JP2003508415A

JP2003508415A - 天然シクロオキシゲナーゼ阻害剤を含有する食物サプリメント

Info

Publication number: JP2003508415A
Application number: JP2001519778A
Authority: JP
Inventors: ムラリードハーランジーネイア; ハイボワン; ディヴィッドエルダウィット; ディヴィッドダブリュークレンピン; ヨンキアン; デュパックケイモーディ
Original assignee: ミシガンステイトユニヴァーシティー; アルティコアインコーポレイテッド
Priority date: 1999-08-27
Filing date: 2000-08-25
Publication date: 2003-03-04
Also published as: WO2001015553A9; KR20060123663A; WO2001015553B1; WO2001015553A1; KR100776465B1; AU6801200A; KR20020042652A; CN1384713A

Abstract

(57)【要約】本発明は、疼痛軽減や抗炎症に有効なフルーツエキスを1種以上含む食物サプリメントを記載している。該食物サプリメントは、シクロオキシゲナーゼ、特にシクロオキシゲナーゼ2によって仲介される炎症を阻害するために用いることができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】関連出願本出願は、1999年8月27日出願の『植物からのフラボノイド類を濃縮する方法
』と称する米国仮出願第60/151,280号に対する優先権を主張する。本出願は、19
99年8月27日出願の米国仮出願第60/151,278号にも関連し、この明細書の記載は
本願明細書に含まれるものとする。

【０００２】背景本発明は、疼痛又は炎症の軽減、また、疼痛又は炎症伝達に関係する生化学経
路の阻害に有効である食物サプリメントに関する。これらの食物サプリメントは
、フラボノイド類、特にある種のアントシアニンを含有している。今日、多くの消費者は、日常生活で感じる様々な症状の応急処置のために合成
医薬品に対する天然代替物を探し求めている。従って、最近はセントジョーンズ
ウォルト、イチョウ、ニンジン等のような天然物質を含有する食物サプリメント
が様々な効果のために市販されている。しかしながら、いままでに、非ステロイ
ド系抗炎症剤（『NSAID』）と等価な疼痛及び/又は炎症の軽減を与える天然物質
を含有する製品は得られていないと思われる。現在、疼痛や炎症は、アスピリン、イブプロフェン（Motrin(登録商標)、Advi
l(登録商標)）、又はNSAIDとして一般に知られる他の類似物質の使用によって共
通して治療されている。炎症は、一部には、機械的、熱、化学的、細菌、又は他
の傷害に応答してホストが遊離するプロスタグランジンとして知られる種類の化
合物によって伝達される（Moncadaら, Handbook of Exp. Pharm. Vol 50-1, Spr
inger Verlag, pp 588-616, 1978; Samuelsson, Science, 220: 568-575, 1983;
Daviesら, Ann. Rev. Immunol. 2:335-357, 1984）。プロスタグランジンの合
成は、偏在するミクロソーム酵素の複合体によって段階的方法で達成される。こ
の生合成経路の第1酵素はプロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼで
ある。この酵素は、当該技術においては脂肪酸シクロオキシゲナーゼとも呼ばれ
ている。この酵素の2つのイソ型がそれぞれシクロオキシゲナーゼ-1（COX-1）と
シクロオキシゲナーゼ-2（COX-2）として知られている（Smith, Am. J. Physiol
., 268:F181-F191, 1992）。

【０００３】アスピリンのような物質はプロスタグランジンの産生、即ち、疼痛又は炎症を
阻止するが、胃の問題及び/又は潰瘍を引き起こすことがある。これらの問題に
取組むために、アスピリン、イブプロフェン、又は他の類似物質と関連がある問
題の一部が完全に排除されない場合には弱められることを期待して特定の疼痛経
路を標的にする薬剤が開発された。そのような薬剤は、Celebrex(登録商標)であ
り、特定の疼痛経路を明らかに標的にし、よって、アスピリンのような物質に伴
う欠点がない。特に、NSAIDは、ヒトアラキドン酸/プロスタグランジン経路にお
ける酵素を阻害することによりプロスタグランジンの産生を阻止する。しかしな
がら、Celebrex(登録商標)のような薬剤は、COX-1とCOX-2を区別し、標準のNSAI
Dに伴う副作用がないものとしてうたわれている。上記のように、多くの消費者は、合成薬剤より天然物質を好んで用いている。
従って、好ましくは優先的にCOX-2酵素を阻害する天然の薬理学的に許容しうる
抗炎症組成物が求められている。本発明は、疼痛の軽減、抗炎症活性、及び/又
はCOX-2の優先阻害を与える未変性活性画分を有するスノキ属の植物材料の1種以
上からのエキスを含有する食物サプリメントを得ることによりその要求に応える
ものである。該サプリメントは、該画分の量を植物材料から得られた果汁に乾燥
質量で存在する画分の割合を著しく超える他の成分の乾燥質量の割合で含有して
いる。一般的には、該活性画分は、フラボノイド類、特にアントシアニンを含ん
でいる。

【０００４】発明の要約本発明は、疼痛軽減や抗炎症に有効なフルーツエキスを１種以上含有する食物
サプリメントを記載している。食物サプリメントは、シクロオキシゲナーゼ、特
にシクロオキシゲナーゼ-2によって仲介される炎症を阻止するために用いること
ができる。特に、本発明は、抗炎症活性が天然フルーツに見られる該抗炎症活性
より大きいフラボノイドを多く含んだフルーツエキス; 及び薬学的に許容しうる
希釈剤又は賦形剤を含んでいる、抗炎症活性を有する食物サプリメントを提供す
る。個々の実施態様においては、フルーツは、スイートチェリー、タルトチェリー
、アセロラチェリー、プラム、ビルベリー、ブラックベリー、スグリ、チョーク
ベリー、ブルーベリー、ストロベリー、クランベリー、ボイゼンベリー、グレー
プ、ラズベリー、エルダーベリー、及びその混合物からなる群より選ばれる。あ
る実施態様においては、エキスの抗炎症活性は、シクロオキシゲナーゼの阻害に
よって仲介される。具体的な実施態様においては、エキスのシクロオキシゲナー
ゼ2（COX-2）阻害活性は、シクロオキシゲナーゼ1（COX-1）阻害活性より大きい
。好適実施態様においては、COX-2阻害活性とCOX-1阻害活性の比は、約1:1〜約2
5:1である。これは比率の例示範囲であり、これらの2つの数値間の比率が特に企
図されていることは当然のことである。

【０００５】ある実施態様においては、抗炎症活性は、シアニジン-3-グルコシド、シアニ
ジン-3-グルコシルルチノシド; シアニジン-3-ゲンチビオシド; シアニジン-3-
ルチノシド、ペオニジン-3-ルチノシド、ペオニジン、シアニジン、シアニジン-
3-ソホロシド、ペラルゴニジン、デルフィニジン、ペツニジン、マルビジン、ケ
ンフェロール、ヘスペリジン、ゲンチオデルフィン、プラチコニン、シネラリン
、及びその混合物からなる群より選ばれたフラボノイドによって仲介される。特
に企図された実施態様においては、フルーツエキスは、エルダーベリーフルーツ
エキス、チョークベリーフルーツエキス、タルトチェリーフルーツエキス又はそ
の混合物である。他の好適実施態様においては、食物サプリメントは、エルダー
ベリーエキス、ビルベリーエキス、及びチェリーエキス、好ましくはタルトチェ
リーエキスを含んでいる。本発明は、また、アントシアニンの加水分解形のアントシアニジンがアントシ
アニンと比べて高COX阻害活性を示すという所見に基づいている。従って、本発
明のサプリメントは、上記フラボノイド類（アントシアニン）をサプリメントに
取り込み、アントシアニンが生体内で加水分解されてCOX阻害活性を得ることを
企図している。

【０００６】食物サプリメントは、ゲル、カプセル、タブレット、シロップ、飲料又は粉末
に処方することができる。そのような製剤の製造方法は、当業者に周知である。
他の態様においては、食物サプリメントは、更に、ビタミン、ミネラル、補酵素
、繊維、ハーブエキス又はその組合わせからなる群より選ばれた追加の添加剤を
含むことができる。特に好ましいハーブエキスは、ジンジャーエキスやボスウェ
リアエキスを含んでいる。ビタミンは、ビタミンA、ビタミンD、ビタミンE、ビ
タミンB₁₂、リボフラビン、ナイアシン、パントテン酸、チアミン、コリン、葉
酸、ビオチン、ビタミンK、又はビタミンCからなる群より選ぶことができる。ミ
ネラルは、コバルト、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレン又はその組合わせからな
る群より選ぶことができる。個々の実施態様においては、抗炎症活性は、天然果実の抗炎症活性の約2〜約1
00倍である。他の実施態様においては、食物サプリメントの疼痛軽減特性は、ア
スピリンの疼痛軽減特性より大きい。また、抗炎症活性が天然果実に見られる抗炎症活性より大きいビルベリーエキ
ス、チェリーエキス、エルダーベリーフルーツエキス、又はその混合物より選ば
れたフルーツエキスを含んでいる抗炎症性を有する食物サプリメントが企図され
る。具体的な実施態様においては、食物サプリメントは、更に、チョークベリー
フルーツエキス又は上で確認された他のフルーツエキスを含んでいる。

【０００７】また、細胞においてCOX-2活性を阻害する方法であって、該細胞と、抗炎症活
性が天然フルーツに見られる抗炎症活性より大きいビルベリーエキス、チェリー
エキス、エルダーベリーフルーツエキス、及びその混合物の群より選ばれたフル
ーツエキスとを接触させる段階を含む、前記方法が提供される。個々の実施態様
は、更に、該細胞と該チョークベリーフルーツエキス又は上で確認された他のフ
ルーツエキスとを接触させる段階を含んでいる。特に好ましい実施態様において
は、該エルダーベリーフルーツエキスと該チョークベリーフルーツエキスが同じ
組成物中にある。他の実施態様においては、該エルダーベリーフルーツエキスと
該チョークベリーフルーツエキスは、別個の組成物中にある。本発明のある態様
は、該細胞が哺乳動物細胞であることを企図している。他の実施態様は、該細胞
がヒト細胞であることを企図している。具体的な実施態様は、該細胞と該フルー
ツエキスとを試験管内で接触させる。他の実施態様は、該細胞を生体内で接触さ
せることを企図している。好適態様においては、該方法は、ゲル、カプセル、タ
ブレット、シロップ、飲料又は粉末に処方されたサプリメントを使用する。本発明の他の態様は、動物において炎症応答を治療する方法であって、抗炎症
活性が天然果実に見られる抗炎症活性より大きいフルーツエキス; 及び薬学的に
許容しうる希釈剤又は賦形剤を含む組成物を該動物に投与する段階を含む、前記
方法を提供する。

【０００８】個々の実施態様においては、該炎症応答は、関節炎、疼痛、アレルギー疹、炎
症性腸症候群、及び喘息からなる群より選ぶことができる。勿論、これらが例示
炎症疾患であり、本食物サプリメントが炎症応答から生じる疾病の優れた薬草治
療剤を与えることができることが企図される。本サプリメントは、ゲル、カプセ
ル、タブレット、シロップ、飲料又は粉末の形であってもよい。本明細書に記載される食物サプリメントは、単独で又は他の抗炎症治療剤と併
用して用いられる場合に有効であることは理解されるべきである。他の治療剤と
併用して用いられる実施態様においては、本方法は、更に、サリチル酸塩、グル
ココルチコイド、パラアミノフェノール誘導体、オピオイド、インドメタシン、
スリンダク、フェナム酸塩、プロピオン酸誘導体及びオキシカムからなる群より
選ばれた抗炎症剤を該動物に投与する段階を企図している。本発明の他の実施態様は、疼痛に苦しんでいる生物に摂取又は適用した場合に
疼痛が軽減される、エルダーベリーフルーツ、チェリー（タルトチェリーを含む
）、ビルベリー、チョークベリーフルーツ、又は本明細書に記載される他のアン
トシアニン含有フルーツを含むアントシアニン含有フルーツのエキスを含む栄養
剤を含んでいる。特に、疼痛は、関節炎、月経痛、頭痛、虫刺症又はアレルギー
疹の痛みであってもよい。

【０００９】本発明の他の目的は、抗炎症活性が天然果実の該抗炎症活性の約2〜約100倍で
あるサプリメントを提供することである。例えば、該サプリメントの抗炎症活性
が天然果実に見られる該抗炎症活性より大きいエルダーベリーフルーツエキスを
含有し得る。本発明の他の目的は、細胞においてCOX-2活性を阻害する方法であって、該細
胞と抗炎症活性が天然フルーツに見られる該抗炎症活性より大きいエルダーベリ
ーフルーツエキスとを接触させることによる前記方法を提供することである。一
般的には、本目的は、動物において炎症応答を治療する方法であって、抗炎症活
性が天然果実に見られる該抗炎症活性より大きいフルーツエキス; 及び薬学的に
許容しうる希釈剤又は賦形剤を含む組成物を該動物に投与する段階を含む、前記
方法を企図している。本発明の他の目的、特徴及び利点は、次の詳細な説明から明かになるであろう
。しかしながら、詳細な説明及び個々の実施例は、本発明の好適実施態様を示し
ており、単に例示によって示されているので、本発明の真意と範囲内で様々な変
更と修正がこの詳細な説明から当業者に明かになるであろう。特にことわらない限り、詳細な説明と特許請求の範囲に用いられる％はすべて
質量％である。

【００１０】発明の詳細な説明プロスタグランジン（PGE₂、PGD₂、PGF₂、PGl₂及び他の関連化合物）は、脂肪
酸の代謝から誘導される異種グループの自己分泌ホルモンとパラ分泌ホルモンで
ある。細胞において細胞膜リン脂質の分解から誘導される炭素数20の脂肪酸のア
ラキドン酸から要求に応じて生合成されるように貯蔵されない天然に存在するエ
イコサノイド（プロスタグランジン、トロンボキサン又はロイコトリエン）のフ
ァミリーに属している。正常な場合には、エイコサノイドは低レベルで産生され
、異なった種類の細胞内では非常に異なってしまう多くの異種細胞機能の重要な
伝達物質として働いている。しかしながら、プロスタグランジンは、病態生理学
に重要な役割を果たしている。特に、少なくとも一部には、損傷した細胞におい
てプロスタグランジンが過剰生産されることにより炎症の開始も維持もされる。
炎症においてプロスタグランジンが果たす中心的な役割は、多くの炎症の病態の
治療に最も有効であるアスピリン様非ステロイド系抗炎症剤（NSAID）がプロス
タグランジン合成を阻害することによりすべて作用しているという事実によって
強調される。残念ながら、これらの薬剤の使用は、正常な生理学の維持に必要と
される自己分泌機能とパラ分泌機能の欠除に苦しむことになる正常細胞において
望ましくないプロスタグランジンの減少から生じる副作用（胃腸出血、潰瘍、腎
不全等）によってしばしば制限される。特に、炎症を起こした細胞におけるプロ
スタグランジンの減少を他の細胞におけるプロスタグランジン産生を変化させず
に達成することにより作用する新規な薬剤の開発は、将来の疼痛炎症治療の目標
である。

【００１１】シクロオキシゲナーゼ反応は、プロスタグランジン合成経路の第1段階である
。プロスタグランジンG/H合成活性を有する酵素（PGHS）は、アラキドン酸をエ
ンドペルオキシドPGG₂に変換し、次にPGH₂に分解する（2つの反応が単一酵素で
行われる）。PGH₂は、1種以上のプロスタグランジンシンターゼ（PGE₂シンター
ゼ、PGD₂シンターゼ等）によって代謝されてトロンボキサン、TXA₂を含む最後の
『2系列』プロスタグランジン、PGE₂、PGD₂、PGF₂、PGl₂等を生成する。第1段階
（PGHS）は、プロスタグランジン合成を律速する段階である。それだけで、PGHS
仲介反応は、抗炎症剤作用の主な標的であり、炎症におけるプロスタグランジン
の過剰生産を制限する（所望の治療目標）とともに炎症を起こしていない細胞に
おけるプロスタグランジンの正常の産生を減少させる（望ましくない副作用を生
じる）NSAID（アスピリン、アセトミノフェン、イブプロフェン、ナプロキセン
、インドメタシン）の活性を説明することがPGHS活性の阻害である。炎症に伴う異常な変化のほかに、実験条件下でプロスタグランジン産生に影響
する他の多数の因子が既知である。これらには、成長因子、cAMP、腫瘍プロモー
ター、src活性化及びインターロイキン1又は2が含まれ、すべてが細胞PGHS活性
全体を増大させる。副腎グルココルチコイドホルモンや関連した合成抗炎症ステ
ロイドもプロスタグランジン合成を阻害するが、代謝作用部位ははっきりしてい
ない。

【００１２】たいていの非ステロイド系抗炎症剤の主要な、おそらく唯一の作用は、プロス
タグランジンの生合成において第1始動段階として働くシクロオキシゲナーゼと
して知られる酵素、プロスタグランジンG/Hシンターゼを阻害することである。シクロオキシゲナーゼが2つのイソ型、COX-1とCOX-2で存在していることは十
分に確立されている。構成的に表される形、COX-1は、徹底的に研究され、プロ
スタグランジン仲介生理作用の維持に関係していることが提唱されている。対照
的に、COX-2、誘導型は、正常状態のもとでは無視できる量で存在するが、炎症
症状のもとでは生体内で実質的に誘導される。COX-1とCOX-2が、異なる生理作用
と病理作用の働きをすることは明らかである。最も広く利用できるNSAIDは、両方のイソ型を無差別に阻害する非選択的シク
ロオキシゲナーゼ阻害剤である。酵素が2つの異なるイソ型をもつことが発見さ
れてから選択的COX-2阻害剤が探究されてきた。最近、COX-2特異的阻害剤が開発
されたが、副作用があることが示されている。炎症を治療する安全で効果的な方
法が求められている。本発明は、その要求に応えるものである。本発明は、COX-2活性を優先的に阻害しかつCOX-2によって仲介される炎症を改
善するNSAIDに対する天然代替物を記載するものである。本発明は、ある種のフ
ルーツエキスの抗炎症活性が天然果実に見られる抗炎症活性より大きいことを示
している。この所見を利用して抗炎症活性が天然果実に見られる抗炎症活性より
大きいフルーツエキス及び薬学的に許容しうる希釈剤又は賦形剤を含む食物サプ
リメントを提供する。言い換えると、本発明は、選択的にCOX-2を阻害する、ア
ントシアニン含有植物、特に果実から得られたエキスを提供する。

【００１３】また、アントシアニン含有植物からのエキスは、COX-1の活性を選択的に阻害
することができる。従って、本発明は、COX-1又はCOX-2の活性を選択的に阻害す
るアントシアニン含有植物のエキスから誘導されたアントシアニンを少なくとも
1種含有する食物サプリメントを企図している。特に、実施態様においては、エルダーベリーエキスとチョークベリーエキスが
高抗炎症活性を有することがわかる。フルーツエキスのアントシアニン化合物（
特に加水分解した）によって仲介されるこの抗炎症活性は、COX-1の阻害に比べ
てCOX-2の阻害が大きい。この所見を利用する方法と組成物は、下で更に詳述さ
れる。しかしながら、一般的に言えば、この実施態様のエキスは、アントシアニ
ン含有植物から選択され、COX、好ましくはCOX-2の活性を選択的に阻害する。哺
乳動物がエキスを経口的に摂取する場合、存在するアントシアニンはCOXを阻害
する対応するアントシアニジンに生体内で加水分解されると考えられる。個々の
実施態様においては、ある種の果実の抗炎症活性がCOX-1に比べてCOX-2に優先的
であることがわかった。本発明の特に好ましい態様においては、抗炎症活性のCO
X-2/COX-1比が約2:1〜約25:1であるフルーツエキスを得ることが望ましい。ある
実施態様においては、タルトチェリーエキスのCOX-2/COX-1比は約4.6:1であり、
チョークベリーの比は約7.5:1であり、エルダーベリーの比は約10.1:1であるこ
とがわかった。実際に、ある態様においては、この抗炎症活性は、十分に認識さ
れているCOX-2合成阻害剤のCelebrex(登録商標)の抗炎症活性より大きいもので
ある。

【００１４】従って、チョークベリー、エルダーベリー、ビルベリー、タルトベリー又はそ
の混合物が有益な抗炎症性を有することが企図される。個々の実施態様において
は、これらのフルーツエキスの1種を含んでいる栄養サプリメントが企図される
。また、2種以上のフルーツエキスを含む食物サプリメントも企図される。比較
によって、COX-2特異的阻害活性を有するというCeleberx(登録商標)抗炎症薬剤
のCOX-2/COX-1阻害活性比が7.0であることがわかった。好適実施態様においては、栄養食物サプリメントは、約0.1％〜約99％、好ま
しくは約5％〜約95％、望ましくは約10％〜約90％、更に好ましくは約30％〜約9
0％のアントシアニン含有エキスを含んでいる。アントシアニン含有エキスの量
は、上で確認されたアントシアニン含有フルーツエキス、及び他のアントシアニ
ン含有植物エキスによって与えることができる。この点では、単一剤形（即ち、単一のタブレット、カプセル、サービング(液
体にしても固体にしても)）は、約1 mg〜約500 mgの全アントシアニン、好まし
くは約5 mg〜約100 mg、更に好ましくは約20 mg〜約70 mgの全アントシアニンを
含有する。現在好ましい製剤においては、約50 mgの全アントシアニンを含有す
るタブレット（単一剤形）が提供される。『全アントシアニン』という言葉は、
単一剤形中に有するアントシアニンの全量を意味する。本発明の食物サプリメントは、単一剤形の抗炎症有効成分の量を約0.1％〜約9
9％、好ましくは約5％〜約95％、望ましくは約10％〜約90％、更に好ましくは約
30％〜約90％の範囲で与える。抗炎症有効成分は、アントシアニン含有植物、エ
キス又は抗炎症活性を与える植物又はエキス（例えば、ジンジャー、ボスウェリ
ア）由来であってもよい。

【００１５】 A. NSAIDに対する天然代替物としてのアントシアニン植物に天然に見られる有益な植物化学物質を含有する食物サプリメントがます
ます求められてきている。これらの天然に存在する植物化学物質は、数種の異な
るグループに分類し得る。重要なグループの1つは、フラボノイド類であり、こ
れもいくつかのグループに分類することができる。フラボノイド類の重要なグル
ープはアントシアニンである。アントシアニンは、チェリー（スイート、サワー
(又はタルト)）、アセロラチェリー、ブループラム、ビルベリー、ブラックベリ
ー、スグリ、チョークベリー、ブルーベリー、ストロベリー、クランベリー、ボ
イゼンベリー、グレープ、ラズベリー、又はエルダーベリーのような赤色、青色
、又は中間色をした花や果物に最も優勢である。本発明は、食物サプリメントに
抗炎症活性を与えるためのアントシアニンの使用を記載している。本発明によれば、アントシアニンは、アントシアニン含有植物のエキスから得
られる。植物がアントシアニンを含有するかを求める方法は既知であるので、こ
こでは述べない。適切なアントシアニン含有植物の例としては、スイートチェリ
ー、タルトチェリー、アセロラチェリー、プラム、ビルベリー、ブラックベリー
、スグリ、チョークベリー、ブルーベリー、ストロベリー、クランベリー、ボイ
ゼンベリー、グレープ、ラズベリー、エルダーベリー、及びその混合物からなる
群より選ばれた果実が挙げられる。

【００１６】抗炎症活性を与えるのに用いることができるアントシアニンとしては、シアニ
ジン-3-グルコシド; シアニジン-3-グルコシルルチノシド; シアニジン-3-ゲン
チビオシド; シアニジン-3-ルチノシド、シアニジン-3-サンブニグリン、シアニ
ジン-3-サンブ-5-グルコシド、シアニジン-3-ガラクトシド、ペオニジン-3-ルチ
ノシド、ペオニジン-3-グルコシド、ペオニジン-3-ガラクトシド、ペオニジン、
シアニジン、シアニジン-3-ソホロシド、ペラルゴニジン、デルフィニジン、デ
ルフィニジン-3-グルコシド、デルフィニジン-3-ガラクトシド、ペツニジン、ペ
ツニジン-3-グルコシド、ペツニジン-3-ガラクトシド、マルビジン、マルビジン
-3-アラビノシド、マルビジン-3-グルコシド、マルビジン-3-ガラクトシド、ケ
ンフェロール、ヘスペリジン、ゲンチオデルフィン、プラチコニン、シネラリン
等が含まれるがこれらに限定されない。これらの物質の化学は、下記構造を有する2-フェニルベンゾピリリウム（フラ
ビリウム）に基づいている。

【００１７】

【化１】

【００１８】この基本式が2、3、4、5、7、3' 又は5' においてヒドロキシ基又はメトキシ
基で置換される場合、得られた化合物はアントシアニジンとして知られ、水不溶
性であり、光に不安定であり、アルカリで急速に破壊され、よってほとんど植物
には見られない。しかしながら、アントシアニンは、上記化合物の配糖体であり
、安定であり、植物の葉、花又は果実に未変性物質として見られる。従って、ア
ントシアニンは、加水分解されてアントシアニジン（アグリコン形）と糖を生じ
る。天然に見られるアントシアニンの全体数は非常に大きく、多くのモノ、ジ及び
トリサッカリドが3、5又は7位でグリコシル化されることができ、3位の糖もアシ
ル化される（しばしばp-クマル酸で）ことができるからである。従って、具体的
な果実は、シアニジン、デルフィニジン、ペツニジン、ペラルゴニジン又はマル
ビジンの3,5-ジグルコシド、3-モノグルコシド、3-(6-O-p-クマリルグルコシド)
-5-グルコシド又は3-(6-O-p-クマリルグルコシド)を含む20種以上のアントシア
ニンを有することができる。アントシアニンの色は、分子構造及び存在する媒質
の物理化学的性質によって決定される。

【００１９】本発明によれば、エキスは、ペオニジン、シアニジン、ペラルゴニジン、デル
フィニジン、ペツニジン、マルビジン、ケンフェロール、ヘスペリジン、ゲンチ
オデルフィン、プラチコニン、シネラリン、それらのグリコシド誘導体、及びそ
の混合物からなる群より選ばれたアントシアニンを1種以上含有する。好適実施
態様においては、アントシアニンは、シアニジン、ペオニジン、マルビジン、ペ
ツニジン、デルフィニジン、それらのグルコシド誘導体、及びその混合物からな
る群より選ばれる。加水分解されたアントシアニン、アントシアニジンは、アントシアニンやその
グリコシド誘導体と比べてCOX阻害活性が大きいことがわかった。結果として、
本発明は、NSAIDのような現在利用できるCOX阻害剤より有利であると思われる。
アントシアニンは、COX阻害、特にCOX-1阻害があるとしてもほとんどないと思わ
れる。従って、アントシアニンを含有する食物サプリメントが摂取される場合に
は、胃腸（『GI』）管でCOX-1の阻害はほとんどなく、おそらく副作用が減少す
る。

【００２０】 B. アントシアニンの抽出方法当業者に既知のアントシアニンの抽出方法がいろいろある。これらの方法の一
部は、例えば、米国特許第5,817,354号; 同第5,200,186号; 同第5,912,363号;
同第4,211,577号; 同第4,302,200号に記載されている（それぞれの明細書の記載
は本願明細書に含まれるものとする）。米国特許第5,817,354号には、苦味の原因となる柑橘類産物からフラボノイド
類を除去する方法が記載されている。該方法は、1種以上の苦味フラボノイド類
を含有する液体とポリスチレンジビニルベンゼン樹脂とを接触させてフラボノイ
ド類を樹脂に結合する段階を含んでいる。一般的には、ポリスチレンジビニルベ
ンゼン樹脂と接触させる前に遠心分離又は限外ろ過段階を用いている。次に、樹
脂から溶離することによりフラボノイド類が収集され得る。この特許には、フラ
ボノイド類を樹脂からどのように溶離(除去)し得るかが記載されてなく、Chandr
aら（J. Agric. Food Chem., 1062-64, Vol. 41, No.7(1993)）にはアントシア
ニンを溶離するためにエタノールの使用が記載されている。次に、溶離した溶液
を減圧乾燥してエタノールが除去されている。

【００２１】米国特許第5,912,363号には、植物材料からプロアントシアニジンを抽出する
方法が記載されている。該方法には、固体の植物材料の水性混合液を、任意によ
り高圧と低酸素下で加熱する段階に続いて種々の分離、ろ過及び吸着段階、及び
吸着したプロアントシアニジンの極性溶媒による溶離が必要である。この方法は
、また、極性溶媒を該方法の溶離相への再構成及び再循環に従い、溶媒使用の減
少とコスト効果の高いプロセスがもたらされる。米国特許第4,211,577号には、不純な材料を処理して溶液中に異なるアントシ
アニンモノマー分子を確実にし、その溶液を限外ろ過膜に通過させて可溶性及び
/又は濁った巨大分子、例えば、コロイド不純物を熟成、煙霧、及び沈降を生じ
る下流に保持し、液体又は粉末として更に濃縮する下流にアントシアニンモノマ
ーを送ることによる植物アントシアニン色の抽出が記載されている。この方法で
、果実固形分を、イオン化し、脱色し、色素分子のモノマー状態を確実にするた
めに二酸化イオウ溶液で処理することができる（アントシアニンからクロモン2-
及び4-スルホネートに変化する）。溶液を限外ろ過してペクチン、タンニン、タ
ンパク質、その複合体等の巨大分子成分を上流に維持しつつアントシアニンを下
流に送る。任意により、限外ろ過した溶液から二酸化イオウをストリッピングす
るとクロメンスルホネートから最初のアントシアニンが再生する。次に、アント
シアニンは、高度に濃縮した液体に蒸発させることにより濃縮することができ、
分子内にアシル基を有する不安定な色素は定温で制御された沈殿により除去され
てもよい。

【００２２】米国特許第4,302,200号には、アントシアニンを含有する天然産物を亜硫酸イ
オン含有水溶液と85℃以上の温度で、天然産物と最初に接触している水溶液の亜
硫酸含量がSO₂で少なくとも10,000 ppmに調整される30分以内に接触させること
により天然産物からアントシアニンを抽出する方法が記載されている。米国特許第3,963,700号には、酒石酸アルカノール抽出に続いて酒石酸水素カ
リウムとして過剰量の酒石酸の制御された沈殿を用いてグレープ廃棄物のような
植物材料からアントシアニンを回収する方法が記載されている。この特許には、
更に、アントシアニンエキスで着色された人工グレープを調製するためのこれら
のアントシアニンの使用が記載されている。上記特許に記載された方法が本明細書に記載される抗炎症性のためにアントシ
アニンを生成するのに用いられることが企図される一方、本発明者らは天然源か
らアントシアニンを抽出する他の方法を開発した。本方法は、望ましくない化学物質を用いずに植物からフラボノイド類を濃縮す
る方法に関する。方法には、1種以上のフラボノイド類を含有する溶液を限外ろ
過膜に通過させて上澄みと保持物質を得る段階を含んでいる。次に、上澄みを逆
浸透膜に通過させて保持物質と浸透物を得、次に逆浸透保持物質を集める。

【００２３】限外ろ過膜の分子量区分は、好ましくは約100,000〜約1,000,000の範囲にある
。逆浸透膜の分子量区分は、好ましくは約1,000〜約10,000の範囲内にある。集めた保持物質は、本発明に記載されるCOX-2阻害抗炎症性を有する。好適実
施態様においては、食物サプリメントを得るために保持物質をこのように乾燥し
、1種以上の賦形剤と混合することができる。ここで、図1について説明する。図1は本発明の方法の実施態様を示すフローシ
ートである。本実施態様によれば、植物源1、特にフラボノイド類を含有する果
実、更に特にアントシアニン化合物を含有する果実を抽出法10で処理してエキス
又は果汁2を得る。例えば、ケークや果汁を得るために植物を搾汁操作又はねじ
プレス又はバッグプレスのような搾る操作に供することができる。また、生の植
物を粉砕、粉末又はバルク固形分から所望のフラボノイド類化合物の抽出と分離
を容易にするために植物の表面積を増大させるプロセスに供することができる。この分離を促進させるとともに所望のアントシアニン化合物の良好な最終回収
を得るために、植物と抽出用溶媒3とを接触させてフラボノイド類（特にアント
シアニン化合物）を多く含んだエキス（果汁）を得るとともにバルク固形分残渣
又はケーク4を形成することは望ましいことである。好ましくは、抽出用溶媒は
、分離処理段階をできるだけ少なくするために水である。抽出段階は、慣用の抽
出装置を用いて向流方式でバッチ、又は多重バッチ抽出を行うことができる。

【００２４】更に、所望のアントシアニン化合物の回収を高めるためにケークを同様に抽出
プロセスに供することができる。この抽出プロセス段階が行われる場合には、こ
の段階からのエキスを前の段階からの果汁及び/又はエキス（果汁）と合わせる
ことは望ましいことである。果汁は、遠心分離機、スクリーン、プレス、又はフィルターのようなバルク分
離装置を用いて既知の方法でケークから分離することができる。限外ろ過の前に
、バルク固形分を既知のバルク分離装置で液体から分離することが望ましい。例
えば、遠心分離機、フィルター、スクリーン、プレス等を用いることができる。その後、懸濁粒子と分子量が約200,000ダルトンより大きい高分子量コロイド
成分を除去するために限外ろ過プロセス20が用いられる。限外ろ過膜は、管状型
、毛管型、らせん型、中空繊維、又は他の適切な型であり得る。膜は、ポリスル
ホン、ポリアクリロニトリル、ポリエーテルスルホン、PVDF又は他の適切な材料
であり得る。好ましくは、限外ろ過はクロスフローを用いて行われる。膜の分子
量区分は、約20,000ダルトン〜約300,000ダルトン、好ましくは約200,000ダルト
ンの範囲にあり得る。限外ろ過前にろ過がない場合には、許容しうるろ過速度が
得られるように高分子量区分膜を用いることが好ましい。従って、限外ろ過段階
の前に精密ろ過を組込むことが企図される。

【００２５】例えば、サイズが約0.01〜約1マイクロメートルの範囲にある懸濁粒子を除去
するためにマイクロフィルターを用いることができる。限外ろ過は、約0.5〜2.5MPa（5〜25 bar）の圧力下で約20℃〜約80℃の温度で
行われ得る。この段階は、主に脂質、タンパク質及び類似コロイド、細胞断片、
デンプン等を除去し、ろ過速度の低下を招く膜の汚染がなく次のRO段階が行われ
得るという利点がある。限外ろ過段階によってアントシアニン化合物を多く含んだ浸透物5と望ましく
ない化合物を含有する保持物質7が得られる。フラボノイド類と所望のアントシ
アニン化合物の最終回収を高めるために、限外ろ過膜にジフィルトレート6を供
給することができる。限外ろ過浸透物5は、アントシアニン化合物を含むフラボノイド類を多く含ん
だ保持物質8、及びアントシアニン化合物を含む実質的にフラボノイド類を含ま
ない浸透物10を得るために逆浸透30に供される。フラボノイド類と所望のアント
シアニン化合物の最終回収を高めるために、ジフィルトレート9を限外ろ過膜に
供給することができる。本発明のROに用いられる膜は、ポリエーテルスルホン、
ポリスルホン、セルロースアセテート、又はポリアミド膜であり得る。

【００２６】逆浸透は、約3〜7MPa（30〜70 bar）の圧力で約30℃〜約80℃の温度で行うこ
とができる。好ましくは、温度は約30℃〜約45℃の範囲内に維持される。一般的
には、逆浸透膜の分子量区分は、保持物質を得る約1,000〜約10,000の範囲内、
好ましくは約2,000である。保持物質は、出発植物材料に見られるものより高い濃度の所望のアントシアニ
ン化合物を含有する。保持物質は、溶液の形のままであってもよいが、水の一部
を除去するために乾燥40により更に濃縮してもよく、粉末11を形成するために完
全に乾燥してもよい。濃縮した溶液が所望される場合、NaCl保持が90％より多い逆浸透膜の使用を含
む慣用の手段によって水の一部を除去することができる。噴霧乾燥が好ましい乾燥手段であるが、他の乾燥法、例えば、フラッシュ乾燥
、凍結乾燥、流動床乾燥、リング乾燥、ミクロン乾燥、トレー乾燥、真空乾燥、
高周波乾燥、又はマイクロ波乾燥もこの乾燥段階に用いられるように適合させる
ことができる。乾燥前に、マルトデキストリン（例えば、M100）、水酸化マグネシウム又は他
の既知の流れ調整剤又は担体のような1種以上の流れ調整剤を添加することは望
ましいことである。保持物質中の固形分含量の約20〜60質量％の量で流れ調整剤
を添加することは望ましいことである。

【００２７】噴霧乾燥を用いる場合、保持物質の全固形分含量は、全スラリー質量に対して
少なくとも約1％でなければならないが、少なくとも約20％〜約35％の範囲内の
高い全固形分含量が所望される。乾燥段階で除去されなければならない水の量が
減少してくるので高い固形分含量レベルが望ましい。結果として、保持物質の固
形分含量は、得ることができ、なお効率のよい処理条件を可能にする程度に高い
。保持物質中の固形分含量の上限は、典型的には、逆浸透/ナノろ過段階で用い
られる膜の操作中の束縛及び用いられる乾燥装置によって決定される。保持物質の温度は重要ではない。一般的には約10〜25℃の周囲温度が好ましい
。高いスラリー温度が用いられ、これらはあるタイプの乾燥装置において望まし
いものである。慣用の噴霧乾燥装置を用いることができ、噴霧乾燥において当業者によく知ら
れた操作手順がこのプロセスの噴霧乾燥段階に適用できる。ドライヤ（ドライヤ
ガス）の出口温度は、普通は得られた粉末で得られる残留水分レベルを制御する
ために用いられる。噴霧乾燥プロセスにおいては、ドライヤの出口温度は、普通
は約40〜100℃の範囲内である。一般的には、所望されるアントシアニン化合物
の分解の可能性をできるだけ少なくするために約80℃未満に出口温度を維持する
ことが望ましい。対応するドライヤ入口温度は高く、普通は約90℃〜約200℃の
範囲内であるが、好ましくは約150℃未満である。

【００２８】乾燥操作から回収された産物は、典型的には、微粒状粉末の外観を有しかつ食
物サプリメントとして用いるのに適した自由流動微粒状固体である。この点で、
所望される1種以上のアントシアニン化合物を含有する得られた粉末は、食物サ
プリメントとして有効である。果汁入り清涼飲料を調製するために用いることができる濃縮物12を得るために
、例えば、濃縮機50によって逆浸透の浸透物を更に処理することができる。勿論、上記は単に1つの方法であり、抗炎症活性が天然果実に見られる抗炎症
活性より大きいフルーツエキスを得るいずれの方法も本発明に関連して用いられ
ることは理解されるべきである。上記方法のいずれもが所望のアントシアニンを得るのに適しているが、本発明
の製品に必要とされる一部又は全部に市販のエキスを用いることができる。一例
として、フォートワインのアルテミスインターナショナル、インディアナ州がア
ントシアニンと他のフラボノイド類を含有する果汁濃縮液と粉末を供給している
ことは既知である。市販品を用いる場合、エキス中のアントシアニン含量は、エ
キス製品の少なくとも10質量％であることが好ましい。

【００２９】 C. アントシアニンの同定及び新規な抗炎症化合物上記には、エキスが未精製果実より抗炎症活性が高いフルーツエキスから抗炎
症活性を抽出する方法が記載されている。これらの教示を考えれば、フルーツエ
キスにそのような抗炎症活性を与える新規な化合物を含む精製組成物を得ること
も可能である。本項は、そのような化合物を精製及び同定する一般的教示を与え
ることに関する。一般的には、フルーツエキスは上記のように調製される。このフルーツエキス
は、フラボノイド化合物の混合物を含み、その一部はCOX-2選択的活性を有し、
その他はCOX-1選択的活性を有し、その他は広範囲スペクトルシクロオキシゲナ
ーゼ阻害活性を有し、その他はシクロオキシゲナーゼ阻害の認めうるほどの阻害
活性はないものである。具体的なフルーツエキスが抗炎症活性を有することを、例えば、下記の分析又
はCOX活性を測定するのに当業者に既知の他の等価な分析を用いて証明するとき
に、フルーツエキスの個々の成分を分離することは可能である。分離手法は、当
業者に周知である。例えば、当業者は、個々のフラボノイド成分を分離するため
に薄層クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー、高性能液体クロマトグラ
フィー、ペーパークロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、イ
オン交換クロマトグラフィー、スーパークリティカルフロークロマトグラフィー
等のクロマトグラフィーを用いることができる（クロマトグラフィー手法の概要
についてはFreifelder, 物理生化学の生化学と分子生物学への応用, 2nd ed., W
m. Freeman & Co., ニューヨーク, N.Y., 1982を参照されたい）。

【００３０】分配クロマトグラフィーは、2相が相互に接触している場合や1相又は2相が溶
質を構成している場合には、溶質がその2相間に配分されるという理論に基づい
ている。通常は、吸着剤と溶媒で充填されるカラムを用いる。溶質を含有する溶
液をカラムの上部に加層する。次に、溶媒をカラムに通過させ、連続して溶質を
カラム材料まで移動させることができる。次に、溶質を移動速度に基づいて集め
ることができる。2つの最も共通するタイプの分配クロマトグラフィーは、ろ紙
クロマトグラフィーと薄層クロマトグラフィー（TLC）であり、共に吸着クロマ
トグラフィーと呼ばれる。いずれの場合も、マトリックスは結合した液体を含有
している。他の分配クロマトグラフィーの例は、ガス液体クロマトグラフィーや
ゲルクロマトグラフィーである。ろ紙クロマトグラフィーは、ろ紙の形のセルロースカラム上で行われる分配ク
ロマトグラフィーの変形である。セルロースは、徹底的に乾燥したときでさえ多
量の結合した水を含有している。分配は、結合した水と展開する溶媒間で生じる
。用いられる溶媒は、しばしば水である。通常は、非常に少量の分離すべき溶液
混合液をろ紙の上方に置き、乾燥する。毛管現象によって溶媒がろ紙に流れ、試
料を溶解し、流れの向きに成分を移動させる。溶媒流れを上昇か又は降下させる
のにペーパークロマトグラムを展開させることができる。最初の実験後に移動軸
を90^o 変化させることにより二次元分離が可能である。

【００３１】薄層クロマトグラフィー（TLC）は、脂質を分離するために非常に一般的に用
いられているので、本発明の好適実施態様と考えられる。TLCは、ろ紙クロマト
グラフィーの利点を有するが、微細にし得るとともに均一層にし得る物質の使用
が可能である。TLCにおいては、固定相は、ガラス又はプラスチック平板の表面
上に一様に拡散した吸着剤層である。平板は、通常は、平板の周辺に沿って選択
した高さにテープを置くことによりウェルをつくった後に、ゲルの表面に注ぐ吸
着剤スラリーをつくることにより平板が作製される。吸着剤が乾燥した後、テー
プを取り除き、ろ紙クロマトグラフィーのろ紙のように平板を処理する。試料を
加え、平板を溶媒と接触させる。溶媒が平板の端にほとんど達するとすぐに、プ
レートを取り出し、乾燥する。蛍光、免疫学的同定、放射能の計数、又は種々の
試薬表面に噴霧して色の変化が生じることによりスポットを同定し得る。 Petriら(1994)にビルベリーエキスからのアントシアニンのTLCが記載されてい
る。この文献には、更に、アントシアニン物質の同定と確認に使用し得る分光光
度法とクロマトグラフィー法が記載されている。ガス液体クロマトグラフィー(GLC)においては、移動相は気体であり、固定相
は管又はカラムの内部面か又は固体支持体に吸着される液体である。液体は、通
常は、エーテルのような揮発性溶媒に溶解した固体として加えられる。揮発し得
る試料であってもよい試料は、ヘリウム、アルゴン又は窒素のような不活性ガス
とともに液体として導入され、加熱される。このガス状混合物が管を通過する。
揮発した化合物は、分配係数にしたがって移動気相と固定液相間で再配分される
。

【００３２】 GLCの利点は、小分子の分離にある。感度と速度は非常に良好であり、速度は
標準液体クロマトグラフィーの1000倍近い。非分解検出器を用いることにより、
グラム量の材料を精製するためにGLCを分取用に使用し得る。ゲルクロマトグラフィー、又は分子ふるいクロマトグラフィーは、分子サイズ
に基づく特殊な種類の分配クロマトグラフィーである。ゲルクロマトグラフィー
の背後にある理論は、カラムが小さな孔を有する不活性物質の小さな粒子で調製
され、サイズによっては孔の中又は孔の前後を通過するにつれて大きい分子を小
さい分子から分離することである。粒子をつくる材料が分子を吸着しない限り、
流速を決定する唯一の因子はサイズである。つまり、形が相対して一定である限
り、サイズの小さい点で分子がカラムから溶離される。ゲルクロマトグラフィー
は、分離がpＨ、イオン強度、温度等の他のすべての因子に依存しないことから
異なるサイズの分子を分離するのにまさるものはない。また、ほとんど吸着せず
、ゾーンが広がらず、溶離量が単純に分子量に関係する。ゲルクロマトグラフィーのゲル材料は、通常は不規則な構造である三次元的な
網目構造である。ゲルは、一般的には不活性であり、分析される材料と結合も反
応もせず、電荷をもたない架橋ポリマーからなる。ゲル内の充填された空間は、
液体で充填され、この液体はほとんどのゲル容量を占めている。一般的なゲルは
、デキストラン、アガロース又はポリアクリルアミドであり、水溶液として用い
られる。

【００３３】高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)は、異常な分割のピークによる極めて急
速な分離を特徴とする。これは、十分な流速を維持する非常に微細な粒子と高圧
の使用によって達成される。分離は分程度で、又は長くても1時間で達成し得る
。更に、粒子がそのように小さく稠密であり、ボイド容量が総容積の非常に小さ
な部分であることから非常に少量の試料しか必要とされない。また、バンドが狭
いので試料をほとんど希釈しないことから試料の濃縮はほとんど必要ない。光双
極子アレイ検出系によるHPLC設定は、ルチン又は他のケルセチン配糖体、フロリ
ジン、及びある種のアントシアニンのようなフラボノイド類を研究するために用
いられている(Paganga & Rice-Evans, FEBS Lett. 401(1):78-82, 1997)。逆相H
PLC勾配法は、12のアントシアニンの分離と定量評価が記載されている（Petriら
, Acta Pharm. Hung. 64(4) 117-122, 1994）。ケルセチン化合物もLairesらに
よって記載されたHPLC法を用いて確認することができる（Food Chem. Toxicol.,
31(12) 989-994, 1993）。新規なフラボノイド類を確認同定するのにそのよう
な方法を本発明に適合させることができることも企図される。アフィニティークロマトグラフィーは、分離すべき物質と特異的に結合し得る
分子間の特異的親和性に依存するクロマトグラフィー法である。これは、レセプ
ターリガンド型相互作用である。カラム材料は、結合パートナーの一方を不溶性
マトリックスに共有結合することにより合成される。カラム材料は、溶液からの
物質を特異的に吸着し得るものである。溶離は、条件を結合が起こらないものに
変えることにより起こる（pＨ、イオン強度、温度等を変える）。

【００３４】マトリックスは、分子を有意な程度までは吸着せずかつ広範囲の化学的、物理
的及び熱的安定性を有する物質でなければならない。リガンドは、結合特性に影
響しないような方法で結合しなければならない。リガンドは、また、相対して強
固に結合しなければならない。また、試料又はリガンドを破壊させずに物質を溶
離することが可能でなければならない。最も一般的な形の1つは、検出すべき具
体的な物質に対する抗体を用いる免疫親和性クロマトグラフィーである。上記の手法を用いて分離されるアントシアニンの構造は、Saitoら(Phytochemi
stry 41(6) 1613-1620, 1996; Phytochemistry 43(6), 1365-1370, 1996); Take
daら(Phytochemistry 36(3) 613-616, 1994)に記載されている質量スペクトルと
NMRスぺクトルを生成することにより同定し得る。NMR法は、更に、Teraharaら(B
ioSci. Biotech. Biochem., 58(7) 1324-1325, 1994); Nerdalら(Acta Chem. Sc
and. 46(9) 872-876, 1992)に記載されている。Johansenら(Phytochemistry 30(
12)4137-4141, 1991)には、アントシアニンの分離のためにイオン交換樹脂、小
滴向流クロマトグラフィー又はゲルろ過を含む種々の方法及び分離したアントシ
アニン化合物の確認のために化学分解、クロマトグラフィー又は分光法、特に同
核又は異核二次元NMR法の続いての使用が記載されている。上記手法のいずれも
が本明細書に記載されたフルーツエキスを分離及び精製して抗炎症活性に関与す
る個々の化合物を同定するために使用し得ることは当業者に明かである。

【００３５】 D. 抗炎症活性を試験する分析本発明においては、アントシアニン含有フルーツエキスが抗炎症活性を有する
ことが記載されている。特に、そのエキスがCOX-1活性より優先的にCOX-2を阻害
することが証明される。それだけでこれらのエキスは、COX-2に選択的であると
いう点で伝統的なNSAIDに対して優れた代替物を与える。これらのエキスは心臓
発作、卒中、又は他の有害な心臓血管事象の傾向増大に関連しない天然エキスで
あることから最近開発されたCOX-2特異的『スーパーアスピリン』より更に有利
である。酵素を最大活性の50％まで阻害する阻害剤の濃度は、IC₅₀又はI₅₀と呼ばれる
。IC₅₀が小さくなるほど、対応する阻害剤が酵素阻害に強くなり又は効力が大き
くなる。結果として、化合物が機能障害部位又は疾患部位に吸収、代謝、輸送さ
れ得る場合には、抗炎症や疼痛軽減サプリメント製剤に必要とされる阻害剤の量
は少なくなる。ある材料、化合物、又は植物濃縮物は、COX-1か又はCOX-2酵素を選択的に阻害
することができる。これを、物質の選択性と呼ぶことができる。選択性は、I₅₀(
COX-1)/I₅₀(COX-2)の比の数値で表すことができる。比が1に等しい場合には、阻
害剤はいずれのアイソザイムにも選択性がない。即ち、阻害剤は、COX-1とCOX-2
酵素を同様に阻害する。比が1未満である場合には、阻害剤はCOX-1阻害に選択的
である。比が1より大きい場合には、阻害剤はCOX-2阻害に選択的である。慢性の
抗炎症性又は疼痛の軽減剤又はサプリメントについては、選択性が副作用に重要
な役割を果たすことができる。副作用は、たいてい胃腸（GI）出血であり、プロ
スタグランジンがGI内膜で正常な機能をもつGI管に対するCOX-1酵素の阻害に起
因する。

【００３６】選択性は、非ステロール抗炎症剤(NSAID)において重要な課題である。NSAIDだ
けが、炎症部位と疼痛部位に対する吸収と輸送の予想された作用のほかに、GI管
において構成的に示されるCOX-1酵素を阻害するとともにGI出血を引き起こし得
る活性型をもっているからである。まだ証明されていないが、アントシアニン含
有植物エキスのような天然産物は、非活性型と活性型があるので、GI管で副作用
を引き起こすことができないことから有利である。吸収、代謝及び輸送の異なる
機序が存在してもよい。非活性型(糖とのグリコシド型)がCOX-1酵素を阻害せず
にGI管に吸収又はそこを通過し得ることは可能である。結果として、GI管でCOX-
1酵素によって生成されたプロスタグランジンの量は、正常又はGI内膜を維持す
るのに十分高い。吸収後、糖部分は切断され、活性型(アグリコン型、アントシ
アニジン)はCOX-2酵素が高いレベルで誘導される部位に輸送されるが、COX-1も
同様に阻害される（しかし程度は小さい）。両酵素の部位での阻害は、抗炎症と
疼痛軽減に非常に有効である。本発明のある態様においては、具体的なフルーツエキス又はその成分が抗炎症
活性を有するかを求めることが必要である。そのような活性は、当業者に周知で
ある抗炎症分析を用いて測定することができる。プロスタグランジンエンドペル
オキシドシンターゼ-1及び-2アイソザイムの使用は、具体的なエキスが適切な活
性を有するかを安易に求めることができる。これらの分析によって、アラキドン
酸をプロスタグランジンに変換する酵素の能力が求められる。また、下記の免疫
分析法を用いることができる。

【００３７】アラキドン酸やCOX-1、及びCOX-2酵素のミクロソーム懸濁液のような試薬は、
当業者に容易に入手しうる（例えば、オックスフォードバイオメディカルリサー
チ、オックスフォード、ミシシッピー州、米国から）。従って、具体的なエキスのCOX-2阻害活性は、一般的には(a)COX-2ミクロソー
ム組成物を得る段階; (b)候補エキスとCOX-2ミクロソーム組成物と混合する段階
; 及び(c)COX-2活性を阻害する候補エキスの能力を求める段階を含む方法を用い
て測定することができる。 COX-2活性は、COX-2のミクロソーム膜標品、例えば、(5〜10 mgタンパク質/ml
適切な緩衝液中)を得ることにより測定することができる。COX-2分析は、記載さ
れているO₂ 摂取率をモニターすることにより37℃で行われる(DeWittら, Am. J.
Med. 95(2A)40S-44S, 1993; Arch. Biochem. Biophys. 306(1) 96-102, 1993)
。この分析は、基本的には、アラキドン酸のプロスタグランジンエンドペルオキ
シド-2への変換を測定するものである。従って、シクロオキシゲナーゼ活性の1
単位は、1ナノモルのアラキドン酸/分の酸素化である（上記DeWittら, 1993）。
また、COX-2の活性は、COX-2酵素の産物の量を、例えば、薄層クロマトグラフィ
ー、ガスクロマトグラフィー、高性能液体クロマトグラフィー等を用いて求める
ことにより測定することができる。COX-2活性を測定する他の方法は、基質を放
射能標識する段階及びCOX-2反応の放射能標識最終産物の量をモニターする段階
を用いることである。用いられる方法に無関係に、当業者は、シクロオキシゲナ
ーゼ活性、例えば、使用したO₂/mgシクロオキシゲナーゼ/min; mg産物/mgシクロ
オキシゲナーゼ/min; μCi産生した放射能標識産物/mgシクロオキシゲナーゼ/mi
n; μCi使用した放射能標識アラキドン酸塩/mgシクロオキシゲナーゼ/minとして
最終測定を表にすることができる。

【００３８】 COX-2を阻害することができるフルーツエキスを同定するために、候補エキス
を添加していないミクロソーム標品のCOX-2活性を測定又は定量する。次に、候
補エキスを標品に添加し、候補エキスの存在下に活性を再定量する。候補エキス
が存在していないときのアラキドン酸の酸素化に相対して酸素化したアラキドン
酸の量が減少することはCOX-2阻害能を有する候補エキスを示している。 COX活性を有する他の阻害剤、例えば、アスピリン、イブプロフェン、Celebre
x(登録商標)、ナプロキセン等を用いることができる対照実験を行うことができ
る。フルーツエキスの結果を有効な既知の阻害剤の存在下のCOX-2活性と比較す
ることにより、相対的活性を求めることができる。例えば、O₂電極、クロマトグラフィー法(デンシトメトリー又は液体シンチレ
ーション分光法による最終産物の定量)による酸素消費を用いて測定した、アラ
キドン酸の酸素化の著しい減少は、少なくとも20％〜40％のCOX-2活性レベルの
低下、最も好ましくは少なくとも約50％の減少によって表され、それより高い値
も勿論可能である。アラキドン酸代謝産物を測定するクロマトグラフィー分析と
プロスタグランジン形成を測定するCOX酵素分析は、当該技術において周知であ
り、試験管内又は生体内で行うことができる。

【００３９】フルーツエキスの阻害特性の定量的試験管内試験は、本発明の栄養剤を形成す
るフルーツエキスがしばしば全体の果物に天然に見られる同じ化合物であること
が一般に認識されているので本発明には要求されない。本明細書に記載されるフ
ルーツエキスのCOX-2阻害成分を形成するアントシアニンとフラボノイド化合物
が抗炎症化合物を生じるように摂取時に生体内で更に修飾することができること
は理解されるべきである。同様に、生体内試験も必要なものとして要求されない。しかしながら、当業者
は、これらの化合物の生体内活性を試験するために炎症の動物モデルを用いるこ
とができる。例えば、上記のような分析で同定されたCOX-2阻害剤の抗炎症作用
を試験するために炎症を起こした領域をもつげっ歯類モデルを用いることができ
る。そのような動物モデルは、使用する分析に用いられ、例えば、少なくとも2
匹の動物が同じ炎症をもち、動物の1匹が候補抗炎症組成物と接触させ、もう1匹
の動物を抗炎症成分を欠いている注目すべき例外をもつ候補組成物の成分をすべ
て含む対照又はプラセボ組成物と接触させる。対照又はプラセボ組成物と接触さ
せた動物と比べて候補組成物と接触させた動物の炎症の減少は、抗炎症活性を有
する候補組成物を示している。

【００４０】 E. アントシアニンと他の抗炎症剤との組合わせ本発明は、ある態様においては、食物サプリメントの抗炎症活性が天然果実に
見られる抗炎症活性より大きいフルーツエキスを含んでいる、抗炎症性を有する
食物サプリメントの摂取を記載している。当業者は、そのような食物サプリメン
トが他の抗炎症剤と有利に組合わせることができることを理解すべきである。そ
のような追加の抗炎症剤は本発明のフルーツエキスの二次的なものであることは
当然のことであり、一般に認識された抗炎症剤であってもよく、実際に上で示し
た分析を用いて確認されるものであってもよい。追加の抗炎症剤が既知の抗炎症剤であるか又は本発明を用いて同定されるかに
無関係に、本発明は、用いることができる種々の組合わせの使用を企図する。従
って、フルーツエキスが『A』であり、その他の抗炎症剤が『B』である場合、組
合わせは次のようであってもよい。 A/B/A B/A/B B/B/A A/A/B A/B/B B/A/A A/B/B/B B/A/B/B B/B/B/A B/B/A/B A/A/B/B A/B/A/B A/B/B/A B/B/A/A B/A/B/A B/A/A/B A/A/A/B B/A/A/A A/B/A/A A/A/B/A

【００４１】フルーツエキスと追加の抗炎症剤は、生体内か又は試験管内で細胞に接触又は
曝露することができ、細胞のCOX-2活性を阻害する。細胞に加えられる場合の『
接触』や『曝露』という用語は、フルーツエキスと第2抗炎症剤が標的細胞に送
達され、標的細胞とのすぐ近位にも置かれる方法を記載するために本明細書に用
いられている。有益な効果を得るために、両方の物質を、COX-2活性を阻害する
のに、炎症を減少させるのに、及びプロスタグランジン又は細胞が位置する個々
の患者において炎症応答を減少させるような他の作用を引き起こす炎症の発生を
減少させるのに有効な組合わせ量で細胞に送達させることができる。抗炎症剤は、当業者に周知であり、サリチル酸誘導体(例えば、アスピリン)、
パラミノフェノール誘導体(例えば、アセトアミノフェン)、インドール又はイン
デン酢酸(インドメタシン、スリンダク又はエトダラク)、ヘテロアリール酢酸(
トルメチンジクロフェナク又はケトロラク)、アリールプロピオン酸誘導体(イブ
プロフェン、ナプロキセン、ケオプレン、フェノプレン、オキサプロジン)、ア
ントラニル酸(メフェナム酸、メクロフェナム酸)、エノール酸(ピロキシカム、
テノキシカム、フェニルブタゾン又はオキシフェンタトラゾン)のような薬剤を
含んでいる。これらの及び他の抗炎症剤は、当業者に周知であり、これらの薬剤
の説明を更に示すことは必要ではない。

【００４２】 F. 製剤本発明は、食物サプリメントの抗炎症活性が天然果実に見られる抗炎症活性よ
り大きい、フルーツエキスから製造された天然食物サプリメントを提供する。本
発明は、粉末、液体、又は固体の形で存在し得るフルーツエキスを提供する。個
々の製剤は、下記の実施例に示され、本項には所望される製剤の形と成分が記載
され、本発明の教示を考えれば容易に製造される。フルーツエキスは、例えば、水、ミルク又は他の類似の液体と再構成された場
合に、飲料を与え、それを必要としている患者に抗炎症活性を与えるために用い
ることができる再構成可能な粉末組成物であると思われる。粉末組成物及びそれ
らから調製される飲料は、多くの注意して設計された製品を様々な形、即ち、シ
ェーク、スープ、果汁入り清涼飲料、スナックバー又はタブレット、ゲルキャッ
プ等の他の固体で利用する疼痛又は炎症管理の計画において患者に、特に長期の
治療状態の患者に与えるために疼痛管理期間にわたって混合及び組合わせ得る。飲料のほかに、本発明のフルーツエキスは、食品に用いることができる。その
ようなフルーツエキスは、他の食品と組合わせることができる。例えば、本発明
のエキスを含有する油は、調理用油、揚げ油、又はサラダ油として用いることが
でき、マーガリン、マヨネーズ又はピーナツバターのような油性食品に用いるこ
とができる。本発明の化合物で強化した穀物粉は、焼き製品、シリアル、パスタ
又はスープのような食品に用いることができる。フルーツエキス及びそれから抽
出された新規なアントシアニンを含有する油を乳化し、上記のような飲料ミック
スを含む飲料のような種々の水性食品に使用し得る。有利には、そのような食品
を低脂肪、低コレステロール又は制限された食事療法に含めることができる。

【００４３】『栄養剤』は、栄養のため以外の利点を追加する機能食品である。この分類は
、栄養飲料、ダイエット飲料（例えば、Slimfast(登録商標)、Boost(登録商標)
等）又はスポーツ薬草飲料又は他の強化飲料を含むことができる。本発明は、抗
炎症剤として用いることができる栄養剤組成物を提供する。それだけで、関節炎
、頭痛、アレルギー疹、炎症性腸症候群、関節痛、慢性疲労、線維筋痛症等を含
むがこれらに限定されないCOX-2作用によって仲介される症状を軽減するために
使用し得る。精製したフルーツエキスのほかに、栄養剤又は食品は、必須脂肪酸、ビタミン
又はミネラルを含むがこれらに限定されない様々な他の有益な成分を含有するこ
とができる。これらの成分は、当業者に周知であるべきであるが、特に製剤又は
内容に縛られずに、本項には本発明の食物サプリメントの一部をなすことができ
る成分を簡単に記載する。栄養サプリメントの内容物と製造を記載している追加
の開示は、例えば、米国特許第5,902,797号; 同第5,834,048号; 同第5,817,350
号; 同第5,792,461号; 同第5,707,657号及び同第5,656,312号に見ることができ
る（それぞれの明細書の記載は本願明細書に含まれるものとする）。

【００４４】 γリノレン酸(ω-3)又はリノール酸(ω-6)のような必須脂肪酸は、本発明の食
物サプリメントに添加することができる。研究によって、ヒト以外の動物におい
て、n-3とn-6の脂肪酸の比は脂肪酸の絶対量より重要でさえあることがわかった
。Boudreau MDら,『アラキドン酸からのエイコサノイド生合成の抑制におけるn-
3とn-6脂肪酸の一定比の食品n-3脂肪酸による用量応答の欠除』Am. J. Clin. Nu
tr. 54:111-117(1991)。必須脂肪酸は、心臓血管の健康や免疫系の補助に関係す
る。これらの必須脂肪酸の平衡異常によってコレステロール代謝が悪くなり得る
。更に、免疫系機能が障害され、炎症を引き起こしてしまう。カルシウムもマグネシウムも特に骨の健康に関係する。カルシウムとマグネシ
ウム間の平衡異常の起こり得る影響は、骨成長と骨交替（骨の分解と蓄積）に影
響し得る骨ミネラルの平衡異常である。マグネシウムもカルシウムと同様に骨の
健康と骨粗鬆症の危険を減少することにに重要であり、これは男性にも女性にも
影響を及ぼすものである（Purvis, J.R.,『非インスリン依存性糖尿病における
選択心臓血管危険因子に対する経口マグネシウム補充因子の影響』Archives of
Family Medicine 3:503-508(1994)。

【００４５】ミネラルの亜鉛と銅は、共に心臓血管の健康に関係し、5:1の亜鉛:銅比で与え
なければならない。これらの2つのミネラルの平衡異常は、銅に対する亜鉛の拮
抗作用を引き起こし得る。この作用は、心臓血管の健康を維持する銅の体内使用
能を妨害し得る。銅に対して亜鉛が多すぎてもSOD（スーパーオキシドジスムタ
ーゼ）、重要な心臓保護酵素の体内製造能が妨害され得る。また、HDL（高密度
リポタンパク質）とLDL（低密度リポタンパク質）の適切なバランスを得るため
に適切な亜鉛：銅比が必要である。典型的な米国男性の亜鉛摂取は、亜鉛を含む
食物サプリメントが企図されるようにRDAのわずかに33〜75％である。セレン対ヨウ素の比も、セレン対ヨウ素の比が約2:1が最も効果的に機能する
。これらのミネラルは、甲状腺機能に働くので、甲状腺機能の変化による代謝に
対する作用が結果として生じる。甲状腺機能の平衡異常によって、食物から栄養
素の吸収不良が生じる体内に過度のストレスがかかり得る。これにより、成長と
発達が遅れてしまう。ピリドキシン対葉酸塩対コバラミンの比は、血管障害の予防に最も効果的に機
能する。ピリドキシン（ビタミンB6）対葉酸塩対コバラミン（ビタミンB12）の
比は、それぞれ約100:4:1である。これらのビタミンは、潜在的毒性アミノ酸ホ
モシステインのレベルを下げる能力によって心臓血管機能に働く。この比によっ
て、心臓病の危険のある個体が食事から消費されるこれらのビタミンの平衡異常
レベルと不十分なレベルが確認される。

【００４６】更に、ビタミンC、ビタミンB1（チアミン）、及びビタミンEも与え得る。ビタ
ミンCはスモーカーにおいて増加が要求され、喫煙は肺がんの主な寄与因子であ
る。ビタミンB1は、エネルギー変換に不可欠な役割を果たしている。二リン酸チ
アミン（TDP）は、炭水化物のエネルギーへの変換に必要な補酵素である。米国
男性は、現在、総カロリーの約45％を炭水化物から消費しているので、食事にお
けるビタミンB1最適化が望ましい。ビタミンB6とともに、ビタミンB12と葉酸の補充は、ホモシステインの血液レ
ベルのモジュレートを援助し、それだけで本発明の食物サプリメント製剤の有効
な成分である。ビタミンD（カルシフェロール）は、骨格の形成とミネラルホメ
オスタシスに不可欠である。ビタミンDがないと、カルシウムがどのくらい吸収
に利用できるかに無関係に小腸は十分なカルシウムを吸収することができない。
従って、ビタミンDは、強い骨の形成を援助する栄養サプリメントの成分として
必要である。金属酵素マンガンスーパーオキシドジスムターゼ（Mn-SOD）の活性化における
マンガンの役割は、他の金属酵素系（グルタミンシンテターゼ、アルギナーゼ、
及びピルビン酸カルボキシラーゼ）における同様の役割とともに明かに確認され
ている。多くの酵素系は、マンガン金属酵素でないとしてもマンガンの活性化を
受けることがわかった。マンガン-SOD結合は特に臨床的に重要であり、この形の
金属酵素が細胞のミトコンドリア膜内での唯一の作用形態であり、よってミトコ
ンドリアの保護と体内の酸化的エネルギー生産系の安定にユニークな役割を果た
すことができるからである。食物サプリメントにマンガンを含めることが望まし
い。

【００４７】サプリメントに含めることができる他の微量養分としては、ビタミンA、ビタ
ミンC、ビタミンE、リボフラビン、ナイアシン、ナイアシンアミド、パントテン
酸、ピリドキシン、コバラミン、ビオチン、イノシトール、重酒石酸コリン、ベ
タイン、又はビタミンKのようなビタミン、又はモリブデン、クロム又はカリウ
ムのようなミネラルが挙げられるがこれらに限定されない。ストレス、運動、及び他の状態は、体内にフリーラジカルをつくり、体内成分
に損傷を生じることがある。フリーラジカルを阻止するために、本発明は、上記
ビタミンC及びEのほかに次の抗酸化剤: シトラスバイオフラボノイド、混合カロ
テノイド、緑茶エキス、又はN-アセチルシステインを含めることができる。更に、味をよくするために当業者に周知の他の香料や添加剤を製剤に添加する
ことができる。例えば、製剤はジンジャー、ボスウェリア、果実香料、着色料、
防腐剤等を含有することができる。固体の形で摂取される場合、本発明の栄養剤組成物は、ゼラチンのような固体
担体又は補助剤を更に含有することができる。液体の形で投与される場合、水、
石油、動物油又は落花生油のような植物由来の油、鉱油、大豆油、又はゴマ油、
又は合成油のような液体担体を添加することができる。本発明の栄養剤組成物は
、安定剤、防腐剤、緩衝剤、抗酸化剤、又は当業者に既知の他の添加剤を含有す
ることができる。

【００４８】好適実施態様においては、食物サプリメント又は栄養サプリメント又は栄養剤
が提供され、約0.1％〜約99％、好ましくは約30％〜約90％のアントシアニン含
有フルーツエキスを含有している。この点で、単一剤形（即ち、単一タブレット
、カプセル、サービング(液体にしても固体にしても)）は、約1 mg〜約500 mgの
全アントシアニン、好ましくは約5 mg〜約100 mg、更に好ましくは約20 mg〜約7
0 mgの全アントシアニンを含有する。現在好ましい製剤においては、約50 mgの
全アントシアニンを含有するタブレット（単一剤形）が提供される。『全アント
シアニン』という言葉は、単一剤形中に有するアントシアニンの全量を意味する
。アントシアニン含有植物から得られるエキスは、ペオニジン、シアニジン、ペ
ラルゴニジン、デルフィニジン、ペツニジン、マルビジン、ケンフェロール、ヘ
スペリジン、ゲンチオデルフィン、プラチコニン、シネラリン、それらのグリコ
シド誘導体、及びその混合物からなる群より選ばれる。好適実施態様においては
、アントシアニンは、シアニジン、ペオニジン、マルビジン、ペツニジン、デル
フィニジン、それらのグリコシド誘導体、及びその混合物からなう群より選ばれ
る。

【００４９】有利には、栄養サプリメントは、COX阻害活性を与える、生体内でアグリコン
形に加水分解される安定なアントシアニンを含有する。好ましい栄養サプリメントは、エルダーベリー、タルトチェリー、ビルベリー
、及びその混合物からなる群より選ばれるフルーツエキスを含有する。更に詳し
くは、フルーツエキスは、エルダーベリーエキスをフルーツエキスの約2〜約98
質量％、タルトチェリーエキスをフルーツエキスの約1〜約49質量％、及びビル
ベリーエキスをフルーツエキスの約1〜約49質量％の量で含んでいる。好ましく
は、エキスは、約90％〜約98％（更に好ましくは約96％）のエルダーベリーエキ
ス、約1〜約5％（更に好ましくは約2％）のチェリーエキス（好ましくはタルト
チェリー）、約1％〜約5％（更に好ましくは約2％）のビルベリーエキスを含ん
でいる。この好適栄養サプリメントにおいては、シアニジンがエルダーベリーエキス中
に存在する全アントシアニンの少なくとも約90質量％を含んでいる。シアニジン
は、エルダーベリーエキス中に存在する全アントシアニンの好ましくは約95質量
％、更に好ましくは約96質量％を含んでいる。この点で、シアニジンは、シアニ
ジン-3-グルコシド、シアニジン-3-サンブニグリン、シアニジン-3,5-ジグルコ
シド、及びシアニジン-3-サンブ-5-グルコシドの混合物として存在する。

【００５０】同様に、シアニジンは、タルトチェリーエキス中に存在する全アントシアニン
の少なくとも約90質量％を含んでいる。シアニジンは、タルトチェリーエキス中
に存在する全アントシアニンの好ましくは約95質量％、更に好ましくは約96質量
％を含んでいる。エルダーベリーと対照的に、シアニジンは、シアニジン-3-ル
チノシドヘキソース、シアニジン-3-ルチノシドペントース、シアニジン-3-ルチ
ノシド、及びペオニジン-3-ルチノシドの混合物として存在する。最後に、ベルベリーは、マルビジン、ペオニジン、シアニジン、ペツニジン、
及びデレフィニジンの混合物を含有する。これらのアントシアニンのそれぞれが
ビルベリーエキス中に存在する全アントシアニンの約95質量％、更に好ましくは
約96質量％を含んでいる。更に詳しくは、マルビジンは、マルビジン-3-アラビ
ノシド、マルビジン-3-グルコシド、マルビジン-3-ガラクトシドとして存在する
。ペオニジンは、ペオニジン-3-グルコシド、ペオニジン-3-ガラクトシドとして
存在する。シアニジン、ペツニジン、及びデルフィニジンは、3-グルコシドと3-
ガラクトシドとして存在する。次は、特に好ましい実施態様においてそれぞれの個々の内容物を示す表である
。

【００５１】

【００５２】 G. 実施例次の実施例は、本発明の好適実施態様を示すために含まれる。しかしながら、
当業者は、本開示を考慮して多くの変更が開示された個々の実施態様において行
うことができ、本発明の真意と範囲から逸脱せずに同様の結果を得ることを理解
すべきである。

【００５３】実施例１ 100 kgのチェリーをバッグプレスを用いて搾り、果汁を集めた。集めた果汁を
200,000分子量区分を有する限外ろ過ユニットによって約38℃未満の温度でろ過
した。UFユニットを操作し、保持物質は質量固形分で0.5％未満を有した。その後、UFユニットからの浸透物を4,000分子量区分を有する膜を用いて逆浸
透に供した。保持物質が質量固形分で約1％以下を有するまで逆浸透段階を続け
る。保持物質をタンクに集め、真空蒸発器で約52℃未満の温度において質量固形分
で少なくとも20％まで濃縮して濃縮したフラボノイド類の分解を回避した。濃縮物をバクガデキストリンと合わせ、約27℃未満の温度で維持した噴霧乾燥
機の出口温度により噴霧乾燥した。バッグプレスからの保持したパルプを集め、乾燥し、製粉した。

【００５４】実施例２ 38.8 kgのタルトチェリーからなるバッチをバッグプレスで搾って19.3 kgの果
汁と18.6 kgのケークを得た。pＨが3.3の果汁を1770〜1950 g/minの流速、1MPa
（10 bar）の圧力、ろ過の開始の最初の29℃からろ過の終りの-7.8℃（18^oF）の
範囲内の温度で限外ろ過膜までポンプで送った。ジフィルトレートフローを開始
させ、浸透物中の溶解した固形分が約0.2質量％になるまで続けた。限外ろ過膜は、100,000分子量（ダルトン）区分が評価されたPVDF高分子膜と
した。適切な膜をPCIメンブランシステムズから商品名FPとして入手し得る。限外ろ過の終りに、質量固形分で5％を有する53.7 kgの浸透物と質量固形分で
0.3％を有する3.49 kgの保持物質を集めた。次に、浸透物を4MPa（40 bar）のフ
ィード圧、最初の1290 g/min〜終りの1380 g/minの範囲の流速、プロセスの開始
時に24℃でプロセスの完了時に5℃（41^oF）の温度でナノろ過/逆浸透に供した。
72.4 kgの水のジフィルトレートを用いた。 4,000分子量（ダルトン）区分を有するポリエーテルスルホン膜を用いた。適
切な膜をPCIメンブランシステムズから商品名ES404として入手し得る。この工程の完了時に6.4 kgの保持物質を集め、質量固形分で1％を有した。質
量固形分で2％を有する117 kgの浸透物を回収した。粉末を製造するために、保持物質を合わせ、79 gのバクガデキストリンM100と
混合し、得られた生成物を入口温度が約140℃で出口温度が約190℃の噴霧乾燥機
へ導入し、約105 gの粉末を製造した。

【００５５】実施例３フルーツエキスのCOX-2とCOX-1阻害活性の比較本実施例には、フルーツエキスのCOX阻害活性をモニターする酸素モニタリン
グシステムを用いた酵素分析が記載される。この分析においては、溶存酸素の濃
度変化が溶存酸素測定システム（インステック、プリマスミーディング、ペンシ
ルベニア州）の酸素電極により連続的にモニターされる。リニアレコーダー（フ
ィッシャサイエンティフィック、ピッツパーグ、ペンシルベニア州）で出力を記
録する。毎日新しい塩化カリウム溶液（15 g/100 ml蒸留水）をつくり、製造業者の説
明書に従って電極を設定した。チャンバを37℃に保った。

【００５６】プロスタグランジン分析キットを用い、COX-1分析と同様の方法で分析を設定
した。概要としては、37℃に1分間温めた20 mlの100 mMトリス緩衝液（ワーキン
グバッファー）に50μlのフェノールを添加した。ヘマチンチューブに0.9 mlの
ワーキングバッファーを添加した。アラキドン酸バイアルに50μlの0.1 NaOHを
添加し、撹拌した。0.43 mlの水を添加し、その溶液を混合した。試料のエキス
の質量を量り、ワーキングバッファーに0.1 g/mlの最終濃度に溶解した。バッフ
ァー、試料又は希釈試料を酵素分析に直接用いた。当業者に周知であるはずである酵素分析は、製造業者の説明書に従って行われ
る。概要としては、閉じた注入バルブをもつオーバーフロー出口と、右向きにシ
リンジに接続された主出口からチャンバへ600μlのワーキングバッファーを流し
た。1分間隔で、5μlの酵素、15μlのヘマチン溶液、6μlのバッファー又は試料
又は希釈試料及び8μlのアラキドン酸溶液を注入した。酸素濃度変化をmVに変換
し、記録した。アラキドン酸を添加したとき、酸素の消費又は酸素濃度の低下が
明らかであった。下記の表に示されるように試験した試料の中で選択性の傾向が明かであった。

【００５７】表1 COX-1とCOX-2のIC50値及び比活性 ^* この数字が大きいほどCOX-1とは反対にCOX-2に対するエキスの選択性が大きく
なる。更に、周知のCOX-2特異的阻害剤のセレブレックスに関してCOX-2の効力をモニ
ターした。

【００５８】表2 セレブレックスに相対するCOX-2の効力上記方法を用いて種々の阻害剤候補物質のCOX-2を求め、既知のCOX-2阻害剤の
セレブレックスと比較した。データからアルテミスダークチェリー試料のCOX-2に対する選択性が明らかで
ある。

【００５９】実施例４阻害剤候補物質がCOX-1か又はCOX-2を阻害するかを求める現在好ましい方法を
次に述べる。COX-1とCOX-2双方の酵素反応について6種類の異なる濃度を用いる
。標準、又は酵素反応からのPG-f2αの含量を免疫分析により定量する。標準のP
G-f2αの量を用いて標準曲線（光学濃度と濃度）をつくり、その標準曲線を用い
て試料の各酵素反応におけるPG-f2α量(回帰)を算出する。次に、同じ阻害剤候
補物質の6種類の異なる反応濃度からPG-f2αの含量を用いて試料曲線をつくる。
最後に、酵素を最大活性（阻害剤を含まない）の50％まで阻害する阻害剤候補物
質の濃度、又はIC₅₀を試料曲線から得る。一貫した結果を維持するために、各組
の実験に正の対照として阻害剤候補物質又は薬剤を用いる。 COX-1とCOX-2の酵素はケンタッキー大学のダニエルタイ博士から入手した。次
のように調製した。ケンタッキー中央血液センターから入手したヒト血小板濃縮
物からCOX-1酵素を抽出した。血小板浮遊液を1,000×gで10分間遠心分離した。
沈降物を同量のリン酸塩緩衝食塩水で洗浄し、浮遊液を更に遠心分離した。血小
板を5容量の50 mMトリスHCl緩衝液、pＨ7.5に懸濁し、4℃で3×20秒間音波処理
した。浮遊液を5,000×gで10分間遠心分離した。上清を更に100,000×gで60分間
遠心分離した。沈降物（ミクロソーム）を5 mlの50 mMトリスHCl緩衝液、pＨ7.5
に懸濁し、-80℃で200μlのアリコートに貯蔵した。この画分をCOX-1酵素源とし
て用いた。

【００６０】 COX-2cDNAを有する組換えバキュロウイルスを感染させた昆虫細胞（Sf9）から
組換えヒトCOX-2酵素を得た。概要としては、Sf9細胞（1×107）を75 cm² 組織
培養フラスコ中の20 mlのTNF-FH完全培地に播種した。細胞を1時間付着させた。
培地を除去し、多重度約10の組換えウイルスを含有する4mlのグレース培地を添
加した。細胞を72時間連続して増殖させた。500×gで10分間遠心分離により細胞
を集めた。次に、細胞を1 mlの50 mMトリスHCl、pＨ7.5緩衝液に懸濁し、0℃で3
×10秒間音波処理した。ホモジネートを5,000×gで5秒間簡単に回転させて細胞
デブリを除去した。次に、上清を-80℃で200μlのアリコートに貯蔵した。この
画分をCOX-2酵素源として用いた。

【００６１】次の緩衝液を調製した。 1. コーティングバッファー: 0.1 M NaHCO₃/Na₂CO₃, pＨ9.5 2. 酵素免疫分析（『EIA』）緩衝液: 0.9％NaCl及び0.1％ウシ血清アルブミン（
ELISA又はRISグレード）を含有する0.1 M KH₂PO₄/K₂HPO₄, pＨ7.5 3. 抗体安定化緩衝液: EIA緩衝液＋スクロース（5 g/100ml） 4. 洗浄緩衝液: 0.05％トゥイーン20 5. 酵素反応緩衝液及び試料希釈緩衝液: 50 mMトリス-HCl、pＨ7.5 6. PBS（リン酸塩緩衝食塩水）0.9％NaClを含有する10 mM KH₂PO₄/K₂HPO₄、pＨ7
.5 7. プロテインA溶液 1 mg/ml PBS (a)100 μlプロテインA溶液を19.9 mlコーティングバッファーに添加し、十分
に混合し、分配トレイに注入し; (b)200μlを各ウェルにピペットで注入し（ウ
ェルに送る前に何回もすすぐ）; (c)プレートを室温で4〜5時間又は37℃で2〜3
時間又は4℃で一晩貯蔵し; (d)100μlのEIA緩衝液を各ウェルにピペットで注入
して充填されていない場所を塞ぎ、振盪し、室温で2時間又は4℃で一晩インキュ
ベートすることにより、免疫分析のウェルを被覆した。ウェルに水を供給する場
合にはプレートを4℃で無期限に貯蔵し得る。

【００６２】次の溶液を調製した。 1. アラキドン酸: 1 mg/mlエタノール 2. イソプロテレノール: 2.5 mg/ml、用時調製 3. ヘモグロビン: 3.2 mg/ml、用時調製 4. SnCl₂: 50 mg/mlエタノール 5. HCl 1 N 6. Kブルー基質緩衝液: ネオジーン、レキシントン、ケンタッキー州 7. COX-1酵素(上記の通り): 30倍に希釈、5μl/分析を使用 8. COX-2酵素(上記の通り): 5倍に希釈、5μl/分析を使用 9. PGF-2α抗体(タイ博士) 5,000×に希釈、50μl/ウェルを使用 10.PGF-2α-HRP(タイ博士) 2,000×に希釈、100μl/ウェルを使用次のPGF-2αを調製した。 A. 1μg/ml B. 20μl A（1μg/ml）＋ 980μl EIA緩衝液----1,000 pg/50μl C. 200μl B ＋ 1.8 ml EIA緩衝液-------------100 pg/50μl D. 200μl C ＋ 1.8 ml EIA緩衝液-------------10 pg/50μl

【００６３】

【００６４】阻害剤候補物質がアントシアニン含有植物のエキスである場合、アントシアニ
ンを抽出し、濃縮し、加水分解してアグリコン形、例えば、アントシアニジンを
得た。同様に、阻害剤候補物質が市販のエキスである場合、エキスを加水分解し
てアグリコン形を得た。それぞれの場合において、試験されるアントシアニンの
アグリコン形であった。次に、加水分解したアントシアニンを試験のためにメタ
ノール中0.1％HClに溶解した。 PGF-2αはプロスタグランジンであり、阻害剤候補物質がCOX-1か又はCOX-2（
用いられる酵素に左右される）を効果的に阻害するかを求めるために酵素反応が
行われる。PGF-2αは、酵素反応によって形成されたプロスタグランジン産物か
ら減少した間接的な安定なプロスタグランジンである。酵素反応手順は次のように行った。(a)385μlの緩衝液（50 mMトリス-HCl、p
Ｈ7.5)を調製し、50μlのイソプロテレノール、10μlのヘモグロビン、5μlのSn
Cl₂、及び5μlの酵素(試験すべき酵素、例えば、上記COX-1又はCOX-2に左右され
る)と室温で混合し; (b)455μlの混合液(a)を40μlの阻害剤候補物質を有するチ
ューブ、ミックスに添加し; (c)5μlのアラキドン酸溶液を各チューブ、ミック
スに添加し、37℃で5分間インキュベートし; (d)30μlの1N HClを添加し混合す
ることにより反応を停止させ; (e)30μlの1Mトリス塩基を添加することにより中
和した。

【００６５】酵素免疫分析手順は、酵素反応によって生成したPGF-2αの量を測定する方法
である。酵素免疫分析を次の方法で行った。(a)ウェル中の液体全部を振ってペ
ーパータオルにブロットし; (b)200μlの洗浄緩衝液で2回洗浄し、振ってブロッ
トし; (c)50μlのPGF-2α抗体を添加し; (d)50μl STD（PGF-2α）又は上の酵素
反応産物（EIA緩衝液で50Xに希釈した）; (e)100μlのPGF-2α-HRP（EIA緩衝液
中）; (f)振盪し、プレートを室温で1時間放置し; (g)工程(b)を繰り返すことに
よりウェルを3回洗浄し; (h)100μlの基質緩衝液を各ウェルに添加し; (i)発色
によって3〜30分間室温でインキュベートし; (j)コンピュータと96ウェルバイオ
アッセイリーダーをつけ、操作説明書に従い（モレキュラーデバイシーズ、Vmax
速度論的マイクロプレートリーダー）; (k)30μlの1N HClを添加して反応を終了
させ; (l)420 nmで読取り; (m)データを記録する。 (a)データをスプレッドシートにコピーし、(b)標準PGF-2α免疫分析結果に従
って標準曲線を作り; (c)標準曲線からの回帰を用いてすべての試料酵素反応に
おけるPGF-2αを見出し; (d)各試料の曲線を描き; (e)IC₅₀を求めることにより
データを分析する。この手順に従って、数種の阻害剤候補物質を評価し、結果を
下記表3に示す。

【００６６】表3 Aは7％のアントシアニンを有する40％ビルベリーを含有するタブレットである
。 Bは25％ビルベリーを含有するニュートリテック製の市販のエキスである。 Cは試料Bと異なる製造ロットからの25％ビルベリーを含有するニュートリテッ
ク製の15％がアントシアニンである39.17％のエルダーベリーを含有するタブレ
ットである。 Eは20％がアントシアニンである39.1％のエルダーベリーを含有するタブレッ
トである。 Fは15％がアントシアニンである11.76％のエルダーベリー及び7.2％がアント
シアニンである19％のビルベリーを含有するタブレットである。エルダーベリーの98％がシアニジンとその配糖体である。ビルベリーの23％が
シアニジンとその配糖体である。上記から高いシアニジン含量が効力と選択性を高めることは明かである。

【００６７】実施例5 上記実施例4に記載された手順に従って、多くの阻害剤候補物質を評価した。
表4に結果を示す。

【００６８】表4 注: 1. 全アントシアニンは果実試料全部のシアニジン-3-グルコシドとして定量
する。 2. 活性成分の含量は試験結果と活性化合物の％に基づいて計算する。例えば
、エルダーチェリー、チョークベリー又はタルトチェリー中の100％のアントシ
アニンは活性物質シアニジン配糖体である。 ^* はCOX阻害活性が加水分解しXADカラム精製した果実から試験されることを意
味する。上記結果によれば、炎症治療用食物サプリメントのCOX-1阻害とCOS-2阻害は、
少なくとも1、好ましくは1.3より大きい。結果として食物サプリメントはCOX-2
を選択的に阻害する。

【００６９】製剤本実施例は、抗炎症剤として用いられるアントシアニン含有植物からのフルー
ツエキスを1種以上含有する製剤を示すものである。これらは単に例示製剤であ
り、これらの製剤が具体的な説明に従って変更することができ、本発明の製剤と
等価のままであることを当業者は理解するであろう。

【００７０】表5 抗炎症製剤1

【００７１】表6 抗炎症製剤2

【００７２】表7 抗炎症製剤2

【００７３】本明細書に開示され特許請求された組成物及び/又は方法はすべて本開示を考慮して過度に実験することなく行われ得る。本発明の組成物及び方法を好適実施
態様によって記載してきたが、本発明の概念、真意及び範囲から逸脱することな
く本明細書に記載された組成物及び/又は方法及び工程又は工程順序に変更を加
えることができることは当業者に明かである。特に、本明細書に記載される物質
を化学的及び生理的双方に関係するある種の物質に置き換えることができるとと
もに同じ又は類似した結果が得られることは明かである。当業者に明かなそのよ
うな類似の置換や変更はすべて前記特許請求の範囲によって定義される本発明の
真意、範囲及び概念内にあると考えられる。

【図面の簡単な説明】

【図１】アントシアニン含有植物から望ましいアントシアニンを獲得及び濃縮する方法
の実施態様を示すフローシートである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 9/20 Ａ６１Ｋ 9/20 9/48 9/48 35/78 35/78 ＣＨＫＡ６１Ｐ 1/00 Ａ６１Ｐ 1/00 11/06 11/06 17/00 17/00 19/02 19/02 25/04 25/04 29/00 29/00 37/08 37/08 43/00 １１１ 43/00 １１１ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ワンハイボアメリカ合衆国カリフォルニア州 93720 フレスノイーストオークアベニュー 2203 (72)発明者ダウィットディヴィッドエルアメリカ合衆国ミシガン州 48864 オークモスヒューレット 4311 (72)発明者クレンピンディヴィッドダブリューアメリカ合衆国カリフォルニア州 92591 テメキューラコートコンテラ 30150 (72)発明者キアンヨンアメリカ合衆国カリフォルニア州 92126 サンディエゴハーリントンドライヴ 8843 (72)発明者モーディデュパックケイアメリカ合衆国カリフォルニア州 92592 テメキューラコートリアルト 43391 Ｆターム(参考） 4B018 LB10 LE03 MD52 ME14 MF01 MF06 4C076 AA09 AA22 AA29 AA36 AA53 BB01 CC01 CC04 CC29 4C086 AA01 AA02 EA11 MA02 MA04 MA23 MA28 MA35 MA37 MA52 NA14 ZA08 ZA59 ZA66 ZA89 ZA96 ZB11 ZB13 4C088 AB12 AB51 AB56 AB62 AC04 BA08 CA11 CA17 MA02 MA23 MA35 MA37 MA43 MA52 NA14 ZA08 ZA59 ZA66 ZA89 ZA96 ZB11 ZB13

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】抗炎症性を有する食物サプリメントであって、 a. 抗炎症活性が天然果実に見られる該抗炎症活性より大きいアントシアニン強
化フルーツエキス、及び b. 薬学的に許容しうる希釈剤又は賦形剤、を含む、前記食物サプリメント。
【請求項２】該フルーツエキスが、スイートチェリー、タルトチェリー、
アセロラチェリー、プラム、ビルベリー、ブラックベリー、スグリ、チョークベ
リー、ブルーベリー、ストロベリー、クランベリー、ボイゼンベリー、グレープ
、ラズベリー、エルダーベリー、及びその混合物からなる群より選ばれた果実由
来である、請求項1記載の食物サプリメント。
【請求項３】該エキスの該抗炎症活性がシクロオキシゲナーゼの阻害によ
って仲介される、請求項1記載の食物サプリメント。
【請求項４】該エキスが、シクロオキシゲナーゼ1（COX-1）阻害活性より
シクロオキシゲナーゼ2（COX-2）阻害活性の方が大きい、請求項1記載の食物サ
プリメント。
【請求項５】該エキスが、シクロオキシゲナーゼ2（COX-2）阻害活性より
シクロオキシゲナーゼ1（COX-1）阻害活性の方が大きい、請求項1記載の食物サ
プリメント。
【請求項６】 COX-2阻害活性対COX-1阻害活性の比が約1:1〜約25:1である
、請求項4記載の食物サプリメント。
【請求項７】該抗炎症阻害活性が、ペオニジン、シアニジン、ペラルゴニ
ジン、デルフィニジン、ペツニジン、マルビジン、ケンフェロール、ヘスペリジ
ン、ゲンチオデルフィン、プラチコニン、シネラリン、それらのグリコシド誘導
体、及びその混合物からなる群より選ばれたアントシアニンによって仲介される
、請求項1記載の食物サプリメント。
【請求項８】該フルーツエキスが、1種以上のアントシアニンを該エキス
の少なくとも約10質量％の量で含有している、請求項1記載の食物サプリメント
。
【請求項９】該フルーツエキスが、シアニジン、そのグリコシド誘導体、
及びその混合物からなる群より選ばれたアントシアニンを含有している、請求項
1記載の食物サプリメント。
【請求項１０】ゲル、カプセル、タブレット、シロップ、飲料又は粉末に
処方される、請求項1記載の食物サプリメント。
【請求項１１】該抗炎症活性が、天然果実の該抗炎症活性の約2〜約100倍
である、請求項1記載の食物サプリメント。
【請求項１２】抗炎症活性を有する植物又はエキスを更に含んでいる、請
求項1記載の食物サプリメント。
【請求項１３】ヒトにおいてCOX-2を阻害する方法であって、COX-1の阻害
の方がCOX-2の阻害より少ないようにアントシアニンがアグリコン形に加水分解
されるアントシアニン含有エキスを供給する段階を含む、前記方法。
【請求項１４】細胞においてCOX-2活性を阻害する方法であって、該細胞
と、スイートチェリー、タルトチェリー、アセロラチェリー、プラム、ビルベリ
ー、ブラックベリー、スグリ、チョークベリー、ブルーベリー、ストロベリー、
クランベリー、ボイゼンベリー、グレープ、ラズベリー、エルダーベリー、及び
その混合物からなる群より選ばれた抗炎症活性が天然果実に見られる該抗炎症活
性より大きいフルーツエキスとを接触させる段階を含む、前記方法。
【請求項１５】該細胞が哺乳動物細胞である、請求項14記載の方法。
【請求項１６】該細胞がヒト細胞である、請求項15記載の方法。
【請求項１７】該細胞を試験管内で該フルーツエキスと接触させる、請求
項14記載の方法。
【請求項１８】該細胞を生体内で接触させる、請求項14記載の方法。
【請求項１９】動物において炎症応答を治療する方法であって、 a. 抗炎症活性が天然果実に見られる該抗炎症活性より大きいフルーツエキス、
及び b. 薬学的に許容しうる希釈剤又は賦形剤、を含む組成物を該動物に投与する段階を含む、前記方法。
【請求項２０】該炎症応答が、関節炎、疼痛、アレルギー疹、炎症性腸症
候群、及び喘息からなる群より選ばれる、請求項19記載の方法。
【請求項２１】該フルーツエキスが、ペオニジン、シアニジン、ペラルゴ
ニジン、デルフィニジン、ペツニジン、マルビジン、ケンフェロール、ヘスペリ
ジン、ゲンチオデルフィン、プラチコニン、シネラリン、それらのグリコシド誘
導体、及びその混合物からなる群より選ばれたアントシアニンを含有している、
請求項19記載の方法。
【請求項２２】該COX-2が選択的に阻害されるように該アントシアニンが
生体内で加水分解される、請求項21記載の方法。
【請求項２３】アントシアニン含有植物からアントシアニンを濃縮する方
法であって、 a. 該植物と水の混合物をホモジナイズしてペオニジン、シアニジン、ペラルゴ
ニジン、デルフィニジン、ペツニジン、マルビジン、ケンフェロール、ヘスペリ
ジン、ゲンチオデルフィン、プラチコニン、シネラリン、それらのグリコシド誘
導体、及びその混合物からなる群より選ばれたアントシアニンを1種以上含有す
る水溶液と、固形分を形成する段階、 b. 該固形分を該溶液から分離する段階、 c. 該水溶液を、分子量区分が約100,000〜約1,000,000の範囲内にある限外ろ過
膜を通過させて上澄みを得る段階、 d. 該上澄みを分子量区分が約1,000〜約10,000の範囲内にある逆浸透膜を通過さ
せて該アントシアニンを多く含んだ保持物質を得る段階、 e. 該保持物質を集める段階、及び f. 該保持物質を約80℃より低い温度で乾燥する段階、を含む、前記方法。
【請求項２４】集めた該保持物質に流れ調整剤を添加して混合物を形成し
、乾燥する該段階が該混合液を噴霧乾燥して粉末を形成することにより達成され
る、請求項23記載の方法。
【請求項２５】該粉末と賦形剤とを合わせて食物サプリメントを得る、請
求項24記載の方法。