CN1384713A - 包含天然的环加氧酶抑制剂的保健食品添加剂 - Google Patents

Abstract

本发明描述了包含一种或多种果实提取物,用于减轻疼痛和消炎的食品添加剂,该食品添加剂可用来抑制由环加氧酶,更具体地由环加氧酶－2传递的炎症。

Description

包含天然的环加氧酶抑制剂的保健食品添加剂

相关申请

本申请要求1999年8月27日提交的美国临时申请系列号60/151,280的优先权，题目是“从植物中浓缩类黄酮的方法”。本申请也与1999年8月27日提交的系列号为60/151,278的美国临时申请有关并且将其特别在此引入作为参考。背景

本发明涉及可用于减轻疼痛或者炎症的保健食品添加剂，其也可用于抑制与疼痛或者炎症传递有关系的生化途径。本食品添加剂包含类黄酮，更特别地，包含某些花色素苷。

当今，许多消费者寻求合成药剂的天然代用品以治疗日常生活中经受的各种疾病。因此，最近，包含天然物质，如St.Johns麦芽汁，银杏biloba，人参及其它的保健食品添加剂已经上市，其可用于各种目的。然而，迄今为止，人们相信，没有任何包含天然物质的产品在减轻疼痛和/或炎症方面可以与非甾族消炎药(“NSAIDs”)相媲美。

目前，疼痛和炎症通常用阿司匹林，布洛芬(Motrin，Advil)以及其它类似的通常被称为NSAIDs的物质来治疗。炎症部分地由被称为前列腺素的一类化合物传递，它由主体在受到机械、热、化学、细菌及其它伤害时作为反应而释放(MonCada等人，Handbook of Exp.Pharm.，卷50-1，Springer Verlag，588-616页，1978年；Samuelsson，Science，220：568-575页，1983年；Davies等人，Ann.Rev.Immunol.2：335-357，1984年)，前列腺素是由普遍存在的微粒体酶类复合体以分段的方式得以合成。在该生物合成途径中，第一种酶是前列腺素内过氧化物合酶。该酶在本领域中也被称作脂肪酸环加氧酶。该酶有两种异构体形式，分别被称为环加氧酶1(COX-1)和环加氧酶-2(COX-2)(Smith，Am.J.Physiol.，268：F181-F191，1992年)。

虽然许多物质，如阿司匹林可抑制前列腺素的产生并且因此可以抑制疼痛或者炎症，但它们可能会引起胃的问题和/或溃疡。为解决这些问题，已经开发出许多针对特殊的痛觉传导通道的药，希望减少一些与阿司匹林、布洛芬及其它相似的物质有关的问题，如果不能完全将其消除的话。上述药之一是Celebrex^TM，其明显把特殊的痛觉传导通道作为目标，因此不存在一些与如阿司匹林的物质有关的缺点。尤其是，NSAIDs通过抑制酶通过人体中花生四烯酸/前列腺素通道而阻止前列腺素的产生。可是，许多药，如Celebrex^TM，把COX-1和COX-2区分开来，被认为其具有较少的与通常NSAIDs有关的副作用。

正如所指出的那样，与合成药物相比，许多消费者更喜欢天然物质。因此，显然需要一种天然的且药理学上可接受的消炎药组合物，其可如人们所希望的那样优先抑制COX-2酶。本发明通过提供包含一种提取物的保健食品添加剂而解决上述需求，所述提取物是从一种或多种Vaccinium属植物原料中提取出来的，其含有能减轻疼痛、消炎和/或优先抑制COX-2的天然活性成分。该添加剂包含一定量的所述成分，其与其它组分的干重比例显著超过从植物物料中获得的汁液中存在的所述成分的干重比例。一般情况下，该活性成分含有类黄酮和，尤其是花色素苷。

发明概述

本发明描述了包含一种或多种果实提取物并可用于减轻疼痛和消炎的膳食或食品添加剂。该食品添加剂可以用来抑制由环加氧酶，更特别是由环加氧酶-2传递的炎症。更具体地说，本发明提供一种具有消炎性能的食品添加剂，其中该食品添加剂含有富含类黄酮的果实提取物和药理上可接受的稀释剂或赋形剂，所述果实提取物的消炎活性大于该天然果实中发现的消炎活性。

在具体的实施方案中，果实选自甜樱桃、酸樱桃、西印度樱桃、李子、欧洲越桔、黑莓、醋栗、北美沙果、越桔、草莓、酸果蔓红、博伊森树莓、葡萄、覆盆子、接骨木果及其混合物。在某些实施方案中，提取物的消炎活性通过抑制环加氧酶传递。在更特别的实施方案中，提取物对环加氧酶-2(COX-2)的抑制活性大于其对环加氧酶-1(COX-1)的抑制活性。在优选实施方案中，COX-2抑制活性与COX-1抑制活性之比为约1∶1-25∶1。当然，这是一个例证的比例范围，这两个值之间的任何比值同样特别适合。

在某些实施方案中消炎活性由类黄酮传递，所述类黄酮选自花青素-3-糖苷，花青素-3-葡糖基芸香苷；花青素-3-龙胆二糖苷；花青素-3-芸香苷，甲基花青素-3-芸香苷，甲基花青素，花青素，花青素-3-槐糖苷，花葵素，翠雀素，3’-甲花翠素，锦葵苷元，堪非醇，橙皮苷，龙胆翠雀碱，桔梗皂苷，瓜菊酯及其混合物。在一个特别关注的实施方案中，该果实提取物是接骨木果果实提取物，北美沙果果实提取物，酸樱桃果实提取物或其混合物。在另一个优选实施方案中，该食品添加剂含有接骨木果提取物，欧洲越桔提取物及樱桃提取物，优选酸樱桃提取物。

本发明还注意到花色素苷水解形式，花青素与花色素苷相比，显示出增加的COX抑制活性。因此，本发明的添加剂将上述类黄酮(花色素苷)引入添加剂中，以便使花色素苷在活体内水解以提供COX抑制活性。

食品添加剂可以制成凝胶，胶囊，片剂，糖浆，饮料或粉末。制造上述剂型的方法对于本领域技术人员来说是众所周知的。另一方面，该食品添加剂还可以包含另外的添加剂，其选自维生素，矿物质，辅酶，纤维，药草浸液或其结合。特别优选的药草浸液包括姜提取物和乳香树提取物。维生素可以选自维生素A，维生素D，维生素E，维生素B₁₂，维生素B₂，烟酸，泛酸，维生素B₁，胆碱，叶酸，维生素H，维生素K和维生素C。矿物质可以选自钴，铜，铁，锰，锌和硒或其结合。

在具体实施方案中，消炎活性比天然果实的消炎活性大约2-100倍。在其它实施方案中，食品添加剂减轻疼痛的性能优于阿司匹林。

同样关注具有消炎性能的食品添加剂，其中该食品添加剂含有选自欧洲越桔提取物，樱桃提取物，接骨木果的果实提取物及其混合物，其消炎活性大于所述天然果实中发现的消炎活性。在具体的实施方案中，该食品添加剂还含有与以上所述的北美沙果果实提取物或其它果实提取物。

也提供在细胞中抑制COX-2活性的方法，包括使细胞与果实提取物接触，所述果实提取物选自欧洲越桔，樱桃，接骨木果提取物及其混合物，其消炎活性大于天然果实中发现的消炎活性。特定的实施方案还包括使细胞与上述的北美沙果果实提取物或其它果实提取物接触。在特别优选的实施方案中，接骨木果和北美沙果果实提取物在相同的组合物中。在其它实施方案中，接骨木果果实提取物和北美沙果果实提取物处在单独的组合物中。本发明的某些方面涉及哺乳动物细胞。其它实施方案关注人的细胞。在特别的实施方案中将果实提取物在活体外与细胞接触。其它实施方案中在活体内接触细胞。在优选的方案中，本发明的方法将添加剂制成凝胶，胶囊，片剂，糖浆，饮料或粉末。

本发明另一方面提供治疗动物炎性反应的方法，包括对动物给予一种组合物和药理上可接受的稀释剂或赋形剂，所述组合物含有消炎活性大于在天然果实中发现的消炎活性的果实提取物。

在特定的实施方案中，炎症性反应可以选自关节炎，疼痛，过敏皮疹，炎性肠病和哮喘。当然，这些是炎性疾病的例子，本发明的食品添加剂可以对任何由于炎性反应引起的病症提供优良的草药治疗。本发明的添加剂可以呈凝胶，胶囊，片剂，糖浆，饮料或粉末形式。

应当理解，在此所述的食品添加剂单独使用或与其它的消炎药结合都将是有用的。在本发明的添加剂与其它的药剂结合使用的实施方案中，本发明的方法还将对动物给予一种选自水杨酸盐，糖皮质激素，对氨基苯酚衍生物，类鸦片，消炎痛，苏灵大，止痛剂，丙酸衍生物和oxiCams的消炎剂。

本发明的另一实施方案包括一种含有含花色素苷的果实提取物的nutraCeutiCal，所述果实包括接骨木果果实，樱桃(包括酸樱桃)，欧洲越桔，北美沙果果实及其它本文中所述的含花色素苷的果实，其中，当吞下或者以其它方式用于受疼痛困扰的有机体时，nutraCeutiCal能减轻疼痛。具体地说，该疼痛可以是关节疼，月经性痉挛，头疼，虫咬疼痛或过敏皮疹。

本发明的另一个目的是提供一种消炎活性为天然果实消炎活性的约2-100倍的添加剂。例如，该添加剂可以包含消炎活性大于天然果实中发现的消炎活性的接骨木果果实提取物。

本发明的另一目的是提供一种在细胞中抑制COX-2活性的方法，该方法通过将细胞与消炎活性大于天然果实消炎活性的接骨木果果实提取物接触而进行。一般情况下，该目的提供了一种治疗动物炎性反应的方法，包括对动物给予一种组合物和药理上可接受的稀释性或赋性剂，所述组合物含具有的消炎活性大于在天然果实中发现的消炎活性的果实提取物。

从以下详细说明中，本发明的其它目的，特征和优点将显而易见。然而，应该理解，详细说明和特定的实施例，虽然指出了本发明的优选实施方案，但仅仅通过例证给以说明，因为根据该详细说明，在本发明的精神和范围之内的各种各样的变化和修正对于领域普通技术人员来说将是显而易见的。

除非另外特别说明，说明书和权利要求书中使用的全部百分数均为重量百分数。

附图简述

图1表示一个实施方案中从含花色素苷的植物中获得和浓缩所希望的花色素苷的方法流程图。

发明详述

前列腺素(包括PGE₂，PGD₂，PGF₂，PGI₂及其它相关化合物)表示不同组的源于脂肪酸代谢的自分泌和旁分泌荷尔蒙。它们属于一族天然存在的类花生酸(前列腺素，凝血噁烷和白细胞三烯)，该类花生酸并不以这样的的形式贮存在细胞中，但是却可根据需要从花生四烯酸，一种来源于细胞膜磷脂分解的20碳脂肪酸生物合成。在正常情况下，生成少量的类花生酸作为许多不同的细胞机能的重要的介质，上述细胞机能在不同种类的细胞中可能极其悬殊。但是，该前列腺素在病理生理学中也起着重要的作用。具体地说，炎症至少部分地在受损害的细胞中既由前列腺素的过量产生引发，又由其维持。下面的事实着重说明了前列腺素在炎症中所起的主要作用，即在许多病理学炎症性状态的治疗中最有效的阿司匹林类非甾族消炎药(NSAIDS)均通过抑制前列腺素合成而起作用。不幸的是，这些药的使用经常由于副作用(胃肠出血，溃疡，肾衰竭等)而受到限制，所述副作用是由正常细胞中前列腺素的不希望的减少引起的，此时，正常细胞缺乏维持正常生理机能所需的自分泌和旁分泌机能。将来，疼痛和炎症治疗的目标是开发出新的替代品，更准确地说，这种替代品将通过减少发炎细胞中的前列腺素但不改变其它细胞中前列腺素的产生而起作用。

环加氧酶反应是前列腺素合成途径中的第一步；带有前列腺素G/H合成活性的酶(PGHS)将花生四烯酸转化成内过氧化物PGG₂，然后内过氧化物PGG₂分解为PGH₂(这两个反应经由一种单一的酶进行)。PGH₂依次由一种或多种前列腺素合酶(PGE₂合酶，PGD₂合酶等)代谢以产生最终的″2-系列″前列腺素，PGE₂，PGD₂，PGF₂，PGI₂及其它，包括凝血噁烷，TXA₂。第一步(PGHS)对于前列腺素合成来说是控速步。因此，PGHS传递反应是消炎药药效的主要目标；抑制PGHS活性产生了NSAIDS(阿司匹林，acetominophen，布洛芬，萘普生，消炎痛)的活性，也可以限制炎症中前列腺素的过量产生(希望的治疗目标)和减少未发炎细胞中前列腺素的正常产生(其产生不希望的副作用)。

除了与炎症有关的异常变化外，在实验条件下影响前列腺素产生的多种其它因子是公知的。这些因子包括生长因子，cAMP，辅助致癌因子，src激活因子和白介素1和2，所有这些均会增加总的细胞PGHS活性。肾上腺糖皮质激素和相关的合成消炎性甾体也能抑制前列腺素合成，但是他们作用的代谢位置没有明确界定。

大多数非甾族消炎药的主要而且也许是唯一的作用是抑制酶前列腺素G/H合酶，亦称环加氧酶，其为前列腺素生物合成中的首要关键步骤。

业已证实，环加氧酶存在两种异构体形式，COX-1和COX-2。人们对组成型表示形式COX-1已经进行了广泛的研究并提出它维持前列腺素传递的生理机能。相反，可诱导的形式COX-2在正常情况下存在的数量较少，但是其在发炎条件下在活体内大量诱导产生。显而易见COX-1和COX-2具有不同的生理和病理机能。

最广泛使用的NSAIDs是非选择性的环加氧酶抑制剂，对两种异构体形式不加区别地进行抑制。自从人们发现酶有两种不同的异构体形式后，人们就在寻求有选择性的COX-2抑制剂。近来，已经开发出特定的COX-2抑制剂，但有人提出它们有副作用。因此需要一种安全有效的炎症治疗方法。本发明旨在解决这种需求。

本发明描述一种NSAIDs的天然代用品，其优先抑制COX-2活性并改善由COX-2传递的炎症。本发明表明，某些果实提取物具有的消炎活性大于在天然果实中发现的消炎活性。利用这一结果来提供一种包含果实提取物和药理上可接受的稀释剂或赋形剂的食品添加剂，其中果实提取物的消炎活性大于在天然果实中发现的消炎活性，换句话说，本发明提供从含花色素苷植物，特别是果实中获得的提取物以选择性地抑制COX-2。

做为选择，来自于含花色素苷植物的提取物可以选择性地抑制COX-1的活性。因此，本发明涉及包含至少一种来源于含花色素苷植物提取物的花色素苷以选择性地抑制COX-1或COX-2的活性。

更特别地，在一个实施方案中，人们发现接骨木果和北美沙果提取物具有高的消炎活性。该消炎活性由果实提取物(特别是当其水解后)中的花色素苷化合物传递，提供比COX-1抑制更强的COX-2抑制。利用这一发现的方法和组合物在下文中将进行更详细的描述。但是，一般说来，该实施方案的提取物选自含花色素苷的植物并能选择性地抑制COX，优选COX-2的活性。人们相信当提取物被哺乳动物经口摄食时，所存在的花色素苷将会在活体内水解成相应的花青素，其将提供COX抑制。在特定的实施方案中，已经发现某些果实具有比COX-1更优先的COX-2消炎活性。在本发明特别优选的实施方案中，希望获得消炎活性的COX-2/COX-1比值在约2∶1-25∶1之间的果实提取物。在某些实施方案中，发现酸樱桃提取物的COX-2/COX-1为约4.6∶1，北美沙果的比值为约7.5∶1，接骨木果的比值为约10.1∶1。实际上，在某些方面，这种消炎活性可能比一种公认的合成COX-2抑制剂Celebret^TM的消炎活性更大。

因此认为一种从北美沙果，接骨木果，欧洲越桔，酸樱桃，或其混合物中提取的提取物具有有益的消炎性能。在特定的实施方案中涉及含有一种这些果实提取物的营养添加剂。做为选择，可以考虑含有两种或更多这种果实提取物的食品添加剂。经过比较，发现声称具有特定的COX-2抑制活性的药物消炎剂CelebreX^TM的COX-2/COX-1抑制活性比值为7.0。

在一个优选实施方案中，营养食物或食品添加剂包含约0.1-99％，优选约5-95％，希望约10-90％，更优选约30-90％的含花色素苷的提取物。含花色素苷提取物的量可以由任何的上述含花色素苷果实提取物，以及任何其它的含花色素苷植物提取物来提供。

在这方面，单一剂型(即以单一片剂，胶囊服用(无论是液体或是固体))包含约1-500毫克，优选约5-100毫克，更优选约20-70毫克的总花色素苷。在目前优选的配方中，提供的片剂(单一剂型)包含约50毫克的总花色素苷。术语“总花色素苷”指的是存在于上述单一剂型中的花色素苷的总量。

对单一剂型来说，本发明的食物或食品添加剂提供的消炎活性成分的量为约0.1-99％，优选约5-95％，希望约10-90％，更优选约30-90％。消炎活性成分可以来自含花色素苷植物，提取物或能提供消炎活性的植物或提取物(如姜，乳香树)。A.花色素苷作为NSAIDs的天然代用品

对于包含在植物中天然发现的有益的植物化学品的食物添加剂存在着不断增长的需要。这些天然存在的植物化学品可以分类成几种不同类型。一个较重要的组是类黄酮，其又可以被分类成几种类型。类黄酮的一个重要类型为花色素苷。花色素苷大多存在于红色，蓝色和中间色的花和果实中，例如樱桃(甜，酸)，西印度樱桃，李子，欧洲越桔，黑莓，黑醋栗，北美沙果，越桔，草莓，酸果蔓红，博伊森树莓，葡萄，覆盆子和接骨木果。已经发现，花色素苷可用作抗氧化剂。本发明描述了花色素苷将消炎活性赋予食品添加剂的应用。

根据本发明，花色素苷从含花色素苷的植物中获得。决定植物是否包含花色素苷的方法是已知的，因此在这里不进行论述。适合的含花色素苷植物的例子包括如下植物的果实，这些植物选自甜樱桃，酸樱桃，西印度樱桃，李子，欧洲越桔，黑莓，黑醋栗，北美沙果，越桔，草莓，酸果蔓红，博伊森树莓，葡萄，覆盆子，接骨木果及其混合物。

可以用于提供消炎活性的花色素苷包括但是不局限于花青素-3-糖苷；花青素-3-葡糖基芸香苷；花青素-3-龙胆二糖苷；花青素-3-芸香苷，花青素-3-黑接骨木苷，花青素-3-samb-5-糖苷，花青素-3-半乳糖苷，甲基花青素-3-芸香苷，甲基花青素-3-糖苷，甲基花青素-3-半乳糖苷，甲基花青素，花青素，花青素-3-槐糖苷，花葵素，翠雀素，翠雀素-3-糖苷，翠雀素-3-半乳糖苷，3′-甲花翠素，3′-甲花翠素-3-糖苷，3′-甲花翠素-3-半乳糖苷，二甲花翠素，二甲花翠素-3-阿拉伯糖苷，二甲花翠素-3-糖苷，二甲花翠素-3-半乳糖苷，堪非醇，橙皮苷，龙胆翠雀碱，桔梗皂苷，瓜菊酯等。

这些物质的化学基础是2-苯基苯并吡喃(黄盐)，其具有以下结构：

如果该基础结构式在2，3，4，5，7，3’或5’上用羟基或甲氧基取代，得到的化合物被称为花青素，其在水中不溶，对光不稳定而且被碱迅速破坏，因此在植物中经常不能发现。但是，花色素苷是上述化合物的苷，更稳定，是在植物的叶子、花和果实中发现的天然物质。因此花色素苷水解产生花青素(糖苷配基形式)和糖。

在自然界中发现的花色素苷的总量非常大，因为许多单、二和三糖在3，5或7位置可以被糖基化，而且也因为糖在位置3可以被酰化(经常用对香豆酸)。因此，一种具体的果实可能含有20种或更多的花色素苷，包括花青素，翠雀素，3′-甲花翠素，花葵素和二甲花翠素的3，5-二糖苷，3-单糖苷，3-(6-0-p-香豆芳基-糖苷)-5-糖苷和3-(6-0-p-香豆芳基-糖苷)。花色素苷的颜色由其分子结构和它们存在的介质的生理化学性质来决定。

根据本发明，提取物包含一种或多种花色素苷，其选自甲基花青素，花青素，花葵素，翠雀素，3’-甲花翠素，二甲花翠素，堪非醇，橙皮苷，龙胆翠雀碱，桔梗皂苷，瓜菊酯，它们的苷衍生物及其混合物。在一个优选实施方案中，花色素苷选自花青素，甲基花青素，二甲花翠素，3′-甲花翠素，翠雀素，它们的苷衍生物及其混合物。

已经发现，水解的花色素苷，即花青素的COX抑制活性比花色素苷和其苷衍生物更大。因此，相信本发明优于现行COX抑制剂，例如NSAIDs。相信花色素苷几乎不提供任何可能有的COX抑制，尤其是对COX-1的抑制。因此，如果摄食包含花色素苷的食品添加剂，在胃肠区域(″GI″)将几乎没有COX-1抑制，于是有可能会减少副作用。B.提取花色素苷的方法

对本领域技术人员来说，有各种各样的已知的提取花色素苷的方法。其中一些方法描述在，例如美国专利5,817,354；美国专利5,200,186；美国专利5,912,363；美国专利4,211,577；美国专利4,302,200中(每个均在此引入作为参考)。

美国专利5,817,354描述了从柑桔属产品中除去引起苦味的类黄酮的方法。包括将包含一种或多种这些苦味类黄酮的流体与聚苯乙烯-二乙烯基苯树脂接触来将该类黄酮粘附到树脂上。通常，在与聚苯乙烯-二乙烯基苯树脂接触以前使用离心或超滤步骤。然后通过洗脱树脂可以收集类黄酮。虽然该专利没有描述怎样将类黄酮从树脂上洗脱(除下)，但Chandra等人(J.Agric.Food Chem.，第41卷，第7期，1062-64页，(1993))中描述了通过利用乙醇来洗脱花色素苷。然后将洗脱出的溶液真空干燥除去乙醇。

美国专利5,912,363描述了从植物物质中提取原花色素的方法。该方法包括加热固体植物物质的含水混合物，任选地在增加压力和减少氧下随后通过各种各样的分离、过滤和吸附步骤，和将吸附的原花色素用极性溶剂洗脱。该方法也可以将极性溶剂再生并循环到该方法的洗脱阶段，以使溶剂消耗量降低并使该方法更有效益。

美国专利4,211,577描述了通过处理不纯物质而提取植物花色素苷色素，以确保溶液中存在离散的单体花色素苷分子，然后将该溶液经过超滤膜以保留可溶的和/或浑浊的大分子例如胶体，产生老化、浑浊并沉淀的上游杂质，将下游的单体花色素苷进一步浓缩为液体或粉末以得到稳定的可用作着色剂的浓色母料。用这样的方式，果实固体可以用二氧化硫溶液处理以电离、脱色并确保单体状态的颜料分子(从花色素苷转化为色酮2和4-磺酸盐)。溶液超滤将花色素苷同向下流，同时大分子组分如果胶，丹宁酸，蛋白质，其复合物等保留在上游。任选从超滤后的溶液中汽提二氧化硫以从色酮磺酸盐中回收原始的花色素苷。然后，花色素苷可以通过蒸发浓缩得到高浓度的液体，从这种液体可以任选地将在分子中含有酰基的不稳定颜料在降低的温度下通过可控沉淀除去。

美国专利4,302,200描述了用于从天然产物中提取花色素苷的方法，该方法通过将含花色素苷的天然产物与含亚硫酸根离子的水溶液在85℃或更高的温度下接触30分钟或更少，之后将最先接触天然产物的水溶液的亚硫酸根离子含量调节到至少10,000ppm(以SO₂计)。

美国专利3,963,700描述了从植物物质如葡萄废物中回收花色素苷的方法，该方法使用酒石酸-链烷醇萃取法，接着过量的酒石酸可控沉淀为酒石酸氢钾。该专利还描述了花色素苷在制备利用花色素苷提取物进行着色的人造葡萄饮料中的用途。

虽然注意到上述专利方法对产生用于本文所述的消炎性质的花色素苷将是有用的，但本发明人开发了另一种从天然源提取花色素苷的方法。

该方法旨在不通过利用不希望的化学品而从植物中提取类黄酮。该方法包括将包含一种或多种类黄酮的溶液经过超滤膜以提供上清液和保留物。然后使上清液经由反渗透膜以得到保留液和渗透物，然后收集反渗透的保留液。

超滤膜的截留分子量优选为约100,000-1,000,000。反渗透膜的分子量截优选为约1,000-10,000。

收集的保留液具有本发明所述的消炎，COX-2抑制性能。在优选实施方案中，该保留液可以被干燥和与一种或多种赋形剂相结合以得到食物添加剂。

现在参考图1，阐述本发明一个实施方案的方法流程图。根据该实施方案，植物源1，特别是包含类黄酮的果实，更特别是包含花色素苷化合物的果实经过提取过程10进行加工得到提取物或汁液2。例如，该植物可以进行榨汁操作或压制操作，如螺杆挤压或袋压以获得团块和汁液。做为选择，未加工的植物可以被磨碎、粉碎或进行加工以增加植物的表面积，以促使希望的类黄酮化合物从松散固形物中萃取和分离出来。

为帮助分离和获得所希望的花色素苷化合物较好的最终收率，希望使植物与萃取剂3接触以得到富含类黄酮(尤其是花色素苷化合物)的提取物(汁液)，并形成松散的固体残渣或团块4。优选，萃取剂为水，以使更进一步的分离过程步骤减到最少。萃取步骤可以使用传统的萃取设备，以逆流、批量或多级萃取方式进行。

另外，团块可以同样进行萃取加工，以增加希望的花色素苷化合物的收率。如果进行该萃取步骤，希望将从这一步骤中得到的萃取液与上面步骤中得到的汁液和/或萃取液合在一起。

汁液可以以任何已知的方式，使用容积分离设备，如离心机，筛子，压滤器或过滤器与团块分离。希望在超滤之前，通过任何已知的容积分离设备将松散固体与液体分离。例如可以使用下列离心机，过滤器，筛子，压滤器等。

之后，超滤过程20用于除去悬浮粒子和分子量大于约200,000道尔顿的胶质高分子量组分。超滤膜可以是管型，毛细管型，螺旋型，中空纤维或其它适合的类型。该膜可以是聚砜，聚丙烯腈，聚醚砜，聚偏二氟乙烯或其它适合的物料。超滤优选使用交叉流动错流进行。膜的截留分子量可以为约20,000道尔顿-300,000道尔顿，优选约200,000道尔顿。如果在超滤以前没有过滤，优选使用更高截留分子量的膜以便获得可接受的过滤速率。因此，可以在超滤步骤以前引入微滤步骤。

例如，微滤器可以用来除去粒度为约0.01-1微米的悬浮粒子。

超滤可以在约5-25巴的压力和约20℃-80℃的温度下进行。这一步骤主要除去脂质、蛋白质和类似的胶体、细胞碎片、淀粉等，其优点是随后的RO步骤可以在没有膜污染的情况下进行，否则其将导致过滤速率降低。

超滤步骤的结果是得到富含花色素苷化合物的渗透液5和包含不希望要的化合物的保留物7。为增加类黄酮和希望的花色素苷化合物的最终收率，可以为超滤膜提供双滤6。

将超滤渗透液5进行反渗透30，得到富含类黄酮(包括花色素苷化合物)的保留液8和渗透液10，其基本上不含类黄酮(包括花色素苷化合物)。为增加类黄酮和希望的花色素苷化合物的最终收率可以向超滤膜提供双滤9。用于本发明RO的膜可以是聚醚砜，聚砜，醋酸纤维素或聚酰胺膜。

反渗透可以在约30-70巴的压力和约30℃-80℃的温度下进行，优选该温度维持在约30℃-45℃范围内。通常，反渗透膜的截留分子量在约1,000-10,000范围内，优选约2,000以得到保留液。

保留液包含比起始植物物质中发现的浓度更高的希望要的花色素苷化合物。保留液可以以溶液的形式保留，但也可以进一步经干燥40进行浓缩以除去一些水或完全干燥形成粉末11。

当希望更浓的溶液时，可以通过传统方法除去一些水，包括使用NaCl保留值大于90％的反渗透膜。

喷雾干燥是优选的干燥方式，但是其它干燥法，例如闪蒸干燥、冷冻干燥、流态化床干燥、环管干燥、微米干燥、盘式干燥、真空干燥、射频烘燥或微波烘燥均适宜用作这一干燥步骤。

在干燥之前，希望加入一种或多种流动调节剂，如麦芽糖糊精(如M100)、氢氧化镁或其它已知的流动调节剂或载体。通常，希望加入流动调节剂的量为保留液中固含量的约20-60％。

当使用喷雾干燥时，保留物的总固含量应该为浆液总重量的至少约1％，尽管希望更高的至少约20-35％固体的总固体含量。希望更高的固含量是因为必须在干燥步骤过程中除去的水量会相应地降低。结果，保留液的固含量将达到可能获得的最高含量，而且还允许有效的加工。保留液中固含量的上限一般由用于反渗透/纳滤步骤的膜以及使用的烘干器的操作限制条件决定。

保留液的温度不是关键的。通常优选约10-25℃的室温。可以使用更高的浆液温度，对于某些种类的干燥设备可能希望这样的温度。

可以使用通用的喷雾干燥设备，为喷雾干燥领域技术人员所熟知的作业程序适用于该方法的喷雾干燥步骤。干燥器(干燥剂气体)出口温度通常用于控制成品粉末的残留水分。在喷雾干燥过程中，干燥器出口温度通常在约40-100℃范围内。通常，希望维持出口温度低于约80℃以将所希望的花色素苷化合物的分解可能性减到最小。应当理解，相应的干燥器进口温度更高，通常在约90℃-200℃范围内，但优选低于约150℃。

从干燥操作中回收的产品是自由的流动的微粒固体，其典型地具有细粒状粉末外观并适于用作食物或食品添加剂。在这方面，包含所希望的一种或多种花色素苷化合物的产品粉末作为食品或食物添加剂是有用的。

反渗透渗透液可以通过，例如浓缩器50进一步加工以获得可以用来制备果汁饮料的浓缩液12。

当然，以上所述仅仅是一个方法，应当理解，能得到具有消炎活性大于天然果实中发现的消炎活性的果实提取物的任何方法均可用于本发明。

虽然上述任何方法均适于获得希望的花色素苷，但也可考虑，市售的提取物也可以用来满足本发明产品的一些或所有的需要。例如，众所周知，Fort Wayne，IN的Artemis International供应的果汁浓缩物和粉末包含花色素苷及其它类黄酮。在使用商品产品时，优选提取物中的花色素苷含量为提取物产品重量的至少10％。C.花色素苷和新型消炎化合物的表征

以上描述了从果实提取物中提取消炎活性的方法，其中提取物的消炎活性比天然果实的更高。根据这些说明，也将可能获得含有新型化合物的提纯组合物，所述化合物使果实提取物具有上述消炎活性。这一部分旨在提供提纯和表征这类化合物的一般说明。

通常，果实提取物按本文上述制备。这种果实提取物含有类黄酮化合物的混合物，其中有一些具有COX-2选择活性，其它具有COX-1选择活性，还有另外一些具有广谱的环加氧酶抑制活性，还有一些不具有任何明显的环加氧酶抑制活性。

为证明某些果实提取物具有消炎活性，使用例如下文所述的试验或其它为本领域技术人员所知的等同试验来测定COX活性，可以将果实提取物的个别组分进行分离。分离技术对本领域技术人员是众所周知的。例如，本领域技术人员可以使用色谱法，如薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、纸色谱法、亲和色谱法、离子交换色谱法、超临界流体色谱法等来分离个别的类黄酮组分(见Freifelder，PhysiCal BioChemistry AppliCations to BioChemistry andMoleCular Biology，第二版，Wm.Freeman and Co.，纽约，1982，其对色谱技术进行了综述)。

分配色谱法的理论基础是如果两相彼此接触，而且如果一相或两相构成溶质，该溶质将在这两相之间分配其本身。通常，分配色谱使用一种装填了吸附剂和溶剂的柱。包含溶质的溶液在柱的上部分层。然后，溶剂连续地通过该柱，其使得溶质通过柱填充材料移动。然后根据其移动速率收集溶质。最普通的两种分配色谱的类型为纸色谱和薄层色层(TLC)；这两者合在一起称为吸附色谱。在这两种情况下，基质包含结合液体。其它的分配色谱的例子是如气-液和凝胶色谱。

纸色谱是分配色谱的一种变形，即在以纸张形式的纤维素柱上进行。即使当其极其干燥时，纤维素也包含大量的结合水。因此分配在结合水和展开溶剂之间发生。经常使用水作溶剂。通常将极少量的欲进行分离的溶液混合物置于纸的上端并将其干燥。毛细作用拉动溶剂经过该纸，溶解样品并沿流动方向移动组分。纸色谱可以设计为上升式或者下降式溶剂流动。在第一次运行之后将轴偏转90度可以进行双向分离。

薄层色谱(TLC)通常用于分离脂质并因此被认为是本发明的一个优选实施方案。TLC具有纸色谱的优点，但是它允许使用任何可以被细分散和形成均匀层的物质。在TLC中，固定相是在玻璃或塑料板上均匀伸展的吸附剂层。通常，在沿着板的周长的一个选定的高度上，放置一根带子从而产生一个槽之后，将吸附剂倾倒在凝胶的表面上形成吸附剂浆液，从而制造所述板。吸附剂干燥之后，除去带子并象处理纸色谱法中的纸一样处理该板。施加样品并使板和溶剂接触。一旦溶剂几乎到达板的末端，移去该板并将其干燥。然后样点可以通过荧光、免疫学鉴定、放射性计算或在其表面上喷涂不同的试剂以产生变色进行鉴定。

欧洲越桔提取物的花色素苷的TLC由Petri等人(1994年)进行了描述。该参考文献也描述了其它可用于花色素苷试剂的鉴定和表征的光谱分光光度技术和色谱技术。

在气-液色谱(GLC)中，流动相是气体，固定相是液体，其或者被吸附在管或柱的内表面，或者被吸附在载体上。液体通常作为溶于挥发性溶剂，如醚中的固体使用。样品可以是可挥发的任何样品，其以液体的形式与惰性气体，如氦、氩或氮气一起引入，然后加热。该气体混合物经过管。挥发的化合物本身不断地在气体流动相和液体固定相之间依照其分配系数进行重新分配。

GLC的优点在于可以分离小分子。其灵敏度和速度相当好，速度接近标准液相色谱的1000倍。通过使用非破坏性检测器，GLC可以用于初步提纯克级物料。

凝胶色谱或分子筛色谱是一种以分子大小为基础的特殊类型的分配色谱。凝胶色谱背后的理论是：由包含小孔的细粒惰性物质制备的柱在大小分子经过或位于孔周围时，根据其粒度将大分子与小分子分离开来。只要用于制造粒子的物料不吸附分子，决定流动速率的唯一因素就是粒度，因此，只要形状相对固定，分子就以粒度逐渐减少的顺序从柱中洗脱出来。凝胶色谱对于分离不同粒度的分子是非常卓越的，因为分离与所有其它因素如pH值、离子强度、温度等均无关。事实上，凝胶色谱分离也没有吸附，区域扩展较小，在单一物质中洗脱体积与分子量相关。

用于凝胶色谱的凝胶原料是三维网状组织，其结构通常是无规的。凝胶剂由通常为惰性的、不粘结或与所分析的物质不起化学反应的、不带电的交联聚合物组成。凝胶中的填充空间充满液体而且该液体占据大部分的凝胶体积。常见的凝胶剂是葡聚糖、琼脂糖和聚丙烯酰胺；它们以水溶液来使用。

高效液相色谱法(HPLC)的特点在于非常快的具有卓越的峰分辨率的分离。这通过使用非常细的粒子和高压以维持足够的流速而实现。分离可以在几分钟或至多一小时内完成。而且，仅仅需要非常少量的样品，因为粒子如此之小而且装得紧紧的以致于空隙容积占柱床体积的非常小的部分。同样，样品的浓度也不必太大，因为区域如此狭窄以致于样品几乎没有稀释。装配有光电二极管阵列检测系统的HPLC常用于研究类黄酮，如芸香苷及其它栎精苷、根皮苷以及某些花色素苷(Paganga和Rice-Evans，FEBS Lett.401(1)：78-82，1997)。反相HPLC梯度程序已经被描述用于12种花色素苷的分离和定量测定(Petri等人，Acta Pharm.Hung.，64(4)117-122，1994)。栎精化合物也可以用HPLC技术表征，Laires等人(Food Chem.ToxiCol.，31(12)，989-994，1993)对其进行了描述。这种方法被认为可能适合于本发明表征和鉴定新型类黄酮。

亲和色谱是一种色谱分析程序，分析基础是被分离的物质与可特别地与其结合的分子之间特定的亲合力。这是一种受体-配位体型相互作用。柱填充材料通过将该键合对中的一个与不溶基质共价偶合而成。然后柱填充材料能特定地吸附溶液中的物质。通过把条件转变到不会发生键结(改变pH值、离子强度、温度等)而进行洗脱。

基质应该是本身不吸附分子到任何明显程度的物质，而且具有宽范围的化学、物理和热稳定性。配位体应该以不影响自身键合性能的方式耦合。配位体还应该提供相对强的键合，而且应该可以在不破坏样品或配位体的情况下洗脱该物质。亲和色谱的一个最普通的形式是免疫亲和层析，其使用与所检测的具体物质直接相对的抗体。

利用上述技术分离的花色素苷的结构可以通过如下参考文献所述的质谱和核磁共振光谱来表征，如Saito等人(PhytoChemistry，41(6)，1613-1620，1996和PhytoChemistry，43(6)，1365-1370，1996)；Takeda等人(PhytoChemistry，36(3)，613-616，1994)。另外的核磁共振技术由Terahara等人(BioSci.Biotech.Biochem.，58(7)，1324-1325，1994)；Nerdal等人(Acta.Chem.Scand.，46(9)，872-876，1992)描述。Johansen等人(Phytochemistry，30(12)，4137-4141，1991)描述了用于分离花色素苷的各种各样的方法，包括离子交换树脂、液滴反流(droplet-Counter)色谱法和凝胶过滤，随后使用如下技术，如化学降解、色谱法和光谱法，尤其是同核和杂核二维核磁共振技术来表征分离的花色素苷化合物。本领域技术人员都会明白，上述任何技术均可用于分离和进一步提纯本文所述果实提取物，以表征具有消炎活性的单独的化合物。D.消炎活性的测定试验

在本发明中描述了含花色素苷的果实提取物具有消炎活性。更具体说，这样的提取物被证明有抑制COX-2活性优于抑制COX-1活性。因此，这些提取物成为传统的NSAIDs的优良替代物，因为它们对COX-2具有选择性。这些抑制提取物还比最近开发出的COX-2专用″特级阿司匹林″优良，因为这些提取物是天然提取物，与对心脏病、中风及其它不利的心血管病的增加倾向没有关系。

抑制酶到其最高活性的50％的任何抑制剂的浓度称作IC₅₀或I₅₀。IC₅₀越小，用于酶抑制作用的相应的抑制剂越强或越有效。因此，如果化合物可以被吸收、代谢、传递到有问题的或患病的位置上，则用于消炎和减轻疼痛的添加剂配方的抑制剂的需要量就较小。

一些物质、化合物或植物浓缩物可以选择性地抑制COX-1或COX-2酶。这可称作物料的选择性。选择性可以通过比值I₅₀(COX-1)/I₅₀(COX-2)用数字表示。当比值等于1时，抑制剂对于任何一个同功酶没有选择性，即抑制剂相等地抑制COX-1和COX-2酶。当比值低于1时，抑制剂对COX-1更有选择性。当比值大于1时，抑制剂对COX-2抑制更有选择性。对慢性消炎和减轻疼痛的药或添加剂来说，选择性在副作用中有重要的作用。副作用主要是由抑制胃肠道内的COX-1酶而引起的胃肠(GI)出血，在胃肠道上前列腺素对胃肠包膜具有正常的机能。

在非甾醇消炎药(NSAIDs)中，选择性是一个重要的问题，因为除了期待吸收作用和输送到发炎的和疼痛的位置外，NSAIDs仅仅具有一种活泼体可以抑制胃肠道中基本用COX-1表示的酶并引起胃肠道出血。虽然尚末证明，天然产物，如含花色素苷的植物提取物，可能具有一定的优势，因为它们同时有非活泼体和活泼体，因此可能不会在胃肠道中引起副作用。可能存在不同的吸收、代谢和输送机制。有可能非活泼形式(含糖的糖苷形式)可以被吸收或通过胃肠道而不抑制在那里的COX-1酶，因此，胃肠道上的COX-1酶产生的前列腺素的量正常或足够高以维持GI包膜。在吸收之后，糖片断被分开，活泼体(糖苷配基体，花青素)被输送到COX-2酶大量诱导的位置，虽然COX-1也将被抑制(但程度低)。在该位置两种酶的抑制对于消炎和减轻疼痛将是非常有效的。

本发明的某些方面，有必要确定一种具体的果实提取物或其成分是否具有消炎活性。这样的活性可以利用本领域技术人员公知的消炎试验法来测定。利用前列腺素内过氧化物合酶-1和-2同功酶将很容易确定一种具体的提取物是否有适当的活性。这些试验法测定这些酶将花生四烯酸转换为前列腺素的能力。做为选择，可以使用如下所述的免疫测定方法。

试剂如花生四烯酸和COX-1和COX-2酶微粒体悬浮液对于本领域技术人员来说很容易获得(如从Oxford BiomediCal ResearCh，Oxford，MI，USA获得)。

因此，一种具体提取物的COX-2抑制活性可以用通常包括如下步骤的方法测定：(a)得到COX-2微粒体组合物；(b)将待测提取物与COX-2微粒体组合物混合；和(c)测定待测提取物抑制COX-2活性的能力。

COX-2活性可以通过得到COX-2的微粒体膜制剂而测定，如(在适当的缓冲液中浓度为5-10毫克蛋白质/毫升)。COX-2试验在37℃下按如下文献所述通过监测O₂吸取速率来进行，如(DeWitt等人，Am.J.Med.，95(2A)，40S-44S，1993；ArCh.BioChem.Biophys.，306(1)，96-102；1993)。该试验主要测定花生四烯酸向前列腺素内过氧化物-2的转化。因此，一单位的环加氧酶活性表示1nmol花生四烯酸/分钟的氧化(DeWitt等人，1993，supra)。做为选择，COX-2活性可以用色谱法通过测定COX-2酶产品的量来测定，可使用例如薄层色谱、气相色谱、高效液相色谱等。另一种测定COX-2活性的方法是使用酶作用物放射性标记并监测放射性标记的COX-2反应成品的量。无论使用什么方法，本领域技术人员可以将最终测定结果概括为环加氧酶活性，如使用的O₂量/毫克环加氧酶/分钟；毫克产品/毫克环加氧酶/分钟；产生的μCi放射性标记的产品/毫克环加氧酶/分钟；使用的μCi放射性标记的花生四烯酸酯/毫克环加氧酶/分钟。

为确定果实提取物能否抑制COX-2，就要在没有加入待测提取物的情况下测定或确定微粒体制剂的COX-2活性。然后将该待测提取物加入制剂中，在有待测提取物的情况下再测定其活性。如果待测提取物的存在使花生四烯酸酯氧化的量相对于待测提取物不存在时花生四烯酸酯氧化的量降低，则表明待测提取物具有COX-2抑制能力。

可以用已知的COX活性抑制剂进行对照实验，如阿司匹林，布洛芬，Celebrex^TM，萘普森等。通过比较果实提取物的结果与这些有用的已知抑制剂存在下的COX-2活性，还可以测定相对活性。

花生四烯酸酯氧化明显降低，如用带有O₂电极的氧消耗法，色谱技术(通过光密度法或液体闪烁光谱学对成品进行的定量)测定，表示为COX-2活性量降低至少约20-40％，最优选降低至少约50％，当然也有可能降低更高。测定花生四烯酸代谢物的色谱法试验和测定前列腺素形成的COX酶活性试验在本领域中是众所周知的，而且可以在活体外或活体内进行。

本发明不需要进行果实提取物的抑制性能体外定量试验，因为通常假设形成本发明的nutraceutical的果实提取物往往与在完整果实中发现的天然化合物相同。当然，应当理解，形成本文所述的果实提取物的COX-2抑制组分的花色素苷和类黄酮化合物在摄食后还可在活体内被改性，产生消炎化合物。

同样，也不必进行体内试验。但是，本领域技术人员可以使用发炎动物模型来测定这些化合物的活体内活性。例如，有发炎区域的啮齿动物模型可以用来测试已经通过如上面描述的试验表征的COX-2抑制剂的消炎效果。在试验中使用这样的动物样品时，需要使用例如至少两只有相似炎症的动物，一只与待测消炎组合物接触，另一只与对比或空白对照剂组合物接触，该空白对照剂组合物包含除消炎成分之外待测组合物的全部组分。与进行对比或空白对照剂组合物接触的动物相比，与待测组合物接触的动物炎症减轻将表示该待测组合物具有消炎活性。E.花色素苷与另外的消炎药的结合

本发明在某些方面描述了摄入具有消炎性能的食品添加剂是有益的，其中该食品添加剂含有消炎活性大于在天然果实中发现的消炎活性的果实提取物。本领域技术人员应该理解，这样的食品添加剂可以有利地与另外的消炎药结合。当然，与本发明的果实提取物相比，上述另外的消炎药将是次要的，并且可以是任何通常公认的消炎剂或甚至可以是通过本文上述试验表征的消炎剂。

不管另外的消炎剂是否是已知消炎药或是用本发明的方法表征的消炎药，本发明将涉及可以使用的各种各样的结合。因此，当果实提取物为“A”，另一消炎剂为“B”时，可以有如下结合：

A/B/A  B/A/B  B/B/A  A/A/B  A/B/B  B/A/A  A/B/B/B  B/A/B/B

B/B/B/A   B/B/A/B   A/A/B/B   A/B/A/B   A/B/B/A   B/B/A/A

B/A/B/A   B/A/A/B   A/A/A/B   B/A/A/A   A/B/A/A   A/A/B/A

果实提取物和另外的消炎剂可以与细胞在活体内或者在活体外接触或在活体内或活体外暴露于细胞以抑制该细胞的COX-2活性。本文使用的术语“接触”和“暴露”，当用于细胞时用来描述果实提取物和第二消炎剂传递到目标细胞或直接与目标细胞接近的过程。为达到有益的效果，两种药剂可以以有效结合量传递到细胞，该用量用来抑制COX-2活性、减少炎症和减少炎症引起的前列腺素的产生或其它效果以便降低细胞或细胞所位于的个别对象中的发炎反应。

对本领域技术人员来说，消炎剂是公知的，包括如水杨酸衍生物(如阿司匹林)，对氨基酚衍生物(如乙酰氨基酚)，吲哚和茚乙酸类(吲哚美辛、舒林酸和依托度酸)，杂芳乙酸类(托美丁、双氯芬酸和酮咯酸)，芳基丙酸衍生物(布洛芬，萘普森，keopren，fenopren，奥沙普秦)，邻氨基苯甲酸类(甲芬那酸，甲氯芬那酸)，烯醇酸类(吡罗昔康，替诺昔康，保泰松和oxyphenthatrazone)。这些及其它消炎剂对本领域技术人员来说是公知的并且对这些药剂不需要提供另外的描述。F.配方

本发明提供由果实提取物制成的天然食品添加剂，其中该食品添加剂含有消炎活性大于在天然果实中发现的消炎活性的果实提取物。本发明提供的果实提取物可以以粉末、液体或固体形式存在。下文实施例中给出特定的配方，这一部分论述配方的形式和组分，这些将是所希望的并且根据本发明的说明可以很容易地制造。

果实提取物可以是可重新组成的粉末组合物，当用例如水，牛奶或其它类似的液体重新组成时会得到饮料，其可以用来对需要的对象提供消炎活性。粉末组合物和由此制备的饮料尤其可在疼痛或炎症处理程序中用作肠内给药成分，上述处理使用许多精心设计的各种形式的产品，如奶昔，汤，鲜果汁，零食棒及其它固体形式如片剂，胶囊等，因此，它可以在疼痛处理时段内混合搭配以对患者提供更诱人的和更有效的帮助，特别是对那些处于后续护理情况中的患者。

除了饮料外，本发明的果实提取物还可以用于食物中。这种果实提取物可以与任何其它的食物相结合，例如，包含本发明提取物的油可以用作烹调油、煎炸用油或色拉油和可以用于任何油基食物，如人造黄油、蛋黄酱或花生酱。添加了本发明化合物的粮食面粉可以用于食物，如烘烤制品，麦片，意大利面制品和汤。包含果实提取物和来自果实提取物的新型花色素苷的油可以被乳化和用于各种水基食物，如饮料，包括如上所讨论的饮料混合物。将上述食物包含在低脂肪、低胆固醇或其它限定的食谱内是有利的。

“nutraceutical”是除提供营养效果外，还能提供其它效果的任何功能性食品。这一种类可包括营养饮料，节食饮料(如，Slimfast^TM，Boost^TM等)以及运动草药及其它加强饮料。本发明提供可以用作消炎剂的nutraceutical组合物。因此，它可用于减轻任何由COX-2的作用传递的症状，包括但不限于关节炎，头痛，过敏皮疹，炎性肠病，关节疼痛，慢性疲劳，纤维肌痛等。

除提纯的果实提取物外，nutraceutical或食物也可包含各种其它的有益组分，包括但不限于必需的脂肪酸、维生素和矿物质。这些组分对于本领域技术人员来说是公知的，但是，在不受缚于任何特别配方或用量的情况下，这一部分简要讨论可以成为本发明食品添加剂的一部分的那些组分。营养添加剂的含量和生产的另外描述公开在如下的文献中，如美国专利5,902,797；5,834,048；5,817,350；5,792,461；5,707,657；5,656,312(每个均在此引入作为参考)。

必需的脂肪酸，如γ-亚麻酸(ω-3)和亚油酸(ω-6)可以加入到本发明的食品添加剂中。研究表明，在除人以外的动物中，n-3与n-6脂肪酸的比甚至比脂肪酸的绝对用量更重要。参见Boudreau MD等人的“抑制从花生四烯酸生物合成类花生酸中在恒定n-3/n-6脂肪酸比值下食物n-3脂肪酸剂量缺乏反应”，Am.J.Clin.Nutr.，54：111-117(1991)。必需的脂肪酸不但涉及到心血管健康而且维护免疫系统。这些必需脂肪酸的不平衡可能导致胆固醇代谢差。另外，免疫系统机能可能受损，导致发炎。

在其它机能之中，钙和镁均与骨质健康有关。钙和镁之间不平衡的一个可能的结果是骨质矿物质的不平衡，它可能影响骨生长和骨更新(骨断裂和生长)。对骨健康和降低骨质疏松症风险来说，镁与钙同等重要，它影响男性也影响妇女(Purvis，J.R.，“不依赖胰岛素制剂的糖尿病患者中口服补镁因子在选择的心血管危险度方面的影响，Archives of Family MediCine，3：503-508(1994)〕。

矿物质锌和铜两者都与心血管健康有关，并应该以锌∶铜为5∶1的比值提供。这两种矿物质之间的不平衡可能会引起锌在铜上的拮抗效应。这种影响可能会妨碍身体将铜应用于心血管健康的能力。较之铜太多的锌将会妨碍身体制造SOD(超氧化物歧化酶)的能力，SOD是一种重要心脏防护酶。此外，要达到适当的HDL(高密度脂蛋白)与LDL(低密度脂蛋白)平衡也要求适当的锌∶铜比值。一般，在美国人饮食中锌摄入仅仅为RDA的33-75％，因此人们会考虑含有锌的食物添加剂。

此外，硒和碘也有一个对其机能最有效的比值，这一比值为硒∶碘为约2∶1。这些矿物质影响甲状腺功能，因此也会对甲状腺功能变化所引起的代谢产生影响。甲状腺功能不平衡可能对身体产生不适当的压力，结果是造成食物中营养素的吸收障碍，随后这可能使生长发育延迟。

在预防血管病症中，吡哆素，叶酸和钴胺素也有一个对它们发挥机能最有效的比值。吡哆素(维生素B6)比叶酸比氰钴胺(维生素B12)的最佳比值分别为大约100∶4∶1。这些维生素通过降低潜在的有害的氨基酸同型半胱氨酸的量来影响心血管功能。这一比值使人认识到：处于心脏病危险之中的个人从他们的饮食中吸收的这些维生素的量不平衡而且也不充分。

另外，也可提供维生素C，维生素B1(硫胺素)和维生素E。吸烟者对于维生素C的要求增加，而且抽烟是产生肺癌主要因素。维生素B1在能量转化中起着很重要的作用。硫胺素二磷酸盐(TDP)是碳水化合物转化为能量所必需的辅酶。因为目前美国男性总卡路里的45％从碳水化合物中吸收，在其饮食中最佳选配维生素B1是所希望的。

与维生素B6一起，维生素B12和叶酸补充帮助调整血的同型半胱氨酸的量，因此，它们将成为本发明食物添加剂配方的有用组分。维生素D(钙化醇)对于骨骼形成和体内矿物平衡是必不可少的。没有维生素D，小肠就不能吸收足够的钙，不管有多少钙可用来被吸收。因此，这表明维生素D作为营养添加剂的一个组分可用来生成强壮的骨骼。

锰在驱动金属酶，锰-超氧化物歧化酶(锰-SOD)中的作用已经清楚地得到认同，其在其它的金属酶体系(谷氨酰胺合成酶、精氨酸酶和丙酮酸羧化酶)中也有类似的作用。业已表明，许多酶系统也受到锰的活化，即使它们不是锰金属酶。锰-SOD连结可能具有特殊的临床重要性，因为这种形式的金属酶看起来好象是细胞线粒体膜内唯一的工作形式，因此它可能在保护线粒体和保证身体的氧化能量生成系统中起着独特的作用。在食物添加剂中将所希望包含锰。

可以包括在添加剂中的其它微量营养素包括但不局限于维生素如维生素A，维生素C，维生素E，维生素B2，烟酸，烟酰胺，泛酸，吡哆素，氰钴胺，维生素H，肌醇，酒石酸氢胆碱，甜菜碱和维生素K以及矿物质如钼，铬和钾。

紧张，运动及其它状况在身体内产生自由基，其可能损害身体的组成部分。为对抗自由基，本发明可以包含除上述维生素C和E以外的下列抗氧化剂：柑桔属生物类黄酮，混合类胡萝卜素，绿茶提取物及N-乙酰半胱氨酸。

另外，本领域技术人员公知的其它调味品和添加剂也可以加入到配方中以使得它们更加可口。例如，配方可以包含姜，乳香，果实调味品，色素，防腐剂等。

当以固体形式被摄食时，本发明的nutraceutical组合物可以另外包含固体载体如明胶或助剂。当以液体形式给药时，可以加入液体载体如水，石油产品，动物油或植物油如花生油、矿物油、豆油或芝麻油，或合成油。本发明的nutraceutical组合物也可以包含稳定剂、防腐剂、缓冲剂、抗氧化剂或其它本领域技术人员公知的添加剂。

在一个优选实施方案中，提供了一种食物或营养添加剂或nutraceutical，其包含约0.1-99％，优选约30-90％的含花色素苷的果实提取物。在这方面，单一剂型(即以单一片剂，胶囊服用(无论是液体或是固体中))包含花色素苷的总量约1-500毫克，优选约5-100毫克，更优选约20-70毫克。在目前优选的配方中，提供的片剂(单一剂型)包含约50毫克总花色素苷。术语“总花色素苷”指的是存在于单一剂型中的花色素苷的总量。

从含花色素苷植物中获得的提取物选自甲基花青素，花青素，花葵素，翠雀素，3’-甲花翠素，二甲花翠素，堪非醇，橙皮苷，龙胆翠雀碱，桔梗皂苷，瓜菊酯，包括它们的苷衍生物及其混合物。在一个优选实施方案中，花色素苷选自花青素，甲基花青素，二甲花翠素，3′-甲花翠素，翠雀素，它们的苷衍生物及其混合物。

营养添加剂包含稳定的花色素苷是有利的，其将在活体内水解成糖苷配基形式(花青素)，以提供COX抑制活性。

一种优选的营养添加剂包含果实提取物，其中果实提取物选自接骨木果，酸樱桃，欧洲越桔和其混合物的提取物。更具体地说，果实提取物含有含量为果实提取物重量的约2-98％的接骨木果提取物，含量为果实提取物重量的约1-49％的酸樱桃提取物，含量为果实提取物重量的约1-49％的欧洲越桔提取物。优选，提取物含有约90-98％(更优选约96％)的接骨木果提取物，约1-5％(更优选约2％)的樱桃提取物(优选酸樱桃)，和约1-5％(更优选约2％)的欧洲越桔提取物。

在这个优选的营养添加剂中，花青素包括至少约90重量％存在于接骨木果提取物中的总花色素苷。优选，花青素含有约95重量％，更优选约96重量％存在于接骨木果提取物中的总花色素苷。在这种情况下，该花青素以花青素-3-糖苷，花青素-3-黑接骨木苷，花青素-3，5-二葡糖苷和花青素-3-samb-5-糖苷的混合物存在。

同样，花青素含有至少约90重量％存在于酸樱桃提取物中的总花色素苷。优选，花青素含有约95重量％，更优选约96重量％存在于酸樱桃提取物中的总花色素苷。与接骨木果相反，该花青素以花青素-3-芸香苷-己糖，花青素-3-芸香苷戊糖，花青素-3-芸香苷和甲基花青素-3-芸香苷的混合物存在。

最后，欧洲越桔包含二甲花翠素，甲基花青素，花青素，3′-甲花翠素和翠雀素的混合物。这些花色素苷中的每一个包括约95重量％，更优选约96重量％存在于欧洲越桔提取物中的总花色素苷。更具体地说，二甲花翠素以二甲花翠素-3-阿糖苷，二甲花翠素-3-糖苷，二甲花翠素-3-半乳糖苷存在。甲基花青素以甲基花青素-3-糖苷，甲基花青素-3-半乳糖苷存在。花青素、3′-甲花翠素和翠雀素以3-糖苷和3-半乳糖苷存在。

下表阐明特别优选的实施方案中的每项具体含量。

果实	花色素苷	总花色素苷的重量％
			酸樱桃(Balaton)	花青素-3-芸香苷-己糖	75％
	花青素-3-芸香苷-戊糖	3％
				花青素-3-芸香苷	18％
	甲基花青素-3-芸香苷	4％
			总计		100％
接骨木果	花青素-3-糖苷	42％
				花青素-3-黑接骨木苷	43％
	花青素-3，5-二葡糖苷	2％
				花青素-3-samb-5-糖苷	9％
	未知物	4％
			总计		100％
欧洲越桔	二甲花翠素-3-阿糖苷	8％
				二甲花翠素-3-糖苷	7％
	二甲花翠素-3-半乳糖苷	3％
				甲基花青素-3-糖苷	15％
	peopnidin-3-半乳糖苷	2％
				花青素-3-糖苷	11％
	花青素-3-半乳糖苷	8％
				3′-甲花翠素-3-糖苷	5％
	3′-甲花翠素-3-半乳糖苷	12％
				翠雀素-3-糖苷	12％
	翠雀素-3-半乳糖苷	11％
				未知物	6％

G.实施例

下列实施例用于说明本发明的优选实施方案。但是，本领域技术人员应该理解，在不背离本发明精神和范围的情况下，根据本公开内容，在公开的具体实施方案中可以进行许多变化，并仍能获得相同或相似的结果。

实施例1

使用袋压装置压榨100千克樱桃，收集果汁。在约38℃以下通过截留分子量为200,000的超滤装置将收集的果汁过滤。操作超滤装置以使保留液包含低于0.5重量％的固体。

之后，使用截留分子量为4,000的膜对来自超滤装置的渗透液进行反渗透。持续反渗透步骤直到保留液包含约1重量％或更少的固体。

将保留液收集到储罐中并用真空蒸发器将其浓缩到固含量为至少20重量％，真空蒸发在低于约52℃温度下进行以避免浓缩的类黄酮分解。

将浓缩物与麦芽糖糊精合并，并进行喷雾干燥，该喷雾干燥器的出口温度给持在低于约27℃。

将从袋压装置保留下来的果肉收集起来，干燥、压碎。

实施例2

由38.8千克酸樱桃组成的批料用袋压以得到19.3千克果汁和18.6千克的团块。将pH值为3.3的果汁泵送到超滤膜，流速为1770-1950g/min，压力为10巴，温度范围为过滤开始时的29℃到过滤终止时的18°F。启动双滤并持续直到渗透液中溶解的固体为约0.2重量％.

超滤膜为PVDF聚合物膜，其额定截留分子量为100,000(道尔顿)。适合的膜可以以商品名FP从PCI Membrane Systems购得。

在超滤结束时，收集到53.7千克包含5重量％固体的渗透液和3.49千克包含0.3重量％固体的保留物。然后将渗透液进行纳滤/反渗透，进料压力为40巴，流速范围从起始的1290g/min到最终的1380g/min，温度范围从该过程起始温度24℃到该过程结束温度41°F。双滤中使用72.4千克水。

使用截留分子量为4,000(道尔顿)的聚醚砜膜。适合的膜可以以商品名ES404从PCI Membrane Systems购得。

这一步骤结束时，收集到6.4千克包含1重量％固体的保留液，回收了117千克包含2重量％固体的渗透液。

为制成粉末，将保留液与79克麦芽糖糊精M100合并并混合，将得到的产品引入进口温度为约140℃，出口温度为约90℃的喷雾干燥器中制得约105克粉末。

实施例3

果实提取物的COX-2和COX-1抑制活性比较

该实施例描述了一种酶活性测定方法，在该方法中使用氧监测系统以监测果实提取物的COX抑制活性。在该测定法中，通过置于溶解氧测量系统(Instech，Plymouth Meeting，PA)中的氧电极不断地监测溶解氧的浓度变化。通过线性记录仪(Fisher Scientific，Pittsburgh，PA)记录输出结果。

每天都制备新鲜的氯化钾溶液(15g/100ml蒸馏水)，并按照厂家说明书装配电极，保持测量室温在37℃。

使用前列腺素测定器材，测定装置类似于对COX-1所描述的测定方式。简短来说，将50μl石炭酸加入到20ml的100mM Tris缓冲液中，加热到37℃，保持1分钟(工作缓冲剂)。在一管正铁血红素中加入0.9ml的该工作缓冲剂。将50μl浓度为0.1的NaOH加入到花生四烯酸管瓶中并旋转。加入0.43ml水并将溶液再次混合。称量提取物样品并将其溶于工作缓冲剂得到最终浓度为0.1g/ml。缓冲剂，样品或稀释的样品直接用于酶活性测定。

按照厂商指导进行酶活性测定，这对本领域技术人员来说是公知的。简短地说，将600μl工作缓冲剂从溢流口吸入室内，关闭喷射阀，将主出口连接到右方的注射器上，将搅拌棒速率设定为3k/min。在1分钟间隔时，注入5μl酶，15μl正铁血红素溶液，6μl缓冲剂或样品或稀释的样品和8μl花生四烯酸溶液。将氧浓度变化转变成mV并将其记录。当加入花生四烯酸时，可以看到的氧消耗或氧浓度减少。

从下表中可以看出所测试的样品中选择性的明显趋势。

            表1.COX-1和COX-2的IC50值和具体的活性

样品	COX-1 IC50	COX-2 IC50	具体活性*
				阿司匹林	1/20,000	1/10,000	0.5
Montmorency酸樱桃Primer	1/20,000	未测出	NA
				Balaton酸樱桃Prime	1/5,000	1/23,000	4.6
Milne酸樱桃	1/2,500	未测出	NA
				Artemis越桔	＞＞1/1,000	1/10,000	NA
Artemis北美沙果	1/2,000	1/15,000	7.5
				Artemis接骨木果	1/3,000	1/23,000	10.1
Nutrilite西印度樱桃	1/20,000	未测出	NA
				Celebrex	1/4,000	1/28,000	7
栎精标准物	1/3,500	1/22,000	6.3
				Artemis欧洲越桔	1/12,000	1/15,000	1.25

*该数越大，提取物对COX-2的选择性越高，相反对COX-1的选择性越小。

另外，对于一种公认的COX-2特效抑制剂Celebrex，检测了其COX-2潜力。

              表2.相对于Celebrex的COX-2性能

用上述方法测定了各种待测抑制剂的COX-2抑制并与已知的COX-2抑制剂Celebrex进行了比较。

样品	COX-2	与Celebrex相比的性能
			Artemis北美沙果	1/15,000	54％
Artemis接骨木果	1/23,000	82％
			Artemis越桔	1/10,000	36％
Balaton酸樱桃  Prime	1/23,000	82％
			标精标准物	1/22,000	78％
Celebrex	1/28,000	100％

以上数据清楚地表明Artemis黑莓样品对COX-2的选择性。实施例4

下面描述一个测定待测抑制剂是否抑制COX-1或COX-2的优选方法。通常，对每个待测抑制剂，六个不同的浓度都用于COX-1和COX-2酶反应。来自标准样品或酶反应的PG-f2α的量用免疫测定法进行定量。在标准样品中的PG-f2α量用于绘制标准曲线(光密度/浓度)，标准曲线用来计算每个样品的酶反应(回归)的PG-f2α量。然后，从同一种待测抑制剂的六个不同反应浓度得到的PG-f2α量用来绘制样品曲线。最后，从样品曲线中获得抑制酶到其最高活性(没有抑制剂时)的50％的待测抑制剂的浓度，或I₅₀。为保持结果的一致性，一个待测抑制剂或药作为正(positive)对照物用于每组实验。

COX-1和COX-2酶来自肯塔基州大学的Dr.Daniel Tai。它们的制备如下：COX-1酶从来自于肯塔基州中心血库的人的血小板浓缩物中提取。在1,000xg下将血小板悬浮液离心10分钟。用相同体积的磷酸盐缓冲盐水洗涤小粒，悬浮液再次进行离心。血小板被悬浮在5体积的50mMTris盐酸缓冲剂中，pH为7.5，在4℃下进行超声处理3×20秒。在5,000xg下将悬浮液离心10分钟。上清液进一步在100,000xg下离心60分钟。小粒(微粒体)悬浮在5ml的50mM Tris盐酸缓冲剂中，pH为7.5，并于-80℃下以200μl的等分部分来贮存。这一部分用作COX-1酶源。

重组体人的COX-2酶从感染了携带有COX-2 cDNA的重组体杆状病毒的昆虫细胞(Sf9)中获得。简而言之，将Sf9细胞(1×10⁷)种在75cm²的组织培养烧瓶中，内有20ml完全的TNF-FH介质。允许细胞附着1小时。移走介质，在约10多重性因子下加入4ml包含重组病毒的Grace介质。允许细胞连续生长72小时。通过500xg下离心10分钟，收集细胞。将细胞悬浮在1毫升50mM的Tris盐酸缓冲剂中(pH为7.5)，并在0℃超声处理3×10秒。在5,000xg简短旋转匀浆5秒以除去细胞碎片。然后将上清液于-80℃下以200μl的等分部分来贮存。这一部分用作COX-2酶源。

制备如下的缓冲剂：

1.包被用缓冲剂：0.1M的NaHCO₃/Na₂CO₃，pH9.5

2.酶免疫测定(“EIA”)用缓冲剂：0.1M的KH₂PO₄/K₂HPO₄，pH7.5，包含0.9％的NaCl和0.1％牛血清清蛋白(ELISA或RIA级)

3.抗体稳定用的缓冲剂：EIA缓冲剂加蔗糖(5g每100毫升)

4.洗涤用缓冲剂：0.01M的KH₂PO₄/K₂HPO₄，pH7.5，包含0.05％的Tween20

5.酶反应缓冲剂和样品稀释缓冲剂：50mM Tris盐酸，pH7.5

6.PBS(磷酸盐缓冲液盐水)10mM的KH₂PO₄/K₂HPO₄，pH7.5，包含0.9％NaCl

7.A蛋白溶液1mg/ml，在磷酸盐缓冲盐水中

用于免疫测定法的加样孔通过如下的方法进行包被处理：(a)在19.9毫升表皮缓冲剂中加入100μlA蛋白溶液，搅拌加样孔，倾倒入配药托盘中；(b)移取200μl上述溶液至每个加样孔中(在转移入加样孔中以前冲洗多次)；(c)在室温下将盘子贮存4-5小时或在37℃贮存2-3小时或在4℃贮存过夜；(d)移取100μl的EIA缓冲剂到每个加样孔以占据未填满的部位，摇动并在室温下保温2小时或在4℃保温过夜。如果加样孔装有水，盘子可以在4℃贮存不确定的时间。

制备如下的溶液：

1.花生四烯酸：1毫克/毫升的乙醇溶液

2.异丙基肾上腺素：2.5毫克/毫升，在使用以前马上制备

3.血色素：3.2毫克/毫升，在使用以前马上制备

4.SnCl₂：50毫克/毫升的乙醇溶液

5.HCI：1N

6.K-蓝色底物缓冲剂：Neogen，Lexington，KY

7.COX-1酶(如上所述)：稀释30倍，每次测定使用5μl

8.COX-2酶(如上所述)：稀释5倍，每次测定使用5μl

9.PGF-2α抗体(Dr.Tai)：稀释5,000倍，每个加样孔使用50μl

10.PGF-2α-HRP(Dr.Tai)：稀释2,000倍，每个加样孔使用100μl

制备下列PGF-2α标准样品：

A.1μg/ml

B.20μlA(1μg/ml)加上980μl的EIA缓冲剂---1,000pg/50μl

C.200μlB加上1.8ml的EIA缓冲剂-----100pg/50μl

D.200μlC加上1.8ml的EIA缓冲剂-----10pg/50μl

标准样品(pg/50μl/well)	B	C	D	缓冲剂(ml)
					0				1.0
5			0.5	0.5
					10			1.0
20		0.2		0.8
					50		0.5		0.5
100		1.0
					200	0.2			0.8
500	0.5			0.5
					1000	1.0

当待测抑制剂是含花色素苷植物的提取物时，花色素苷被提取、浓缩和水解以提供糖苷配基形式，例如花青素。同样，当待测抑制剂为市售提取物时，提取物被水解以提供糖苷配基形式。在所有情况下，所测试的均是花色素苷的糖苷配基形式。然后，将水解的花色素苷溶于0.1％的盐酸乙醇溶液以用于测试。

PGF-2α是一种前列腺素，进行酶反应是为了测定待测抑制剂是否能有效地抑制COX-1或者COX-2(这取决于所使用的酶)。PGF-2a是间接稳定的前列腺素，其由通过酶反应形成的前列腺素产品还原得到。

酶反应程序依如下所述进行：(a)制备385μl缓冲剂(50mM的Tris-HCl，pH7.5)并在室温下将其与50μl异丙基肾上腺素，10μl血色素，5μl SnCl₂和5μl酶混合(取决于将要进行测试的酶，例如如上所述的COX-1或COX-2)；(b)在装有40μl待测抑制剂的管中加入455μl的混合物(a)，并混合；(c)在每个管中加入5μl花生四烯酸溶液，混合，并在37℃保温5分钟；(d)通过加入30μl的1N的HCl并混合以停止反应；(e)通过加入30μl的1M Tris-碱进行中和。

酶免疫测定程序是用来测定由酶反应产生的PGF-2α量的方法。酶免疫测定按下面的方式进行：(a)将加样孔中的全部液体摇出并涂在纸巾上形成斑点；(b)每次用200μl洗涤用的缓冲剂洗涤2次，摇动并吸印；(c)加入50μl的PGF-2α抗体；(d)加入50μl的STD(PGF-2α)或上述酶反应产品(用EIA缓冲剂稀释50倍)；(e)加入100μl的PGF2α-HRP(在EIA缓冲剂中)；(f)摇动并允许盘于在室温下保持1小时；(g)通过重复步骤(b)将加样孔洗涤三次；(h)在每个加样孔中加入100μl底物缓冲剂；(i)在室温下培养3-30分钟，培养时间长短取决于显色；(j)开启计算机和96-well生物测定读数装置并遵循操作指南(Molecular Devices，V_max动力学微量培养板读数装置)；(k)加入30μl的1N HCl以终止反应；(1)在420nm读数；(m)保存数据。

通过如下方法对数据进行分析：(a)将数据复制到一个电子数据表中；(b)根据标准PGF-2a免疫测定结果绘制标准曲线；(c)使用回归从标准曲线查找所有样品酶反应的PGF-2a量；(d)分别对每个样品画出曲线；和(e)测定I₅₀。根据该程序，评价几个待测抑制剂，将其结果列于下表3中。

                                                    表3

样品	样品重量(g)	纯化后的最后体积(ml)	总花色素苷浓度色(mg/ml)	花青素浓度(mg/ml)	花青素(％)	COX抑制(水解的液体样品)
									I50(COX1)(μg)	I50(COX2)(μg)	I50(COX1)/I50(COX2)
						A	1.33	2.1				1.53	0.93	61	13.2	10.7	1.2
B	0.15	2.0	1.68	0.74	44				19.2	21.4	0.9
						C	0.15	2.0				2.92	1.36	47	8.7	8.7	1.0
D	0.2028	1.0	0.20	0.20	100				34.4	17.5	2.0
						E	0.15213	1.0				0.17	0.17	100	31.5	15.8	2.0
F	0.30784	1.0	0.057	0.046	80				32.8	23.5	1.4
						阿司匹林									100	100	1
布洛芬									8	2	4
						Celebrex									7	1	7
Vioxx									10	0.5	20

A是包含40％的含7％花色素苷的欧洲越桔的片剂B是来自包含25％欧洲越桔的Nutritech的市售提取物C是来自包含25％欧洲越桔的Nutritech的市售提取物，其生产批量不同于样品BD是包含39.17％的含15％花色素苷的接骨木果的片剂E是包含39.17％的含20％花色素苷的接骨木果的片剂F是包含11.76％的接骨木果和19％的欧洲越桔的片剂，其中接骨木果中含15％花色素苷，欧洲越桔中含7.2％花色素苷

接骨木果含有98％的花青素和花色素苷。欧洲越桔含有23％的花青素和花色素苷。

从上明显可知，花青素含量提高，其性能和选择性增加。

实施例5

根据上述实施例4中描述的程序，评价了许多待测抑制剂。表4示出了评价结果。

                       表4

提取物	150 COX-1	I50 COX-2	选择性	活性物含量
					欧洲越桔(来自Artemis)*	29	22	1.3	10.0％
鲁比尼  (来自Artemis)*	75	57	1.2	7.2％
					接骨木果样品	18	14	1.3	21.0％
欧洲越桔(来自lprona)*	41	34	1.2	2.3％
					北美沙果(来自lprona)*	117	97	1.2	13.6％
接骨木果(来自lprona)*	47	35	1.3	17.0％
					欧洲越桔(来自Nutratech)*	14	10	1.4	10.6％
酸樱桃    01-01a*	250	200	1.3	3.48％
					接骨木果  004-03*(23％CRR)	25	19	1.3	15.06％
接骨木果  004-04*(0％CRR)	18	14	1.3	20.15％
					石榴提取物粉末	120	80	1.5	n/a
					郁金提取物	250	150	1.7
印乳香	200	150	1.3
					人参  gotogingseng	200	250	0.8
姜	200	100	2
					绿茶提取物粉末	70	60	1.2
绿茶多酚	110	100	1.1

注：1.对所有的果实样品，总花色素苷用花青素-3-糖苷的数量表示

2.活性含量以试验结果为基础计算并表示为活性物质的百分数如，在接骨木果，北美沙果和酸樱桃中，100％的花色素苷是活性花青素的苷。

*指从水解和XAD柱提纯的果实测试的COX抑制活性。

根据以上结果，用于炎症治疗的食品添加剂优选提供COX-1抑制与COX-2抑制的比至少为1，优选大于1.3。因此，食品添加剂将提供选择性的COX-2抑制。配方

本实施例提供包含一种或多种来自于含花色素苷植物的果实提取物用作消炎药的配方。当然这些仅仅是示范性的配方，本领域技术人员将会理解，根据具体的说明书可以对这些配方作出改变，这些改变仍然相当于本发明的配方。

                   表5  消炎配方1

组分	2单位配方	1单位配方	％配方
				活性组分
接骨木果提取物(最少7％花青素苷)	100mg	50mg	11.277％
				北美沙果提取物(最少10％花青素苷)	100mg	50mg	11.277％
酸樱桃提取物	5.00mg	2.50mg	0.564％
				赋形剂：
米粉	675.00mg	337.5mg	76.121％
				硬脂酸镁	4.50mg	2.25mg	0.507％
硅酮二氧化物	2.25mg	1.13mg	0.254％

                      表6  消炎配方2

组分	2单位配方	1单位配方	％配方
				活性组分
接骨木果提取物(最少13％花青素苷)	100mg	50mg	11.855％
				北美沙果提取物(最少10％花青素苷)	100mg	50mg	11.855％
酸樱桃提取物	5.00mg	2.50mg	0.593％
				其它消炎药草浸液：印乳香提取物(最少65％乳香酸)	600.00mg	300.00mg	71.132
赋形剂：
				米粉	25.00mg	12.50mg	2.964％
硬脂酸镁	9.00mg	4.50mg	1.067％
				硅酮二氧化物	4.50mg	2.25mg	0.533％

                        表7  消炎配方3

组分	2单位配方	1单位配方	％配方
				活性组分
接骨木果提取物(最少13％花青素苷)	100mg	50mg	5.905％
				北美沙果提取物(最少10％花青素苷)	100mg	50mg	5.905％
酸樱桃提取物	5.00mg	2.50mg	0.295％
				其它消炎药草浸液
印乳香提取物(最少65％乳香酸)	600.00mg	300.00mg	35.430％
				姜提取物(最少5％的姜醇)	500.00mg	125.00mg	29.525％
赋形剂：
				米粉	375.00	93.75	22.143％
硬脂酸镁	9.00mg	2.25mg	0.531％
				硅酮二氧化物	4.50mg	1.13mg	0.266％

根据本公开，不进行过多的实验即可以制备本文公开的和要求权利的所有组合物和/或实施本文公开的和权利要求的方法。虽然本发明的组合物和方法已经通过优选实施方案进行了描述，但对本领域技术人员来说，很显然，在不背离本发明的原理，精神和范围的情况下，可以对本文所述的组合物和/或方法以及方法的步骤或其顺序进行变化。更准确地说，很显然，当能达到相同或相似的结果时，在化学性质和生理学上均相关的某些试剂可以用来代替本文所述药剂。所有这种相似的代用品和对本领域技术人员显而易见的改变均被认为在随后由权利要求书所定义的本发明的精神，范围和原理范围之内。

Claims (25)

1.一种具有消炎性能的食品添加剂，其中该食品添加剂包括：

a.消炎活性大于在其天然果实中发现的消炎活性的富含花色素苷的果实提取物；和

b.药理上可接受的稀释剂或赋形剂。

2.权利要求1的食品添加剂，其中果实提取物来自于选自如下的果实：甜樱桃，酸樱桃，西印度樱桃，李子，欧洲越桔，黑莓，醋栗，北美沙果，越桔，草莓，酸果蔓红，博伊森树莓，葡萄，覆盆子，接骨木果及其混合物。

3.权利要求1的食品添加剂，其中提取物的消炎活性通过抑制环加氧酶进行传递。

4.权利要求1的食品添加剂，其中提取物提供的对环加氧酶2(COX-2)的抑制活性大于对环加氧酶1(COX-1)的抑制活性。

5.权利要求1的食品添加剂，其中提取物提供的对环加氧酶1(COX-1)的抑制活性大于对环加氧酶2(COX-2)的抑制活性。

6.权利要求4的食品添加剂，其中对COX-2的抑制活性与对COX-1的抑制活性之间的比值为约1∶1-25∶1。

7.权利要求1的食品添加剂，其中消炎抑制活性通过花色素苷传递，所述花色素苷选自甲基花青素，花青素，花葵素，翠雀素，3’-甲花翠素，二甲花翠素，堪非醇，橙皮苷，龙胆翠雀碱，桔梗皂苷，瓜菊酯，它们的苷衍生物及其混合物。

8.权利要求1的食品添加剂，其中果实提取物包含一种或多种花色素苷，其量为该提取物重量的至少约10％。

9.权利要求1的食品添加剂，其中果实提取物包含一种花色素苷，所述花色素苷选自花青素，其苷衍生物及其混合物。

10.权利要求1的食品添加剂，其中添加剂制成凝胶，胶囊，片剂，糖浆，饮料或粉末。

11.权利要求1的食品添加剂，其中消炎活性比天然果实的消炎活性大约2-100倍。

12.权利要求1的食品添加剂，还包括一种具有消炎活性的植物或提取物。

13.一种在人身上抑制COX-2的方法，包括提供一种含花色素苷的提取物的步骤，其中花色素苷水解成其糖苷配基形式以使对COX-1的抑制低于对COX-2的抑制。

14.一种在细胞中抑制COX-2活性的方法，包括将所述细胞与果实提取物接触的步骤，所述果实提取物选自甜樱桃，酸樱桃，西印度樱桃樱桃，李子，欧洲越桔，黑莓，黑醋栗，北美沙果，越桔，草莓，酸果蔓红，博伊森树莓，葡萄，覆盆子，接骨木果及其混合物，并且其消炎活性大于在天然果实中发现的消炎活性。

15.权利要求14的方法，其中细胞是哺乳动物细胞。

16.权利要求15的方法，其中细胞是人的细胞。

17.权利要求14的方法，其中细胞在活体外和果实提取物接触。

18.权利要求14的方法，其中细胞在活体内接触。

19.一种治疗动物发炎反应的方法，包括给予该动物一种组合物，所述组合物包含：

a.消炎活性大于在其天然果实中发现的消炎活性的果实提取物；和

b.药理上可接受的稀释剂或赋形剂。

20.权利要求19的方法，其中发炎反应选自关节炎，疼痛，过敏皮疹，炎性肠病和哮喘。

21.权利要求19的方法，其中果实提取物包含一种花色素苷，所述花色素苷选自甲基花青素，花青素，花葵素，翠雀素，3’-甲花翠素，二甲花翠素，堪非醇，橙皮苷，龙胆翠雀碱，桔梗皂苷，瓜菊酯，它们的苷衍生物及其混合物。

22.权利要求21的方法，其中花色素苷在活体内水解以使COX-2被选择性地抑制。

23.一种用于从含花色素苷植物中浓缩花色素苷的方法，包括：

a.将所述植物和水的混合物均匀化以形成一种包含一种或多种花色素苷的水溶液和固体，所述花色素苷选自甲基花青素，花青素，花葵素，翠雀素，3’-甲花翠素，二甲花翠素，堪非醇，橙皮苷，龙胆翠雀碱，桔梗皂苷，瓜菊酯，它们的苷衍生物及其混合物；

b.从该溶液中分离固体；

c.将该水溶液通过截留分子量在约100,000-1,000,000的超滤膜以得到上清液；

d.将上述上清液通过截留分子量在约1,000-10,000的反渗透膜以得到富含花色素苷的保留物；

e.收集该保留物；

f.在低于约80℃温度下干燥该保留物。

24.权利要求23的方法，其中在收集的保留液中加入流动性控制剂以形成一种混合物，通过喷雾干燥完成干燥以形成粉末。

25.权利要求24的方法，还包括将粉末与一种赋形剂结合以得到食物添加剂。

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