WO2005030233A1 - 活性酸素消去剤及びその製造方法 - Google Patents

活性酸素消去剤及びその製造方法 Download PDF

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WO2005030233A1
WO2005030233A1 PCT/JP2004/012951 JP2004012951W WO2005030233A1 WO 2005030233 A1 WO2005030233 A1 WO 2005030233A1 JP 2004012951 W JP2004012951 W JP 2004012951W WO 2005030233 A1 WO2005030233 A1 WO 2005030233A1
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anthocyanin
acerola
decomposition
oxygen scavenger
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Takayuki Hanamura
Toshihiko Hagiwara
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Nichirei Foods Inc.
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    • C07D311/60—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with aryl radicals attached in position 2
    • C07D311/62—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with aryl radicals attached in position 2 with oxygen atoms directly attached in position 3, e.g. anthocyanidins

Definitions

  • the present invention relates to an active oxygen scavenger containing an anthocyanin-based pigment decomposition product and a method for producing the same.
  • Active oxygen is oxygen in a highly reactive energy state, specifically, OH-
  • phagocytic cells such as neutrophils, monocytes, and macrophages migrate to the local area and start phagocytosis on the invading bacteria and viruses.
  • phagocytic cells such as neutrophils, monocytes, and macrophages migrate to the local area and start phagocytosis on the invading bacteria and viruses.
  • Patent Document 1 a water-soluble antioxidant derived from safflower leaves and Z or stem is selected from Patent Document 2, and plum is selected from plum, Seiyounatsuyuki, Bengal Karatachi, Miracle Berry, Yaba Santa, and Lemongrass.
  • Patent Document 3 discloses an active oxygen scavenger and an iridescent cosmetic composition containing one or more plant extracts, and Patent Document 3 discloses an active oxygen scavenger containing an extract of cotton and Z or yellow flower water lily as an active ingredient. It has been disclosed.
  • anthocyanin pigments are pigments abundant in plants and the like, and It is used as a coloring agent by utilizing the color tone.
  • anthocyanin dyes are known to have active oxygen scavenging activity, and are widely used in health foods and beverages such as supplements.
  • Anthocyanin dyes are generally unstable dyes. Under alkaline conditions, the C ring opens and is decomposed, resulting in fading. It is also easily decomposed and discolored by the influence of temperature, light, etc., but is relatively stable under acidic conditions.
  • Acerola a tropical fruit of the genus Hiraguratrano, is a plant rich in anthocyanin pigments. Since the acerola fruit is acidic, the anthocyanin pigment should be stable unless light or heat is applied. In addition, acerola contains a very large amount of vitamin C per 100 g of fruit, in addition to the anthocyanin pigment, which is about 1,500 mg per 100 g of fruit.As a result, the anthocyanin pigment is easily decomposed without applying light or heat. And fade. It is also known that a small amount of iron contained in acerola promotes further decomposition.
  • Degradation of anthocyanin pigments caused by vitamins C and Z or metals that occur in acerola's discoloration is a mechanism with a different mechanism than that of 'degradation by PH, temperature, light, etc.' It is also known whether the active oxygen scavenging activity of the dye is maintained after decomposition and fading.
  • Patent Document 1 JP-A-2002-38151
  • Patent Document 2 JP 2003-183120
  • Patent Document 3 Japanese Patent Application Laid-Open No. 2003-246747
  • An object of the present invention is to provide an active oxygen scavenger and a method for producing the same.
  • An object of the present invention is to provide an active oxygen scavenger containing an anthocyanin-based pigment decomposed product derived from acerola, and a method for producing the same.
  • the present inventors have conducted intensive studies to solve the above-mentioned problems, and as a result, have found that It has been found that the decomposed product of tosyanine dyes has active oxygen scavenging activity.
  • the present inventors have also found that a decomposition product obtained by decomposing an anthocyanin-based pigment with vitamins C and Z or a metal has an active oxygen elimination activity.
  • the present inventors have further found that the active oxygen scavenging activity increases as the decomposition of these decomposition products progresses.
  • anthocyanin-based dye a method has been hitherto known in which an alkyl peroxyl radical is reacted with an anthocyanin-based dye, whereby the anthocyanin-based dye is decomposed to generate protocatechuic acid ( Lipids, Vol. 31, No. 12 (1996), ppl259-1263) 0
  • Protocatechuic acid is a strong active oxygen scavenger, and therefore, when anthocyanin dyes are decomposed by such a method, the decomposition products are also strong. Active oxygen scavenging It is expected to retain activity.
  • vitamin C and Z or a metal is allowed to act on the anthocyanin pigments.
  • the analysis showed that protocatechuic acid was produced and that it was obvious. From this, it is clear that the mechanism of anthocyanin-based pigment decomposition is different between the above-mentioned known literature and the present invention. Furthermore, it has not been found that the active oxygen scavenging activity increases as the decomposition of anthocyanin-based pigment degradation products proceeds.
  • the present invention includes the following inventions.
  • An active oxygen scavenger containing an anthocyanin-based pigment decomposition product derived from acerola as an active ingredient is an active oxygen scavenger containing an anthocyanin-based pigment decomposition product derived from acerola as an active ingredient.
  • a method for producing an active oxygen scavenger comprising decomposing an anthocyanin-based pigment derived from acerola.
  • An active oxygen scavenger containing, as an active ingredient, a treated product obtained by treating fruit juice derived from acerola or an extract or treated product thereof at 30 ° C. to 90 ° C.
  • An active oxygen scavenger containing an anthocyanin-based pigment decomposition product obtained by decomposing an anthocyanin-based pigment with vitamins C and Z or a metal obtained by decomposing an anthocyanin-based pigment with vitamins C and Z or a metal.
  • An active acid including decomposing anthocyanin pigments with vitamins C and Z or a metal A method for producing an element-erasing agent.
  • the active oxygen scavenger of the present invention contains an anthocyanin-based pigment decomposition product having active oxygen scavenging activity, and is effective for preventing and treating various diseases and aging related to active oxygen. .
  • the present invention also provides a use of an anthocyanin-based pigment decomposition product which has not been used conventionally.
  • the active oxygen scavenger derived from acerola provided in the present invention is derived from a natural component, and thus has little problem of side effects.
  • FIG. 1 is a view showing a change over time in the active oxygen scavenging activity of an anthocyanin-based pigment decomposition product generated by fading of acerola juice.
  • Fig. 2 is a graph showing the time-dependent change in the active oxygen scavenging activity of an anthocyanin-based pigment decomposition product produced when acerola-based purified anthocyanin-based pigment is faded in the presence of vitamin C and iron. is there.
  • Fig. 3 is a graph showing the time course of the DPPH radical scavenging activity of an anthocyanin-based pigment degradation product generated when a standard siadin chloride is faded in the presence of vitamin C and iron. is there.
  • the present invention relates to an active oxygen scavenger containing an anthocyanin-based pigment decomposition product derived from acerola and a method for producing the same.
  • acerola juice obtained by squeezing acerola fruit is Although it can be used as it is, it may be used after pulverizing the fruit by crushing, pulverizing, or the like, or may be used as an extract or processed product thereof.
  • the organic solvent used for the extraction is preferably a hydrophilic organic solvent.
  • the hydrophilic organic solvent include alcohols such as methyl alcohol, ethyl alcohol, glycerin, propylene glycol, and 1,3-butylene glycol, cetone, tetrahydrofuran, acetonitrile, 1,4-dioxane, pyridine, dimethyl sulfoxide, and the like.
  • Known organic solvents such as ⁇ , ⁇ -dimethylformamide, acetic acid and the like can be mentioned.
  • the above hydrophilic organic solvents, particularly methyl alcohol and ethyl alcohol are preferably used as a mixture with water.
  • the extraction conditions are not particularly limited, but a preferred temperature range is 5 ° C to 90 ° C, particularly 20 ° C to 40 ° C.
  • the extraction time is preferably about 1 hour to 10 hours, particularly about 1 hour to 12 hours.
  • the amount of the solvent used for the extraction is preferably 1 to 20 times the mass of the raw material.
  • the extraction residue is removed by filtration or centrifugation to obtain an extract.
  • This extract can be concentrated if necessary.
  • the acerola juice thus obtained or its extract or processed product contains an anthocyanin pigment, vitamin C and iron, and can be obtained without adding vitamin C and Z or a metal.
  • the anthocyanin pigments can be decomposed by vitamin C and Z or iron to decompose.
  • acerola juice or its extract or processed product may be supplemented with vitamins C and Z or a metal.
  • Decomposition conditions are not limited, but for example, a decomposition temperature of 30 ° C to 90 ° C is preferable.
  • the decomposition time can be changed as appropriate depending on the decomposition temperature.For example, if the decomposition temperature is as low as 30 ° C, it is about 10 to 50 days, and if the decomposition temperature is as high as 90 ° C, it is about 1 to 15 hours. Is preferred.
  • Particularly preferred decomposition conditions are 10 days to 50 days at a low temperature of 30 ° C. to 50 ° C.
  • anthocyanin-based dyes include sia-zine, manolevidin, delphi-zine, petunidin, zeo-dine, pelarg- ozine, and glycosides using these as aglycones, and in particular, sia-zine. ! /, That glycoside is preferred! / ,.
  • vitamin C commonly available vitamin C may be used.
  • the metal used for the decomposition is not particularly limited as long as it promotes the decomposition of the anthocyanin dye, and examples thereof include metal salts such as iron and copper, and iron is particularly preferable. .
  • the amount of added vitamin C of vitamin C is preferably 5 to 100 times, particularly preferably 50 to 100 times the amount of the anthocyanin pigment.
  • the amount of metal added is preferably in the range of 1/10 to 1/2, particularly preferably in the range of 1/10 to 1/4 of that of the anthocyanin pigment.
  • the conditions for the decomposition are not particularly limited, but the decomposition can be performed in the same manner as the decomposition of the anthocyanin-based pigment derived from acerola described above.
  • the anthocyanin-based pigment decomposition product of the present invention can be used as an active oxygen scavenger as a mixture with vitamin C and a metal, but after the production, a purification step for removing remaining vitamin C, a metal and the like is performed. You may.
  • the purification method include normal-phase or reverse-phase chromatography, ion-exchange chromatography, and gel filtration. In particular, use of reverse-phase chromatography is preferred. Also, these methods can be used in combination.
  • the active oxygen scavenger of the present invention can be formulated by combining acerola juice, an extract or purified product, or an anthocyan-based pigment decomposition product with a known pharmaceutical carrier.
  • the administration form is not particularly limited and may be appropriately selected as necessary. In general, tablets, capsules, granules, fine granules, powders, liquids, syrups, suspensions, emulsions, elixirs, etc. Or oral, or parenteral preparations such as injections, drops, suppositories, inhalants, transdermal absorbents, transmucosal absorbents, patches and ointments.
  • the addition amount of the active oxygen scavenger of the present invention varies depending on conditions such as the type of the object to be added, the use form, and the like. preferable.
  • the dosage of the active oxygen scavenger of the present invention varies depending on the age, weight, degree of disease, and administration route of the patient, but for oral administration, usually 10 mg / day as dry powder of acerola extract. It is 3000 mg, and the frequency of administration is usually one to three times a day for oral administration.
  • Oral preparations are produced by an ordinary method using excipients such as starch, lactose, sucrose, mannitol, carboxymethylcellulose, corn starch, inorganic salts and the like.
  • a binder In this type of preparation, a binder, a disintegrant, a surfactant, a lubricant, a fluidity promoter, a flavoring agent, a coloring agent, a fragrance, and the like may be used in addition to the excipients as appropriate.
  • a binder a disintegrant, a surfactant, a lubricant, a fluidity promoter, a flavoring agent, a coloring agent, a fragrance, and the like may be used in addition to the excipients as appropriate.
  • a disintegrant e.g., a surfactant, e.g., a surfactant, a lubricant, a fluidity promoter, a flavoring agent, a coloring agent, a fragrance, and the like may be used in addition to the excipients as appropriate.
  • a disintegrant e.g., a surfactant, e.g., a lubricant, e.g., a
  • binder examples include crystalline cellulose, crystalline cellulose 'carmellose sodium, methylcellulose, hydroxypropylcellulose, low-substituted hydroxypropylcellulose, hydroxypropinolemethinoresenorelose, and hydroxypropinolemethinoresenorelose.
  • disintegrants include crystalline cellulose, methylcellulose, low-substituted hydroxypropinoresenololeose, canolemelose, canolemelose kanoresum, canolemelose sodium, croscarmellose sodium, wheat starch, rice starch , Corn starch, potato starch, partially alpha starch, hydroxypropyl starch, sodium carboxymethyl starch and tragacanth.
  • surfactant examples include soybean lecithin, sucrose fatty acid ester, polyoxyl stearate, hydrogenated castor oil of polyoxyethylene, polyoxyethylene polyoxypropylene glycol, sorbitan sesquioleate, sorbitan trioleate, and monoester. Sorbitan stearate, sorbitan monopalmitate, sorbitan monolaurate, polysorbate, Glycerin monostearate, sodium lauryl sulfate and lauromacrogol are mentioned.
  • lubricant examples include wheat starch, rice starch, corn starch, stearic acid, calcium stearate, magnesium stearate, hydrated silicon dioxide, light silicic anhydride, synthetic aluminum silicate, and dried hydroxy acid.
  • examples include dani aluminum gel, talc, magnesium aluminate metasilicate, calcium hydrogen phosphate, anhydrous calcium hydrogen phosphate, sucrose fatty acid esters, waxes, hydrogenated vegetable oils, and polyethylene glycol.
  • fluidity promoter examples include hydrous silicon dioxide, light caustic anhydride, dry aluminum hydroxide gel, synthetic aluminum silicate, and magnesium silicate.
  • the active oxygen scavenger of the present invention may contain a flavoring agent and a coloring agent.
  • the active oxygen scavenger of the present invention is also used in accordance with ordinary methods for skin care cosmetics such as lotions, emulsions, creams, packs, and cleaning agents, makeup cosmetics such as lipsticks and foundations, and hair cosmetics. Can be added.
  • the active oxygen scavenger of the present invention can be further added to foods, candy, troches, jams, gums, beverages and the like according to a conventional method.
  • the active oxygen scavenger of the present invention can be used as it is as an extract dry powder. Further, it may be a so-called food for specified health use (for example, a food for preventing arteriosclerosis).
  • Metals such as acerola, anthocyanin pigments, vitamin C and iron used in the production of the active oxygen scavenger of the present invention have been used in cosmetics, foods and the like to date, and their safety has been established. I have.
  • Acerola was squeezed with gauze, and the juice obtained after centrifugal filtration was treated with vectorinase for 2 hours to eliminate viscosity.
  • the obtained solution was sterilized with a filter, and then aseptically incubated at 40 ° C. for about one month.
  • the red color of the acerola juice gradually faded, and after 5 days completely faded.
  • the bleached juice is applied to a C18 cartridge column (BAKERBOND spe (registered trademark) C18 disposable monkey column), and washed thoroughly with distilled water.
  • the column adsorbed fraction was eluted with 0.2% TFA / methanol solution.
  • the obtained eluate was concentrated using an evaporator, and then redissolved in the same amount of distilled water as the bleached juice applied to the column.
  • the active oxygen scavenging activity was evaluated for the sample obtained by the above-described operation, and the sample obtained by diluting the sample two and four times.
  • the reactive oxygen scavenging activity was evaluated by the scavenging activity of superoxide-one radical by xanthine-xanthine oxidase reaction system, and ESR was used for detection of radical.
  • DMPO (5,5-dimethyl-l-pyrroline-N-oxide) 15 ⁇ 1, 50 mM phosphate buffer ( ⁇ 7.4) 50 ⁇ 1, sample 501, 2 mM hypoxanthine / phosphate buffer solution 501, 0.4 unit / ml xanthine oxidase (XOD) I phosphate buffer 501 was mixed, and ESR measurement was performed 45 seconds after the addition of XOD.
  • the ESR device was JES ESR (JES-FR30), and the spectrum analysis by ESR was performed under the following conditions:
  • Magnetic field sweep width 335.9 ⁇ 5mT
  • magnetic field modulation 0.1mT
  • amplification factor 100
  • sweep time 2 minutes response time
  • FIG. 1 shows the measurement results.
  • FIG. 1 shows that the active oxygen scavenging activity tended to increase as the decomposition of the juice progressed.
  • Example 1 From Example 1, the power of the acerola juice, in which the active oxygen elimination activity tended to increase as the decomposition progressed, was observed.In this system, the effects of components other than the anthocyanin dye can be considered, so that acerolaca also purified the anthocyanin dye. Then, the same experiment was performed in a simple system using a purified dye. [0065] The final concentrations of the anthocyanin pigment, vitamin C, and iron chloride purified from acerola were adjusted to 0.2, 10, and 0.02 mg / ml according to the content of acerola fruit in a 0.1 M acetate buffer (pH 3). .0) and incubated at 40 ° C for about 1 month.
  • the prepared solution after 0, 7, 14, 21, 28, and 35 days of incubation is applied to a C18 cartridge column, washed thoroughly with distilled water, and the fraction adsorbed on the C18 column is washed with 0.2% TFA / methanol solution. Eluted.
  • the obtained eluate was concentrated by an evaporator, and then redissolved in the same amount of distilled water as the prepared solution applied to the column.
  • the active oxygen scavenging activity was evaluated for the sample obtained by the above operation and the sample obtained by diluting the sample by 2, 4, 8, and 16 times.
  • Example 1 The method for evaluating the active oxygen scavenging activity is the same as in Example 1.
  • FIG. 2 shows the measurement results.
  • the active oxygen scavenging activity As shown in FIG. 2, as in the case of acerola juice, there was a tendency for the active oxygen scavenging activity to increase as the pigment decomposition progressed.
  • This experiment was performed in a simple system, and the components adsorbed on the C18 column were limited to anthocyanin-based pigment decomposition products. In fact, the power of examining the vitamin C content of this adsorbed component Vitamin C was not detected at all. Therefore, it was found that the active oxygen scavenging activity of the anthocyanin-based dye in Acerola increased as the decomposition proceeded.
  • a standard siadin chloride was adjusted to a concentration of 0.075mg / ml in a 0.1M acetate buffer (
  • Evaluation was performed by the DPPH method. 2.5 ml of 0.1 M phosphate buffer (pH 6.5), 99% ethanol in 0.5 ml of sample Nord 1.0ml, mixed 5 X 10- 4 M DPPH- ethanol solution 1.0ml and allowed to stand at room temperature. The absorbance at 525 nm was measured over time to evaluate the radical scavenging activity.
  • the active oxygen scavenger of the present invention is effective for preventing and treating various diseases and aging related to active oxygen.

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Abstract

　活性酸素消去剤及びその製造方法を提供する。 　アセロラ由来のアントシアニン系色素分解物を有効成分として含有する活性酸素消去剤及びその製造方法、並びにビタミンＣ及び／又は金属で分解したアントシアニン系色素分解物を含有する活性酸素消去剤及びその製造方法。

Description

明 細 書
活性酸素消去剤及びその製造方法
技術分野
[0001] 本発明は、アントシァニン系色素分解物を含有する活性酸素消去剤及びその製造 方法に関する。
背景技術
[0002] 活性酸素とは、反応性に富んだエネルギー状態にある酸素で、具体的には、 OH—
(ヒドロキシラジカル）、 O—(スーパーォキシドア-オン)及び H O (過酸化水素）を指
2 2 2
す。これらは生体内において種々の反応に関与し、疾病や老化の原因となり得ること が報告されている。
[0003] 例えば、生体内に細菌やウィルスが侵入すると、当該局所に食細胞である好中球、 単球、マクロファージが遊走し、侵入した細菌やウィルスに対し食作用を開始し、引き 続き O—を生産して、この O—が殺菌、殺ウィルス及び殺感染細胞作用を及ぼし、生
2 2
体の自己防衛に当たる。しかし、 o—が過剰に存在すると、正常な細胞や組織に対し
2
て障害を引き起こし、関節リウマチ、動脈硬化、糖尿病、肝炎、腎炎等の疾病、また、 皮膚炎、シミ、シヮ、湿疹、ソバカス等、美容上の障害となる諸症状が引き起こされる
[0004] 近年、上記諸疾患の改善及び予防のために、活性酸素消去活性を有する物質を、 薬学的、食品科学的又は香粧品科学的な見地から、天然物、醱酵物又は化成品か らスクリーニングする作業が活発に行われ、その結果、力なりの数の活性酸素消去剤 が知られるようになった。
[0005] 例えば、特許文献 1では紅花の葉及び Z又は茎由来の水溶性抗酸化剤が、特許 文献 2ではスモモ、セィヨウナツユキソゥ、ベンガルカラタチ、ミラクルベリー、ヤーバ サンタ、レモングラスから選ばれる 1種以上の植物抽出物を含有する活性酸素消去 剤及びィ匕粧料組成物が、特許文献 3では木棉及び Z又は黄花倒水蓮力 の抽出物 を有効成分として含有する活性酸素消去剤が開示されている。
[0006] 一方、アントシァニン系色素は、植物等に多く存在する色素であり、その鮮やかな 色調を利用して着色料として用いられている。また、アントシァニン系色素は活性酸 素消去活性を有することが知られており、サプリメント等の健康食品や飲料に多く利 用されている。アントシァニン系色素は、一般的に不安定な色素であり、特にアルカリ 条件下において、 C環が開環し分解され、退色が起こる。また、温度や光等の影響に よっても容易に分解され退色が起こるが、酸性下では比較的安定である。
[0007] キントラノォ科ヒイラギトラノォ属の熱帯果実であるァセロラは、アントシァニン系色 素を多く含む植物である。ァセロラの果実中は酸性であるため、光や熱を与えなけれ ば、アントシァニン系色素は安定なはずである。し力し、ァセロラには、アントシァニン 系色素の他にビタミン Cが果実 100g当り約 l,500mgと非常に多く含まれ、その影響で 、光や熱を与えなくてもアントシァニン系色素が容易に分解し退色する。また、ァセロ ラ中に少量含まれる鉄分によりさらに分解が促進されることがわ力つている。ァセロラ 中で起こるビタミン C及び Z又は金属によるアントシァニン系色素の分解'退色は、 P H、温度、光等による分解'退色とはメカニズムが異なる力 そのメカニズムが詳細に 調べられた例はほとんどなぐアントシァニン系色素の活性酸素消去活性が分解'退 色後に保持されて 、るのかどうかも知られて ヽな 、。
特許文献 1：特開 2002— 38151号公報
特許文献 2 :特開 2003— 183120号公報
特許文献 3：特開 2003— 246747号公報
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0008] 本発明の目的は、活性酸素消去剤及びその製造方法を提供することである。
[0009] 本発明の目的は、ァセロラ由来のアントシァニン系色素分解物を含有する活性酸 素消去剤及びその製造方法を提供することである。
[0010] 本発明の目的はさらに、アントシァニン系色素をビタミン c及び Z又は金属で分解 したアントシァニン系色素分解物を含有する活性酸素消去剤及びその製造方法を 提供することである。
課題を解決するための手段
[0011] 本発明者らは、前記課題を解決するために鋭意検討した結果、ァセロラ由来のアン トシァニン系色素分解物が活性酸素消去活性を有していることを見出した。
[0012] 本発明者らはまた、アントシァニン系色素をビタミン C及び Z又は金属で分解した 分解物が活性酸素消去活性を有していることを見出した。
[0013] 本発明者らはさらに、これらの分解物の分解が進むにつれ、活性酸素消去活性が 上昇することを見出した。
[0014] アントシァニン系色素の分解については、これまでにアルキルペルォキシルラジ力 ルをアントシァニン系色素に反応させることにより、アントシァニン系色素が分解して プロトカテキュ酸を生じさせる方法が知られている（Lipids, Vol.31, No.12 (1996), ppl259-1263) 0プロトカテキュ酸は強い活性酸素消去剤であり、従ってこのような手 段によりアントシァニン系色素を分解した場合は、その分解物も強い活性酸素消去 活性を保持することが予想される。
[0015] し力し、本発明では、アントシァニン系色素の分解の手段として、アントシァニン系 色素にビタミン C及び Z又は金属を作用させており、また本発明のアントシァニン系 色素分解物にっ 、て成分分析を行ったところ、プロトカテキュ酸は生成されて 、な ヽ ことがわ力つた。このことから、上記の公知文献と本発明とでは、アントシァニン系色 素分解のメカニズムが異なることが明らかである。さらに、アントシァニン系色素分解 物の分解が進むにつれ活性酸素消去活性が上昇することは、これまでに見出されて いなかった。
[0016] 本発明は、以下の発明を包含する。
[0017] (1)ァセロラ由来のアントシァニン系色素分解物を有効成分として含有する活性酸素 消去剤。
[0018] (2)ァセロラ由来のアントシァニン系色素を分解することを含む、活性酸素消去剤の 製造方法。
[0019] (3)ァセロラ由来の果汁又はその抽出物もしくは処理物を 30°C— 90°Cで処理して得 られる処理物を有効成分として含有する活性酸素消去剤。
[0020] (4)アントシァニン系色素をビタミン C及び Z又は金属で分解したアントシァニン系色 素分解物を含有する活性酸素消去剤。
[0021] (5)アントシァニン系色素をビタミン C及び Z又は金属で分解することを含む活性酸 素消去剤の製造方法。
[0022] 本明細書は、本願の優先権の基礎である特願 2003— 336062号の明細書及び Z 又は図面に記載された内容を包含する。
発明の効果
[0023] 本発明の活性酸素消去剤は、活性酸素消去活性を有するアントシァニン系色素分 解物を含有しており、活性酸素に関係する種々の疾病や老化を予防 ·治療するのに 有効である。
[0024] 本発明はまた、従来用いられていな力つたアントシァニン系色素分解物の用途を提 供するものである。
[0025] 本発明で提供されるァセロラ由来の活性酸素消去剤は、天然成分由来のため、副 作用の問題が少ない。
図面の簡単な説明
[0026] [図 1]図 1は、ァセロラ果汁の退色により生成されるアントシァニン系色素分解物の活 性酸素消去活性の経時変化を示した図である。
[図 2]図 2は、ァセロラ力 精製したアントシァニン系色素をビタミン C及び鉄との共存 下で退色させた時に生成されるアントシァニン系色素分解物の活性酸素消去活性の 経時変化を示した図である。
[図 3]図 3は、標品のシァ-ジンクロリドをビタミン C及び鉄との共存下で退色させた時 に生成されるアントシァニン系色素分解物の DPPHラジカル消去活性の経時変化を 示した図である。
発明を実施するための最良の形態
[0027] ァセロラ由来のアントシァニン系色素分解物を含有する活性酸素消去剤及びその製 造方法
本発明は、ァセロラ由来のアントシァニン系色素分解物を含有する活性酸素消去 剤及びその製造方法に関する。
[0028] 本発明で用いるァセロラの生産地や品種は特に制限されないが、生産地としては、 例えば沖縛、ブラジルが挙げられる。
[0029] 本発明の活性酸素消去剤として、ァセロラ果実を搾汁して得られるァセロラ果汁を そのまま用いることができるが、果実を破砕、粉砕等により粉末化処理したものを用い てもよいし、その抽出物又は処理物として用いてもよい。
[0030] 抽出物又はその処理物として用いる場合、抽出に用いる有機溶媒は、親水性有機 溶媒が好ましい。親水性有機溶媒として、例えば、メチルアルコール、ェチルアルコ ール、グリセリン、プロピレングリコール、 1,3-ブチレングリコール等のアルコール、了 セトン、テトラヒドロフラン、ァセトニトリル、 1,4-ジォキサン、ピリジン、ジメチルスルホキ シド、 Ν,Ν-ジメチルホルムアミド、酢酸等の公知の有機溶媒が挙げられる。特にメチ ルアルコールを用いて抽出することが好ましい。上記の親水性有機溶媒、特にメチル アルコール及びエチルアルコールは、水との混合物として用いることが好まし 、。
[0031] 抽出条件は特に限定されないが、好ましい温度範囲は 5°C— 90°C、特に 20°C— 40 °Cである。抽出時間は 1時間一 10時間程度、特に 1時間一 2時間程度が好ましぐまた 抽出に使用する溶媒量は原料に対して質量比で 1倍量一 20倍量が好ましい。
[0032] 抽出後、ろ過あるいは遠心分離により抽出残渣を除き抽出液を得る。この抽出液は 必要に応じて濃縮処理を行うこともできる。
[0033] このようにして得られたァセロラ果汁又はその抽出物もしくは処理物にはアントシァ ニン系色素、ビタミン C及び鉄が含まれており、ビタミン C及び Z又は金属を添加しな くても、アントシァニン系色素をビタミン C及び Z又は鉄により分解させて退色させるこ とができる。しかし、ァセロラ果汁又はその抽出物もしくは処理物に、ビタミン C及び Z 又は金属を添カ卩してもょ 、。
[0034] 分解の条件は、限定されるわけではないが、例えば分解温度として 30°C— 90°Cが 好ましい。また分解時間は分解温度により適宜変更でき、例えば分解温度が 30°Cと いった低温条件であれば 10日一 50日、分解温度が 90°Cといった高温条件であれば 1 時間一 5時間程度が好ましい。特に好ましい分解条件は、 30°C— 50°Cの低温度下で 、 10日一 50日である。
[0035] アントシァニン系色素分解物を含有する活性酸素消去剤及びその製造方法
本発明者らは、一般的なアントシァニン系色素をビタミン C及び Z又は金属で分解 して得られる分解物も活性酸素消去活性を有し、さら〖ここの分解物も、分解が進むに つれ、活性酸素消去活性が上昇することを見出した。 [0036] アントシァニン系色素としては、シァ-ジン、マノレビジン、デルフィ-ジン、ペチュニ ジン、ぺォ-ジン、ペラルゴ-ジンあるいはそれらをァグリコンとする配糖体が挙げら れるが、特にシァ-ジンある!/、はその配糖体が好まし!/、。
[0037] ビタミン Cとしては、通常入手できるものを用いればよい。
[0038] 分解に用いる金属としては、アントシァニン系色素の分解を促進するものであれば よぐ特に限定されるわけではないが、例えば、鉄や銅等の金属塩が挙げられ、特に 鉄が好ましい。
[0039] アントシァニン系色素を、ビタミン C又は金属のいずれかで分解することもできる力 ビタミン C及び金属の両方を用いて分解することが好まし 、。
[0040] ビタミン Cの添カ卩量は、アントシァニン系色素の 5倍一 100倍、特に 50倍一 100倍の 量であることが好ましい。金属の添カ卩量は、アントシァニン系色素の 1/10— 1/2の範 囲、特に 1/10— 1/4の範囲であることが好ましい。
[0041] 分解の条件は、特に限定されるわけではないが、上述のァセロラ由来のアントシァ ニン系色素の分解と同様に行うことができる。
[0042] 本発明のアントシァニン系色素分解物は、ビタミン Cや金属との混合物のままで、活 性酸素消去剤として使用できるが、製造後、残存するビタミン Cや金属等を取り除く 精製工程を行ってもよい。精製処理の方法として、順相又は逆相クロマトグラフィー、 イオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過等が挙げられる力 特に逆相クロマトグラフィ 一の使用が好ましい。また、これらの方法を組み合わせて用いることもできる。
[0043] 用途
本発明の活性酸素消去剤は、ァセロラの果汁、抽出物や精製物、又はアントシァ- ン系色素分解物を、公知の医薬用担体と組み合わせて製剤化することができる。投 与形態としては、特に制限はなぐ必要に応じ適宜選択されるが、一般には錠剤、力 プセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤等 の経口剤、又は注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、貼付 剤、軟膏剤等の非経口剤として使用される。本発明の活性酸素消去剤の添加量は、 添加対象物の種類、使用形態等の諸条件によって異なるが、通常、添加対象物全 体に対し 0.01質量％— 10質量％の範囲で用いることが好ましい。 [0044] 本発明の活性酸素消去剤の投与量は、患者の年令、体重、疾患の程度、投与経 路により異なるが、経口投与では、ァセロラの抽出物乾燥粉末として、通常 1日 10mg 一 3000mgであり、投与回数は、通常、経口投与では 1日 1回一 3回である。
[0045] 経口剤は、例えばデンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、 コーンスターチ、無機塩類等の賦形剤を用いて常法に従って製造される。
[0046] この種の製剤には、適宜前記賦形剤の他に、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢 剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を使用することができる。
[0047] 結合剤の具体例としては、結晶セルロース、結晶セルロース 'カルメロースナトリウム 、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセル ロース、ヒドロキシプロピノレメチノレセノレロース、ヒドロキシプロピノレメチノレセノレロースフタ レート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、力ノレメロースナト リウム、ェチノレセノレロース、カノレボキシメチノレエチノレセノレロース、ヒドロキシェチノレセ ルロース、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、 デキストリン、アルファ一化デンプン、部分アルファ一化デンプン、ヒドロキシプロピル スターチ、プルラン、ポリビニルピロリドン、アミノアルキルメタクリレートコポリマー E、ァ ミノアルキルメタクリレートコポリマー RS、メタクリル酸コポリマー L、メタクリル酸コポリ マー、ポリビュルァセタールジェチルァミノアセテート、ポリビュルアルコール、ァラビ ァゴム、アラビアゴム末、寒天、ゼラチン、白色セラック、トラガント、精製白糖、マクロ ゴールが挙げられる。
[0048] 崩壊剤の具体例としては、結晶セルロース、メチルセルロース、低置換度ヒドロキシ プロピノレセノレロース、カノレメロース、カノレメロースカノレシゥム、カノレメロースナトリウム、 クロスカルメロースナトリウム、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バ レイショデンプン、部分アルファ一化デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキ シメチルスターチナトリウム、トラガントが挙げられる。
[0049] 界面活性剤の具体例としては、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリン酸 ポリオキシル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピ レングリコール、セスキォレイン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、モノステアリン 酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノラウリン酸ソルビタン、ポリソルベート、 モノステアリン酸グリセリン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウロマクロゴールが挙げられる。
[0050] 滑沢剤の具体例としては、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、ス テアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、含水二酸化ケイ素、 軽質無水ケィ酸、合成ケィ酸アルミニウム、乾燥水酸ィ匕アルミニウムゲル、タルク、メ タケイ酸アルミン酸マグネシウム、リン酸水素カルシウム、無水リン酸水素カルシウム、 ショ糖脂肪酸エステル、ロウ類、水素添加植物油、ポリエチレングリコールが挙げられ る。
[0051] 流動性促進剤の具体例としては、含水二酸化ケイ素、軽質無水ケィ酸、乾燥水酸 化アルミニウムゲル、合成ケィ酸アルミニウム、ケィ酸マグネシウムが挙げられる。
[0052] また、本発明の活性酸素消去剤は、液剤、シロップ剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル 剤として投与する場合には、矯味矯臭剤、着色剤を含有してもよい。
[0053] 本発明の活性酸素消去剤はまた、常法に従って、化粧水、乳液、クリーム、パック、 洗浄料等のスキンケア化粧料、口紅、ファンデーション等のメーキャップ化粧料、頭 髪用化粧料等に添加することができる。
[0054] 本発明の活性酸素消去剤はさらに、常法に従って、食品、飴、トローチ、ジャム、チ ユーインガム、飲料等に添加することができる。
[0055] また、本発明の活性酸素消去剤を抽出物乾燥粉末としてそのまま使用することもで きる。さらに、いわゆる特定保健用食品 (例えば、動脈硬化予防食品)等とすることも できる。
[0056] 本発明の活性酸素消去剤の製造に用いるァセロラ、アントシァニン系色素、ビタミ ン C及び鉄等の金属は現在までに化粧料、食品等に供されており、安全性は確立さ れている。
実施例
[0057] 以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの 実施例に限定されるものではな 、。
[0058] 実施例 1
ァセロラの果汁を貯蔵により退色させ、その色素分解物について活性酸素消去活 性を評価した。 [0059] [試料の調製]
ァセロラをガーゼで搾汁し、遠心ろ過後に得られた果汁に、 2時間べクチナーゼを 作用させて粘性をなくした。得られた液をフィルター滅菌後、無菌的に 40°Cで約 1ケ 月間インキュベートした。この処理により、ァセロラ果汁の赤色は徐々に退色していき 、 5日後には完全に退色した。インキュベートお 1、 3、 7、 14、 21、 35日後の退色果汁 を、水溶性成分を C18カートリッジカラム（BAKERBOND spe (登録商標） C18ディスポ 一ザルカラム）に供し、蒸留水で充分に洗浄後、 C18カラム吸着画分を 0.2% TFA/メタ ノール溶液で溶出した。得られた溶出液をエバポレーターで濃縮後、カラムに供した 退色果汁と同量の蒸留水で再溶解した。以上の操作により得られた試料、及びそれ を 2倍希釈、 4倍希釈した試料につ ヽて活性酸素消去活性を評価した。
[0060] [活性酸素消去活性の評価]
活性酸素消去活性は、キサンチンーキサンチンォキシダーゼ反応系によるスーパー ォキシドア-オンラジカルの消去活性で評価し、ラジカルの検出は ESRを用いた。
[0061] DMPO (5,5-dimethyl-l-pyrroline-N-oxide) 15 μ 1、 50mMリン酸緩衝液 (ρΗ7.4) 50 μ 1、試料 50 1、 2mMヒポキサンチン/リン酸緩衝液溶液 50 1、 0.4unit/mlキサンチン ォキシダーゼ（XOD) Iリン酸緩衝液 50 1を混合し、 XOD添加後 45秒後に ESR測定 を行った。
[0062] なお、 ESR装置は日本電子社製 ESR (JES- FR30)を用い、 ESRによるスペクトル解 析は以下の条件で行った：
磁場掃引幅: 335.9±5mT、磁場変調: 0.1mT、増幅率： 100、掃引時間 2分、応答時間
: 0.1秒、測定温度：室温。
[0063] 測定結果は図 1の通りである。図 1より、果汁の分解が進むにつれて、活性酸素消 去活性が高くなる傾向が見られた。
[0064] 実施例 2
実施例 1より、ァセロラ果汁において、分解が進むにつれ活性酸素消去活性が高く なる傾向が見られた力 この系ではアントシァニン系色素以外の成分による影響も考 えられるため、ァセロラカもアントシァニン系色素を精製し、色素精製物を用いた単純 系で同様の実験を行った。 [0065] ァセロラより精製したアントシァニン系色素、ビタミン C、塩化鉄の最終濃度を、ァセ ロラ果実の含有量に従って、それぞれ 0.2、 10、 0.02mg/mlとなるように 0.1M酢酸バッ ファー（pH3.0)で調製し、 40°Cで約 1ヶ月間インキュベートした。その後、インキュべ ート 0、 7、 14、 21、 28、 35日後の調製液を C18カートリッジカラムに供し、蒸留水で充 分に洗浄後、 C18カラム吸着画分を 0.2% TFA/メタノール溶液で溶出した。得られた 溶出液をエバポレーターで濃縮後、カラムに供した調製液と同量の蒸留水で再溶解 した。以上の操作により得られた試料、及びそれを 2倍希釈、 4倍希釈、 8倍希釈、 16 倍希釈した試料について活性酸素消去活性を評価した。
[0066] 活性酸素消去活性の評価方法は実施例 1と同様である。
[0067] 測定結果は図 2の通りである。図 2より、ァセロラ果汁の場合と同様に、色素の分解 が進むにつれて、活性酸素消去活性が高くなる傾向が見られた。この実験は単純系 で行っており、 C18カラムに吸着する成分はアントシァニン系色素分解物に限られる 。実際にこの吸着成分についてビタミン C含量を調べた力 ビタミン Cは全く検出され なかった。従って、ァセロラにおけるアントシァニン系色素は、分解が進むにつれ活 性酸素消去活性が高くなることが判った。
[0068] 実施例 3
ァセロラ果汁中におけるアントシァニン系色素において、分解が進むにつれ活性酸 素消去活性が上昇することがわ力つたが、一般のアントシァニン系色素でも、同様の 結果が得られるかどうか検討を行った。
[0069] 標品のシァ-ジンクロリドを 0.075mg/mlの濃度になるように 0.1M酢酸バッファー（
PH3.0)〖こ溶力し、ビタミン Cを 10mg/ml、塩化鉄を 0.02mg/ml添カ卩したものを 40°Cでィ ンキュペートし退色させた。その後、 C18カートリッジカラムによりビタミン Cを除去し、 エタノールでアントシァニン系色素分解物を溶出した。得られた溶出液をエバポレー ターで濃縮後、濃度が 0.25mg/mlの濃度になるように蒸留水で再溶解した。この試料 の活性酸素消去活性を以下のように DPPH (1,1- dipheny卜 2- picrylhydrazyl)法により 評価した。
[0070] [活性酸素消去活性の評価]
DPPH法で評価を行った。試料 0.5mlに 0.1Mリン酸緩衝液（pH6.5) 2.5ml, 99%エタ ノール 1.0ml、 5 X 10— 4M DPPH-エタノール溶液 1.0mlを混合し室温に放置した。経時 的に 525應の吸光度を測定し、ラジカル消去活性を評価した。
[0071] 測定結果は図 3に示した通りである。図 3より退色前と比較して退色後の方が活性 が強いことが判った。
[0072] 本明細書中で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願をそのまま参考として本 明細書中にとり入れるものとする。
産業上の利用可能性
[0073] 本発明の活性酸素消去剤は、活性酸素に関係する種々の疾病や老化を予防'治 療するのに有効である。

Claims

請求の範囲
[1] ァセロラ由来のアントシァニン系色素分解物を有効成分として含有する活性酸素消 去剤。
[2] ァセロラ由来のアントシァニン系色素を分解することを含む、活性酸素消去剤の製 造方法。
[3] ァセロラ由来の果汁又はその抽出物もしくは処理物を 30°C— 90°Cで処理して得ら れる処理物を有効成分として含有する活性酸素消去剤。
[4] アントシァニン系色素をビタミン C及び Z又は金属で分解したアントシァニン系色素 分解物を含有する活性酸素消去剤。
[5] アントシァニン系色素をビタミン C及び Z又は金属で分解することを含む活性酸素 消去剤の製造方法。
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