁷〜約１×１０¹⁰、好ましくは約１×１０⁷〜約１×１０⁹プラーク形成ユニッ
トであり得る。好ましくは、ウイルスベクターは、非経口的に投与される；例え
ば、４週間間隔をあけて、３回の投与である。当業者は、本発明のウイルスベク
ターを含む組成物に、化学アジュバントを添加することを避けることが好ましく
、それによってウイルスベクターそれ自体への免疫応答を最小化することを認識
する。

【００７２】生経口ワクチンとして有用な非毒素産生性Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｅ変
異株は、Ｍｅｋａｌａｎｏｓら、Ｎａｔｕｒｅ３０６：５５１（１９８３）お
よび米国特許第４，８８２，２７８号（２つのｃｔｘＡ対立遺伝子の各々のコー
ド配列の実質的な量が欠失され、その結果、機能的なコレラ毒素が産生されない
株）；ＷＯ９２／１１３５４（ｉｒｇＡ遺伝子座が変異により不活化されてい
る株；この変異はｃｔｘＡ変異と単一の株中で組み合わされ得る）；およびＷＯ
９４／１５３３（機能的なｃｔｘＡおよびａｔｔＲＳ１のＤＮＡ配列を欠く欠
失変異体）において記載される。これらの株は、ＷＯ９４／１９４８２におい
て記載されるように、遺伝子操作されて異種抗原を発現し得る。本発明のＤＮＡ
分子によってコードされるポリペプチドまたはポリペプチド誘導体を発現し得る
Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｅ株の有効なワクチン用量は、選択された投与の
経路について適切な容量で、例えば、約１×１０⁵〜約１×１０⁹、好ましくは約
１×１０⁶〜約１×１０⁸の生存細菌を含み得る。好ましい投与の経路には、すべ
ての粘膜経路が含まれ；最も好ましくは、これらのベクターは、鼻腔内または経
口的に投与される。

【００７３】異種抗原の組換え発現のために遺伝子操作をされたかまたはされていない、弱
毒化されたＳａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ株、および経口ワク
チンとしてのそれらの使用は、Ｎａｋａｙａｍａら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｙ６：６９３（１９８８）およびＷＯ９２／１１３６１に記載される。好
ましい投与の経路には、すべての粘膜経路が含まれ；最も好ましくは、これらの
ベクターは、鼻腔内または経口的に投与される。

【００７４】ワクチンベクターとして有用な他の細菌株は、Ｈｉｇｈら、ＥＭＢＯ１１：
１９９１（１９９２）；Ｓｉｚｅｍｏｒｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２７０：２９９
（１９９５）（Ｓｈｉｇｅｌｌａｆｌｅｘｎｅｒｉ）；Ｍｅｄａｇｌｉｎｉら
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９２：６８６８（１９９５
）（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｇｏｒｄｏｎｉｉ）；およびＦｌｙｎｎ、Ｃ
ｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４０：３１（１９９４）、ＷＯ８８／６６２６、
ＷＯ９０／０５９４、ＷＯ９１／１３１５７、ＷＯ９２／１７９６、およ
びＷＯ９２／２１３７６（ＢａｃｉｌｌｅＣａｌｍｅｔｔｅＧｕｅｒｉｎ
）に記載される。

【００７５】細菌ベクターにおいて、本発明のポリヌクレオチドは、細菌ゲノムに挿入され
得るか、または、プラスミドに含まれて、遊離の状態で残存し得る。

【００７６】アジュバントもまた、ワクチン細菌ベクターを含む組成物に添加され得る。多
数のアジュバントが当業者に公知である。好ましいアジュバントは、以下に提供
されるリストから選択され得る。

【００７７】本発明の第４の局面によって、以下がまた提供される：（ｉ）希釈剤またはキ
ャリアとともに、本発明のポリヌクレオチドを含む組成物；（ｉｉ）本発明のポ
リヌクレオチドの治療的または予防的に有効な量を含む薬学的組成物；（ｉｉｉ
）哺乳動物においてＣｈｌａｍｙｄｉａに対する免疫応答を誘導するための方法
（この方法は、哺乳動物に、免疫原的に有効な量の本発明のポリヌクレオチドを
投与して、免疫応答（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｉａに対する防御的免疫応答）を
誘発する工程による）；および、特に、（ｉｖ）Ｃｈｌａｍｙｄｉａ（例えば、
Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅ、またはＣ．ｐｅｃｏｒｕｍ）感染を予防および／または処置するための方法
（この方法は、必要がある個体に本発明のポリヌクレオチドの予防的または治療
的量を投与する工程による）。さらに、本発明の第４の局面は、Ｃｈｌａｍｙｄ
ｉａ感染を予防および／または処置するための医薬の調製における本発明のポリ
ヌクレオチドの使用を包含する。本発明の第４の局面は、好ましくは、哺乳動物
細胞における発現のための条件下におかれたＤＮＡ分子（例えば、哺乳動物細胞
中で複製し得ずかつ哺乳動物ゲノム中に実質的に組み込まれ得ない、プラスミド
中で）の使用を含む。

【００７８】本発明のポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）はまた、それ自体ワクチン
目的（例えば、治療目的または予防目的）のために哺乳動物に投与され得る。本
発明のＤＮＡ分子が使用される場合、この分子は哺乳動物細胞中で複製し得ずか
つ哺乳動物ゲノムに組み込まれ得ない、プラスミドの形態であり得る。代表的に
は、ＤＮＡ分子は、哺乳動物細胞における発現に適切なプロモーターの制御下に
おかれる。そのプロモーターは、遍在的にかまたは組織特異的に機能し得る。非
組織特異的なプロモーターの例には、初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロ
モーター（米国特許第４，１６８，０６２号に記載される）、およびラウス肉腫
ウイルスプロモーター（Ｎｏｒｔｏｎ＆Ｃｏｆｆｉｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ
Ｂｉｏｌ．５：２８１（１９８５）に記載される）が含まれる。デスミンプロモ
ーター（Ｌｉら、Ｇｅｎｅ７８：２４３（１９８９）、Ｌｉ＆Ｐａｕｌｉｎ，
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：６５６２（１９９１）、およびＬｉ＆Ｐａｕ
ｌｉｎ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１０４０３（１９９３））は、組織
特異的であり、そして筋肉細胞における発現を駆動する。より一般的には、有用
なベクターは、とりわけ、ＷＯ９４／２１７９７およびＨａｒｔｉｋｋａら、
ＨｕｍａｎＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ７：１２０５（１９９６）に記載され
る。

【００７９】ＤＮＡ／ＲＮＡワクチン投与のために、本発明のポリヌクレオチドは、前駆体
型または成熟型をコードし得る。このポリヌクレオチドが前駆体型をコードする
場合、この前駆体型は同種でも異種でもあり得る。後者の場合において、組織型
プラスミノーゲン因子（ｔＰＡ）リーダー配列のような、真核生物リーダー配列
が使用され得る。

【００８０】本発明の組成物は、本発明の１つまたはいくつかのポリヌクレオチドを含み得
る。この組成物はまた、別のＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原あるいはそのフラグメント
、誘導体、変異体、またはアナログをコードする、少なくとも１つのさらなるポ
リヌクレオチドを含み得る。サイトカイン（例えば、インターロイキン−２（Ｉ
Ｌ−２）またはインターロイキン−１２（ＩＬ−１２））をコードするポリヌク
レオチドもまた、この組成物に添加され得、その結果、免疫応答が増強される。
これらのさらなるポリヌクレオチドは、発現のために適切な制御下におかれる。
有利には、同じ組成物中に含まれるべき本発明のＤＮＡ分子および／またはさら
なるＤＮＡ分子は、同じプラスミド中に含まれ得る。

【００８１】ポリヌクレオチドを調製および精製するための分子生物学の標準的な技術は、
本発明のポリヌクレオチド治療剤の調製において使用され得る。ワクチンとして
の使用のために、本発明のポリヌクレオチドは、種々の方法に従って処方され得
る。

【００８２】第１に、ポリヌクレオチドは、裸の形態、すなわち、任意の送達ビヒクル（例
えば、アニオン性リポソーム、カチオン性脂質、微粒子（例えば、金微粒子）、
沈殿剤（例えば、リン酸カルシウム）、または任意の他のトランスフェクション
促進剤）なしで、使用され得る。この場合において、このポリヌクレオチドは、
単に生理学的に受容可能な溶液（例えば、滅菌生理食塩水または滅菌緩衝化生理
食塩水）中に、キャリアとともにまたはキャリアなしで、希釈され得る。存在す
る場合、そのキャリアは、好ましくは、等張性、低張性、または弱い高張性であ
り、そして、ショ糖溶液（例えば、２０％ショ糖を含む溶液）によって提供され
るような、比較的低いイオン強度を有する。

【００８３】あるいは、ポリヌクレオチドは、細胞の取り込みを補助する薬剤と会合され得
る。このポリヌクレオチドは、とりわけ、（ｉ）ブピバカイン（例えば、ＷＯ
９４／１６７３７を参照のこと）のような細胞の透過性を改変する化学薬剤を補
充され得るか、（ｉｉ）リポソーム中にカプセル化され得るか、あるいは（ｉｉ
ｉ）カチオン性脂質、または、シリカ微粒子、金微粒子、もしくはタングステン
微粒子と会合され得る。

【００８４】アニオン性リポソームおよび中性リポソームは当該分野で周知であり（例えば
、リポソームの作製方法についての詳細な記載については、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ
：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，ＲＰＣＮｅｗ編、ＩＲＬＰ
ｒｅｓｓ（１９９０）を参照のこと）、そして広い範囲の産物（ポリヌクレオチ
ドを含む）を送達するために有用である。

【００８５】カチオン性脂質はまた、当該分野で公知であり、そして遺伝子送達のために一
般に使用される。このような脂質は、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ^TM（また、ＤＯＴＭ
Ａ（Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメ
チルアンモニウムクロライド）としても知られる）、ＤＯＴＡＰ（１，２−ビス
（オレイルオキシ）−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン）、ＤＤＡＢ（ジ
メチルジオクタデシルアンモニウムブロマイド）、ＤＯＧＳ（ジオクタデシルア
ミドログリシルスペルミン（ｄｉｏｃｔａｄｅｃｙｌａｍｉｄｏｌｏｇｌｙｃｙ
ｌｓｐｅｒｍｉｎｅ））およびコレステロール誘導体（例えば、ＤＣ−Ｃｈｏｌ
（３β−（Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノメタン）−カルバモイル）コレス
テロール））を含む。これらのカチオン性脂質の記載は、ＥＰ１８７，７０２
、ＷＯ９０／１１０９２、米国特許第５，２８３，１８５号、ＷＯ９１／１
５５０１、ＷＯ９５／２６３５６、および米国特許第５，５２７，９２８号に
見出され得る。遺伝子送達のためのカチオン性脂質は、好ましくは、例えばＷＯ
９０／１１０９２に記載されるように、中性脂質（例えば、ＤＯＰＥ（ジオレ
イルホスファチジルエタノールアミン））と会合して使用される。

【００８６】他のトランスフェクション促進化合物は、カチオン性リポソームを含む処方物
に添加され得る。それらの多くは、例えば、ＷＯ９３／１８７５９、ＷＯ９
３／１９７６８、ＷＯ９４／２５６０８、およびＷＯ９５／２３９７に記載さ
れる。それらには、とりわけ、核膜を通してのＤＮＡの輸送を容易にするために
有用なスペルミン誘導体（例えば、ＷＯ９３／１８７５９を参照のこと）、お
よび膜透過化化合物（例えば、ＧＡＬＡ、グラミシジンＳ、およびカチオン性胆
汁酸塩）（例えば、ＷＯ９３／１９７６８を参照のこと）が含まれる。

【００８７】金微粒子またはタングステン微粒子もまた、ＷＯ９１／３５９、ＷＯ９３
／１７７０６、およびＴａｎｇら（Ｎａｔｕｒｅ３５６：１５２（１９９２）
）に記載されるように、遺伝子送達のために使用され得る。この場合において、
微粒子コートされたポリヌクレオチドは、針を使わない注射デバイス（「遺伝子
銃」）（例えば、米国特許第４，９４５，０５０号、同第５，０１５，５８０号
、およびＷＯ９４／２４２６３に記載されるデバイス）を使用して、皮内また
は上皮内経路を介して注射され得る。

【００８８】ワクチンレシピエントにおいて使用されるＤＮＡの量は、例えば、ＤＮＡ構築
物において使用されるプロモーターの強さ、発現された遺伝子産物の免疫原性、
投与のために意図される哺乳動物の状態（例えば、哺乳動物の体重、齢、および
全身的健康）、投与の様式、ならびに処方の型に依存する。一般的に、約１μｇ
〜約１ｍｇ、好ましくは約１０μｇ〜約８００μｇ、そしてより好ましくは、約
２５μｇ〜約２５０μｇの治療的または予防的有効用量が、ヒト成体に投与され
得る。この投与は、単回用量または間隔をあけて反復して達成され得る。

【００８９】投与の経路は、ワクチンの分野において使用される従来的な経路のいずれかで
あり得る。一般的なガイダンスとして、本発明のポリヌクレオチドは、粘膜表面
（例えば、眼、鼻内、肺、口、腸、直腸、膣、および尿路の表面）；または非経
口経路（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、皮内、上皮内、または筋肉内の経路に
よる）を介して投与され得る。投与経路の選択は、例えば、選択される処方に依
存する。ブピバカインと付随して処方されるポリヌクレオチドは、有利に筋肉に
投与される。中性リポソームもしくはアニオン性リポソームまたはカチオン性脂
質（例えば、ＤＯＴＭＡまたはＤＣ−Ｃｈｏｌ）が使用される場合、その処方物
は、静脈内経路、鼻内経路（エーロゾル適用）、筋肉内経路、皮内経路、および
皮下経路を介して、有利に注射され得る。裸の形態のポリヌクレオチドは、筋肉
内経路、皮内経路、または皮下経路を介して、有利に投与され得る。

【００９０】絶対的に必要であるのではないが、このような組成物はまた、アジュバントを
含み得る。そうである場合、アジュバント効果を示すために併用投与を必要とし
ない全身性のアジュバント（例えば、ＱＳ２１であり、これは、米国特許第５，
０５７，５４６号に記載される）が、好ましい。

【００９１】本出願において提供される配列情報は、診断において有用であり得る特定のヌ
クレオチドプローブおよびプライマーの設計を可能にする。従って、本発明の第
５の局面において、配列番号１に示される配列に見出される配列か、またはこれ
らの配列から遺伝コードの縮重によって誘導される配列を有するヌクレオチドプ
ローブまたはプライマーが提供される。

【００９２】本出願において使用される場合、用語「プローブ」とは、上記に定義されるよ
うなストリンジェントな条件下で、配列番号１および２に示される配列と相同な
配列を有する核酸分子に、または相補的な配列もしくはアンチセンス配列にハイ
ブリダイズする、ＤＮＡ分子（好ましくは一本鎖）またはＲＮＡ分子（またはそ
の修飾物もしくは組合せ）をいう。一般的に、プローブは、配列番号１および２
に示される全長配列よりも有意に短く；例えば、それらは約５〜約１００、好ま
しくは約１０〜約８０ヌクレオチドを含み得る。特に、プローブは、配列番号１
および２に示される配列の一部に少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８５
％、より好ましくは９５％相同である配列、またはこのような配列に相補的であ
る配列を有する。プローブは、イノシン、メチル−５−デオキシシチジン、デオ
キシウリジン、ジメチルアミノ−５−デオキシウリジン、またはジアミノ−２，
６−プリンのような修飾した塩基を含み得る。糖またはリン酸残基もまた、修飾
または置換され得る。例えば、デオキシリボース残基は、ポリアミドによって置
換され得（Ｎｉｅｌｓｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２５４：１４９７（１９９１）
）、そしてリン酸残基は、エステル基（例えば、ジホスフェートエステル、アル
キルエステル、アリールホスホネートエステル、およびホスホロチオエートエス
テル）によって置換され得る。さらに、リボヌクレオチドの２’−ヒドロキシル
基は、例えば、アルキル基を含むことによって修飾され得る。

【００９３】本発明のプローブは、捕捉または検出プローブとして、診断試験において使用
され得る。このような捕捉プローブは、共有結合的手段によって、または受動的
吸着によって、直接的または間接的に、従来どおりに固体支持体上に固定化され
得る。検出プローブは、放射性同位元素；酵素（例えば、ペルオキシダーゼ、ア
ルカリホスファターゼ、および色素産生基質、蛍光産生基質、または発光性基質
を加水分解し得る酵素）；色素産生性、蛍光産生性または発光性である化合物；
ヌクレオチド塩基アナログ；ならびにビオチン、から選択される検出マーカーに
よって標識され得る。

【００９４】本発明のプローブは、例えば、ドットブロット（Ｍａｎｉａｔｉｓら、ＭＯＬ
ＥＣＵＬＡＲＣＬＯＮＩＮＧ：ＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＡＮＵＡＬ（１
９８２）ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒ
ｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ）、サザン
ブロット（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．９８：５０３（１９７５
））、ノーザンブロット（標的としてＲＮＡが使用される以外は、サザンブロッ
トと同一である）、またはサンドウィッチ技術（Ｄｕｎｎら、Ｃｅｌｌ１２：
２３（１９７７））のような任意の慣用的なハイブリダイゼーション技術におい
て使用され得る。後者の技術は、少なくとも部分的に互いに異なるヌクレオチド
配列を有する特異的な捕捉プローブおよび／または特異的な検出プローブの使用
を含む。

【００９５】プライマーは、通常、増幅プロセス（例えば、ＰＣＲ）において、伸長プロセ
スにおいて、または逆転写方法において、ＤＮＡの酵素的重合を開始するために
使用される約１０〜約４０ヌクレオチドのプローブである。ＰＣＲを含む診断的
方法において、プライマーは標識され得る。

【００９６】従って、本発明はまた、（ｉ）生物学的材料においてＣｈｌａｍｙｄｉａの存
在を検出および／または同定するための本発明のプローブを含む、試薬；（ｉｉ
）生物学的材料においてＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出および／または同定す
るための方法であって、ここで（ａ）サンプルが生物学的材料から回収されるか
または生物学的材料に由来し、（ｂ）この材料からＤＮＡまたはＲＮＡが抽出さ
れ、そして変性され；そして（ｃ）本発明のプローブ（例えば、捕捉プローブ、
検出プローブ、またはその両方）に、ストリンジェントなハイブリダイゼーショ
ン条件下で曝露され、その結果、ハイブリダイゼーションが検出される、方法；
ならびに（ｉｉｉ）生物学的材料においてＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出およ
び／または同定するための方法であって、ここで、（ａ）サンプルが生物学的材
料から回収されるかまたは生物学的材料に由来し、（ｂ）ＤＮＡがそこから抽出
され、（ｃ）本発明の少なくとも１つ、好ましくは２つのプライマーを用いて、
抽出されたＤＮＡがプライムされ、そしてポリメラーゼ連鎖反応によって増幅さ
れ、そして（ｄ）増幅されたＤＮＡフラグメントが産生される、方法、を包含す
る。

【００９７】以前に言及したように、新しく同定されたオープンリーディングフレームの発
現に際して産生され得るポリペプチドは、有用なワクチン薬剤である。

【００９８】従って、本発明の第６の局面は、本発明のポリヌクレオチドによってコードさ
れるアミノ酸配列を有する、実質的に精製されたポリペプチドまたはポリペプチ
ド誘導体を特徴とする。

【００９９】「実質的に精製されたポリペプチド」は、天然にそのポリペプチドが存在する
環境から分離されたポリペプチド、および／またはそのポリペプチドが合成され
た環境中に存在するポリペプチドの大部分を含まないポリペプチドとして定義さ
れる。例えば、実質的に精製されたポリペプチドは、細胞質ポリペプチドを含ま
ない。当業者は、本発明のポリペプチドが、天然の供給源（すなわち、Ｃｈｌａ
ｍｙｄｉａ株）から精製され得るか、または組換え手段によって産生され得るこ
とを理解する。

【０１００】本発明のポリヌクレオチドによってコードされる相同なポリペプチドまたはポ
リペプチド誘導体を、配列番号１および２に示されるアミノ酸配列を有する参照
ポリペプチドに対して惹起された抗血清を用いる交差反応性を試験することによ
って、特異的抗原性についてスクリーニングし得る。手短には、単一特異的過免
疫抗血清を、それ自体としてまたは融合ポリペプチドとしての精製された参照ポ
リペプチド（例えば、ＭＢＰ、ＧＳＴ、またはＨｉｓ−タグ系の発現産物、ある
いは抗原性であることが予測される合成ペプチド）に対して惹起し得る。特異的
抗原性についてスクリーニングされる相同ポリペプチドまたは誘導体は、それ自
体としてか、または融合ポリペプチドとして産生され得る。後者の場合であって
、抗血清がまた、融合ポリペプチドに対して惹起される場合、２つの異なる融合
系が使用される。特異的抗原性は、以下に記載するように、ウェスタンブロット
（Ｔｏｗｂｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７６：４
３５０（１９７９））、ドットブロット、およびＥＬＩＳＡを含む多数の方法に
従って決定され得る。

【０１０１】ウェスタンブロットアッセイにおいて、スクリーニングされるべき産物を、精
製された調製物としてか、またはＥ．ｃｏｌｉ全抽出物のいずれかとして、Ｌａ
ｅｍｍｌｉ（Ｎａｔｕｒｅ２２７：６８０（１９７０））によって記載される
ように、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動に供する。ニトロセルロース膜に転写した後
、この材料をさらに、約１：５〜約１：５０００、好ましくは約１：１００〜約
１：５００の希釈の範囲で希釈された単一特異的過免疫抗血清とともに、インキ
ュベートする。特異的抗原性は、一旦、産物に対応するバンドが上記の範囲にお
ける任意の希釈で反応性を示すと、示される。

【０１０２】ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、スクリーニングされるべき産物は、好ましくは
、コーティングする抗原として使用される。精製された調製物が好ましいが、全
細胞抽出物もまた、使用され得る。手短には、約１０μｇタンパク質／ｍｌでの
約１００μｌの調製物を、９６ウェルポリカーボネートＥＬＩＳＡプレートのウ
ェル中に分配する。このプレートを、３７℃で２時間、次に４℃で一晩インキュ
ベートする。このプレートを、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝化
生理食塩水（ＰＢＳ）（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ緩衝液）で洗浄する。ウェルを１％
のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む２５０μｌのＰＢＳで満たし、非特異的
抗体結合を防ぐ。３７℃での１時間のインキュベーションの後、このプレートを
ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ緩衝液で洗浄する。抗血清を、０．５％のＢＳＡを含有する
ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ緩衝液中で、連続的に希釈する。希釈液の１００μｌを、１
ウェルあたりに添加する。このプレートを、３７℃で９０分間インキュベートし
、洗浄し、そして標準的な手順に従って評価する。例えば、特異的抗体がウサギ
において惹起された場合、ヤギ抗ウサギペルオキシダーゼ結合体を、ウェルに添
加する。インキュベーションを３７℃で９０分間行い、そしてこのプレートを洗
浄する。反応物を適切な基質を用いて発色させ、そしてこの反応を比色定量によ
って測定する（分光光度的に測定した吸光度）。上記の実験条件下で、ポジティ
ブ反応が、非免疫コントロール血清よりも高いＯ．Ｄ．値によって示される。

【０１０３】ドットブロットアッセイにおいて、精製された産物が好ましいが、全細胞抽出
物もまた、使用され得る。手短には、約１００μｌ／ｍｌの産物の溶液を、５０
ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）中で連続的に２倍希釈する。各希釈液
の１００μｌを、９６ウェルのドットブロット装置（Ｂｉｏｒａｄ）中にセット
したニトロセルロース膜０．４５μｍにアプライする。このシステムに真空を適
用することによって緩衝液を取り除く。ウェルを、５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ
（ｐＨ７．５）の添加によって洗浄し、そしてその膜を風乾する。その膜をブロ
ッキング緩衝液（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）０．１５ＭＮ
ａＣｌ、１０ｇ／Ｌスキムミルク）中に浸し、そして約１：５０〜約１：５０
００、好ましくは約１：５００の抗血清希釈物とともに、インキュベートする。
反応を標準的な手順に従って明らかにする。例えば、ウサギ抗体が使用される場
合、ヤギ抗ウサギペルオキシダーゼ結合体を、ウェルに添加する。インキュベー
ションを３７℃で９０分間行い、そしてこのブロットを洗浄する。反応物を適切
な基質を用いて発色させ、そして停止させる。この反応を、着色したスポットの
出現によって（例えば、比色定量によって）可視的に測定する。上記の実験条件
下で、一旦、着色したスポットが、少なくとも約１：５、好ましくは少なくとも
約１：５００の希釈と関連付けられると、ポジティブ反応が示される。

【０１０４】本発明のポリペプチドまたは誘導体の治療的効力または予防的効力は、下記の
ように評価され得る。

【０１０５】本発明の第７の局面に従って、以下が提供される（ｉ）希釈剤またはキャリア
とともに本発明のポリペプチドを含有する組成物；特に（ｉｉ）本発明のポリペ
プチドの治療的有効量または予防的有効量を含む薬学的組成物；（ｉｉｉ）免疫
応答を誘発するために本発明のポリペプチドの免疫学的有効量を哺乳動物に投与
することによって、哺乳動物においてＣｈｌａｍｙｄｉａに対する免疫応答（例
えば、Ｃｈｌａｍｙｄｉａに対する防御的免疫応答）を誘導する方法；および、
特に（ｉｖ）必要とする個体に対して、本発明のポリペプチドの予防的有効量ま
たは治療的有効量を投与することによって、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ（例えば、Ｃ．
ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、
またはＣ．ｐｅｃｏｒｕｍ）感染を、予防および／または処置する方法。さらに
、本発明の第７の局面は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防および／または処置す
るための医薬の調製における、本発明のポリペプチドの使用を包含する。

【０１０６】本発明の免疫原性組成物は、ワクチンの分野における使用において、任意の従
来の経路（特に粘膜（例えば、眼、鼻内、肺、口、胃、腸、直腸、膣、もしくは
尿路）表面に対してか、または非経口（例えば、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、
もしくは腹膜内）経路を介して）によって投与され得る。投与経路の選択は、多
数のパラメーター（例えば、ポリペプチドに付随するアジュバント）に依存する
。例えば、粘膜アジュバントが使用される場合、鼻内または経口経路が好ましく
、そして脂質処方物またはアルミニウム化合物を使用する場合、非経口経路が好
ましい。後者の場合、皮下経路または筋肉内経路が、最も好ましい。この選択は
また、ワクチン剤の性質にも依存し得る。例えば、ＣＴＢまたはＬＴＢと融合し
た本発明のポリペプチドは、粘膜表面に対して、最も良好に投与される。

【０１０７】本発明の組成物は、１つまたは数個の本発明のポリペプチドまたは誘導体を含
み得る。本発明の組成物はまた、少なくとも１つのさらなるＣｈｌａｍｙｄｉａ
抗原、またはそのサブユニット、フラグメント、ホモログ、変異体、もしくは誘
導体を含み得る。

【０１０８】本発明の組成物の使用のために、ポリペプチドまたはその誘導体を、リポソー
ム（好ましくは、中性リポソームもしくはアニオン性リポソーム）、ミクロスフ
ェア、ＩＳＣＯＭＳ、またはウイルス様粒子（ＶＬＰ）中に、またはこれらとと
もに処方して、送達を促進し得、そして／あるいは免疫応答を増強し得る。これ
らの化合物は、当業者にとって、容易に利用可能である；例えば、ＬＩＰＯＳＯ
ＭＥＳ：ＡＰＲＡＣＴＩＣＡＬＡＰＰＲＯＡＣＨ（上記）を参照のこと。

【０１０９】リポソームなど以外のアジュバントもまた、使用され得、そして当該分野で公
知である。適切な選択は、例えば、以下に提供されるリストから、当業者によっ
て従来的になされ得る。

【０１１０】投与は、当業者によって決定され得るように、単回用量において達成され得る
か、または必要に応じて間隔をおいて繰り返され得る。例えば、初回刺激用量の
後、週１回または月１回の間隔での３回の追加免疫用量を続け得る。適切な用量
は、当業者によって決定され得るように、レシピエント（例えば、成体または幼
児）、特定のワクチン抗原、投与の経路および頻度、アジュバントの存在／非存
在またはタイプ、ならびに所望の効果（例えば、防御および／または処置）を含
む種々のパラメーターに依存する。一般に、本発明のワクチン抗原は、約１０μ
ｇ〜約５００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ〜約２００ｍｇの量において、粘膜経路
によって投与され得る。投与の非経口経路のために、用量は、通常約１ｍｇ（好
ましくは、約１００μｇ）を越えるべきではない。

【０１１１】ワクチン剤として使用する場合、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドは、多段階の免疫プロセスの一部として連続的に使用され得る。例えば、哺乳
動物は、ポックスウイルスのような本発明のワクチンベクターを用いて（例えば
、非経口経路を介して）最初に初回刺激され得、次いで、ワクチンベクターによ
ってコードされるポリペプチドを用いて２回追加免疫（例えば、粘膜経路を介し
て）され得る。別の例において、本発明のポリペプチドまたは誘導体と会合する
リポソームはまた、初回刺激のために使用され得、追加免疫が、粘膜アジュバン
ト（例えば、ＬＴ）と組み合わせて本発明の可溶性のポリペプチドまたは誘導体
を使用して粘膜的に行われる。

【０１１２】本発明のポリペプチド誘導体はまた、抗Ｃｈｌａｍｙｄｉａ抗体の存在（例え
ば、血液サンプル中）の検出のための診断試薬として有用である。このようなポ
リペプチドは、約５〜約８０、好ましくは約１０〜約５０アミノ酸長であり、そ
して診断方法に依存して標識されてもよいし、または標識されなくてもよい。こ
のような試薬を含む診断方法を、以下に記載する。

【０１１３】本発明のＤＮＡ分子の発現の際に、ポリペプチドまたはポリペプチド誘導体を
産生し、そして公知の実験室技術を使用して精製し得る。例えば、ポリペプチド
またはポリペプチド誘導体は、精製を促進する融合したテールを含む融合タンパ
ク質として産生され得る。この融合産物を使用して、ポリペプチドまたはポリペ
プチド誘導体に対する抗体（単一特異的抗体）を惹起するために、小哺乳動物（
例えば、マウスまたはウサギ）を免疫し得る。従って、本発明の第８の局面は、
本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体に結合する単一特異的抗体を提
供する。

【０１１４】「単一特異的抗体」とは、独特の天然に存在するＣｈｌａｍｙｄｉａポリペプ
チドと反応し得る抗体が意味される。本発明の抗体は、ポリクローナルまたはモ
ノクローナルであり得る。単一特異的抗体は、組換え体、例えば、キメラ（例え
ば、ヒト定常領域と会合したマウス起源の可変領域から構成される）、ヒト化（
動物（例えば、マウス）起源の超可変領域をともなうヒト免疫グロブリン定常骨
格）、および／または単鎖であり得る。ポリクローナル抗体および単一特異的抗
体の両方はまた、免疫グロブリンフラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ）’２または
Ｆａｂフラグメント）の形態であり得る。本発明の抗体は、任意のアイソタイプ
（例えば、ＩｇＧまたはＩｇＡ）であり得、そしてポリクローナル抗体は、単一
のアイソタイプであっても、アイソタイプの混合物を含んでもよい。

【０１１５】本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体に対して惹起される本発明の
抗体を産生し得、そして標準的な免疫学的アッセイ（例えば、ウエスタンブロッ
ト分析、ドットブロットアッセイ、またはＥＬＩＳＡ（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ
ら、ＣＵＲＲＥＮＴＰＲＯＴＯＣＯＬＳＩＮＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ（１９
９４）ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹを
参照のこと））を使用して、同定され得る。この抗体を、診断方法において使用
して、サンプル（例えば、生物学的サンプル）中のＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原の存
在を検出し得る。この抗体を、本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体
の精製のためのアフィニティークロマトグラフィー方法においてもまた、使用し
得る。以下にさらに考察されるように、そのような抗体を、予防的および治療的
な受動免疫方法において、使用し得る。

【０１１６】従って、本発明の第９の局面は、以下を提供する、（ｉ）本発明の抗体、ポリ
ペプチド、またはポリペプチド誘導体を含む、生物学的サンプル中のＣｈｌａｍ
ｙｄｉａの存在を検出するための試薬；および（ｉｉ）生物学的サンプルを本発
明の抗体、ポリペプチド、またはポリペプチド誘導体と接触させ、その結果、免
疫複合体を形成する工程、およびそのような複合体を検出して、サンプル中また
はそのサンプルが由来する生物中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を示す工程によっ
て、生物学的サンプル中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出する診断方法。

【０１１７】当業者は、抗体、ポリペプチド、またはポリペプチド誘導体のいずれが使用さ
れても、サンプルの成分と、その抗体、ポリペプチド、またはポリペプチド誘導
体との間で免疫複合体が形成され、そして任意の未結合物質が、複合体の検出前
に除去され得ることを理解する。容易に理解され得るように、ポリペプチド試薬
は、サンプル（例えば、血液サンプル）中の抗Ｃｈｌａｍｙｄｉａ抗体の存在を
検出するために有用であるが、本発明の抗体は、サンプル（例えば、胃抽出物、
または生検）をＣｈｌａｍｙｄｉａポリペプチドの存在についてスクリーニング
するために使用され得る。

【０１１８】診断適用における用途のために、試薬（すなわち、本発明の抗体、ポリペプチ
ド、またはポリペプチド誘導体）は、遊離の状態であっても、固体支持体（例え
ば、チューブ、ビーズ、または当該分野で使用される任意の他の従来の支持体）
に固定化されてもよい。固定化は、直接的手段または間接的手段を使用して達成
され得る。直接的手段としては、支持体と試薬との間の、受動的吸着（非共有結
合）または共有結合が挙げられる。「間接的手段」とは、試薬と相互作用する抗
試薬化合物を、最初に固体支持体に付着することが意味される。例えば、ポリペ
プチド試薬を使用する場合、その試薬に結合する抗体が生物学的サンプル中の抗
体の認識に関与しないエピトープに結合するという条件で、その試薬に結合する
抗体が、抗試薬として供され得る。間接的手段はまた、リガンド−レセプター系
（例えば、ビタミンのような分子を、ポリペプチド試薬に移植（ｇｒａｆｔ）し
得、そして対応するレセプターを、固相上に固定し得る）を利用し得る。これは
、ビオチン−ストレプトアビジン系によって例示される。あるいは、間接的手段
は、例えば、化学的にか、または遺伝子操作によってペプチド尾部（ｔａｉｌ）
を試薬に付加し、そして移植した産物または融合した産物を、ペプチド尾部の受
動的吸着または共有結合により固定することによって、使用され得る。

【０１１９】本発明の第１０の局面に従って、生物学的サンプルから本発明のポリペプチド
またはポリペプチド誘導体を精製するプロセスが提供される。このプロセスは、
生物学的サンプルを用いる、抗体に基づくアフィニティークロマトグラフィーを
実施する工程を包含し、ここでこの抗体は、本発明の単一特異的抗体である。

【０１２０】本発明の精製プロセスにおける用途のために、抗体は、ポリクローナルまたは
単一特異的であり得、そして好ましくは、ＩｇＧタイプである。精製されたＩｇ
Ｇは、標準的な方法を用いて抗血清から調製され得る（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ
ら、前出を参照のこと）。従来のクロマトグラフィー支持体、ならびに抗体を移
植する標準的な方法が、例えば、ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＡＬＡＢＯＲＡＴＯ
ＲＹＭＡＮＵＡＬ，Ｄ．Ｌａｎｅ，Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ編（１９８８）に開示さ
れる。

【０１２１】手短には、生物学的サンプル（例えば、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抽出物（好
ましくは、緩衝溶液中））を、クロマトグラフィー材料（好ましくは、生物学的
サンプルを希釈するために使用される緩衝液で平衡化される）に適用し、その結
果、本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体（すなわち、抗原）を、そ
の材料上に吸着させる。クロマトグラフィー材料（例えば、本発明の抗体に結合
したゲルまたは樹脂）は、バッチ形態であっても、カラム中であってもよい。未
結合の成分を洗い流し、次に抗原を適切な溶出緩衝液（例えば、グリシン緩衝液
またはカオトロピック剤（例えば、グアニジンＨＣｌ）または高塩濃度（例えば
、３ＭＭｇＣｌ₂）を含む緩衝液）で溶出する。溶出された画分を回収し、そ
して抗原の存在を検出する（例えば、２８０ｎｍでの吸光度を測定することによ
る）。

【０１２２】本発明の抗体を、以下に記載のように、治療的効力についてスクリーニングし
得る。本発明の第１１の局面に従って、以下が提供される（ｉ）希釈剤またはキ
ャリアとともに本発明の単一特異的抗体を含有する物質の組成物；（ｉｉ）本発
明の単一特異的抗体の治療的または予防的有効量を含む薬学的組成物；および（
ｉｉｉ）必要とする個体に対して、本発明の単一特異的抗体の治療的または予防
的な量を投与することによって、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ（例えば、Ｃ．ｔｒａｃｈ
ｏｍａｔｉｓ、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、またはＣ．
ｐｅｃｏｒｕｍ）感染を、処置または予防する方法。さらに、本発明の第１１の
局面は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を処置または予防するための医薬の調製におけ
る、本発明の単一特異的抗体の使用を含む。

【０１２３】この目的のために、単一特異的抗体は、ポリクローナルであっても、モノクロ
ーナルであってもよく、好ましくは、ＩｇＡアイソタイプ（主として）であり得
る。受動免疫では、抗体を、哺乳動物の粘膜表面（例えば、胃粘膜（例えば、経
口的または胃内に））に、有利には炭酸水素緩衝液の存在下で投与し得る。ある
いは、全身投与（炭酸水素緩衝液を必要としない）を実施し得る。本発明の単一
特異的抗体を、単一の活性成分としてか、または異なるＣｈｌａｍｙｄｉａポリ
ペプチドに特異的な少なくとも１つの単一特異的抗体との混合物として投与し得
る。使用される抗体の量および特定のレジメンは、当業者によって容易に決定さ
れ得る。例えば、１週間にわたる約１００〜１，０００ｍｇの抗体の毎日の投与
、または２〜３日間にわたる約１００〜１，０００ｍｇの抗体の１日あたり３用
量の投与は、大半の目的にとって有効なレジメンであり得る。

【０１２４】治療的または予防的効力を、例えばＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅマウスモデルを
使用した、当該分野で標準的な方法（例えば、粘膜免疫応答の誘導、あるいは防
御的および／または治療的免疫の誘導を測定することによる）を使用して評価し
得る。当業者は、このモデルのＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ株が、別のＣｈｌａｍ
ｙｄｉａ株で置換され得ることを認識する。例えば、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ
由来のＤＮＡ分子およびポリペプチドの効力は、好ましくは、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏ
ｎｉａｅ株を使用するマウスモデルにおいて評価される。防御を、コントロール
群の程度に対してＣｈｌａｍｙｄｉａ感染の程度を比較することによって決定し
得る。防御は、コントロール群と比較して感染が減少する場合に示される。その
ような評価は、ポリヌクレオチド、ワクチンベクター、ポリペプチドおよびこれ
らの誘導体、ならびに本発明の抗体について、なされ得る。

【０１２５】上記の任意のワクチン組成物において有用なアジュバントは、以下のとおりで
ある。

【０１２６】非経口投与のためのアジュバントとしては、アルミニウム化合物（例えば、ア
ルミニウムヒドロキシド、アルミニウムホスフェート、およびアルミニウムヒド
ロキシホスフェート）が挙げられる。抗原は、標準的なプロトコールに従って、
アルミニウム化合物とともに沈殿され得るか、またはアルミニウム化合物に吸着
され得る。他のアジュバント（例えば、ＲＩＢＩ（ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ，Ｈａ
ｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ））を、非経口投与に使用し得る。

【０１２７】粘膜投与のためのアジュバントとしては、細菌毒素（例えば、コレラ毒素（Ｃ
Ｔ）、Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性毒素（ＬＴ）、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆ
ｆｉｃｉｌｅ毒素Ａおよび百日咳毒素（ＰＴ）、またはそれらの組み合わせ、サ
ブユニット、トキソイド、または変異体が挙げられる。例えば、ネイティブのコ
レラ毒素サブユニットＢ（ＣＴＢ）の精製された調製物が使用され得る。これら
の任意の毒素のフラグメント、ホモログ、誘導体、および融合物がアジュバント
活性を保持する場合には、これらもまた、適切である。好ましくは、減少した毒
性を有する変異体が使用される。適切な変異体が、例えば、ＷＯ９５／１７２１
１（Ａｒｇ−７−ＬｙｓＣＴ変異体）、ＷＯ９６／６６２７（Ａｒｇ−１９２
−ＧｌｙＬＴ変異体）、およびＷＯ９５／３４３２３（Ａｒｇ−９−Ｌｙｓお
よびＧｌｕ−１２９−ＧｌｙＰＴ変異体）において記載される。本発明の方法
および組成物に使用され得るさらなるＬＴ変異体としては、例えば、Ｓｅｒ−６
３−Ｌｙｓ、Ａｌａ−６９−Ｇｌｙ、Ｇｌｕ−１１０−Ａｓｐ、およびＧｌｕ−
１１２−Ａｓｐ変異体が挙げられる。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌ
ｌａｍｉｎｎｅｓｏｔａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、
またはＳｈｉｇｅｌｌａｆｌｅｘｎｅｒｉの細菌モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰ
ＬＡ）；サポニン、あるいはポリラクチドグリコリド（ＰＬＧＡ）ミクロスフェ
アのような他のアジュバントもまた、粘膜投与において使用され得る。

【０１２８】粘膜投与および非経口投与の両方のために有用なアジュバントとしては、ポリ
ホスファゼン（ＷＯ９５／２４１５）、ＤＣ−コール（３ｂ−（Ｎ−（Ｎ’，Ｎ
’−ジメチルアミノメタン）−カルバモイル）コレステロール（ＤＣ−ｃｈｏｌ
（３ｂ−（Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅ）
−ｃａｒｂａｍｏｙｌ）ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ）（米国特許第５，２８３，１
８５号およびＷＯ９６／１４８３１）およびＱＳ−２１（ＷＯ８８／９３３６）
が挙げられる。

【０１２９】本発明の任意の薬学的組成物（本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、ポ
リペプチド誘導体、または抗体を含む）を、従来の様式において製造し得る。特
に、この組成物は、薬学的に受容可能な希釈剤またはキャリア（例えば、水また
は生理食塩水溶液（例えば、リン酸緩衝化生理食塩水））とともに処方され得る
。一般に、希釈剤またはキャリアを、投与の様式および経路、ならびに標準的な
薬学的実施に基づいて選択し得る。適切な薬学的キャリアまたは希釈剤、ならび
に薬学的処方物中におけるその用途のための薬学的に必要不可欠な物は、Ｒｅｍ
ｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ（当該分
野での標準的な参考テキスト）中、およびＵＳＰ／ＮＦ中に記載される。

【０１３０】本発明はまた、抗生物質、制酸剤、スクラルファートまたはこれらの組み合わ
せと組み合わせた、本発明のＣｈｌａｍｙｄｉａポリペプチドおよび粘膜アジュ
バントの経口投与によって、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を処置する方法を含む。ワ
クチン抗原およびアジュバントとともに投与され得るそのような化合物の例は、
例えば、マクロライド、テトラサイクリンおよびそれらの誘導体を含む抗生物質
（使用され得る抗生物質の具体的な例としては、アジスロマイシンまたはドキシ
サイクリンが挙げられる）、またはサイトカインもしくはステロイドのような免
疫調節薬が挙げられる。さらに、上記に列挙した成分の１つより多くを共に組み
合わせて含む化合物を使用し得る。本発明はまた、これらの方法を実施するため
の組成物（すなわち、薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤中の、本発明の
Ｃｈｌａｍｙｄｉａ抗原（単数または複数）、アジュバント、および１つ以上の
上記に列挙した化合物を含む組成物）を含む。

【０１３１】本発明の方法および組成物において使用される、上記に列挙した化合物の量を
、当業者は容易に決定し得る。さらに、当業者は、処置／免疫スケジュールを容
易に設計し得る。例えば、非ワクチン成分を、１〜１４日目に投与し得、そして
ワクチン抗原＋アジュバントを、７、１４、２１、および２８日目に投与し得る
。

【０１３２】上記の開示は、一般的に、本発明を記載する。より完全な理解が、以下の具体
的な実施例を参照して得られ得る。これらの例は、例示の目的のみのために記載
され、そして本発明の範囲を限定することを意図しない。形態の変更および等価
物の置換は、付随的な事柄として意図され、そして好適として示唆または指示さ
れ得る。本明細書において特定の用語を用いたが、そのような用語は、記述的意
味におけることが意図され、そして限定の目的のためでない。配列番号１および
配列番号２に示される配列の１つに相同な配列を有するポリペプチドとしては、
天然に存在する対立遺伝子改変体、ならびに、抗原性の点でポリペプチドに類似
する変異体または任意の他の天然に存在しない改変体が挙げられる。

【０１３３】当該分野において公知のように、対立遺伝子改変体は、ポリペプチドの生物学
的機能を変更しない、１以上のアミノ酸の置換、欠失または付加を有するとして
特徴付けられる、ポリペプチドの代替形態である。「生物学的機能」とは、たと
えその機能が細胞の増殖または生存に必要でなくとも、ポリペプチドが天然に存
在する細胞における、そのポリペプチドの機能を意味する。例えば、ポーリンの
生物学的機能は、細胞外培地中に存在する化合物の細胞への侵入を可能にするこ
とである。生物学的機能は、抗原性機能とは異なる。ポリペプチドは、１より多
い生物学的機能を有し得る。

【０１３４】対立遺伝子改変体は、天然において非常に一般的である。例えば、細菌種（例
えば、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）は、通常、少数の対立遺伝子改変によって互
いに異なる種々の株によって代表される。実際、異なる株において同じ生物学的
機能を満たすポリペプチドは、各々の株において同一ではないアミノ酸配列を有
し得る。このような対立遺伝子の変動は、ポリヌクレオチドレベルで等しく反映
され得る。

【０１３５】ポリペプチド抗原の対立遺伝子改変体の使用の支持は、例えば、Ｃｈｌａｍｙ
ｄｉａｌＭＯＭＰ抗原の研究により生じる。ＭＯＭＰのアミノ酸配列は、株ご
とに変動するが、株を越える（ｃｒｏｓｓ−ｓｔｒａｉｎ）抗体結合および感染
性の中和がなお生じ、これは、ＭＯＭＰが、免疫原として使用される場合、アミ
ノ酸変動に耐性であることを示す。

【０１３６】対立遺伝子改変体をコードするポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ分子）は、
従来の方法によって抽出された細菌のゲノムＤＮＡのポリメラーゼ連鎖反応（Ｐ
ＣＲ）増幅によって、容易に回収され得る。これは、コードドメインの５’末端
および３’末端の上流および下流に適合する、合成オリゴヌクレオチドプライマ
ーの使用を含む。適切なプライマーは、配列番号１および２に提供されるヌクレ
オチド配列情報に従って設計され得る。代表的には、プライマーは、１０〜４０
ヌクレオチド、好ましくは１５〜２５ヌクレオチドからなり得る。効率的なハイ
ブリダイゼーションを保証するのに十分な割合で、ＣおよびＧヌクレオチドを含
有する（例えば、総ヌクレオチド量の少なくとも４０％、好ましくは５０％のＣ
およびＧヌクレオチド量）プライマーを選択することもまた、有利であり得る。

【０１３７】天然に存在しない有用なホモログは、アミノ酸配列の変化および／または欠失
に耐性である可能性のある抗原の領域を同定するための公知の方法を使用して、
設計され得る。例えば、異なる種由来の抗原の配列を比較して、保存配列を同定
し得る。

【０１３８】本発明のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド誘導体としては
、例えば、フラグメント、全長ポリペプチドに由来する大きな内部欠失を有する
ポリペプチド、および融合タンパク質が挙げられる。

【０１３９】本発明のポリペプチドフラグメントは、このフラグメントがその親ポリペプチ
ドの実質的な抗原性（特異的抗原性）を保持する程度まで、配列番号１に示され
る配列のいずれかに相同な配列を有するポリペプチドから誘導され得る。ポリペ
プチド誘導体はまた、特異的抗原性を保持しながら、親ポリペプチドの実質的な
部分を除去する大きな内部欠失によって構築され得る。一般に、ポリペプチド誘
導体は、抗原性を維持するために、少なくとも約１２アミノ酸長であるべきであ
る。有利には、これは、少なくとも２０アミノ酸長、好ましくは少なくとも５０
アミノ酸長、より好ましくは少なくとも７５アミノ酸長、そして最も好ましくは
少なくとも１００アミノ酸長であり得る。有用なポリペプチド誘導体（例えば、
ポリペプチドフラグメント）は、表面に露出される抗原性領域としての可能性を
有するタンパク質抗原における部位を同定するために、アミノ酸配列のコンピュ
ーター支援解析を使用して設計され得る。例えば、Ｈｕｇｈｅｓら、Ｉｎｆｅｃ
ｔ．Ｉｍｍｕｎ．６０：３４９７（１９９２）を参照のこと。

【０１４０】ポリペプチドフラグメントおよび大きな内部欠失を有するポリペプチドは、さ
もなくば親ポリペプチドにおいてマスクされており、そして、防御的なＴ細胞依
存性免疫応答を誘導するために重要であり得るエピトープを明らかにするために
使用され得る。欠失はまた、株間の高い可変性の免疫優性領域を除去し得る。

【０１４１】タンパク質免疫原のフラグメントおよび改変体を、ワクチンとして使用するこ
とは、免疫学の分野における認められた常套手段である。なぜなら、タンパク質
に対する免疫応答を誘導するために必要とされる全ては、そのタンパク質の小さ
い（例えば、８〜１０アミノ酸）免疫原性領域のみであるからである。これは、
Ｃｈｌａｍｙｄｉａ以外の病原体に対する多くのワクチンについてなされている
。例えば、病原体の表面露出抗原に対応する短い合成ペプチド（例えば、マウス
乳癌ウイルスの、１１アミノ酸を含むペプチド（例えば、Ｄｉｏｎら、Ｖｉｒｏ
ｌｏｇｙ１７９：４７４−４７７（１９９０）を参照のこと）；セムリキ森林
ウイルスの、１６アミノ酸を含むペプチド（例えば、Ｓｎｉｊｄｅｒｓら、Ｊ．
Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７２：５５７−５６５（１９９１）を参照のこと）；およ
びイヌパルボウイルスの２つの重複ペプチド（各々、１５アミノ酸を含む）（例
えば、Ｌａｎｇｅｖｅｌｄら、Ｖａｃｃｉｎｅ１２（１５）：１４７３−１４
８０（１９９４）を参照のこと））は、これらそれぞれの病原体に対する有効な
ワクチン抗原であることが示されている。

【０１４２】ポリペプチドフラグメントおよび大きな内部欠失を有するポリペプチドをコー
ドするポリヌクレオチドは、例えば、ＰＣＲ（インバース（ｉｎｖｅｒｓｅ）Ｐ
ＣＲを含む）によるか、クローン化ＤＮＡ分子の制限酵素処理によるか、または
Ｋｕｎｋｅｌら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：４４
８（１９８５））の方法による、標準的な方法を使用し、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ
から入手可能な生物学的材料を使用して、構築され得る。

【０１４３】ポリペプチド誘導体はまた、例えば、Ｎ末端またはＣ末端で、任意の他のポリ
ペプチド（本明細書中以降、ペプチドテールという）に融合された本発明のポリ
ペプチドまたはポリペプチド誘導体を含む、融合ポリペプチドとして生成され得
る。このような産物は、遺伝子融合物（すなわち、ハイブリッド遺伝子）の翻訳
によって容易に得られ得る。融合ポリペプチドを発現するためのベクターは、市
販されている（例えば、ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓのｐＭａｌ−
ｃ２系またはｐＭａｌ−ｐ２系（ここで、ペプチドテールは、マルトース結合タ
ンパク質である）、Ｐｈａｒｍａｃｉａのグルタチオン−Ｓ−トランスフェラー
ゼ系、またはＮｏｖａｇｅｎから入手可能なＨｉｓ−Ｔａｇ系）。これらおよび
他の発現系は、本発明のポリペプチドおよび誘導体のさらなる精製のための簡便
な手段を提供する。

【０１４４】本発明に含まれる融合ポリペプチドの別の特定の例としては、アジュバント活
性を有するポリペプチド（例えば、コレラ毒素またはＥ．ｃｏｌｉ非耐熱性毒素
のいずれかのサブユニットＢのような）に融合された、本発明のポリペプチドま
たはポリペプチド誘導体が挙げられる。いくつかの可能性が、融合を達成するた
めに使用され得る。第１に、本発明のポリペプチドは、アジュバント活性を有す
るポリペプチドのＮ末端、または好ましくはＣ末端に融合され得る。第２に、本
発明のポリペプチドフラグメントは、アジュバント活性を有するポリペプチドの
アミノ酸配列内に融合され得る。

【０１４５】上記のように、本発明のポリヌクレオチドは、前駆体形態または成熟形態のＣ
ｈｌａｍｙｄｉａポリペプチドをコードする。これらはまた、異種シグナルペプ
チドを含むハイブリッド前駆体をコードし得、これは、本発明のポリペプチドに
成熟し得る。「異種シグナルペプチド」とは、本発明のポリペプチドの天然に存
在する前駆体に見出されないシグナルペプチドを意味する。

【０１４６】相同なコード配列を有する、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１または
２に示されるような配列を有するポリヌクレオチドに、好ましくはストリンジェ
ントな条件下でハイブリダイズする。ハイブリダイゼーション手順は、例えば、
Ａｕｓｕｂｅｌら、ＣＵＲＲＥＮＴＰＲＯＴＯＣＯＬＳＩＮＭＯＬＥＣＵ
ＬＡＲＢＩＯＬＯＧＹ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆ＳｏｎｓＩｎｃ．（１９９
４）；Ｓｉｌｈａｖｙら、ＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＳＷＩＴＨＧＥＮＥＦＵ
ＳＩＯＮＳ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ（１９８４）；Ｄａｖｉｓら、ＡＭＡＮＵＡＬＦＯＲＧＥＮＥ
ＴＩＣＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ：ＡＤＶＡＮＣＥＤＢＡＣＴＥＲＩＡＬＧ
ＥＮＥＴＩＣＳ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒ
ｙＰｒｅｓｓ（１９８０）に記載される。ハイブリダイゼーション条件を最適
化するために考慮され得る重要なパラメーターは、臨界値（それより上では２つ
の相補的ＤＮＡ鎖が互いに離れる、融解温度）の算出を可能にする式に反映され
る。ＣａｓｅｙおよびＤａｖｉｄｓｏｎ，Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄＲｅｓ．４：１
５３９（１９７７）。この式は、以下のとおりである：Ｔｍ＝８１．５＋０．４１×（％Ｇ＋Ｃ）＋１６．６ｌｏｇ（陽イオン濃度）
−０．６３×（％ホルムアミド）−６００／塩基数。適切なストリンジェンシー条件下で、ハイブリダイゼーション温度（Ｔｈ）は、
算出されたＴｍより約２０〜４０℃、２０〜２５℃、または好ましくは、３０〜
４０℃低い。当業者は、最適の温度および塩条件が、従来の手順を使用した予備
実験において、容易に経験的に決定され得ることを理解する。

【０１４７】例えば、ストリンジェント条件は、プレハイブリダイゼーションインキュベー
ションおよびハイブリダイゼーションインキュベーションの両方について、（ｉ
）５０％ホルムアミドを含有する６×ＳＳＣ中、４２℃で、４〜１６時間以内、
または（ｉｉ）６×ＳＳＣ水溶液（１ＭＮａＣｌ、０．１Ｍクエン酸ナトリ
ウム（ｐＨ７．０））中、６５℃で、４〜１６時間以内で、達成され得る。代
表的には、ハイブリダイゼーション実験は、６０℃〜６８℃（例えば、６５℃）
の温度で行われる。このような温度において、ストリンジェントなハイブリダイ
ゼーション条件は、６×ＳＳＣ中、好ましくは、２×ＳＳＣまたは１×ＳＳＣ中
、より好ましくは、０．５×ＳＳＣ、０．３×ＳＳＣまたは０．１×ＳＳＣ中（
ホルムアミドの非存在下で）で達成され得る。１×ＳＳＣは、０．１５ＭＮａ
Ｃｌおよび０．０１５Ｍクエン酸ナトリウムを含有する。

【０１４８】３０〜６００ヌクレオチドを含むポリヌクレオチドについては、上記の式が使
用され、次いで、（６００／ポリヌクレオチドの大きさ（塩基対））を減算する
ことによって補正される。ストリンジェンシー条件は、Ｔｍより５〜１０℃低い
Ｔｈによって定義される。

【０１４９】２０〜３０塩基より短いオリゴヌクレオチドに関するハイブリダイゼーション
条件は、上記の規則に正確には従わない。このような場合、Ｔｍを算出するため
の式は、以下のとおりである：Ｔｍ＝４×（Ｇ＋Ｃ）＋２（Ａ＋Ｔ）。例えば、５０％のＧ＋Ｃの１８ヌクレオチドフラグメントは、約５４℃のＴｍを
有する。

【０１５０】本発明のポリヌクレオチド分子（ＲＮＡ、ＤＮＡ、あるいはこれらの改変体ま
たは組み合わせを含む）は、種々の適用を有し得る。例えば、ＤＮＡ分子は、（
ｉ）組換え宿主系においてコードされるポリペプチドを生成するためのプロセス
において、（ｉｉ）Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防および／または処置するため
の方法および組成物においてさらに使用される、ポックスウイルスのようなワク
チンベクターの構築において、（ｉｉｉ）裸の形態のワクチン剤（およびＲＮＡ
分子）として、または送達ビヒクルで処方されたワクチン剤（およびＲＮＡ分子
）として、ならびに（ｉｖ）本発明のポリヌクレオチドを過剰発現し得るか、ま
たはそのポリヌクレオチドを、非毒性の変異された形態で発現し得る、弱毒化Ｃ
ｈｌａｍｙｄｉａ株の構築において、使用され得る。

【０１５１】本発明の第２の局面に従って、以下が提供される：（ｉ）発現に必要とされる
エレメントの制御下（特に、適切なプロモーターの制御下）に配置された本発明
のＤＮＡ分子を含む、発現カセット；（ｉｉ）本発明の発現カセットを含む発現
ベクター；（ｉｉｉ）本発明の発現カセットおよび／または発現ベクターで形質
転換あるいはトランスフェクトされた、原核生物細胞または真核生物細胞、なら
びに（ｉｖ）本発明のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドまた
はポリペプチド誘導体を産生するためのプロセスであって、本発明の発現カセッ
トおよび／または発現ベクターで形質転換あるいはトランスフェクトされた、原
核生物細胞または真核生物細胞を、本発明のＤＮＡ分子の発現を可能にする条件
下で培養する工程、およびこの細胞培養物からコードされたポリペプチドまたは
ポリペプチド誘導体を回収する工程を包含する、プロセス。

【０１５２】組換え発現系は、原核生物宿主および真核生物宿主から選択され得る。真核生
物宿主としては、酵母細胞（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖ
ｉｓｉａｅまたはＰｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）、哺乳動物細胞（例えば、
ＣＯＳ１細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、またはＪＥＧ３細胞）、節足動物細胞（例え
ば、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（ＳＦ９）細胞）、および植
物細胞が挙げられる。好ましくは、原核生物宿主（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）が使
用される。細菌細胞および真核生物細胞は、多くの異なる供給源（例えば、Ａｍ
ｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；
Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ））より、当業者に利用可能である。

【０１５３】発現系の選択は、発現されるポリペプチドについて所望される特徴に依存する
。例えば、特定の脂質化された形態または任意の他の形態で本発明のポリペプチ
ドを産生することが有用であり得る。

【０１５４】発現カセットの選択は、選択される宿主系ならびに発現されるポリペプチドに
ついて所望される特徴に依存する。代表的には、発現カセットは、選択された宿
主系において機能的であり、そして構成的または誘導的であり得るプロモーター
；リボソーム結合部位；必要な場合、開始コドン（ＡＴＧ）；シグナルペプチド
（例えば、脂質化シグナルペプチド）をコードする領域；本発明のＤＮＡ分子；
停止コドン；および必要に応じて３’末端領域（翻訳ターミネーターおよび／ま
たは転写ターミネーター）を含む。シグナルペプチドコード領域は、本発明のポ
リヌクレオチドに隣接し、そして適切なリーディングフレームに配置される。こ
のシグナルペプチドコード領域は、成熟ポリペプチドをコードするＤＮＡ分子に
対して同種または異種であり得、そして発現のために使用される宿主の分泌装置
に特異的であり得る。本発明のＤＮＡ分子によって構成されるオープンリーディ
ングフレームは、単独で、またはシグナルペプチドとともに、プロモーターの制
御下に置かれて、その結果、宿主系において転写および翻訳が起こる。プロモー
ター、シグナルペプチドコード領域は、当業者に広範に公知でありかつ使用可能
であり、そして例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍのプロ
モーター（および誘導体）（これは、アラビノースによって誘導可能であり（プ
ロモーターａｒａＢ）、そしてグラム陰性細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）におい
て機能的である（米国特許第５，０２８，５３０号において、およびＣａｇｎｏ
ｎら、ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ４：８４３（１９９１））に
おいて記載されるように））；ＲＮＡポリメラーゼをコードするバクテリオファ
ージＴ７の遺伝子のプロモーター（これは、Ｔ７ポリメラーゼを発現する多数の
Ｅ．ｃｏｌｉ株において機能的である（米国特許第４，９５２，４９６号に記載
される））；ＯｓｐＡ脂質化シグナルペプチド；およびＲｌｐＢ脂質化シグナル
ペプチドが挙げられる。Ｔａｋａｓｅら、Ｊ．Ｂａｃｔ．１６９：５６９２（１
９８７）を参照のこと。

【０１５５】発現カセットは、代表的には発現ベクターの一部であり、これは、選択された
発現系においてその複製する能力について選択される。発現ベクター（例えば、
プラスミドまたはウイルスベクター）は、Ｐｏｕｗｅｌｓら（Ｃｌｏｎｉｎｇ
Ｖｅｃｔｏｒｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，１９８５，補遺、
１９８７）において記載されたベクターから選択され得る。これらは、種々の商
業的な供給源から購入され得る。

【０１５６】発現ベクターを用いて宿主細胞を形質転換／トランスフェクトするための方法
は、Ａｕｓｕｂｅｌら、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅ
ｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆ＳｏｎｓＩｎｃ．（１
９９４）において記載されるように選択される宿主系に依存する。

【０１５７】発現に際して、本発明の組換えポリペプチド（またはポリペプチド誘導体）は
、細胞内区画において産生されそしてそこに残存するか、細胞外の培地または細
胞周辺腔中に分泌／排出されるか、あるいは細胞膜に埋め込まれる。次いで、ポ
リペプチドは、細胞抽出物から、または組換え細胞培養物の遠心分離後の上清か
ら、実質的に精製された形態で回収され得る。代表的には、この組換えポリペプ
チドは、抗体に基づくアフィニティー精製、または当業者によって容易に適合さ
れ得る任意の他の方法（例えば、小さなアフィニティー結合ドメインへの遺伝子
の融合による方法）によって精製され得る。抗体に基づくアフィニティー精製法
もまた、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ株から抽出された本発明のポリペプチドを精製する
ために利用し得る。免疫アフィニティーによって本発明のポリペプチドを精製す
るための有用な抗体は、以下のようにして得られ得る。

【０１５８】本発明のポリヌクレオチドはまた、ワクチンの分野において（例えば、ＤＮＡ
ワクチン投与を達成することのために）有用であり得る。２つの主な可能性が存
在し、これらは、ウイルスもしくは細菌宿主を遺伝子送達ビヒクルとして使用す
る（生ワクチンベクター）か、または遊離の形態で遺伝子を投与する（例えば、
プラスミドに挿入して）かのいずれかである。本発明のポリヌクレオチドの治療
的または予防的効力は、以下に記載されるように評価され得る。

【０１５９】従って、本発明の第３の局面において、以下が提供される：（ｉ）発現のため
に必要であるエレメントの制御下に配置される本発明のＤＮＡ分子を含む、ワク
チンベクター（例えば、ポックスウイルス）；（ｉｉ）希釈剤またはキャリアと
ともに、本発明のワクチンベクターを含む組成物；特に、（ｉｉｉ）本発明のワ
クチンベクターの治療的または予防的に有効な量を含む薬学的組成物；（ｉｖ）
哺乳動物（例えば、ヒト；あるいは、この方法は、動物（例えば、ネコまたは鳥
類）のＣｈｌａｍｙｄｉａ感染を処置または予防するための獣医学的な適用にお
いて使用され得る）においてＣｈｌａｍｙｄｉａに対する免疫応答を誘導するた
めの方法であって、この方法は、哺乳動物に、免疫原的に有効な量の本発明のワ
クチンベクターを投与して、免疫応答（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｉａに対する予
防的または治療的免疫応答）を誘発する工程を包含する、方法；および、特に、
（ｖ）Ｃｈｌａｍｙｄｉａ（例えば、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃ．ｐｓｉ
ｔｔａｃｉ、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃ．ｐｅｃｏｒｕｍ）感染を予防およ
び／または処置するための方法であって、この方法は、必要がある個体に、本発
明のワクチンベクターの予防的または治療的な量を投与する工程を包含する、方
法。さらに、本発明の第３の局面は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防および／ま
たは処置するための医薬の調製における本発明のワクチンベクターの使用を包含
する。

【０１６０】本発明のワクチンベクターは、本発明の１つまたはいくつかのポリペプチドま
たは誘導体、ならびに少なくとも１つのさらなるＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原、その
フラグメント、ホモログ、変異体、または誘導体を発現し得る。さらに、それは
、免疫応答を増強する（アジュバント効果）、サイトカイン（例えば、インター
ロイキン−２（ＩＬ−２）またはインターロイキン−１２（ＩＬ−１２））を発
現し得る。従って、ワクチンベクターは、哺乳動物細胞における発現のために必
要とされるエレメントの制御下に配置された、例えば、クラミジア抗原またはサ
イトカインをコードするさらなるＤＮＡ配列を含み得る。

【０１６１】あるいは、本発明の組成物は、いくつかのワクチンベクターを含み得、これら
の各々は、本発明のポリペプチドまたは誘導体を発現し得る。組成物はまた、さ
らなるＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原あるいはそのサブユニット、フラグメント、ホモ
ログ、変異体、または誘導体；あるいはサイトカイン（例えば、ＩＬ−２もしく
はＩＬ−１２）を発現し得るワクチンベクターを含み得る。

【０１６２】哺乳動物細胞における感染を処置または予防するためのワクチン投与方法にお
いて、本発明のワクチンベクターは、ワクチンの分野での使用における任意の従
来的な経路によって、特に粘膜（例えば、眼、鼻内、口、胃、肺、腸、直腸、膣
、または尿路）表面に、または非経口（例えば、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、
または腹腔内）経路を介して、投与され得る。好ましい経路は、ワクチンベクタ
ーの選択に依存する。投与は、単回用量において、または間隔をあけて反復して
達成され得る。適切な投薬量は、当業者によって理解される種々のパラメーター
（例えば、ワクチンベクターそれ自体、投与の経路、またはワクチン投与される
哺乳動物の状態（体重、齢など））に依存する。

【０１６３】当該分野において利用可能な生ワクチンベクターとしては、ウイルスベクター
（例えば、アデノウイルスおよびポックスウイルス）、ならびに細菌ベクター（
例えば、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅ
ｒａｅ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、カルメット−ゲラン桿菌（ＢＣＧ）、お
よびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）が挙げられる。

【０１６４】アデノウイルスベクターの例、ならびに本発明のＤＮＡ分子を発現し得るアデ
ノウイルスベクターを構築するための方法は、米国特許第４，９２０，２０９号
に記載される。使用され得るポックスウイルスベクターには、例えば、ワクシニ
アウイルスおよびカナリア痘ウイルスが含まれ、これらはそれぞれ、米国特許第
４，７２２，８４８号および米国特許第５，３６４，７７３号に記載される（例
えば、ワクシニアウイルスベクターの記載については、Ｔａｒｔａｇｌｉａら、
Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（１９９２）１８８：２１７；およびカナリア痘ウイルスの参
考文献については、Ｔａｙｌｏｒら、Ｖａｃｃｉｎｅ（１９９５）１３：５３９
もまた参照のこと）。本発明のポリヌクレオチドを発現し得るポックスウイルス
ベクターは、Ｋｉｅｎｙら、Ｎａｔｕｒｅ３１２：１６３（１９８４）に記載
されるように、相同組換えによって得られ得、その結果、本発明のポリヌクレオ
チドは、哺乳動物細胞における発現に適切な条件下でウイルスゲノムに挿入され
る。一般的に、ワクチンウイルスベクターの用量は、治療的または予防的使用に
ついては、１キログラム当たり、約１×１０⁴〜約１×１０¹¹、有利には、約１
×１０⁷〜約１×１０¹⁰、好ましくは約１×１０⁷〜約１×１０⁹プラーク形成ユ
ニットであり得る。好ましくは、ウイルスベクターは、非経口的に投与される；
例えば、４週間間隔をあけて、３回の投与である。当業者は、本発明のウイルス
ベクターを含む組成物に、化学アジュバントを添加することを避けることが好ま
しく、それによってウイルスベクターそれ自体への免疫応答を最小化することを
認識する。

【０１６５】生経口ワクチンとして有用な非毒素産生性のＶｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｅ
変異株は、Ｍｅｋａｌａｎｏｓら、Ｎａｔｕｒｅ３０６：５５１（１９８３）
および米国特許第４，８８２，２７８号（２つのｃｔｘＡ対立遺伝子の各々のコ
ード配列の実質的な量が除去され、その結果、機能的なコレラ毒素が産生されな
い株）；ＷＯ９２／１１３５４（ｉｒｇＡ遺伝子座が変異により不活性化され
ている株；この変異はｃｔｘＡ変異と単一の株中で組み合わされ得る）；および
ＷＯ９４／１５３３（機能的なｃｔｘＡおよびａｔｔＲＳ１ＤＮＡ配列を欠
く欠失変異体）において記載される。これらの株は、ＷＯ９４／１９４８２に
おいて記載されるように、遺伝子操作されて異種抗原を発現し得る。本発明のＤ
ＮＡ分子によってコードされるポリペプチドまたはポリペプチド誘導体を発現し
得るＶｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｅ株の有効なワクチン用量は、選択された投
与の経路について適切な容量で、例えば、約１×１０⁵〜約１×１０⁹、好ましく
は約１×１０⁶〜約１×１０⁸の生存細菌を含み得る。好ましい投与の経路には、
すべての粘膜経路が含まれ；最も好ましくは、これらのベクターは、鼻腔内また
は経口的に投与される。

【０１６６】異種抗原の組換え発現のために遺伝子操作されたか、または遺伝子操作されて
いない弱毒化されたＳａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ株、および
経口ワクチンとしてのそれらの使用は、Ｎａｋａｙａｍａら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈ
ｎｏｌｏｇｙ６：６９３（１９９８）およびＷＯ９２／１１３６１に記載さ
れる。好ましい投与の経路には、すべての粘膜経路が含まれ；最も好ましくは、
これらのベクターは、鼻腔内または経口的に投与される。

【０１６７】ワクチンベクターとして有用な他の細菌株は、Ｈｉｇｈら、ＥＭＢＯ１１：
１９９１（１９９２）およびＳｉｚｅｍｏｒｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２７０：２
９９（１９９５）（Ｓｈｉｇｅｌｌａｆｌｅｘｎｅｒｉ）；Ｍｅｄａｇｌｉｎ
ｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９２：６８６８（１９
９５）（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｇｏｒｄｏｎｉｉ）；ならびにＦｌｙｎ
ｎ、Ｊ．Ｌ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４０（補遺Ｉ）：３１（１９９４）
、ＷＯ８８／６６２６、ＷＯ９０／０５９４、ＷＯ９１／１３１５７、Ｗ
Ｏ９２／１７９６、およびＷＯ９２／２１３７６（ＢａｃｉｌｌｅＣａｌ
ｍｅｔｔｅＧｕｅｒｉｎ）に記載される。

【０１６８】細菌ベクターにおいて、本発明のポリヌクレオチドは、細菌ゲノムに挿入され
得るか、または、プラスミドに保有されて、自由な状態で残存し得る。

【０１６９】アジュバントはまた、ワクチン細菌ベクターを含む組成物に添加され得る。多
数のアジュバントが当業者に公知である。好ましいアジュバントは、以下に提供
されるリストから選択され得る。

【０１７０】本発明の第４の局面において、以下がまた提供される：（ｉ）希釈剤またはキ
ャリアとともに、本発明のポリヌクレオチドを含む物質の組成物；（ｉｉ）本発
明のポリヌクレオチドの治療的または予防的有効量を含む薬学的組成物；（ｉｉ
ｉ）哺乳動物においてＣｈｌａｍｙｄｉａに対する免疫応答を誘導するための方
法であって、この方法は、哺乳動物に、免疫原的有効量の本発明のポリヌクレオ
チドを投与して、免疫応答（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｉａに対する保護的免疫応
答）を誘発する工程による、方法；および、特に、（ｉｖ）Ｃｈｌａｍｙｄｉａ
（例えば、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃ．ｐｎｅｕ
ｍｏｎｉａｅ、またはＣ．ｐｅｃｏｒｕｍ）感染を予防および／または処置する
ための方法であって、この方法は、必要がある個体に本発明のポリヌクレオチド
の予防的または治療的量を投与する工程による、方法。さらに、本発明の第４の
局面は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防および／または処置するための医薬の調
製における本発明のポリヌクレオチドの使用を包含する。本発明の第４の局面は
、好ましくは、哺乳動物細胞における発現のための条件下におかれたＤＮＡ分子
（例えば、哺乳動物細胞中で複製できず、かつ哺乳動物ゲノム中に実質的に組み
込まれ得ないプラスミド中で）の使用を含む。

【０１７１】本発明のポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）はまた、それ自体ワクチン
目的（例えば、治療目的または予防目的）のために哺乳動物に投与され得る。本
発明のＤＮＡ分子が使用される場合、それは哺乳動物細胞中で複製され得ず、か
つ哺乳動物ゲノムに組み込まれ得ないプラスミドの形態においてであり得る。代
表的には、ＤＮＡ分子は、哺乳動物細胞における発現に適切なプロモーターの制
御下におかれる。そのプロモーターは、遍在的にかまたは組織特異的に機能し得
る。非組織特異的なプロモーターの例には、初期サイトメガロウイルス（ＣＭＶ
）プロモーター（米国特許第４，１６８，０６２号に記載される）、およびラウ
ス肉腫ウイルスプロモーター（Ｎｏｒｔｏｎ＆Ｃｏｆｆｉｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅ
ｌｌＢｉｏｌ．５：２８１（１９８５）に記載される）が含まれる。デスミン
プロモーター（Ｌｉら、Ｇｅｎｅ７８：２４３（１９８９）、Ｌｉ＆Ｐａｕｌ
ｉｎ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：６５６２（１９９１）、およびＬｉ＆
Ｐａｕｌｉｎ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１０４０３（１９９３））は
、組織特異的であり、そして筋肉細胞における発現を駆動する。より一般的には
、有用なベクターは、とりわけ、ＷＯ９４／２１７９７およびＨａｒｔｉｋｋ
ａら、ＨｕｍａｎＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ７：１２０５（１９９６）に記
載される。

【０１７２】ＤＮＡ／ＲＮＡワクチン接種のために、本発明のポリヌクレオチドは、前駆体
形態または成熟形態をコードし得る。それが前駆体形態をコードする場合、前駆
体形態は同種または異種であり得る。後者の場合において、組織型プラスミノー
ゲン因子（ｔＰＡ）リーダー配列のような真核生物リーダー配列が使用され得る
。

【０１７３】本発明の組成物は、本発明の１つまたはいくつかのポリヌクレオチドを含み得
る。それはまた、別のＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原（例えば、ウレアーゼサブユニッ
トＡ、Ｂ、またはその両方）；あるいはそのフラグメント、誘導体、変異体、ま
たはアナログをコードする少なくとも１つのさらなるポリヌクレオチドを含み得
る。サイトカイン（例えば、インターロイキン−２（ＩＬ−２）またはインター
ロイキン−１２（ＩＬ−１２））をコードするポリヌクレオチドもまた、この組
成物に添加され得、その結果、免疫応答が増強される。これらのさらなるポリヌ
クレオチドは、発現のために適切な制御下におかれる。有利には、同じ組成物中
に含まれるべき本発明のＤＮＡ分子および／またはさらなるＤＮＡ分子は、同じ
プラスミド中に保有され得る。

【０１７４】ポリヌクレオチドを調製および精製するための分子生物学の標準的な技術は、
本発明のポリヌクレオチド治療剤の調製において使用され得る。ワクチンとして
の使用のために、本発明のポリヌクレオチドは、種々の方法に従って処方され得
る。

【０１７５】第１に、ポリヌクレオチドは、任意の送達ビヒクル（例えば、アニオン性リポ
ソーム、カチオン性脂質、微粒子（例えば、金微粒子）、沈殿剤（例えば、リン
酸カルシウム）、または任意の他のトランスフェクション促進剤）なしの裸の形
態で、使用され得る。この場合において、このポリヌクレオチドは、単に生理学
的に受容可能な溶液（例えば、滅菌生理食塩水または滅菌緩衝化生理食塩水）中
に、キャリアとともにまたはキャリアなしで、希釈され得る。存在する場合、そ
のキャリアは、好ましくは、等張性、低張性、または弱い高張性であり、そして
、ショ糖溶液（例えば、２０％ショ糖を含む溶液）によって提供されるような、
相対的に低いイオン強度を有する。

【０１７６】あるいは、ポリヌクレオチドは、細胞取り込みを補助する薬剤と付随され得る
。それは、とりわけ、（ｉ）ブピバカイン（例えば、ＷＯ９４／１６７３７を
参照のこと）のような細胞の透過性を改変する化学薬剤で補充されるか、（ｉｉ
）リポソーム中にカプセル化されるか、あるいは（ｉｉｉ）カチオン性脂質、ま
たは、シリカ微粒子、金微粒子、もしくはタングステン微粒子と付随され得る。

【０１７７】アニオン性リポソームおよび中性リポソームは当該分野で周知であり（例えば
、リポソームの作製方法についての詳細な記載については、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ
：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ，ＲＰＣＮｅｗＥｄ，ＩＲＬ
ｐｒｅｓｓ（１９９０）を参照のこと）、そして広い範囲の産物（ポリヌクレ
オチドを含む）を送達するために有用である。

【０１７８】カチオン性脂質はまた、当該分野で公知であり、そして遺伝子送達のために一
般に使用される。このような脂質は、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ^TM（ＤＯＴＭＡ（Ｎ
−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルア
ンモニウムクロライド）としても知られる）、ＤＯＴＡＰ（１，２−ビス（オレ
イルオキシ）−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン）、ＤＤＡＢ（ジメチル
ジオクタデシルアンモニウムブロマイド）、ＤＯＧＳ（ジオクタデシルアミドロ
グリシルスペルミン（ｄｉｏｃｔａｄｅｃｙｌａｍｉｄｏｌｏｇｌｙｃｙｌｓｐ
ｅｒｍｉｎｅ））およびコレステロール誘導体（例えば、ＤＣ−Ｃｈｏｌ（３β
−（Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノメタン）−カルバモイル）コレステロー
ル））を含む。これらのカチオン性脂質の記載は、ＥＰ１８７，７０２、ＷＯ
９０／１１０９２、米国特許第５，２８３，１８５号、ＷＯ９１／１５５０
１、ＷＯ９５／２６３５６、および米国特許第５，５２７，９２８号に見出さ
れ得る。遺伝子送達のためのカチオン性脂質は、好ましくは、例えばＷＯ９０
／１１０９２に記載されるように、中性脂質（例えば、ＤＯＰＥ（ジオレイルホ
スファチジルエタノールアミン））を付随して使用される。

【０１７９】他のトランスフェクション促進化合物は、カチオン性リポソームを含む処方物
に添加され得る。それらの多くは、例えば、ＷＯ９３／１８７５９、ＷＯ９
３／１９７６８、ＷＯ９４／２５６０８、およびＷＯ９５／２３９７に記載さ
れる。それらには、とりわけ、核膜を通してのＤＮＡの輸送を容易にするために
有用なスペルミン誘導体（例えば、ＷＯ９３／１８７５９を参照のこと）、お
よび膜透過化合物（例えば、ＧＡＬＡ、グラミシジンＳ、およびカチオン性胆汁
酸塩）（例えば、ＷＯ９３／１９７６８を参照のこと）が含まれる。

【０１８０】金微粒子またはタングステン微粒子もまた、ＷＯ９１／３５９、ＷＯ９３
／１７７０６、およびＴａｎｇら（Ｎａｔｕｒｅ３５６：１５２（１９９２）
）に記載されるように、遺伝子送達のために使用され得る。この場合において、
微粒子でコーティングされたポリヌクレオチドは、針なしの注入デバイス（「遺
伝子銃」）（例えば、米国特許第４，９４５，０５０号、同第５，０１５，５８
０号、およびＷＯ９４／２４２６３に記載されるデバイス）を使用して、皮内
経路または上皮内経路を介して注入され得る。

【０１８１】ワクチンレシピエントにおいて使用されるべきＤＮＡの量は、例えば、ＤＮＡ
構築物において使用されるプロモーターの強さ、発現された遺伝子産物の免疫原
性、投与のために意図される哺乳動物の状態（例えば、哺乳動物の体重、齢、お
よび一般的健康）、投与の様式、ならびに処方の型に依存する。一般的に、約１
μｇ〜約１ｍｇ、好ましくは約１０μｇ〜約８００μｇ、そしてより好ましくは
、約２５μｇ〜約２５０μｇの治療的または予防的有効用量が、ヒト成体に投与
され得る。この投与は、単回用量または間隔をあけて反復して達成され得る。

【０１８２】投与の経路は、ワクチンの分野において使用される、任意の従来的な経路であ
り得る。一般的なガイダンスとして、本発明のポリヌクレオチドは、粘膜表面（
例えば、眼、鼻内、肺、口、腸、直腸、膣、および尿路の表面）；または非経口
経路（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、皮内、上皮内、または筋肉内の経路によ
る）を介して投与され得る。投与経路の選択は、例えば、選択される処方に依存
する。ブピバカインを付随して処方されるポリヌクレオチドは、有利に筋肉中に
投与される。中性リポソームもしくはアニオン性リポソームまたはカチオン性脂
質（例えば、ＤＯＴＭＡまたはＤＣ−Ｃｈｏｌ）が使用される場合、その処方物
は、静脈内経路、鼻内経路（エアロゾル化）、筋肉内経路、皮内経路、および皮
下経路を介して、有利に注入され得る。裸の形態のポリヌクレオチドは、筋肉内
経路、皮内経路、または皮下経路を介して、有利に投与され得る。

【０１８３】絶対的に必要であるのではないが、このような組成物はまた、アジュバントを
含み得る。そうである場合、アジュバント効果を示すために同時投与を必要とし
ない全身性のアジュバント（例えば、ＱＳ２１であり、これは、米国特許第５，
０５７，５４６号に記載される）が、好ましい。

【０１８４】本出願において提供される配列情報は、診断において有用であり得る特定のヌ
クレオチドプローブおよびプライマーの設計を可能にする。従って、本発明の第
５の局面において、配列番号１または２に示される配列に見出される配列か、ま
たはこれらの配列から遺伝コードの縮重によって誘導される配列を有するヌクレ
オチドプローブまたはプライマーが提供される。

【０１８５】本出願において使用される場合、用語「プローブ」とは、上記に定義されるよ
うなストリンジェントな条件下で、配列番号１および２に示される配列と相同な
配列、または相補的な配列もしくはアンチセンス配列を有する核酸分子にハイブ
リダイズする、ＤＮＡ分子（好ましくは一本鎖）またはＲＮＡ分子（またはその
改変物もしくは組合せ）をいう。一般的に、プローブは、配列番号１および２に
示される全長配列よりも有意に短く；例えば、それらは約５〜約１００、好まし
くは約１０〜約８０ヌクレオチドを含み得る。特に、プローブは、配列番号１お
よび２に示される配列の一部に少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８５％
、より好ましくは９５％相同である配列、またはこのような配列に相補的である
配列を有する。プローブは、イノシン、メチル−５−デオキシシチジン、デオキ
シウリジン、ジメチルアミノ−５−デオキシウリジン、またはジアミノ−２，６
−プリンのような改変した塩基を含み得る。糖残基またはリン酸残基もまた、改
変または置換され得る。例えば、デオキシリボース残基は、ポリアミドによって
置換され得（Ｎｉｅｌｓｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２５４：１４９７（１９９１
））、そしてリン酸残基は、エステル基（例えば、ジホスフェートエステル、ア
ルキルエステル、アリールホスホネートエステル、およびホスホロチオエートエ
ステル）によって置換され得る。さらに、リボヌクレオチドの２’−ヒドロキシ
ル基は、例えば、アルキル基を含むことによって改変され得る。

【０１８６】本発明のプローブは、捕捉または検出プローブとして、診断試験において使用
され得る。このような捕捉プローブは、共有結合的手段によって、または受動的
吸着によって、直接的または間接的に、従来どおりに固体支持体上に固定化され
得る。検出プローブは、放射性同位体；酵素（例えば、ペルオキシダーゼ、アル
カリホスファターゼ、および色素形成基質、蛍光形成基質、または発光性基質を
加水分解し得る酵素）；色素形成、蛍光形成または発光性である化合物；ヌクレ
オチド塩基アナログ；ならびにビオチンから選択される検出マーカーによって標
識され得る。

【０１８７】本発明のプローブは、例えば、ドットブロット（Ｍａｎｉａｔｉｓら、Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ（１
９８２）ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒ
ｅｓｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮｅｗＹｏｒｋ）、サザン
ブロット（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．９８：５０３（１９７５
））、ノーザンブロット（標的としてＲＮＡが使用される以外は、サザンブロッ
トと同一である）、またはサンドイッチ技術（Ｄｕｎｎら、Ｃｅｌｌ１２：２
３（１９７７））のような任意の従来のハイブリダイゼーション技術において使
用され得る。後者の技術は、少なくとも部分的に互いに異なるヌクレオチド配列
を有する、特異的な捕捉プローブおよび／または特異的な検出プローブの使用を
含む。

【０１８８】プライマーは、通常、増幅プロセス（例えば、ＰＣＲ）において、伸長プロセ
スにおいて、または逆転写方法において、ＤＮＡの酵素的重合を開始するために
使用される約１０〜約４０ヌクレオチドのプローブである。ＰＣＲを含む診断的
方法において、プライマーは標識され得る。

【０１８９】従って、本発明はまた、（ｉ）生物学的材料中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を
検出および／または同定するための本発明のプローブを含む試薬；（ｉｉ）生物
学的材料中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出および／または同定するための方
法であって、ここで（ａ）サンプルが生物学的材料から回収されるかまたは生物
学的材料に由来し、（ｂ）この材料からＤＮＡまたはＲＮＡが抽出され、そして
変性され；そして（ｃ）本発明のプローブ（例えば、捕捉プローブ、検出プロー
ブ、またはその両方）に、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で
曝露され、その結果、ハイブリダイゼーションが検出される、方法；ならびに（
ｉｉｉ）生物学的材料中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出および／または同定
するための方法であって、ここで、（ａ）サンプルが生物学的材料から回収され
るかまたは生物学的材料に由来し、（ｂ）ＤＮＡがそこから抽出され、（ｃ）本
発明の少なくとも１つ、好ましくは２つのプライマーを用いて、抽出されたＤＮ
Ａがプライムされ、そしてポリメラーゼ連鎖反応によって増幅され、そして（ｄ
）増幅されたＤＮＡフラグメントが産生される、方法、を包含する。

【０１９０】以前に言及したように、新しく同定されたオープンリーディングフレームの発
現に際して産生され得るポリペプチドは、有用なワクチン薬剤である。

【０１９１】従って、本発明の第６の局面は、本発明のポリヌクレオチドによってコードさ
れるアミノ酸配列を有する、実質的に精製されたポリペプチドまたはポリペプチ
ド誘導体を特徴とする。

【０１９２】「実質的に精製されたポリペプチド」は、そのポリペプチドが天然に存在する
環境から分離されたポリペプチド、および／またはそのポリペプチドが合成され
た環境中に存在するポリペプチドの大部分を含まないポリペプチドとして定義さ
れる。例えば、実質的に精製されたポリペプチドは、細胞質ポリペプチドを含ま
ない。当業者は、本発明のポリペプチドが、天然の供給源（すなわち、Ｃｈｌａ
ｍｙｄｉａ株）から精製され得るか、または組換え手段によって産生され得るこ
とを理解する。

【０１９３】本発明のポリヌクレオチドによってコードされる相同なポリペプチドまたはポ
リペプチド誘導体を、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有する参照ポリペプ
チドに対して惹起された抗血清を用いる交差反応の試験によって、特異的抗原性
についてスクリーニングし得る。手短には、単一特異的過免疫抗血清は、それ自
体としてまたは融合ポリペプチドとしての精製された参照ポリペプチド（例えば
、ＭＢＰ、ＧＳＴ、またはＨｉｓ−タグ系の発現産物、もしくは抗原性であるこ
とが予測される合成ペプチド）に対して惹起され得る。特異的抗原性についてス
クリーニングされる相同ポリペプチドまたは誘導体は、それ自体としてか、また
は融合ポリペプチドとして産生され得る。後者の場合であって、抗血清がまた、
融合ポリペプチドに対して惹起される場合、２つの異なる融合系が使用される。
特異的抗原性は、以下に記載するように、ウェスタンブロット（Ｔｏｗｂｉｎら
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７６：４３５０（１９７９
））、ドットブロット、およびＥＬＩＳＡを含む多数の方法に従って決定され得
る。

【０１９４】ウェスタンブロットアッセイにおいて、スクリーニングするべき産物を、精製
された調製物としてか、またはＥ．ｃｏｌｉ全抽出物のいずれかとして、Ｌａｅ
ｍｍｌｉ（Ｎａｔｕｒｅ２２７：６８０（１９７０））によって記載されるよ
うに、ＳＤＳ−Ｐａｇｅ電気泳動に供する。ニトロセルロース膜に転写した後、
この材料をさらに、約１：５〜約１：５０００、好ましくは約１：１００〜約１
：５００の希釈の範囲で希釈された単一特異的過免疫抗血清とともに、インキュ
ベートする。一旦、産物に対応するバンドが上記の範囲における任意の希釈での
反応性を示すと、特異的抗原性が示される。

【０１９５】ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、スクリーニングされるべき産物は、好ましくは
、コーティング抗原として使用される。精製された産物が好ましいが、全細胞抽
出物もまた、使用され得る。手短には、１ｍｌあたり約１０μｇタンパク質での
約１００μｌの調製物を、９６ウェルポリカーボネートＥＬＩＳＡプレートのウ
ェル中に分配する。このプレートを、３７℃で２時間、次に４℃で一晩インキュ
ベートする。このプレートを、０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝化
生理食塩水（ＰＢＳ）（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ緩衝液）で洗浄する。ウェルを１％
のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む２５０μｌのＰＢＳで満たし、非特異的
抗体結合を防ぐ。３７℃での１時間のインキュベーションの後、このプレートを
ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ緩衝液で洗浄する。抗血清を、０．５％のＢＳＡを含有する
ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ緩衝液中で、連続的に希釈する。希釈液の１００μｌを、１
ウェルあたりに添加する。このプレートを、３７℃で９０分間インキュベートし
、洗浄し、そして標準的な手順に従って評価する。例えば、特異的抗体がウサギ
において惹起された場合、ヤギ抗ウサギペルオキシダーゼ結合体を、ウェルに添
加する。インキュベーションを３７℃で９０分間行い、そしてこのプレートを洗
浄する。反応物を適切な基質を用いて発色させ、そしてこの反応を比色法によっ
て測定する（分光光度的に測定した吸光度）。上記の実験条件下では、陽性の反
応を、非免疫コントロール血清よりも大きなＯ．Ｄ．値によって示す。

【０１９６】ドットブロットアッセイにおいて、精製された産物が好ましいが、全細胞抽出
物もまた、使用され得る。手短には、約１００μｇ／ｍｌの産物の溶液を、５０
ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）中で連続的に２倍希釈する。各希釈液
の１００μｌを、９６ウェルのドットブロット装置（Ｂｉｏｒａｄ）中にセット
したニトロセルロース膜０．４５μｍにアプライする。このシステムに真空濾過
を適用することによって緩衝液を取り除く。ウェルを、５０ｍＭＴｒｉｓ−Ｈ
Ｃｌ（ｐＨ７．５）の添加によって洗浄し、そしてその膜を風乾する。その膜を
ブロッキング緩衝液（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）０．１５Ｍ
ＮａＣｌ、１０ｇ／Ｌスキムミルク）中に浸し、約１：５０〜約１：５００
０、好ましくは約１：５００の希釈の抗血清とともに、インキュベートする。反
応を標準的な手順に従って明らかにする。例えば、ウサギ抗体が使用される場合
、ヤギ抗ウサギペルオキシダーゼ結合体を、ウェルに添加する。インキュベーシ
ョンを３７℃で９０分間行い、そしてこのブロットを洗浄する。反応を適切な基
質を用いて発色させ、そして終了する。この反応を、着色したスポットの出現に
よって可視的に定量する（例えば、比色法）。上記の実験条件下で、一旦、着色
したスポットが、少なくとも約１：５、好ましくは少なくとも約１：５００の希
釈で会合すると、ポジティブ反応が示される。

【０１９７】本発明のポリペプチドまたは誘導体の治療的または予防的効力は、下記のよう
に評価され得る。

【０１９８】本発明の第７の局面に従って、以下が提供される（ｉ）希釈剤またはキャリア
とともに本発明のポリペプチドを含有する物質の組成物；特に（ｉｉ）本発明の
ポリペプチドの治療的または予防的有効量を含む薬学的組成物；（ｉｉｉ）免疫
応答を誘発するための本発明のポリペプチドの免疫学的有効量を哺乳動物に投与
することによって、哺乳動物においてＣｈｌａｍｙｄｉａに対する免疫応答（例
えば、Ｃｈｌａｍｙｄｉａに対する防御的免疫応答）を誘導する方法；および、
特に（ｉｖ）必要とする個体に対して、本発明のポリペプチドの予防的有効量ま
たは治療的有効量を投与することによって、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ（例えば、Ｃ．
ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、
またはＣ．ｐｅｃｏｒｕｍ）感染を、予防および／または処置する方法。さらに
、本発明の第７の局面は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防および／または処置す
るための医薬の調製における、本発明のポリペプチドの使用を包含する。

【０１９９】本発明の免疫原性組成物は、ワクチンの分野における使用において、任意の従
来の経路（特に粘膜（例えば、眼、鼻内、肺、経口、胃、腸、直腸、膣、または
尿路）表面に対してか、または非経口（例えば、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、
または腹膜内）経路を介して）によって投与され得る。投与経路の選択は、多数
のパラメーター（例えば、ポリペプチドと会合するアジュバント）に依存する。
例えば、粘膜アジュバントが使用される場合、鼻内または経口経路が好ましく、
脂質処方物またはアルミニウム化合物を使用する場合、非経口経路が好ましい。
後者の場合、皮下経路または筋肉内経路が、最も好ましい。この選択はまた、ワ
クチン剤の性質にも依存し得る。例えば、ＣＴＢまたはＬＴＢと融合した本発明
のポリペプチドは、粘膜表面に対して、最も良好に投与される。

【０２００】本発明の組成物は、１つまたは数個の本発明のポリペプチドまたは誘導体を含
み得る。本発明の組成物はまた、少なくとも１つのさらなるＣｈｌａｍｙｄｉａ
抗原、またはそのサブユニット、フラグメント、ホモログ、変異体、もしくは誘
導体を含み得る。

【０２０１】本発明の組成物の使用のために、ポリペプチドまたはその誘導体を、リポソー
ム（好ましくは、中性リポソームまたはアニオン性リポソーム）、ミクロスフェ
ア、ＩＳＣＯＭＳ、またはウイルス様粒子（ＶＬＰ）中に、またはこれらととも
に処方して、送達を促進し得、そして／または免疫応答を増強し得る。これらの
化合物は、当業者にとって、容易に利用可能である；例えば、Ｌｉｐｏｓｏｍｅ
ｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ（上記）を参照のこと。

【０２０２】リポソームなど以外のアジュバントもまた、使用され得、そして当該分野で公
知である。適切な選択は、当業者によって従来的になされ得る（例えば、以下に
提供されるリストから）。

【０２０３】投与は、当業者によって決定され得るように、単回用量において達成され得る
か、または必要に応じて間隔をおいて繰り返され得る。例えば、初回刺激用量の
後、週または月の間隔での３回の追加免疫用量を続け得る。適切な用量は、当業者によって決定され得るように、レシピエント（例えば、成人または幼児）
、特定のワクチン抗原、投与の経路および頻度、アジュバントの存在／不存在ま
たはタイプ、ならびに所望の効果（例えば、防御および／または処置）を含む種
々のパラメーターに依存する。一般に、本発明のワクチン抗原は、約１０μｇ〜
約５００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ〜約２００ｍｇの量において、粘膜経路によ
って投与され得る。投与の非経口経路のために、用量は、通常約１ｍｇ（好まし
くは、約１００μｇ）を越えるべきではない。

【０２０４】ワクチン剤として使用する場合、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチ
ドは、多段階の免疫プロセスの一部として連続的に使用され得る。例えば、哺乳
動物は、ポックスウイルスのような本発明のワクチンベクターを用いて（例えば
、非経口経路を介して）最初に初回刺激され得、次に、ワクチンベクターによっ
てコードされるポリペプチドを用いて２回追加免疫（例えば、粘膜経路を介して
）され得る。別の例において、本発明のポリペプチドまたは誘導体と会合するリ
ポソームはまた、初回刺激のために使用され得、追加免疫が、粘膜アジュバント
（例えば、ＬＴ）と組み合わせた本発明の可溶性のポリペプチドまたは誘導体を
使用して粘膜的に行われる。

【０２０５】本発明のポリペプチド誘導体はまた、抗Ｃｈｌａｍｙｄｉａ抗体の存在（例え
ば、血液サンプル中）の検出のための診断試薬として有用である。そのようなポ
リペプチドは、約５〜約８０、好ましくは約１０〜約５０アミノ酸長であり、そ
して診断方法に依存して標識化され得るか、または非標識化され得る。そのよう
な試薬を含む診断方法を、以下に記載する。

【０２０６】本発明のＤＮＡ分子の発現の際に、ポリペプチドまたはポリペプチド誘導体を
産生し、そして公知の実験室技術を使用して精製し得る。例えば、ポリペプチド
またはポリペプチド誘導体は、精製を促進する融合したテールを含む融合タンパ
ク質として産生され得る。融合産物を使用して、ポリペプチドまたはポリペプチ
ド誘導体に対する抗体（単一特異的抗体）を惹起するために、小哺乳動物（例え
ば、マウスまたはウサギ）を免疫し得る。従って、本発明の第８の局面は、本発
明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体に結合する単一特異的抗体を提供す
る。

【０２０７】「単一特異的抗体」によって、独特の天然に存在するＣｈｌａｍｙｄｉａポリ
ペプチドと反応し得る抗体が意味される。本発明の抗体は、ポリクローナル抗体
またはモノクローナル抗体であり得る。単一特異的抗体は、組換え（例えば、キ
メラ（例えば、ヒト定常領域と会合したマウス起源の可変領域から構成される）
、ヒト化（動物（例えば、マウス）起源の超可変領域をともなうヒト免疫グロブ
リン定常骨格）、および／または単鎖）であり得る。ポリクローナル抗体および
単一特異的抗体の両方もまた、免疫グロブリンフラグメント（例えば、Ｆ（ａｂ
）’２またはＦａｂフラグメント）の形態であり得る。本発明の抗体は、任意の
イソ型（例えば、ＩｇＧまたはＩｇＡ）であり得、そしてポリクローナル抗体は
、単一のイソ型であり得るか、またはイソ型の混合物を含み得る。

【０２０８】本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体に対して惹起される本発明の
抗体を産生し得、そして標準的な免疫学的アッセイ（例えば、ウエスタンブロッ
ト分析、ドットブロット分析、またはＥＬＩＳＡ（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎら、
ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（１９９４
）ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＹｏｒｋ，ＮＹを参照
のこと））を使用して、同定され得る。この抗体を、診断方法において使用して
、サンプル（例えば、生物学的サンプル）中のＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原の存在を
検出し得る。この抗体を、本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体の精
製のためのアフィニティークロマトグラフィー方法においてもまた、使用し得る
。以下にさらに考察されるように、そのような抗体を、予防的および治療的受動
免疫方法において、使用し得る。

【０２０９】従って、本発明の第９の局面は、以下を提供する、（ｉ）本発明の抗体、ポリ
ペプチド、またはポリペプチド誘導体を含む、生物学的サンプル中のＣｈｌａｍ
ｙｄｉａの存在を検出するための試薬；および（ｉｉ）生物学的サンプルを本発
明の抗体、ポリペプチド、またはポリペプチド誘導体と接触させ、その結果、免
疫複合体を形成させる工程、およびそのような複合体を検出して、サンプル中ま
たはそのサンプルが由来する生物中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を示す工程によ
って、生物学的サンプル中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出する診断方法。

【０２１０】当業者は、抗体、ポリペプチド、またはポリペプチド誘導体のいずれが使用さ
れても、サンプルの成分と、その抗体、ポリペプチド、またはポリペプチド誘導
体との間で免疫複合体が形成され、そして任意の未結合物質が、複合体の検出前
に除去され得ることを理解する。容易に理解され得るように、ポリペプチド試薬
は、サンプル（例えば、血液サンプル）中の抗Ｃｈｌａｍｙｄｉａ抗体の存在を
検出するために有用であるが、本発明の抗体は、サンプル（例えば、胃抽出物、
または生検）をＣｈｌａｍｙｄｉａポリペプチドの存在についてスクリーニング
するために使用され得る。

【０２１１】診断適用における使用のために、試薬（すなわち、本発明の抗体、ポリペプチ
ド、またはポリペプチド誘導体）は、遊離の状態であり得、固体支持体（例えば
、チューブ、ビーズ、またはこの分野で使用される任意の他の従来の支持体）に
固定化され得る。固定化は、直接的手段または間接的手段を使用して達成され得
る。直接的手段としては、支持体と試薬との間の、受動的吸着（非共有結合）ま
たは共有結合が挙げられる。「間接的手段」によって、試薬と相互作用する抗試
薬化合物を、最初に固体支持体に付着することが、意味される。例えば、ポリペ
プチド試薬を使用する場合、もしその試薬に結合する抗体が生物学的サンプル中
の抗体の認識に関与しないエピトープに結合するならば、その試薬に結合する抗
体が、抗試薬として供され得る。間接的手段はまた、リガンド−レセプター系（
例えば、ビタミンのような分子を、ポリペプチド試薬上に移植し得、そして対応
するレセプターを、固相上に固定化し得る）を利用し得る。この系は、ビオチン
−ストレプトアビジン系によって例示される。あるいは、間接的手段を、例えば
、化学的にか、または遺伝子操作によってペプチドのテールを試薬に付加し、そ
して移植した産物または融合した産物を、ペプチドテールの受動的吸着または共
有結合によって固定化することによって、使用し得る。

【０２１２】本発明の第１０の局面に従って、生物学的サンプルから本発明のポリペプチド
またはポリペプチド誘導体を精製するプロセスが提供される。このプロセスは、
生物学的サンプルを用いる、抗体に基づくアフィニティークロマトグラフィーの
実行を包含し、ここでこの抗体は、本発明の単一特異的抗体である。

【０２１３】本発明の精製プロセスにおける使用のために、抗体は、ポリクローナルまたは
単一特異的であり得、そして好ましくは、ＩｇＧイソ型である。精製されたＩｇ
Ｇは、標準的な方法を用いて抗血清から調製され得る（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ
ら、前出を参照のこと）。従来のクロマトグラフィー支持体、ならびに抗体移植
の標準的な方法が、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙ
ｍａｎｕａｌ，Ｄ．Ｌａｎｅ，Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ編（１９８８）に開示される
。

【０２１４】手短には、生物学的サンプル（例えば、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抽出物、好
ましくは、緩衝溶液中）を、クロマトグラフィー材料（好ましくは、生物学的サ
ンプルを希釈するために使用される緩衝液で平衡化される）にアプライし、その
結果、本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体（すなわち、抗原）を、
その材料上に吸着させる。クロマトグラフィー材料（例えば、本発明の抗体に結
合したゲルまたは樹脂）は、バッチ形態であり得るか、またはカラム中にあり得
る。未結合の成分を洗い流し、次に抗原を適切な溶出緩衝液（例えば、グリシン
緩衝液またはカオトロピック剤（例えば、グアニジンＨＣｌ）または高塩濃度（
例えば、３ＭＭｇＣｌ₂）を含む緩衝液）で溶出する。溶出された画分を取り
除き、そして抗原の存在を検出する（例えば、２８０ｎｍでの吸収を測定するこ
とによる）。

【０２１５】本発明の抗体を、以下に記載のように、治療的効力についてスクリーニングし
得る。本発明の第１１の局面に従って、以下が提供される（ｉ）希釈剤またはキ
ャリアとともに本発明の単一特異的抗体を含有する組成物；（ｉｉ）本発明の単
一特異的抗体の治療的または予防的有効量を含む薬学的組成物；および（ｉｉｉ
）必要とする個体に対して、本発明の単一特異的抗体の予防的有効量または治療
的有効量を投与することによって、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ（例えば、Ｃ．ｔｒａｃ
ｈｏｍａｔｉｓ、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、またはＣ
．ｐｅｃｏｒｕｍ）感染を、処置または予防する方法。さらに、本発明の第１１
の局面は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を処置または予防するための医薬の調製にお
ける、本発明の単一特異的抗体の使用を包含する。

【０２１６】この目的のために、単一特異的抗体は、ポリクローナルであっても、モノクロ
ーナルであり得、好ましくは、ＩｇＡイソ型（主に）であり得る。受動免疫にお
いて、抗体を、哺乳動物の粘膜表面（例えば、胃粘膜（例えば、経口的または胃
内に））に、有利には、炭酸水素緩衝液の存在下で投与し得る。あるいは、全身
投与（炭酸水素緩衝液を必要としない）を実行し得る。本発明の単一特異的抗体
を、単一の活性成分としてか、または異なるＣｈｌａｍｙｄｉａポリペプチドに
対して特異的な少なくとも１つの単一特異的抗体との混合物として投与され得る
。使用される抗体の量および特定の療法は、当業者によって容易に決定され得る
。例えば、１週間にわたる約１００〜１，０００ｍｇの抗体の毎日の投与、また
は１〜３日間にわたる約１００〜１，０００ｍｇの抗体の１日あたり３用量の投
与は、ほとんどの目的にとって効果的な療法であり得る。

【０２１７】治療効力または予防効力は、当該分野の標準的方法を使用して、例えば、粘膜
免疫応答の誘導または予防免疫および／もしくは治療免疫の誘導を、例えば、Ｃ
．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅマウスモデルを使用して測定することによって、評価さ
れ得る。当業者は、このモデルのＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ株が、別のＣｈｌａ
ｍｙｄｉａ株で置換され得ることを理解する。例えば、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅ由来のＤＮＡ分子およびポリペプチドの効力は、好ましくは、Ｃ．ｐｎｅｕｍ
ｏｎｉａｅ株を使用するマウスモデルにおいて評価される。防御は、Ｃｈｌａｍ
ｙｄｉａ感染の程度をコントロール群の程度と比較することにより決定され得る
。防御は、このコントロール群と比較して感染が減少した場合に、示される。こ
のような評価は、本発明のポリヌクレオチド、ワクチンベクター、ポリペプチド
およびその誘導体、ならびに抗体について、なされ得る。

【０２１８】上記のいずれかのワクチン組成物において有用なアジュバントは、以下の通り
である。

【０２１９】非経口投与のためのアジュバントとしては、アルミニウム化合物（例えば、水
酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、およびアルミニウムヒドロキシホスフ
ェート）が挙げられる。この抗原は、標準的プロトコールに従って、このアルミ
ニウム化合物とともに沈殿され得るか、またはこのアルミニウム化合物上に吸着
され得る。他のアジュバント（例えば、ＲＩＢＩ（ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ、Ｈａ
ｍｉｌｔｏｎ、ＭＴ）が、非経口投与において使用され得る。

【０２２０】粘膜投与のためのアジュバントとしては、細菌毒素（例えば、コレラ毒素（Ｃ
Ｔ）、Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性（ｈｅａｔ−ｌａｂｉｌｅ）毒素（ＬＴ）、Ｃｌ
ｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ毒素Ａ、およびｐｅｒｔｕｓｓｉｓ毒
素（ＰＴ）、あるいはこれらの組合せ、サブユニット、トキソイドまたは変異体
）が挙げられる。例えば、天然のコレラ毒素Ｂサブユニット（ＣＴＢ）の精製さ
れた調製物が有用であり得る。アジュバント活性を保持する限り、これら毒素の
いずれかのフラグメント、ホモログ、誘導体、および融合物もまた適切である。
好ましくは、減少した毒性を有する変異体が使用される。適切な変異体は、例え
ば、ＷＯ９５／１７２１１（Ａｒｇ−７−ＬｙｓＣＴ変異体）、ＷＯ９６
／６６２７（Ａｒｇ−１９２−ＧｌｙＬＴ変異体）、およびＷＯ９５／３４
３２３（Ａｒｇ−９−ＬｙｓかつＧｌｕ−１２９−ＧｌｙＰＴ変異体）におい
て記載される。本発明の方法および組成物において使用され得るさらなるＬＴ変
異体としては、例えば、Ｓｅｒ−６３−Ｌｙｓ変異体、Ａｌａ−６９−Ｇｌｙ変
異体、Ｇｌｕ−１１０−Ａｓｐ変異体、およびＧｌｕ−１１２−Ａｓｐ変異体が
挙げられる。他のアジュバント（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ
ｍｉｎｎｅｓｏｔａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、また
はＳｈｉｇｅｌｌａｆｌｅｘｎｅｒｉの細菌モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬＡ
）；サポニン、またはポリラクチドグリコリド（ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）（ＰＬＧ
Ａ）ミクロスフェア）もまた、粘膜投与において使用され得る。

【０２２１】粘膜投与および非経口投与の両方に有用なアジュバントとしては、ポリホスフ
ァゼン（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｅｎｅ）（ＷＯ９５／２４１５）、ＤＣ−
ｃｈｏｌ（３ｂ−（Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノメタン）−カルバモイル
）コレステロール）（米国特許第５，２８３，１８５号およびＷＯ９６／１４
８３１）ならびにＱＳ−２１（ＷＯ８８／９３３６）が挙げられる。

【０２２２】本発明の任意の薬学的組成物（本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、ポ
リペプチド誘導体、または抗体を含む）も、従来の様式で製造され得る。詳細に
は、本発明の薬学的組成物は、薬学的に受容可能な希釈剤またはキャリア（例え
ば、水、またはリン酸緩衝化生理食塩水のような生理食塩水溶液）とともに処方
され得る。一般的には、希釈剤またはキャリアは、投与の様式および経路、なら
びに標準的薬学的実施に基いて選択され得る。適切な薬学的キャリアまたは希釈
剤、ならびに薬学的処方物におけるそれらの使用のための薬学的な必需品は、Ｒ
ｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ、この
分野における標準的参考文書、およびＵＳＰ／ＮＦに記載されている。

【０２２３】本発明はまた、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染が、本発明のＣｈｌａｍｙｄｉａポリ
ペプチドおよび粘膜アジュバントを、抗生物質、制酸薬、スクラルファート、ま
たはこれらの組合せと共に経口投与することによって処置される方法を含む。こ
のワクチン抗原およびこのアジュバントとともに投与され得るこのような化合物
の例は、例えば、マクロライド、テトラサイクリン、およびこれらの誘導体を含
む抗生物質である（使用され得る抗生物質の特定の例は、アジスロマイシンまた
はドキシサイクリン、あるいは免疫調節剤（例えば、サイトカインまたはステロ
イド）を含む）。さらに、上記に列挙した成分のうちの１つより多くを結合して
含む化合物が、使用され得る。本発明はまた、これらの方法を実行するための組
成物（すなわち、本発明のＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原、アジュバントおよび上記に
列挙した化合物のうち１つ以上を、薬学的に受容可能なキャリアかまたは希釈剤
中に含む組成物）を含む。

【０２２４】本発明の方法および組成物において使用される上記に列挙した化合物の量は、
当業者により容易に決定され得る。さらに、当業者は、処置スケジュール／免疫
スケジュールを容易に設計し得る。例えば、非ワクチン成分が、１〜１４日目に
投与され得、そしてこのワクチン抗原＋アジュバントが、７、１４、２１、およ
び２８日目に投与され得る。

【０２２５】上記の開示は、一般的に本発明を記載している。より完全な理解が、以下の特
定の実施例を参照することにより得られ得る。これらの実施例は、例示目的のた
めのみ記載され、そして本発明の範囲を制限することは意図されない。形態の変
化および等価物の置換が、状況が好都合であることを示唆し得るかまたは好都合
にするような場合に、意図される。特定の用語が本明細書中で使用されているが
、このような用語は、記述上の意味で意図され、そして制限の目的には意図され
ない。

【０２２６】（実施例１ＬＯＲＦ２遺伝子を含むプラスミドベクターｐＣＡＩ５５６の調
製）本実施例は、ｌｏｒｆ２遺伝子を含むプラスミドベクターｐＣＡＩ５５６の調
製を例示する。

【０２２７】ｌｏｒｆ２遺伝子を、ＣｈｌａｍｙｄｉａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅのゲノムＤ
ＮＡから、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅した。このＰＣＲにお
いて、以下の５’プライマー：

【０２２８】

【化１】

【０２２９】（配列番号３）（ＮｏｔＩ制限部位、リボソーム結合部位、開始コドン、およ
びｌｏｒｆ２コード配列の５’末端に近接する配列を含む）、ならびに以下の３
’プライマー：

【０２３０】

【化２】

【０２３１】（配列番号４）（ｌｏｒｆ２遺伝子のＣ末端配列をコードする配列およびＢａｍ
ＨＩ制限部位を含む）を使用した。停止コドンを除去し、そして付加的ヌクレオ
チドを挿入して、ヒスチジンタグを備えるインフレーム融合物を得た。

【０２３２】増幅後、このＰＣＲフラグメントを、ＱＩＡｑｕｉｃｋ^TMＰＣＲ精製キット（
Ｑｉａｇｅｎ）を使用して精製し、次いで、ＮｏｔＩおよびＢａｍＨＩで消
化し、そして実施例２（図３）に記載のｐＣＡ−Ｍｙｃ−Ｈｉｓ真核生物発現ベ
クターにクローニングした。このベクターは、ヒトＣＭＶプロモーターの制御下
で転写する。

【０２３３】（実施例２真核生物発現ベクターｐＣＡ／Ｍｙｃ−Ｈｉｓの調製）本実施例は、真核生物発現ベクターｐＣＡ／Ｍｙｃ−Ｈｉｓの調製を例示する
。

【０２３４】プラスミドｐｃＤＮＡ３．１（−）Ｍｙｃ−ＨｉｓＣ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ）をＳｐｅＩおよびＢａｍＨＩで制限処理して、そのＣＭＶプロモーター
を除去し、そして残りのベクターフラグメントを単離した。プラスミドＶＲ−１
０１２（Ｖｉｃａｌ）から、ＣＭＶプロモーターおよびイントロンＡをＳｐｅ
Ｉ／ＢａｍＨＩフラグメント上に単離した。これらのフラグメントをともに連
結して、プラスミドｐＣＡ／Ｍｙｃ−Ｈｉｓを生成した。ｌｏｒｆ２遺伝子を含
むＮｏｔＩ／ＢａｍＨＩ制限処理したＰＣＲフラグメントを、ＮｏｔＩお
よびＢａｍＨＩで制限したプラスミドｐＣＡ／Ｍｙｃ−Ｈｉｓに連結して、プ
ラスミドｐＣＡＩ５５６（図３）を生成した。

【０２３５】生じたプラスミドｐＣＡＩ５５６を、Ｅ．ｃｏｌｉＸＬ−１ｂｌｕｅ（Ｓ
ｔｒａｔａｇｅｎｅ）にエレクトロポレーションによって移入し、このＥ．ｃｏ
ｌｉをカルベニシリン５０μｇ／ｍｌを含むＬＢブロスにて増殖させた。このプ
ラスミドを、ＥｎｄｏＦｒｅｅＰｌａｓｍｉｄＧｉｇａＫｉｔ^TM（Ｑｉ
ａｇｅｎ）大スケールＤＮＡ精製系により単離した。ＤＮＡ濃度を２６０ｎｍの
吸光度により決定し、そしてこのプラスミドを、ゲル電気泳動および臭化エチジ
ウム染色および分子量スタンダードとの比較後に確認した。この遺伝子の５’末
端および３’末端を、ＬｉＣｏｒモデル４０００ＬＤＮＡシーケンサーおよ
びＩＲＤ−８００標識プライマーを使用する配列決定によって確認した。

【０２３６】（実施例３鼻内Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対する防御）本実施例は、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの鼻内チャレンジに対する防御を達成
するためのマウスの免疫を例示する。

【０２３７】マウスが、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの異なる単離株での鼻内感染に感受性で
あることが、以前に示されている（Ｙａｎｇら、１９９３）。ＡＲ−３９株（Ｇ
ｒａｙｓｔｏｎ、１９８９）を、チャレンジ感染モデルとしてのＢａｌｂ／ｃマ
ウスにおいて使用して、裸のＤＮＡとして送達されたクラミジア属の遺伝子生成
物が致死下のＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ肺感染に対する防御応答を惹起する能力
を試験した。防御免疫は、肺感染のクリアランスの促進として規定される。

【０２３８】７〜９週齢の雄性Ｂａｌｂ／ｃマウスの群（１群あたり８〜１０匹）を、実施
例１および２に記載されるＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｌｏｒｆ２遺伝子のコー
ド配列を含むプラスミドＤＮＡで、筋肉内（ｉ．ｍ．）および鼻内（ｉ．ｎ．）
免疫した。生理食塩水、または挿入されたクラミジア属の遺伝子を欠くプラスミ
ドベクターを、コントロール動物の群に与えた。

【０２３９】筋肉内免疫のために、左四頭筋および右四頭筋交互に、ＰＢＳ５０μｌ中のＤ
ＮＡ１００μｇを、０、３、および６週間目に３回、注射した。鼻内免疫のため
に、麻酔したマウスに、５０μｇのＤＮＡを含む５０μｌのＰＢＳを、０、３、
および６週間目に３回吸引させた。８週間目に、免疫したマウスに、１００μｌ
のＳＰＧ緩衝液中５×１０⁵ＩＦＵのＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅＡＲ３９株を
鼻内接種して、これらのマウスが致死下のＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅチャレンジ
の増殖を制限する能力を試験した。

【０２４０】肺をチャレンジ後９日目にマウスから取り出し、そしてすぐにＳＰＧ緩衝液（
７．５％ショ糖、５ｍＭグルタミン酸塩、１２．５リン酸塩、ｐＨ７．５）にホ
モジネートした。このホモジネートを、アッセイまで−７０℃で凍結して保存し
た。このホモジネートの希釈物を、感染性クラミジア属の存在について、感受性
細胞の単層上への接種によりアッセイした。この接種物を、この細胞上に３００
０ｒｐｍで１時間遠心分離し、次いで、この細胞を、１μｇ／ｍｌのシクロへキ
シミドの存在下で３５℃で３日間インキュベーした。インキュベーション後、こ
の単層をホルマリンおよびメタノールで固定し、次いで、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ封
入体の存在について、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに感染したウサギ由来の回復期
血清、ならびにペルオキシダーゼ基質として金属増強したＤＡＢを使用して、イ
ムノペルオキシダーゼ染色した。

【０２４１】図４および表１は、ｐＣＡＩ５５６で鼻内および筋肉内免疫したマウスが、９
日目に６つの症例のうち６つにおいて１８，０００ＩＦＵ／肺（平均１１，０５
０）未満のクラミジア属肺力価を有したが、生理食塩水で偽免疫されたコントロ
ールマウスについての値の範囲は、９日目で、１０，７００〜４５８，０００Ｉ
ＦＵ／肺（平均１１１，７８３）であったことを例示する。ＤＮＡ免疫は、それ
自体、観察された防御効果を担わない。なぜなら、別のプラスミド構築物、ｐＣ
ＡＩ６２４は、防御せず、免疫したマウスにおける肺力価（１３４，６００ＩＦ
Ｕ／肺）は、生理食塩水免疫したコントロールマウスについて得られた肺力価と
同様であったからである。この構築物ｐＣＡＩ６２４は、ｌｏｒｆ２遺伝子をコ
ードするヌクレオチド配列が、異なる９８ｋＤａ外膜タンパク質をコードするＣ
．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅヌクレオチド配列で置換されていることを除いては、ｐ
ＣＡＩ５５６と同一である。

【０２４２】

【表１】

【０２４３】（等価物）本発明の特定の実施形態の前述の詳細な説明から、独特のＣｈｌａｍｙｄｉａ
抗原が記載されていることが明らかである。特定の実施形態が本明細書中で詳細
に開示されているが、これは、例示目的のためだけになされており、そして上記
に添付される特許請求の範囲の範囲について制限することを意図しない。特に、
本発明に対する種々の置換、変更、および改変が、特許請求の範囲によって規定
される本発明の精神および範囲から逸脱することなくなされ得ることが、本発明
者によって意図される。

【図面の簡単な説明】

本発明は、図面を参照して、以下の説明からさらに理解され得る。

【図１】図１は、全長ｌｏｒｆ２遺伝子（配列番号１）およびＣｈｌａｍｙｄｉａｐ
ｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来のプロセシングされた配列（配列番号２）の、ヌクレオ
チド配列（上段の配列）および推定アミノ酸配列（下段の配列）を示す。

【図２】図２は、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅのｌｏｒｆ２遺伝子をコードするヌクレオ
チド配列の制限酵素分析を示す。

【図３】図３は、プラスミドｐＣＡＩ５５６の構築および要素を示す。

【図４】図４は、ＤＮＡ免疫後のｐＣＡＩ５５６によるＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染
に対する防御を例示する。個々のデータ点を、各動物（白菱形）ならびに各群に
ついての平均および標準偏差（黒四角）について示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 39/39 Ａ６１Ｐ 11/06 ４Ｃ０８５Ａ６１Ｐ 9/10 Ｃ０７Ｋ 1/22 ４Ｈ０４５ 11/00 14/295 11/06 16/12 Ｃ０７Ｋ 1/22 Ｃ１２Ｎ 1/15 14/295 1/19 16/12 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/19 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 1/21 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｍ 5/10 33/566 Ｃ１２Ｐ 21/02 33/569 ＦＣ１２Ｑ 1/68 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｒ 1:01） 33/566 33/569 (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:01）Ｃ１２Ｒ 1:01）Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＡＣ１２Ｒ 1:01） 5/00 Ａ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ１２Ｒ 1:01） (31)優先権主張番号０９／４２７，５０１ (32)優先日平成11年10月26日(1999．10．26) (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ダン，パメラレスリーカナダ国エル５エイ４ビー８オンタリオ，ミシソーガ，カネフサークル 3700，アパートメント 703 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA13 BA31 BA50 CA04 CA11 DA02 DA05 DA11 EA02 EA03 EA04 GA11 HA01 HA12 HA15 4B063 QA01 QA19 QQ01 QQ42 QQ52 QR08 QR42 QR56 QR62 QS25 QS33 QS34 QS36 QX02 4B064 AG31 CA01 CA19 CC24 DA01 DA15 4B065 AA01X AA01Y AA57X AA87X AB01 BA01 CA24 CA45 CA46 4C084 AA02 AA07 CA04 ZA45 ZA59 4C085 AA03 BA45 DD61 EE03 EE06 FF24 GG08 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA11 DA76 DA86 EA29 EA31 EA52 FA72 FA74 GA26

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】以下からなる群より選択される、単離されたポリヌクレオチ
ド：（ａ）配列番号１のヌクレオチド配列を含む配列を有するポリヌクレオチド、
およびその機能的フラグメント；（ｂ）配列番号２と少なくとも７５％相同である配列を有するポリペプチドを
コードするポリヌクレオチド、およびその機能的フラグメント；ならびに（ｃ）配列番号１のヌクレオチド配列を含む配列を有するポリヌクレオチドに
、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得るポリヌクレオチド、および
その機能的フラグメント。
【請求項２】融合ポリペプチドをコードする第２のヌクレオチド配列に連
結される、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】前記融合ポリペプチドが、異種シグナルペプチドである、請
求項２に記載のヌクレオチド。
【請求項４】前記ポリヌクレオチドが、配列番号２を有するポリペプチド
の機能的フラグメントをコードする、請求項２に記載のヌクレオチド。
【請求項５】配列番号２に少なくとも７５％相同である配列を有する、単
離されたポリペプチド、およびその機能的フラグメント。
【請求項６】前記ポリペプチドが、配列番号２の配列またはその機能的フ
ラグメントを有する、請求項５に記載のポリペプチド。
【請求項７】融合ポリペプチドに連結された請求項５に記載のポリペプチ
ドを含む、ポリペプチド。
【請求項８】前記融合ポリペプチドが、シグナルペプチドである、請求項
７に記載のポリペプチド。
【請求項９】前記融合ポリペプチドが、アジュバント活性を有する異種ポ
リペプチドを含む、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項１０】プロモーターに作動可能に連結された請求項１に記載のポ
リヌクレオチドを含む、発現カセット。
【請求項１１】請求項１０に記載の発現カセットを含む、発現ベクター。
【請求項１２】請求項１０に記載の発現カセットを含む、宿主細胞。
【請求項１３】前記宿主細胞が、原核生物細胞である、請求項１２に記載
の宿主細胞。
【請求項１４】前記宿主細胞が、真核生物細胞である、請求項１２に記載
の宿主細胞。
【請求項１５】配列番号２を有する組換えポリペプチドを産生するための
方法であって、以下の工程：（ａ）請求項１２に記載の宿主細胞を、該ポリペプチドの発現を可能にする条
件下で培養する工程；および（ｂ）該組換えポリペプチドを回収する工程、を包含する、方法。
【請求項１６】請求項１０に記載の発現カセットを含む、ワクチンベクタ
ー。
【請求項１７】前記宿主哺乳動物がヒトである、請求項１６に記載のワク
チンベクター。
【請求項１８】薬学的に受容可能な賦形剤中にある、請求項１６に記載の
ワクチンベクター。
【請求項１９】免疫学的な有効量の、請求項１６に記載のワクチンベクタ
ーを含む、薬学的組成物。
【請求項２０】哺乳動物において免疫応答を誘導するための方法であって
、以下の工程：該哺乳動物に、免疫学的な有効量の、請求項１６に記載のワクチンベクターを
投与する工程であって、ここで該投与が、免疫応答を誘導する、工程、を包含する、方法。
【請求項２１】免疫学的な有効量の、請求項５に記載のポリペプチド、お
よび薬学的に受容可能な希釈剤を含む、薬学的組成物。
【請求項２２】アジュバントをさらに含む、請求項２１に記載の薬学的組
成物。
【請求項２３】１以上の既知のＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原をさらに含む、請
求項２１に記載の薬学的組成物。
【請求項２４】哺乳動物において免疫応答を誘導するための方法であって
、以下の工程：該哺乳動物に、免疫学的な有効量の、請求項２１に記載の薬学的組成物を投与
する工程であって、ここで該投与が、免疫応答を誘導する、工程、を包含する、方法。
【請求項２５】生物学的材料中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出し得る
ポリヌクレオチドプローブ試薬であって、ストリンジェントな条件下で請求項１
に記載のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドを含む、ポリ
ヌクレオチドプローブ試薬。
【請求項２６】前記試薬が、ＤＮＡプライマーである、請求項２５に記載
のポリヌクレオチドプローブ試薬。
【請求項２７】サンプル中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出するための
ハイブリダイゼーション方法であって、以下の工程：（ａ）該サンプルからポリヌクレオチドを得る工程；（ｂ）該得られたポリヌクレオチドを、請求項２５に記載のポリヌクレオチド
プローブ試薬と、該プローブおよび該サンプルのハイブリダイゼーションを可能
にする条件下でハイブリダイズさせる工程；ならびに（ｃ）該検出試薬の該サンプル中のポリヌクレオチドとの該ハイブリダイゼー
ションを検出する工程、を包含する、方法。
【請求項２８】サンプル中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出するための
増幅方法であって、以下の工程：（ａ）該サンプルからポリヌクレオチドを得る工程；（ｂ）該得られたポリヌクレオチドを、請求項２５に記載の１以上のポリヌク
レオチドプローブ試薬を使用して増幅する工程；および（ｃ）該増幅したポリペプチドを検出する工程、を包含する、方法。
【請求項２９】サンプル中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出するための
方法であって、以下の工程：（ａ）該サンプルを、配列番号２を有するポリペプチドと結合する検出試薬と
接触させて、複合体を形成させる、工程；および（ｂ）該形成された複合体を検出する工程、を包含する、方法。
【請求項３０】前記検出試薬が、抗体である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項３０に記
載の方法。
【請求項３２】前記抗体が、ポリクローナル抗体である、請求項３０に記
載の方法。
【請求項３３】配列番号２を有するポリペプチドを実質的に精製するため
のアフィニティークロマトグラフィー方法であって、以下の工程：（ａ）該ポリペプチドを含むサンプルを、該ポリペプチドに結合する検出試薬
と接触させて、複合体を形成させる、工程；（ｂ）該形成された複合体を単離する工程；（ｃ）該形成された複合体を解離させる工程；および（ｄ）該解離したポリペプチドを単離する工程、を包含する、方法。
【請求項３４】前記検出試薬が、抗体である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項３４に記
載の方法。
【請求項３６】前記抗体が、ポリクローナル抗体である、請求項３４に記
載の方法。
【請求項３７】請求項５に記載のポリペプチドを免疫特異的に結合する抗
体、またはその結合ドメインを含む該抗体のフラグメントもしくは誘導体。