JP2003532378A

JP2003532378A - リンパ腫／黒色腫の発症に関与する新規Ｆｃ受容体型黒色腫をコードする５つの新規遺伝子の単離

Info

Publication number: JP2003532378A
Application number: JP2001540243A
Authority: JP
Inventors: ダラ−ファベラ、リッカルド
Original assignee: Columbia University of New York
Current assignee: Columbia University of New York
Priority date: 1999-11-29
Filing date: 2000-11-28
Publication date: 2003-11-05
Also published as: EP1235847A4; HK1049843B; CA2393126C; HK1161723A1; HK1166009A1; EP1235847A2; CY1117761T1; EP2363403A2; WO2001038490A3; EP2363403A3; EP2404927B1; EP2418212B1; ES2586850T3; ES2568625T3; ES2581239T3; CA2393126A1; EP2404927A2; DK1235847T3; EP2316843B1; EP2418212A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連（ＩＲＴＡ）タンパク質なる免疫グロブリン受容体をコードする単離された核酸分子を提供する。前記単離された核酸分子によってコードされるＩＲＴＡタンパク質（図１８Ａ、１８Ｂ−１−１８Ｂ−３、１８Ｃ−１−１８Ｃ−２、１８Ｄ−１−１８Ｄ−２、又は１８Ｅ−１−１８Ｅ−２の何れかに記載されたアミノ酸配列を有するＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、又はＩＲＴＡ５タンパク質）も提供される。前記単離された核酸分子のオリゴヌクレオチドが提供される。精製されたＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、又はＩＲＴＡ５タンパク質のエピトープに対して誘導された抗体、及びこのような抗体又はオリゴヌクレオチドを含む薬学的組成物も提供される。被験者から得たサンプル中のＢ細胞悪性腫瘍を検出する方法、患者から得たサンプル中のＢ細胞悪性腫瘍を診断する方法、サンプル中のヒトＩＲＴＡタンパク質を検出する方法、及びＢ細胞癌を有する被験者を治療する方法も提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本出願は、１９９９年１１月２９日に出願された同時係属米国仮出願第６０／
１６８，１５１号の優先権を主張し、その内容は本出願に参考文献として援用さ
れる。

【０００２】本明細書に開示されている発明は、国立癌研究所のＮＣＩグラント第ＣＡ４４
０２９号の下での研究の過程で為された。従って、合衆国政府は本発明に一定の
権利を有する。

【０００３】本出願を通じて、様々な参考文献が括弧内に参照されている。本発明が属する
技術分野の技術水準をより完全に記載するために、これらの文献の開示内容全体
を本出願に参考文献として援用する。これらの参考文献の完全な書誌的事項の引
用は、特許請求の直前、本出願の末尾に記載されている。

【０００４】

【発明の背景】

染色体１ｑ２１の異常は、Ｂ細胞リンパ腫及び骨髄腫を含むＢ細胞悪性腫瘍に
共通するが、これらの異常の標的となる遺伝子の大部分は不明である。骨髄腫細
胞株中のｔ（１；１４）（ｑ２１；ｑ３２）染色体転座の限界点をクローニング
することによって、本発明者らは、Ｆｃ及び阻害的受容体ファミリーに対して相
同性を有する細胞表面受容体をコードする２つの新規遺伝子ＩＲＴＡ１及びＩＲ
ＴＡ２を同定した。両遺伝子は、本来、成熟Ｂ細胞中で発現されるが、末梢リン
パ系臓器中での分布は異なっている。すなわち、ＩＲＴＡ１は周辺帯Ｂ細胞に発
現されているのに対して、ＩＲＴＡ２は胚中心の中心細胞及び免疫芽細胞中にも
発現されている。ｔ（１；１４）転座の結果、ＩＲＴＡ１シグナルペプチドは免
疫グロブリンＣαドメインに融合され、キメラＩＲＴＡ１／Ｃａ融合タンパク質
を与える。１ｑ２１異常を有する多発性骨髄腫及びバーキットリンパ腫細胞株で
は、ＩＲＴＡ２の発現は調節解除されている。このように、ＩＲＴＡ１とＩＲＴ
Ａ２は、Ｂ細胞の発育とリンパ腫の生成において、重要な役割を果たしている可
能性がある新規免疫受容体である。

【０００５】Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（Ｂ−ＮＨＬ、Ｂ−ｃｅｌｌＮｏｎ−Ｈｏｄｇｋ
ｉｎ’ｓＬｙｍｐｈｏｍａ）及び多発性骨髄腫（ＭＭ、ＭｕｌｔｉｐｌｅＭ
ｙｅｌｏｍａ）は、前胚中心（ＧＣ、ＧｅｒｍｉｎａｌＣｅｎｔｅｒ）（マン
トル細胞）、ＧＣ（ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒ，ｄｉｆｆｕｓｅｌａｒｇｅｃ
ｅｌｌ，Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ）、又は後ＧＣＢ細胞（ＭＭ）に対応する表現
型を有する成熟Ｂ細胞由来の多種多様な悪性腫瘍群から構成される（総説として
、ＧａｉｄａｎｏａｎｄＤａｌｌａ−Ｆａｖｅｒａ，１９９７；Ｋｕｐｐｅ
ｒｓｅｔａｌ．，１９９９）。これらの悪性腫瘍の病因についての洞察は、
特定の疾病サブタイプに特徴的な再発性クローン性染色体異常の同定によって得
られている。これらの転座の結果、対となる染色体中に位置する異種の転写制御
因子にそれらが隣接することによって、原癌遺伝子の転写脱制御が共通して起こ
る（ＧａｉｄａｎｏａｎｄＤａｌｌａ−Ｆａｖｅｒａ，１９９７）。これら
の異種性転写制御因子は、免疫グロブリン（ＩＧ）遺伝子座又は他の対染色体座
に由来し得る。バーキットリンパ腫（ＢＬ）におけるｔ（８；１４）（ｑ２４；
ｑ３２）中のＭＹＣ（Ｄａｌｌａ−Ｆａｖｅｒａｅｔａｌ．，１９８２；Ｔ
ａｕｂｅｔａｌ．，１９８２）、マントル細胞リンパ球（ＭＣＬ、Ｍａｎｔ
ｌｅｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａ）（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｅｔａｌ．，１
９９１）及び多発性骨髄腫（ＭＭ）（Ｒｏｎｃｈｅｔｔｉｅｔａｌ．，１９
９９）中のｔ（１１；１４）（ｑ１３；ｑ３２）によって調節解除されたＣＣＮ
Ｄ１遺伝子、濾胞性リンパ腫（ＦＬ、ｆｏｌｌｉｃｕｌａｒｌｙｍｐｈｏｍａ
）（Ｂａｋｈｓｈｉｅｔａｌ．，１９８５）中のｔ（１４；１８）（ｑ３２
；ｑ２１）に含まれるＢＣＬ２、びまん性巨大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ、ｄｉ
ｆｆｕｓｅｌａｒｇｅＢ−ｃｅｌｌｌｙｍｐｈｏｍａ）中のｔ（３；１４
）（ｑ２７；ｑ３２）におけるＢＣＬ６（Ｙｅｅｔａｌ．，１９９３）、ｔ
（４；１４）（ｐ１６；ｑ３２）におけるＦＧＦＲ３（Ｃｈｅｓｉｅｔａｌ
．，１９９７）、ｔ（１４；１６）（ｑ３２；ｑ２３）中のＭＡＦ（Ｃｈｅｓｉ
ｅｔａｌ．，１９９８）、多発性骨髄腫（ＭＭ）におけるｔ（６；１４）（
ｐ２５；ｑ３２）中のＭＵＭ１／ＩＲＦ４（Ｉｉｄａｅｔａｌ．，１９９７
）が例に含まれる。これらの癌遺伝子が同定されることによって、それらが対応
する悪性腫瘍の発病及び診断について価値ある洞察が得られた。

【０００６】バンド１ｑ２１〜ｑ２３に含まれる染色体異常は、Ｂ−ＨＮＬとＭＭの両者に
おいて最も高い頻度で見られる遺伝的病変の１つである。ＮＨＬサブタイプのう
ち、転座と重複を含む１ｑ２１〜ｑ２３での転座限界点は、多くの場合、単一の
染色体異常として、濾胞性及びびまん性巨大Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＣＬ）の１７
〜２０％、周辺帯Ｂ細胞リンパ腫の３９％（Ｏｆｆｉｔｅｔａｌ．，１９９
１；Ｗｈａｎｇ−Ｐｅｎｇｅｔａｌ．，１９９５；Ｃｉｇｕｄｏｓａｅｔ
ａｌ．，１９９９）、及びバーキットリンパ腫の２７〜３８％で報告されてお
り、それらは、ＭＹＣ癌原遺伝子が関与する転座後の細胞遺伝学的異常のうち２
番目に一般的なものである（ＢｅｒｇｅｒａｎｄＢｅｒｎｈｅｉｍ，１９８
５；Ｋｏｒｎｂｌａｕｅｔａｌ．，１９９１）。比較ゲノムハイブリダイゼ
ーション（ＣＧＨ）によって、ＤＬＣＬ症例の１０％で、１ｑ２１−ｑ２３は高
レベル増幅の再発部位としても同定されている（Ｒａｏｅｔａｌ．，１９９
８）。ＭＭでは、１ｑ２１−ｑ３２領域のトリソミーが、症例の２０〜３１％で
報告されており（Ｓａｗｙｅｒｅｔａｌ．，１９９５）、８０％の細胞株及
び４０％の原発性腫瘍に、１ｑ１２−ｑｔｅｒ領域の増幅が見出され（Ａｖｅｔ
−Ｌｏｉｓｅａｕｅｔａｌ．，１９９７）、異常な核型を有する患者の２３
％に、隣接する１ｑ２１−２２領域の多重重複を伴った、ランダムでない１ｑの
不均等な全腕転座が見出された（Ｓａｗｙｅｒｅｔａｌ．，１９９８）。

【０００７】Ｂ細胞悪性腫瘍に１ｑ２１の構造的な再編成（ｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ）
が高い頻度で関与しているということは、この遺伝子座が、これらの疾病の発症
にとって必須の遺伝子を有しているかもしれないということを示唆している。前
Ｂ細胞急性リンパ芽性白血病細胞株中のｔ（１；１４）（ｑ２１；ｑ３２）をク
ローニングすることによって、この症例でのみ調節解除され（Ｗｉｌｌｉｓｅ
ｔａｌ．，１９９８）、他の症例には関与していない新規遺伝子ＢＣＬ９がこ
れまでに同定されている。最近の報告は、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）細胞株中にｔ
（１；２２）（ｑ２２；ｑ１１）を特定し、低親和性のＩｇＧＦｃ受容体であ
るＦＣＧＲＩＩＢをコードするＦＣＧＲ２Ｂ遺伝子座がこの細胞株とさらに２つ
のＦＬ症例で標的とされることが見出された（Ｃａｌｌａｎａｎｅｔａｌ．
，２０００）。最後に、ＮＨＬ中のｔ（１；１４）（ｑ２１；ｑ３２）の限界点
の近傍（Ｄｙｏｍｉｎｅｔａｌ．，２０００；Ｇｉｌｌｅｓｅｔａｌ．
，２０００）にＭＵＣ１遺伝子座が同定され、１ｑ２１異常を有するＮＨＬの６
％にＭＵＣ１遺伝子座の再編成が見出された（Ｄｙｏｍｉｎｅｔａｌ．，２
０００）。これらの変化の大部分には説明が与えられていないなので、これらの
結果は、１ｑ２１限界点の不均一性と該遺伝子座に位置する更なる候補癌遺伝子
を同定することの必要性を強調するものである。

【０００８】本研究の目的は、Ｂ細胞悪性腫瘍における１ｑ２１染色体再編成の構造をさら
に探究することであった。この目的のために、本発明者らは、骨髄腫細胞株ＦＲ
４の中に存在するｔ（１；１４）（ｑ２１；ｑ３２）の分子クローニングアプロ
ーチを利用した。本発明者らは、１ｑ２１異常によって、それぞれ別々に標的と
される２つの新規遺伝子を同定した。これらの遺伝子は、免疫グロブリン受容体
ファミリーの５つの新規メンバーであるＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、
ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴＡ５（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓｕｐｅｒｆａ
ｍｉｌｙＲｅｃｅｐｔｏｒＴｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎＡｓｓｏｃｉａｔ
ｅｄｇｅｎｅｓ１、２、３、４、及び５）をコードしており、これらは正常な
リンパ球の機能及びＢ細胞の悪性腫瘍にとって重要である可能性がある。

【０００９】

【発明の概要】

本発明は、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連（ＩＲＴＡ）タ
ンパク質なる免疫グロブリン受容体をコードする単離された核酸分子を提供する
。

【００１０】本発明は、ＩＲＴＡポリペプチド（タンパク質）を作製する方法であって、（
ａ）免疫グロブリン受容体（免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連
（ＩＲＴＡ））タンパク質をコードする単離された核酸を備えたベクターを適切
な宿主細胞中に導入することと、（ｂ）得られた細胞を培養して、前記ポリペプ
チドを産生させることとを備えた方法を提供する。

【００１１】本発明は、単離された核酸分子であって、ＩＲＴＡタンパク質をコードする前
記単離された核酸分子の配列中に含まれるユニークな配列と特異的にハイブリダ
イズし得る少なくとも１５の連続したヌクレオチドを含む単離された核酸分子を
提供する。ある態様では、前記ＩＲＴＡタンパク質は、それぞれ図１８Ａ、１８
Ｂ−１−１８Ｂ−３、１８Ｃ−１−１８Ｃ−２、１８Ｄ−１−１８Ｄ−２、又は
１８Ｅ−１−１８Ｅ−２の何れかに記載されているアミノ酸配列を有するＩＲＴ
Ａ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、若しくはＩＲＴＡ５タンパク質、
又はそれらの断片であり得る。

【００１２】本発明は、被験者から得たサンプル中のＢ細胞悪性腫瘍又は一種のＢ細胞悪性
腫瘍を検出する方法であって、前記Ｂ細胞悪性腫瘍は１ｑ２１染色体再編成を含
み、（ａ）前記被験者から得た前記サンプルからＲＮＡを取得することと、（ｂ
）ヒトＩＲＴＡタンパク質をコードする単離されたＲＮＡの配列中に含まれるユ
ニークな配列と特異的にハイブリダイズすることができ、検出可能なマーカーで
標識された核酸分子に、工程（ａ）の前記ＲＮＡがハイブリダイズし得る条件下
で、ヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴＡ５か
らなる群から選択されるヒトＩＲＴＡタンパク質をコードする単離されたＲＮＡ
の配列中に含まれるユニークな配列と特異的にハイブリダイズし得る少なくとも
１５の連続したヌクレオチドの核酸分子に、工程（ａ）の前記ＲＮＡを接触させ
ることと、（ｃ）工程（ｂ）における何らかのハイブリダイゼーションを検出す
ることとを備え、ハイブリダイゼーションが検出されることが、前記サンプル中
にＢ細胞悪性腫瘍又は一種のＢ細胞悪性腫瘍が存在することの指標となる方法を
提供する。

【００１３】本発明は、ヒトＩＲＴＡタンパク質をコードするｍＲＮＡ分子に特異的にハイ
ブリダイズして、前記ｍＲＮＡ分子の過剰発現を抑え得る配列を有するアンチセ
ンスオリゴヌクレオチドを提供する。

【００１４】本発明は、図１８Ａに示されたアミノ酸配列（配列番号１）を含む精製された
ＩＲＴＡ１タンパク質を提供する。

【００１５】本発明は、図１８Ｂ−１−１８Ｂ−３に示されたアミノ酸配列（配列番号３）
を含む精製されたＩＲＴＡ２タンパク質を提供する。

【００１６】本発明は、図１８Ｃ−１−１８Ｃ−２に示されたアミノ酸配列（配列番号５）
を含む精製されたＩＲＴＡ３タンパク質を提供する。

【００１７】本発明は、図１８Ｄ−１−１８Ｄ−２に示されたアミノ酸配列（配列番号７）
を含む精製されたＩＲＴＡ４タンパク質を提供する。

【００１８】本発明は、図１８Ｅ−１−１８Ｅ−２に示されたアミノ酸配列（配列番号９）
を含む精製されたＩＲＴＡ５タンパク質を提供する。

【００１９】本発明は、図１８Ａ、１８Ｂ−１−１８Ｂ−３、１８Ｃ−１−１８Ｃ−２、１
８Ｄ−１−１８Ｄ−２、又は１８Ｅ−１−１８Ｅ−２の何れかに示されているア
ミノ酸配列を有する精製されたＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ
４、若しくはＩＲＴＡ５タンパク質、又はそれらの断片のエピトープに対して誘
導された１又は複数の抗体を提供する。

【００２０】本発明は、ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴＡ
５からなる群から選択される精製されたＩＲＴＡタンパク質に対して誘導された
抗体を提供する。

【００２１】本発明は、ヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲ
ＴＡ５からなる群から選択されるＩＲＴＡタンパク質を発現している癌細胞に結
合して前記癌細胞の増殖を抑えるのに有効である、ＩＲＴＡタンパク質に対して
誘導された一定量の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物を提
供する。

【００２２】本発明は、本明細書に記載されたＩＲＴＡタンパク質をコードする核酸分子の
オリゴヌクレオチドであって、ヒトＩＲＴＡタンパク質の過剰発現を抑えるのに
有効な一定量のオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的
組成物を提供する。

【００２３】本発明は、被験者から得たサンプル中の１ｑ２１染色体の再編成を備えたＢ細
胞悪性腫瘍を診断する方法であって、（ａ）前記被験者から前記サンプルを取得
することと、（ｂ）精製されたＩＲＴＡタンパク質に対して誘導された抗体であ
って、ヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴＡ５
ＩＲＴＡタンパク質からなる群から選択されるヒトＩＲＴＡタンパク質と特異
的に結合し得る抗体に、検出可能なマーカーで標識された抗体が前記癌細胞の細
胞表面上に存在するヒトＩＲＴＡタンパク質に結合し得る条件下で、工程（ａ）
の前記サンプルを接触させることと、（ｃ）工程（ｂ）において何らかの結合を
検出することとを備え、結合の検出が、前記サンプル中にＢ細胞悪性腫瘍の診断
を示す方法を提供する。

【００２４】本発明は、サンプル中のヒトＩＲＴＡタンパク質を検出する方法であって、（
ａ）上記抗ＩＲＴＡ抗体の何れかに、該抗体と前記サンプル中の前記ＩＲＴＡと
の間で複合体が形成され得る条件下で、前記サンプルを接触させることと、（ｂ
）工程（ａ）で形成された前記複合体を検出することによって、前記サンプル中
にヒトＩＲＴＡが存在することを検出することとを備えた方法を提供する。

【００２５】本発明は、Ｂ細胞癌を有する患者を治療する方法であって、ＩＲＴＡタンパク
質を発現している癌細胞に結合して、該癌細胞の増殖を抑えるのに有効な一定量
の抗ＩＲＴＡ抗体と薬学的に許容される担体とを前記患者に投与することによっ
て、前記患者を治療することを備えた方法を提供する。

【００２６】本発明は、Ｂ細胞癌を有する患者を治療する方法であって、ヒトＩＲＴＡタン
パク質をコードするｍＲＮＡ分子に特異的にハイブリダイズして、前記ヒトＩＲ
ＴＡタンパク質の過剰発現を抑えて、１又は複数のＩＲＴＡタンパク質を発現し
ている癌細胞の細胞増殖を停止させ、又は細胞死を誘導させ得る配列を有する一
定量のアンチセンスオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容される担体とを前記患
者に投与することにより前記患者を治療することを備えた方法を提供する。

【００２７】本発明は、本明細書に記載された有効量の何れかの前記オリゴヌクレオチドと
、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物も提供する。

【００２８】本発明は、本明細書に記載された何れかのＩＲＴＡタンパク質のエピトープに
対して誘導された有効量の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成
物も提供する。

【００２９】

【発明の詳細な記述】

特定のヌクレオチドを表示するために、本明細書を通じて、以下の標準的な略
号、Ｃ＝シトシン、Ａ＝アデノシン、Ｔ＝チミジン、及びＧ＝グアノシンを使用
する。

【００３０】本発明は、免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連（ＩＲＴＡ）タ
ンパク質なる免疫グロブリン受容体をコードする単離された核酸分子を提供する
。

【００３１】本明細書において使用する「免疫グロブリン受容体転座関連」遺伝子、「ＩＲ
ＴＡ」とは、Ｂ細胞中の新規免疫グロブリンスーパーファミリー細胞表面受容体
をコードする核酸分子であって、Ｂ細胞の発育に重要であり、その異常な発現（
例えば、調節解除された発現）が細胞表面のＢ細胞の免疫応答を擾乱せしめるた
めに、リンパ腫形成を含むＢ細胞悪性腫瘍に関与する核酸分子である。

【００３２】第１の実験において「ＭＵＭ−２」及び「ＭＵＭ−３」タンパク質と表記され
るタンパク質をコードする核酸分子は、現在では、「ＩＲＴＡ−１」及び「ＩＲ
ＴＡ−２」遺伝子（すなわち、それぞれＩＲＴＡ−１及びＩＲＴＡ−２タンパク
質をコードする核酸分子）と称されている。ＩＲＴＡ−３、−４、及び−５タン
パク質は、ＩＲＴＡ−１及びＩＲＴＡ−２タンパク質と同様に、同じ免疫グロブ
リン遺伝子スーパーファミリーの一員である。

【００３３】免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連（ＩＲＴＡ）タンパク質な
る免疫グロブリン受容体をコードする上記の単離された核酸分子のある態様では
、コードされるＩＲＴＡタンパク質は、図１８Ａに記されているアミノ酸配列（
配列番号１）を含むＩＲＴＡ１タンパク質である。

【００３４】上記の単離された核酸分子の別の態様では、コードされるＩＲＴＡタンパク質
は、図１８Ｂ−１−１８Ｂ−３に記されているアミノ酸配列（配列番号３）を含
むＩＲＴＡ２タンパク質である。

【００３５】上記の単離された核酸分子のさらなる態様では、コードされるＩＲＴＡタンパ
ク質は、図１８Ｃ−１−１８Ｃ−２に記されているアミノ酸配列（配列番号５）
を含むＩＲＴＡ３タンパク質である。

【００３６】上記の単離された核酸分子のさらに別の態様では、コードされるＩＲＴＡタン
パク質は、図１８Ｄ−１−１８Ｄ−２に記されているアミノ酸配列（配列番号７
）を含むＩＲＴＡ４タンパク質である。

【００３７】上記の単離された核酸分子のさらに別の態様では、コードされるＩＲＴＡタン
パク質は、図１８Ｅ−１−１８Ｅ−２に記されているアミノ酸配列（配列番号９
）を含むＩＲＴＡ５タンパク質である。

【００３８】上記全ての単離された核酸分子の別の態様では、前記核酸分子はＤＮＡである
。さらなる態様では、前記ＤＮＡはｃＤＮＡである。別の態様では、前記ＤＮＡ
はゲノムＤＮＡである。さらに別の態様では、前記核酸分子はＲＮＡ分子である
。さらに別の態様では、前記ＤＮＡ分子は、図１８Ａに記載されたヌクレオチド
配列（配列番号２）を有するｃＤＮＡである。別の態様では、前記ＤＮＡ分子は
、図１８Ａに記載されたヌクレオチド配列（配列番号４）を有するｃＤＮＡであ
る。さらなる態様では、前記ＤＮＡ分子は、図１８Ａに記載されたヌクレオチド
配列（配列番号６）を有するｃＤＮＡである。別の態様では、前記ＤＮＡ分子は
、図１８Ａに記載されたヌクレオチド配列（配列番号８）を有するｃＤＮＡであ
る。ある態様では、前記ＤＮＡ分子は、図１８Ａに記載されたヌクレオチド配列
（配列番号１０）を有するｃＤＮＡである。前記単離された核酸分子の好ましい
態様では、前記核酸分子は、ヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴ
Ａ４、又はＩＲＴＡ５タンパク質をコードする。別の態様では、前記核酸分子は
哺乳類のＩＲＴＡ１タンパク質をコードする。哺乳類のＩＲＴＡ１タンパク質は
マウスのＩＲＴＡ１タンパク質であり得る。別の好ましい態様では、前記単離さ
れた核酸分子は、ＤＮＡ転写のプロモータ−に作用可能に連結されている。前記
単離された核酸分子のさらに別の好ましい態様では、前記プロモーターは、細菌
、酵母、昆虫、植物、又は哺乳類のプロモーターから構成される。

【００３９】本発明は、ＩＲＴＡタンパク質（哺乳類のＩＲＴＡタンパク質が含まれ、ヒト
及びマウスのＩＲＴＡタンパク質が好ましいが、これらに限定されない）をコー
ドする上記単離された核酸分子の何れかを備えたベクターを提供する。ある態様
では、前記ベクターはプラスミドである。

【００４０】本発明は、ＩＲＴＡタンパク質をコードする上記単離された核酸分子の何れか
を備えた上記ベクターを含む宿主細胞を提供する。好ましくは、このようなベク
ター中の前記単離された核酸分子は、ＤＮＡ転写のプロモーターに作用可能に連
結されている。前記宿主細胞の別の態様では、前記細胞は、細菌細胞、植物細胞
、及び昆虫細胞、及び哺乳類細胞からなる群から選択される。

【００４１】本発明は、ＩＲＴＡポリペプチド（タンパク質）を作製する方法であって、（
ａ）免疫グロブリン受容体（免疫グロブリンスーパーファミリー受容体転座関連
（ＩＲＴＡ））タンパク質をコードする単離された核酸を備えたベクターを適切
な宿主細胞中に導入することと、（ｂ）得られた細胞を培養して、前記ポリペプ
チドを産生させることとを備えた方法を提供する。さらなる態様では、上記方法
によって産生されるＩＲＴＡタンパク質は回収してもよく、さらなる態様では、
完全に、又は部分的に精製してもよい。ある態様では、前記ＩＲＴＡタンパク質
は、ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、又はＩＲＴＡ５タンパ
ク質の何れかであり得る。さらなる態様では、前記ＩＲＴＡタンパク質は何れも
、哺乳類のタンパク質であり得る。さらなる態様では、前記哺乳類のタンパク質
は、ヒト又はマウスのＩＲＴＡタンパク質であり得る。

【００４２】ＩＲＴＡ遺伝子（ＩＲＴＡタンパク質（ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３
、ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴＡ５）をコードする核酸分子）は、これによってコー
ドされるＩＲＴＡタンパク質の作製に有用である。ＩＴＲＡタンパク質は、抗体
の作製に有用である。このような抗体は、血液病理学におけるリンパ腫のサブタ
イプの識別診断用試薬として使用される。ＩＲＴＡタンパク質に対して誘導され
、ＩＲＴＡタンパク質に特異的に結合する抗体も、治療的な用途で、すなわち、
腫瘍細胞を特異的に標的とするために、「Ｒｉｔｕｘｉｍａｂ」（ＦＤＡによっ
て、再発性のＣＤ２０陽性リンパ腫の治療用に承認された抗ＣＤ２０抗体（Ｆｏ
ｏｎＫ．，ＣａｎｃｅｒＪ．６（５）：２７３））と同じように使用し、投
与することができる。抗ＩＲＴＡ１、抗ＩＲＴＡ２、抗ＩＲＴＡ３、抗ＩＲＴＡ
４、及び抗ＩＲＴＡ５抗体は、正常なＢ細胞及び腫瘍Ｂ細胞の生物学の調査研究
において、Ｂ細胞の特定のサブセットを単離するための有用なマーカーでもある
。さらに、抗ＩＲＴＡ１、抗ＩＲＴＡ２、抗ＩＲＴＡ３、抗ＩＲＴＡ４、及び抗
ＩＲＴＡ５抗体は、正常なＢ細胞及び腫瘍Ｂ細胞中のシグナル伝達の生物学を実
験的に調べるための有用な研究試薬である。

【００４３】細胞中に核酸分子を導入する方法は、当業者に周知である。このような方法に
は、例えば、ウイルスベクターの使用、及びリン酸カルシウム共沈の使用が含ま
れる。従って、ＩＲＴＡタンパク質（ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、Ｉ
ＲＴＡ４、及びＩＲＴＡ５）をコードする核酸分子は、これらのＩＲＴＡタンパ
ク質を作製するために細胞中に導入し得る。

【００４４】本発明のタンパク質ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及び
ＩＲＴＡ５を発現させるためには、数多くのベクターを利用し得る。プラスミド
ベクター、コスミドベクター、バクテリオファージベクター、及びその他のウイ
ルスを含むこのようなベクターは、本分野において周知である。例えば、１つの
クラスのベクターは、ウシパピローマウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウ
イルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ＲＳＶ、Ｍ
ＭＴＶ、又はＭｏＭＬＶ）、セムリキ森林ウイルス又はＳＶ４０ウイルスのよう
な動物ウイルス由来のＤＮＡ要素を使用する。さらに、染色体中に前記ＤＮＡが
安定に組込まれた細胞は、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能とする
１以上のマーカーを導入することによって選択し得る。前記マーカーは、例えば
、栄養要求性宿主に原栄養性を与え、殺生物剤耐性又は銅のような重金属に対す
る耐性を与え得る。前記選択可能なマーカー遺伝子は、発現すべきＤＮＡ配列に
直接連結されるか、あるいは同時形質転換によって同じ細胞中に導入され得る。

【００４５】発現に必要な制御要素は、ＲＮＡポリメラーゼを結合するためのプロモーター
配列とリボゾームが結合するための転写開始配列とを含む。ｍＲＮＡの合成を最
適化するためには、更なる要素が必要な場合もある。これらの更なる要素には、
スプライシングシグナル、エンハンサー、終結シグナルが含まれ得る。例えば、
細菌の発現ベクターは、ｌａｃプロモーターのようなプロモーター、転写開始の
ためのシャイン−ダルガルノ配列、及び開始コドンＡＵＧを含む。同様に、真核
生物の発現ベクターは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩのための異種又は同種のプロモ
ーター、下流のポリアデニル化シグナル、開始コドンＡＵＧ、及びリボゾームを
脱離させるための終始コドンを含む。このようなベクターは、市販のものを購入
してもよいし、あるいは本分野において周知の方法（例えば、前に概説したベク
ターを構築するための方法）によって、既述の配列から組み立ててもよい。

【００４６】これらのベクターは、本発明のタンパク質を生産するための宿主ベクター系を
作成するために、適切な宿主細胞中に導入してもよい。宿主ベクター系の作成法
は当業者に周知である。

【００４７】適切な宿主細胞には、細菌細胞（グラム陽性細胞を含む）、酵母細胞、真菌細
胞、昆虫細胞、及び動物細胞が含まれるが、これらに限定されない。適切な動物
細胞には、ＨｅＬａ細胞、Ｃｏｓ細胞、ＣＶ１細胞、及び様々な哺乳類の初代細
胞が含まれるが、これらに限定されない。マウスの線維芽細胞、ＮＩＨ−３Ｔ３
細胞、ＣＨＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、Ｌｔｋ⁻細胞及びＣＯＳ細胞を含む多くの哺
乳類細胞を宿主として使用し得るが、これらに限定されない。哺乳類細胞は、リ
ン酸カルシウム沈澱、電気穿孔、及びマイクロインジェクションのような本分野
において周知の方法によってトランスフェクトし得る。

【００４８】本発明は、単離された核酸分子であって、ＩＲＴＡタンパク質をコードする前
記単離された核酸分子の配列中に含まれるユニークな配列と特異的にハイブリダ
イズし得る少なくとも１５の連続したヌクレオチドを含む核酸分子を提供する。
ある態様では、前記ＩＲＴＡタンパク質は、それぞれ図１８Ａ、１８Ｂ−１−１
８Ｂ−３、１８Ｃ−１−１８Ｃ−２、１８Ｄ−１−１８Ｄ−２、又は１８Ｅ−１
−１８Ｅ−２の何れかに記されているアミノ酸配列を有するＩＲＴＡ１、ＩＲＴ
Ａ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、若しくはＩＲＴＡ５タンパク質、又はそれらの
断片であり得る。別の態様では、前記単離された核酸分子は、検出可能なマーカ
ーで標識される。前記単離された核酸分子のさらに別の態様では、前記検出可能
なマーカーは、放射性同位元素、酵素、色素、ビオチン、蛍光標識、又は化学発
光標識からなる群から選択される。

【００４９】本発明は、被験者から得たサンプル中のＢ細胞悪性腫瘍又は一種のＢ細胞悪性
腫瘍を検出する方法であって、前記Ｂ細胞悪性腫瘍は１ｑ２１染色体再編成を含
み、（ａ）前記被験者から得た前記サンプルからＲＮＡを取得することと、（ｂ
）ヒトＩＲＴＡタンパク質をコードする単離されたＲＮＡの配列中に含まれるユ
ニークな配列と特異的にハイブリダイズすることができ、検出可能なマーカーで
標識された核酸分子に、工程（ａ）の前記ＲＮＡがハイブリダイズし得る条件下
で、ヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴＡ５か
らなる群から選択されるヒトＩＲＴＡタンパク質をコードする単離されたＲＮＡ
の配列中に含まれるユニークな配列と特異的にハイブリダイズし得る少なくとも
１５の連続したヌクレオチドの核酸分子に、工程（ａ）の前記ＲＮＡを接触させ
ることと、（ｃ）工程（ｂ）における何らかのハイブリダイゼーションを検出す
ることとを備え、ハイブリダイゼーションが検出されることが、前記サンプル中
にＢ細胞悪性腫瘍又は一種のＢ細胞悪性腫瘍が存在することの指標となる方法を
提供する。

【００５０】ＩＲＴＡタンパク質をコードするＲＮＡのハイブリダイゼーションの検出は、
悪性腫瘍がＢ細胞悪性腫瘍であることの指標となるであろう。より具体的には、
ＩＴＲＡ１タンパク質をコードするＲＮＡのハイブリダイゼーションの検出は、
Ｂ細胞悪性腫瘍が、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ、Ｍｕｃｏｓａ−Ａｓｓｏｃ
ｉａｔｅｄ−Ｌｙｍｐｈｏｉｄ−ｔｉｓｓｕｅ）Ｂ細胞リンパ腫であることを示
す。ＩＴＲＡ４及びＩＴＲＡ５タンパク質をコードするＲＮＡのハイブリダイゼ
ーションの検出は、Ｂ細胞悪性腫瘍がマントル細胞リンパ腫であることを示す。
上記方法のある態様では、前記Ｂ細胞悪性腫瘍には１ｑ２１染色体再編成が含ま
れる。当業者であれば、悪性腫瘍、例えば腫瘍サンプルの病理を検出／診断する
リンパ腫の指標となり得る他の標準的な方法と組み合わせて、上記方法を診断の
補助として使用するであろう。次いで、上記方法は、Ｂ細胞リンパ腫、あるいは
上記のように、より具体的には、前記悪性腫瘍はＭＡＬＴＢ細胞リンパ腫又は
マントル細胞リンパ腫に限定することができるであろう。

【００５１】当業者であれば、核酸オリゴヌクレオチド（すなわち診断法の対象とすべきタ
ンパク質をコードする核酸プローブ）への核酸分子のハイブリダイゼーションを
検出する公知の方法に習熟している。本発明のＩＲＴＡタンパク質をコードする
核酸分子は、Ｂ細胞悪性腫瘍を検出するのに有用である。当業者であれば、サン
プル中のＢ細胞悪性腫瘍を検出するための上記方法の変法には、前記サンプルか
ら得た核酸を制限酵素で消化し、このようにして得られた核酸分子の断片を、ハ
イブリダイゼーションの前にサイズ分画することによって分離することが含まれ
るが、これらに限定されるものではないことを理解し得るであろう。

【００５２】被験者から得たサンプル中にＢ細胞悪性腫瘍を検出するための上記方法のある
態様では、前記検出可能なマーカーは放射性同位元素、酵素、色素、ビオチン、
蛍光標識、又は化学発光標識である。好ましい態様では、前記Ｂ細胞悪性腫瘍は
、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、バーキットリンパ腫、周辺帯リンパ腫、びま
ん性巨大細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫細胞からなる群から選択される。さ
らなる態様では、前記Ｂ細胞リンパ腫は、粘膜関連リンパ組織Ｂ細胞リンパ腫（
ＭＡＬＴ）である。別の好ましい態様では、前記Ｂ細胞リンパ腫は、非ホジキン
リンパ腫である。

【００５３】本発明は、ヒトＩＲＴＡタンパク質をコードするｍＲＮＡ分子に特異的にハイ
ブリダイズして、前記ｍＲＮＡ分子の過剰発現を抑え得る配列を有するアンチセ
ンスオリゴヌクレオチドを提供する。

【００５４】前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの好ましい態様では、前記ＩＲＴＡタン
パク質は、ヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴ
Ａ５タンパク質からなる群から選択される。ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ
３、ＩＲＴＡ４、及び／又はＩＲＴＡ５タンパク質をコードする核酸分子の上記
何れかのオリゴヌクレオチドのさらなる態様では、前記核酸は、ゲノムＤＮＡ又
はｃＤＮＡであり得る。

【００５５】当業者であれば、オリゴヌクレオチドの核酸ハイブリダイゼーションのための
慣用技術、例えばＡｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．らのＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃ
ｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，（ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ
＆Ｓｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９９８）、例えば、上昇した塩濃度の存
在下での６５℃のストリンジェントな条件に習熟している。このような条件は完
全に相補的な核酸のハイブリダイゼーションに使用されるのに対して、ストリン
ジェントでない条件は、完全には相補的でない核酸のハイブリダイゼーションに
使用される。

【００５６】本明細書で使用する「特異的にハイブリダイズする」という用語は、ある核酸
が自身に対して相補的である核酸配列を認識し、相補的な塩基対間での水素結合
を通じて二重螺旋セグメントを形成し得ることを意味する。本明細書で使用する
「ユニークな配列」とは、ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、
及びＩＲＴＡ５タンパク質をコードする核酸分子のみに特異的な配列である。核
酸プローブ技術は当業者に周知であり、当業者であれば、このようなプローブの
長さは大幅に代えることができ、プローブの検出を容易にするために放射性同位
体又は蛍光色素などの検出可能な標識で標識してもよいことを容易に理解できる
であろう。ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及び／又はＩＲ
ＴＡ５タンパク質をコードする核酸分子の検出は、対応するＩＲＴＡ１、ＩＲＴ
Ａ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及び／又はＩＲＴＡ５タンパク質の発現レベル
が変化する任意の疾病過程の診断検査として有用である。ＤＮＡプローブ分子は
、全て本分野で周知の方法を用いて、哺乳類のＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴ
Ａ３、ＩＲＴＡ４、及び／又はＩＲＴＡ５タンパク質又はそれらの断片をコード
するＤＮＡ分子を、プラスミド又はバクテリオファージのような適切なベクター
中に挿入した後に適切な細菌宿主細胞中に挿入し、ＤＮＡプローブを複製して、
採取することによって作製される。例えば、フェノール及びエタノールを用いて
細胞可溶化液からＤＮＡを抽出し、（本明細書中に論述されている）ベクター中
への前記ＤＮＡの挿入部位に対応する制限酵素で消化して、電気泳動し、得られ
たゲルから切り出す。オリゴヌクレオチドプローブは、「インサイチュ」ハイブ
リダイゼーションに有用であり、該ＩＲＴＡ遺伝子ファミリーを発現している組
織の位置を決定するために、及び様々な生物組織におけるこれらの遺伝子（ＩＲ
ＴＡ１〜ＩＲＴＡ５タンパク質の何れかをコードする核酸分子）及びそれらのｍ
ＲＮＡの存在についてのその他のハイブリダイゼーションに有用である。さらに
、（ＤＮＡ合成装置によって作製された）ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３
、ＩＲＴＡ４、又はＩＲＴＡ５タンパク質をコードするＤＮＡ分子の配列に対し
て相補的な合成オリゴヌクレオチドは、これらの遺伝子に対するプローブ、それ
らの関連ｍＲＮＡに対するプローブ、又はゲノムライブラリー若しくはｃＤＮＡ
ライブラリーの相同性スクリーニングによって、又はポリメラーゼ連鎖反応のよ
うな増幅技術の使用によって関連遺伝子を単離するためのプローブとして有用で
ある。

【００５７】本発明は、図１８Ａに記載されたアミノ酸配列（配列番号１）を含む精製され
たＩＲＴＡ１タンパク質を提供する。該精製されたＩＲＴＡ１タンパク質のある
態様では、前記ＩＲＴＡ１タンパク質はヒトＩＲＴＡ１である。

【００５８】本発明は、図１８Ｂ−１−１８Ｂ−３に記載されたアミノ酸配列（配列番号３
）を含む精製されたＩＲＴＡ２タンパク質を提供する。該精製されたＩＲＴＡ２
タンパク質のある態様では、前記ＩＲＴＡ２タンパク質はヒトＩＲＴＡ２である
。

【００５９】本発明は、図１８Ｃ−１−１８Ｃ−２に記載されたアミノ酸配列（配列番号５
）を含む精製されたＩＲＴＡ３タンパク質を提供する。該精製されたＩＲＴＡ３
タンパク質のある態様では、前記ＩＲＴＡ３タンパク質はヒトＩＲＴＡ３である
。

【００６０】本発明は、図１８Ｄ−１−１８Ｄ−２に記載されたアミノ酸配列（配列番号７
）を含む精製されたＩＲＴＡ４タンパク質を提供する。該精製されたＩＲＴＡ４
タンパク質のある態様では、前記ＩＲＴＡ４タンパク質はヒトＩＲＴＡ４である
。

【００６１】本発明は、図１８Ｅ−１−１８Ｅ−２に記載されたアミノ酸配列（配列番号９
）を含む精製されたＩＲＴＡ５タンパク質を提供する。該精製されたＩＲＴＡ５
タンパク質のある態様では、前記ＩＲＴＡ５タンパク質はヒトＩＲＴＡ５である
。

【００６２】以下に記載されている実験の詳細の部についての理解を助けるために、頻繁に
出てくる方法及び／又は用語は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔａｌ．（１９８９
）ａｎｄＨａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬ
ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮＹ：１９
８８に最も詳しく説明されている。

【００６３】本発明は、図１８Ａ、１８Ｂ−１−１８Ｂ−３、１８Ｃ−１−１８Ｃ−２、１
８Ｄ−１−１８Ｄ−２、又は１８Ｅ−１−１８Ｅ−２の何れかに示されているア
ミノ酸配列を有する精製されたＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ
４、若しくはＩＲＴＡ５タンパク質、又はそれらの断片のエピトープに対して誘
導された１又は複数の抗体を提供する。

【００６４】本明細書で使用する「抗体」という用語には、天然に存在する抗体と天然には
存在しない抗体の両者が含まれるが、これらに限定されるものではない。具体的
には、「抗体」という用語には、ポリクローナル及びモノクローナル抗体、並び
にそれらの結合断片が含まれる。さらに、「抗体」という用語には、キメラ抗体
、完全な合成抗体、及びそれらの断片が含まれる。前記ポリクローナル及びモノ
クローナル抗体は「精製」してもよく、「精製」とは、前記ポリクローナル及び
モノクローナル抗体に他の抗体が何れも存在しなくなることを意味する。本明細
書において、部分精製された抗体とは、１又は複数の本発明のＩＲＴＡタンパク
質の何れかに特異的に結合する抗体を含み、該抗体を与えた血清に比べてタンパ
ク質不純物が少ない抗体組成物を意味する。タンパク質不純物とは、１又は複数
の本発明のＩＲＴＡタンパク質に特異的な抗体以外のタンパク質である。例えば
、部分的に精製された抗体は、ＩｇＧ調製物であり得る。

【００６５】ポリクローナル抗体（抗ＩＲＴＡ抗体）は、ウサギ、ラット、ヤギ、マウス、
又はその他の動物等の宿主動物に、以下に記載されている１又は複数の本発明の
免疫原（例えば、精製されたヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴ
Ａ４、又はＩＲＴＡ５）を注射することによって作製し得る。前記宿主動物から
血清を抽出し、前記免疫原に対して特異的なポリクローナル抗体を得るためにス
クリーニングされる。ポリクローナル抗体のスクリーニング法は、Ｈａｒｌｏｗ
＆Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，（ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，
ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ，ＮＹ：１９８８）（その内容は、参考
文献として本明細書に援用される）に開示されているもののように、当業者に周
知である。

【００６６】本発明の抗ＩＲＴＡモノクローナル抗体は、例えば、免疫原（本明細書に記載
されているＩＲＴＡポリペプチド又はそれらの断片）でマウスを免疫することに
よって作製し得る。前記マウスは、免疫原性を示し得る量の上記免疫原を腹腔内
に接種された後、同じような量の該免疫原で追加免疫される。最終追加免疫の数
日後に前記免疫されたマウスから、脾臓を回収し、融合に用いるために該脾臓か
ら細胞懸濁物を調製する。

【００６７】ハイブリドーマは、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．ａｎｄＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．
，Ｎａｔｕｒｅ（１９７５）２５６：４９５−４９７の一般的な体細胞ハイ
ブリダイゼーション技術を用いて、脾臓細胞及び相手方となるマウス腫瘍から調
製され得る。１０８０１ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＢｌｖｄ．、Ｍａｎａｓｓａ
ｓ、ＶＡ２０１１０−２２０９、Ｕ．Ｓ．Ａ．の米国菌培養収集所（ＡＴＣＣ
）から得られるもののような使用可能なマウスの骨髄腫株を、前記ハイブリダイ
ゼーションに使用し得る。基本的には、前記技術には、ポリエチレングリコール
などの融合誘導因子を用いて前記腫瘍細胞と脾臓細胞を融合させることが含まれ
る。融合後に、融合培地から前記細胞を分離し、ＨＡＴ培地のような選択培地中
で成育させて、ハイブリダイズしなかった親細胞を除去する。ハイブリドーマは
増殖させることができ、所望であれば、免疫化物質を抗原として用いて、慣用的
なイムノアッセイ操作（例えば、放射線免疫アッセイ）によって上清をアッセイ
してもよい。本発明の抗体の基準を満たすかどうかを調べるために、さらに陽性
クローンの性質を決定してもよい。このような抗体を産生するハイブリドーマは
、公知の操作を用いてインビトロ又はインビボで増殖させ得る。モノクローナル
抗体は、所望であれば、場合により、硫安分画、ゲル電気泳動、透析、クロマト
グラフィー、及び限外濾過のような慣用的な免疫グロブリン精製操作によって培
地又は体液から単離し得る。

【００６８】本発明の実施に際しては、上記抗体は何れも、検出可能なマーカーで標識し得
る。ある態様では、前記標識された抗体は、精製された被標識抗体である。「抗
体」という用語には、例えば、天然に存在する抗体と天然には存在しない抗体の
両者が含まれるが、これらに限定されない。具体的には、「抗体」という用語に
は、ポリクローナル及びモノクローナル抗体、並びにそれらの断片が含まれる。
さらに、「抗体」という用語には、キメラ抗体、完全な合成抗体、及びそれらの
断片が含まれる。検出可能な標識として機能する「検出可能な部分」は、当業者
に周知であって、蛍光標識、放射性原子、常磁性イオン、ビオチン、化学発光標
識、又は二次酵素の段階若しくは結合の段階によって、検出され得る標識が含ま
れるが、これらに限定されない。前記二次酵素の段階若しくは結合の段階では、
ジゴキシゲニン、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、β−
ガラクトシダーゼ、フルオレセイン、又はストレプトアビジン／ビオチンの使用
が含まれ得る。抗体を標識する方法は、本分野において周知である。

【００６９】被験者から血清を回収する方法は、当業者に周知である。抗体を部分精製する
方法も当業者に周知であり、例えば、濾過、イオン交換クロマトグラフィー、及
び沈殿が含まれる。

【００７０】本発明のポリクローナル及びモノクローナル抗体は、検出可能なマーカーで標
識し得る。ある態様では、前記標識された抗体は精製された被標識抗体である。
前記検出可能なマーカーは、例えば、放射性又は蛍光マーカーであり得る。抗体
を標識する方法は、本分野において周知である。

【００７１】本発明のポリクローナル及びモノクローナル抗体が、ＩＲＴＡタンパク質を発
現している細胞（例えば、癌細胞）に結合して、前記細胞の表面上に存在する本
明細書に記載されている１以上のＩＲＴＡタンパク質又はそれらの断片と複合体
を形成し得るかどうかの決定は、当業者に周知の方法に従って実施し得る。好ま
しい態様では、前記決定は、フローサイトメトリー法によって実施し得る。

【００７２】本発明の抗体は、アフィニティークロマトグラフィーで用いられるような不溶
性マトリックスに結合し得る。本発明で使用する前記固定化されたポリクローナ
ル抗体又はモノクローナル抗体と複合体を形成する、すなわち結合する細胞の単
離は、当業者に周知の標準的な方法によってなし得る。例えば、単離は、固定化
抗体を用いるアフィニティークロマトグラフィーを具備し得る。

【００７３】あるいは、前記抗体は、遊離の抗体であり得る。この場合、単離は、遊離の標
識された一次抗体又は二次抗体を用いた細胞分別（ｃｅｌｌｓｏｒｔｉｎｇ）
を備え得る。このような細胞分別法は標準的なものであり、当業者に周知である
。

【００７４】本発明は、ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴＡ
５からなる群から選択される精製されたＩＲＴＡタンパク質に対して誘導された
抗体を提供する。抗ＩＲＴＡ抗体の好ましい態様では、前記ＩＲＴＡタンパク質
はヒトのＩＲＴＡタンパク質である。前記ＩＲＴＡタンパク質は、マウスのＩＲ
ＴＡタンパク質を含む任意の哺乳類のＩＲＴＡタンパク質であり得る。上記何れ
かの抗体のさらなる態様においては、前記抗体はモノクローナル抗体である。別
の態様では、前記モノクローナル抗体は、マウスのモノクローナル抗体又はヒト
化モノクローナル抗体である。本明細書で使用する「ヒト化」とは、ヒト抗体の
特性を有する抗体を意味し、このような抗体は天然に存在しないものであり、抗
原決定基（これはマウスのものである）を除いて抗体がヒトに由来するハイブリ
ドーマ技術を用いて作製される。さらに別の態様では、前記抗体はポリクローナ
ル抗体である。

【００７５】好ましい態様では、本発明の抗体は何れも、治療剤（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ
ａｇｅｎｔ）に抱合（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）させ得る。さらに好ましい態様で
は、前記治療剤は、放射性同位体、毒素、トキソイド、又は化学療法剤である。
本発明の抱合抗体は、以下に示されている何れの方法においても、Ｂ細胞癌を有
する患者に投与し得る。

【００７６】本発明は、ヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲ
ＴＡ５からなる群から選択されるＩＲＴＡタンパク質を発現している癌細胞に結
合して前記癌細胞の増殖を抑えるのに有効である、ＩＲＴＡタンパク質に対して
誘導された一定量の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物を提
供する。前記抗ＩＲＴＡ抗体は、ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴ
Ａ４、及びＩＲＴＡ５からなる群から選択されるＩＲＴＡタンパク質のエピトー
プに対して誘導され得る。前記ＩＲＴＡタンパク質は、ヒト又はマウスＩＲＴＡ
タンパク質であり得る。

【００７７】上記薬学的組成物の好ましい態様では、前記癌細胞は、Ｂ細胞リンパ腫、多発
性骨髄腫、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、周辺帯リンパ腫、びま
ん性巨大細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫細胞からなる群から選択される。前
記薬学的組成物の別の好ましい態様では、前記Ｂ細胞リンパ腫細胞は、粘膜関連
リンパ組織Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴ）細胞である。前記薬学的組成物の別の好
ましい態様では、前記Ｂ細胞リンパ腫細胞は、非ホジキンリンパ腫細胞である。

【００７８】本発明は、ヒトＩＲＴＡタンパク質の過剰発現を抑えるのに有効な一定量の上
記オリゴヌクレオチドの何れかと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成
物を提供する。薬学的組成物の好ましい態様では、前記オリゴヌクレオチドは、
ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴＡ５からなる群
から選択されるＩＲＴＡタンパク質をコードする核酸分子である。前記ＩＲＴＡ
タンパク質は、ヒト又はマウスのＩＲＴＡタンパク質であり得る。

【００７９】本明細書で使用する「悪性」とは、転移し得ることを意味する。本明細書で使
用する「腫瘍細胞」とは、腫瘍から発生する、すなわち異なる組織又は異常な組
織の新しい増殖から発生する細胞である。前記腫瘍細胞及び癌細胞は、腫瘍塊の
一部として、又はそれらが発生した腫瘍塊から剥離した浮遊細胞として存在し得
る。

【００８０】本明細書で使用する悪性細胞には、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、バーキッ
トリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、周辺帯リンパ腫、びまん性巨大細胞リンパ
腫、及び濾胞性リンパ腫が含まれるが、これらに限定されるものではない。前記
Ｂ細胞リンパ腫は、粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）Ｂ細胞リンパ腫、又は非ホ
ジキンリンパ腫である。

【００８１】本明細書で使用する「被験者」は、任意の動物又は人工的に改変された動物で
ある。人工的に改変された動物には、ヒトの免疫系を有するＳＣＩＤマウスが含
まれるが、これに限定されない。好ましい態様では、前記被験者はヒトである。

【００８２】本発明は、被験者から得たサンプル中の１ｑ２１染色体の再編成を備えたＢ細
胞悪性腫瘍を診断する方法であって、（ａ）前記被験者から前記サンプルを取得
することと、（ｂ）検出可能なマーカーで標識された抗体が癌細胞の細胞表面上
に存在するヒトＩＲＴＡタンパク質と結合し得る条件下で、精製されたＩＲＴＡ
タンパク質に対して誘導された抗体であって、前記癌細胞の細胞表面上に存在す
るヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴＡ５Ｉ
ＲＴＡタンパク質からなる群から選択されるヒトＩＲＴＡタンパク質と特異的に
結合し得る抗体に、工程（ａ）の前記サンプルを接触させることと、（ｃ）工程
（ｂ）において何らかの結合を検出することとを備え、結合の検出が、前記サン
プル中にＢ細胞悪性腫瘍の診断を示す方法を提供する。

【００８３】Ｂ細胞悪性腫瘍を診断する上記方法のある態様では、前記ＩＲＴＡタンパク質
は、ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴＡ５からな
る群から選択される。該方法の別の方法では、前記ＩＲＴＡタンパク質はヒト又
はマウスのＩＲＴＡタンパク質である。さらなる態様では、ＩＲＴＡタンパク質
は精製される。該方法の好ましい態様では、前記Ｂ細胞悪性腫瘍は、Ｂ細胞リン
パ腫、多発性骨髄腫、バーキットリンパ腫、周辺帯リンパ腫、びまん性巨大細胞
リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫細胞からなる群から選択される。該方法のさらに
別の態様では、前記Ｂ細胞リンパ腫は、粘膜関連リンパ組織Ｂ細胞リンパ腫（Ｍ
ＡＬＴ）である。該方法の別の好ましい態様では、前記Ｂ細胞リンパ腫は、非ホ
ジキンリンパ腫である。

【００８４】本発明は、サンプル中のヒトＩＲＴＡタンパク質を検出する方法であって、（
ａ）上記抗ＩＲＴＡ抗体の何れかに、該抗体と前記サンプル中の前記ＩＲＴＡと
の間で複合体が形成され得る条件下で、前記サンプルを接触させることと、（ｂ
）工程（ａ）で形成された前記複合体を検出することによって、前記サンプル中
にヒトＩＲＴＡが存在することを検出することとを備えた方法を提供する。ある
態様では、検出される前記ＩＲＴＡタンパク質は、それぞれ図１８Ａ、１８Ｂ−
１−１８Ｂ−３、１８Ｃ−１−１８Ｃ−２、１８Ｄ−１−１８Ｄ−２、又は１８
Ｅ−１−１８Ｅ−２の何れかに記されているアミノ酸配列を有するＩＲＴＡ１、
ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、又はＩＲＴＡ５であり得る。上述のよう
に、形成された複合体の検出は、検出可能なマーカーで標識された抗体を用い、
標識された複合体の存在を決定することによって実施し得る。被験者から得たサ
ンプル中にヒトＩＲＴＡタンパク質を検出することは、被験者のＢ細胞悪性腫瘍
を診断する別の方法である。該診断方法のある態様では、前記Ｂ細胞悪性腫瘍は
、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、バーキットリンパ腫、周辺帯リンパ腫、びま
ん性巨大細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫細胞からなる群から選択される。該
方法のさらに別の態様では、前記Ｂ細胞リンパ腫は、粘膜関連リンパ組織Ｂ細胞
リンパ腫（ＭＡＬＴ）である。該方法の別の好ましい態様では、前記Ｂ細胞リン
パ腫は、非ホジキンリンパ腫である。

【００８５】本発明は、Ｂ細胞癌を有する患者を治療する方法であって、ＩＲＴＡタンパク
質を発現している癌細胞に結合して、該癌細胞の増殖を抑えるのに有効な一定量
の抗ＩＲＴＡ抗体と薬学的に許容される担体とを前記患者に投与することによっ
て、前記患者を治療することを備えた方法を提供する。癌細胞の成長と増殖がこ
れにより阻害され、癌細胞は死滅する。上記方法のある態様では、前記ＩＲＴＡ
タンパク質はヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲ
ＴＡ５からなる群から選択される。Ｂ細胞癌を有する患者を治療する上記方法の
好ましい態様では、前記抗ＩＲＴＡ抗体はモノクローナル抗体である。該方法の
別の態様では、前記モノクローナル抗体は、マウスのモノクローナル抗体又はヒ
ト化モノクローナル抗体である。前記抗体はキメラ抗体であり得る。さらなる態
様では、前記抗ＩＲＴＡ抗体はポリクローナル抗体である。ある態様では、前記
ポリクローナル抗体は、マウス又はヒトのポリクローナル抗体であり得る。好ま
しい態様では、前記Ｂ細胞癌は、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、バーキットリ
ンパ腫、マントル細胞リンパ腫周辺帯リンパ腫、びまん性巨大細胞リンパ腫、及
び濾胞性リンパ腫細胞からなる群から選択される。別の好ましい態様では、前記
Ｂ細胞リンパ腫は、粘膜関連リンパ組織Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡＬＴ）である。さ
らなる好ましい態様では、前記Ｂ細胞リンパ腫は、非ホジキンリンパ腫である。
Ｂ細胞癌を有する患者を治療する上記方法の好ましい態様では、ＩＲＴＡタンパ
ク質を発現している癌細胞に結合するのに有効な一定量の抗ＩＲＴＡ抗体の投与
は、静脈内、腹腔内、くも膜下腔内、リンパ管内、筋肉内、病変部内、非経口、
硬膜外、皮下、注入（ｉｎｆｕｓｉｏｎ）、リポソームを介した送達、エアロゾ
ル送達、局所、経口、鼻腔、肛門、眼、又は耳からの送達である。上記方法の別
の好ましい態様では、前記抗ＩＲＴＡ抗体を治療剤に抱合させてもよい。さらな
る好ましい態様では、前記治療剤は放射性同位体、毒素、トキソイド、又は化学
療法剤である。

【００８６】本発明は、Ｂ細胞癌を有する患者を治療する方法であって、ヒトＩＲＴＡタン
パク質をコードするｍＲＮＡ分子に特異的にハイブリダイズして、前記ヒトＩＲ
ＴＡタンパク質の過剰発現を抑えて、１又は複数のＩＲＴＡタンパク質を発現し
ている癌細胞の細胞増殖を停止させ、又は細胞死を誘導させ得る配列を有する一
定量のアンチセンスオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容される担体とを前記患
者に投与することにより前記患者を治療することを備えた方法を提供する。Ｂ細
胞癌を有する患者を治療する上記方法のある態様では、前記ＩＲＴＡタンパク質
はヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴＡ５タン
パク質からなる群から選択される。好ましい態様では、前記Ｂ細胞癌は、Ｂ細胞
リンパ腫、多発性骨髄腫、バーキットリンパ腫、周辺帯リンパ腫、びまん性巨大
細胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫細胞からなる群から選択される。別の好まし
い態様では、前記Ｂ細胞リンパ腫は、粘膜関連リンパ組織Ｂ細胞リンパ腫（ＭＡ
ＬＴ）である。さらに別の好ましい態様では、前記Ｂ細胞リンパ腫は、非ホジキ
ンリンパ腫である。ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及び／
又はＩＲＴＡ５タンパク質をコードする核酸分子の上記オリゴヌクレオチドの何
れかの実施態様では、前記核酸はゲノムＤＮＡ又はｃＤＮＡであり得る。Ｂ細胞
癌を有する患者を治療する上記方法のさらなる好ましい態様では、ヒトＩＲＴＡ
タンパク質の過剰発現を抑えるのに有効な量のオリゴヌクレオチドの投与は、静
脈内、腹腔内、くも膜下腔内、リンパ管内、筋肉内、病変部内、非経口、硬膜外
、皮下、注入、リポソームを介した送達、エアロゾル送達、局所、経口、鼻腔、
肛門、眼、又は耳からの送達である。上記方法の別の好ましい態様では、前記オ
リゴヌクレオチドを治療剤に抱合させてもよい。さらなる好ましい態様では、前
記治療剤は放射性同位体、毒素、トキソイド、又は化学療法剤である。

【００８７】本発明は、上記された有効量の前記オリゴヌクレオチド又は前記抗体のうちの
何れかと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物も提供する。本発明に
おいて、本発明において、「有効量」とは、前記オリゴヌクレオチド又は抗体が
有効である疾病又は異常に罹患している患者に投与したときに有効であり、前記
疾病又は異常の減少、軽減、又は退行をもたらす任意の量のオリゴヌクレオチド
又は抗体である。本発明において、「薬学的に許容される担体」は、薬学的組成
物を調合するのに有用な当業者に公知である任意の生理的担体である。

【００８８】薬学的に許容される担体は当業者に周知であり、０．０１〜０．１Ｍ、好まし
くは０．０５Ｍのリン酸緩衝液、又は０．８％の生理的食塩水が含まれるが、こ
れらに限定されるものではない。さらに、このような薬学的に許容される担体は
水性又は非水性の溶液、懸濁液、及びエマルジョンであり得る。非水性溶媒の例
は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油
、及びオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルである。水性担体には、
生理的食塩水及び緩衝化された溶媒を含む水、アルコール／水溶液、エマルジョ
ン又は懸濁液が含まれる。非経口ビークルには、塩化ナトリウム容器、リンガー
のデキストロース、デキストロース及び塩化ナトリウム、乳酸加リンガー液、又
は不揮発性油が含まれる。静脈内ビークルには、流体及び栄養素補充液、リンガ
ーのデキストロースを基礎とするもののような電解質補充液などが含まれる。例
えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、不活性ガスなどの防腐剤及び他の添加物
が存在してもよい。

【００８９】ある好ましい態様では、前記薬学的担体は液体であって、前記薬学的組成物は
溶液の形態であり得る。同様に好ましい別の様態では、前記薬学的に許容される
担体は固体であって、前記組成物は粉末又は錠剤の形態である。さらなる態様で
は、前記薬学的担体はゲルであって、前記組成物は坐剤又はクリームの形態であ
る。さらなる態様では、前記化合物は、薬学的に許容される経皮パッチの一部と
して調合され得る。

【００９０】固体の担体には、香料、潤滑剤、可溶化剤、懸濁剤、賦形剤、流動促進剤（ｇ
ｌｉｄａｎｔ）、圧縮補助剤、結合剤、又は錠剤崩壊剤としても作用し得る１以
上の物質が含まれ得る。固体担体はカプセル化物質でもあり得る。粉末では、前
記担体は、細粉化された活性成分と混合されている細粉化された固体である。錠
剤では、前記活性成分は、必要な圧縮特性を有する担体と適切な比率で混合され
、所望の形状とサイズに圧縮される。好ましくは、前記粉末と前記錠剤は、前記
活性成分を９９％まで含有する。適切な固体担体には、例えば、リン酸カルシウ
ム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、デキストリン、デン
プン、ゼラチン、セルロース、ポリビニルピロリジン、低融解ワックス、及びイ
オン交換樹脂が含まれる。

【００９１】液体担体は、溶液、懸濁液、エマルジョン、シロップ、エリクシル剤、及び加
圧された組成物を調製するために用いられる。前記活性成分は、水、有機溶媒、
若しくは両者の混合物、又は薬学的に許容されるオイル若しくは脂肪等の薬学的
に許容される液体担体中に、溶解又は懸濁し得る。前記液体担体は、可溶化剤、
乳化剤、緩衝液、防腐剤、甘味料、香料、懸濁剤、濃縮剤、色素、粘度調節剤、
安定剤、又は浸透圧調節剤のような他の適切な薬学的添加剤を含有し得る。経口
投与及び非経口投与用の液体担体の適切な例には、水（部分的に上記のような添
加物、例えばセルロース誘導体、好ましくはカルボキシメチルセルロースナトリ
ウム溶液を含有する）、アルコール（一価アルコール及び多価アルコール、例え
ばグリコールを含む）及びそれらの誘導体、並びにオイル（例えば、ヤシ油とピ
ーナッツ油）が含まれる。非経口投与の場合、前記担体は、オレイン酸エチル及
びミリスチン酸イソプロピルのような油状エステルでもあり得る。滅菌された液
体担体は、非経口投与用の滅菌された液体形態の組成物において有用である。加
圧された組成物用の液体担体は、ハロゲン化炭化水素又は他の薬学的に許容され
る噴射剤であり得る。

【００９２】滅菌溶液又は懸濁液である液体の薬学的組成物は、例えば、筋肉内、くも膜下
腔内、硬膜外、腹腔内又は皮下投与によって使用し得る。滅菌溶液は、静脈内に
も投与され得る。前記化合物は、滅菌固体組成物として調製することができ、投
与時に、滅菌水、滅菌生理食塩水、又は他の適切な注射可能な滅菌媒体を用いて
、溶解又は懸濁し得る。担体は、必要な不活性結合剤、懸濁剤、潤滑剤、香料、
甘味料、防腐剤、色素、及びコーティング剤を含み得る。

【００９３】前記オリゴヌクレオチド又は抗体を含む前記薬学的組成物は、他の溶質又は懸
濁剤（例えば、前記溶液を等張にするのに十分な量の生理食塩水又はグルコース
、胆汁塩、アカシア、ゼラチン、モノオレイン酸ソルビタン、ポリソルベート８
０（エチレンオキサイドと共重合したソルビトールのオレイン酸エステルとその
無水物）等）を含有する滅菌溶液又は懸濁液の形態で、経口投与することができ
る。

【００９４】前記オリゴヌクレオチド又は前記抗体を含む薬学的組成物は、液体又は固体の
うち何れの形態の組成物としても、経口投与することが可能である。経口投与に
適した組成物には、丸薬、カプセル、顆粒、錠剤、及び粉末のような固体形態と
、溶液、シロップ、エリクシル剤、及び懸濁液のような液体形態とが含まれる。
非経口投与に有用な形態には、滅菌溶液、エマルジョン、及び懸濁液が含まれる
。

【００９５】投与すべき最適な用量は当業者によって決定することが可能であり、使用して
いる阻害剤、調製物の強度、投与方法、及び病状又は異常の進行度に応じて変化
し得る。患者の年齢、体重、性別、食事、投与時間を含む、治療を受けている当
該患者に応じた更なる要素によっても、用量を調節する必要性が生じるであろう
。

【００９６】本発明は、以下の実験の詳細を通じて、よりよく理解されるであろう。しかし
ながら、当業者であれば、論述されている具体的な方法及び結果は、この後に続
く特許請求の範囲により完全に記載されている本発明の例示に過ぎないことを容
易に理解し得るであろう。

【００９７】

【実験の詳細】

第１シリーズの実験多発性骨髄腫（ＭＭ）に関連した染色体転座の分子分析によって、この悪性腫
瘍の病因は多様であるかもしれず、ＢＣＬ−１、ＭＵＭ−１及びＦＧＦＲ３を含
む数種の別個の癌遺伝子に関連していることが示された。染色体１４ｑ３２との
転座を含む染色体１ｑ２１の構造異常は、多発性骨髄腫に関連した細胞遺伝学的
異常を表すことが多い。これらの転座に関連した遺伝子を同定するために、ＦＲ
４ヒト形質細胞腫細胞株で検出され得るｔ（１；１４）（ｑ２１；ｑ３２）の両
派生物に対応した限界点領域をクローニングした。この限界点配列を分析したと
ころ、１４ｑ３２上のイムノグロブリン重鎖（ＩｇＨ）座と１ｑ２１上の未知の
配列との相互組換えが含まれていることが示された。転座に関連した１ｑ２１領
域に対応する正常な遺伝子座をクローニングして、限界点領域に隣接した遺伝子
をエキソントラップ法によって同定した。互いに２０Ｋｂの距離内に位置する２
種の遺伝子が、１ｑ２１上の限界点を含む領域に発見された。第１の遺伝子は、
ＭＵＭ−２（多発性骨髄腫―２）と呼ばれ、脾臓及びリンパ節において検出可能
な２．５ＫｂｍＲＮＡ転写物として発現される。完全長ＭＵＭ−２ｃＤＮＡをク
ローニングし、配列決定すると、４種の細胞外Ｉｇ型ドメイン、膜貫通ドメイン
及び細胞質ドメインを含む５１５個のアミノ酸の細胞表面糖タンパク質であって
、最初の３個の細胞外ドメインはＦｃガンマ受容体Ｉと３７％の同一性（５１％
の相同性）を有していることが予測される。ＦＲ４細胞では、転座限界点はＭＵ
Ｍ−２コーディングドメインを分断し、同じ転写方向にＩｇＨ座と並列させる。
結果として、構造が異常なＦＲ４特異的ＭＵＭ−２は、リンパ節及び脾臓におい
て転写され（３．０、５．２及び６．０Ｋｂ）、Ｆｃガンマ及びＩｇ型接着受容
体ファミリーのメンバーに相同な６種のＩｇ型ドメインを含む細胞外ドメインを
有したタンパク質をコードする。ＭＵＭ−２及びＭＵＭ−３遺伝子の構造及びＭ
Ｍ関連転座にそれらの遺伝子が直接関与しているということは、これらの遺伝子
が正常なリンパ球機能及びＢ細胞悪性腫瘍にとって重要な新規細胞表面受容体を
コードすることを示唆している。

【００９８】第２シリーズの実験実験の手順細胞株：本研究に使用したＭＭ細胞株（ＦＲ４、Ｕ２６６、ＪＪＮ３、ＥＪＭ、ＳＫＭ
Ｍ１、ＲＰＭＩ−８２２６、ＸＧ１、ＸＧ２、ＸＧ４、ＸＧ６、ＸＧ７）につい
ては、既に報告されている（Ｔａｇａｗａｅｔａｌ．、１９９０）、（Ｊｅ
ｒｎｂｅｒｇｅｔａｌ．、１９８７）、（Ｈａｍｉｌｔｏｎｅｔａｌ．
、１９９０；Ｊａｃｋｓｏｎｅｔａｌ．、１９８９）、（Ｅｔｏｎｅｔ
ａｌ．、１９８９）、（Ｚｈａｎｇｅｔａｌ．、１９９４）。ＦＲ４細胞株
は、本出願人のうちの一人（Ｓ．Ｔ．）の所属する研究室で確立されたものであ
る。Ｕ２６６、ＪＪＮ３、及びＥＪＭ細胞株は、Ｄｒ．Ｋ．Ｎｉｌｓｓｏｎ（Ｕ
ｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＵｐｐｓａｌａ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）
から恵与されたものであり、ＳＫＭＭ−１細胞株はＡ．Ｎ．Ｈｏｕｇｔｏｎ（Ｍ
ｅｍｏｒｉａｌＳｌｏａｎＫｅｔｔｅｒｉｎｇＣａｎｃｅｒＣｅｎｔｅ
ｒ、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＮＹ）から恵与された。５種のＸＧ細胞株は、Ｄｒ．Ｂ
ｅｒｎａｒｄＫｌｅｉｎから恵与されたものであり、既に記載されたように１
ｎｇ／ｍｌのヒト組換えＩＬ−６の存在下で培養した（Ｚｈａｎｇｅｔａｌ
．、１９９４）。１ｑ２１異常を有するＢＬ細胞株については、既に記載されて
おり（Ｐｏｌｉｔｏｅｔａｌ．、１９９５）、（Ｍａｇｒａｔｈｅｔａ
ｌ．、１９８０）、ＲＰＭＩ、１０％ＦＣＳ中で増殖させた。

【００９９】ゲノム及びｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング及びＤＮＡ配列の分析：ＦＲ４ゲノムＤＮＡをＢａｍＨＩで完全消化するか、又はＳａｕ３ＡＩで部分
消化して、その後ゲル精製画分をｌＤＡＳＨ−ＩＩファージベクター（Ｓｔｒａ
ｔａｇｅｎｅ）に連結することによって２種のゲノムライブラリーを構築した。
Ｃａ遺伝子座から得られた４．２ｋｂのＸｈｏＩ−ＢａｍＨＩプローブを用いて
ＢａｍＨＩライブラリーをスクリーニングし、既に記載した５′Ｓａプローブを
用いてＳａｕ３ＡＩライブラリーをスクリーニングした（Ｂｅｒｇｓａｇｅｌ
ｅｔａｌ．、１９９６）。ヒト胎盤ＤＮＡライブラリー（Ｓｔｒａｔａｇｅｎ
ｅ）をプローブ１．０ＥＨ（図８Ａ〜８Ｃ）でスクリーニングすると、生殖系列
１ｑ２１遺伝子座が得られた。ライブラリーのスクリーニング及びプラーク単離
は、確立された方法によって実施した（Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．、１９
８９）。ＩＲＴＡ１及びＩＲＴＡ２ｃＤＮＡクローンは、正常なヒトの脾臓Ｒ
ＮＡから構成されたオリゴ−ｄＴ／ランダムプライムｃＤＮＡライブラリー（Ｃ
ｌｏｎｔｅｃｈ）から単離された。ライブラリーのスクリーニングに使用された
ＩＲＴＡ１ｃＤＮＡプローブは、エキソン１及び３に隣接したプライマーを用
いたヒト脾臓ｃＤＮＡのＲＴ−ＰＣＲから得られた。ＤＮＡ配列決定は、ＡＢＩ
３７３自動シークエンサー（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によっ
て実施した。配列相同性の検索は、国立生命工学情報センター（Ｂｅｔｈｅｓｄ
ａ、ＭＤ）のＢＬＡＳＴｅ−メールサーバーを通じて行った。

【０１００】ＰＡＣ及びＹＡＣ単離及びエキソントラップ法：ヒトＰＡＣクローンは、ナイロン膜（ＲｅｓｅａｒｃｈＧｅｎｅｔｉｃｓ）
にスポットしたヒトＰＡＣライブラリーを１．０ＥＨプローブでスクリーニング
することによって得られた（図８Ａ−８Ｃ）。英国ヒトゲノムマッピング情報セ
ンター（ＵＫ−ＨＧＭＰ）から得られたＺｅｎｅｃａ（以前は、ＩＣＩ）ヒトＹ
ＡＣライブラリー（Ａｎａｎｄｅｔａｌ．、１９９０）を、ＰＣＲをベース
としたプール法を使用してスクリーニングした。エキソントラップ法は、エキソ
ントラップシステム（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）を使用して、製造元の指示に従って
実施した。

【０１０１】ＰＡＣ／ＹＡＣ末端クローンの単離、パルスフィールドゲル電気泳動法（ＰＦ
ＧＥ）及び蛍光インサイチュハイブリダイゼーション法（ＦＩＳＨ）による分析
：ＰＡＣＤＮＡの抽出は、標準的アルカリ溶解法（Ｄｒａｋｏｐｏｌｉｅｔ
ａｌ．、１９９６）によって実施した。既に記載されたように（Ｉｉｄａｅ
ｔａｌ．、１９９６）、ｖｅｃｔｏｒｅｔｔｅ−ＰＣＲ法を使用して、ＰＡＣ
及びＹＡＣ末端プローブを単離した（Ｒｉｌｅｙｅｔａｌ．、１９９０）。
ＰＦＧＥ分析は、ＣＨＥＦＭａｐｐｅｒシステム（ＢｉｏＲａｄ、Ｈｅｒｃｕ
ｌｅｓ、ＣＡ）を使用して標準プロトコール（ＤｒａｋｏｐｏｌｉＮｅｔ
ａｌ．、１９９６）に従って実施した。ＰＡＣＤＮＡのビオチン標識、染色体
の調製及びＦＩＳＨは、既に記載されたように実施した（Ｒａｏｅｔａｌ．
、１９９３）。

【０１０２】サザンブロット及びノザンブロット分析、ＲＡＣＥ及びＲＴ−ＰＣＲ：サザンブロット及びノザンブロット分析は、既に記載されたように実施した（
Ｍｅｒｉｅｔａｌ．、１９９１）。ノザンブロット分析では、全ＲＮＡはチ
オシアン酸グアニジウム法を使用して調製し、ポリ（Ｔ）コーティングビーズ（
Ｑｕｉｇｅｎ製のＯｌｉｇｏｔｅｘキット）を使用してポリ（Ａ）ＲＮＡを選択
した。ノザンブロットでは、レーン毎に２ｍｇのポリ（Ａ）ＲＮＡを添加した。
複数組織用ノザンフィルターをＣｌｏｎｔｅｃｈから入手した。ＲＡＣＥは、Ｍ
ａｒａｔｈｏｎｃＤＮＡ増幅キット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）及びＭａｒａｔｈｏ
ｎ−Ｒｅａｄｙ脾臓ｃＤＮＡを使用して実施した。１本鎖ｃＤＮＡ合成は、Ｓｕ
ｐｅｒｓｃｒｉｐｔＲＴ−ＰＣＲシステム（ＧｉｂｃｏＢＲＬ）を使用して
実施した。

【０１０３】インサイチュハイブリダイゼーション：ジゴキシゲニンを含むアンチセンスｃＲＮＡ及びセンスｃＲＮＡプローブは、
それぞれＴ３及びＴ７ＲＮＡポリメラーゼを用いて、ｃＤＮＡのコーディング領
域（ＩＲＴＡ１の６２〜１６８１のヌクレオチドとＩＲＴＡ２の１８〜２９９６
のヌクレオチド）を含む直鎖化したｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳ＋プラスミド
から転写された。ＣｏｌｕｍｂｉａＰｒｅｓｂｙｔｅｒｉａｎＭｅｄｉｃａ
ｌＣｅｎｔｅｒ、小児科病院において、小児から外科的に切除されたヒト肥厚
扁桃組織を粉末ドライアイス中で急速冷凍した。処理の前に、−８０℃で数日間
クリオスタット切片を保存した。非放射活性インサイチュハイブリダイゼーショ
ンは、パラホルムアルデヒド４％での固定時間を２０分に増加し、プロテイナー
ゼＫ処理を省略する以外は、基本的に記載された通りに（Ｆｒａｎｋｅｔａ
ｌ．、１９９９）実施した。ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは、
６８℃、５ｘＳＳＣ、５０％ホルムアルデヒドであった。アルカリホスファター
ゼ抱合抗ジゴキシゲニン抗体染色は、ＢＣＩＰ／ＮＢＴ基質で発色させた。

【０１０４】トランスフェクション、免疫沈殿及びウェスタンブロッティング：ＤＭＥＭ、１０％ＦＣＳ中で増殖させた２９３細胞（ＡＴＣＣ）に、標準的リ
ン酸カルシウム法によって、ｐＭＴ２Ｔ及びｐＭＴ２Ｔ−ＩＲＴＡ１／Ｃａ一過
性発現構築物を一過性にトランスフェクトした。後者の構造物は、ＩＲＴＡ１／
ＣａＲＴ−ＰＣＲ生成物を使用して、ＭＲ４から作製した。細胞（２ｘ１０^６の形質移入体と２ｘ１０^７の残りの細胞株）を、プロテアーゼ阻害剤カクテル（
ＲｏｃｈｅＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）の存在下で、トリトンＸ−１００溶解
緩衝液（１５０ｍＭＮａＣｌ、１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ［ｐＨ７．４］、
１％Ｔｘ−１００、０．１％ＢＳＡ）で可溶化した。ＩｇＡ膜ペプチドの細胞外
部分に対して作製した４ｍｇ／ｍｌのモノクローナル抗体＃１１７−３３２−１
（Ｙｕｅｔａｌ．、１９９０）（ＴａｎｏｘＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎ
ｃ、Ｈｏｕｓｔｏｎ、Ｔｅｘａｓ）とともに、４℃で２時間溶解物をインキュベ
ートした。１０〜２０％のＴｒｉｓ−ＨＣｌ勾配ゲル（ＢｉｏＲａｄ）で電気泳
動を行う前に、タンパク質Ｇ−セファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いて免
疫複合体を単離して、前記１５ｍｇ／ｍｌの＃１１７−３３２−１抗体を使用し
てイムノブロッティングした。結果をＥＣＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）で可視化した
。

【０１０５】結果ｔ（１；１４）（ｑ２１；ｑ３２）の分子クローニング：「非正統的（ｉｌｌｅｇｉｔｉｍａｔｅ）」スイッチ組換え現象の結果、Ｉｇ
重鎖（ＩＧＨ）遺伝子座を含む染色体転座は、ＩｇＨスイッチ領域内又は近傍で
起こることが多い（Ｄａｌｌａ−Ｆａｖｅｒａｅｔａｌ．，１９８３；
Ｃｈｅｓｉｅｔａｌ．，１９９６；Ｃｈｅｓｉｅｔａｌ．，１９
９８）。サザンブロットハイブリダイゼーションアッセイにより、ＩＧＨ定常（
Ｃ_Ｈ）領域配列がＩＧＨ接合（Ｊ_Ｈ）領域及び５’スイッチ領域（Ｓ）配列との
シンテニー相関を失った再編成された対立遺伝子として、組換えの限界点を検出
することができる（Ｄａｌｌａ−Ｆａｖｅｒａｅｔａｌ．，１９８３；Ｎ
ｅｒｉｅｔａｌ．，１９８８；Ｎｅｒｉｅｔａｌ．，１９９１；
Ｂｅｒｇｓａｇｅｌｅｔａｌ．，１９９６）。該アッセイによって、Ｂ−
ＮＨＬ及びＭＭにおけるＩｇＨ遺伝子座に対するいくつかの染色体パートナーが
同定されるに至った（Ｔａｕｂｅｔａｌ．，１９８２；Ｄａｌｌａ−Ｆ
ａｖｅｒａｅｔａｌ．，１９８３；Ｎｅｒｉｅｔａｌ．，１９８
８；Ｎｅｒｉｅｔａｌ．，１９９１；Ｙｅｅｔａｌ．，１９９
３；Ｃｈｅｓｉｅｔａｌ．，１９９６；Ｒｉｃｈｅｌｄａｅｔａ
ｌ．，１９９７；Ｉｉｄａｅｔａｌ．，１９９７；Ｄｙｏｍｉｎ
ｅｔａｌ．，１９９７；Ｄｙｏｍｉｎｅｔａｌ．，２０００）。Ｆ
Ｒ４（細胞遺伝学的解析によって、ｔ（１；１４）（ｑ２１；ｑ３２）を保有す
ることが判明している骨髄腫細胞株）（Ｔａｇａｗａｅｔａｌ．，１９９
０；ＴａｎｉｗａｋｉＭ，未発表結果）における前記１ｑ２１限界点をク
ローニングするために、本発明者は前記方法と同じ方法を採用した。サザンブロ
ットハイブリダイゼーション解析により、ＦＲ４中のＣα重鎖遺伝子座内部に２
つの「非正統的」に再編成された断片を同定し（データは示さず）、ＦＲ４ゲノ
ムＤＮＡから構築されたファージライブラリーからクローニングした。制限酵素
マッピング、サザンブロットハイブリダイゼーション及び２つのゲノムファージ
（クローンλＦＲ４Ｂ−５及びλＦＲ４Ｓ−ａ、図８Ａ）のヌクレオチドを部分
的に配列決定することによって、該組換え断片は１４ｑ３２上のＣα_１座と非Ｉ
ＧＨ配列との間での相互均等転座の染色体限界点を含んでいることが示された。
次いで、ファージ、Ｐ１人工染色体（ＰＡＣ）、及び酵母人工染色体（ＹＡＣ）
ヒトゲノムライブラリーから対応する正常なゲノム遺伝子座をクローニングする
ためにこれらの非ＩＧＨ配列を示すプローブ（１．０ＥＨ）（図８Ａ）を用いた
。前記限界点領域にわたる１００−ｋｂの非キメラＰＡＣクローン４９Ａ１６（
下記参照、図１３）を用いた正常なヒトの中期スプレッドの蛍光インサイチュハ
イブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）解析によって、相手方の染色体遺伝子座がバ
ンド１ｑ２１に由来することが同定された（図８Ｃ）。１番染色体内の単一遺伝
子座へのマッピングは、個々のヒト染色体の代表的な体細胞ハイブリッドパネル
から得られたＤＮＡに対する２つの非反復配列プローブのハイブリダイゼーショ
ンによって確認した（データは示していない）。これらの結果はＦＲ４における
ｔ（１；１４）（ｑ２１；ｑ３２）を包含する配列の前記クローニングと一致し
た。

【０１０６】派生した染色体上の限界点領域の配列解析、及び生殖細胞系列の１４ｑ３２及
び１ｑ２１遺伝子座とのアラインメントによって、１４番染色体上のＣＨ３とＣ
α_１の膜貫通エキソン間で、イントロン中に限界点が生じていることが明らかと
なった。限界点領域には組換えシグナル配列（ＲＳＳ）又はスイッチシグナル配
列（Ｋｕｐｐｅｒｓｅｔａｌ．，１９９９）が欠損していたが、生殖細胞
系列の１４番染色体及び１番染色体の両方の限界点接合部には配列ＣＴＴＡＡＣ
（図８Ｂでは下線が付されている）が存在していた。派生した各染色体には、ｄ
ｅｒ（１）コピー中に僅かな変化を伴う（最後のヌクレオチド中の点突然変異：
ＣからＧ）該配列が１コピー存在した。１番染色体上のＣＴＴＡＡＣに先行する
ヌクレオチドＡＴも派生した両染色体中に存在した（図８Ｂ）。転座によって１
番染色体配列の欠失は起こらなかった。これに対して、本発明者らは、ｄｅｒ（
１）の１４番染色体の部分には、限界点接合の上流に２つの欠失、すなわち、１
６ヌクレオチドの欠失（ＧＧＣＡＣＣＴＣＣＣＣＴＴＡＡＣ）及び６ヌクレオチ
ド上流の４ヌクレオチド欠失（ＴＧＣＡ）を観察した（図８Ｂ）。これらの観察
は、ＦＲ４細胞中のｔ（１；１４）（ｑ２１：ｑ３２）がおそらく両染色体上の
相同な配列（ＣＴＴＡＡＣ）の存在によって促進された均等な相互転座であるこ
とを示している。

【０１０７】１ｑ２１限界点領域は免疫グロブリン受容体スーパーファミリーの新規メンバ
ーをコードする遺伝子を含有する：次に、本発明者らは、ＦＲ４中の転座限界点を包含する染色体１ｑ２１の領域
が転写ユニットを含むかどうかを調べた。部分的にオーバーラップするＰＡＣク
ローン４９Ａ１６と２１０Ｋ２２（図１３）から得たＤＮＡをプラスミド中に「
ショットガン」クローニングし、配列を決定し、ヒトゲノムデータベースにおけ
る既知の遺伝子との相同性に関する解析を行った。平行して、エキソントラッピ
ング法（Ｃｈｕｒｃｈｅｔａｌ．，１９９４）により４９Ａ１６ＰＡＣ上
の候補遺伝子を探索した。

【０１０８】１ｑ２１ゲノムクローンへの候補エキソンのマッピングによりＦＲ４限界点は
捕捉された２つのエキソンの間で（両エキソンは脾臓ＲＮＡを用いたＲＴ−ＰＣ
Ｒによって連結され得るので、同一の転写産物上に存在する）（下記参照、図１
３）起こっていることが明らかとなった。次いで、該転写産物に相当する完全長
クローンを単離するために脾臓ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングするため
のプローブとして該ＲＴ−ＰＣＲ産物を用いた。２セットのｃＤＮＡクローンが
同定され、両者は２つの異なる転写産物であり、４４３ｂｐプローブ領域内にお
いて７６％のｍＲＮＡ配列の相同性を示した。５’及び３’伸長産物を生成する
ヒト脾臓ｃＤＮＡに対するＲＡＣＥによって、両転写産物の完全長ｃＤＮＡクロ
ーンを得た。

【０１０９】最初の転写物に相当するｃＤＮＡの模式図を図９Ａに図示した。３’非翻訳領
域内のポリアデニル化部位と思われる３つの部位を交互に用いることによって、
同じ推定５１５アミノ酸のタンパク質をコードする２．６、２．７、３．５ｋｂ
の３つのｍＲＮＡ種が生じる（図９Ａ）。該タンパク質の予想される特徴は、［
−３， −１］ルールに従う（ｖｏｎＨｅｉｊｎｅ，１９８６）シグナルペ
プチド、３つのアスパラギン（Ｎ）結合グリコシル化候補部位を有する４つの細
胞外Ｉｇ型領域（図９Ａ）、３つのコンセンサスＳｒｃ−相同性２（ＳＨ２）
−結合ドメインの候補（ＵｎｋｅｌｅｓｓａｎｄＪｉｎ，１９９７）を伴
う１６アミノ酸の膜貫通ドメインと１０６アミノ酸の細胞質ドメインを含む（図
１０Ｂ）。これらの（ＳＨ２）−結合ドメインは、ＩＴＡＭ（Ｉｍｍｕｎｅ−ｒ
ｅｃｅｐｔｏｒＴｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄＡｃｔｉｖａｔｉｏｎＭｏ
ｔｉｆ−Ｄ／ＥＸ_７／ＥＸ_２ＹＸＸＬ／ＩＸ_６−８ＹＸＸＬ／Ｉ；Ｘは非保存的
な残基を表す）（Ｒｅｔｈ，１９８９）とＩＴＩＭモチーフ（Ｉｍｍｕｎｅ−
ｒｅｃｅｐｔｏｒＴｙｒｏｓｉｎｅ−ｂａｓｅｄＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎＭｏｔｉｆ−Ｓ／Ｖ／Ｌ／ＩＹＸＸＬ／Ｖ、Ｘは非保存的な残基を示す）（Ｕｎｋ
ｅｌｅｓｓａｎｄＪｉｎ，１９９７）特徴をともに示す。図１０Ｂに示さ
れているように、最初の２つのＳＨ２−結合ドメインは８アミノ酸離れており、
コンセンサスＩＴＡＭモチーフと一致する。前記コンセンサスから派生して、グ
ルタミン酸残基（Ｅ）が最初のチロシン残基（Ｙ）の２アミノ酸はなく、４アミ
ノ酸前に位置し（図１０Ｂ）、チロシン（Ｙ）から＋３位はロイシン（Ｌ）又は
イソロイシン（Ｉ）ではなくバリン（Ｖ）によって占められている（Ｃａｍｂｉ
ｅｒ，１９９５）。３つ全てのドメインがＩＴＩＭコンセンサスに一致し、Ｉ
ＴＩＭの場合、各々が別個のエキソンでコードされる。従って、それらの編成は
３つのＩＴＩＭか、又は１つのＩＴＡＭと１つのＩＴＩＭを生じ得る。該タンパ
ク質の全体的構造から、該タンパク質はＩｇスーパーファミリーの新規膜貫通型
受容体であることが示唆され、このためＩＲＴＡ１（ＩｍｍｕｎｅＲｅｃｅｐ
ｔｏｒＴｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎＡｓｓｏｃｉａｔｅｄｇｅｎｅ１）
と名付けられた。

【０１１０】第２のｃＤＮＡはＩＲＴＡ１と相同性を示し（細胞外ドメインをコードするＩ
ＲＴＡ１メッセージの長さに対して６８％のヌクレオチド同一性）、ＩＲＴＡ２
と名付けられた。ＩＲＴＡ２遺伝子座はＩＲＴＡ１よりも複雑であり、異なる分
子量（それぞれ、２．８、４．７、及び５．４ｋｂ）を有する３つの主要なｍＲ
ＮＡイソフォーム（ＩＲＴＡ２ａ、ＩＲＴＡ２ｂ、ＩＲＴＡ２ｃ）へと転写され
、それぞれ固有の３’非翻訳領域を有する（図９Ｂ）。さらに、ＩＲＴＡ２の５
３６番目のヌクレオチドの早期ポリアデニル化シグナルを用いて、０．６ｋｂの
転写産物（図１２Ａ）が生じる。該転写産物によってコードされる前記３つの予
想されるＩＲＴＡ２タンパク質のイソフォームは５６０残基まではアミノ酸配列
が共通しており、共通のシグナルペプチド及び６個の細胞外Ｉｇ型ドメインを有
する（図９Ｂ）。ＩＲＴＡ２ａはＣ末端に１３個の主として極性のユニークなア
ミノ酸が続く８つのＩｇ−型ドメインを有する７５９アミノ酸の分泌型糖タンパ
ク質をコードする。ＩＲＴＡ２ｂは、５６０番目のアミノ酸残基においてＩＲＴ
Ａ２ａから派生し、３２の短いアミノ酸残基がさらに付加されており、その疎水
性はＧＰＩ−アンカーを介した細胞膜へのドッキングに適している（Ｆｅｒｇｕ
ｎｓｏｎａｎｄＷｉｌｌｉａｍｓ，１９８８）。ＩＲＴＡ２ｃは、ＩＲＴ
Ａ２ａの７４６番アミノ酸から分かれた配列を有する最も長いイソフォームであ
る。ＩＲＴＡ２ｃは、Ｎグリコシル化部位となり得る８個の部位を有する９個の
細胞外Ｉｇ−型ドメインと、２３アミノ酸膜貫通ドメインと、３つのコンセンサ
スＳＨ２−結合モチーフを伴う１０４アミノ酸の細胞質ドメインとを有するＩ型
膜貫通型糖タンパク質をコードする（図１０Ｂ）。ＩＲＴＡ２ｃ内の各ＳＨ２−
結合部位は、ＩＴＩＭコンセンサスと一致し（図１０Ｂ）、別個のエキソンによ
ってコードされる。これらの特徴は、ＩＲＴＡ２ｃが分泌型及びＧＰＩ−結合型
イソフォームを有するＩｇスーパーファミリーに属する新規膜貫通型受容体であ
ることを示唆している。

【０１１１】ＩＲＴＡタンパク質と免疫グロブリンスーパーファミリー受容体の相同性：ＩＲＴＡ１及びＩＲＴＡ２の細胞外ドメイン全体のアミノ酸を互いに、又は他
のＩｇスーパーファミリーのメンバーと並列させるとそれらの間で顕著な相同性
があり（４７％の同一性、５１％の類似性）、これよりは低いがＦｃガンマ受容
体ファミリーのタンパク質とも高い相同性を示すことが明らかとなった。Ｆｃ受
容体の異なるクラス間で保存されているアミノ酸の部位では、この相同性はさら
に高かった。Ｆｃ受容体の中でも、高親和性ＩｇＧ受容体ＦＣＧＲＩ（ＣＤ６４
）は、ＩＲＴＡ１及びＩＲＴＡ２の全細胞外部分にわたって、最初の３つのＩｇ
−ドメインと最も高レベルの相同性を示した（３７％の同一性、５０％の類似性
）（図１０Ａ）。ＩＲＴＡタンパク質、及びヒト血小板内皮細胞接着分子（ＰＥ
ＣＡＭ１）、Ｂ−リンパ球細胞接着分子（ＣＤ２２）、及び胆管糖タンパク質１
（ＢＧＰ１）を含む他の細胞表面分子の細胞外ドメインとの間では更に低いレベ
ルの相同性が観察された（２２−２５％同一性、３８−４１％相同性）。

【０１１２】細胞質ドメインには、ＩＲＴＡとＦｃ受容体ファミリーのメンバーとの間に相
同性は全く見られない。これに対して、ＩＲＴＡ１とＰＥＣＡＭ１の間（３１％
のアミノ酸同一性、４５％の相同性）、ＩＲＴＡ２ｃとＢＧＰ１の間（３０％の
同一性、３５％の相同性）、ＩＲＴＡ２ｃとＰＥＣＡＭ１の間（２８％の同一性
、５０％の相同性）ではかなりのアミノ酸相同性が存在する（図１０Ｂ）。これ
らの相同性は、これらの異なるタンパク質によって類似した下流の信号伝達経路
が利用されていることを示唆している。

【０１１３】ＩＲＴＡ１及びＩＲＴＡ２は、通常Ｂ細胞の特定の亜集団中で発現される：まず、様々な正常なヒトの組織に由来するＲＮＡ、並びに様々な造血系列及び
様々なＢ細胞発生段階に相当するヒト細胞株に由来するＲＮＡのノザンブロット
ハイブリダイゼーションによってＩＲＴＡ１及びＩＲＴＡ２のｍＲＮＡの正常な
発現パターンを解析した。

【０１１４】ＩＲＴＡ１の発現は、ヒト脾臓及びリンパ節ＲＮＡでは、非常に低レベルで検
出され（図１１Ａ、左図）、胎児肝臓、骨髄、肺、胎盤、小腸、腎臓、肝臓、大
腸、骨格筋、心臓及び脳を含む解析した他の全てのヒト組織には検出されなかっ
た（データは示していない）。Ｂ細胞株の中では、前Ｂ及び胚中心Ｂ細胞、形質
細胞、及び赤血球細胞、Ｔ細胞及び骨髄由来に相当する細胞株には、ＩＲＴＡ１
の発現は存在しなかった（データは示していない、材料と方法参照）。ＥＢＶで
不死化したリンパ芽球細胞株（ＬＣＬ）（Ｂ細胞の分化における胚中心Ｂ細胞の
下流に位置する亜集団（免疫芽球）を表す）中に、低レベルで発現が検出される
にすぎなかった。しかしながら、エストロゲンを欠失させたＥＲ／ＥＢ細胞（Ｅ
ＢＮＡ２遺伝子をエストロゲン受容体に融合させ、エストロゲンを除去してＧ_０／Ｇ_１期で停止されている間にエストロゲンの存在下で増殖する組換えＥＢＶゲ
ノムによって不死化されている）において発現が誘導された（Ｋｅｍｐｋｅｓ
ｅｔａｌ．，１９９５）。エストロゲンの存在下では、これらの細胞中にＩ
ＲＴＡ１の発現は僅かに検出されたが、エストロゲンを除去して、Ｇ_０／Ｇ_１期
を停止させると誘導された（１０倍）（図１１Ａ、右図）。総合すると、これら
の結果は、ＩＲＴＡ１が脾臓及びリンパ節に存在するリンパ球系亜集団において
発現され、おそらく休止期のＢ細胞によって提示されることが示唆される。

【０１１５】ＩＲＴＡ１を発現する細胞の表現型及び組織分布をさらに調べるために、本発
明者らはＩＲＴＡ１アンチセンスｃＤＮＡプローブを用いてヒト扁桃組織に対す
るインサイチュハイブリダイゼーションを行った（図１１Ｂ）。対照センスｃＤ
ＮＡプローブ（図１１Ｂ中のパネル＃１）、アンチセンスｃＤＮＡプローブ（パ
ネル＃２）を用いたインサイチュハイブリダイゼーション、及びリンパ球組織の
構造の輪郭を明らかにするためのヘマトキシリンとエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色のた
めに連続切片を処理した。胚中心及びリンパ小節のマントルゾーンには前記ＩＲ
ＴＡ１ハイブリダイゼーションシグナルはなく、上皮内領域中への浸潤を伴って
、リンパ小節近傍のゾーンに特徴的に集中していた（図１１Ｂ−２、１１Ｂ−４
）。文献に報告されているように、該領域では、Ｂ細胞のみがＢ細胞特異的なマ
ーカーを用いた染色（ＩｇＤ、示していない）によって、及び抗ＩＲＴＡ１抗体
、抗Ｂ抗体（ＣＤ２０、ＰＡＸ５）、抗Ｔ抗体（ＣＤ−３）、及び抗単球抗体（
ＣＤ６８）を用いた免疫組織化学的解析によって（図示せず；Ｇ．Ｃａｔｔｏ
ｒｅｔｔｉｅｔａｌ．，投稿準備中）Ｂ細胞のみが陽性であった。該リン
パ小節近傍領域は扁桃腺の「周辺帯」に相当するものであり、大部分はメモリー
Ｂ細胞及び単球Ｂ細胞を含有する機能的に異なるＢ細胞コンパートメントである
（ｄｅＷｏｌｆ−Ｐｅｅｔｅｒｓｅｔａｌ．，１９９７）。正常組織及
び細胞株のノザンブロット解析と合わせると、これらの結果は、リンパ小節近傍
及び上皮内領域（メモリーＢ細胞が豊富な部位）に形態的に位置する休止期の成
熟Ｂ細胞の亜集団中にＩＲＴＡ１が発現していることを示している。

【０１１６】ＩＲＴＡ２の場合には、ノザンブロット解析によりヒトリンパ節、脾臓、骨髄
及び小腸ｍＲＮＡ中に、全ての選択的スプライシング種が検出され、ＩＲＴＡ２
ａイソフォームが比較的多量であった（図１２Ａ、左図）。テストしたリンパ球
及び非リンパ球由来の造血系細胞株の中では、ＩＲＴＡ２の発現は免疫芽、胚中
心後の表現型を有するＢ細胞株に限定されていた（図１２Ａ、右図）。ＩＲＴＡ
１と同様に、前Ｂ細胞、胚中心の胚中心細胞、形質細胞、Ｔ細胞、赤血球細胞、
骨髄細胞由来の細胞株ではＩＲＴＡ２の発現はなかった（図１２Ａ、右図）。

【０１１７】ＩＲＴＡ２ｃのｃＤＮＡをプローブとして用いたヒト扁桃組織のインサイチュ
ハイブリダイゼーション解析はノザンブロット解析の結果と一致した。少数の陽
性細胞を除き、ＩＲＴＡ２のｍＲＮＡは胚中心のマントルゾーンではほとんど見
られなかった（図１２Ｂ−２、１２Ｂ４）。胚中心の中では、胚中心細胞に代表
される暗部帯はＩＲＴＡ２陰性であるのに対して、中心細胞が豊富である明帯は
強く陽性であった（図１２Ｂ−２、１２Ｂ−４）。最後に、胚中心濾胞外の均等
な領域である「周辺帯」中と、扁桃腺の上皮内及びリンパ小胞間領域中にＩＲＴ
Ａ２ｍＲＮＡが検出された。該パターンは中心細胞及び後胚中心Ｂ細胞におけ
るＩＲＴＡ２の特異性と一致する。該発現パターンを比較して、ＩＲＴＡ１とＩ
ＲＴＡ２は何れも成熟Ｂ細胞に特異的であるが、ＩＲＴＡ２は中心細胞及びリン
パ小胞間のＢ細胞を含むさらに広い発現パターンを示すのに対して、ＩＲＴＡ１
は周辺帯Ｂ細胞（おそらくはメモリー細胞）に限定されると本発明者らは結論す
る。

【０１１８】ＩＲＴＡ１及びＩＲＴＡ２遺伝子のゲノム構造：ＩＲＴＡ１及びＩＲＴＡ２遺伝子の構造と発現に対する１ｑ２１異常の結果を
理解するために、本発明者らは、まずそれらのゲノム遺伝子座の構成を決定した
。ＩＲＴＡ１遺伝子は、１１個のエキソンを含み、２４．５ｋｂの総ゲノムサイ
ズを有する（図１３）。ＩＲＴＡ２遺伝子座は約４０ｋｂのゲノム領域にわたる
ことが判明した（図１３）。３つのＩＲＴＡ２の選択的スプライシング産物は、
最初の８個のエキソンを共有しており、この地点でＩＲＴＡ２ｂは次のスプライ
シング部位を利用せず、その３’ＵＴＲ領域に入ることによって終結する。ＩＲ
ＴＡ２ａと２ｃイソフォームはエキソン９の中にスプライスし、ＩＲＴＡ２ａは
エキソン１１の後に３’ＵＴＲに入り、ＩＲＴＡ２ｃはエキソン１２に入って、
エキソン１８まで伸長する（図１３）。

【０１１９】配列データを元に、本発明者らは、ＩＲＴＡ１とＩＲＴＡ２遺伝子が互いに２
１ｋｂ離れて存在しており、テロメア（５’）からセントロメア（３’）に向か
って伸びる同じ転写方向で並列していることを決定した（図１３）。１ｑ２１座
において、これらの遺伝子は互いに強く連鎖しているとともに、本発明者らがＩ
ＲＴＡとの相同性に基づいて最近クローニングした３つの更なる遺伝子とも強く
連鎖している（Ｉ．Ｍ，投稿準備中）。５つの遺伝子は全て近接しており、１
ｑ２１遺伝子座の〜３００ｋｂをカバーしている。該領域は以前に報告された１
ｑ２１限界点の間に存在する。前記各遺伝子を保有するゲノムクローン間のＷｈ
ｉｔｅｈｅａｄＩｎｓｔｉｔｕｔｅＲａｄｉａｔｉｏｎＨｙｂｒｉｄマッ
プ上での距離に基づくと、ＩＲＴＡ１−２遺伝子座はＭＵＣ１遺伝子座からテロ
メア方向に約０．８Ｍｂ離れていると推定され（Ｎ．Ｐ，未発表データ；Ｄｙ
ｏｍｉｎｅｔａｌ．，２０００；Ｇｉｌｌｅｓｅｔａｌ．，２００
０）、ＦＣＧＲＩＩＢ遺伝子座からはセントロメア方向に７Ｍｂ以下離れている
（Ｎ．Ｐ．，未発表データ）。

【０１２０】ｔ（１；１４）（ｑ２１；ｑ３２）転座によって、ＦＲ４骨髄腫細胞株中にＩ
ＲＴＡ１／Ｃａ_１融合タンパク質が生じる：生殖細胞系列とＣａ_１及びＩＲＴＡ１遺伝子座由来の再編成された配列との比
較制限酵素解析及びヌクレオチド配列解析によって、前記転座はＩＲＴＡ１遺伝
子のイントロン２内の配列をＣＨ３とＣａ_１の膜貫通エキソン間のイントロン配
列に同じ転写方向で融合することが示された（図１４Ａ）。このことは、もしＩ
ＲＴＡ１配列が転座した遺伝子座に発現するのであれば、ＩＲＴＡ１エキソンの
３’境界に位置する元の状態の供与部位とＣａ_１の５’に位置する元の状態の受
容部位とを融合ＩＲＴＡ１／Ｃａ_１ｍＲＮＡ、及びおそらくはＩＲＴＡ１／Ｃａ_１融合タンパク質を作製するために使用できることを示唆した。

【０１２１】この予測をテストするために、本発明者らは、エキソン１由来のＩＲＴＡ１ｃ
ＤＮＡプローブを用いたノザンブロット解析によって、ＦＲ４におけるＩＲＴＡ
１のｍＲＮＡの発現を解析した（図１４Ａ）。該プローブによって、他のＢ細胞
株には存在せず、ＥＲ／ＥＢ細胞中に検出される正常な２．５ｋｂのメッセージ
よりも短い０．８ｋｂのメッセ−ジがＦＲ４中に検出された（図１４Ｂ）。本発
明者らは、ＩＲＴＡ１エキソン１の５’境界に位置する配列とＣα細胞内エキソ
ンの３’境界に位置する配列由来のプライマーを用いたＦＲ４ｍＲＮＡのＲＴ
−ＰＣＲによって、該転写産物をクローニングした（図１４Ａ）。ＦＲ４からＲ
Ｔ−ＰＣＲ産物が得られたが、野生型の表面ＩｇＡを発現するＤＡＫＩＫＩ細胞
株又はｔ（１；１４）転座を欠く他の細胞株からは得られなかった（データは示
していない）。ＰＣＲ産物を直接配列決定分析にかけることによって、正準的な
スプライシング部位において、スプライシングがＩＲＴＡ１とＣａ_１を連鎖させ
ることが示され、融合転写産物が８２０ｂｐの長さであることが決定された。

【０１２２】予想タンパク質産物の解析によって、ＩＲＴＡ１／Ｃα_１スプライシングによ
り、ＩＲＴＡ１シグナルペプチドと最初の２つの細胞外アミノ酸の間に、膜Ｉｇ
Ａ_１（ｍＩｇＡ_１）受容体の３２アミノ酸の細胞外スペーサー、膜貫通領域、及
び細胞内尾部を伴う融合が生じることが示された（図１４Ｃ）。ＦＲ４タンパク
質抽出物中での該融合タンパク質の発現をアッセイするために、本発明者らは、
免疫沈降と続くウェスタンブロッティング用に、Ｃα_１の膜貫通イソフォームに
対して特異的な細胞外アミノ酸残基に対して誘導された抗体（Ｙｕｅｔａｌ
．，１９９０）を用いた。ＦＲ４細胞はＩＲＴＡ１／Ｃα_１融合タンパク質の
予想サイズと一致する９．８ｋＤａのタンパク質を発現するが、野生型表面Ｉｇ
Ａを発現する対照細胞株（ＤＡＫＩＫＩ）は該タンパク質を発現していないこと
が、晴我々の結果によって実証された（図１４Ｄ）。これらの結果は、シグナル
ペプチドと、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメイン（７１アミノ酸）をコードする
Ｃα_１に融合されたＩＲＴＡ１の最初の２つの細胞外残基（１７アミノ酸）とか
ら構成される転座した対立遺伝子が融合タンパク質をコードしていることが示さ
れた。ｄｅｒ（１４）でのＩＲＴＡ１／Ｃａ_１の過剰発現とは対照的に、ＦＲ４
では、相互Ｃａ_１／ＩＲＴＡ１転写産物又はｄｅｒ（１）上に存在する元の状態
のＩＲＴＡ２遺伝子の発現は全く検出されなかった。

【０１２３】ＦＲ４を除いて、染色体バンド１ｑ２１の状態に関わらず、他の何れの骨髄腫
又はリンパ腫細胞株でも、ＩＲＴＡ１のｍＲＮＡの発現は見られなかった（デー
タは示していない）。従って、ＩＲＴＡ１／Ｃａ融合は、１ｑ２１異常ではまれ
な現象といえる。

【０１２４】１ｑ２１異常を保有する細胞株におけるＩＲＴＡ２の発現の高頻度調節解除：他の１ｑ２１限界点とＩＲＴＡ１／２遺伝子座の間の物理的な関係を確定する
ために、本発明者らは、本発明者らのＢＬ及びＭＭ細胞株群に対してＰＡＣ４
９Ａ１６を用いたＦＩＳＨ解析を行った。解析した１０個のＢＬ細胞株のうち、
７つはｄｕｐ（１）（ｑ２１ｑ３２）を有し、３つは１ｑ２１転座（ＡＳ２８３
Ａ、ＢＬ１０４、ＢＬ１３６）を有しており、本発明者らは、前者の７つに、後
者の２つにＩＲＴＡ１／ＩＲＴＡ２遺伝子座に相当する３つのシグナルを検出し
、第１のケースではｄｕｐ（１）（ｑ２１ｑ３２）と一致し、第２のケースでは
１ｑ２１に転座限界点が続くｄｕｐ（１）（ｑ２１ｑ３２）と一致していた（表
１）。ＩＲＴＡ遺伝子座を包含するプローブを使用し、隣接するゲノムクローン
を用いるＡＳ２８３Ａ及びＢＬ１３６のＦＩＳＨ解析によって、両細胞株ともに
、派生した染色体の限界点はＩＲＴＡ遺伝子座の外側に存在することが決定され
、ＡＳ２８３ではセントロメアの方向に８００ｋｂより離れた距離に、ＢＬ１３
６ではテロメア方向に８００ｋｂより離れた距離に位置していた（Ｎ．Ｐ，未
発表結果）。かかる知見と一致して、３００ｋｂのＹＡＣ２３ＧＣ４を用い、
間期にＦＩＳＨを行って、３０症例のＭＭ原発性腫瘍を解析することにより、１
５症例（解析を行った総症例の５０％）は、２より多い間期のＦＩＳＨシグナル
を有しており（データは示していない）、ＹＡＣセントロメア及びテロメア境界
に隣接する２つのＰＡＣクローンを用いた二重染色ＦＩＳＨでは、これら２つの
プローブの分裂は何れの症例においても検出されなかった。これらの結果は、Ｆ
Ｒ４を除き、ＢＬ又はＭＭ中の１ｑ２１異常の限界点がＩＲＴＡ１とＩＲＴＡ２
によって規定されるゲノム領域の内部、又はその近傍には存在しないことを示し
ている。しかしながら、不均等転座（表１中のＡＳ２８３Ａ、ＢＬ１３６、ＸＧ
２、ＸＧ７）が後ろに続いているｄｕｐ（１）（ｑ２１ｑ３２）（表１参照）又
はｄｕｐ（１）（ｑ２１ｑ３２）では、ＩＲＴＡ遺伝子を含有する１ｑ２１の部
分的なトリソミー又はテトラソミーという一貫した結果が得られている。

【０１２５】

【表１】次に、本発明者らは、これらの異常がＩＲＴＡ２のｍＲＮＡの発現に対して影
響を有するかどうかを調べた。この目的のため、本発明者らは、１ｑ２１染色体
異常を喪失又は表現する一群のＢ−ＮＨＬ及びＭＭ細胞株を用いてノザンブロッ
トをスクリーニングするために、ＩＲＴＡ２の５’非翻訳領域に相当するｃＤＮ
Ａプローブを使用した。正常な１ｑ２１染色体を有する多くのＢＬ株（１０／１
２）では、ＩＲＴＡ２の発現が実質的に欠如していることを結果は示しており、
通常はＩＲＴＡ２が発現していないＧＣ中心細胞にＢＬが由来するという事実と
一致している（図１５Ａ、左図）。これに対して、１ｑ２１異常を保有する大部
分のＢＬ株では（１０／１２）、正常な１ｑ２１を有するＢＬで検出された基底
値の２〜５０倍のレベルにわたるＩＲＴＡ２ｍＲＮＡのアップレギュレーショ
ンが明確に示された（図１５Ａ、右図）。骨髄腫細胞株の中では、ＩＲＴＡ２は
１ｑ２１異常（ＸＧ２）示す３つの株のうち１つの株において過剰発現されてい
たのに対して、正常な１ｑ２１を有する７つの株では全く発現していなかった（
図１５Ｂ）。

【０１２６】これらの結果は、１ｑ２１染色体異常の存在とＢＬにおけるＩＲＴＡ２ｍＲ
ＮＡ発現の調節解除との間に強い相関が存在することを示しており、ＩＲＴＡ２
遺伝子座のトリソミーが、該リンパ腫サブタイプの中でそれ自身の発現を調節解
除し得ることを示している。

【０１２７】考察本明細書に記載されているように、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫において
バンド１ｑ２１に影響を与える染色体異常に関与する遺伝子を同定する努力によ
って、ＩＲＴＡ１及びＩＲＴＡ２が発見された。両者は免疫受容体ファミリーに
属する関連受容体の新規サブファミリーの最初のメンバーであって、ＩＲＴＡ１
及びＩＲＴＡ２タンパク質をコードする完全長の核酸配列が本明細書に記載され
ており、コードされているＩＲＴＡ１とＩＲＴＡ２タンパク質のアミノ酸配列が
同様に記載されている。続いて、関連する受容体の該サブファミリーのメンバー
として、３つの遺伝子ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、ＩＲＴＡ５がさらに単離され、
その全長核酸配列と、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、ＩＲＴＡ５タンパク質をコード
するアミノ酸配列が本明細書に記載されている。これらの結果はＢ細胞の正常な
生物学及びリンパ腫生成における１ｑ２１異常の役割に関する示唆を与える。

【０１２８】ＩＲＴＡ１及びＩＲＴＡ２はＩｇスーパーファミリーにおける新規サブファミ
リーの最初のメンバーである：２つのＩＲＴＡ遺伝子間及び該遺伝子がコードするタンパク質間で共通する幾
つかの特徴は、これらの遺伝子が免疫受容体スーパーファミリー内の新規サブフ
ァミリーを形成することを示唆している。第１に、これらの遺伝子の細胞外ドメ
インは、他のスーパーファミリーのメンバーと比べて、ｍＲＮＡ配列（６８％同
一性）とタンパク質配列（４７％同一性）の両者が互いに高度の相同性を有して
いる。第２に、これらの遺伝子の細胞質ドメインが相同性を示し、相同性のある
アミノ酸配列に関して、ＩＴＡＭ様及びＩＴＩＭシグナルモチーフが存在すると
いう特徴を有する。第３に、より高いファミリー内相同性を示し、１ｑ２１にお
いて〜３００ｋｂ領域中に緊密なクラスターを成すさらに大きな５つの遺伝子の
ファミリーに、ＩＲＴＡ１及びＩＲＴＡ２は属する（Ｉ．Ｍ．ｅｔａｌ．，
投稿準備中）。Ｆｃ受容体ファミリーに関して提唱されているメカニズムと同様
に（Ｑｉｕｅｔａｌ．，１９９０）、遺伝子重複と配列の多様化というプ
ロセスによって、共通の祖先遺伝子がこのサブファミリーを生じさせた可能性が
あることをこれらの遺伝子のゲノム構造は示唆している。

【０１２９】とりわけ高親和性のＦＣＧＲＩ受容体と高度のアミノ酸相同性を有することに
基づくと（３７−４５％のアミノ酸同一性）、ＩＲＴＡタンパク質は、細胞外ド
メインがＦｃ受容体サブファミリーと極めて近縁である。１ｑ２１上のＦＣＧＲ
Ｉ遺伝子座と１ｑ２１−ｑ２３上のＦＣＥＲＩ及びＦＣＧＲＩＩ−ＩＩＩ遺伝子
座との間に、ＩＲＴＡファミリーの遺伝子座が位置するということは、Ｆｃ受容
体と進化的な起源が共通することも示唆している。最後に、ＩＲＴＡ及びＦＣＲ
遺伝子は、シグナルペプチドをコードする遺伝子部位のエキソン／イントロン構
造が類似しており、とりわけ２つ目の２１ｂｐのエキソン内に位置するシグナル
ペプチド部位をコードする配列を有する２つの５’リーダーエキソンが類似して
いる。

【０１３０】細胞内ＩＴＩＭ様モチーフに基づくと、ＩＲＴＡタンパク質は阻害的受容体ス
ーパーファミリー（ＩＲＳ）（免疫系の多くの細胞種の活性化を遮断する受容体
群）のメンバー（Ｌａｎｉｅｒ，１９９８）であると考えることができる。こ
のようなメンバーには、ヒトではＦＣＧＲＩＩＢとＣＤ２２（ＤｅＬｉｓｓｅｒ
ｅｔａｌ．，１９９４）が、マウスではＰＩＲ−Ｂ（Ｋｕｂａｇａｗａ
ｅｔａｌ．，１９９７）を含まれる。ＩＲＳメンバーと同様に、ＩＲＴＡ１
とＩＲＴＡ２のＩＴＩＭは個々のエキソンにコードされる。多くのＩＲＳメンバ
ーが共有する特徴は、その細胞質ドメインにＩＴＩＭが欠如している対応する活
性化受容体イソフォームが存在ということである（総説、Ｒａｖｅｔｃｈａｎ
ｄＬａｎｉｅｒ，１９９８）。ＩＴＩＭ様モチーフを欠如するＩＲＴＡ２の
分泌型イソフォームは、膜貫通型イソフォームの効果を打ち消すことによって類
似した役割を実行する可能性がある。

【０１３１】ＩＲＴＡ１及びＩＲＴＡ２タンパク質、並びに細胞接着分子（ＣＡＭ）サブフ
ァミリーメンバーのＰＥＣＡＭ１、ＣＤ２２及びＢＧＰ１の間には、細胞外部分
の配列と全体的な構造に高い相同性が存在する。さらに、異なるスプライシング
によって細胞内の局在が異なる（膜貫通、ＧＰＩ結合型、又は分泌型タンパク質
）３つのタンパク質イソフォームを産生するＩＲＴＡ２の能力を、ＮＣＡＭ（Ｃ
ＡＭスーパーファミリーの別のメンバー）も有している（Ｄｉｃｋｓｏｎｅｔ
ａｌ．，１９８７；Ｇｏｗｅｒｅｔａｌ．，１９８８）。従って、
ＰＥＣＡＭ１（ＣＡＭ、ＩＲＳファミリー）と相同性を有するが故に、Ｆｃ受
容体ファミリー（マウスＦＣＧＲＩＩ）のメンバーであるとこれまでに示唆され
たように、ＩＲＴＡファミリーもＣＡＭファミリーと関連している（Ｄａｅｒｏ
ｎ，１９９１；Ｎｅｗｍａｎｅｔａｌ．，１９９０；Ｓｔｏｃｋｉｎｇ
ｅｒｅｔａｌ．，１９９０）。

【０１３２】結論として、ＩＲＴＡファミリーはＦｃ、ＩＲＳ及びＣＡＭファミリーの共通
部分である可能性があり、３つの特徴を全て兼ね備えている。従って、ＩＲＴＡ
タンパク質は免疫反応の際のシグナル伝達の調節（Ｆｃ受容体のように）、細胞
間コミュニケーション（ＩＲＳ及びＣＡＭファミリーのメンバーのように）、及
び細胞移動（ＣＡＭファミリーメンバーのように）において役割を有しているか
もしれない（ＤｅＬｉｓｓｅｒｅｔａｌ．，１９９４；Ｒａｖｅｔｃｈ
ａｎｄＬａｎｉｅｒ，２０００）。初期の実験によって、ＩＲＴＡ１は熱
で凝集したＩｇＡと弱く結合し得るのに対して、ＩＲＴＡ２ｃは熱で凝集したヒ
ト血清ＩｇＧと特異的に結合し得るが（ＩｇＧ_１及びＩｇＧ_２に対して、より高
い親和性を有する）、単量体のヒトＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ及びＩｇＥとは結合
しないが示されている（データは示していない）。これらの初期のデータは、Ｉ
ＲＴＡとＦｃ受容体ファミリーの間に機能的な相関が存在することを裏付けるが
、ＩＲＴＡタンパク質の他のリガンドに依存する機能を排除するものではない。

【０１３３】成熟Ｂ細胞におけるＩＲＴＡ遺伝子の発現の様々なパターン：ＩＲＴＡ遺伝子は、正常なＢ細胞の様々なコンパートメントにおいて特異的な
発現パターンを示す。ＩＲＴＡ１は、空間的には、元来脾臓において周辺帯と名
付けられたリンパ小節近傍領域内のＢ細胞に限局しているが、多くのリンパ器官
でも検出することができる（ｄｅＷｏｌｆ−Ｐｅｅｔｅｒｓｅｔａｌ．，
１９９７）。周辺帯Ｂ細胞の中で、及びＮＨＬのうちでは周辺帯リンパ腫（こ
れらの細胞に由来する腫瘍）の中でＩＲＴＡ１タンパク質が選択的に発現されて
いることを示す抗ＩＲＴＡ１抗体を用いた免疫組織化学的解析によって、本明細
書に示したインサイチュハイブリダイゼーションのデータが確認された（Ｇ．
Ｃａｔｔｏｒｅｔｔｉｅｔａｌ．，投稿準備中）。一方、ＩＲＴＡ２は、
ＧＣ中心細胞と、広範なリンパ小節近傍細胞（免疫芽細胞及びメモリー細胞が含
まれ得る）とを含むさらに広い発現パターンを有する。ＩＲＴＡ３の発現パター
ンはＩＲＴＡ２と類似しているのに対して、ＩＲＴＡ４とＩＲＴＡ５はマントル
ゾーンＢ細胞（Ｉ．Ｍｉｌｌｅｒｅｔａｌ．，投稿準備中）及び成熟Ｂ
細胞の前ＧＣコンパートメント（ＭａｃＬｅｎｎａｎ，Ｉ．Ｃ．，１９９
４）中に選択的に発現されることを、初期のデータは示唆している。ＩＲＴＡ遺
伝子の発現がこのようにリンパ系器官に限定されているということは、特定の機
能的Ｂ細胞コンパートメントの中での様々なＢ細胞小集団の移動又は活性におい
て、ＩＲＴＡ分子が役割を果たしている可能性があることを示唆している。さら
に、ＩＲＴＡ（特に周辺帯リンパ腫の診断におけるＩＲＴＡ１）の発現は、様々
なＢ細胞コンパートメント由来のＮＨＬサブタイプを識別する診断において有用
であるはずである。

【０１３４】ＩＲＴＡ１遺伝子座及びＭＭにおける１ｑ２１異常：ＦＲ４細胞株では、ｔ（１；１４）転座の結果、ＩＲＴＡ１／Ｃα_１融合遺伝
子が形成される。該遺伝子がＩＲＴＡ１プロモーター領域（形質細胞では通常は
非活性化されている）により駆動されるという事実にも関わらず、ＦＲ４ではそ
の発現は高いが、これは、おそらくＣα_１遺伝子座の下流に保持されているＣα_１３’ＬＣＲの影響によるものであろう。前記融合遺伝子は、シグナルペプチド
、及び膜表面のＩｇＡ受容体に連結されたＩＲＴＡ１の最初の２アミノ酸のみを
含有するＩＲＴＡ１／Ｃα_１融合タンパク質をコードする。後者は、ほぼ完全に
その細胞外ドメインを失っているが、その膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインは
全て保持している。かかる構造は、ＩＲＴＡ１／Ｃα_１融合タンパク質がおそら
くは何れのリガンドも結合することができないが、２量体化及びシグナル伝達能
は保持しているかもしれないということを示している。特に、膜（ｍ）ＩｇＡ由
来の細胞外部分はシステイン残基を含有しており、２つのα−鎖の間でのジスル
フィド結合、又はａ−鎖と関連タンパク質（補助表面受容体ＣＤ１９などの）間
でのジスルフィド結合に関わっている可能性がある（Ｌｅｄｕｃｅｔａｌ．
，１９９７）。融合タンパク質も変化を受けていない１４アミノ酸ｍＩｇＡ細
胞内ドメインを保持し、進化の過程で非常に良く保存されているので（Ｒｅｔｈ
，１９９２）、ｍＩｇＧ及びｍＩｇＥの役割と同様に、成熟Ｂ細胞の増殖、生
存、及び分化において不可欠な役割を果たしている可能性がある（Ｋａｉｓｈｏ
ｅｔａｌ．，１９９７）。従って、ＦＲ４の中にＩＲＴＡ１／Ｃａ_１タン
パク質が出現すると、ＢＣＲ経路のリガンド（抗原）非依存的な活性化を通じて
、腫瘍が発育している際に、前記細胞は増殖及び生存における優位性を獲得する
かもしれない。しかしながら、これまでのところ、本発明者らはＦＲ４細胞以外
では該タンパク質を検出できなかったので、かかる融合現象はＢ細胞悪性腫瘍で
は稀なようである。

【０１３５】ＩＲＴＡ２遺伝子座並びにＭＭ及びＢＬにおける１ｑ２１異常：１ｑ２１異常の結果、ＩＲＴＡ２の異常な発現が頻繁に起こる。該遺伝子は、
胚中心細胞（ＢＬの正常な対応物と推定される）（Ｋｕｐｐｅｒｓｅｔａｌ
．，１９９９）、及び正常な１ｑ２１を有するＢＬにおいては、通常は発現さ
れないが、１ｑ２１異常を伴うＢＬ細胞株では、そのレベルは総じて１０倍アッ
プレギュレートされる。１ｑ２１上で３００ｋｂ以内に存在するこれ以外の４つ
のＩＲＴＡ遺伝子は全てＢＬ中で発現されないか（ＩＲＴＡ１）、又は発現パタ
ーンが１ｑ２１異常の存在と相関しない（ＩＲＴＡ３、４、５、図示せず）ので
、この調節解除はＩＲＴＡ２に特異的であるようである。ＩＲＴＡ２遺伝子の内
部に、又はＩＲＴＡ２遺伝子の隣接部に構造的な障害が存在しない状態で、かか
る調節解除が起きるメカニズムを確かめるのは困難である。１ｑ２１に影響を与
える異種の異常は全てＩＲＴＡ遺伝子座のコピー数の過剰を引き起こすので、Ｆ
Ｌ欠損（１４；１８）転座におけるＢＣＬ２の低レベル増幅（Ｍｏｎｎｉｅｔ
ａｌ．，１９９７）、びまん性巨大細胞リンパ腫（Ｈｏｕｌｄｓｗｏｒｔｈ
ｅｔａｌ．，１９９６；Ｒａｏｅｔａｌ．，１９９８）、及びト
リソミー１１を伴ういくつかのＭＭ症例でのサイクリンＤ１の調節解除（Ｐｒｕ
ｎｅｒｉｅｔａｌ．，２０００）の場合と同様に、このことによって制御
が妨害されるのかもしれない。一方、転座及び重複を含む１ｑ２１異常はＩＲＴ
Ａ遺伝子座のゲノムにおける意義を変化させ、風土性ＢＬ（Ｐｅｌｉｃｃｉｅ
ｔａｌ．，１９８６）、及びＭＭ（Ｓｈｏｕｅｔａｌ．，２０００）
におけるＭＹＣ、及びマントル細胞リンパ腫（Ｂｏｓｃｈｅｔａｌ．，１
９９４；Ｓｗｅｒｄｌｏｗｅｔａｌ．，１９９５）、及びＭＭ（Ｐｒｕ
ｎｅｒｉｅｔａｌ．，２０００）におけるＣＣＮＤ１と同様に、そのプロ
モーターに作用する、離れたシス作用エンハンサークロマチン制御エレメントに
よってＩＲＴＡ２の調節解除を導くのかもしれない。

【０１３６】調節解除されたＩＲＴＡ２の発現の生物学的な重要性は、現段階では予測し難
い。ＩＲＴＡ２がＣＡＭ接着受容体と相同性があるという観察は、ＧＣが明帯に
特異的に分散していることと相俟って、胚中心細胞中での異所的な発現によって
ＧＣの発生及び構造の崩壊が引き起こされるかもしれないということを示唆する
。一方で、ＩＲＴＡ２は真正なＦｃ受容体と同等にＩｇＧ免疫複合体を結合する
ことができるという本発明者ら初期の観察は、その不適当な発現がＢ細胞の免疫
学的応答の細胞表面における制御の動態を乱し、おそらくはクローンの増殖を引
き起こし得るであろうということを示唆している。濾胞性リンパ腫におけるｔ（
１；１４）（ｑ２１；ｑ３２）のために調節解除されたＦＣＧＲ２Ｂの発現は、
Ｆｃ結合及び腫瘍特異的なＩｇＧの不活性化を通じて腫瘍細胞が抗腫瘍免疫監視
機構を逃れることを含むメカニズムによって、該腫瘍種におけるリンパ腫形成の
成因となることが提唱されている（Ｃａｌｌａｎａｎｅｔａｌ．，２００
０）。ＩＲＴＡ２調節解除の役割は、ＧＣ中で常にＩＲＴＡ２を発現する「機能
獲得」トランスジェニックマウスにおいて検査する必要がある。

【０１３７】＜第２シリーズの実験についての参考文献＞

【０１３８】

【参考文献】第３シリーズの実験染色体１ｑ２１は、多発性骨髄腫、バーキットリンパ腫、周辺帯リンパ腫、及
び濾胞性リンパ腫を含む幾つかの種類のＢ細胞悪性腫瘍中で、転座及び重複によ
って頻繁に変化を受ける。これらの異常に関与する遺伝子を同定するために、骨
髄腫細胞株ＦＲ４におけるｔ（１；１４）（ｑ２１；３２）の染色体限界点をク
ローニングした。前記限界点を包含する３００ｋｂ領域は、免疫グロブリン遺伝
子スーパーファミリーのメンバーである表面受容体分子をコードする極めて近縁
の遺伝子を少なくとも５つ含有するため、ＩＲＴＡ（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌ
ｉｎＲｅｃｅｐｔｏｒＴｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎＡｓｓｏｃｉａｔｅｄ
）と呼ばれる。前記様々なＩＲＴＡ分子は、３〜９個の細胞外免疫グロブリンス
ーパーファミリードメインを有し、Ｆｃガンマ受容体と関連がある。これらの分
子は、ＩＴＩＭ様及びＩＴＡＭ様（ＩＴＲＡ−１、ＩＲＴＡ−３、ＩＲＴＡ
４）シグナルモチーフを含む膜貫通ドメインと細胞内ドメインを有する。インサ
イチュハイブリダイゼーション実験によって、全てのＩＲＴＡ遺伝子は、発育段
階に特異的なパターンを伴ってＢ細胞系列中で発現することが示されている。す
なわち、ＩＲＴＡ−１は周辺Ｂ細胞パターンで発現される。ＩＲＴＡ−２は、中
心細胞とこれより成熟したＢ細胞中で発現される。ＦＲ４における転座の結果、
ＩＲＴＡ−１は破壊され、免疫グロブリン遺伝子座との融合転写産物を産生する
。胚中心細胞中では通常不活性化されているＩＲＴＡ−２遺伝子は、１ｑ２１異
常を保有する多発性骨髄腫及びバーキットリンパ腫細胞株中で過剰発現される。
本明細書のデータは、ＩＲＴＡ遺伝子がリンパ腫生成における役割も有する可能
性がある新規Ｂ細胞調節分子であることが示唆される。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＦＲ４多発性骨髄腫細胞株における転座ｔ（１；１４）（ｑ２１：ｑ３２）の
分子クローニング。図１Ａ）ｄｅｒ（１４）及びｄｅｒ（１）限界点を示すλ
ＦＲ４Ｂ−５及びλＦＲ４Ｓ−ａクローン、並びに生殖系列ＩｇＨ及び１ｑ２１
座の模式図。図１Ｂ）限界点接合部のヌクレオチド配列及び対応する染色体１
４の生殖系列領域の配列。Ｓα、ＩｇＡスイッチ領域。ＬＣＲ：３′ＩｇＨ座制
御領域。Ｂ、ＢａｍＨＩ。Ｈ、ＨｉｎｄＩＩＩ。Ｘ、ＸｈｏＩ。

【図２】ＦＲ４限界点周辺における１ｑ２１座のゲノム地図。図２Ａ）：制限エンドヌクレアーゼ地図及びゲノムクローン、すなわち、バ
クテリオファージ（１）、Ｐ１人工染色体（ＰＡＣｓ）（２）、及び酵母人工染
色体（ＹＡＣ）（３）の模式図であり、ＦＲ４限界点領域（矢印）に位置する生
殖系列１ｑ２１座を包含する。各クローンの名称は各表示のすぐ上にある。ＰＡ
Ｃ及びＹＡＣ挿入部分から得られた末端断片を、ＳＰ６／Ｔ７ベクター方向（Ｐ
ＡＣ）又は左／右腕ベクター方向（ＹＡＣ）の何れかで、円として図示している
。図１Ａの上図は、ＦＲ４限界点を取り巻く２つの遺伝子のゲノムにおける構成
を示している。この２つの遺伝子をＰＡＣ４９Ａ１６のエキソントラップ法に
よって同定した。これらはゲノム内で互いに３０Ｋｂ以内の近接した位置にあり
、ＭＵＭ２及びＭＵＭ３（多発性骨髄腫−２及び３、ｍｕｌｔｉｐｌｅｍｙｅ
ｌｏｍａ−２ａｎｄ３）と称される。ゲノム遺伝子座の図では、黒い四角は
コーディングエキソンを示しており、白抜きの四角及び薄い灰色又は中程度の灰
色の四角は非コーディングエキソンを示している。これらをつなぐイントロンは
線で表されている。ＭＵＭ３（左）からは選択的スプライスによって生じた３種
のｍＲＮＡが得られ、何れも共通の５′非翻訳領域（ＵＴＲ）を有するが、（異
なる影で示した）３′ＵＴＲは多様である。四角の下の数字は、ｃＤＮＡ中での
エキソンの順番を表している。１００ｂｐ未満のエキソンは、細い縦線で示され
ている。各エキソンの位置及び大きさは、ゲノムＰＡＣとファージクローンの配
列決定によって、及びエンドヌクレアーゼで消化されたクローンＤＮＡに対する
ｃＤＮＡプローブのハイブリダイゼーションによって決定された。ＰＡＣ及びＹ
ＡＣのマッピングは、希な切断酵素によって部分消化した後、パルスフィールド
ゲル電気泳動法並びに内部及び末端由来のプローブとのハイブリダイゼーション
を行って実施した。破線は、重複領域を揃えたものである。Ｓ、ＳａｃＩ。Ｈ、
ＨｉｎｄＩＩＩ。Ｓ、ＳｗａＩ。Ｐｃ、ＰａｃＩ。Ｐ、ＰｍｅＩ。図２Ｂ）ＭＵＭ２／ＭＵＭ３座の領域中の１ｑ２１のジェネトン遺伝連鎖地
図。配列タグ部位（ＳＴＳ）は、Ｄｉｂ、Ｃ．、ｅｔａｌ．（１９９６）Ｎａ
ｔｕｒｅ、３８０：１６２〜１６４によって既に決定された距離の近くに置かれ
ている。ＳＴＳＷＩ−５４３５（太字）はＹＡＣ２３ＧＣ４及びＰＡＣ４
９Ａ１６に含まれている。平行な縦線は、中断したセグメントを表しており、お
よその大きさをメガ塩基（ＭＢ）で上部に示している。大きさは、２個のマーカ
ーの間の非キメラＹＡＣコンティグ配列の大きさによって推定した。セントロメ
アのＢＣＬ９遺伝子は、ＷｉｌｌｉｓＴ．Ｇ．ｅｔａｌ．、（１９９８）
Ｂｌｏｏｄ９１、６：１８７３〜１８８１によって、異なるｔ（１；１４）（
ｑ２１；ｑ３２）限界点からクローニングした。ＦｃＧＲＩＩＡ遺伝子は、１ｑ
２１〜ｑ２２染色体バンド境界領域にある。

【図３】ＭＵＭ２ｍＲＮＡの構造及び発現パターン。図３Ａ）ＭＵＭ２ｍＲＮＡの模式図。模様付きの大きい四角は、コーディ
ングドメインを表し、小さな白抜きの四角は非翻訳領域を表している。ＳＰ、シ
グナルペプチド。ＥＣ、細胞外ドメイン。ＴＭ、膜貫通ドメイン。ＣＹＴ、細胞
質ドメイン。Ａ（ｎ）、ポリＡテール。細胞外領域は、図示されているように４
個の免疫グロブリン様ドメインから構成される。選択的なポリアデニル化シグナ
ル（矢印）によって、長さの範囲が２．６〜３．５（Ｋｂ）である３種のＭＵＭ
２ｍＲＮＡ種（ａ、ｂ、ｃ）が生じる。図３Ｂ）免疫系のヒト組織におけるＭＵＭ２ｍＲＮＡ発現のノザンブロッ
ト分析。分析に使用したｃＤＮＡプローブは、図３Ａ）のｍＲＮＡ図の下に実線
で示されている。各レーンは対応する組織のｍＲＮＡ２μｇを含む。ブロットの
右側には、ＲＮＡ分子量マーカーの位置が図示されている。ＭＵＭ２及びＧＡＰ
ＤＨｍＲＮＡ転写物の位置は矢印で示されている。（ＧＡＰＤＨプローブは、
内部対照としてハイブリダイゼーションに含めた。標識プローブ０．１５ｎｇ＋
非標識プローブ５０ｎｇ）。この分析の結果から、リンパ節及び脾臓においてＭ
ＵＭ２は弱く発現していることが示された。ＭＵＭ２の発現は、その他の種々の
ヒト組織では検出されなかった（データは示していない）。図３Ｃ）ＥＲＥＢ、条件的ＥＢＶ形質転換Ｂリンパ芽球細胞株から得られた
全ＲＮＡにおけるＭＵＭ２発現のノザンブロット分析。ＥＲＥＢは、ＥＢＮＡ２
−エストロゲン受容体融合タンパク質と共にＥＢＶゲノムを有し、エストロゲン
の存在下でのみ活性化する。この実験のために、細胞をエストロゲン（１μｇ／
ｍｌ）存在下で増殖させた後、表記の時間、エストロゲンの使用を中止した。エ
ストロゲンを中止すると、ＥＲＥＢ細胞はＧ０／Ｇ１期で停止し、これはｃ−ｍ
ｙｃ発現の喪失によって確認された。図３Ｃでは、図３Ｂのように、ＥＲＥＢ全
ＲＮＡのノザンブロット（レーン当たり１０μｇ）を図３Ａに示したＭＵＭ２
ｃＤＮＡプローブ及びＧＡＰＤＨ内部対照プローブとハイブリダイズさせた。矢
印は、ＥＲＥＢブロット上の対応するｍＲＮＡの位置を示している。ａ、ｂ、及
びｃは、図３Ａのパネル中のＭＵＭ２種に対応する。次いで、同ブロットのプロ
ーブを剥離して、ｃ−ｍｙｃｃＤＮＡプローブ（エキソン２）で再ブローブし
て、細胞がＧ０／Ｇ１期で停止していることを確かめた。ホスホイメージャーデ
ンシトメトリ分析を使用してＭＵＭ２ｍＲＮＡを定量すると、エストロゲンを
中止してから４８時間以内にｍＲＮＡ濃度が１０倍に増加していることが示され
、ＭＵＭ２発現は細胞が休止期にはいると上昇することが示唆された。

【図４】ＭＵＭ３ｍＲＮＡの構造及び発現パターン。図４Ａ）ＭＵＭ３ｍＲＮＡの模式図。模様付きの大きい四角は、コーディ
ングドメインを表しており、小さな白抜き又は灰色の四角は非翻訳領域を表して
いる。ＳＰ、シグナルペプチド。ＥＣ、細胞外ドメイン。ＴＭ、膜貫通ドメイン
。ＣＹＴ、細胞質ドメイン。Ａ（ｎ）、ポリＡテール。細胞外領域は、示したよ
うに４個の免疫グロブリン様ドメインから構成される。選択的スプライシングに
よって、細胞内局在が異なる４種のｍＲＮＡ種が生じる。ＭＵＭ３−ａ及びＭＵ
Ｍ３−ｄタンパク質は分泌されるが、ＭＵＭ３−ｂは、図面に示されているよう
に、糖化ホスファチジル−イノシトールアンカー（ＧＰＩ−アンカー）を付加す
るためのシグナルとして役立ち得るアミノ酸の疎水性範囲をＣ末端に含有する。
ＭＵＭ３−ｃは細胞膜を貫通している。種間での配列の同一性は、同一の模様で
示されている。図４Ｂ）多数のヒト組織（左）及び様々なリンパ細胞株と非リンパ球細胞株
（右）におけるＭＵＭ３ｍＲＮＡの発現のノザンブロット分析。使用したｃＤ
ＮＡプローブが、図４ＡのｃＤＮＡ図の下に棒線で示されている。各レーンには
、対応する組織又は細胞株のｍＲＮＡ２μｇが含まれる。ＭＵＭ３及びＧＡＰＤ
ＨｍＲＮＡ転写物の位置を矢印で示す。（ＧＡＰＤＨプローブは、図３で説明
したように、内部対照としてハイブリダイゼーションに含めた。）ａ、ｂ、ｃ及
びｄは図４Ａで示したＭＵＭ３ｍＲＮＡ種に対応する。ＲＤ、ＮＣ４２及びＣ
Ｂ３３、エプシュタイン−バールウイルスで形質転換したＢリンパ芽球細胞株。
ＥＲＥＢ、条件的ＥＢＶ形質転換Ｂリンパ芽球細胞株。ＦＲ４、形質細胞株。Ｍ
ＯＬＴ４及びＨＵＴ７８、Ｔ細胞株。ＨＬ６０及びＵ９３７、骨髄単球性白血病
細胞株。Ｋ５６２、赤血球細胞株。これらの結果から、ＭＵＭ３は骨髄、リンパ
及び脾臓、特にリンパ芽球表現型を有するＢ細胞の免疫系組織のみで発現するこ
とが示唆される。

【図５】ヒトＭＵＭ２のヌクレオチド配列及びアミノ酸配列。推定アミノ酸配列を一文字
コードでヌクレオチド配列の上部に示し、シグナルペプチドの最初のコドンを１
位として、右側に番号を付した。予想シグナルペプチダーゼ部位は、Ｎｉｅｌｓ
ｅｎｅｔａｌ．，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ１０、１〜６
（１９９７）によって報告されたコンピューターアルゴリズムによって得られた
ものであり、矢印で示されている。ポリアデニル化シグナルＡＡＴＡＡＡを下線
で示す。Ｎ−グリコシル化の候補部位にも、アミノ酸配列に下線が付されている
。細胞膜を貫通すると予測される１６アミノ酸の疎水性範囲を２重線で示す。コ
ンセンサスＳＨ−２結合部位は、波線で強調されている。

【図６Ａ】ヒトＭＵＭ３−ａのヌクレオチド配列及びアミノ酸配列。推定アミノ酸配列を
一文字コードでヌクレオチド配列の上部に示し、シグナルペプチドの最初のコド
ンを１位として右側に番号を付した。シグナルペプチダーゼ開裂部位は、前述し
たように予測し、矢印で示されている。ポリアデニル化シグナルＡＴＴＡＡＡは
下線で示す。Ｎ−グリコシル化の候補部位も、アミノ酸配列に下線が付されてい
る。このタンパク質は膜貫通ドメインを欠失しているので、分泌型であると予測
される。

【図６Ｂ】ヒトＭＵＭ３−ｂのヌクレオチド配列及びアミノ酸配列。推定アミノ酸配列を
一文字コードでヌクレオチド配列の上部に示し、シグナルペプチドの最初のコド
ンを１位として、右側に番号を付けた。シグナルペプチダーゼ開裂部位は前述し
たように予測し、矢印で示されている。ポリアデニル化シグナルＡＡＴＡＡＡは
下線で示す。Ｎ−グリコシル化の候補部位も、アミノ酸配列に下線が付されてい
る。

【図６Ｃ−１】ヒトＭＵＭ３−ｃのヌクレオチド配列及びアミノ酸配列。推定アミノ酸配列を
一文字コードでヌクレオチド配列の上部に示し、シグナルペプチドの最初のコド
ンを１位として、右側に番号を付けた。シグナルペプチダーゼ開裂部位は前述し
たように予測し、矢印で示されている。ポリアデニル化シグナルＡＡＴＡＡＡは
下線で示す。Ｎ−グリコシル化の候補部位も、アミノ酸配列に下線が付されてい
る。細胞膜を貫通すると予測される２３アミノ酸の疎水性範囲は２重線で示され
ている。コンセンサスＳＨ−２結合部位は波線で強調されている。

【図６Ｃ−２】ヒトＭＵＭ３−ｃのヌクレオチド配列及びアミノ酸配列。推定アミノ酸配列を
一文字コードでヌクレオチド配列の上部に示し、シグナルペプチドの最初のコド
ンを１位として、右側に番号を付けた。シグナルペプチダーゼ開裂部位は前述し
たように予測し、矢印で示されている。ポリアデニル化シグナルＡＡＴＡＡＡは
下線で示す。Ｎ−グリコシル化の候補部位も、アミノ酸配列に下線が付されてい
る。細胞膜を貫通すると予測される２３アミノ酸の疎水性範囲は２重線で示され
ている。コンセンサスＳＨ−２結合部位は波線で強調されている。

【図７】ＦＲ４のｔ（１；１４）（ｑ２１；３２）によって、ＭＵＭ２／Ｃａ融合転写
物が生じる。図７Ａ）ｄｅｒ（１４）ゲノムクローンλＦＲ４Ｂ−５及び生殖系列ＩｇＨ
Ａ１座の模式図。ＦＲ４限界点を矢印で示す。模様付きの四角及び中抜きの四角
は、それぞれＭＵＭ２及びＣａｌｐｈａコーディングエキソン及び非コーディン
グエキソンを表す。ノザンブロット分析に使用したＭＵＭ２エキソン１プローブ
の位置が線で示されている。図７Ｂ）ＦＲ４及び他の細胞株について、ＭＵＭ２エキソン１プローブでノ
ザンブロット分析を行ったところ、ＦＲ４だけ選択的に０．８ｋｂの異常なメッ
セージが検出された。矢印は、ＥＲＥＢｍＲＮＡにおける正常なＭＵＭ２メッ
セージの位置を示す。ＪＪＮ３及びＵ２６６、ミエローマ細胞株。ＥＲＥＢ、条
件的ＥＢＶ−形質転換Ｂリンパ芽球細胞株。レーン当たりポリＡ＋ＲＮＡ２μｇ
を添加した。図７ｃ）ＦＲ４におけるＭＵＭ２−Ｃａ融合ｃＤＮＡのヌクレオチド配列及
びアミノ酸配列。図７Ａで示したプライマーを使用して、ＦＲ４全ＲＮＡからＲ
Ｔ−ＰＣＲによってｃＤＮＡを増幅し、その後サブクローニングして配列決定し
た。推定アミノ酸配列を一文字コードでヌクレオチド配列の上部に示し、シグナ
ルペプチドの最初のコドンを１位として、右側に番号を付けた。シグナルペプチ
ダーゼ開裂部位は前述したように予測し、矢印で示されている。ポリアデニル化
シグナルＡＡＴＡＡＡは下線で示されている。Ｃａｌｐｈａ膜貫通ドメインは下
線で示されている。ｃＤＮＡのＭＵＭ２部分は、イタリック体で示されている。
Ｈ、ＨｉｎｄＩＩＩ。Ｂ、ＢａｍＨＩ。Ｘ、ＸｈｏＩ。Ｓα、ＩｇＡスイッチ領
域。ＥＣ、細胞外領域。ＴＭ、膜貫通領域。ＣＹＴ、細胞質ドメイン。

【図８−１】ＦＲ４多発性骨髄腫細胞株における転座ｔ（１；１４）（ｑ２１：ｑ３２）の
分子クローニング。図８Ａ）ｄｅｒ（１４）及びｄｅｒ（１）限界点を示すファージクローン及
び生殖系列ＩＧＨ及び１ｑ２１座の模式図である。染色体１４の配列は、Ｃａ１
エキソンを表す黒四角を有する黒い直線で示されている。染色体１の配列は、灰
色の線として示されている。染色体マッピング用に使用したプローブは、地図の
下に示している。制限酵素コードは、ＢはＢａｍＨＩ、ＨはＨｉｎｄＩＩＩ、Ｘ
はＸｈｏＩ、ＳはＳａｃＩ、ＥはＥｃｏＲＩである。（＊）が付された酵素につ
いては、プローブの輪郭を表す部位のみが示されている。Ｓａ：ＩｇＡスイッチ
領域。ＬＣＲ：３′ＩｇＨ座制御領域。

【図８−２】図８Ｂ）限界点接合部のヌクレオチド配列、及び染色体１４と１の対応する
生殖系列領域に対するアラインメント。図８Ｃ）左、ＦＲ４限界点で生殖系列１ｑ２１領域を包含するＰＡＣクロー
ン４９Ａ１６（図１３）を用いた、ヒト正常分裂中期細胞の蛍光インサイチュハ
イブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）分析。右、同じ分裂中期の細胞のＤＡＰＩ染
色画像。

【図９】ＩＲＴＡ１及びＩＲＴＡ２のｃＤＮＡの構造。図９Ａ、９Ｂ）完全長ＩＲＴＡ１のｃＤＮＡ（図９Ａ）及びＩＲＴＡ２のｃ
ＤＮＡ（図９Ｂ）の模式図。模様付きの大きな四角はコーディングドメインを表
し、小さな四角は非翻訳領域（ＵＴＲ）を表す。予想シグナルペプチダーゼ開裂
部位が矢印で示されており、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓ
ｅｒｖｉｃｅｓ／ＳｉｇｎａｌＩＰのＳｉｇｎａｌＩＰＷｏｒｌｄＷｉｄｅ
Ｗｅｂサーバーによって調べた。膜貫通ドメインを推定するアルゴリズムは、
Ｔｕｓｎａｄｙｅｔａｌ、１９９８に述べられている。ＳＰ、シグナルペプ
チド。ＥＣ、細胞外ドメイン。Ｉｇ、免疫グロブリン型。ＴＭ、膜貫通ドメイン
。ＣＹＴ、細胞質ドメイン。Ａ（ｎ）、ポリＡテール。ＧＰＩ、糖化ホスファチ
ジルイノシトール。図９Ａでは、３′ＵＴＲにおける矢印は、ＩＲＴＡ１のｃＤ
ＮＡで使用される種々のポリアデニル化付加部位を示している。図９Ｂでは、Ｉ
ＲＴＡ２イソフォームの様々な３′ＵＴＲ領域は、異なった陰影で示されている
。図９Ａ及び図９Ｂ中のＵＴＲ領域の下の棒線は、図１２のノザンブロット分析
で使用したプローブを示している。

【図１０】ＩＲＴＡ１及びＩＲＴＡ２のアミノ酸配列とＦｃ受容体ファミリーのメンバー
との比較。図１０Ａ）ＩＲＴＡ１及びＩＲＴＡ２の最初の２つ（上部）及び第３（下部
）の細胞外Ｉｇ−ドメインとＦｃ受容体ファミリーメンバーとの多重配列アライ
メント。配列は、ＣｌｕｓｔａｌＷプログラム（Ｔｈｏｍｐｓｏｎｅｔａｌ
．，１９９４）を使用して比較した。黒塗りの四角は、全ての配列に保存されて
いるアミノ酸を示している。濃い灰色に塗った四角は、少なくとも半数の配列に
保存されているアミノ酸を示している。薄い色で塗った四角は、保存的置換を示
している。図１０Ｂ）ＩＲＴＡ１及びＩＲＴＡ２のＳＨ２結合ドメインとＩＴＡＭ及び
ＩＴＩＭコンセンサスモチーフとのアラインメント。保存されたアミノ酸の位置
が太字で示されている。印Ｘは、いずれかのアミノ酸を示す。

【図１１Ａ】ＩＲＴＡ１の発現パターン。左図、ヒト免疫系の組織におけるＩＲＴＡ１ｍ
ＲＮＡ発現のノザンブロット分析。各レーンにはｍＲＮＡ２ｍｇが含まれる。Ｒ
ＮＡ分子量マーカーの位置がブロットの右側に示されている。ＩＲＴＡ１及びＧ
ＡＰＤＨｍＲＮＡ転写物の位置が矢印で示されている（ＧＡＰＤＨプローブは
、内部対照（標識プローブ０．１５ｎｇ＋非標識プローブ５０ｎｇ）として、ハ
イブリダイゼーションに含めた）。右図、ＥＲ／ＥＢ細胞株の全ＲＮＡにおける
ＩＲＴＡ１発現のノザンブロット分析（レーン当たり１０ｍｇ）。この実験のた
めに、エストロゲン（１ｍｇ／ｍｌ）存在下で細胞を増殖させた後、表記の時間
、エストロゲンを除去した。矢印は、対応するｍＲＮＡの位置を示す。ａ、ｂ及
びｃは、様々にポリアデニル化されたＩＲＴＡ１種に対応する。同プロットをプ
ローブ剥離して、ＭＹＣｃＤＮＡプローブ（エキソン２）で再プローブして、
細胞がＧ_０／Ｇ_１期で停止していることを確認した。ＩＲＴＡ１ｍＲＮＡレベ
ルの濃度分析が隣接する棒グラフ中にプロットされている。使用したｃＤＮＡプ
ローブは、図９ＡのＩＲＴＡ１ｍＲＮＡ図の下の棒線で示す。

【図１１Ｂ】ヒト扁桃の連続切片におけるＩＲＴＡ１発現のインサイチュハイブリダイゼー
ション分析。１．センスＩＲＴＡ１プローブ。２．アンチセンスＩＲＴＡ１プロ
ーブ。３．Ｈ＆Ｅ染色。４．Ｈ＆Ｅ染色切片に重ねたアンチセンスＩＲＴＡ１シ
グナル。ＧＣ、胚中心。ＭａｒｇＺ、辺縁帯。

【図１２Ａ】ＩＲＴＡ２発現パターン。図１２Ａ）複数のヒト組織（左図）及び種々のリ
ンパ細胞株及び非リンパ細胞株（右図）におけるＩＲＴＡ２ｍＲＮＡ発現のノ
ザンブロット分析。各レーンはｍＲＮＡ２ｍｇを含む。ＩＲＴＡ２及びＧＡＰＤ
Ｈ転写物の位置は矢印で示されている。ａ、ｂ、ｃ及びｄは、選択的にスプライ
スされたＩＲＴＡ２ｍＲＮＡのイソフォームに対応する。ＲＤ、ＮＣ４２、及
びＣＢ３３、エプシュタイン−バールウイルス形質転換Ｂリンパ芽球細胞株。Ｅ
ＲＥＢ、条件的ＥＢＶ−形質転換Ｂリンパ芽球細胞株。ＦＲ４、形質細胞。ＭＯ
ＬＴ４及びＨＵＴ７８、Ｔ細胞株。ＨＬ６０及びＵ９３７、骨髄単球細胞株。Ｋ
５６２、赤血球細胞株。使用したｃＤＮＡプローブは、図９ＢのＩＲＴＡ２ｍ
ＲＮＡ図の下に棒線で示している。

【図１２Ｂ】ヒト扁桃におけるＩＲＴＡ２発現のインサイチュハイブリダイゼーション分析
。図１２Ｂ−１．センスＩＲＴＡ２ｃＤＮＡプローブ。図１２Ｂ−２．アンチ
センスＩＲＴＡ２ｃＤＮＡプローブ。図１２Ｂ−３．Ｈ＆Ｅ染色。図１２Ｂ−
４．Ｈ＆Ｅ染色部分に重ねたアンチセンスＩＲＴＡ２ｃＤＮＡプローブシグナ
ル。ＧＣ、胚中心。ＭａｒｇＺ、辺縁帯。

【図１３】ＦＲ４限界点を包含する生殖細胞１ｑ２１領域の地図、及びＩＲＴＡ１とＩＲ
ＴＡ２のゲノムにおける配置。上図では、脾臓ｃＤＮＡのＩＲＴＡ１エキソンを
増幅するために使用したプライマーが矢印で示されている。黒四角及び白四角は
、それぞれコーディングエキソン及び非コーディングエキソンを示している。矢
印は、ＢＣＬ９、ＭＵＣ１、ＩＲＴＡファミリー、及びＦＣＧＲＩＩＢ座の位置
を示している。Ｓ、ＳａｃＩ。Ｈ、ＨｉｎｄＩＩＩ。Ｓ、ＳｗａＩ。Ｐｃ、Ｐａ
ｃＩ。Ｐ、ＰｍｅＩ。Ｍｂ、メガ塩基。

【図１４】ＦＲ４のｔ（１；１４）（ｑ２１；ｑ３２）によって、ＩＲＴＡ１／Ｃα融合
転写物が生じる。図１４Ａ）ｄｅｒ（１４）ゲノムクローンｌＦＲ４Ｂ−５及び生殖系列Ｉｇ
Ｃα_１座の模式図。ＦＲ４限界点は、矢印で示されている。黒塗りの四角及び白
抜きの四角は、それぞれＩＲＴＡ１及びＣａ_１のコーディング及び非コーディン
グエキソンを表している。図１４Ｂ）ＦＲ４及び他の細胞系に対して、ＩＲＴＡ１エキソン１プローブ
（図１４Ａ中の棒線によって示されている）を用いたノザンブロット分析を行う
ことによって、ＦＲ４に異常なメッセージが検出される。矢印は、ＥＲ／ＥＢ
ｍＲＮＡ中の正常なＩＲＴＡ１の位置を示す。ＪＪＮ３及びＵ２６６、骨髄腫細
胞株。レーン当たりポリＡ^＋ＲＮＡ２ｍｇを添加した。図１４Ｃ）ＦＲ４におけるＩＲＴＡ１／Ｃα融合ｃＤＮＡの模式図。図１４
Ａで示したプライマーを使用したＲＴ−ＰＣＲによって、ＦＲ４の全ＲＮＡから
ｃＤＮＡを増幅して、サブクローニング後に配列決定した。図１４Ｄ）ベクター対照でトランスフェクトした２９３−Ｔ細胞及びＩＲＴ
Ａ１／Ｃα一過性発現構造物でトランスフェクトした２９３−Ｔ細胞（レーン１
及び２）、又は以下の細胞株、ｍＩｇＡ陽性リンパ芽球細胞株−Ｄａｋｉｋｉ（
レーン３）、ＦＲ４（レーン４）、ｍＩｇＭ陽性ＮＨＬ細胞株−Ｒａｍｏｓ（レ
ーン５）から得られた免疫沈殿物のＳＤＳ／ＰＡＧＥ分析。Ｈ、ＨｉｎｄＩＩＩ
。Ｂ、ＢａｍＨＩ。Ｘ、ＸｈｏＩ。Ｓａ、ＩｇＡスイッチ領域。ＥＣ、細胞外領
域。ＴＭ、膜貫通領域。ＣＹＴ、細胞質領域。

【図１５】ＩＲＴＡ２発現は、１ｑ２１異常を有する細胞株では調節解除されている。図１５Ａ、１５Ｂ）バーキットリンパ腫細胞株（図１５Ａ）及び多発性骨髄
腫細胞株（図１５Ｂ）におけるＩＲＴＡ２ｍＲＮＡ発現のノザンブロット分析
。使用したｃＤＮＡプローブは、図１２と同様である。各レーンはｍＲＮＡ２ｍ
ｇを含む。ＩＲＴＡ２及びＧＡＰＤＨｍＲＮＡ転写物の位置は、それぞれダッ
シュ及び矢印で示す。デンシトメトリ分析して、ＧＡＰＤＨ濃度に対して標準化
した後に、左図（図１５Ａ）でのＩＲＴＡ２ｍＲＮＡ発現の相対レベルを右図
（図１５Ａ）にプロットした。図１５Ｂの右図は、ノザンブロット分析結果の概
要である。

【図１６】正常リンパ組織におけるＩＲＴＡ１の発現。正常なヒトの扁桃のパラフィン包
埋切片を以下の抗体で染色した。図１６−１）陰性対照。図１６−２）Ｔ細胞検
出用の抗ＣＤ３マウスモノクローナル抗体。図１６−３）抗ＩＲＴＡ１（ｍＩＲ
ＴＡ）マウスモノクローナル抗体。図１６−４）抗ＩＲＴＡ１（Ｊ９２８８４Ｋ
）ウサギポリクローナル抗体。ＩＲＴＡ１陽性細胞は、脾臓の周辺帯に相当する
扁桃の濾胞周囲領域及び上皮細胞間領域中に局在している。

【図１７】胃粘膜関連リンパ組織（ＭＡＬＴ）Ｂ細胞リンパ腫におけるＩＲＴＡ１の発現
。胃ＭＡＬＴＢ細胞リンパ腫から得たパラフィン包埋切片を抗ＩＲＴＡ１（ｍ
ＩＲＴＡ）マウスモノクローナル抗体で染色して、Ｈ＆Ｅで対比染色した。分析
したＭＡＬＴリンパ腫のほとんどがＩＲＴＡ１陽性であった。従って、この抗体
は、ＭＡＬＴリンパ腫の鑑別診断に有効な手段である。ｍＩＲＴＡ１抗体は、再
発したＣＤ２０陽性リンパ腫の治療における抗ＣＤ２０抗体（Ｒｉｔｕｘｉｍａ
ｂ）の使用と同様に（ＦｏｏｎＫ．、ＣａｎｃｅｒＪ．６：ｐ２７３）、Ｂ
細胞腫瘍の治療に有用であることが証明されるかもしれない。

【図１８Ａ】ＩＲＴＡ１のｃＤＮＡ及びコードされたＩＲＴＡ１タンパク質のアミノ酸配列
。

【図１８Ｂ−１】ＩＲＴＡ２のｃＤＮＡ及びコードされたＩＲＴＡ２タンパク質のアミノ酸配列
。

【図１８Ｂ−２】ＩＲＴＡ２のｃＤＮＡ及びコードされたＩＲＴＡ２タンパク質のアミノ酸配列
。

【図１８Ｂ−３】ＩＲＴＡ２のｃＤＮＡ及びコードされたＩＲＴＡ２タンパク質のアミノ酸配列
。

【図１８Ｃ−１】ＩＲＴＡ３のｃＤＮＡ及びコードされたＩＲＴＡ３タンパク質のアミノ酸配列
。

【図１８Ｃ−２】ＩＲＴＡ３のｃＤＮＡ及びコードされたＩＲＴＡ３タンパク質のアミノ酸配列
。

【図１８Ｄ−１】ＩＲＴＡ４のｃＤＮＡ及びコードされたＩＲＴＡ４タンパク質のアミノ酸配列
。

【図１８Ｄ−２】ＩＲＴＡ４のｃＤＮＡ及びコードされたＩＲＴＡ４タンパク質のアミノ酸配列
。

【図１８Ｅ−１】ＩＲＴＡ５のｃＤＮＡ及びコードされたＩＲＴＡ５タンパク質のアミノ酸配列
。

【図１８Ｅ−２】ＩＲＴＡ５のｃＤＮＡ及びコードされたＩＲＴＡ５タンパク質のアミノ酸配列
。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｋ 14/735 Ｃ０７Ｋ 16/28 ４Ｃ０８６ 16/28 Ｃ１２Ｎ 1/21 ４Ｈ０４５Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/02 5/10 1/68 ＡＣ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 1/68 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ // Ｃ１２Ｐ 21/08 5/00 ＣＢ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ダラ−ファベラ、リッカルドアメリカ合衆国、ニューヨーク州 10025 ニューヨーク、リバーサイド・ドライブ 445、アパートメント 122 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA12 BA41 BA63 CA04 CA09 CA11 DA02 DA03 DA06 EA04 FA02 GA01 GA11 GA18 GA19 HA03 HA14 4B063 QA01 QA18 QA19 QQ02 QQ52 QR32 QR38 QR48 QR56 QR82 QS24 QS25 QS28 QS34 QS38 QX01 QX07 QX10 4B064 AG27 CA10 CA19 CA20 CC24 DA01 DA14 4B065 AA26X AA93X AA93Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA44 CA46 4C085 AA13 AA14 AA21 CC03 CC05 CC22 CC23 EE01 GG01 GG08 4C086 AA01 AA02 EA16 MA02 MA05 NA14 ZB26 4H045 AA10 AA11 AA30 BA10 CA40 DA50 DA76 DA86 EA28 EA51 FA72 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】免疫グロブリン受容体（免疫グロブリンスーパーファミリー
受容体転座関連（ＩＲＴＡ）タンパク質）をコードする単離された核酸分子。
【請求項２】前記ＩＲＴＡタンパク質が図１８Ａに示されたアミノ酸配列
（配列番号１）を含むＩＲＴＡ１タンパク質である請求項１の単離された核酸分
子。
【請求項３】前記ＩＲＴＡタンパク質が図１８Ｂ−１−１８Ｂ−３に示さ
れたアミノ酸配列（配列番号３）を含むＩＲＴＡ２タンパク質である請求項１の
単離された核酸分子。
【請求項４】前記ＩＲＴＡタンパク質が図１８Ｃ−１−１８Ｃ−２に示さ
れたアミノ酸配列（配列番号５）を含むＩＲＴＡ３タンパク質である請求項１の
単離された核酸分子。
【請求項５】前記ＩＲＴＡタンパク質が図１８Ｄ−１−１８Ｄ−２に示さ
れたアミノ酸配列（配列番号７）を含むＩＲＴＡ４タンパク質である請求項１の
単離された核酸分子。
【請求項６】前記ＩＲＴＡタンパク質が図１８Ｅ−１−１８Ｅ−２に示さ
れたアミノ酸配列（配列番号９）を含むＩＲＴＡ５タンパク質である請求項１の
単離された核酸分子。
【請求項７】前記核酸分子がＤＮＡである請求項１の単離された核酸分子
。
【請求項８】前記ＤＮＡがｃＤＮＡである請求項２の単離されたＤＮＡ分
子。
【請求項９】前記ＤＮＡがゲノムＤＮＡである請求項２の単離されたＤＮ
Ａ分子。
【請求項１０】前記核酸分子がＲＮＡ分子である請求項１の単離された核
酸分子。
【請求項１１】前記ＤＮＡ分子が図１８Ａに記載されたヌクレオチド配列
（配列番号２）を有するｃＤＮＡである請求項２の単離されたＤＮＡ分子。
【請求項１２】前記ＤＮＡ分子が図１８Ａに記載されたヌクレオチド配列
（配列番号４）を有するｃＤＮＡである請求項２の単離されたＤＮＡ分子。
【請求項１３】前記ＤＮＡ分子が図１８Ａに記載されたヌクレオチド配列
（配列番号６）を有するｃＤＮＡである請求項２の単離されたＤＮＡ分子。
【請求項１４】前記ＤＮＡ分子が図１８Ａに記載されたヌクレオチド配列
（配列番号８）を有するｃＤＮＡである請求項２の単離されたＤＮＡ分子。
【請求項１５】前記ＤＮＡ分子が図１８Ａに記載されたヌクレオチド配列
（配列番号１０）を有するｃＤＮＡである請求項２の単離されたＤＮＡ分子。
【請求項１６】前記核酸分子がヒトＩＲＴＡ１タンパク質をコードする請
求項１の単離された核酸分子。
【請求項１７】ＤＮＡ転写のプロモーターに作用可能に連結された請求項
１の単離された核酸分子。
【請求項１８】前記プロモーターが、細菌、酵母、昆虫、植物、又は哺乳
類のプロモーターを有する請求項１７の単離された核酸分子。
【請求項１９】請求項１７の核酸分子を備えたベクター。
【請求項２０】前記ベクターがプラスミドである請求項１９のベクター。
【請求項２１】請求項２０のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２２】前記細胞が、細菌細胞、植物細胞、及び昆虫細胞、及び哺
乳類細胞からなる群から選択される請求項２１の宿主細胞。
【請求項２３】単離された核酸分子であって、請求項１のＩＲＴＡ１タン
パク質をコードする前記単離された核酸分子の配列中に含まれるユニークな配列
と特異的にハイブリダイズし得る少なくとも１５の連続したヌクレオチドを含む
核酸分子。
【請求項２４】検出可能なマーカーで標識された請求項２３の単離された
核酸分子。
【請求項２５】前記検出可能なマーカーが、放射性同位元素、酵素、色素
、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識からなる群から選択される請求項２４
の核酸分子。
【請求項２６】被験者から得たサンプル中のＢ細胞悪性腫瘍又は一種のＢ
細胞悪性腫瘍を検出する方法であって、前記Ｂ細胞悪性腫瘍は１ｑ２１染色体再
編成を含み、（ａ）前記被験者から得た前記サンプルからＲＮＡを取得することと、（ｂ）ヒトＩＲＴＡタンパク質をコードする単離されたＲＮＡの配列中に含ま
れるユニークな配列と特異的にハイブリダイズすることができ、検出可能なマー
カーで標識された核酸分子に、工程（ａ）の前記ＲＮＡがハイブリダイズし得る
条件下で、ヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴ
Ａ５からなる群から選択されるヒトＩＲＴＡタンパク質をコードする単離された
ＲＮＡの配列中に含まれるユニークな配列と特異的にハイブリダイズし得る少な
くとも１５の連続したヌクレオチドの核酸分子に、工程（ａ）の前記ＲＮＡを接
触させることと、（ｃ）工程（ｂ）における何らかのハイブリダイゼーションを検出することと
を備え、ハイブリダイゼーションが検出されることが、前記サンプル中にＢ細胞
悪性腫瘍又は一種のＢ細胞悪性腫瘍が存在することの指標となる方法。
【請求項２７】前記検出可能なマーカーが、放射性同位元素、酵素、色素
、ビオチン、蛍光標識、又は化学発光標識である請求項２６の方法。
【請求項２８】前記Ｂ細胞悪性腫瘍が、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、
バーキットリンパ腫、周辺帯リンパ腫、びまん性巨大細胞リンパ腫、及び濾胞性
リンパ腫からなる群から選択される請求項２６の方法。
【請求項２９】前記Ｂ細胞リンパ腫が粘膜関連リンパ組織Ｂ細胞リンパ腫
（ＭＡＬＴ）である請求項２８の方法。
【請求項３０】前記Ｂ細胞リンパ腫が非ホジキンリンパ腫である請求項２
８の方法。
【請求項３１】ヒトＩＲＴＡタンパク質をコードするｍＲＮＡ分子に特異
的にハイブリダイズして、前記ｍＲＮＡ分子の過剰発現を抑え得る配列を有する
アンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項３２】前記ＩＲＴＡタンパク質が、ヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２
、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴＡ５タンパク質からなる群から選択され
る請求項３１のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項３３】図１８Ａに記載されたアミノ酸配列（配列番号１）を含む
精製されたＩＲＴＡ１タンパク質。
【請求項３４】前記ＩＲＴＡ１タンパク質がヒトＩＲＴＡ１である請求項
３３の精製されたＩＲＴＡ１タンパク質。
【請求項３５】図１８Ｂ−１−１８Ｂ−３に記載されたアミノ酸配列（配
列番号３）を含む精製されたＩＲＴＡ２タンパク質。
【請求項３６】前記ＩＲＴＡ２タンパク質がヒトＩＲＴＡ２である請求項
３５の精製されたＩＲＴＡ２タンパク質。
【請求項３７】図１８Ｃ−１−１８Ｃ−２に記載されたアミノ酸配列（配
列番号５）を含む精製されたＩＲＴＡ３タンパク質。
【請求項３８】前記ＩＲＴＡ３タンパク質がヒトＩＲＴＡ３である請求項
３７の精製されたＩＲＴＡ３タンパク質。
【請求項３９】図１８Ｄ−１−１８Ｄ−２に記載されたアミノ酸配列（配
列番号７）を含む精製されたＩＲＴＡ４タンパク質。
【請求項４０】前記ＩＲＴＡ４タンパク質がヒトＩＲＴＡ４である請求項
３９の精製されたＩＲＴＡ３タンパク質。
【請求項４１】図１８Ｅ−１−１８Ｅ−２に記載されたアミノ酸配列（配
列番号９）を含む精製されたＩＲＴＡ５タンパク質。
【請求項４２】前記ＩＲＴＡ５タンパク質がヒトＩＲＴＡ５である請求項
４１の精製されたＩＲＴＡ５タンパク質。
【請求項４３】ヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、
及びＩＲＴＡ５からなる群から選択される精製されたＩＲＴＡタンパク質に対し
て誘導された抗体。
【請求項４４】前記ＩＲＴＡタンパク質がヒトＩＲＴＡタンパク質である
請求項４３の抗体。
【請求項４５】前記抗体がモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体で
ある請求項４３の抗体。
【請求項４６】前記モノクローナル抗体は、マウスのモノクローナル抗体
又はヒト化モノクローナル抗体である請求項４３の抗体。
【請求項４７】前記抗体が治療剤に抱合され、該治療剤が放射性同位体、
毒素、トキソイド、又は化学療法剤からなる群から選択される請求項４３の抗体
。
【請求項４８】ヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、
及びＩＲＴＡ５からなる群から選択されるＩＲＴＡタンパク質を発現している癌
細胞に結合して前記癌細胞の増殖を抑えるのに有効である一定量の請求項４３の
抗体と、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物。
【請求項４９】前記癌細胞が、Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、
多発性骨髄腫、バーキットリンパ腫、周辺帯リンパ腫、びまん性巨大細胞リンパ
腫、及び濾胞性リンパ腫細胞からなる群から選択される請求項４８の薬学的組成
物。
【請求項５０】前記Ｂ細胞リンパ腫細胞が粘膜関連リンパ組織Ｂ細胞リン
パ腫（ＭＡＬＴ）細胞である請求項４９の薬学的組成物。
【請求項５１】前記Ｂ細胞リンパ腫細胞が非ホジキンリンパ腫細胞である
請求項４９の薬学的組成物。
【請求項５２】ヒトＩＲＴＡタンパク質の過剰発現を抑えるのに有効な一
定量の請求項３１のオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容される担体とを含む薬
学的組成物。
【請求項５３】被験者から得たサンプル中の１ｑ２１染色体の再編成を備
えたＢ細胞悪性腫瘍を診断する方法であって、（ａ）前記被験者から前記サンプルを取得することと、（ｂ）検出可能なマーカーで標識された抗体が癌細胞の細胞表面上に存在する
ヒトＩＲＴＡタンパク質と結合し得る条件下で、前記癌細胞の細胞表面上に存在
するヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴＡ５
ＩＲＴＡタンパク質からなる群から選択されるヒトＩＲＴＡタンパク質と特異的
に結合し得る請求項４３の抗体に、工程（ａ）の前記サンプルを接触させること
と、（ｃ）工程（ｂ）において何らかの結合を検出することとを備え、結合の検出
が、前記サンプル中にＢ細胞悪性腫瘍の診断を示す方法。
【請求項５４】前記Ｂ細胞悪性腫瘍が、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、
バーキットリンパ腫、マントル細胞リンパ腫、周辺帯リンパ腫、びまん性巨大細
胞リンパ腫、及び濾胞性リンパ腫細胞からなる群から選択される請求項５３の方
法。
【請求項５５】前記Ｂ細胞リンパ腫が粘膜関連リンパ組織Ｂ細胞リンパ腫
（ＭＡＬＴ）である請求項５４の方法。
【請求項５６】前記Ｂ細胞リンパ腫が非ホジキンリンパ腫である請求項５
４の方法。
【請求項５７】Ｂ細胞癌を有する患者を治療する方法であって、ヒトＩＲ
ＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴＡ５からなる群から
選択されるＩＲＴＡタンパク質を発現する癌細胞に結合して、前記癌細胞の増殖
を抑えるのに有効な一定量の抗ＩＲＴＡ抗体と、薬学的に許容される担体とを前
記患者に投与することにより前記患者を治療することを備えた方法。
【請求項５８】前記抗ＩＲＴＡ抗体がモノクローナル抗体である請求項５
７の方法。
【請求項５９】前記モノクローナル抗体がマウスのモノクローナル抗体又
はヒト化モノクローナル抗体である請求項５８の方法。
【請求項６０】前記抗ＩＲＴＡ抗体がポリクローナル抗体である請求項５
７の方法。
【請求項６１】前記Ｂ細胞癌が、Ｂ細胞リンパ腫、多発性骨髄腫、マント
ル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、周辺帯リンパ腫、びまん性巨大細胞リン
パ腫、及び濾胞性リンパ腫からなる群から選択される請求項５７の方法。
【請求項６２】前記Ｂ細胞リンパ腫が粘膜関連リンパ組織Ｂ細胞リンパ腫
（ＭＡＬＴ）である請求項６１の方法。
【請求項６３】前記Ｂ細胞リンパ腫が非ホジキンリンパ腫である請求項６
１の方法。
【請求項６４】Ｂ細胞癌を有する患者を治療する方法であって、ヒトＩＲ
ＴＡタンパク質の過剰発現を抑えて、１又は複数のＩＲＴＡタンパク質を発現し
ている癌細胞の細胞増殖を停止させ、又は細胞死を誘導させ得るのに有効な一定
量の請求項３１のオリゴヌクレオチドと、薬学的に許容される担体とを前記患者
に投与することにより前記患者を治療することを備えた方法。
【請求項６５】前記ＩＲＴＡタンパク質が、ヒトＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２
、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、及びＩＲＴＡ５タンパク質からなる群から選択され
る請求項６４の方法。
【請求項６６】前記Ｂ細胞癌が、Ｂ細胞リンパ腫、マントル細胞リンパ腫
、多発性骨髄腫、バーキットリンパ腫、周辺帯リンパ腫、びまん性巨大細胞リン
パ腫、及び濾胞性リンパ腫からなる群から選択される請求項６４の方法。
【請求項６７】前記Ｂ細胞リンパ腫が粘膜関連リンパ組織Ｂ細胞リンパ腫
（ＭＡＬＴ）である請求項６６の方法。
【請求項６８】前記Ｂ細胞リンパ腫が非ホジキンリンパ腫である請求項６
６の方法。