RU2313535C2 - Пептид neisseria meningitidis для терапевтического и диагностического применения - Google Patents
Пептид neisseria meningitidis для терапевтического и диагностического применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2313535C2 RU2313535C2 RU2003107837/13A RU2003107837A RU2313535C2 RU 2313535 C2 RU2313535 C2 RU 2313535C2 RU 2003107837/13 A RU2003107837/13 A RU 2003107837/13A RU 2003107837 A RU2003107837 A RU 2003107837A RU 2313535 C2 RU2313535 C2 RU 2313535C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- peptide
- gram
- neisseria
- negative bacteria
- peptide according
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 45
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 title claims description 29
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims description 7
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 17
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 9
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 46
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 16
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 12
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 claims description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 7
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims 2
- 101710105699 D-alanyl-D-alanine carboxypeptidase DacB Proteins 0.000 claims 1
- 101710167890 Penicillin-binding protein 4 Proteins 0.000 claims 1
- 101710202103 Putative beta-lactamase HcpD Proteins 0.000 claims 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 abstract description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 2
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 17
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 7
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 7
- 101150009573 phoA gene Proteins 0.000 description 7
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 6
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010027202 Meningitis bacterial Diseases 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 2
- 201000009904 bacterial meningitis Diseases 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 2
- 208000013223 septicemia Diseases 0.000 description 2
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 2
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-L (5-bromo-4-chloro-1h-indol-3-yl) phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP([O-])(=O)[O-])=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700003860 Bacterial Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101000823106 Equus caballus Alpha-1-antiproteinase 2 Proteins 0.000 description 1
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 241001625930 Luria Species 0.000 description 1
- 206010062212 Neisseria infection Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 101150093941 PORA gene Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 101100084022 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) lapA gene Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010039203 Road traffic accident Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 108010023191 Streptomycin 3''-adenylyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000001055 blue pigment Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 244000000058 gram-negative pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000012750 in vivo screening Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- MVZXTUSAYBWAAM-UHFFFAOYSA-N iron;sulfuric acid Chemical compound [Fe].OS(O)(=O)=O MVZXTUSAYBWAAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000001989 nasopharynx Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000012770 revaccination Methods 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/22—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Neisseriaceae (F)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/522—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Пептид N. meningitidis имеет последовательность SEQ ID NO:10 и применяется для лечения или диагностики. Также предложены полинуклеотид, кодирующий такой пептид, клетка-хозяин, экспрессирующая пептид, микроорганизм, вакцина и антитело, специфичное к пептиду. Изобретение может быть использовано в медицине. 13 н. и 3 з.п. ф-лы, 2 табл.
Description
Область изобретения
Данное изобретение относится к бактериальным генам и белкам и их применениям. Более конкретно, оно относится к их применению в терапии, для иммунизации и в скрининге лекарственных средств.
Предпосылки изобретения
Neisseria meningitidis является грамотрицательным патогеном, который вызывает септический шок и бактериальный менингит. Эта бактерия является главной причиной бактериального менингита в развивающихся странах и причиной крупномасштабных эпидемий в Африке и Китае. В Великобритании Neisseria meningitidis является главной причиной смерти в детском возрасте, наряду с дорожными происшествиями. Эта бактерия в норме обитает в носоглотке человека и затем приобретает доступ к кровотоку, в котором обусловливает тяжелую септицемию или менингит. Хотя существующие в настоящее время противомикробные средства эффективно элиминируют эту бактерию из организма, смертность от менингококковой септицемии остается существенной. Было бы желательным обеспечение средств для лечения или предупреждения состояний, вызываемых Neisseria meningitidis, например, посредством иммунизации.
Сущность изобретения
Данное изобретение основано на обнаружении генов в Neisseria meningitidis, продукты которых могут быть локализованы на наружной поверхности этого организма и, следовательно, могут быть использованы в качестве мишеней для иммунотерапии.
Согласно одному аспекту данного изобретения описан пептид, кодируемый геном, имеющим любую из нуклеотидных последовательностей, идентифицированных в пункте 1 формулы изобретения, или его гомолог или функциональный фрагмент. Такой пептид пригоден для терапевтического или диагностического применения, например, после выделения.
Согласно второму аспекту данного изобретения полинуклеотид, кодирующий определенный выше пептид, может быть также применим в терапии или диагностике.
Согласно следующему аспекту данного изобретения этот пептид или полинуклеотид может быть использован для скрининга потенциальных противомикробных лекарственных средств.
Следующим аспектом данного изобретения является применение любого из идентифицированных здесь продуктов для лечения или предупреждения состояния, связанного с инфекцией Neisseria или грамотрицательными бактериями.
Описание изобретения
Данное изобретение основано на обнаружении генов, кодирующих пептиды, которые локализованы на клеточной поверхности Neisseria и которые, следовательно, применимы для приготовления лекарственных средств для лечения инфекции. Должно быть понятно, что ссылки на лечение включают в себя также превентивные мероприятия, например вакцинацию. Кроме того, хотя продукты данного изобретения предназначены прежде всего для лечения инфекций у пациентов-людей, предполагается, что ветеринарные применения также находятся в рамках данного изобретения.
Данное изобретение описывается со ссылкой на Neisseria meningitidis. Однако все штаммы Neisseria и многие другие грамотрицательные бактериальные штаммы включают в себя, по-видимому, родственные пептиды или белки, имеющие идентичность или гомологию аминокислотной последовательности с аминокислотными последовательностями, идентифицированными здесь. Организмы, которые, по-видимому, содержат эти пептиды, включают в себя, но не ограничиваются ими, роды Salmonella, Enterobacter, Klebsiella, Shigella и Yersinia.
Предпочтительно пептиды, которые могут быть применимы в различных аспектах данного изобретения, имеют большую, чем 40%-ную, гомологию с идентифицированными здесь пептидами. Более предпочтительно эти пептиды имеют большую, чем 60%-ную, гомологию последовательности. Наиболее предпочтительно эти пептиды имеют большую, чем 80%-ную, гомологию последовательности, например 95%-ную гомологию. Что касается полинуклеотидных последовательностей, идентифицированных здесь, родственные полинуклеотиды, которые могут быть применимы в различных аспектах данного изобретения, могут иметь большую, чем 40%-ную, идентичность с идентифицированными здесь последовательностями. Более предпочтительно эти полинуклеотидные последовательности имеют большую, чем 60%-ную, идентичность. Наиболее предпочтительно эти полинуклеотидные последовательности имеют большую, чем 80%-ную, идентичность, например 95%-ную идентичность.
Термины «гомология» и «идентичность» известны в данной области. Применение термина «идентичность» относится к сравнению последовательностей, основанному на идентичных совпадениях между соответственно идентичными положениями в сравниваемых последовательностях. Термин «гомология» относится к сравнению между аминокислотными последовательностями и учитывает не только идентичные аминокислоты в соответствующих положениях, но также функциональность гомологичных аминокислот в соответствующих положениях. Таким образом, гомология между полипептидными последовательностями указывает на функциональную гомологию, наряду с гомологией последовательностей.
Уровни идентичности между генными последовательностями и уровни идентичности или гомологии между аминокислотными последовательностями могут быть рассчитаны с использованием известных способов. В отношении данного изобретения публично доступные основанные на применении компьютера способы для определения идентичности и гомологии включают в себя BLASTP, BLASTN и FASTA (Altschul et al., J. Molec. Biol., 1990; 215:403-410, программу BLASTX, доступную из NCBI, и программу Gap из Genetics Computer Group, Madison WI. Уровни гомологии и идентичности, обеспеченные здесь, были получены с применением программы Gap, с использованием штрафа за пропуск 12 и штрафа за длину пропуска 4 для аминокислотных последовательностей и штрафа за пропуск 50 и штрафа за длину пропуска 3 для сравнений полинуклеотидных последовательностей.
Охарактеризовав ген в соответствии с данным изобретением, можно применять последовательность этого гена для поиска на родственные гены или пептиды в других микроорганизмах. Это может проводиться посредством поиска в существующих базах данных, например EMBL (Европейской лаборатории молекулярной биологии) или GenBank.
Упоминаемые здесь способы хорошо известны в данной области. Однако делается ссылка, в частности, на Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1989) и Ausubel et al., Protocols in Molecular Biology (1995), John Wiley and Sons, Inc.
Пептиды или белки данного изобретения могут быть очищены и выделены способами, известными в данной области. В частности, после идентификации последовательности генов становится возможным применение рекомбинантных способов для экспрессии этих генов в подходящем хозяине. Активные фрагменты и родственные молекулы могут быть идентифицированы и могут быть применимы в терапии. Например, пептиды или их активные фрагменты могут быть использованы в качестве антигенных детерминант в вакцине для индуцирования иммунной реакции. Они могут быть также использованы в получении антител для пассивной иммунизации или диагностических применений. Подходящие антитела включают в себя моноклональные антитела или их фрагменты, в том числе одноцепочечные Fv-фрагменты. Гуманизированные антитела также находятся в объеме данного изобретения. Способы получения антител будут очевидными для специалистов с квалификацией в данной области.
Активными фрагментами пептидов являются фрагменты, которые сохраняют биологическую функцию пептида. Например, при применении для индуцирования иммунной реакции этот фрагмент должен быть достаточного размера, так что антитела, генерируемые в ответ на этот фрагмент, будут различать между данным пептидом и другими пептидами на бактериальном микроорганизме. Обычно этот фрагмент будет иметь размер по меньшей мере 30 нуклеотидов (10 аминокислот), предпочтительно 60 нуклеотидов (20 аминокислот) и наиболее предпочтительно более чем 90 нуклеотидов (30 аминокислот).
Должно быть также понятно, что, кроме родственных молекул из других микроорганизмов, данное изобретение включает в себя модификации, произведенные относительно идентифицированных здесь пептидов и полинуклеотидов, которые не изменяют значимо биологическую функцию. Специалисту с квалификацией в данной области будет понятно, что вырожденность генетического кода может обусловливать полинуклеотиды с незначащими изменениями оснований в сравнении с указанными здесь полинуклеотидами, которые, однако, кодируют те же самые пептиды. Комплементарные полинуклеотиды также находятся в рамках данного изобретения. Рассматриваются также консервативные замены на уровне аминокислот, т.е. различные кислые или основные аминокислоты могут заменяться друг другом без существенной потери функции.
Приготовление вакцин на основе идентифицированных пептидов будет известным для специалистов в данной области. Вакцинные композиции могут быть приготовлены с подходящими носителями или адъювантами, например квасцами, по мере необходимости или по желанию, для обеспечения эффективной иммунизации против инфекции. Приготовление вакцинных композиций будет очевидным для квалифицированного специалиста.
Более часто, как хорошо известно специалистам с квалификацией в данной области, может быть выбрано подходящее количество активного компонента данного изобретения для терапевтического применения, как могут быть также выбраны подходящие носители или наполнители и способы введения. Эти факторы должны выбираться или определяться в соответствии с известными критериями, такими как природа/тяжесть подлежащего лечению состояния, тип и/или состояние здоровья субъекта и т.д.
В отдельном варианте продукты данного изобретения могут быть использованы в анализах скрининга для идентификации потенциальных противомикробных лекарственных средств или для определения вирулентности. Рутинные анализы скрининга известны специалистам с квалификацией в данной области и могут быть адаптированы с использованием продуктов данного изобретения подходящим образом. Например, продукты данного изобретения могут быть использованы в качестве мишени для потенциального лекарственного средства, причем способность данного лекарственного средства инактивировать мишень или связываться с этой мишенью указывает на его потенциальную противомикробную активность.
Гены данного изобретения могут также участвовать в вирулентности микроорганизма, и, следовательно, делетирование или инактивация такого гена может быть достаточной для получения аттенуированного (авирулентного) микроорганизма.
Аттенуированные микроорганизмы могут быть получены посредством мутации, которая нарушает экспрессию любого из идентифицированных здесь генов. Квалифицированному специалисту известны способы нарушения экспрессии конкретных генов. Способы, которые могут быть использованы, включают в себя способы инсерционной инактивации или делеции генов. Аттенуированные микроорганизмы данного изобретения могут также содержать дополнительные мутации в других генах, например во втором идентифицированном здесь гене или в отдельном гене, требующемся для роста данного микроорганизма, например, мутацию aro или, в связи с Salmonella, мутацию в гене, локализованном в районе SPI2, идентифицированном в WO-А-96/17951.
Аттенуированные микроорганизмы могут быть также использованы в качестве систем-носителей для доставки гетерологичных антигенов, терапевтических белков или нуклеиновых кислот (ДНК или РНК). В этом варианте аттенуированные микроорганизмы используют для доставки гетерологичных антигена, белка или нуклеиновой кислоты к конкретному сайту in vivo. Введение гетерологичных антигена, пептида или нуклеиновой кислоты в аттенуированный микроорганизм может проводиться общепринятыми способами, включающими в себя применение рекомбинантных конструкций, например векторов, содержащих полинуклеотиды, которые экспрессируют гетерологичный антиген или лекарственный белок, а также включают в себя подходящие промоторные последовательности. Альтернативно, ген, который кодирует гетерологичный антиген или белок, может быть включен в геном данного организма и использовать эндогенные промоторы для регуляции экспрессии.
Различные продукты данного изобретения могут быть также использованы в ветеринарных применениях.
Пептиды данного изобретения были идентифицированы следующим образом.
Идентификация пептидов
Частичную библиотеку генов хромосомной ДНК Neisseria meningitidis (штамма С311+) получали с использованием плазмидных векторов pFW-phoA1, pFW-phoA2 и pFW-phoA3 (Podbielski, A. et al., Gene 1996; 177:137-147). Эти плазмиды имеют конститутивную спектиномицин-аденилтрансферазу, являющуюся маркером устойчивости к антибиотику, который придает высокий уровень устойчивости к спектиномицину и, следовательно, облегчает отбор. Кроме того, эти векторы содержат укороченный (не имеющий лидерной последовательности) ген phoA щелочной фосфатазы Escherichia coli. Эти три вектора отличаются только в отношении рамки считывания, в которой существует безлидерный ген phoA, в сравнении с сайтом рестриктазы BamHI против хода транскрипции (слева) в рамке считывания. Поскольку этот укороченный ген phoA E. coli не имеет подходящей лидерной последовательности для экспорта этого фермента через бактериальную мембрану, внеклеточная активность щелочной фосфатазы отсутствует при размножении этих плазмид в phoA-мутанте E. coli (например, штамме DH5α). Хромогенный субстрат щелочной фосфатазы, ХР (5-бром-4-хлор-3-индолилфосфат), не входит в интактные бактериальные клетки и, следовательно, может быть детектирована только активность экспортируемой или поверхностно-связанной щелочной фосфатазы. Когда активность экспортируемой или поверхностно-связанной щелочной фосфатазы присутствует, хромогенный субстрат ХР расщепляется с образованием синего пигмента, и соответствующие бактериальные колонии могут быть идентифицированы по их синему цвету.
Плазмидную ДНК расщепляли полностью BamHI и дефосфорилировали с использованием щелочной фосфатазы мелкого ракообразного. Геномную ДНК Neisseria частично расщепляли Sau3AI, так что большинство фрагментов имели, по-видимому, размер 0,5-1,0 т.п.н. при наблюдении в виде полос на 1% агарозном геле, окрашенном бромидом этидия. Эти Sau3AI-фрагменты лигировали в приготовленные векторы pFW-phoA. Штамм E. coli DH5α был выбран в качестве клонирующего хозяина, так как он не содержит функционального гена phoA. Рекомбинантные плазмиды отбирали на агаре Луриа, содержащем 100 мкг/мл спектиномицина и 40 мкг/мл хромогенного субстрата ХР. Трансформанты E. coli, несущие плазмиды, содержащие инсерт ДНК Neisseria meningitidis, который добавляет сигнальную последовательность экспорта безлидерного гена phoA, были идентифицированы по синему цвету колоний.
ДНК-инсерт Neisseria meningitidis, который добавляет сигнальную последовательность экспорта безлидерного гена phoA, секвенировали, и был проведен поиск на полученную последовательность среди известных белков в базе данных GenBank. Результаты показаны в таблице 1.
Защитные свойства содержащих белок-кандидат вакцин
Гены, идентифицированные в этом скрининге, оценивали в качестве потенциальных кандидатов на белковые вакцины на основе способности этих клонированных, экспрессируемых белков индуцировать иммунную реакцию у кроликов, выражающуюся в том, что полученные антитела способны стимулировать опосредованный комплементом бактериолиз Neisseria meningitidis. Защитные реакции определяли заражением живыми бактериями мышей, иммунизированных рекомбинантными белками.
В целом, гены-кандидаты амплифицировали при помощи ПЦР, клонировали и кодируемый белок экспрессировали и очищали. Очищенный белок использовали для генерирования антител для применения в твердофазном иммуноферментном анализе (ELISA). Ген PorA также ПЦР-амплифицировали, клонировали, экспрессировали и очищали. Было показано, что моноклональные антитела против PorA пассивно защищали животных в крысиной модели инфекции с детенышами крыс (Saukkonen et al., Microb. Pathog., 1987; 3(4): 261-267). Таким образом, этот белок использовали в качестве положительного контроля в некоторых экспериментах. Было показано, что PorA был неспособен защищать животное против заражения различными штаммами N. meningitidis (Poolman, Infect. Dis., 1995; 4: 13), следовательно, любой кандидат, который способен генерировать иммунную реакцию против разнообразного диапазона штаммов N. meningitidis, представляет преимущества в сравнении с PorA.
ПЦР-амплификация ДНК
Гены-кандидаты амплифицировали при помощи ПЦР с использованием геномной ДНК из штамма МС58 в качестве матрицы (McGuinness et al., Lancet, 1991; 337:514). Праймеры приведены в списке в таблице 2. F обозначает прямой праймер, и R обозначает обратный праймер. Пару праймеров PRAF и PRAR использовали для амплификации ДНК гена PorA.
Клонирование вакцинных кандидатов
ПЦР-амплифицированную ДНК из кандидатов клонировали непосредственно в вектор pCRT7/CT-TOPO InVitrogen. Этот вектор обеспечивает слияние промотора Т7, сайта связывания рибосом и С-концевой метки 6хHis для облегчения экспрессии и очистки рекомбинантных белков с использованием металл-аффинной хроматографии.
Для клонирования реакцию (реакционную смесь) лигирования трансформировали в клетки ТОР10F' (Invitrogen). Препараты ДНК из ДНК-клонов трансформантов подвергали скринингу для проверки ориентации ДНК-инсерта. Клоны из кандидатов, которые, по-видимому, имеют ДНК-инсерт в правильной ориентации, секвенировали для подтверждения целостности 5'-района данной конструкции.
Экспрессия и очистка
Клоны-кандидаты испытывали на экспрессию генов-кандидатов после трансформации в компетентные клетки НMS174(DE3)pLysS (Invitrogen). Экспрессию клонов-кандидатов индуцировали IPTG (изопропилтиогалактозидом) и экспрессию анализировали при помощи электрофореза в ДСН-ПААГ и вестерн-блоттинга с использованием антител против His спустя четыре часа после индукции. Белок-кандидат очищали с использованием смолы Talon (металл-аффинной колонки, использующей метку 6хHis, клонированную на карбоксиконце данного белка (Clontech)), с использованием градиента имидазольного буфера для элюции белка из смолы (10-100 мМ).
Получение антител
Перед получением антител сыворотку животного подвергали скринингу на низкую реактогенность в отношении цельноклеточных Neisseria meningitidis в анализах ELISA. Антитела индуцировали против каждого из клонированных и очищенных кандидатов-белков в кроликах с использованием 100 мкг белков для начальной вакцинации с адъювантом Фрейнда и трех последующих бустер-иммунизаций (ревакцинаций) при 28-дневных интервалах с неполным адъювантом Фрейнда. Сыворотку собирали после каждой бустер-иммунизации для генерирования проб сыворотки.
ELISA против цельноклеточных убитых нагреванием N. meningitidis
Анализы ELISA против убитых нагреванием N. meningitidis проводили для подтверждения, что антитела, индуцированные к очищенным белкам, узнают клетки N. meningitidis. Эти анализы проводили на штамме МС58, а также на:
Neisseria meningitidis (В) Типа 1000
Neisseria meningitidis (В) Типа SW2 107
Neisseria meningitidis (В) Типа NGH38
Neisseria meningitidis (В) Типа NGE28
Neisseria meningitidis (В) Типа 2996
Эти штаммы являются преобладающими вызывающими заболевание штаммами и охватывают генетическое разнообразие этого вида на основе дендрограммы, генерируемой мультилокусным типированием последовательности.
Получение убитых нагреванием N. meningitidis
N. meningitidis выращивали на Колумбийском агаре с содержащей шоколад лошадиной кровью (Oxoid) в течение 14 часов при 37°С в 5% СО2. Клетки соскребали из чашки с агаром и ресуспендировали эти клетки в 20 мл PBS в пробирке на 50 мл. Клеточную суспензию нагревали в течение 30 минут при 56°С для убивания бактерий.
Пробу 50 мкл убитых нагреванием N. meningitidis распределяли на Колумбийском агаре с содержащей шоколад лошадиной кровью (Oxoid) и инкубировали в течение 18 часов при 37°С, 5% СО2. Это позволяет подтвердить, что все клетки N. meningitidis были убиты. Затем убитые нагреванием клетки промывали в PBS. ОП620 этой суспензии доводили до 0,1 отн. единиц против PBS.
ELISA убитых нагреванием N. meningitidis
Анализы ELISA проводили с использованием убитых нагреванием цельноклеточных N. meningitidis. Планшеты ELISA покрывали в течение ночи убитыми нагреванием клетками (50 мкл убитых бактерий в PBS помещали в каждую лунку 96-луночного планшета и инкубировали при 4°С). Использовали стандартные протоколы ELISA, в которых все инкубации проводили при 37°С в течение 1 часа. Использовали блокирующий раствор PBS/3% БСА, промывной раствор PBS/Твин 0,1%, АР-конъюгированное вторичное антитело против кроличьего иммуноглобулина (Sigma) и реагент детектирования нитрофенилфосфата Sigma Fast P (Sigma). Данные считывали при 405 нм с использованием подходящего микропланшет-ридера. Эти данные получали с использованием сывороток, получаемых спустя семь дней после первой бустер-вакцинации (день 35 после первой вакцинации).
Данные ELISA.
Результаты показали, что антисыворотки, индуцированные против каждого белка-кандидата, индуцировали сильную реакцию против различных штаммов N. meningitidis.
Скрининг in vivo.
Для оценки защитной эффективности вакцинных кандидатов взрослых мышей иммунизировали рекомбинантными белками и защитную реакцию определяли посредством заражения живыми бактериями.
Для каждого вакцинного кандидата 15 шестинедельных мышей balb/C вакцинировали (подкожно) 25 мкг антигена в два разных дня с интервалами три недели. Спустя одну неделю после конца схемы иммунизации группу заражали гомологичным бактериальным штаммом МС58. Бактерии инокулировали внутрибрюшинно в объеме 500 мкл раствором для инфузий головной мозг/сердце/средой с 0,5% железо-декстраном при дозе 1х106 КОЕ. Предварительные результаты показали, что железо необходимо для инициации бактериемического заболевания в этих животных. Эту модель использовали ранее для демонстрации защитной эффективности вакцинации (Lissolo et al., Infect. Immunol., 1995; 63: 884-890).
Контрольные группы включали животных, вакцинированных только адъювантом (отрицательный контроль), адъювантом, объединенным с очищенным PorA (положительный контроль), или аттенуированным гомологичным штаммом. После заражения выживание подвергали мониторингу.
Животные, вакцинированные кандидатом pho2-5, показали 80% (12/15) выживание в сравнении с невакцинированными контролями, где выживали 15% (2/15). Кандидат pho2-4 показал уровни защиты, эквивалентные относительно белка porA (13/15).
Животные, вакцинированные кандидатами pho2-10, pho1-94 или pho2-66, имели выживание 40% (6/15), 47% (7/15) или 27% (4/15), соответственно, в сравнении с невакцинированными контролями, где выживали 13% (2/15).
Claims (16)
1. Пептид, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10, или его гомолог в грамотрицательной бактерии, который представляет собой пенициллин-связывающий белок 4, или который по меньшей мере на 60% гомологичен или идентичен последовательности на пептидном уровне, или его фрагмент, состоящий по меньшей мере из 10 аминокислот, и который вызывает иммунный ответ, специфичный для пептида, для лечебного или диагностического применения.
2. Пептид по п.1, где гомолог по меньшей мере на 80% гомологичен или идентичен последовательности на пептидном уровне.
3. Пептид по п.1 или 2, где гомолог по меньшей мере на 90% гомологичен или идентичен последовательности на пептидном уровне.
4. Полинуклеотид, кодирующий пептид по любому из предыдущих пунктов, для лечебного или диагностического применения.
5. Клетка-хозяин, трансформированная гетерологичным полинуклеотидом по п.4 и, таким образом, экспрессирующая пептид по любому из пп.1-3.
6. Микроорганизм для лечебного или диагностического применения, содержащий мутацию, которая нарушает экспрессию любой из нуклеотидной последовательности, кодирующей пептид по п.1, где мутация является инсерционной инактивацией или делецией гена.
7. Микроорганизм по п.6, где этим микроорганизмом является Neisseria meningitidis.
8. Вакцина, содержащая пептид по любому из пп.1-3, использующаяся для лечения инфекции, вызванной грам-отрицательными бактериями.
9. Антитело, индуцированное против пептида по любому из пп.1-3, использующееся для лечения инфекции, вызванной грам-отрицательными бактериями.
10. Применение пептида по любому из пп.1-3 в скрининговом исследовании.
11. Применение полинуклеотида по п.4 в скрининговом исследовании.
12. Применение клетки-хозяина по п.5, в скрининговом исследовании.
13. Применение пептида по любому из пп.1-3 для производства лекарственного препарата для терапии или профилактики состояния, связанного с инфекцией, вызванной Neisseria или грам-отрицательными бактериями.
14. Применение полинуклеотида по п.4 для производства лекарственного препарата для терапии или профилактики состояния, связанного с инфекцией, вызванной Neisseria или грам-отрицательными бактериями.
15. Применение клетки-хозяина по п.5 для производства лекарственного препарата для терапии или профилактики состояния, связанного с инфекцией, вызванной Neisseria или грам-отрицательными бактериями.
16. Применение микроорганизма по п.6 или 7 для производства лекарственного препарата для терапии или профилактики состояния, связанного с инфекцией, вызванной Neisseria или грам-отрицательными бактериями.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB0020952.8A GB0020952D0 (en) | 2000-08-24 | 2000-08-24 | Genes and proteins and their uses |
| GB0020952.8 | 2000-08-24 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2003107837A RU2003107837A (ru) | 2004-08-10 |
| RU2313535C2 true RU2313535C2 (ru) | 2007-12-27 |
Family
ID=9898283
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003107837/13A RU2313535C2 (ru) | 2000-08-24 | 2001-08-21 | Пептид neisseria meningitidis для терапевтического и диагностического применения |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20040073000A1 (ru) |
| EP (1) | EP1373511A2 (ru) |
| JP (1) | JP2004507245A (ru) |
| KR (2) | KR20080052693A (ru) |
| CN (1) | CN1545552A (ru) |
| AU (2) | AU8229901A (ru) |
| CA (1) | CA2420261A1 (ru) |
| GB (1) | GB0020952D0 (ru) |
| HU (1) | HUP0300813A3 (ru) |
| NO (1) | NO20030821L (ru) |
| NZ (3) | NZ548093A (ru) |
| RU (1) | RU2313535C2 (ru) |
| WO (1) | WO2002016612A2 (ru) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1706481A2 (en) * | 2003-12-23 | 2006-10-04 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Vaccine |
| IL308456A (en) | 2005-04-08 | 2024-01-01 | Wyeth Llc | A multivalent pneumomuroral protein-polysaccharide conjugate preparation |
| US7709001B2 (en) | 2005-04-08 | 2010-05-04 | Wyeth Llc | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
| US8261648B1 (en) | 2011-10-17 | 2012-09-11 | Sequent Medical Inc. | Braiding mechanism and methods of use |
| CN116326547B (zh) * | 2023-01-06 | 2023-11-10 | 广东省农业科学院植物保护研究所 | 一种针对荔枝蒂蛀虫幼虫室内毒力测定方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004511201A (ja) * | 1998-10-09 | 2004-04-15 | カイロン コーポレイション | ナイセリアゲノム配列およびそれらの使用方法 |
| EP1123403A1 (en) * | 1998-10-22 | 2001-08-16 | The University Of Montana | OMP85 PROTEINS OF $i(NEISSERIA GONORRHOEAE) AND $i(NEISSERIA MENINGITIDIS), COMPOSITIONS CONTAINING SAME AND METHODS OF USE THEREOF |
| CA2929348A1 (en) * | 1999-05-19 | 2000-11-30 | Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. | Combination neisserial compositions |
| US20050100892A1 (en) * | 2002-07-22 | 2005-05-12 | Shea Terrance P.Jr. | Method of selecting genes for crop improvement |
-
2000
- 2000-08-24 GB GBGB0020952.8A patent/GB0020952D0/en not_active Ceased
-
2001
- 2001-08-21 JP JP2002522283A patent/JP2004507245A/ja active Pending
- 2001-08-21 RU RU2003107837/13A patent/RU2313535C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-08-21 EP EP01960908A patent/EP1373511A2/en not_active Withdrawn
- 2001-08-21 AU AU8229901A patent/AU8229901A/xx active Pending
- 2001-08-21 HU HU0300813A patent/HUP0300813A3/hu unknown
- 2001-08-21 WO PCT/GB2001/003759 patent/WO2002016612A2/en active IP Right Grant
- 2001-08-21 NZ NZ548093A patent/NZ548093A/en unknown
- 2001-08-21 NZ NZ524277A patent/NZ524277A/en unknown
- 2001-08-21 AU AU2001282299A patent/AU2001282299B2/en not_active Ceased
- 2001-08-21 CN CNA01815395XA patent/CN1545552A/zh active Pending
- 2001-08-21 US US10/362,327 patent/US20040073000A1/en not_active Abandoned
- 2001-08-21 KR KR1020087012388A patent/KR20080052693A/ko not_active Application Discontinuation
- 2001-08-21 CA CA002420261A patent/CA2420261A1/en not_active Abandoned
- 2001-08-21 KR KR10-2003-7002608A patent/KR20030045039A/ko not_active Application Discontinuation
- 2001-08-21 NZ NZ538864A patent/NZ538864A/en not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-02-21 NO NO20030821A patent/NO20030821L/no not_active Application Discontinuation
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| DATABASE EMBL 'Online', Accession No. AE002429, "Neisseria meningitides serogroup В strain MC58 section 71 of 206 of the complete genome". XP 002182227 "AAF41162.1", 15.03.2000. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NZ538864A (en) | 2007-03-30 |
| CN1545552A (zh) | 2004-11-10 |
| JP2004507245A (ja) | 2004-03-11 |
| NZ548093A (en) | 2007-11-30 |
| KR20030045039A (ko) | 2003-06-09 |
| CA2420261A1 (en) | 2002-02-28 |
| WO2002016612A3 (en) | 2003-10-09 |
| EP1373511A2 (en) | 2004-01-02 |
| KR20080052693A (ko) | 2008-06-11 |
| HUP0300813A2 (hu) | 2003-10-28 |
| GB0020952D0 (en) | 2000-10-11 |
| US20040073000A1 (en) | 2004-04-15 |
| NZ524277A (en) | 2005-09-30 |
| AU2001282299B2 (en) | 2007-08-02 |
| NO20030821D0 (no) | 2003-02-21 |
| HUP0300813A3 (en) | 2007-10-29 |
| WO2002016612A2 (en) | 2002-02-28 |
| AU8229901A (en) | 2002-03-04 |
| NO20030821L (no) | 2003-04-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Konkel et al. | Identification and molecular cloning of a gene encoding a fibronectin‐binding protein (CadF) from Campylobacter jejuni | |
| US20080241151A1 (en) | Virulence genes, proteins, and their use | |
| CN101573374A (zh) | 免疫原性PcpA多肽和其用途 | |
| JPH09503210A (ja) | ブランハメラ・カタラリスに対するワクチン | |
| EP1874806B1 (en) | Vaccine against burkholderia infections | |
| RU2313535C2 (ru) | Пептид neisseria meningitidis для терапевтического и диагностического применения | |
| El-Adhami et al. | Characterization of the gene encoding a 26-kilodalton protein (OMP26) from nontypeable Haemophilus influenzae and immune responses to the recombinant protein | |
| EP1240332B1 (en) | Streptococcus pyogenes virulence genes and proteins and their use | |
| Lo et al. | Characterization of two lipoproteins in Pasteurella multocida | |
| Ayalew et al. | Identification and immunogenicity of Mannheimia haemolytica S1 outer membrane lipoprotein PlpF | |
| CA2466156C (en) | Ehrlichia disulfide bond formation proteins and uses thereof | |
| AU2001282299A1 (en) | Genes and proteins, and their uses | |
| GB2455650A (en) | Brucella melitensis ABC transporter proteins for generating an immune response | |
| CN112301041B (zh) | 牛支原体p21蛋白及其应用 | |
| EP1196584A1 (en) | Tetanus toxin polypeptides | |
| AU2007202896A1 (en) | Genes and proteins, and their uses | |
| Nassrullah et al. | Cloning, Sequencing and Expression of the Brucella Melitensis Novel Lomr Protein. | |
| JP2009520491A (ja) | 髄膜炎菌に対するワクチン |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20090822 |