RU2252224C2 - Пептид со свойствами антигена neisseria meningitidis, кодирующий его полинуклеотид, вакцина для лечения или предотвращения заболеваний или состояний, вызванных neisseria meningitidis, (варианты), антитело, связывающееся с указанным пептидом - Google Patents
Пептид со свойствами антигена neisseria meningitidis, кодирующий его полинуклеотид, вакцина для лечения или предотвращения заболеваний или состояний, вызванных neisseria meningitidis, (варианты), антитело, связывающееся с указанным пептидом Download PDFInfo
- Publication number
- RU2252224C2 RU2252224C2 RU2002132891/13A RU2002132891A RU2252224C2 RU 2252224 C2 RU2252224 C2 RU 2252224C2 RU 2002132891/13 A RU2002132891/13 A RU 2002132891/13A RU 2002132891 A RU2002132891 A RU 2002132891A RU 2252224 C2 RU2252224 C2 RU 2252224C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peptide
- neisseria meningitidis
- neisseria
- meningitidis
- prevention
- Prior art date
Links
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 title claims abstract description 69
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 41
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 title claims abstract description 15
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 title claims abstract description 15
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 11
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 title abstract 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 title 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 title 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 title 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 50
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 11
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 10
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 claims abstract description 9
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims abstract description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims abstract description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 20
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 10
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 claims description 4
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 claims description 3
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 2
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 claims 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 10
- 238000003780 insertion Methods 0.000 abstract description 6
- 230000037431 insertion Effects 0.000 abstract description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 4
- 206010062212 Neisseria infection Diseases 0.000 abstract description 2
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 20
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 17
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 6
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 4
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 4
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 4
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 230000017105 transposition Effects 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 description 3
- 101100290859 Neisseria meningitidis serogroup B (strain MC58) metE gene Proteins 0.000 description 3
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241000831652 Salinivibrio sharmensis Species 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 2
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 2
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000012750 in vivo screening Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 108010066587 tRNA Methyltransferases Proteins 0.000 description 2
- 102000018477 tRNA Methyltransferases Human genes 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710119938 5-methyltetrahydropteroyltriglutamate-homocysteine methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101150035093 AMPD gene Proteins 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 102000003669 Antiporters Human genes 0.000 description 1
- 108090000084 Antiporters Proteins 0.000 description 1
- 108010072228 Apolipoprotein N-acyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 101000611440 Escherichia coli (strain K12) Intermembrane transport protein PqiB Proteins 0.000 description 1
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 102000051366 Glycosyltransferases Human genes 0.000 description 1
- 241001674326 Helicobacter pylori J99 Species 0.000 description 1
- 101001037191 Homo sapiens Hyaluronan synthase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000594820 Homo sapiens Purine nucleoside phosphorylase Proteins 0.000 description 1
- 102100040203 Hyaluronan synthase 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 101710150641 L-lactate permease Proteins 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 239000006391 Luria-Bertani Medium Substances 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000034762 Meningococcal Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010027280 Meningococcal sepsis Diseases 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 101100429962 Neisseria meningitidis serogroup B (strain MC58) NMB0183 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100289257 Neisseria meningitidis serogroup B (strain MC58) lnt gene Proteins 0.000 description 1
- 101100244468 Neisseria meningitidis serogroup B (strain MC58) pnp gene Proteins 0.000 description 1
- 101100252136 Neisseria meningitidis serogroup B (strain MC58) rnc gene Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000002681 Polyribonucleotide nucleotidyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003661 Ribonuclease III Human genes 0.000 description 1
- 108010057163 Ribonuclease III Proteins 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 102000008579 Transposases Human genes 0.000 description 1
- 108010020764 Transposases Proteins 0.000 description 1
- 241000544286 Vibrio anguillarum Species 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- JBGSPJNXVJCLOQ-HJZCUYRDSA-N [(2-amino-2-oxoethyl)-[(3R,4S,5R)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolane-2-carbonyl]amino]phosphonic acid Chemical compound NC(=O)CN(P(O)(O)=O)C(=O)C1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O JBGSPJNXVJCLOQ-HJZCUYRDSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000006619 dextran medium Substances 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 208000037941 meningococcal disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 210000001989 nasopharynx Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/22—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Neisseriaceae (F)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/522—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/523—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/36—Neisseria
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к вирулентным генам и белкам. Пептид, проявляющий свойства антигена Neisseria meningitidis, и полинуклеотид, его кодирующий, применяются при изготовлении лекарственного препарата для лечения или предупреждения состояний, ассоциированных с инфекцией, вызываемой Neisseria или грамм-отрицательными бактериями. С помощью указанного пептида получают антитела. Вакцины, используемые для лечения или предотвращения заболеваний или состояний, вызванных Neisseria meningitidis, содержат аттенуированный мутантный штамм Neisseria meningitidis, имеющий мутацию или инсерцию, или делецию гена, нарушающую экспрессию определенной нуклеотидной последовательности. Данное изобретение позволяет повысить эффективность лечения и профилактики инфекции Neisseria. 7 с. и 6 з.п. ф-лы, 1 табл.
Description
Область, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к вирулентным генам и белкам и к их применению. Более конкретно, настоящее изобретение относится к генам и белкам/пептидам, полученным из Neisseria meningitidis, и к их применению в терапии и в скрининге лекарственных средств.
Предпосылки создания изобретения
Neisseria meningitidis представляет собой грам-отрицательный бактериальный патоген, который вызывает септический шок и бактериальный менингит. Эта бактерия является основным возбудителем бактериального менингита в развитых странах и причиной широкомасштабных эпидемий в Африке и Китае. В Великобритании Neisseria meningitidis является главной после дорожно-транспортных происшествий причиной смертности детей. Эта бактерия обычно заселяет носоглотку человека, а затем попадает в кровоток, где она вызывает тяжелый сепсис или менингит. Хотя современные антимикробные средства являются эффективными для элиминации бактерий из организма, однако смертность от менингококкового сепсиса все еще остается высокой. Поэтому необходима разработка новых средств для лечения или предупреждения состояний, вызываемых Neisseria meningitidis, например, путем иммунизации.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение основано на обнаружении генов вирулентности в Neisseria meningitidis.
В соответствии со своим первым аспектом настоящее изобретение относится к пептиду, кодируемому опероном, включающим любую нуклеотидную последовательность, идентифицированную в п.1 формулы изобретения, или к его гомологу в грам-отрицательной бактерии, или его функциональному фрагменту, которые могут быть использованы в терапевтических или диагностических целях.
Эти пептиды могут иметь много терапевтических применений для лечения инфекций Neisseria, включая использование в вакцинах для профилактических целей.
В соответствии со вторым аспектом изобретения полинуклеотид, кодирующий пептид, определенный выше, может быть также использован для терапии или диагностики.
В соответствии с третьим аспектом изобретения гены, кодирующие указанные пептиды, могут быть использованы для получения аттенуированных микроорганизмов. Эти аттенуированные микроорганизмы обычно имеют мутацию, которая нарушает экспрессию одного или несколько идентифицированных здесь генов, в результате чего образуется штамм, у которого отсутствует вирулентность. Указанные микроорганизмы могут быть также использованы в терапии и в диагностике.
В соответствии с четвертым аспектом изобретения указанные пептиды, гены и аттенуированные микроорганизмы настоящего изобретения могут быть использованы для лечения и предупреждения состояния, ассоциированного с инфекциями, вызываемыми Neisseria или грам-отрицательными бактериями.
Описание изобретения
Настоящее изобретение основано на обнаружении генов, кодирующих пептиды, которые ответственны за вирулентность. Поэтому пептиды и гены настоящего изобретения могут быть использованы в целях получения терапевтических агентов для лечения инфекций. Следует отметить, что термин “терапия” также включает превентивные методы лечения, например вакцинацию. Кроме того, хотя продукты настоящего изобретения используются главным образом для лечения инфекции у человека, однако, предполагается, что их применение в ветеринарии также входит в объем настоящего изобретения.
Настоящее изобретение описано в применении к Neisseria meningitidis. Однако все штаммы Neisseria и многие другие штаммы грам-отрицательных бактерий также содержат родственные пептиды или белки, имеющие аминокислотную последовательность, идентичную или аналогичную идентифицированным здесь последовательностям. Микроорганизмами, которые, вероятно, содержат указанные пептиды, являются, но не ограничиваются ими, бактерии рода Salmonella, Enterobacter, Klebsiella, Shigella и Yersinia.
Эксперименты для идентификации генов вирулентности настоящего изобретения осуществляли с использованием штамма В N. meningitidis. Скрининг на гомологию осуществляли на базе данных штамма А, однако предпочтительными являются белки и гены, происходящие от штамма В.
Предпочтительно пептиды, которые могут быть использованы в различных аспектах настоящего изобретения, имеют более чем 40%-ное сходство с идентифицированными здесь пептидами. Более предпочтительно эти пептиды имеют более чем 60%-ное сходство последовательности. Наиболее предпочтительно указанные пептиды имеют более чем 80%-ное сходство последовательности, например 95%-ное сходство. Что касается идентифицированных здесь полинуклеотидных последовательностей, то родственные полинуклеотиды, которые могут быть использованы в различных аспектах настоящего изобретения, могут иметь более чем 40%-ную идентичность с идентифицированными здесь последовательностями. Более предпочтительно полинуклеотидные последовательности имеют более чем 60%-ную идентичность последовательности. Наиболее предпочтительно указанные полинуклеотидные последовательности имеют более чем 80%-ную идентичность последовательности, например 95%-ную идентичность.
Термины “сходство” и “идентичность” понятны специалистам. Используемый здесь термин “идентичность” относится к сравнению последовательностей, исходя из абсолютной совместимости сравниваемых последовательностей в соответствующих идентичных положениях. Термин “сходство” относится к сравнению аминокислотных последовательностей и подразумевает не только идентичность аминокислот в соответствующих положениях, но также и их функциональное сходство. Такое сходство между полипептидами, помимо сходства их последовательностей, указывает на их функциональное сходство.
Степени идентичности между генными последовательностями и уровни идентичности или сходства между аминокислотными последовательностями могут быть вычислены известными методами. В настоящем изобретении для определения идентичности и сходства могут быть использованы методы, основанные на использовании общедоступных компьютерных программ BLASTP, BLASTN и FASTA (Atschul et al., Molec. Biol., 1990; 215:403-410), а также программ BLASTX, доступных от NCBI, и программы “Gap” от Genetics Computer Group, Madison WI. Представленные здесь степени сходства и идентичности были получены с использованием программы Gap, причем для сравнения аминокислотных последовательностей были введены “бреши”, где “штраф на брешь-пропуск” был равен 12, а “штраф на брешь-удлинение” был равен 4, и при сравнении полинуклеотидных последовательностей “штраф на брешь-пропуск” был равен 50, а “штраф на брешь-удлинение” был равен 3.
При характеризации гена настоящего изобретения может быть использована генная последовательность для поиска родственных генов или пептидов в других микроорганизмах. Это может быть осуществлено путем поиска в имеющихся базах данных, например в EMBL или GenBank.
Пептиды или белки настоящего изобретения могут быть очищены и выделены методами, известными специалистам. В частности, при идентификации генной последовательности могут быть использованы рекомбинантные методы для экспрессии генов в подходящем хозяине. Активные фрагменты и родственные молекулы могут быть идентифицированы и использованы в терапии. Так, например, пептиды или их активные фрагменты могут быть использованы в вакцине в качестве антигенных детерминант для выработки иммунного ответа. Они могут быть также использованы для получения антител в целях пассивной иммунизации или для диагностики. Подходящими антителами являются моноклональные антитела или их фрагменты, включая одноцепочечные Fv-фрагменты. Методы получения антител известны специалистам.
Активные фрагменты пептидов представляют собой такие фрагменты, которые сохраняют биологическую функцию данного пептида. Так, например, при использовании для выработки иммунного ответа этот фрагмент должен иметь достаточный размер, такой, чтобы антитела, генерированные этим фрагментом, могли отличать этот пептид от других пептидов в бактериальном микроорганизме. Обычно этот фрагмент имеет размер, по крайней мере, в 30 нуклеотидов (10 аминокислот), а предпочтительно в 60 нуклеотидов (20 аминокислот), а наиболее предпочтительно более чем в 90 нуклеотидов (30 аминокислот).
Следует также отметить, что помимо родственных молекул, происходящих от других микроорганизмов, настоящее изобретение охватывает модификации, которые могут быть внесены в идентифицированные здесь пептиды и полинуклеотиды и которые не оказывают значительного влияния на биологическую функцию. Для специалиста очевидно, что вырожденность генетического кода может приводить к получению полинуклеотидов, которые имеют небольшие замены оснований по сравнению с определенными здесь основаниями, но которые, тем не менее, кодируют те же самые пептиды. Комплементарные полинуклеотиды также входят в объем настоящего изобретения. Также рассматриваются консервативные замены на аминокислотном уровне, то есть различные кислотные или основные аминокислоты могут быть заменены без значительной потери их функциональных свойств.
Получение вакцин на основе аттенуированных микроорганизмов известно специалистам. При необходимости или по желанию вакцинные композиции могут быть получены с использованием подходящих носителей или адъювантов, например, на основе алюминия для эффективной иммунизации против инфекции. Получение вакцинных композиций известно специалисту. Аттенуированные микроорганизмы могут быть получены путем внесения мутации, которая нарушает экспрессию любого идентифицированного здесь гена. Методы нарушения экспрессии конкретных генов известны специалисту. Методы, которые могут быть использованы для этих целей, предусматривают инсерционную инактивацию или делецию гена. Аттенуированные микроорганизмы настоящего изобретения могут также включать дополнительные мутации в других генах, например во втором идентифицированном здесь гене или в отдельном гене, необходимом для роста микроорганизма, например, мутацию в гене аrо, или, что касается Salmonella, в гене, локализованном в области SP12, идентифицированной в WO-A-96/17951.
Аттенуированные микроорганизмы могут быть также использованы в качестве систем носителей для доставки гетерологичных антигенов, терапевтических белков или нуклеиновых кислот (ДНК или РНК). В этом варианте осуществления изобретения аттенуированные микроорганизмы используют для доставки гетерологичного антигена, белка или нуклеиновой кислоты в конкретный участок in vivo. Введение гетерологичного антигена, пептида или нуклеиновой кислоты в аттенуированный микроорганизм может быть осуществлено стандартными методами, включая использование рекомбинантных конструкций, например векторов, которые содержат полинуклеотиды, экспрессирующие гетерологичный антиген или терапевтический белок, а также подходящие промоторные последовательности. Альтернативно ген, который кодирует гетерологичный антиген или белок, может быть введен в геном данного микроорганизма, и эндогенные промоторы используют для регуляции экспрессии.
В более общих чертах и как хорошо известно специалисту для терапевтического использования может быть выбрано подходящее количество активного компонента настоящего изобретения, а также могут быть выбраны подходящие носители или эксципиенты и способы введения. Эти факторы должны быть выбраны или определены в соответствии с известными критериями, такими как природа/тяжесть состояния, подвергаемого лечению, тип и/или состояние здоровья индивидуума и т.п.
В отдельном варианте осуществления изобретения продукты настоящего изобретения могут быть использованы в скринирующих анализах для идентификации потенциальных антимикробных лекарственных средств или для детекции на вирулентность. Рутинные скринирующие анализы известны специалисту и могут быть соответствующим образом адаптированы с использованием продуктов настоящего изобретения. Так, например, продукты настоящего изобретения могут быть использованы в качестве мишени для потенциального лекарственного средства, где способность лекарственного средства инактивировать мишень или связываться с этой мишенью указывает на его потенциальную антимикробную активность.
Различные продукты настоящего изобретения могут быть также использованы в ветеринарии.
Ниже приводится краткий обзор экспериментальной процедуры, используемой для идентификации генов вирулентности.
Для идентификации генов в N. meningitidis, которые играют главную роль в септической инфекции, может быть использован мутагенез с сигнатурным мечением (STM) (Hensel et al., Science, 1995; 269:400-403). При осуществлении STM отдельные мутанты метят идентификаторами с уникальными последовательностями, что позволяет одновременно анализировать большое число мутантов. Однако для этого необходимо сконструировать библиотеки инсерционных мутантов, и такая необходимость до сих пор ограничивала исследование N. meningitidis. Мутагенез был успешно осуществлен с использованием метода, в котором ДНК Neisseria модифицируют in vitro с использованием очищенных компонентов транспозиции Тn10. Поскольку N. meningitidis эффективно поглощает экзогенную ДНК, то модифицированные аллели вводят в N. meningitidis путем трансформации. Эти мутанты могут быть затем скринированы на их способность вызывать системную инфекцию.
Вектор pSTM115 (Sun et al. Nature Medicine, 2000; 6(11):1269-1273) использовали в качестве донора транспозона для in vitro-мутагенеза. Каждое из 96 производных pSTM115, содержащее уникальную метку-сигнатуру, участвовали в 96 отдельных реакциях транспозиции. Модифицированная геномная ДНК подвергалась репарации и возвращалась в хозяина при трансформации. Для того чтобы определить, присутствует ли Тn10-инсерция в других сайтах, 40 трансформантов были оценены на реакцию транспозиции в одном локусе с помощью Саузерн-блот-анализа. Каждый из трансформантов имел одну отличающуюся инсерцию в Тn10. Для того чтобы определить, была ли Tn10-интеграция стабильной в процессе системного инфицирования детенышей крыс, проводили сравнение картин гибридизации шести мутантов до и после пересевов с использованием крыс. В результате получали идентичные картины гибридизации до и после инфицирования.
При этом были использованы нижеследующие экспериментальные условия:
Бактериальные штаммы и рост:
С311+ представляет собой изолят ЕТ-5 N. meningitidis, серологической группы В, выделенный у пациента с инвазивной менингококковой инфекцией (Virji et al., Mol. Microbiol., 1991; 5:1831-1841). N. meningitidis культивировали на среде с сердечно-мозговым экстрактом, содержащей 5% добавку Левинталя. Штаммы Е. coli культивировали на среде Луриа-Бертани. По необходимости, к твердой среде добавляли канамицин в концентрациях 75 и 50 мкг/мл для N. meningitidis и Е. coli соответственно.
Характеризация in vitro-транспозиции и сайтов инсерции:
Сайт инициации репликации pACYC184 в pSTM115 использовали для выделения сайта инсерции путем “спасения” маркера. Секвенирование нуклеотидов осуществляли методом терминации с красителем (Perkin Elmer, Norwalk, Connecticut) с использованием праймеров NG62 (5'-TTGGTTAATTGGTTGTAACACTGG-3') (SEQ ID NO:209) или NG99 (5' -ATTCTCATGTTTGACAGCG-3') (SEQ ID NO:210). Поиски гомологии осуществляли в базах данных белков (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/), включающих геномные последовательности серологических групп А и В N. meningitidis и N. gonorrhoeae (http://www.sanger.ас.uk/Projects/N_meningitidis, http://www.tigr.org и http://dnal.chem.ou.edu/gono.html соответственно).
Амплификация метки, клонирование и Саузерн-блот-анализы:
Гибридизацию и получение дот-блотов осуществляли как описано Hensel и др., см. выше, за исключением того, что метки амплифицировали с использованием праймеров NG13 (5'- ATCCTACAACCTCAAGCT-3') (SEQ ID NO:211) и NG14 (5'-АТСССАТТСТААССААСС-3') (SEQ ID NO:212) и ПЦР-продуктов, но не с использованием плазмидной ДНК, и фиксировали на мембранах. Олигонуклеотиды S1 (5'-AAGAGATTACGCGCAGACC-3') (SEQ ID NO:213) и S2 (5'-AATACGCAACCGCCTCTC-3') (SEQ ID NO:214) отжигали с последовательностями в pSTM115, фланкирующими “сигнатурные метки”, и использовали для амплификации продукта в 367 пар оснований из каждого производного рSТМ115. Для Саузерн-блот-анализа кластер генов резистентности к канамицину, происходящих от pSTM115, метили методом рандомизированных праймеров (NEB) и использовали в качестве зондов для геномной ДНК, гидролизованной Clal.
Модель на животных
Для скрининга пулов STM мутанты культивировали отдельно на микротитрационных планшетах в течение 18 ч. Бактерии собирали, затем ресуспендировали в PBS. Крыс Wistar (в возрасте 5 дней) инокулировали внутрибрюшинно 100 мкл суспензии и проводили мониторинг в течение 48 часов. Для определения индекса конкурентоспособности мутанта бактерию дикого типа и мутантную бактерию культивировали в течение 18 ч на твердой среде и собирали в PBS, после чего крыс инокулировали клетками мутанта и дикого типа в отношении 1:1 при уровне заражения для всего инокулята 5 х 106 к.о.е. Количество мутантных бактерий (резистентных к канамицину) по отношению к количеству бактерий дикого типа (чувствительных к канамицину) определяли путем посева образцов (в дубликатах) на среды, которые содержали или не содержали антибиотики.
Результаты поиска гомологов представлены в таблице 1.
| Таблица 1 | |||
| SEQ ID NO: | БЕЛОК | РЕГИСТРАЦ.№ | МИКРООРГАНИЗМ |
| 3 и 4 | 3'-дегидрохинатсинтаза | NMB0647 | N. gonorrhoeae |
| 25 и 26 | Гликозилтрансфераза | LS12 | N. gonorrhoeae |
| 35 и 36 | Полирибонуклеотиднуклеотидилтрансфераза | NMB0758 | N. meningitidis |
| 37 и 38 | Фосфорибозилформилглицинамидсинтаза | PURL | Е. coli |
| 43 и 44 | Шикиматдегидрогеназа | AROE | N. meningitidis |
| 47 и 48 | Гипотетический 21,7 кД-белок | NMB0673 | N. meningitidis |
| 53 и 54 | Предполагаемый фактор связывания с клеткой | NMB0345 | N. meningitidis |
| 57 и 58 | Гипотетический белок | HI0633 | H. influenzae |
| 61 и 62 | Nа+/Н+антипортер | NMBN0536 | N. meningitidis |
| 63 и 64 | Хоризматсинтаза | AROC | V. anguillarum |
| 67 и 68 | Паракват-индуцибельный белок В | PQ15B | E. coli |
| 71 и 72 | 5'-метилтетрагидротероилил-триглутамат-гомоцистеин-метилтрансфераза | NMB0944 | N. meningitidis |
| 79 и 80 | α-1,2-N-ацетилглюкозамин-трансфераза | RFAK | N. meningitidis |
| 83 и 84 | Предполагаемая РНК-метилаза | NMB1348 | N. meningitidis |
| 89 и 90 | L-лактатпермеаза | NMB0543 | N. meningitidis |
| 91 и 92 | АВС-переносчик | NMB1240 | N. meningitidis |
| 103 и 104 | Предполагаемый GTP-связывающий белок | HI0393 | H. influenzae |
| 109 и 110 | Белок, модифицирующий капсулярный полисахарид | LIPB | N. meningitidis |
| 113 и 114 | Гипотетический 17,8 кД-белок | NMB0734 | N. meningitidis |
| 115 и 116 | Гипотетический белок Е. coli | YIGC | S. typhimurium |
| 119 и 120 | Рибонуклеаза III | NMB0686 | N. meningitidis |
| 121 и 122 | Белок AMPD | NMB0668 | N. meningitidis |
| 123 и 124 | 5-метилтетрагидроптероилил-триглутамат-гомоцистеин-метилтрансфераза | NMB0944 | N. meningitidis |
| 133 и 134 | Предполагаемая АТР-зависимая РНК-геликаза | NMB1422 | N. meningitidis |
| 137 и 138 | Предполагаемая РНК-метилаза | NMB1348 | N. meningitidis |
| 141 и 142 | Шикиматдегидрогеназа | AROE | N. meningitidis |
| 143 и 144 | Предполагаемый внешний мембранный белок | OMPU | N. meningitidis |
| 145 и 146 | Белок TONB | TONB | N. meningitidis |
| 147 и 148 | Предполагаемая аполипопротеин-N-ацилтрансфераза | NMB0713 | N. meningitidis |
| 149 и 150 | Транспосаза | NMB0991 | N. meningitidis |
| 153 и 154 | UTР-глюкозо-1-фосфат-уридилилтрансфераза | NMB0638 | N. meningitidis |
| 157 и 158 | АDР-гептозо-LРS-гептозил-трансфераза II | NMB1527 | N. meningitidis |
| 161 и 162 | Предполагаемая мембрано-ассоциированная литическая трансгликозилаза В | NMB1279 | N. meningitidis |
| 171 и 172 | Предполагаемый фактор связывания с клеткой | NMB0345 | N. meningitidis |
| 173 и 174 | Р-аминобензоатсинтетаза | РАВВ | H. pylori J99 |
| 177 и 178 | 5'-метилтетрагидроптероилил-триглутамат-гомоцистеин-метилтрансфераза | NMB0944 | N. meningitidis |
| 183 и 184 | Консервативный гипотетический белок | NMB0183 | N. meningitidis |
| 185 и 186 | Гипотетический белок Е. coli | YIGC | S. typhi LT2 |
Для остальных идентифицированных здесь последовательностей не было получено каких-либо данных о гомологии последовательностей.
Указанные генные продукты использовали для продуцирования поликлональных антител, которые были протестированы иммуноферментным способом (ELISA) против различных штаммов N. meningitidis для оценки их эффективности в качестве вакцин-кандидатов. Для этого использовали следующие штаммы:
Neisseria meningitidis (В) тип 1000
Neisseria meningitidis (В) тип NGE31
Neisseria meningitidis (В) тип NGH15
Neisseria meningitidis (В) тип SW2107
Neisseria meningitidis (В) тип NHG38
Neisseria meningitidis (В) тип NGE28
Neisseria meningitidis (В) тип 2996
Этот анализ дает информацию относительно разнообразия штаммов N. meningitidis, которые распознаются этими антителами.
N. meningitidis культивировали на “шоколадном” агаре Columbia с лошадиной кровью (Oxoid) в течение 14 часов при 37°С в 5% СO2. Клетки соскребали с агаровых чашек и ресуспендировали в 20 мл PBS в 50-мл пробирке. Клеточную суспензию нагревали в течение 30 минут при 56°С для инактивации бактерий.
50 мкл образца термоинактивированной N. meningitidis распределяли на “шоколадном” агаре Columbia с лошадиной кровью и инкубировали в течение 18 часов при 37°С в 5% СO2. В результате этого подтвердили, что все N. meningitidis были инактивированы. OD620 данной суспензии доводили до 0,1 единиц OD с использованием PBS в качестве контроля.
ELISA с использованием термоинактивированной N. Meningitidis
ELISA-анализы проводили с использованием термоинактивированной N. meningitidis в соответствии с нижеследующим протоколом. ELISA-планшеты сенсибилизировали в течение ночи термоинактивированными клетками (50 мкл инактивированных бактерий в PBS на каждую лунку 96-луночного планшета) и инкубированными при 4°С.
Ниже описаны стандартные протоколы ELISA, где все инкубирования проводили при 37°С в течение 1 часа. При этом были использованы PBS/3% BSA-блокирующий раствор, PBS/0,1% раствор твина для промывки, конъюгат вторичного антикроличьего антитела, конъюгированного со щелочной фосфатазой (ЩФ) (Sigma) и нитрофенилфосфатный реагент для детекции (Sigma, Fast Р). Данные считывали при 405 нм с использованием соответствующего ридера для микротитрационных планшетов. При этом использовали сыворотки, полученные через семь дней после первой бустер-вакцинации (через 35 дней после первой вакцинации).
Тестируемые антитела вырабатывались против генных продуктов, идентифицированных как SEQ ID NO:8, 102, 140, 158 и 202. В каждом случае результаты показали, что антисыворотка распознавала несколько различных штаммов N. meninglkidis В.
Ex vivo/in vivo-скрининг
Защита против менингококковых заболеваний у человека ассоциируется с присутствием бактерицидных антител против N. meningitidis (Goldscheider et al., J. Exp. Med., 1969; 129:1307-1326). Имеются также данные, которые позволяют предположить, что существует корреляция между присутствием детектируемой бактерицидной активности и протективным эффектом в in vivo-модели (работа Martin, J. Bacteriol., 2000; 83; 27-31). Поэтому генерированную антисыворотку использовали для оценки бактерицидной активности продуцированных антител.
Бактерицидные анализы были проведены с использованием неиммунной сыворотки и соответствующей кроличьей антисыворотки, вырабатываемой в ответ на антигены-кандидаты.
Коммерчески доступная кроличья сыворотка была использована как дополнительный источник после предварительного скрининга для предотвращения гибели комплемента. Там, где это необходимо, в качестве буфера использовали PBS Дульбекко (Gibco). Перед использованием в анализе штамм МС58 N. meningitidis культивировали при 37°С (5% CO2) в течение 14 часов.
200-400 к.о.е. МС58 в объеме 50 мкл инкубировали в присутствии добавки (50 мкл) со 100 мкл серийных разведений термоинактивированной сыворотки. В момент времени 0 образцы высевали на “шоколадный” агар Columbia с лошадиной кровью (Oxoid). После 60-минутного инкубирования число выживших бактерий оценивали путем их посева на “шоколадный” агар Columbia с лошадиной кровью (Oxoid). Бактерицидную активность выражали в процентах бактерий, выживших через 60 минут. Все образцы тестировали в дубликатах и высевали с тремя повторностями. При этом были использованы все соответствующие позитивные и негативные контроли. В каждом тестируемом образце бактерицидная активность значительно превышала бактерицидную активность неиммунной сыворотки.
Скрининг in vivo
Для оценки протективной эффективности вакцин-кандидатов взрослых мышей иммунизировали рекомбинантными белками, идентифицированными здесь как SEQ ID NO:102 и 108, и определяли протективный ответ путем заражения живой бактерией. Для каждого кандидата на вакцинирование 15-недельных мышей (6-недельных мышей balb/c) вакцинировали (подкожно) 25 мкг антигена в двух отдельных процедурах через интервалы в три недели.
Через одну неделю после проведения процедуры иммунизации эту группу заражали гомологичным бактериальным штаммом МС58. Бактерии инокулировали внутрибрюшинно в объеме 500 мкл в среде с сердечно-мозговым экстрактом/декстрановая среда с 0,5% железом в дозе 107 к.о.е. Предварительные результаты показали, что железо необходимо для инициации у этих животных бактериальных заболеваний. Указанную модель использовали ранее для демонстрации протективной эффективности вакцинации (Lissolo et al., Infect. Immujn, 1995; 63:884-890).
Контрольные группы включали животных, вакцинированных одним адъювантом (негативный контроль) или адъювантом вместе с очищенным РоrА (позитивный контроль). РоrА представляет собой внешний мембранный белок, экспрессируемый исключительно в N. meningitidis, и является главной мишенью для бактерицидных антител, индуцированных вакцинами на основе внешних мембранных везикул. Было также показано, что моноклональные антитела против РоrА обеспечивают пассивную защиту детенышей крыс, используемых в качестве модели. Однако РоrА значительно варьируется у разных штаммов, и, хотя он вырабатывает определенный иммунитет при заражении гомологичным штаммом, однако, он не является идеальным вакцинным кандидатом. После заражения проводили мониторинг на выживание животных. Крысы негативного контроля не выживали более 48 часов. Из мышей, вакцинированных РоrА, через 72 часа после вакцинации выживали 6 мышей. Из мышей, вакцинированных SEQ ID NO:102 и 108, выживали 5 и 3 мышей соответственно.
Claims (13)
1. Пептид, проявляющий свойства антигена Neisseria meningitidis, кодируемый нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 35, или характеризующийся, по крайней мере, 60% сходством или идентичностью к указанной последовательности на пептидном или нуклеотидном уровне, или его фрагмент, сохраняющий свойства антигена, для применения при изготовлении лекарственного препарата для лечения или предупреждения состояний, ассоциированных с инфекцией, вызываемой Neisseria или грам- отрицательными бактериями.
2. Пептид по п.1, отличающийся тем, что указанная последовательность имеет сходство или идентичность, по крайней мере, на 90%.
3. Пептид по п.1, отличающийся тем, что указанный пептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:36.
4. Пептид по любому из пп.1-3, где указанным состоянием является менингит.
5. Пептид, определенный в любом из пп. 1-3, для применения в скринирующем анализе для идентификации антимикробного лекарственного средства.
6. Полинуклеотид, кодирующий пептид, определенный в любом из пп.1-3, для применения при изготовлении лекарственного препарата для лечения или предупреждения состояний, ассоциированных с инфекцией, вызываемой Neisseria или грамотрицательными бактериями.
7. Полинуклеотид по п.6, где указанным состоянием является менингит.
8. Полинуклеотид, определенный в п.6, для применения в скринирующем анализе для идентификации антимикробного лекарственного средства.
9. Вакцина для лечения или предотвращения заболеваний или состояний, вызванных Neisseria meningitidis, содержащая аттенуированный мутантный штамм Neisseria meningitidis, который содержит мутацию, нарушающую экспрессию нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:35.
10. Вакцина для лечения или предотвращения заболеваний или состояний, вызванных Neisseria meningitidis, содержащая аттенуированный мутантный штамм Neisseria meningitidis, который содержит инсерционную инактивацию или делецию гена, нарушающую экспрессию нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:35.
11. Вакцина для лечения или предотвращения заболеваний или состояний, вызванных Neisseria meningitidis, содержащая аттенуированный мутантный штамм Neisseria meningitidis, который содержит мутацию, нарушающую экспрессию нуклеотидной последовательности SEQ ID NO:35, и дополнительно содержит гетерологичный антиген, гетерологичный терапевтический пептид или гетерологичную нуклеиновую кислоту.
12. Вакцина для предотвращения состояний, связанных с бактериальной инфекцией, вызванной Neisseria, содержащая пептид по любому из пп.1-3.
13. Антитело, полученное с помощью пептида, определенного в любом из пп. 1-3, которое связывается с пептидом, определенным в любом из пп. 1-3.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB0011108.8 | 2000-05-08 | ||
| GBGB0011108.8A GB0011108D0 (en) | 2000-05-08 | 2000-05-08 | Virulence gene and protein and their use |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005101623/13A Division RU2005101623A (ru) | 2000-05-08 | 2005-01-24 | Вирулентные гены, белки и их применение |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2002132891A RU2002132891A (ru) | 2004-08-10 |
| RU2252224C2 true RU2252224C2 (ru) | 2005-05-20 |
Family
ID=9891203
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2002132891/13A RU2252224C2 (ru) | 2000-05-08 | 2001-05-08 | Пептид со свойствами антигена neisseria meningitidis, кодирующий его полинуклеотид, вакцина для лечения или предотвращения заболеваний или состояний, вызванных neisseria meningitidis, (варианты), антитело, связывающееся с указанным пептидом |
| RU2005101623/13A RU2005101623A (ru) | 2000-05-08 | 2005-01-24 | Вирулентные гены, белки и их применение |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005101623/13A RU2005101623A (ru) | 2000-05-08 | 2005-01-24 | Вирулентные гены, белки и их применение |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20040087770A1 (ru) |
| EP (2) | EP1908839A3 (ru) |
| JP (1) | JP2003532404A (ru) |
| KR (3) | KR20030032948A (ru) |
| CN (2) | CN1427892A (ru) |
| AT (1) | ATE382056T1 (ru) |
| AU (1) | AU776508B2 (ru) |
| CA (1) | CA2408738A1 (ru) |
| CZ (1) | CZ20023642A3 (ru) |
| DE (1) | DE60132084T2 (ru) |
| GB (1) | GB0011108D0 (ru) |
| HU (1) | HUP0302481A2 (ru) |
| NO (1) | NO20025329L (ru) |
| NZ (3) | NZ549068A (ru) |
| RU (2) | RU2252224C2 (ru) |
| WO (1) | WO2001085772A2 (ru) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20060099543A (ko) | 1994-12-09 | 2006-09-19 | 임페리얼 컬리지 이노베이션스 리미티드 | 유전자의 동정 |
| CA2341349C (en) | 1998-09-04 | 2013-12-10 | Creatogen Aktiengesellschaft | Attenuated cells comprising sp12 mutants, carriers and compositions containing same, methods of production and uses thereof |
| DK1163343T3 (da) | 1999-03-12 | 2010-04-19 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Neisseria meningitidis antigene polypeptider, tilsvarende polynukleotider og beskyttende antistoffer |
| GB9910812D0 (en) | 1999-05-10 | 1999-07-07 | Microscience Ltd | Vaccine composition |
| SI2255826T1 (sl) * | 2002-08-02 | 2016-07-29 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Neisserijski vakcinski sestavki, ki obsegajo kombinacijo antigenov |
| GB0330007D0 (en) * | 2003-12-23 | 2004-01-28 | Imp College Innovations Ltd | Vaccines |
| US7709001B2 (en) | 2005-04-08 | 2010-05-04 | Wyeth Llc | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
| CA2604363C (en) | 2005-04-08 | 2015-06-16 | Wyeth | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
| AU2008304231A1 (en) * | 2007-09-27 | 2009-04-02 | Albany Molecular Research, Inc. | Isoindoline compounds for the treatment of spinal muscular atrophy and other uses |
| US8703153B2 (en) | 2008-06-16 | 2014-04-22 | Prokarium Ltd. | Salmonella vectored vaccines against Chlamydia and methods of use |
| GB0816447D0 (en) * | 2008-09-08 | 2008-10-15 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| CA2792691A1 (en) * | 2010-03-11 | 2011-09-15 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Immunogenic composition or vaccine against gram-negative bacterial, for example, neisserial, infection or disease |
| CN111118043B (zh) * | 2020-01-13 | 2022-07-05 | 吉林大学 | 一种苦豆子SaMET6基因克隆及其应用 |
| CN116042562B (zh) * | 2022-03-11 | 2023-10-20 | 山东恒鲁生物科技有限公司 | 重组酵母菌及其应用 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2047043A1 (en) * | 1990-07-19 | 1992-01-20 | Allen I. Oliff | Class ii protein of the outer membrane of neisseria meningitidis having immune enhancement properties |
| US5338664A (en) * | 1992-12-04 | 1994-08-16 | American Cyanamid Company | Assay for detection of bacterial iron transport inhibitors |
| US6121037A (en) * | 1994-10-18 | 2000-09-19 | Stojiljkovic; Igor | Bacterial hemoglobin receptor genes |
| KR20060099543A (ko) * | 1994-12-09 | 2006-09-19 | 임페리얼 컬리지 이노베이션스 리미티드 | 유전자의 동정 |
| FR2751000B1 (fr) * | 1996-07-12 | 1998-10-30 | Inst Nat Sante Rech Med | Adn specifiques des bacteries de l'espece neisseria meningitidis, leurs procedes d'obtention et leurs applications biologiques |
| US6472518B1 (en) * | 1996-10-24 | 2002-10-29 | Centers For Disease Control And Prevention, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Invasion associated genes from Neisseria meningitidis serogroup B |
| GB9711964D0 (en) * | 1997-06-09 | 1997-08-06 | Medical Res Council | Live attenuated vaccines |
| NZ502750A (en) * | 1997-08-15 | 2002-03-01 | Univ Utrecht | Vaccination against Neisseria meningitidis disease using Neisseria outer membrane protein (OMP) in particular, lactoferrin binding protein B (LbpB) |
| CA2671261A1 (en) * | 1997-11-06 | 1999-05-20 | Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. | Neisserial antigens |
| CN1245512C (zh) * | 1998-04-29 | 2006-03-15 | 惠氏控股有限公司 | 含重组菌毛蛋白的抗淋病奈瑟氏球茵或脑膜炎奈瑟氏球菌的疫苗 |
| GB9811260D0 (en) * | 1998-05-26 | 1998-07-22 | Smithkline Beecham Biolog | Novel compounds |
| EP1144998A3 (en) * | 1998-10-09 | 2002-08-07 | Chiron Corporation | Neisseria genomic sequences and methods of their use |
| US6610836B1 (en) * | 1999-01-29 | 2003-08-26 | Genome Therapeutics Corporation | Nucleic acid amino acid sequences relating to Klebsiella pneumoniae for diagnostics and therapeutics |
| ES2323845T3 (es) * | 1999-04-30 | 2009-07-27 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Secuencias genomicas de neisseria y procedimientos de uso. |
-
2000
- 2000-05-08 GB GBGB0011108.8A patent/GB0011108D0/en not_active Ceased
-
2001
- 2001-05-08 AT AT01925742T patent/ATE382056T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-05-08 CN CN01809191A patent/CN1427892A/zh active Pending
- 2001-05-08 CN CNA2005101362903A patent/CN1840665A/zh active Pending
- 2001-05-08 HU HU0302481A patent/HUP0302481A2/hu unknown
- 2001-05-08 AU AU52422/01A patent/AU776508B2/en not_active Ceased
- 2001-05-08 DE DE60132084T patent/DE60132084T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2001-05-08 US US10/275,026 patent/US20040087770A1/en not_active Abandoned
- 2001-05-08 NZ NZ549068A patent/NZ549068A/en unknown
- 2001-05-08 NZ NZ522277A patent/NZ522277A/en unknown
- 2001-05-08 CA CA002408738A patent/CA2408738A1/en not_active Abandoned
- 2001-05-08 NZ NZ532297A patent/NZ532297A/en unknown
- 2001-05-08 CZ CZ20023642A patent/CZ20023642A3/cs unknown
- 2001-05-08 KR KR1020027014876A patent/KR20030032948A/ko not_active Application Discontinuation
- 2001-05-08 WO PCT/GB2001/002003 patent/WO2001085772A2/en active IP Right Grant
- 2001-05-08 EP EP07114502A patent/EP1908839A3/en not_active Withdrawn
- 2001-05-08 RU RU2002132891/13A patent/RU2252224C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-05-08 JP JP2001582371A patent/JP2003532404A/ja active Pending
- 2001-05-08 EP EP01925742A patent/EP1287024B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-11-06 NO NO20025329A patent/NO20025329L/no not_active Application Discontinuation
-
2005
- 2005-01-24 RU RU2005101623/13A patent/RU2005101623A/ru not_active Application Discontinuation
-
2007
- 2007-08-17 US US11/893,649 patent/US20080241151A1/en not_active Abandoned
- 2007-08-29 KR KR1020070087191A patent/KR20070102447A/ko not_active Application Discontinuation
-
2008
- 2008-07-10 KR KR1020080067099A patent/KR20080080069A/ko not_active Application Discontinuation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| J.PARKHILL et al. Complete DNA Sequence of a serogroup a strain of Neisseria meningitidis Z 2491. Nature. Vol. 404, 30.03.2000, р.502-506. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1908839A2 (en) | 2008-04-09 |
| HUP0302481A2 (hu) | 2003-10-28 |
| GB0011108D0 (en) | 2000-06-28 |
| CZ20023642A3 (cs) | 2003-04-16 |
| NO20025329D0 (no) | 2002-11-06 |
| RU2005101623A (ru) | 2006-07-10 |
| NZ532297A (en) | 2005-07-29 |
| AU5242201A (en) | 2001-11-20 |
| EP1287024B1 (en) | 2007-12-26 |
| AU776508B2 (en) | 2004-09-09 |
| WO2001085772A3 (en) | 2002-03-28 |
| EP1908839A3 (en) | 2008-07-16 |
| CN1427892A (zh) | 2003-07-02 |
| KR20070102447A (ko) | 2007-10-18 |
| DE60132084T2 (de) | 2008-12-11 |
| CA2408738A1 (en) | 2001-11-15 |
| NO20025329L (no) | 2003-01-06 |
| CN1840665A (zh) | 2006-10-04 |
| KR20080080069A (ko) | 2008-09-02 |
| JP2003532404A (ja) | 2003-11-05 |
| NZ549068A (en) | 2008-03-28 |
| ATE382056T1 (de) | 2008-01-15 |
| KR20030032948A (ko) | 2003-04-26 |
| WO2001085772A2 (en) | 2001-11-15 |
| EP1287024A2 (en) | 2003-03-05 |
| US20080241151A1 (en) | 2008-10-02 |
| US20040087770A1 (en) | 2004-05-06 |
| NZ522277A (en) | 2004-05-28 |
| DE60132084D1 (de) | 2008-02-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20080241151A1 (en) | Virulence genes, proteins, and their use | |
| AU2016222520B2 (en) | Attenuated Streptococcus suis vaccines and methods of making and use thereof | |
| US7901692B2 (en) | Nontypeable Haemophilus influenzae virulence factors | |
| Stefanelli et al. | Molecular characterization of two Bordetella bronchiseptica strains isolated from children with coughs | |
| JP4785014B2 (ja) | 蛋白質 | |
| RU2313535C2 (ru) | Пептид neisseria meningitidis для терапевтического и диагностического применения | |
| US20030170261A1 (en) | Virulence genes, proteins, and their use | |
| WO2002077020A2 (en) | Virulence genes in h. influenzae | |
| US20100322955A1 (en) | Virulence genes, proteins, and their use | |
| JP2008525008A (ja) | 髄膜炎菌に対するワクチン | |
| Cheung | The immunomodulatory and cytotoxic effects of different forms of recombinant adenylate cyclase toxin | |
| JP2007517505A (ja) | 挿入変異体ライブラリーを血清でスクリーニングすることによる、抗原的に重要な髄膜炎菌抗原の同定 | |
| JP2009520491A (ja) | 髄膜炎菌に対するワクチン | |
| AU2008200445A1 (en) | Virulence genes, proteins, and their use | |
| AU2004203417A1 (en) | Virulence genes, proteins, and their use |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090509 |