JP2003521916A - イヌのアレルギー治療用の組換えキメラ抗−ＩｇＥモノクローナル抗体 - Google Patents
イヌのアレルギー治療用の組換えキメラ抗−ＩｇＥモノクローナル抗体Info
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Abstract
(57)【要約】
本発明はイヌのＩｇＥレベルを減少させるための方法および組成物を提供する。該方法および組成物はイヌにおいてアレルギー症状を治療するのに有用である。本発明はキメライヌ抗−ＩｇＥモノクローナル抗体組成物およびアレルギーの治療に該組成物を用いる方法を含む。好ましい具体例において、本発明の組成物は、血漿中の可溶性ＩｇＥを結合させることにより、あるいはＩｇＥが肥満細胞、Ｂ細胞および好塩基球上の受容体に結合することを阻害することにより作用することができる。
Description
【０００１】
本願は２０００年２月１日付け出願の米国出願番号６０／１７９６２９の一部
継続出願である。 （技術分野） 本発明はイヌにおけるＩｇＥレベルを減少させ、アレルギー症状を緩和するた
めの組成物および方法を提供する。該組成物はキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂを含
み、該方法はイヌにおけるアレルギーを治療するのに有用である。
継続出願である。 （技術分野） 本発明はイヌにおけるＩｇＥレベルを減少させ、アレルギー症状を緩和するた
めの組成物および方法を提供する。該組成物はキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂを含
み、該方法はイヌにおけるアレルギーを治療するのに有用である。
【０００２】
（背景技術）
すべてのイヌの３０％までもがアレルギーまたはアレルギー関連の皮膚障害に
罹患していると予測される。具体的には、アレルギー性皮膚炎はイヌ全体の３な
いし１５％に影響を与えていると予測される。イヌにおけるアレルギーの蔓延に
鑑みて、イヌのアレルギーを適切に診断し、治療する方法および組成物を開発す
る必要がある。 アレルギー反応の原因となる可能性が最も高い物質は種によって変わる。通常
のイヌのアレルゲンは、ノミ、花粉、カビおよび埃を包含する。ノミに対するア
レルギーが最も一般的なイヌのアレルギーであると考えられる。典型的には、ノ
ミの唾液がアレルゲンであり、ノミが一回噛むだけで実質的にカユミが生じ得る
。イヌにおけるアレルギーのさらなる形態はアトピーと称される。アトピーはイ
ヌが花粉、カビまたはハウスダスト中に見られる微視的なダニなどの吸入物に対
してアレルギー性であるところの症状である。イヌのアレルギーを治療する最近
の方法は、望ましくない副作用を引き起こすステロイドを使用すること、または
各型のアレルギーに対して異なる処理を必要とするアレルゲン介在の脱感作操作
を使用することに焦点が当てられることが多い。
罹患していると予測される。具体的には、アレルギー性皮膚炎はイヌ全体の３な
いし１５％に影響を与えていると予測される。イヌにおけるアレルギーの蔓延に
鑑みて、イヌのアレルギーを適切に診断し、治療する方法および組成物を開発す
る必要がある。 アレルギー反応の原因となる可能性が最も高い物質は種によって変わる。通常
のイヌのアレルゲンは、ノミ、花粉、カビおよび埃を包含する。ノミに対するア
レルギーが最も一般的なイヌのアレルギーであると考えられる。典型的には、ノ
ミの唾液がアレルゲンであり、ノミが一回噛むだけで実質的にカユミが生じ得る
。イヌにおけるアレルギーのさらなる形態はアトピーと称される。アトピーはイ
ヌが花粉、カビまたはハウスダスト中に見られる微視的なダニなどの吸入物に対
してアレルギー性であるところの症状である。イヌのアレルギーを治療する最近
の方法は、望ましくない副作用を引き起こすステロイドを使用すること、または
各型のアレルギーに対して異なる処理を必要とするアレルゲン介在の脱感作操作
を使用することに焦点が当てられることが多い。
【０００３】
動物において、抗体分子はＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭなど
の種々のイソタイプに分類される。抗体分子は長および短鎖成分からなる。所定
のイソタイプの分子の長鎖は、アミノ酸配列が相同の長い領域と、逆に他のイソ
タイプに属する抗体とは異なる領域とを有する。長鎖の割り当てられた領域は、
特定の細胞表面受容体に、または補体などの他の巨大分子に結合して、したがっ
て、個々の免疫エフェクター機能を活性化する共通の能力を各イソタイプのメン
バーに提供する。かくして、抗体分子のイソタイプへの分離はまた、それらが共
通して活性化する一連のエフェクター機能に従って抗体を分離することにも役立
つ。ヒトおよびイヌにおいて、イムノグロブリンＥ（ＩｇＥ）がアレルギーに関
与しており、即時過敏性反応における抗原を認識する。
の種々のイソタイプに分類される。抗体分子は長および短鎖成分からなる。所定
のイソタイプの分子の長鎖は、アミノ酸配列が相同の長い領域と、逆に他のイソ
タイプに属する抗体とは異なる領域とを有する。長鎖の割り当てられた領域は、
特定の細胞表面受容体に、または補体などの他の巨大分子に結合して、したがっ
て、個々の免疫エフェクター機能を活性化する共通の能力を各イソタイプのメン
バーに提供する。かくして、抗体分子のイソタイプへの分離はまた、それらが共
通して活性化する一連のエフェクター機能に従って抗体を分離することにも役立
つ。ヒトおよびイヌにおいて、イムノグロブリンＥ（ＩｇＥ）がアレルギーに関
与しており、即時過敏性反応における抗原を認識する。
【０００４】
さらには、ＩｇＥは、哺乳動物にて、Ｉ型即時過敏症を含む、アレルギー応答
の重要な媒介物質であると考えられている抗体型である。ＩｇＥは肥満細胞など
の伝達物質細胞上の受容体に結合する。この結合はＩｇＥ分子のＦｃ領域が肥満
細胞上のＦｃ受容体に結合すると起こる。ついで、かかる細胞と結合したＩｇＥ
抗体がアレルゲンに結合すると、このアレルゲンにより複数のＩｇＥ抗体が肥満
細胞表面に架橋する。この架橋がＩ型即時過敏性反応を媒介し、アレルギーと関
連する症状を引き起こすヒスタミンおよび他の分子の放出を引き起こす。 ヒトにおいて、血清中のＩｇＥ全体のレベルはアレルギー疾患の診断手段であ
る。ＩｇＥの血清レベルがイヌにおいてもアレルギーの診断手段であり得る可能
性を探るため、デボアおよびヒル（DeBoerおよびHill）はさらなる研究を行った
（HillおよびDeBoer、Am.J.Vet.Res. ５５（７）：９４４−４８（１９９４））
。彼らは以下の構成（Ｄ９を基質に結合させ、抗体をＤ９で捕獲させ、ついでマ
ーカーを有するＤ９を用いて捕獲した抗体に印を付ける）のエライザアッセイに
てモノクローナル抗体（「ｍＡｂ」）Ｄ９を用いた。
の重要な媒介物質であると考えられている抗体型である。ＩｇＥは肥満細胞など
の伝達物質細胞上の受容体に結合する。この結合はＩｇＥ分子のＦｃ領域が肥満
細胞上のＦｃ受容体に結合すると起こる。ついで、かかる細胞と結合したＩｇＥ
抗体がアレルゲンに結合すると、このアレルゲンにより複数のＩｇＥ抗体が肥満
細胞表面に架橋する。この架橋がＩ型即時過敏性反応を媒介し、アレルギーと関
連する症状を引き起こすヒスタミンおよび他の分子の放出を引き起こす。 ヒトにおいて、血清中のＩｇＥ全体のレベルはアレルギー疾患の診断手段であ
る。ＩｇＥの血清レベルがイヌにおいてもアレルギーの診断手段であり得る可能
性を探るため、デボアおよびヒル（DeBoerおよびHill）はさらなる研究を行った
（HillおよびDeBoer、Am.J.Vet.Res. ５５（７）：９４４−４８（１９９４））
。彼らは以下の構成（Ｄ９を基質に結合させ、抗体をＤ９で捕獲させ、ついでマ
ーカーを有するＤ９を用いて捕獲した抗体に印を付ける）のエライザアッセイに
てモノクローナル抗体（「ｍＡｂ」）Ｄ９を用いた。
【０００５】
ヒルおよびデボアのエライザを用い、イヌのアレルギーを診断するための努力
においてイヌ血清中のＩｇＥの総量を確立した。しかし、ＩｇＥの定量はイヌに
おけるアレルギーを診断するのに有用でないことが見出された（例えば、ヒルお
よびデボアの要約および考察のセクションを参照のこと）。この知見はヒト免疫
学における状況とは正反対であった。この結果は異なる２種類の動物の間のデー
タを相関させる試みが難しいことを指摘している。 この困難性はイヌがヒトよりも一連の異なる抗原に対してアレルギー的であり
得るという事実によってさらに具現化される。例えば、ノミに対するアレルギー
はイヌでは大きな問題であるが、ヒトではそうではない。さらには、イヌおよび
ヒトが同じアレルゲン抽出物に対してアレルギー作用性であることが明らかな場
合に、グリール研究所（Greer Laboratories）（Lenoir,NC）のエシュおよびグ
リール（EschおよびGreer）博士による研究で、イヌの疾患を発症するアレルゲ
ン抽出物中の特異的アレルゲンがヒトにおいて疾患を発症するアレルゲンと必ず
しも同じである必要がないことを示した。例えば、チリダニ抽出物の免疫優勢成
分がイヌとヒトとでは異なることが知られている。
においてイヌ血清中のＩｇＥの総量を確立した。しかし、ＩｇＥの定量はイヌに
おけるアレルギーを診断するのに有用でないことが見出された（例えば、ヒルお
よびデボアの要約および考察のセクションを参照のこと）。この知見はヒト免疫
学における状況とは正反対であった。この結果は異なる２種類の動物の間のデー
タを相関させる試みが難しいことを指摘している。 この困難性はイヌがヒトよりも一連の異なる抗原に対してアレルギー的であり
得るという事実によってさらに具現化される。例えば、ノミに対するアレルギー
はイヌでは大きな問題であるが、ヒトではそうではない。さらには、イヌおよび
ヒトが同じアレルゲン抽出物に対してアレルギー作用性であることが明らかな場
合に、グリール研究所（Greer Laboratories）（Lenoir,NC）のエシュおよびグ
リール（EschおよびGreer）博士による研究で、イヌの疾患を発症するアレルゲ
ン抽出物中の特異的アレルゲンがヒトにおいて疾患を発症するアレルゲンと必ず
しも同じである必要がないことを示した。例えば、チリダニ抽出物の免疫優勢成
分がイヌとヒトとでは異なることが知られている。
【０００６】
アレルギー機構および応答の種交差実験の困難性に加えて、イヌのアレルギー
は主に皮膚で発症するのに対して、ヒトは主に呼吸器系にてアレルギー症状を示
す。加えて、好酸球はヒトにおいてアレルギーと相関するが、イヌでは相関しな
い。 生理学的症状を治療するために医薬組成物の投与を考慮するにおいて、組換え
またはキメラ分子を動物にインビボにて投与した場合、それらはその動物から速
やかに一掃される。組換え体を動物に投与する場合、組換え分子の半減期を長く
するために組換えＩｇＧ分子が用いられた。例えば、カポン・ディ（Capon,D.）
、チャモウ・エス（Chamow,S.）ら、「Designing CD4 Immunoadhesins」Nature
３３７：５２５（１９８９）；バイルン・アール（Byrn,R.）、モルデンチ・シ
ー（Mordenti,C.）ら、「Biological Properties of a CD４ Immunoadhesin」Na
ture ３４４：６６７（１９９０）；ハーク−フレンドスコ・エム（Haak−Frend
scho M.）、リドウェイ・ジェイ（Ridgway,J.）ら、「Human IgE Receptor Alph
a-Chain IgG Chimera Blocks Passive Cutaneous Anaphylaxis Reaction in vit
ro」Journal of Immunology １５１：３５１−５３（１９９３）；米国特許第５
１１６９６４号（１９９２年５月２６日発行；カポン・ディ・ジェイ（Capon,D.
J.）ら、発明の名称「ハイブリッド・イムノグロブリン」）を参照のこと。
は主に皮膚で発症するのに対して、ヒトは主に呼吸器系にてアレルギー症状を示
す。加えて、好酸球はヒトにおいてアレルギーと相関するが、イヌでは相関しな
い。 生理学的症状を治療するために医薬組成物の投与を考慮するにおいて、組換え
またはキメラ分子を動物にインビボにて投与した場合、それらはその動物から速
やかに一掃される。組換え体を動物に投与する場合、組換え分子の半減期を長く
するために組換えＩｇＧ分子が用いられた。例えば、カポン・ディ（Capon,D.）
、チャモウ・エス（Chamow,S.）ら、「Designing CD4 Immunoadhesins」Nature
３３７：５２５（１９８９）；バイルン・アール（Byrn,R.）、モルデンチ・シ
ー（Mordenti,C.）ら、「Biological Properties of a CD４ Immunoadhesin」Na
ture ３４４：６６７（１９９０）；ハーク−フレンドスコ・エム（Haak−Frend
scho M.）、リドウェイ・ジェイ（Ridgway,J.）ら、「Human IgE Receptor Alph
a-Chain IgG Chimera Blocks Passive Cutaneous Anaphylaxis Reaction in vit
ro」Journal of Immunology １５１：３５１−５３（１９９３）；米国特許第５
１１６９６４号（１９９２年５月２６日発行；カポン・ディ・ジェイ（Capon,D.
J.）ら、発明の名称「ハイブリッド・イムノグロブリン」）を参照のこと。
【０００７】
一般に、ＩｇＧはヒトにおいて血清半減期の長いイソタイプのイムノグロブリ
ンであると了承されている。イヌにおいて、半減期の長いイソタイプは知られて
いない。少なくとも２本の、あるいは４本すべての長鎖イヌＩｇＧイムノグロブ
リン配列のエキソン１および３の一部に対応すると考えられている配列が米国特
許第５５９３８６１号（マエダ（Maeda）ら）に報告されているが、これら長鎖
配列のいずれがイヌの半減期の長いＩｇＧ構造の部分であるかわかっていない。 ＩｇＥレベルはアレルギー疾患を経験しているヒト患者では高く、ＩｇＥはア
レルギー症状を媒介すると考えられる。イヌにおいて、血清ＩｇＥのレベルはア
レルギー疾患と相関していないが、それにも拘わらず、アレルギー症状を軽減す
るための機構としてＩｇＥレベルを減少させることが望ましい。 さらには、通常の組成物および方法の欠点を回避し、さらにイヌのアレルギー
に対して効果的な治療活性を付与する、イヌのアレルギーの治療用組成物および
方法に対する要求もある。
ンであると了承されている。イヌにおいて、半減期の長いイソタイプは知られて
いない。少なくとも２本の、あるいは４本すべての長鎖イヌＩｇＧイムノグロブ
リン配列のエキソン１および３の一部に対応すると考えられている配列が米国特
許第５５９３８６１号（マエダ（Maeda）ら）に報告されているが、これら長鎖
配列のいずれがイヌの半減期の長いＩｇＧ構造の部分であるかわかっていない。 ＩｇＥレベルはアレルギー疾患を経験しているヒト患者では高く、ＩｇＥはア
レルギー症状を媒介すると考えられる。イヌにおいて、血清ＩｇＥのレベルはア
レルギー疾患と相関していないが、それにも拘わらず、アレルギー症状を軽減す
るための機構としてＩｇＥレベルを減少させることが望ましい。 さらには、通常の組成物および方法の欠点を回避し、さらにイヌのアレルギー
に対して効果的な治療活性を付与する、イヌのアレルギーの治療用組成物および
方法に対する要求もある。
【０００８】
（発明の開示）
本発明の一の目的は、イヌのアレルギーの治療用の組成物および方法であって
、ステロイド処理で経験するよりも副作用が実質的に少ない、組成物および方法
を提供することである。 本発明のもう一つ別の目的は、アレルゲンの型とは関係なく効果的であるイヌ
のアレルギー症状を軽減するための治療用組成物および方法であって、その処理
が特異的アレルゲンよりもアレルギー応答の存在を基礎とする、組成物および方
法を提供することである。 本発明のもう一つ別の目的はＩｇＥ合成を標的とすることによりイヌのアレル
ギー症状を軽減するための治療用組成物および方法を提供することである。 これらおよび他の目的は、以下の開示および添付したクレームから当業者に明
らかであろう。
、ステロイド処理で経験するよりも副作用が実質的に少ない、組成物および方法
を提供することである。 本発明のもう一つ別の目的は、アレルゲンの型とは関係なく効果的であるイヌ
のアレルギー症状を軽減するための治療用組成物および方法であって、その処理
が特異的アレルゲンよりもアレルギー応答の存在を基礎とする、組成物および方
法を提供することである。 本発明のもう一つ別の目的はＩｇＥ合成を標的とすることによりイヌのアレル
ギー症状を軽減するための治療用組成物および方法を提供することである。 これらおよび他の目的は、以下の開示および添付したクレームから当業者に明
らかであろう。
【０００９】
本発明はイヌのアレルギーを治療するための組成物および方法に関する。さら
に詳細には、本発明はイヌに投与するための方法および組成物であって、遊離し
た血清ＩｇＥが組成物と結合することで、このＩｇＥが肥満細胞および好塩基球
上にある高アフィニティー性のＩｇＥ受容体への結合を阻害するように、実質的
にイヌのイムノグロブリンＥ分子に結合する組成物を提供する。その提供される
組成物および方法は遊離した血清ＩｇＥのレベルを排除または減少させることが
できる。遊離した血清ＩｇＥレベルが低いほど、好塩基球および肥満細胞上にあ
る高アフィニティー性ＩｇＥ受容体の合成および発現をダウンレギュレートさせ
ることができる。その結果として遊離したおよび／または全体としての血清Ｉｇ
Ｅが減少または排除され、皮膚の肥満細胞上のアレルゲンに対するＩｇＥ応答が
減少または排除される。「遊離した血清ＩｇＥ」とは、高アフィニティー性Ｉｇ
Ｅ受容体に結合することができるＩｇＥであって、血清中の結合していないＩｇ
Ｅを意味する。
に詳細には、本発明はイヌに投与するための方法および組成物であって、遊離し
た血清ＩｇＥが組成物と結合することで、このＩｇＥが肥満細胞および好塩基球
上にある高アフィニティー性のＩｇＥ受容体への結合を阻害するように、実質的
にイヌのイムノグロブリンＥ分子に結合する組成物を提供する。その提供される
組成物および方法は遊離した血清ＩｇＥのレベルを排除または減少させることが
できる。遊離した血清ＩｇＥレベルが低いほど、好塩基球および肥満細胞上にあ
る高アフィニティー性ＩｇＥ受容体の合成および発現をダウンレギュレートさせ
ることができる。その結果として遊離したおよび／または全体としての血清Ｉｇ
Ｅが減少または排除され、皮膚の肥満細胞上のアレルゲンに対するＩｇＥ応答が
減少または排除される。「遊離した血清ＩｇＥ」とは、高アフィニティー性Ｉｇ
Ｅ受容体に結合することができるＩｇＥであって、血清中の結合していないＩｇ
Ｅを意味する。
【００１０】
本発明者らは、検出可能な遊離したおよび／または全体としての血清ＩｇＥの
排除を７日間、あるいはさらに短期間維持することで、ＩｇＥの合成を抑制しつ
づける、負のフィードバック−ループが得られることを明らかにした。ＩｇＥ合
成の抑制を維持することでアレルゲンに対する皮膚応答の排除が得られるであろ
う。 好ましい具体例において、本発明のキメラ抗−ＩｇＥ分子の特異性および構造
をＩｇＥ＋Ｂ細胞に直接標的化させることができる。この結合は成熟Ｂ細胞の負
の刺激を介するか、またはアポトーシスもしくは補体介在溶菌によりＢ細胞を破
壊するかのいずれかによりＩｇＥ合成の減少または排除を得ることができる。
排除を７日間、あるいはさらに短期間維持することで、ＩｇＥの合成を抑制しつ
づける、負のフィードバック−ループが得られることを明らかにした。ＩｇＥ合
成の抑制を維持することでアレルゲンに対する皮膚応答の排除が得られるであろ
う。 好ましい具体例において、本発明のキメラ抗−ＩｇＥ分子の特異性および構造
をＩｇＥ＋Ｂ細胞に直接標的化させることができる。この結合は成熟Ｂ細胞の負
の刺激を介するか、またはアポトーシスもしくは補体介在溶菌によりＢ細胞を破
壊するかのいずれかによりＩｇＥ合成の減少または排除を得ることができる。
【００１１】
したがって、本発明は、キメラを含み、イヌＩｇＥに特異的に結合するＩｇＥ
受容体分子を含む。その受容体分子は抗体分子、好ましくはモノクローナル抗体
（「ｍＡｂ」）であってもよく、そのｍＡｂはイヌＩｇＥのエキソン３に対して
アフィニティーを有することが好ましい。キメラはイヌおよびマウスのイムノグ
ロブリンを含むことができる。キメラはさらにマウスの長および短鎖可変領域に
融合したイヌの長および短不変ドメインを含むこともできる。本発明の受容体お
よび抗体分子もまた、ＩｇＧ長鎖配列を含んでいてもよい。 本発明の受容体および抗体分子はＩｇＥが別のＩｇＥ受容体に結合することを
妨げることができる。その別のＩｇＥ受容体は１またはそれ以上の肥満細胞また
は好塩基球上にあってもよい。本発明の受容体および抗体分子は蛋白、ペプチド
または他の有機分子からなっていてもよい。
受容体分子を含む。その受容体分子は抗体分子、好ましくはモノクローナル抗体
（「ｍＡｂ」）であってもよく、そのｍＡｂはイヌＩｇＥのエキソン３に対して
アフィニティーを有することが好ましい。キメラはイヌおよびマウスのイムノグ
ロブリンを含むことができる。キメラはさらにマウスの長および短鎖可変領域に
融合したイヌの長および短不変ドメインを含むこともできる。本発明の受容体お
よび抗体分子もまた、ＩｇＧ長鎖配列を含んでいてもよい。 本発明の受容体および抗体分子はＩｇＥが別のＩｇＥ受容体に結合することを
妨げることができる。その別のＩｇＥ受容体は１またはそれ以上の肥満細胞また
は好塩基球上にあってもよい。本発明の受容体および抗体分子は蛋白、ペプチド
または他の有機分子からなっていてもよい。
【００１２】
本発明はまた、イヌのアレルギーの治療方法であって、本発明のキメラを含み
、イヌＩｇＥに特異的に結合する受容体またはモノクローナル抗体をイヌに投与
することを特徴とする方法を提供する。本発明の方法は、治療されるイヌの血清
ＩｇＥレベルの低下をもたらすことができ、あるいはＩｇＥをＢ細胞に結合させ
て、つづいてＢ細胞のクローン集団を排除することができる。該方法はまた、血
漿中の血清ＩｇＥの結合をもたらし、あるいは治療されるイヌにおけるＩｇＥの
産生の阻害をもたらすこともできる。本発明の方法の血清ＩｇＥレベルの低下は
、ＩｇＥと、肥満細胞または好塩基球上にあってもよいＩｇＥについての受容体
との間の相互作用の遮断を破壊することにより惹起することもできる。 本発明はさらには、本発明の受容体を治療上有効な量含有する医薬処方を提供
する。
、イヌＩｇＥに特異的に結合する受容体またはモノクローナル抗体をイヌに投与
することを特徴とする方法を提供する。本発明の方法は、治療されるイヌの血清
ＩｇＥレベルの低下をもたらすことができ、あるいはＩｇＥをＢ細胞に結合させ
て、つづいてＢ細胞のクローン集団を排除することができる。該方法はまた、血
漿中の血清ＩｇＥの結合をもたらし、あるいは治療されるイヌにおけるＩｇＥの
産生の阻害をもたらすこともできる。本発明の方法の血清ＩｇＥレベルの低下は
、ＩｇＥと、肥満細胞または好塩基球上にあってもよいＩｇＥについての受容体
との間の相互作用の遮断を破壊することにより惹起することもできる。 本発明はさらには、本発明の受容体を治療上有効な量含有する医薬処方を提供
する。
【００１３】
（発明を実施するための最良の形態）
定義
アフィニティー：リガンドとその受容体の間の、あるいは２つの結合基の間の
誘引力または結合力。アフィニティーはまた結合した結合対を平衡状態に保持す
る。 アミノ酸：リニアーアレイにて結合してポリペプチド、ペプチドまたは蛋白を
形成することのできるアミノ基を含有する有機分子。２０種の通常のアミノ酸は
、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタ
ミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン
、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトフ
ァン、トリプシンおよびバリンである。保守的変種を含む本発明の具体例におい
て、当業者であれば、通常のアミノ酸のいずれも、ならびに列挙されていない他
の物も本発明において用いることができることを理解するであろう。
誘引力または結合力。アフィニティーはまた結合した結合対を平衡状態に保持す
る。 アミノ酸：リニアーアレイにて結合してポリペプチド、ペプチドまたは蛋白を
形成することのできるアミノ基を含有する有機分子。２０種の通常のアミノ酸は
、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタ
ミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン
、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトフ
ァン、トリプシンおよびバリンである。保守的変種を含む本発明の具体例におい
て、当業者であれば、通常のアミノ酸のいずれも、ならびに列挙されていない他
の物も本発明において用いることができることを理解するであろう。
【００１４】
イヌＩｇＥ受容体：イヌＩｇＥに対してアフィニティーを示すか、さもなけれ
ばインビボまたはインビトロにて結果としてイヌの血清からＩｇＥを除去する、
本明細書にて限定される組換えまたはキメラ受容体。 ｃＤＮＡクローン：クローニングベクター中に保有される、ＲＮＡを提示する
二重ＤＮＡ配列。 キメラｍＡｂ：少なくとも２種の異なるイヌ免疫グロブリン源からのアミノ酸
を合して得られるハイブリッドアミノ酸配列を有するイムノグロブリン分子。一
般に、アミノ酸配列は天然では一緒になって見られないのが普通である。「ｍＡ
ｂ」はモノクローナル抗体をいう。 クローニングベクター：宿主細胞にて複製することができ、付加したＤＮＡ配
列の増幅または発現を目的として外因的に付加されたＤＮＡ配列の保持能を有す
るプラスミド、ファージＤＮＡまたは他のＤＮＡ配列。
ばインビボまたはインビトロにて結果としてイヌの血清からＩｇＥを除去する、
本明細書にて限定される組換えまたはキメラ受容体。 ｃＤＮＡクローン：クローニングベクター中に保有される、ＲＮＡを提示する
二重ＤＮＡ配列。 キメラｍＡｂ：少なくとも２種の異なるイヌ免疫グロブリン源からのアミノ酸
を合して得られるハイブリッドアミノ酸配列を有するイムノグロブリン分子。一
般に、アミノ酸配列は天然では一緒になって見られないのが普通である。「ｍＡ
ｂ」はモノクローナル抗体をいう。 クローニングベクター：宿主細胞にて複製することができ、付加したＤＮＡ配
列の増幅または発現を目的として外因的に付加されたＤＮＡ配列の保持能を有す
るプラスミド、ファージＤＮＡまたは他のＤＮＡ配列。
【００１５】
保守的変種：ヌクレオチド配列の保守的変種は、アミノ酸配列の変化をもたら
さないヌクレオチド置換、ならびに同類アミノ酸置換またはそのヌクレオチドか
ら翻訳されたポリペプチドの特性に実質的に影響を及ぼさないアミノ酸置換をも
たらすヌクレオチド置換を包含する。例えば、置換がペプチドとイヌのＩｇＥ受
容体またはイヌの他のＩｇＥリガンドとの特異的結合を妨げないならば、ポリペ
プチド特性は実質的には影響を受けていない。 アミノ酸配列の保守的変種は、出発ペプチドに関連するポリペプチド変種の特
性に実質的に影響を及ぼさないアミノ酸の置換または欠失を包含する。例えば、
置換または欠失がペプチド変種の出発ペプチドの特異的結合パートナーへの特異
的結合を妨げないならば、ポリペプチド特性は実質的には影響を受けていない。
糖鎖形成および他の変種ならびに当業者に明らかであろう誘導体はこの定義に含
まれ、本発明の範囲内にあると考えられる。さらに、出発ペプチドに対してポリ
ペプチドの特性に実質的に影響を及ぼさないアミノ酸挿入、置換、欠失および切
断もこの定義に含まれる。
さないヌクレオチド置換、ならびに同類アミノ酸置換またはそのヌクレオチドか
ら翻訳されたポリペプチドの特性に実質的に影響を及ぼさないアミノ酸置換をも
たらすヌクレオチド置換を包含する。例えば、置換がペプチドとイヌのＩｇＥ受
容体またはイヌの他のＩｇＥリガンドとの特異的結合を妨げないならば、ポリペ
プチド特性は実質的には影響を受けていない。 アミノ酸配列の保守的変種は、出発ペプチドに関連するポリペプチド変種の特
性に実質的に影響を及ぼさないアミノ酸の置換または欠失を包含する。例えば、
置換または欠失がペプチド変種の出発ペプチドの特異的結合パートナーへの特異
的結合を妨げないならば、ポリペプチド特性は実質的には影響を受けていない。
糖鎖形成および他の変種ならびに当業者に明らかであろう誘導体はこの定義に含
まれ、本発明の範囲内にあると考えられる。さらに、出発ペプチドに対してポリ
ペプチドの特性に実質的に影響を及ぼさないアミノ酸挿入、置換、欠失および切
断もこの定義に含まれる。
【００１６】
発現調節配列：構造遺伝子に作動的に連結した場合に、その遺伝子の発現を調
節および制御するヌクレオチドのＤＮＡ配列を意味する。 エキソン：ポリペプチドの一部をコードするＤＮＡの１つの連続領域。いずれ
かのエキソンに言及すること、例えば「エキソン６のＤＮＡ配列」は完全なエキ
ソンまたはその一部をいう。 遊離したＩｇＥまたは血清ＩｇＥ：ＩｇＥまたは他のＩｇＥ分子に対してアフ
ィニティーを有する未変性または投与受容体と複合または結合していない、患者
において循環しているＩｇＥ。 ゲノム：１の物質の全ＤＮＡ。ゲノムは、とりわけ、その物質のポリペプチド
をコードする構造遺伝子ならびにオペレーター、プロモーターおよびシャイン−
ダルガーノ配列などのリボソーム結合および相互作用配列を含む。
節および制御するヌクレオチドのＤＮＡ配列を意味する。 エキソン：ポリペプチドの一部をコードするＤＮＡの１つの連続領域。いずれ
かのエキソンに言及すること、例えば「エキソン６のＤＮＡ配列」は完全なエキ
ソンまたはその一部をいう。 遊離したＩｇＥまたは血清ＩｇＥ：ＩｇＥまたは他のＩｇＥ分子に対してアフ
ィニティーを有する未変性または投与受容体と複合または結合していない、患者
において循環しているＩｇＥ。 ゲノム：１の物質の全ＤＮＡ。ゲノムは、とりわけ、その物質のポリペプチド
をコードする構造遺伝子ならびにオペレーター、プロモーターおよびシャイン−
ダルガーノ配列などのリボソーム結合および相互作用配列を含む。
【００１７】
特異結合：バックグラウンド結合よりも大きな結合アフィニティーでの１つの
物質の別の物質への結合。特異結合を示す２つの物質は特異結合パートナーまた
は特異結合対と称される。抗体およびその抗原は特異結合対の一例である。 構造遺伝子：そのテンプレートまたはメッセンジャーＲＮＡ（「ｍＲＮＡ」）
を介して特定のポリペプチドに特有のアミノ酸の配列をコードするＤＮＡ配列。 治療量：「治療量」は、治療された動物にて、血清ＩｇＥレベルを減少または
ＩｇＥ産生もしくは活性を抑制し、障害または生理学的症状の徴候を軽減または
防止する効果を有する、ｍＡｂの量である。 全ＩｇＥ：「全ＩｇＥ」とは別の分子と結合しているか、または結合していな
い、全血清ＩｇＥを意味する。
物質の別の物質への結合。特異結合を示す２つの物質は特異結合パートナーまた
は特異結合対と称される。抗体およびその抗原は特異結合対の一例である。 構造遺伝子：そのテンプレートまたはメッセンジャーＲＮＡ（「ｍＲＮＡ」）
を介して特定のポリペプチドに特有のアミノ酸の配列をコードするＤＮＡ配列。 治療量：「治療量」は、治療された動物にて、血清ＩｇＥレベルを減少または
ＩｇＥ産生もしくは活性を抑制し、障害または生理学的症状の徴候を軽減または
防止する効果を有する、ｍＡｂの量である。 全ＩｇＥ：「全ＩｇＥ」とは別の分子と結合しているか、または結合していな
い、全血清ＩｇＥを意味する。
【００１８】
本明細書において開示されるように、新規なキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂを産
生し、ブタクサに感作したイヌに投与した。ｃ１５Ａ．２と称されるこのキメラ
分子はマウスの長および短可変領域に融合したイヌの不変長および短ドメインか
らなる。いずれのケースにおいても、かかる投与により、循環している遊離した
ＩｇＥのレベルの検出可能なレベル以下までの持続的な減少が得られた。加えて
、キメラ１５Ａ．２と複合体を形成し、今なお循環し、ｃ１５Ａ．２の投与直後
では検出可能なＩｇＥを含む、全ＩｇＥは時間の経過と共に減少した。投与から
２８日後、遊離したｃ１５．２が血清中で検出可能であったが、遊離および全血
清ＩｇＥは共に検出できなかった。ヒトアレルギー用の治療薬としてのヒト化抗
−ＩｇＥモノクローナル抗体の使用が米国特許第５５９３８６１号（マエダら）
に開示された。組換え抗−ＩｇＥｍＡｂの投与によるＩｇＥの除去は今までイヌ
では知られていなかったと考える。当業者であれば、本願発明および本明細書中
のｍＡｂに関する開示が抗体分子の一部を含んでいてもよい受容体にも同様に適
用できると認識するであろう。したがって、本明細書の開示は抗体だけでなく受
容体の組成物にも関係するものである。
生し、ブタクサに感作したイヌに投与した。ｃ１５Ａ．２と称されるこのキメラ
分子はマウスの長および短可変領域に融合したイヌの不変長および短ドメインか
らなる。いずれのケースにおいても、かかる投与により、循環している遊離した
ＩｇＥのレベルの検出可能なレベル以下までの持続的な減少が得られた。加えて
、キメラ１５Ａ．２と複合体を形成し、今なお循環し、ｃ１５Ａ．２の投与直後
では検出可能なＩｇＥを含む、全ＩｇＥは時間の経過と共に減少した。投与から
２８日後、遊離したｃ１５．２が血清中で検出可能であったが、遊離および全血
清ＩｇＥは共に検出できなかった。ヒトアレルギー用の治療薬としてのヒト化抗
−ＩｇＥモノクローナル抗体の使用が米国特許第５５９３８６１号（マエダら）
に開示された。組換え抗−ＩｇＥｍＡｂの投与によるＩｇＥの除去は今までイヌ
では知られていなかったと考える。当業者であれば、本願発明および本明細書中
のｍＡｂに関する開示が抗体分子の一部を含んでいてもよい受容体にも同様に適
用できると認識するであろう。したがって、本明細書の開示は抗体だけでなく受
容体の組成物にも関係するものである。
【００１９】
本発明のイヌ抗−ＩｇＥｍＡｂ組成物はイヌおよびマウスイムノグロブリンの
組換え体またはきキメラ構造物であってもよい。該分子は、イヌＩｇＧ不変長お
よび短ドメインと、イヌＩｇＥのエキソン３に対してアフィニティーを有するネ
ズミイムノグロブリン長および短可変領域ドメインとから製造されるキメラを包
含しうる。 本明細書において使用されるイヌ抗−ＩｇＥｍＡｂ、キメラｍＡｂ、組換えｍ
Ａｂおよび受容体なる語は、そのいずれのおよびすべての保守的変種を包含し、
本発明の範囲内にあると考えられる。 キメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体の投与がイヌアレルギーの治療方法
にて有用であることが本発明の特徴である。本発明の組成物の投与がイヌにおけ
る血清ＩｇＥレベルを低下させることも本発明の特徴である。 本発明のキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂおよび受容体はＩｇＥとその受容体の間
の相互作用を中断または遮断することができる。一般に、ＩｇＥとその受容体の
間の干渉は、アレルギー症状を惹起する、または惹起する可能性のあるアレルゲ
ンの型とは無関係である。
組換え体またはきキメラ構造物であってもよい。該分子は、イヌＩｇＧ不変長お
よび短ドメインと、イヌＩｇＥのエキソン３に対してアフィニティーを有するネ
ズミイムノグロブリン長および短可変領域ドメインとから製造されるキメラを包
含しうる。 本明細書において使用されるイヌ抗−ＩｇＥｍＡｂ、キメラｍＡｂ、組換えｍ
Ａｂおよび受容体なる語は、そのいずれのおよびすべての保守的変種を包含し、
本発明の範囲内にあると考えられる。 キメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体の投与がイヌアレルギーの治療方法
にて有用であることが本発明の特徴である。本発明の組成物の投与がイヌにおけ
る血清ＩｇＥレベルを低下させることも本発明の特徴である。 本発明のキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂおよび受容体はＩｇＥとその受容体の間
の相互作用を中断または遮断することができる。一般に、ＩｇＥとその受容体の
間の干渉は、アレルギー症状を惹起する、または惹起する可能性のあるアレルゲ
ンの型とは無関係である。
【００２０】
本発明の具体例において、本発明のキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂおよび受容体
は、ＩｇＥ分子上の結合部位を遮断することにより、さもなければＩｇＥのその
受容体への結合を干渉することにより、ＩｇＥが肥満細胞または好塩基球上にあ
るその受容体への結合を遮断することによって作用することができる。本発明の
キメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂおよび受容体はまた、血漿中の可溶性ＩｇＥを結合
させ、ついで正常な体内機構により循環系からその複合体を除去することにより
作用することもできる。本発明の他の具体例において、キメライヌ抗−ＩｇＥｍ
Ａｂまたは受容体は、ＩｇＥをＢ−細胞と結合させ、ＩｇＥ＋Ｂ−細胞のクロー
ン集団を排除することにより作用してもよい。本発明のキメライヌ抗−ＩｇＥｍ
Ａｂまたは受容体はまた、ＩｇＥ産生を阻害することにより作用してもよい。特
定の理論により拘束するつもりはないが、ｍＡｂまたは受容体はＢ細胞に結合し
、細胞のアポトーシスを誘発するか、またはＩｇＥ合成をダウンレギュレートま
たは排除する阻害シグナルに至ることができる架橋事象を誘発すると考えられる
。加えて、血清ＩｇＥ、すなわち遊離したＩｇＥの結合は、通常、エキソン３領
域の血清ＩｇＥと結合することのできるもう一つ別の制御分子をＢ細胞上のＩｇ
Ｅに結合させ、その後、かかる結合に付随かつ由来する負のシグナルを介してＩ
ｇＥ合成を行うことができる。
は、ＩｇＥ分子上の結合部位を遮断することにより、さもなければＩｇＥのその
受容体への結合を干渉することにより、ＩｇＥが肥満細胞または好塩基球上にあ
るその受容体への結合を遮断することによって作用することができる。本発明の
キメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂおよび受容体はまた、血漿中の可溶性ＩｇＥを結合
させ、ついで正常な体内機構により循環系からその複合体を除去することにより
作用することもできる。本発明の他の具体例において、キメライヌ抗−ＩｇＥｍ
Ａｂまたは受容体は、ＩｇＥをＢ−細胞と結合させ、ＩｇＥ＋Ｂ−細胞のクロー
ン集団を排除することにより作用してもよい。本発明のキメライヌ抗−ＩｇＥｍ
Ａｂまたは受容体はまた、ＩｇＥ産生を阻害することにより作用してもよい。特
定の理論により拘束するつもりはないが、ｍＡｂまたは受容体はＢ細胞に結合し
、細胞のアポトーシスを誘発するか、またはＩｇＥ合成をダウンレギュレートま
たは排除する阻害シグナルに至ることができる架橋事象を誘発すると考えられる
。加えて、血清ＩｇＥ、すなわち遊離したＩｇＥの結合は、通常、エキソン３領
域の血清ＩｇＥと結合することのできるもう一つ別の制御分子をＢ細胞上のＩｇ
Ｅに結合させ、その後、かかる結合に付随かつ由来する負のシグナルを介してＩ
ｇＥ合成を行うことができる。
【００２１】
もう一つ別の具体例において、本発明のキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受
容体はＩｇＧ長鎖配列を含むか、または上記配列と一緒に処方し、該分子のイン
ビボでの半減期を長くし、またはその活性を増強することもできる。 アレルギー症状に罹患しているイヌの治療方法またはイヌにおけるアレルギー
症状の予防方法は、一般に、治療量のキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体
を治療される動物に投与することを含む。キメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受
容体の正確な投与量および投与変数は当業者に公知の方法と矛盾しない方法にて
確立されるであろう。これは以下の１またはそれ以上の因子を考慮することを含
むが、このような列挙は代表的なものを意図するものであり、当業者に公知の、
または知られるようになる他の変数を排除することを意図とするものではない：
アレルギー症状の存在および重度、イヌの種類、個々の患者の状態、デリバリー
部位、投与方法および期間、当業者に公知の、または将来公知となる可能性のあ
る他の因子。
容体はＩｇＧ長鎖配列を含むか、または上記配列と一緒に処方し、該分子のイン
ビボでの半減期を長くし、またはその活性を増強することもできる。 アレルギー症状に罹患しているイヌの治療方法またはイヌにおけるアレルギー
症状の予防方法は、一般に、治療量のキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体
を治療される動物に投与することを含む。キメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受
容体の正確な投与量および投与変数は当業者に公知の方法と矛盾しない方法にて
確立されるであろう。これは以下の１またはそれ以上の因子を考慮することを含
むが、このような列挙は代表的なものを意図するものであり、当業者に公知の、
または知られるようになる他の変数を排除することを意図とするものではない：
アレルギー症状の存在および重度、イヌの種類、個々の患者の状態、デリバリー
部位、投与方法および期間、当業者に公知の、または将来公知となる可能性のあ
る他の因子。
【００２２】
同様に、投与されるキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体の用量は、使用
されるＩｇＥ長鎖イソタイプの特性および他の因子の事項に依存しているかもし
れない。例えば、これらの事項は結合活性およびインビボでの血漿中半減期、処
方中のキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体の濃度、投与経路、投与部位お
よび速度、ならびに治療される患者の臨床耐性を包含する。この列挙は限定を意
図するものではなく、当業者は他の因子も関連しており、有利であると考えるこ
とができると考えられる。 このキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体の治療量を、アレルギー症状を
緩和または抑制し、および／または血清ＩｇＥレベルを減少させ、および／また
はＩｇＥ産生または活性を抑制するのに十分な投与量および期間、投与すること
ができる。
されるＩｇＥ長鎖イソタイプの特性および他の因子の事項に依存しているかもし
れない。例えば、これらの事項は結合活性およびインビボでの血漿中半減期、処
方中のキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体の濃度、投与経路、投与部位お
よび速度、ならびに治療される患者の臨床耐性を包含する。この列挙は限定を意
図するものではなく、当業者は他の因子も関連しており、有利であると考えるこ
とができると考えられる。 このキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体の治療量を、アレルギー症状を
緩和または抑制し、および／または血清ＩｇＥレベルを減少させ、および／また
はＩｇＥ産生または活性を抑制するのに十分な投与量および期間、投与すること
ができる。
【００２３】
一般に、本発明の処方は、イヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体の安定および効
能のある形態の調製に干渉しない量の他の成分を含有していてもよい。キメライ
ヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体と共に投与されるいずれの付加成分も効果的で
安全な医薬処方に適する量にて配合することができる。当業者に知られている医
薬賦形剤も本発明の組成物の一部を形成することができる。例えば、かかる賦形
剤として、セイラインおよび他の非経口用溶液、バッファーおよび安定化剤、な
らびに種々の適当な増量剤、緩衝化剤、酸化防止剤、共溶媒および配合するのが
有利であると当業者にわかっている他の成分が挙げられる。好ましい具体例にお
いて、イヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体は滅菌ＰＢＳ中の蛋白の溶液として処
方することができる。
能のある形態の調製に干渉しない量の他の成分を含有していてもよい。キメライ
ヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体と共に投与されるいずれの付加成分も効果的で
安全な医薬処方に適する量にて配合することができる。当業者に知られている医
薬賦形剤も本発明の組成物の一部を形成することができる。例えば、かかる賦形
剤として、セイラインおよび他の非経口用溶液、バッファーおよび安定化剤、な
らびに種々の適当な増量剤、緩衝化剤、酸化防止剤、共溶媒および配合するのが
有利であると当業者にわかっている他の成分が挙げられる。好ましい具体例にお
いて、イヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体は滅菌ＰＢＳ中の蛋白の溶液として処
方することができる。
【００２４】
本発明のキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体は、ＩｇＥとその受容体の
間の結合を破壊し、遮断するか、そうではなく干渉するように投与することがで
き、あるいは投与されるｍＡｂまたは受容体とＩｇＥの間の結合を強化するよう
に投与することができる。これらの方法は当業者に明らかであろう。好ましい具
体例において、キメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体は皮下的、筋肉内また
は静脈内投与することができる。別法として、ｍＡｂまたは受容体は、懸濁液、
錠剤、カプセルあるいは経口、経直腸または経膣投与用の坐剤に処方して投与す
ることができる。 以下の実施例を用いて１５Ａ．２ｍＡｂのクローニング、発現および精製を説
明するが、これに限定されるものではない。
間の結合を破壊し、遮断するか、そうではなく干渉するように投与することがで
き、あるいは投与されるｍＡｂまたは受容体とＩｇＥの間の結合を強化するよう
に投与することができる。これらの方法は当業者に明らかであろう。好ましい具
体例において、キメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂまたは受容体は皮下的、筋肉内また
は静脈内投与することができる。別法として、ｍＡｂまたは受容体は、懸濁液、
錠剤、カプセルあるいは経口、経直腸または経膣投与用の坐剤に処方して投与す
ることができる。 以下の実施例を用いて１５Ａ．２ｍＡｂのクローニング、発現および精製を説
明するが、これに限定されるものではない。
【００２５】実施例Ｉ
：マウス１５Ａ．２可変領域のクローニング
マウスモノクローナル１５Ａ．２可変領域を１５Ａ．２ハイブリドーマ細胞か
らＲＴ−ＰＣＲによりクローン化した。マウスハイブリドーマ細胞株からＩｇＶ
ｈおよびＩｇＶｌのｍＲＮＡの逆転写および増幅用の一式の縮重ＰＣＲプライマ
ーからなる市販のキット（ノバゲン（Ｎｏｖａｇｅｎ）、マディソン、ＷＩ、Ｉ
ｇ−プライム・キット）を、短および長可変ドメインをコードする１５Ａ．２ｍ
ＲＮＡをクローン化するためのプライマー源として使用した。ＩｇＶｈドメイン
用５’および３’プライマーはそれぞれＭｕＩｇＶｈ５’−ＢおよびＭｕＩｇＭ
ｖｈ３’−１であった。ＭｕＩｇＶｈ５’−Ｂは１つのチューブ中の２つのプラ
イマーの混合物（ノバゲンにより提供）であって、配列ＧＧＧＡＡＴＴＣＡＴＧ
ＲＡＡＴＧＳＡＳＣＴＧＧＧＴＹＷＴＹＣＴＣＴＴ（配列番号１）および配列Ａ
ＣＴＡＧＴＣＧＡＣＡＴＧＧＡＣＴＣＣＡＧＧＣＴＣＡＡＴＴＴＡＧＴＴＴＴＣ
ＣＴ（配列番号２）を有する。ＭｕＩｇＭｖｈ３’−１は配列ＣＣＣＡＡＧＣＴ
ＴＡＣＧＡＧＧＧＧＧＡＡＧＡＣＡＴＴＴＧＧＧＡＡを有する。ＩｇＶｌドメイ
ン用の５’および３’プライマーはそれぞれＭｕＩｇλＶｌ５’−ＡおよびＭｕ
ＩｇλＶｌ３’−１であった。１５Ａ．２のＩｇＶｈおよびＩｇＶｌ可変ドメイ
ンをコードするｍＲＮＡを逆転写し、増幅させ、クローン化した。ＭｕＩｇλＶ
ｌ５’−Ａは 配列ＧＧＧＡＡＴＴＣＡＴＧＧＣＣＴＧＧＡＹＴＹＣＷＣＴＹＷ
ＴＭＹＴＣＴを有する。ＭｕＩｇλＶｌ３’−１は 配列ＣＣＣＡＡＧＣＴＴＡ
ＧＣＴＣＹＴＣＷＧＷＧＧＡＩＧＧＹＧＧＲＡＡを有する。
らＲＴ−ＰＣＲによりクローン化した。マウスハイブリドーマ細胞株からＩｇＶ
ｈおよびＩｇＶｌのｍＲＮＡの逆転写および増幅用の一式の縮重ＰＣＲプライマ
ーからなる市販のキット（ノバゲン（Ｎｏｖａｇｅｎ）、マディソン、ＷＩ、Ｉ
ｇ−プライム・キット）を、短および長可変ドメインをコードする１５Ａ．２ｍ
ＲＮＡをクローン化するためのプライマー源として使用した。ＩｇＶｈドメイン
用５’および３’プライマーはそれぞれＭｕＩｇＶｈ５’−ＢおよびＭｕＩｇＭ
ｖｈ３’−１であった。ＭｕＩｇＶｈ５’−Ｂは１つのチューブ中の２つのプラ
イマーの混合物（ノバゲンにより提供）であって、配列ＧＧＧＡＡＴＴＣＡＴＧ
ＲＡＡＴＧＳＡＳＣＴＧＧＧＴＹＷＴＹＣＴＣＴＴ（配列番号１）および配列Ａ
ＣＴＡＧＴＣＧＡＣＡＴＧＧＡＣＴＣＣＡＧＧＣＴＣＡＡＴＴＴＡＧＴＴＴＴＣ
ＣＴ（配列番号２）を有する。ＭｕＩｇＭｖｈ３’−１は配列ＣＣＣＡＡＧＣＴ
ＴＡＣＧＡＧＧＧＧＧＡＡＧＡＣＡＴＴＴＧＧＧＡＡを有する。ＩｇＶｌドメイ
ン用の５’および３’プライマーはそれぞれＭｕＩｇλＶｌ５’−ＡおよびＭｕ
ＩｇλＶｌ３’−１であった。１５Ａ．２のＩｇＶｈおよびＩｇＶｌ可変ドメイ
ンをコードするｍＲＮＡを逆転写し、増幅させ、クローン化した。ＭｕＩｇλＶ
ｌ５’−Ａは 配列ＧＧＧＡＡＴＴＣＡＴＧＧＣＣＴＧＧＡＹＴＹＣＷＣＴＹＷ
ＴＭＹＴＣＴを有する。ＭｕＩｇλＶｌ３’−１は 配列ＣＣＣＡＡＧＣＴＴＡ
ＧＣＴＣＹＴＣＷＧＷＧＧＡＩＧＧＹＧＧＲＡＡを有する。
【００２６】
ＰＣＲ反応は以下のように行った：
酵素： Ｔａｑポリメラーゼ
１） ９４℃ ２０秒 ３５サイクル
６０℃ ５８秒
７２℃ ２０秒
２） ４℃ 保持
１５Ａ．２のＩｇＶｈおよびＩｇＶｌ可変ドメインの適当なクローンを、制限
酵素分析およびＤＮＡ配列分析を用いて同定した。周知のマウスＩｇＶｈおよび
ＩｇＶｌ遺伝子とこれらのＤＮＡ配列の比較により、それらをマウスモノクロー
ナル抗体可変ドメインに相当するとして確認した。
酵素分析およびＤＮＡ配列分析を用いて同定した。周知のマウスＩｇＶｈおよび
ＩｇＶｌ遺伝子とこれらのＤＮＡ配列の比較により、それらをマウスモノクロー
ナル抗体可変ドメインに相当するとして確認した。
【００２７】実施例ＩＩ
：イヌＩｇＧ定常領域のクローニング
イヌのイムノグロブリン短および長定常領域を、イヌのリンパ球細胞からＲＴ
−ＰＣＲによりクローン化した。イヌＩｇＧの定常ドメインの配列に準じたＰＣ
Ｒプライマーを、イムノグロブリンの定常ドメインをコードしているｍＲＮＡの
逆転写およびＰＣＲ増幅に用いた（Ｍａｅｄａらにより、米国特許第５５９３８
６１号に開示）。ＰＣＲ反応条件は前記した通りであった。ＰＣＲ産生物をクロ
ーン化し、ＤＮＡ配列分析を行った。イムノグロブリンドメインの適当なクロー
ンを、制限酵素分析およびＤＮＡ配列分析を用いて同定した。周知のイムノグロ
ブリン遺伝子とこれらのＤＮＡ配列の比較により、それらをイヌイムノグロブリ
ンの定常ドメインに相当するとして確認した。
−ＰＣＲによりクローン化した。イヌＩｇＧの定常ドメインの配列に準じたＰＣ
Ｒプライマーを、イムノグロブリンの定常ドメインをコードしているｍＲＮＡの
逆転写およびＰＣＲ増幅に用いた（Ｍａｅｄａらにより、米国特許第５５９３８
６１号に開示）。ＰＣＲ反応条件は前記した通りであった。ＰＣＲ産生物をクロ
ーン化し、ＤＮＡ配列分析を行った。イムノグロブリンドメインの適当なクロー
ンを、制限酵素分析およびＤＮＡ配列分析を用いて同定した。周知のイムノグロ
ブリン遺伝子とこれらのＤＮＡ配列の比較により、それらをイヌイムノグロブリ
ンの定常ドメインに相当するとして確認した。
【００２８】実施例ＩＩＩ
：マウス／イヌキメラ１５Ａ．２の全長のクローニング
キメラモノクローナル抗体の調製のための慣用法を、マウス／イヌキメラ１５
Ａ．２モノクローナル抗体遺伝子の全長を構築するために用いた。マウス１５Ａ
．２可変領域をコードしている配列および適当なイヌ定常領域をコードしている
配列をＰＣＲであわせてクローニングした。ＤＮＡ配列分析によるキメラ遺伝子
の検証後、適当なマウス／イヌキメラ１５Ａ．２短鎖遺伝子およびマウス／イヌ
１５Ａ．２長鎖遺伝子を、キメラタンパク質の発現およびタンパク質産生のため
に選択した。
Ａ．２モノクローナル抗体遺伝子の全長を構築するために用いた。マウス１５Ａ
．２可変領域をコードしている配列および適当なイヌ定常領域をコードしている
配列をＰＣＲであわせてクローニングした。ＤＮＡ配列分析によるキメラ遺伝子
の検証後、適当なマウス／イヌキメラ１５Ａ．２短鎖遺伝子およびマウス／イヌ
１５Ａ．２長鎖遺伝子を、キメラタンパク質の発現およびタンパク質産生のため
に選択した。
【００２９】
機能的クローンの同定
１５Ａ．２キメラ長および短鎖の機能的クローンをＣＯＳ細胞一過的発現系を
用いて同定した。全長長鎖および全長短鎖をｐｃＤＮＡ３．１ベクター（インビ
トロゲン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、カールスバッド、ＣＡ）上のＣＭＶプロモ
ーターの正しい方向にて下流にクローニングした。タンパク質上のイムノグロブ
リンのリーダーシグナルは、細胞から培地上清中にタンパク質を分泌させる。両
方のＤＮＡをＣＯＳ細胞に同時にトランスフェクションさせることにより、細胞
中の機能的キメラ抗体の一過的遺伝子発現、タンパク質産生および集合が認めら
れた。ＩｇＥ結合エライザおよび抗イヌＩｇＧエライザを、細胞培地上清中の機
能的抗体活性を検出するために用いた。最もよい結合活性を与えるクローンを、
バキュロウィルス発現系においてキメラモノクローナル抗体産生用ベクターを構
築するために用いた。長鎖および短鎖両方の配列を以下に示す：
用いて同定した。全長長鎖および全長短鎖をｐｃＤＮＡ３．１ベクター（インビ
トロゲン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、カールスバッド、ＣＡ）上のＣＭＶプロモ
ーターの正しい方向にて下流にクローニングした。タンパク質上のイムノグロブ
リンのリーダーシグナルは、細胞から培地上清中にタンパク質を分泌させる。両
方のＤＮＡをＣＯＳ細胞に同時にトランスフェクションさせることにより、細胞
中の機能的キメラ抗体の一過的遺伝子発現、タンパク質産生および集合が認めら
れた。ＩｇＥ結合エライザおよび抗イヌＩｇＧエライザを、細胞培地上清中の機
能的抗体活性を検出するために用いた。最もよい結合活性を与えるクローンを、
バキュロウィルス発現系においてキメラモノクローナル抗体産生用ベクターを構
築するために用いた。長鎖および短鎖両方の配列を以下に示す：
【００３０】
キメラ１５Ａ．２長鎖ＤＮＡ配列（配列番号３）
ＡＴＧＡＡＡＴＧＧＡ ＧＣＴＧＧＧＴＴＴＴ ＴＣＴＣＴＴＴＣＴＣ
ＣＴＧＴＣＡＧＴＡＡ ＣＴＧＣＧＧＧＴＧＴ ＧＴＴＣＴＣＴＧＡＧ
ＧＴＴＣＡＧＣＴＧＣ ＡＧＣＡＧＴＣＴＧＧ ＡＣＣＴＧＡＧＣＴＧ
ＧＴＧＡＡＧＣＣＴＧ ＧＧＧＣＴＴＣＡＧＴ ＧＡＡＧＡＴＡＴＣＣ
ＴＧＣＡＡＧＧＣＴＴ ＣＴＧＧＴＴＡＣＴＣ ＡＴＴＴＡＣＴＧＡＣ
ＴＡＣＴＴＴＡＴＧＡ ＡＣＴＧＧＧＴＧＡＴ ＧＣＡＧＡＧＣＣＡＴ
ＧＧＡＡＡＧＡＧＣＣ ＴＴＧＡＧＴＧＧＡＴ ＴＧＧＴＣＧＴＡＴＴ
ＡＡＴＣＣＴＴＴＣＡ ＡＴＧＧＴＧＡＴＣＣ ＴＴＴＣＴＡＣＡＡＣ
ＣＡＧＡＡＧＴＴＣＡ ＡＧＧＧＣＡＡＧＧＣ ＣＡＣＡＴＴＧＡＣＴ
ＧＴＡＧＡＣＡＡＡＴ ＣＣＴＣＴＡＧＣＡＣ ＡＧＣＣＣＡＣＡＴＧ
ＧＡＧＣＴＣＣＧＧＡ ＧＣＣＴＧＧＣＡＴＣ ＴＧＡＧＧＡＣＴＣＴ
ＧＣＡＧＴＣＴＡＴＴ ＡＴＴＧＴＧＣＡＡＧ ＡＴＴＣＴＡＣＴＡＣ
ＧＧＡＣＧＴＴＡＣＴ ＡＴＧＣＴＡＴＧＧＡ ＣＴＡＣＴＧＧＧＧＴ
ＣＡＡＧＧＡＡＣＣＴ ＣＡＧＴＣＡＣＣＧＴ ＣＴＣＣＴＣＡＧＣＣ
ＴＣＣＡＣＣＡＣＧＧ ＣＣＣＣＣＴＣＧＧＴ ＴＴＴＣＣＣＡＣＴＧ
ＧＡＣＣＣＣＡＧＣＴ ＧＣＧＧＧＴＣＣＡＣ ＴＴＣＣＧＧＣＴＣＣ
ＡＣＧＧＴＧＧＣＣＣ ＴＧＧＣＣＴＧＣＣＴ ＧＧＴＧＴＣＡＧＧＣ
ＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧ ＡＧＣＣＴＧＴＡＡＣ ＴＧＴＧＴＣＣＴＧＧ
ＡＡＴＴＣＣＧＧＣＴ ＣＣＴＴＧＡＣＣＡＧ ＣＧＧＴＧＴＧＣＡＣ
ＡＣＣＴＴＣＣＣＧＴ ＣＣＧＡＣＣＴＧＣＡ ＧＴＣＣＴＣＡＧＧＧ
ＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣ ＴＣＡＧＣＡＧＣＡＴ ＧＧＴＧＡＣＡＧＴＧ
ＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡ ＧＧＴＧＧＴＣＣＡＧ ＣＧＡＧＡＣＣＴＴＣ
ＡＣＣＴＧＣＡＡＣＧ ＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣ ＧＧＣＣＡＧＣＡＡＡ
ＡＣＴＡＡＡＧＴＡＧ ＡＣＡＡＧＣＣＡＧＴ ＧＣＣＣＡＡＡＡＧＡ
ＧＡＡＡＡＴＧＧＡＡ ＧＡＧＴＴＣＣＴＣＧ ＣＣＣＡＣＣＴＧＡＴ
ＴＧＴＣＣＣＡＡＡＴ ＧＣＣＣＡＧＣＣＣＣ ＴＧＡＡＡＴＧＣＴＧ
ＧＧＡＧＧＧＣＣＴＴ ＣＧＧＴＣＴＴＣＡＴ ＣＴＴＴＣＣＣＣＣＧ
ＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧ ＡＣＡＣＣＣＴＣＴＴ ＧＡＴＴＧＣＣＣＧＡ
ＡＣＡＣＣＴＧＡＧＧ ＴＣＡＣＡＴＧＴＧＴ ＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴ
ＣＴＧＧＧＡＣＣＡＧ ＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡ ＧＧＴＧＣＡＧＡＴＣ
ＡＧＣＴＧＧＴＴＣＧ ＴＧＧＡＣＧＧＴＡＡ ＧＣＡＧＡＴＧＣＡＡ
ＡＣＡＧＣＣＡＡＧＡ ＣＴＣＡＧＣＣＴＣＧ ＴＧＡＧＧＡＧＣＡＧ
ＴＴＣＡＡＴＧＧＣＡ ＣＣＴＡＣＣＧＴＧＴ ＧＧＴＣＡＧＴＧＴＣ
ＣＴＣＣＣＣＡＴＴＧ ＧＧＣＡＣＣＡＧＧＡ ＣＴＧＧＣＴＣＡＡＧ
ＧＧＧＡＡＧＣＡＧＴ ＴＣＡＣＧＴＧＣＡＡ ＡＧＴＣＡＡＣＡＡＣ
ＡＡＡＧＣＣＣＴＣＣ ＣＡＴＣＣＣＣＧＡＴ ＣＧＡＧＡＧＧＡＣＣ
ＡＴＣＴＣＣＡＡＧＧ ＣＣＡＧＡＧＧＧＣＡ ＧＧＣＣＣＡＴＣＡＧ
ＣＣＣＡＧＴＧＴＧＴ ＡＴＧＴＣＣＴＧＣＣ ＧＣＣＡＴＣＣＣＧＧ
ＧＡＧＧＡＧＴＴＧＡ ＧＣＡＡＧＡＡＣＡＣ ＡＧＴＣＡＧＣＴＴＧ
ＡＣＡＴＧＣＣＴＧＡ ＴＣＡＡＡＧＡＣＴＴ ＣＴＴＣＣＣＡＣＣＴ
ＧＡＣＡＴＴＧＡＴＧ ＴＧＧＡＧＴＧＧＣＡ ＧＡＧＣＡＡＴＧＧＡ
ＣＡＧＣＡＧＧＡＧＣ ＣＴＧＡＧＡＧＣＡＡ ＧＴＡＣＣＧＣＡＣＧ
ＡＣＣＣＣＧＣＣＣＣ ＡＧＣＴＧＧＡＣＧＡ ＧＧＡＣＧＧＧＴＣＣ
ＴＡＣＴＴＣＣＴＧＴ ＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴ ＣＴＣＴＧＴＧＧＡＣ
ＡＡＧＡＧＣＣＧＣＴ ＧＧＣＡＧＣＧＧＧＧ ＡＧＡＣＡＣＣＴＴＣ
ＡＴＡＴＧＴＧＣＧＧ ＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡ ＡＧＣＴＣＴＡＣＡＣ
ＣＡＣＡＧＡＡＡＴＣ ＣＣＴＣＴＣＣＣＡＴ ＴＣＴＣＣＧＧＧＴＡ
ＡＡＴＧＡ
【００３１】
キメラ１５Ａ．２短鎖ＤＮＡ配列（配列番号４）
ＡＴＧＧＣＣＴＧＧＡ ＴＴＴＣＡＣＴＣＴＴ ＡＴＴＣＴＣＴＣＴＣ
ＣＴＧＧＣＴＣＴＣＡ ＧＣＴＣＡＧＧＧＧＣ ＣＡＴＴＴＣＣＣＡＧ
ＧＣＴＧＴＴＧＴＧＡ ＣＴＣＡＧＧＡＡＴＣ ＴＧＣＡＣＴＣＡＣＣ
ＡＣＡＴＣＡＣＣＴＧ ＧＴＧＡＡＡＣＡＧＴ ＣＡＣＡＣＴＣＡＣＴ
ＴＧＴＣＧＣＴＣＡＡ ＧＴＡＣＴＧＧＧＧＣ ＴＧＴＴＡＣＡＡＣＴ
ＡＧＴＡＡＣＴＡＴＧ ＣＣＡＡＣＴＧＧＧＴ ＣＣＡＡＧＡＡＡＡＡ
ＣＣＡＧＡＴＣＡＴＴ ＴＡＴＴＣＡＣＴＧＧ ＴＣＴＡＡＴＡＧＧＴ
ＧＧＴＣＣＣＡＡＣＡ ＡＣＣＧＡＧＣＴＣＣ ＡＧＧＴＧＴＴＣＣＴ
ＧＣＣＡＧＡＴＴＣＴ ＣＡＧＧＣＴＣＣＣＴ ＧＡＴＴＧＧＡＧＡＣ
ＡＡＧＧＣＴＧＣＣＣ ＴＣＡＣＣＡＴＣＡＣ ＡＧＧＧＧＣＡＣＡＧ
ＡＣＴＧＡＧＧＡＴＧ ＡＧＧＣＡＡＴＡＴＡ ＴＴＴＣＴＧＴＧＣＴ
ＣＴＡＴＧＧＴＡＣＡ ＧＣＡＡＣＣＡＴＴＧ ＧＧＴＧＴＴＣＧＧＴ
ＧＧＡＧＧＡＡＣＣＡ ＡＡＣＴＧＡＣＴＧＴ ＣＣＴＡＧＧＣＣＡＧ
ＣＣＣＡＡＧＧＣＣＴ ＣＣＣＣＣＴＣＧＧＴ ＣＡＣＡＣＴＣＴＴＣ
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【００３２】実施例ＩＶ
：昆虫細胞におけるキメラ１５Ａ．２の発現
キメラ１５Ａ．２マウス/イヌモノクローナル抗体をより大規模に産生するた
めに、バキュロウィルス発現系を用いた。バキュロウィルス発現は一般的な操作
であって、該方法は当業者において周知である。１５Ａ．２長鎖ＤＮＡを、ファ
ーミンゲン社（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）（サンディエゴ、ＣＡ）のバキュロウィ
ルスに組換えるためのｐＡｃ ＬＩＣバキュロウィルストランスファーベクター
中にクローン化した。キメラ１５Ａ．２短鎖ＤＮＡを、ファーミンゲン社のバキ
ュロウィルスに組換えるためのｐＡｃＨｉｓ ＮＴ−Ａ（商標登録）バキュロウ
ィルス輸送ベクター中にクローン化した。両方のウィルス構築物の組換え体およ
び増幅物を昆虫ｓｆ−９細胞中で増幅した。キメラ１５Ａ．２を昆虫Ｈｉｇｈ
Ｆｉｖｅ細胞を用いて発現させた。感染条件は以下の通りであった： 感染用Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ細胞密度： １．５ｘ１０６／ｍｌ 長鎖ウィルス感染用ＭＯＩ： １０ 短鎖ウィルス感染用ＭＯＩ： ３ タンパク質発現の時間： ７２時間 １５Ａ．２を細胞培地中で発現および分泌させた。
めに、バキュロウィルス発現系を用いた。バキュロウィルス発現は一般的な操作
であって、該方法は当業者において周知である。１５Ａ．２長鎖ＤＮＡを、ファ
ーミンゲン社（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）（サンディエゴ、ＣＡ）のバキュロウィ
ルスに組換えるためのｐＡｃ ＬＩＣバキュロウィルストランスファーベクター
中にクローン化した。キメラ１５Ａ．２短鎖ＤＮＡを、ファーミンゲン社のバキ
ュロウィルスに組換えるためのｐＡｃＨｉｓ ＮＴ−Ａ（商標登録）バキュロウ
ィルス輸送ベクター中にクローン化した。両方のウィルス構築物の組換え体およ
び増幅物を昆虫ｓｆ−９細胞中で増幅した。キメラ１５Ａ．２を昆虫Ｈｉｇｈ
Ｆｉｖｅ細胞を用いて発現させた。感染条件は以下の通りであった： 感染用Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ細胞密度： １．５ｘ１０６／ｍｌ 長鎖ウィルス感染用ＭＯＩ： １０ 短鎖ウィルス感染用ＭＯＩ： ３ タンパク質発現の時間： ７２時間 １５Ａ．２を細胞培地中で発現および分泌させた。
【００３３】
キメラ１５Ａ．２タンパク質の精製
一般的な精製スキームは以下の通りである：
１．細胞浄化：
１５Ａ．２タンパク質を含む細胞培地上清を、感染後７２時間で回収した。該
上清をミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）（ベッドフォード、ＭＡ）の細胞浄化用
のミリガード（ＭＩＬＬＩＧＵＡＲＤ）（商標登録）カートリッジ濾過システム
を通して濾過した。また、０．２μｍの孔の大きさを有し、低タンパク質吸着の
高い処理能力のフィルターであって、高圧力に耐えることができる別の濾過シス
テムも適当であろう。次いで、不純物を除去した上清をカラムクロマトグラフィ
ーで濃縮した。
上清をミリポア（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）（ベッドフォード、ＭＡ）の細胞浄化用
のミリガード（ＭＩＬＬＩＧＵＡＲＤ）（商標登録）カートリッジ濾過システム
を通して濾過した。また、０．２μｍの孔の大きさを有し、低タンパク質吸着の
高い処理能力のフィルターであって、高圧力に耐えることができる別の濾過シス
テムも適当であろう。次いで、不純物を除去した上清をカラムクロマトグラフィ
ーで濃縮した。
【００３４】
２．タンパク質Ａのカラムクロマトグラフィー：
濃縮した試料を、ＰＢＳ緩衝液で平衡にしたタンパク質Ａカラムに装填した。
１５Ａ．２タンパク質を４％グリセロール、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）および４％グ
リセロール、２５ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）を混合すること
により得られたｐＨ勾配液により溶出させた。該タンパク質は約ｐＨ４で溶出し
た。
１５Ａ．２タンパク質を４％グリセロール、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）および４％グ
リセロール、２５ｍＭクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ２．５）を混合すること
により得られたｐＨ勾配液により溶出させた。該タンパク質は約ｐＨ４で溶出し
た。
【００３５】
３．イオン交換カラムクロマトグラフィー：
タンパク質Ａで精製した１５Ａ．２を、４％グリセロール、ＰＢＳ（ｐＨ７．
２）で平衡にしたＱセファロース（商標登録）（ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃ
ｉａ）、ウプサラ、スウェーデン）カラムに装填し、混入したタンパク質、ＤＮ
Ａ、ＲＮＡ、ウィルスなどを除去した。また、精製したタンパク質からＤＮＡ、
ＲＮＡ、エンドトキシンおよび別の負に帯電した物質を除去する類似のイオン交
換樹脂を利用してもよい。流出物を回収した。 ４．滅菌： Ｑを流出した１５Ａ．２を濃縮し、０．２μｍのフィルターを通して濾過する
ことにより滅菌した。最終的な緩衝液の成分は以下の通りである： ０．７ｘＰＢＳ ６．５ｍＭクエン酸ナトリウム ４％グリセロール ｐＨ：約７．０ 該タンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥタンパク質ゲルにより示されるように、少
なくとも９５％の純度を有し、将来使用するために−８０℃で保管した。
２）で平衡にしたＱセファロース（商標登録）（ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃ
ｉａ）、ウプサラ、スウェーデン）カラムに装填し、混入したタンパク質、ＤＮ
Ａ、ＲＮＡ、ウィルスなどを除去した。また、精製したタンパク質からＤＮＡ、
ＲＮＡ、エンドトキシンおよび別の負に帯電した物質を除去する類似のイオン交
換樹脂を利用してもよい。流出物を回収した。 ４．滅菌： Ｑを流出した１５Ａ．２を濃縮し、０．２μｍのフィルターを通して濾過する
ことにより滅菌した。最終的な緩衝液の成分は以下の通りである： ０．７ｘＰＢＳ ６．５ｍＭクエン酸ナトリウム ４％グリセロール ｐＨ：約７．０ 該タンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥタンパク質ゲルにより示されるように、少
なくとも９５％の純度を有し、将来使用するために−８０℃で保管した。
【００３６】実施例Ｖ
：組換えイヌ抗−ＩｇＥｍＡｂ（ｃ１５Ａ．２）：インビトロおよびイ
ンビボのＩｇＥ活性の効果 実施例ＩＶで得た精製したｃ１５Ａ．２を、インビトロでのイヌＩｇＥ受容体
へのイヌＩｇＥの結合能力について試験を行った（図１）。２００２、２００３
および２１０３で示される３匹のイヌの血清中のＩｇＥを中和するために必要な
ｃ１５Ａ．２の量を血清中和アッセイにより調べ、それを図８に示す。４０日の
実験期間での時間経過および事象を図２ａおよび２ｂにまとめる。イヌをラブレ
ース・レスピレイトリー・リサーチ・インスティテュート（Ｌｏｖａｌａｃｅ
Ｒｅｐｉｒａｔｏｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（アウバカー
キ、ＮＭ）産のブタクサに感作させ、その効能をアレルゲンの投与後に皮下皮膚
反応を生じるイヌの能力により評価して試験する実験に用いた。 ｃ１５Ａ．２をイヌ２００２、２００３および２１０３に５日おきに８回連続
して投与した。最初の処置でのｃ１５Ａ．２の投与量は、投与を開始する３日前
に測定した遊離した血清ＩｇＥ濃度の１０倍の濃度に相当していた。１および２
回の投与は遊離した血清ＩｇＥ濃度の１０倍を与えた。後のすべての投与は遊離
した血清ＩｇＥ濃度の５倍とした。３０分間にわたって静脈内注入することによ
り、１０倍または５倍の血清ＩｇＥ濃度をデリバリーするために必要な濃度に、
試験物質を滅菌ＰＢＳで希釈した。
ンビボのＩｇＥ活性の効果 実施例ＩＶで得た精製したｃ１５Ａ．２を、インビトロでのイヌＩｇＥ受容体
へのイヌＩｇＥの結合能力について試験を行った（図１）。２００２、２００３
および２１０３で示される３匹のイヌの血清中のＩｇＥを中和するために必要な
ｃ１５Ａ．２の量を血清中和アッセイにより調べ、それを図８に示す。４０日の
実験期間での時間経過および事象を図２ａおよび２ｂにまとめる。イヌをラブレ
ース・レスピレイトリー・リサーチ・インスティテュート（Ｌｏｖａｌａｃｅ
Ｒｅｐｉｒａｔｏｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）（アウバカー
キ、ＮＭ）産のブタクサに感作させ、その効能をアレルゲンの投与後に皮下皮膚
反応を生じるイヌの能力により評価して試験する実験に用いた。 ｃ１５Ａ．２をイヌ２００２、２００３および２１０３に５日おきに８回連続
して投与した。最初の処置でのｃ１５Ａ．２の投与量は、投与を開始する３日前
に測定した遊離した血清ＩｇＥ濃度の１０倍の濃度に相当していた。１および２
回の投与は遊離した血清ＩｇＥ濃度の１０倍を与えた。後のすべての投与は遊離
した血清ＩｇＥ濃度の５倍とした。３０分間にわたって静脈内注入することによ
り、１０倍または５倍の血清ＩｇＥ濃度をデリバリーするために必要な濃度に、
試験物質を滅菌ＰＢＳで希釈した。
【００３７】
図２ａは、ｃ１５Ａ．２ｍＡｂの投与量に基づく、各々のイヌにおける時間に
対する遊離および全血清ＩｇＥのレベルを示す。次いで、付加的なｃ１５Ａ．２
を５日おきに合計して４０日間連続して投与した。血清ＩｇＥレベルを当業者に
より周知である標準的なエライザ法によりアッセイする。ＩｇＥレベルが約１ｎ
ｇ／ｍｌ以下では、一般的にエライザ法で検出されないと考えられている。 図２ａはまた、実験用イヌにおける遊離したＩｇＥが６０分以内で検出されな
いレベルにまで低下し、４０日の処理期間の間に戻らなかったことを示す。生理
食塩水を与えただけの対照イヌ１１０１および１１０２における遊離した血清Ｉ
ｇＥのレベルはこの期間の間著しく変化しなかった（図２ｂ）。これらの実験に
おいて使用したアッセイは、マウスｃ１５Ａ．２抗体でのエライザ固相捕捉、イ
ヌＩｇＥのエキソン４を認識する別のＨＲＰＯ接合ｍＡｂである１４Ｋ．２での
検出からなる。該アッセイはｃ１５Ａ．２に結合しないすべての血清ＩｇＥを検
出する。
対する遊離および全血清ＩｇＥのレベルを示す。次いで、付加的なｃ１５Ａ．２
を５日おきに合計して４０日間連続して投与した。血清ＩｇＥレベルを当業者に
より周知である標準的なエライザ法によりアッセイする。ＩｇＥレベルが約１ｎ
ｇ／ｍｌ以下では、一般的にエライザ法で検出されないと考えられている。 図２ａはまた、実験用イヌにおける遊離したＩｇＥが６０分以内で検出されな
いレベルにまで低下し、４０日の処理期間の間に戻らなかったことを示す。生理
食塩水を与えただけの対照イヌ１１０１および１１０２における遊離した血清Ｉ
ｇＥのレベルはこの期間の間著しく変化しなかった（図２ｂ）。これらの実験に
おいて使用したアッセイは、マウスｃ１５Ａ．２抗体でのエライザ固相捕捉、イ
ヌＩｇＥのエキソン４を認識する別のＨＲＰＯ接合ｍＡｂである１４Ｋ．２での
検出からなる。該アッセイはｃ１５Ａ．２に結合しないすべての血清ＩｇＥを検
出する。
【００３８】
ｃ１５Ａ．２と結合した全ＩｇＥは、おそらく、再循環するためそのＩｇＥは
実験用イヌにおける遊離したＩｇＥよりゆっくり低下し、結局は循環から一掃さ
れる。ここで使用したアッセイはｍＡｂ１４Ｋ．２でのエライザ捕捉およびｃ１
５Ａ．２に結合することを阻害しない別の抗イヌＩｇＥｍＡｂでの検出からなる
。イヌ２００３および２１０３において、遊離および全血清ＩｇＥは、組換え抗
体の最終投与後、６０日間以上アッセイで検出されないままである。イヌ２００
２において、キメラ抗体の投与を中断した後３０日で、遊離した血清ＩｇＥは約
２００ｎｇ／ｍｌで検出することができ、観測の残りの３０日間このレベルを保
ったままであった。
実験用イヌにおける遊離したＩｇＥよりゆっくり低下し、結局は循環から一掃さ
れる。ここで使用したアッセイはｍＡｂ１４Ｋ．２でのエライザ捕捉およびｃ１
５Ａ．２に結合することを阻害しない別の抗イヌＩｇＥｍＡｂでの検出からなる
。イヌ２００３および２１０３において、遊離および全血清ＩｇＥは、組換え抗
体の最終投与後、６０日間以上アッセイで検出されないままである。イヌ２００
２において、キメラ抗体の投与を中断した後３０日で、遊離した血清ＩｇＥは約
２００ｎｇ／ｍｌで検出することができ、観測の残りの３０日間このレベルを保
ったままであった。
【００３９】
これらのデータは、本発明の組換え抗体の、（１）血清中に循環しているＩｇ
Ｅを一掃すること；および（２）ＩｇＥを補充する過程に影響を及ぼす方法を示
すこと、における効果を示す。これらの結果から、血清ＩｇＥが短い半減期、お
そらく、約２日のオーダーの半減期を有することがわかり、組換え体またはキメ
ラ分子も同様にインビボで相対的に短い半減期を示していてもよいという意外な
ものである。処置していない動物において、循環している血清ＩｇＥは４ないし
５日おきに完全に補充されると考えられており、さらに、本発明のイヌ抗−Ｉｇ
ＥｍＡｂ１５Ａ．２の投与後、血清ＩｇＥレベルは、キメラ抗体の投与後１８日
で検出したレベル未満に抑えられたままであった。
Ｅを一掃すること；および（２）ＩｇＥを補充する過程に影響を及ぼす方法を示
すこと、における効果を示す。これらの結果から、血清ＩｇＥが短い半減期、お
そらく、約２日のオーダーの半減期を有することがわかり、組換え体またはキメ
ラ分子も同様にインビボで相対的に短い半減期を示していてもよいという意外な
ものである。処置していない動物において、循環している血清ＩｇＥは４ないし
５日おきに完全に補充されると考えられており、さらに、本発明のイヌ抗−Ｉｇ
ＥｍＡｂ１５Ａ．２の投与後、血清ＩｇＥレベルは、キメラ抗体の投与後１８日
で検出したレベル未満に抑えられたままであった。
【００４０】実施例ＶＩ
：ｃ１５Ａ．２の浄化値
イヌ２００２、２００３および２１０３の血清における本発明の遊離したキメ
ラ１５Ａ．２の存在を、ポリクロナールヤギ抗イヌＩｇＧ接合体により検出する
組換えイヌＩｇＥ固相を用いてエライザにより調べた。図３は、血清中のｃ１５
Ａ．２レベルが、投与の周期の各々の５日間の最初と最後に常に、上昇および下
降することを示す。遊離したｃ１５Ａ．２は、注入後２４日の実験用イヌ血清に
おいてまだ検出可能（Ｘμｇ／ｍｌ）である。 ｃ１５Ａ．２およびイヌＩｇＥの免疫複合体を、１４Ｋ．２固相のエライザに
より測定し、ポリクロナール抗−イヌＩｇＧｆｃ接合体により検出した。図４に
要約したこれらのデータは、複合したＩｇＥは、処置の早い時期では高い濃度で
検出されるが、複合体レベルはやがて経時的に下降することを示す。２８日まで
は、ｃ１５Ａ．２を与えたイヌにおいて免疫複合体は検出されない。この結果は
、該複合体が血清イムノグロブリンの循環しているプールから一掃され、この時
間枠において新しいＩｇＥの合成が減少し、排除されていることを示唆する。対
照イヌでは変化は観察されなかった。イヌ２００３および２１０３において、キ
メラモノクローナル抗体ｃ１５Ａ．２に対する免疫反応は観察されなかった。第
一の注入後２８日で、イヌ２００２において試験物質に対する免疫反応が観察さ
れた。図５に示すデータは、より多くのキメラ１５Ａ．２を投与すると、この反
応が増大し、イヌ２００２におけるｃ１５Ａ．２のより短い血清中半減期で一定
の役割を果たしうる（図３）ことを示す。
ラ１５Ａ．２の存在を、ポリクロナールヤギ抗イヌＩｇＧ接合体により検出する
組換えイヌＩｇＥ固相を用いてエライザにより調べた。図３は、血清中のｃ１５
Ａ．２レベルが、投与の周期の各々の５日間の最初と最後に常に、上昇および下
降することを示す。遊離したｃ１５Ａ．２は、注入後２４日の実験用イヌ血清に
おいてまだ検出可能（Ｘμｇ／ｍｌ）である。 ｃ１５Ａ．２およびイヌＩｇＥの免疫複合体を、１４Ｋ．２固相のエライザに
より測定し、ポリクロナール抗−イヌＩｇＧｆｃ接合体により検出した。図４に
要約したこれらのデータは、複合したＩｇＥは、処置の早い時期では高い濃度で
検出されるが、複合体レベルはやがて経時的に下降することを示す。２８日まで
は、ｃ１５Ａ．２を与えたイヌにおいて免疫複合体は検出されない。この結果は
、該複合体が血清イムノグロブリンの循環しているプールから一掃され、この時
間枠において新しいＩｇＥの合成が減少し、排除されていることを示唆する。対
照イヌでは変化は観察されなかった。イヌ２００３および２１０３において、キ
メラモノクローナル抗体ｃ１５Ａ．２に対する免疫反応は観察されなかった。第
一の注入後２８日で、イヌ２００２において試験物質に対する免疫反応が観察さ
れた。図５に示すデータは、より多くのキメラ１５Ａ．２を投与すると、この反
応が増大し、イヌ２００２におけるｃ１５Ａ．２のより短い血清中半減期で一定
の役割を果たしうる（図３）ことを示す。
【００４１】実施例ＶＩＩ
：イヌ抗−ＩｇＥｍＡｂ１５Ａ．２（ｃ１５Ａ．２）の投与による
好塩基球上の高アフィニティーＩｇＥ受容体の発現のレベルへの効果 ｃ１５Ａ．２投与開始後の５日、１４日、および２９日に、１０ｍｌの全血を
摂取した。末梢血の白血球の半精製個体群を密度勾配遠心分離により調製し、２
次元フローサイトメトリー解析用試薬で染色した。これらの実験において用いた
試薬はＦＩＴＣ接合、抗イヌ高アフィニティーＩｇＥ受容体ｍＡｂ９Ｌ．４およ
びＰＥ接合１４Ｋ．２であった。これらの抗体用に２重染色し、図６のドットブ
ロット図の４つの象限（右上が第１象限）中にある細胞種は好塩基球である。 図６のデータはイヌ２００２のものであって、代表例である。象限中の２重染
色した細胞の数はｃ１５Ａ．２の投与と経時的に減少する。該データは、好塩基
球における高アフィニティーＩｇＥ受容体の発現レベルが実験用イヌ２００２へ
のｃ１５Ａ．２の投与から２９日後には９０％以上減少することを示唆する。経
時的に血清ＩｇＥの排除が好塩基球上のＩｇＥ用受容体の発現の減少をもたらし
、皮膚肥満細胞においても同様の反応を反映するかもしれない。高アフィニティ
ーＩｇＥ受容体の肥満細胞での発現の減少はアレルゲンに対する皮膚試験の反応
性の減少または排除をもたらすであろう。
好塩基球上の高アフィニティーＩｇＥ受容体の発現のレベルへの効果 ｃ１５Ａ．２投与開始後の５日、１４日、および２９日に、１０ｍｌの全血を
摂取した。末梢血の白血球の半精製個体群を密度勾配遠心分離により調製し、２
次元フローサイトメトリー解析用試薬で染色した。これらの実験において用いた
試薬はＦＩＴＣ接合、抗イヌ高アフィニティーＩｇＥ受容体ｍＡｂ９Ｌ．４およ
びＰＥ接合１４Ｋ．２であった。これらの抗体用に２重染色し、図６のドットブ
ロット図の４つの象限（右上が第１象限）中にある細胞種は好塩基球である。 図６のデータはイヌ２００２のものであって、代表例である。象限中の２重染
色した細胞の数はｃ１５Ａ．２の投与と経時的に減少する。該データは、好塩基
球における高アフィニティーＩｇＥ受容体の発現レベルが実験用イヌ２００２へ
のｃ１５Ａ．２の投与から２９日後には９０％以上減少することを示唆する。経
時的に血清ＩｇＥの排除が好塩基球上のＩｇＥ用受容体の発現の減少をもたらし
、皮膚肥満細胞においても同様の反応を反映するかもしれない。高アフィニティ
ーＩｇＥ受容体の肥満細胞での発現の減少はアレルゲンに対する皮膚試験の反応
性の減少または排除をもたらすであろう。
【００４２】実施例ＶＩＩＩ
：イヌ抗−ＩｇＥｍＡｂ１５Ａ．２を投与したブタクサ皮膚試験
反応性に対する効果 ブタクサに感作したイヌにエバンスブルー色素のＰＢＳ中０．５％溶液を０．
２ｍｌ／ｋｇで注入し、次いで、１０分後にアレルゲンで攻撃した。１０００Ｐ
ＭＵ／ｍｌで開始するＰＢＳ中のブタクサアレルゲンの５回連続して１０倍に希
釈したものを調製し、胴体の毛をそった部分に１００μｌ皮下注入した。生理食
塩水（ＰＢＳ）は負の対照として供し、ヒスタミン（ＰＢＳ中０．２７５μｇ／
ｍｌのヒスタミン希釈体１００μｌ）は正の対照として供した。反応性を１０分
後に測定し、皮膚における腫れおよび青色素の拡散をヒスタミンの対照と比較し
た。２の評価は該反応がヒスタミン反応に対する大きさおよび色に相当するアレ
ルゲン希釈体に与えた。１の評価はヒスタミン対照の半分であった反応に与え、
０の評価は反応が負の対照である生理食塩水に相当した場合に与えた。２００２
、２００３および２１０３の３つの実験用イヌおよび１１０１および１１０２の
２つの対照イヌを、c１５Ａ．２を投与する一週間前、次いで、最終投与から３
日および７日後に前記した通りに皮膚試験行った。図７は、対照イヌにおいてブ
タクサアレルゲンに対する皮膚反応が研究を通して一様であったことを示す。対
照イヌ１１０２において、ブタクサ皮膚反応は実際のところ経時的に増加した。
実験用イヌ２００３および２１０３において、ｃ１５Ａ．２の投与後４０日間で
ブタクサ感作は少なくとも７日間完全になくなった。イヌ２００２だけが、注入
後３日目に最も高いブタクサ濃度でのブタクサ感作を示し、反応は色素の拡散か
ら１の評価を得た。対照イヌを観察および記録した評価１においてみられた特徴
的な腫れを有するわけではなかった。イヌ２００２に注入後７日で、１の反応評
価を１０００ＰＭＵ／ｍｌ、１００ＰＭＵ／ｍｌおよび１０ＰＭＵ／ｍｌのスポ
ットに与えた。腫れることなく色の拡散のみあった。イヌ２００２において、こ
の皮膚試験期間で検出できない遊離または全ＩｇＥがあるという事実が得られた
ならば、観察された皮膚反応は肥満細胞上の高アフィニティーＩｇＥ受容体とＩ
ｇＥとの架橋によるものではないと思われる。これらを試験手順に伴う別の皮膚
反応の結果としてもよい。
反応性に対する効果 ブタクサに感作したイヌにエバンスブルー色素のＰＢＳ中０．５％溶液を０．
２ｍｌ／ｋｇで注入し、次いで、１０分後にアレルゲンで攻撃した。１０００Ｐ
ＭＵ／ｍｌで開始するＰＢＳ中のブタクサアレルゲンの５回連続して１０倍に希
釈したものを調製し、胴体の毛をそった部分に１００μｌ皮下注入した。生理食
塩水（ＰＢＳ）は負の対照として供し、ヒスタミン（ＰＢＳ中０．２７５μｇ／
ｍｌのヒスタミン希釈体１００μｌ）は正の対照として供した。反応性を１０分
後に測定し、皮膚における腫れおよび青色素の拡散をヒスタミンの対照と比較し
た。２の評価は該反応がヒスタミン反応に対する大きさおよび色に相当するアレ
ルゲン希釈体に与えた。１の評価はヒスタミン対照の半分であった反応に与え、
０の評価は反応が負の対照である生理食塩水に相当した場合に与えた。２００２
、２００３および２１０３の３つの実験用イヌおよび１１０１および１１０２の
２つの対照イヌを、c１５Ａ．２を投与する一週間前、次いで、最終投与から３
日および７日後に前記した通りに皮膚試験行った。図７は、対照イヌにおいてブ
タクサアレルゲンに対する皮膚反応が研究を通して一様であったことを示す。対
照イヌ１１０２において、ブタクサ皮膚反応は実際のところ経時的に増加した。
実験用イヌ２００３および２１０３において、ｃ１５Ａ．２の投与後４０日間で
ブタクサ感作は少なくとも７日間完全になくなった。イヌ２００２だけが、注入
後３日目に最も高いブタクサ濃度でのブタクサ感作を示し、反応は色素の拡散か
ら１の評価を得た。対照イヌを観察および記録した評価１においてみられた特徴
的な腫れを有するわけではなかった。イヌ２００２に注入後７日で、１の反応評
価を１０００ＰＭＵ／ｍｌ、１００ＰＭＵ／ｍｌおよび１０ＰＭＵ／ｍｌのスポ
ットに与えた。腫れることなく色の拡散のみあった。イヌ２００２において、こ
の皮膚試験期間で検出できない遊離または全ＩｇＥがあるという事実が得られた
ならば、観察された皮膚反応は肥満細胞上の高アフィニティーＩｇＥ受容体とＩ
ｇＥとの架橋によるものではないと思われる。これらを試験手順に伴う別の皮膚
反応の結果としてもよい。
【００４３】実施例ＩＸ
：長期血清安定性、免疫原性の喪失およびＩｇＥ＋Ｂ−細胞を標的と
するために設計したキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂ イヌの配列から選ばれた分子のかなりの部分をＩｇとして含む形態の本発明の
イヌ抗−ＩｇＥｍＡｂを提供し、それゆえ、より大きな血清安定性、免疫原性の
喪失およびより効果的にＩｇＥ＋Ｂ−細胞を標的とすることが期待できることを
、当業者は理解するであろう。 それゆえ、もう一つ別の例において、長期血清安定性およびそれに対する免疫
反応を誘発不能にするように操作されたキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂをイヌに投
与する。このｍＡｂは血清中のＩｇＥ、および肥満細胞または好塩基球上のＩｇ
Ｅではなく、ＩｇＥ産生Ｂ−細胞の表面上のＩｇＥに結合する。それゆえ、Ｉｇ
Ｅ合成は減少または排除される。結果として減じたＩｇＥレベルは肥満細胞Ｉｇ
Ｅ受容体発現の減少および伴うアレルギー反応の減少の原因となる。
するために設計したキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂ イヌの配列から選ばれた分子のかなりの部分をＩｇとして含む形態の本発明の
イヌ抗−ＩｇＥｍＡｂを提供し、それゆえ、より大きな血清安定性、免疫原性の
喪失およびより効果的にＩｇＥ＋Ｂ−細胞を標的とすることが期待できることを
、当業者は理解するであろう。 それゆえ、もう一つ別の例において、長期血清安定性およびそれに対する免疫
反応を誘発不能にするように操作されたキメライヌ抗−ＩｇＥｍＡｂをイヌに投
与する。このｍＡｂは血清中のＩｇＥ、および肥満細胞または好塩基球上のＩｇ
Ｅではなく、ＩｇＥ産生Ｂ−細胞の表面上のＩｇＥに結合する。それゆえ、Ｉｇ
Ｅ合成は減少または排除される。結果として減じたＩｇＥレベルは肥満細胞Ｉｇ
Ｅ受容体発現の減少および伴うアレルギー反応の減少の原因となる。
【００４４】実施例Ｘ
：組換えイヌＩｇＥ受容体を意味するｃＲｃＩｇの、昆虫細胞中のクロ
ーニングおよび発現 イヌＩｇＥ受容体のα−サブユニットの少なくとも一部に相当すると考えられ
ている配列が、ＧＥＮＢＡＮＫデータベースの受入番号Ｄ１６４１３に示されて
いる。 ｃＲｃＩｇ受容体は、イヌＩｇＥのエキソン２および３に架橋しているＩｇＥ
に結合する受容体のαドメインからなる。受容体のＩｇＧ長鎖部分はｃ１５Ａ．
２のエキソン２および３と同様である。 キメラＩｇＥ受容体ｃＲｃＩｇをコードしているＤＮＡを標準的な操作を用い
てバキュロウィルス遺伝子に導入した。Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ昆虫細胞菌株を、ｃ
ＲｃＩｇを産生するバキュロウィルスに感染させた。ｃＲｃＩｇタンパク質をタ
ンパク質Ａのクロマトグラフィーにより細胞培地から精製し、続いて、イオン交
換クロマトグラフィーにより混入しているタンパク質を除去した。組換えＩｇＥ
受容体であるｃＲｃＩｇのＤＮＡ配列を、対応する翻訳とともに、図１０に示す
。
ーニングおよび発現 イヌＩｇＥ受容体のα−サブユニットの少なくとも一部に相当すると考えられ
ている配列が、ＧＥＮＢＡＮＫデータベースの受入番号Ｄ１６４１３に示されて
いる。 ｃＲｃＩｇ受容体は、イヌＩｇＥのエキソン２および３に架橋しているＩｇＥ
に結合する受容体のαドメインからなる。受容体のＩｇＧ長鎖部分はｃ１５Ａ．
２のエキソン２および３と同様である。 キメラＩｇＥ受容体ｃＲｃＩｇをコードしているＤＮＡを標準的な操作を用い
てバキュロウィルス遺伝子に導入した。Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ昆虫細胞菌株を、ｃ
ＲｃＩｇを産生するバキュロウィルスに感染させた。ｃＲｃＩｇタンパク質をタ
ンパク質Ａのクロマトグラフィーにより細胞培地から精製し、続いて、イオン交
換クロマトグラフィーにより混入しているタンパク質を除去した。組換えＩｇＥ
受容体であるｃＲｃＩｇのＤＮＡ配列を、対応する翻訳とともに、図１０に示す
。
【００４５】
実験に用いたＩｇＥ受容体はｃＲｃＩｇと称される組換えキメラ受容体であり
、イヌＩｇＧ ＣＨ２およびＣＨ３ドメインに融合した可溶性高アフィニティー
ＩｇＥ受容体のαユニットからなる。膜貫通ドメインを欠く可溶性αサブユニッ
トをＧｅｎｅＢａｎｋで利用できる情報を用いてＰＣＲによりクローン化した。
ＩｇＧ ＣＨ２およびＣＨ３ドメインはＣｈｅｍｏ−Ｓｅｒｏパテントにより請
求されたＤＥ９４の配列の一部であった。可溶性受容体およびＤＥ９４ＣＨ２／
ＣＨ３をＰＣＲにより結合させ、全長ｃＲｃＩｇを形成した。 全長ｃＲｃＩｇをファーミンゲン社のバキュロウィルスｐＡｃＨｉｓＴＮＡベ
クター中にクローン化した。該ウィルスをｓｆ−９細胞を用いて増幅させた。ｃ
ＲｃＩｇタンパク質を秘密形態で産生し、４８時間、ＭＯＩ（感染の多重度）５
で、Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ細胞中で発現させた。該タンパク質をＣＨ２／ＣＨ３ド
メインのタンパク質Ａカラムへの結合に基づいて精製した。詳細な精製スキーム
は実施例ＩＶに示す１５Ａ．２のものと同様である。 精製したｃＲｃＩｇを２．９ｍｇ／ｍｌに濃縮し、０．２μｍのフィルターユ
ニットを通して濾過することにより滅菌した。最終的な緩衝液成分は以下の通り
である： ０．７ｘＰＢＳ ６．５ｍＭクエン酸ナトリウム １５％グリセロール ｐＨ：約７．０ 該タンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥタンパク質ゲルにより示されるように、少
なくとも９５％の純度を有し、将来使用するために−８０℃で保管した。
、イヌＩｇＧ ＣＨ２およびＣＨ３ドメインに融合した可溶性高アフィニティー
ＩｇＥ受容体のαユニットからなる。膜貫通ドメインを欠く可溶性αサブユニッ
トをＧｅｎｅＢａｎｋで利用できる情報を用いてＰＣＲによりクローン化した。
ＩｇＧ ＣＨ２およびＣＨ３ドメインはＣｈｅｍｏ−Ｓｅｒｏパテントにより請
求されたＤＥ９４の配列の一部であった。可溶性受容体およびＤＥ９４ＣＨ２／
ＣＨ３をＰＣＲにより結合させ、全長ｃＲｃＩｇを形成した。 全長ｃＲｃＩｇをファーミンゲン社のバキュロウィルスｐＡｃＨｉｓＴＮＡベ
クター中にクローン化した。該ウィルスをｓｆ−９細胞を用いて増幅させた。ｃ
ＲｃＩｇタンパク質を秘密形態で産生し、４８時間、ＭＯＩ（感染の多重度）５
で、Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ細胞中で発現させた。該タンパク質をＣＨ２／ＣＨ３ド
メインのタンパク質Ａカラムへの結合に基づいて精製した。詳細な精製スキーム
は実施例ＩＶに示す１５Ａ．２のものと同様である。 精製したｃＲｃＩｇを２．９ｍｇ／ｍｌに濃縮し、０．２μｍのフィルターユ
ニットを通して濾過することにより滅菌した。最終的な緩衝液成分は以下の通り
である： ０．７ｘＰＢＳ ６．５ｍＭクエン酸ナトリウム １５％グリセロール ｐＨ：約７．０ 該タンパク質は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥタンパク質ゲルにより示されるように、少
なくとも９５％の純度を有し、将来使用するために−８０℃で保管した。
【００４６】実施例ＸＩ
：インビボおよびインビトロでのＩｇＥ活性に対する組換えイヌＩｇ
Ｅ受容体の効果 血清ＩｇＥレベルを、前記した通りに、エライザにより測定した。実施例Ｘで
得られた精製したｃＲｃＩｇをインビトロで、イヌＩｇＥ受容体とイヌＩｇＥの
結合を妨げるその能力の試験をした。血清ＩｇＥを中和させるのに必要なｃＲｃ
Ｉｇ量を、インビトロで、イヌ血清に対する精製したｃＲｃＩｇの滴定により測
定した。次いで、精製したｃＲｃＩｇを静脈内注射によりボーラスで投与した。 それゆえ、組換えイヌＩｇＥ受容体ｃＲｃＩｇを、イヌ１００１および１００
２に静脈内ボーラス投与した。ｃＲｃＩｇ量は、インビトロで結合する組換え受
容体の５０％中和に必要な量の１０倍（イヌ１００２において、１４１ｍｇｓ；
２ｍｇ／ｍｌで７．０８ｍｌ）または２０倍（イヌ１００１において、２２０ｍ
ｇｓ；２ｍｇ／ｍｌで１１．０４ｍｌ）に相当した。次いで、付加的なｃＲｃＩ
ｇを各々のイヌに第１３日目ないし１７日目に５日連続して２ｍｇ／ｍｌで５ｍ
ｌの投与量でボーラス投与した。図９は時間に対する各々のイヌにおける遊離し
た血清ＩｇＥのレベルを示す。いずれのイヌにおいても、０日目のｃＲｃＩｇの
最初の投与後に、ＩｇＥは急速に循環して戻った。血清ＩｇＥレベルは、一般的
に、当業者に周知の標準的なエライザ法によりアッセイされる。ＩｇＥレベルは
、一般的に、約１ｎｇ／ｍｌ以下だとエライザ法では検出できないと考えられて
いる。
Ｅ受容体の効果 血清ＩｇＥレベルを、前記した通りに、エライザにより測定した。実施例Ｘで
得られた精製したｃＲｃＩｇをインビトロで、イヌＩｇＥ受容体とイヌＩｇＥの
結合を妨げるその能力の試験をした。血清ＩｇＥを中和させるのに必要なｃＲｃ
Ｉｇ量を、インビトロで、イヌ血清に対する精製したｃＲｃＩｇの滴定により測
定した。次いで、精製したｃＲｃＩｇを静脈内注射によりボーラスで投与した。 それゆえ、組換えイヌＩｇＥ受容体ｃＲｃＩｇを、イヌ１００１および１００
２に静脈内ボーラス投与した。ｃＲｃＩｇ量は、インビトロで結合する組換え受
容体の５０％中和に必要な量の１０倍（イヌ１００２において、１４１ｍｇｓ；
２ｍｇ／ｍｌで７．０８ｍｌ）または２０倍（イヌ１００１において、２２０ｍ
ｇｓ；２ｍｇ／ｍｌで１１．０４ｍｌ）に相当した。次いで、付加的なｃＲｃＩ
ｇを各々のイヌに第１３日目ないし１７日目に５日連続して２ｍｇ／ｍｌで５ｍ
ｌの投与量でボーラス投与した。図９は時間に対する各々のイヌにおける遊離し
た血清ＩｇＥのレベルを示す。いずれのイヌにおいても、０日目のｃＲｃＩｇの
最初の投与後に、ＩｇＥは急速に循環して戻った。血清ＩｇＥレベルは、一般的
に、当業者に周知の標準的なエライザ法によりアッセイされる。ＩｇＥレベルは
、一般的に、約１ｎｇ／ｍｌ以下だとエライザ法では検出できないと考えられて
いる。
【００４７】
イヌ１００１において、血清ＩｇＥは組換えＩｇＥ受容体の最終投与から２ヶ
月を超えてもアッセイにより検出できなかった。イヌ１００２において、血清Ｉ
ｇＥレベルは組換え受容体の最終投与の一定の期間経過後には、検出可能なレベ
ルに戻った。しかしながら、イヌ１００２において、血清ＩｇＥレベルは増加し
たが、０日目の組換え受容体の投与前に示していた高いレベルまでは戻らなかっ
た。図１０は、各々のイヌにおける実験期間中の全および遊離した血清ＩｇＥレ
ベルを示す。これらのデータは、循環しているＩｇＥを血清から速やかに除去す
ることができなかったことを示す。遊離した血清ＩｇＥは利用できないが、おそ
らく、ｃＲｃＩｇと複合した全ＩｇＥはまだ循環していた。 これらのデータは、（１）血清の循環しているＩｇＥを明らかにすること；お
よび（２）ＩｇＥを補充する過程に影響を及ぼす方法を示すことにおいて、本発
明の組換え抗体の効果を示す。
月を超えてもアッセイにより検出できなかった。イヌ１００２において、血清Ｉ
ｇＥレベルは組換え受容体の最終投与の一定の期間経過後には、検出可能なレベ
ルに戻った。しかしながら、イヌ１００２において、血清ＩｇＥレベルは増加し
たが、０日目の組換え受容体の投与前に示していた高いレベルまでは戻らなかっ
た。図１０は、各々のイヌにおける実験期間中の全および遊離した血清ＩｇＥレ
ベルを示す。これらのデータは、循環しているＩｇＥを血清から速やかに除去す
ることができなかったことを示す。遊離した血清ＩｇＥは利用できないが、おそ
らく、ｃＲｃＩｇと複合した全ＩｇＥはまだ循環していた。 これらのデータは、（１）血清の循環しているＩｇＥを明らかにすること；お
よび（２）ＩｇＥを補充する過程に影響を及ぼす方法を示すことにおいて、本発
明の組換え抗体の効果を示す。
【００４８】実施例ＸＩＩ
：イヌＩｇＥに結合し、ＩｇＥ受容体に結合することを妨げ、およ
び／またはＢ−細胞上のＩｇＥに結合し、ＩｇＥの合成に影響を及ぼすペプチド ペプチドはコンビナトリアルペプチドライブラリー由来であって、ＩｇＥと結
合した場合、ＩｇＥ受容体に結合するのを妨げるアミノ酸配列を含むと当業者に
より認識されているであろう。次いで、それらはＩｇＥ、好ましくはＩｇＥのエ
キソン３に結合可能で、このＩｇＥがＩｇＥ受容体に結合するのを妨げることが
できるアミノ酸配列のペプチドである。また、それらはＢ−細胞上のＩｇＥに結
合していてもよい。 それゆえ、別の例において、イヌＩｇＥに結合するペプチドをイヌに投与する
。該ペプチドは血清中のＩｇＥおよび、肥満細胞または好塩基球上のＩｇＥでは
なく、ＩｇＥ産生Ｂ−細胞の表面上のＩｇＥに結合する。ＩｇＥ合成を減少させ
るか、または排除する。結果として減じたＩｇＥレベルは肥満細胞におけるＩｇ
Ｅ受容体の発現の減少およびそれに伴うアレルギー反応の減少を引き起こす。
び／またはＢ−細胞上のＩｇＥに結合し、ＩｇＥの合成に影響を及ぼすペプチド ペプチドはコンビナトリアルペプチドライブラリー由来であって、ＩｇＥと結
合した場合、ＩｇＥ受容体に結合するのを妨げるアミノ酸配列を含むと当業者に
より認識されているであろう。次いで、それらはＩｇＥ、好ましくはＩｇＥのエ
キソン３に結合可能で、このＩｇＥがＩｇＥ受容体に結合するのを妨げることが
できるアミノ酸配列のペプチドである。また、それらはＢ−細胞上のＩｇＥに結
合していてもよい。 それゆえ、別の例において、イヌＩｇＥに結合するペプチドをイヌに投与する
。該ペプチドは血清中のＩｇＥおよび、肥満細胞または好塩基球上のＩｇＥでは
なく、ＩｇＥ産生Ｂ−細胞の表面上のＩｇＥに結合する。ＩｇＥ合成を減少させ
るか、または排除する。結果として減じたＩｇＥレベルは肥満細胞におけるＩｇ
Ｅ受容体の発現の減少およびそれに伴うアレルギー反応の減少を引き起こす。
【００４９】実施例ＸＩＶ
：イヌＩｇＥに結合し、ＩｇＥ受容体へ結合するのを妨げ、および
／またはＢ−細胞上のＩｇＥに結合し、ＩｇＥ合成に影響を及ぼす小分子 小有機分子はコンビナトリアルライブラリーに由来し、アッセイでスクリーニ
ングし、よってＩｇＥがＩｇＥ受容体に結合することを阻害する能力で小有機分
子を単離すると、当業者は認識している。それゆえ、それらはＩｇＥ、好ましく
はエキソン３内の領域に結合していてもよく、ＩｇＥ受容体に結合することを阻
害する。 別の例において、小分子をイヌに投与する。小分子は血清中のＩｇＥおよび肥
満細胞または好塩基球上のＩｇＥではなく、ＩｇＥ生成Ｂ−細胞の表面上のＩｇ
Ｅに結合する。したがって、ＩｇＥ合成を減少させるか、または排除する。結果
として減じたＩｇＥレベルは肥満細胞中のＩｇＥ受容体発現の減少およびそれに
伴うアレルギー反応の減少を引き起こす。
／またはＢ−細胞上のＩｇＥに結合し、ＩｇＥ合成に影響を及ぼす小分子 小有機分子はコンビナトリアルライブラリーに由来し、アッセイでスクリーニ
ングし、よってＩｇＥがＩｇＥ受容体に結合することを阻害する能力で小有機分
子を単離すると、当業者は認識している。それゆえ、それらはＩｇＥ、好ましく
はエキソン３内の領域に結合していてもよく、ＩｇＥ受容体に結合することを阻
害する。 別の例において、小分子をイヌに投与する。小分子は血清中のＩｇＥおよび肥
満細胞または好塩基球上のＩｇＥではなく、ＩｇＥ生成Ｂ−細胞の表面上のＩｇ
Ｅに結合する。したがって、ＩｇＥ合成を減少させるか、または排除する。結果
として減じたＩｇＥレベルは肥満細胞中のＩｇＥ受容体発現の減少およびそれに
伴うアレルギー反応の減少を引き起こす。
【００５０】おわりに
本明細書および請求の範囲で用いる単数形「ａ」「ａｎｄ」および「ｔｈｅ」
は特に明記のない限り複数形を包含する。例えば、「処方」なる用語は、異なる
処方の混合物を包含し、「治療法」なる用語は同等の工程および当業者により周
知の方法を包含する。 特に記載がない限り、本明細書で用いたすべての技術および特定の用語は当業
者により一般的に理解すると同じ意味を有する。本明細書で記載したものと類似
または同等の方法および物質のいずれも、本発明の実施または試験に使用でき、
本明細書に記載した好ましい方法および物質である。本明細書に記載した全ての
刊行物は出典明示により本明細書の一部とする。
は特に明記のない限り複数形を包含する。例えば、「処方」なる用語は、異なる
処方の混合物を包含し、「治療法」なる用語は同等の工程および当業者により周
知の方法を包含する。 特に記載がない限り、本明細書で用いたすべての技術および特定の用語は当業
者により一般的に理解すると同じ意味を有する。本明細書で記載したものと類似
または同等の方法および物質のいずれも、本発明の実施または試験に使用でき、
本明細書に記載した好ましい方法および物質である。本明細書に記載した全ての
刊行物は出典明示により本明細書の一部とする。
【配列表】
【図１】 ＩｇＥが組換えイヌＩｇＥ受容体と結合することを阻害するキメ
ラ１５Ａ．２の能力を示す。
ラ１５Ａ．２の能力を示す。
【図２】 １のコースのキメラ抗体を投与した後の、イヌにおけるｃ１５Ａ
．２活性に関する経時的データを示す。
．２活性に関する経時的データを示す。
【図３】 ｃ１５Ａ．２と称される組換えキメラ抗−ＩｇＥｍＡｂを投与し
た後の、２匹の対照および３匹の実験用のイヌにおける（遊離の、および合計の
ＩｇＥ）の循環しているＩｇＥレベルに関する経時的データを示す。このｍＡｂ
１５Ａ．２およびその特異性は１９９９年３月３０日出願の係属している特許出
願番号０９／２８１７６０に開示されている。
た後の、２匹の対照および３匹の実験用のイヌにおける（遊離の、および合計の
ＩｇＥ）の循環しているＩｇＥレベルに関する経時的データを示す。このｍＡｂ
１５Ａ．２およびその特異性は１９９９年３月３０日出願の係属している特許出
願番号０９／２８１７６０に開示されている。
【図４】 ８つのコースのキメラ抗体を投与した後の、３匹のイヌにおける
ｃ１５Ａ．２と複合したＩｇＥの循環に関する経時的データを示す。
ｃ１５Ａ．２と複合したＩｇＥの循環に関する経時的データを示す。
【図５】 キメラ抗体を投与した後の、実験用イヌの血清中に観察される抗
−キメラ１５Ａ．２活性に関する経時的データを示す。
−キメラ１５Ａ．２活性に関する経時的データを示す。
【図６】 キメラ抗−１５Ａ．２ｍＡｂを投与する最初のコースから４日後
の、第２のコースから３日後の、および第５のコースから５日後の、ＰＥ−標識
した抗−エキソン４イヌＩｇＥｍＡｂ１４Ｋ．２およびＦＩＴＣ−標識した抗−
イヌＩｇＥ受容体ｍＡｂ９Ｌ．４で二重染色した、イヌからのフローサイトメト
リーデータを示す。
の、第２のコースから３日後の、および第５のコースから５日後の、ＰＥ−標識
した抗−エキソン４イヌＩｇＥｍＡｂ１４Ｋ．２およびＦＩＴＣ−標識した抗−
イヌＩｇＥ受容体ｍＡｂ９Ｌ．４で二重染色した、イヌからのフローサイトメト
リーデータを示す。
【図７】 ｃ１５Ａ．２ｍＡｂの投与前、８つのコースを投与した３日およ
び８日後の、イヌにおけるラグウェード（Ragweed）皮膚試験反応性に関する経
時的データを示す。
び８日後の、イヌにおけるラグウェード（Ragweed）皮膚試験反応性に関する経
時的データを示す。
【図８】 ｃＲｃＩｇと称される組換え受容体−ＩｇＧアンタゴニストを投
与した後の、イヌ１００１および１００２における循環している遊離したＩｇＥ
レベルの経時的データを示す。
与した後の、イヌ１００１および１００２における循環している遊離したＩｇＥ
レベルの経時的データを示す。
【図９】 実験の時間経過にわたる実験用イヌ１００１および１００２の遊
離したＩｇＥおよび全体としてのＩｇＥを示す。
離したＩｇＥおよび全体としてのＩｇＥを示す。
【図１０】 組換えＩｇＥ受容体ｃＲｃＩｇのＤＮＡ配列（配列番号５）と
対応する翻訳（配列番号６）を示す。図の最後に４個のアミノ酸を付加した、そ
の対応するヌクレオチドを欠くのが配列番号７である。
対応する翻訳（配列番号６）を示す。図の最後に４個のアミノ酸を付加した、そ
の対応するヌクレオチドを欠くのが配列番号７である。
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フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｃ０７Ｋ 16/42 Ｃ１２Ｐ 21/08
// Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，
ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ
Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ
，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，
ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ
Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ
，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，
ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，
ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ
Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ
，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，
ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ
Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ
，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，
ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ
Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ
，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，
ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ
(72)発明者 ウェンディ・ダブリュー・リュー
アメリカ合衆国44122オハイオ州シェイカ
ー・ハイツ、ウィンブルドン・ロード
24036番
(72)発明者 ブライオン・マーマー
アメリカ合衆国04092メイン州カンバーラ
ンド、リンデン・コート２番
(72)発明者 ホンリアン・グオ
アメリカ合衆国04074メイン州スカーバー
ロウ、トーマス・ドライブ11番
(72)発明者 ユージーン・アール・クラー・ザ・サード
アメリカ合衆国04104メイン州ポートラン
ド、ヒギンズ・ストリート31番
Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA58 CA07 DA02 GA11
HA20
4B064 AG27 CA19 CC24 DA01
4C076 AA01 AA12 AA22 AA36 AA53
BB01 BB13 BB15 BB16 BB29
BB30
4C085 AA14 AA16 BB03 BB35 BB36
DD62 EE01 GG02 GG03 GG04
GG08
4H045 AA11 BA41 CA40 DA76 EA22
FA74
Claims (34)
- 【請求項１】 イヌＩｇＥに特異的に結合する外来性受容体分子。
- 【請求項２】 受容体分子が抗体である、請求項１記載の受容体分子。
- 【請求項３】 抗体がモノクローナル抗体である、請求項２記載の抗体。
- 【請求項４】 受容体分子がイヌおよびマウスのイムノグロブリンのキメラ
である、請求項１記載の受容体分子。 - 【請求項５】 イヌの不変長および短ドメインの、マウスの長および短鎖可
変領域に融合したキメラを含む、請求項４記載の受容体分子。 - 【請求項６】 受容体分子がイヌＩｇＥのエキソン３に対してアフィニティ
ーを有する、請求項１記載の受容体分子。 - 【請求項７】 抗体がＣ１５Ａ．２である、請求項８記載の受容体分子。
- 【請求項８】 受容体分子がＩｇＥが別の受容体と結合することを妨げ、そ
の別の受容体が１またはそれ以上のＢ細胞、肥満細胞および好塩基球からなる群
より選択される細胞上にある、請求項１記載の受容体分子。 - 【請求項９】 受容体が有機分子である、請求項１記載の受容体分子。
- 【請求項１０】 受容体が蛋白またはペプチドである、請求項９記載の受容
体分子。 - 【請求項１１】 受容体分子がさらにＩｇＧ長鎖の少なくとも一部を含む、
請求項１０記載の受容体分子。 - 【請求項１２】 受容体分子がＩｇＥに結合するキメラモノクローナル抗体
を含み、そのモノクローナル抗体がイヌおよびマウスのイムノグロブリンのキメ
ラである、請求項１記載の受容体分子。 - 【請求項１３】 モノクローナル抗体がマウスの長および短鎖可変領域に融
合したイヌの不変長および短ドメインを含む、請求項１２記載のモノクローナル
抗体。 - 【請求項１４】 モノクローナル抗体がイヌＩｇＥのエキソン３に対してア
フィニティーを有する、請求項１３記載のモノクローナル抗体。 - 【請求項１５】 モノクローナル抗体がＩｇＥが受容体と結合することを妨
げ、その受容体が１またはそれ以上のＢ細胞、肥満細胞および好塩基球からなる
群より選択される細胞上にある、請求項１４記載のモノクローナル抗体。 - 【請求項１６】 ＩｇＥと特異的に結合する外来性受容体分子をイヌに投与
することを含む、イヌのアレルギーの治療方法。 - 【請求項１７】 受容体分子がイヌおよびマウスのイムノグロブリンのキメ
ラである、請求項１６記載の方法。 - 【請求項１８】 受容体がモノクローナル抗体である、請求項１７記載の受
容体分子。 - 【請求項１９】 受容体分子が、イヌの不変長および短ドメインの、マウス
の長および短鎖可変領域に融合したキメラを含む、請求項１８記載の方法。 - 【請求項２０】 受容体分子がイヌＩｇＥのエキソン３に対してアフィニテ
ィーを有する、請求項１６記載の方法。 - 【請求項２１】 受容体分子がＣ１５Ａ．２である、請求項２０記載の方法
。 - 【請求項２２】 受容体分子の投与が治療されるイヌにおいて血清ＩｇＥレ
ベルの低下をもたらす、請求項１６記載の方法。 - 【請求項２３】 受容体分子の投与がＩｇＥのＢ細胞上への結合をもたらし
、その後でＢ細胞のクローン集団を排除する、請求項１６記載の方法。 - 【請求項２４】 受容体分子の投与がＩｇＥの血漿への結合をもたらす、請
求項１６記載の方法。 - 【請求項２５】 受容体分子の投与が治療されるイヌにおいてＩｇＥ産生の
阻害をもたらす、請求項１６記載の方法。 - 【請求項２６】 受容体分子がさらにＩｇＧ長鎖配列を含む、請求項１６記
載の方法。 - 【請求項２７】 血清ＩｇＥレベルの低下がＩｇＥとＩｇＥについての受容
体との相互作用を破壊または遮断することにより惹起される、請求項２２記載の
方法。 - 【請求項２８】 ＩｇＥについての受容体が肥満細胞上にある、請求項２７
記載の方法。 - 【請求項２９】 ＩｇＥについての受容体が好塩基球上にある、請求項２７
記載の方法。 - 【請求項３０】 イヌのアレルギーを治療するための医薬処方であって、治
療上有効量の外来性受容体分子を含み、ここに外来性受容体分子がイヌＩｇＥに
特異的に結合する分子である、医薬処方。 - 【請求項３１】 外来性受容体分子がキメラモノクローナル抗体を含む、請
求項３０記載の医薬処方。 - 【請求項３２】 キメラモノクローナル抗体が、イヌの不変長および短ドメ
インの、マウスの長および短鎖可変領域に融合したキメラを含み、イヌＩｇＥの
エキソン３に対してアフィニティーを有する、請求項３１記載の医薬処方。 - 【請求項３３】 さらに、セイラインまたは他の非経口用溶液、緩衝化剤、
安定化剤、増量剤、酸化防止剤および共溶媒からなる群より選択される１または
それ以上の成分を含んでいてもよい、請求項３０記載の医薬処方。 - 【請求項３４】 静脈内投与、皮下投与および筋肉内投与からなる方法のう
ち１またはそれ以上の方法による投与に適する形態である、請求項３１記載の医
薬処方。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006151880A (ja) * | 2004-11-30 | 2006-06-15 | Asahi Breweries Ltd | 抗イヌＩｇＥモノクローナル抗体、その製造法および用途 |
| JP2020501518A (ja) * | 2016-11-09 | 2020-01-23 | ノース カロライナ ステート ユニバーシティＮｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ | キメラタンパク質を用いたアレルギー疾患の治療 |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7393529B2 (en) * | 1998-04-09 | 2008-07-01 | Idexx Laboratories, Inc. | Methods and compositions for inhibiting binding of IgE to a high affinity receptor |
| WO2002066602A2 (en) * | 2001-01-03 | 2002-08-29 | Heska Corporation | Detection of allergen-specific ige |
| WO2003060080A2 (en) * | 2001-12-21 | 2003-07-24 | Idexx Laboratories, Inc. | Canine immunoglobulin variable domains, caninized antibodies, and methods for making and using them |
| ES2466716T3 (es) * | 2002-11-08 | 2014-06-11 | Ablynx N.V. | Anticuerpos de un solo dominio estabilizados |
| US9320792B2 (en) | 2002-11-08 | 2016-04-26 | Ablynx N.V. | Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof |
| EP2336179A1 (en) * | 2002-11-08 | 2011-06-22 | Ablynx N.V. | Stabilized single domain antibodies |
| US20060034845A1 (en) | 2002-11-08 | 2006-02-16 | Karen Silence | Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor |
| US20100003253A1 (en) * | 2002-11-08 | 2010-01-07 | Ablynx N.V. | Single domain antibodies directed against epidermal growth factor receptor and uses therefor |
| GB0304576D0 (en) | 2003-02-28 | 2003-04-02 | Lonza Biologics Plc | Protein a chromatography |
| WO2005095967A1 (en) * | 2004-03-23 | 2005-10-13 | Quidel Corporation | Hybrid phase lateral flow assay |
| WO2005100995A2 (en) | 2004-04-06 | 2005-10-27 | Mount Sinai School Of Medicine | Methods of determining allergen response using microarray imminoassay techinques |
| CN104610422A (zh) | 2005-03-11 | 2015-05-13 | 惠氏公司 | 弱分配层析的方法 |
| JP2007172129A (ja) * | 2005-12-20 | 2007-07-05 | Sony Corp | 不揮発性メモリアクセス制御装置および不揮発性メモリ制御システム |
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| EP2705846B1 (en) * | 2007-07-09 | 2017-06-21 | Nestec S.A. | Methods for reducing allergies caused by environmental allergens |
| RS63063B1 (sr) | 2010-08-19 | 2022-04-29 | Zoetis Belgium S A | Anti-ngf antitela i njihova upotreba |
| US9546219B2 (en) | 2012-02-08 | 2017-01-17 | North Carolina State University | Treatment of allergic diseases with recombinant antibodies |
| JP6199054B2 (ja) * | 2013-03-19 | 2017-09-20 | 公益財団法人かずさＤｎａ研究所 | 抗イヌＩｇＥモノクローナル抗体並びに抗イヌＩｇＥモノクローナル抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域 |
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| CN109143137B (zh) * | 2018-06-14 | 2020-09-29 | 国电南瑞科技股份有限公司 | 一种发电机pmu装置测量精度提升方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0383579A (ja) * | 1989-08-25 | 1991-04-09 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | イヌ×マウスヘテロハイブリドーマおよびイヌ免疫グロブリンλ鎖の定常領域をコードする遺伝子断片 |
| JPH03123489A (ja) * | 1989-09-30 | 1991-05-27 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | イヌ免疫グロブリンκ鎖の定常領域をコードする遺伝子断片およびマウス×イヌキメラ抗体 |
| JPH0440894A (ja) * | 1990-06-07 | 1992-02-12 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | イヌ免疫グロブリンγ鎖の定常領域をコードする遺伝子断片およびマウス×イヌキメラ抗体 |
| EP0957111A2 (en) * | 1998-04-09 | 1999-11-17 | Idexx Laboratories, Inc. | Specific binding proteins for treating canine allergy |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5449760A (en) | 1987-12-31 | 1995-09-12 | Tanox Biosystems, Inc. | Monoclonal antibodies that bind to soluble IGE but do not bind IGE on IGE expressing B lymphocytes or basophils |
| US5422258A (en) | 1987-12-31 | 1995-06-06 | Tanox Biosystems, Inc. | Methods for producing high affinity anti-human IgE-monoclonal antibodies which binds to IgE on IgEabearing B cells but not basophils |
| EP0407392B2 (en) | 1987-12-31 | 1998-10-28 | Tanox Biosystems, Inc. | UNIQUE ANTIGENIC EPITOPES ON IgE-BEARING B LYMPHOCYTES |
| ES2193136T3 (es) * | 1991-08-14 | 2003-11-01 | Genentech Inc | Variantes de inmunoglubina para receptores especificos de fc epsilon. |
| US5965709A (en) | 1991-08-14 | 1999-10-12 | Genentech, Inc. | IgE antagonists |
| SE9102808L (sv) | 1991-09-26 | 1993-03-27 | Lars T Hellman Inst F Immunolo | Vaccin, foer humant bruk, vars avsedda effekt aer att lindra symptomen eller foerhindra uppkomsten av ige-medierade allergiska reaktioner |
| DE69332521T2 (de) | 1993-03-11 | 2003-10-02 | Tanox Biosystems, Inc. | ANTIGENE EPITOPE VON IgE REPRÄSENTIERENDEN PEPTIDEN AUF DER B-ZELL-OBERFLÄCHE ABER NICHT AUF OBERFLÄCHEN VON BASOPHILEN |
| US5629415A (en) | 1994-11-09 | 1997-05-13 | Merck & Co., Inc. | DNA encoding canine immunoglobulin E |
| AU1146897A (en) | 1995-12-08 | 1997-06-27 | Idexx Laboratories, Inc. | Methods and compositions concerning allergy in dogs |
| US5945294A (en) | 1996-11-26 | 1999-08-31 | Heska Corporation | Method to detect IgE |
| US6060326A (en) | 1997-04-07 | 2000-05-09 | Heska Corporation | Method to detect canine IgE and kit therefor |
| US5994511A (en) | 1997-07-02 | 1999-11-30 | Genentech, Inc. | Anti-IgE antibodies and methods of improving polypeptides |
| TWI227241B (en) | 1998-06-20 | 2005-02-01 | United Biomedical Inc | IgE-CH3 domain antigen peptide, peptide conjugate containing the same, and pharmaceutical composition for treating allergies containing the peptide conjugate |
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0383579A (ja) * | 1989-08-25 | 1991-04-09 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | イヌ×マウスヘテロハイブリドーマおよびイヌ免疫グロブリンλ鎖の定常領域をコードする遺伝子断片 |
| JPH03123489A (ja) * | 1989-09-30 | 1991-05-27 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | イヌ免疫グロブリンκ鎖の定常領域をコードする遺伝子断片およびマウス×イヌキメラ抗体 |
| JPH0440894A (ja) * | 1990-06-07 | 1992-02-12 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | イヌ免疫グロブリンγ鎖の定常領域をコードする遺伝子断片およびマウス×イヌキメラ抗体 |
| EP0957111A2 (en) * | 1998-04-09 | 1999-11-17 | Idexx Laboratories, Inc. | Specific binding proteins for treating canine allergy |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006151880A (ja) * | 2004-11-30 | 2006-06-15 | Asahi Breweries Ltd | 抗イヌＩｇＥモノクローナル抗体、その製造法および用途 |
| JP2020501518A (ja) * | 2016-11-09 | 2020-01-23 | ノース カロライナ ステート ユニバーシティＮｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ | キメラタンパク質を用いたアレルギー疾患の治療 |
| JP7127859B2 (ja) | 2016-11-09 | 2022-08-30 | ノース カロライナ ステート ユニバーシティ | キメラタンパク質を用いたアレルギー疾患の治療 |
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