JP2003135093A - メタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の薬剤感受性試験方法 - Google Patents
メタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の薬剤感受性試験方法Info
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- JP2003135093A JP2003135093A JP2001331756A JP2001331756A JP2003135093A JP 2003135093 A JP2003135093 A JP 2003135093A JP 2001331756 A JP2001331756 A JP 2001331756A JP 2001331756 A JP2001331756 A JP 2001331756A JP 2003135093 A JP2003135093 A JP 2003135093A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】本発明は院内感染の原因菌として問題になって
いるメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の薬剤感受性試験
方法を提供する。 【解決手段】β−ラクタム薬を含有する液体培地と、β
−ラクタム薬／メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤として
ジカルボン酸誘導体を含有する液体培地との組合せを用
いることを特徴とするメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌
の薬剤感受性試験方法。
いるメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の薬剤感受性試験
方法を提供する。 【解決手段】β−ラクタム薬を含有する液体培地と、β
−ラクタム薬／メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤として
ジカルボン酸誘導体を含有する液体培地との組合せを用
いることを特徴とするメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌
の薬剤感受性試験方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、β−ラクタム薬を
含有する液体培地とβ−ラクタム薬およびメタロ−β−
ラクタマーゼ阻害剤としてジカルボン酸誘導体を含有す
る液体培地との組合せを用いたメタロ−β−ラクタマー
ゼ産生菌の薬剤感受性試験方法に関する。
含有する液体培地とβ−ラクタム薬およびメタロ−β−
ラクタマーゼ阻害剤としてジカルボン酸誘導体を含有す
る液体培地との組合せを用いたメタロ−β−ラクタマー
ゼ産生菌の薬剤感受性試験方法に関する。
【０００２】本発明では次の略語を使用することがあ
る。
る。
ＭＢＬ：メタロ−β−ラクタマーゼ (Metallo-Beta-Lac
tamase) ＥＳＢＬ：基質拡張型β−ラクタマーゼ (Extended Spe
ctrum Beta-Lactamase) ＳＭＡ：メルカプト酢酸ナトリウム (Mercaptoacetic A
cid Sodium salt) ＭＰＡ：２−メルカプトプロピオン酸 (2-Mercaptoprop
ionic Acid) ＳＭＰ：２−メルカプトプロピオン酸ナトリウム (2-Me
rcaptopropionic Acid Sodium salt) ＤＰＡ：ジピコリン酸（2,6-pyridinedicarboxylic aci
d） ＣＡＺ：セフタジジム ＩＰＭ：イミペネム ＮＣＣＬＳ：米国臨床検査標準委員会 (National Commi
tee for Clinical Laboratory Standards) ＭＩＣ：最小発育阻止濃度 (Minimum Inhibitory Conce
ntration) ＭＨＡ：ミューラー・ヒントン寒天培地 (Mueller Hint
on Agar) ＭＨＢ：ミューラー・ヒントン液体培地 (Mueller Hint
on Broth) ＣＡＭＨＡ：陽イオン調整ミューラー・ヒントン寒天培
地 (Cation Adjusted Mueller Hinton Agar) ＣＡＭＨＢ：陽イオン調整ミューラー・ヒントン液体培
地 (Cation Adjusted Mueller Hinton Broth)
tamase) ＥＳＢＬ：基質拡張型β−ラクタマーゼ (Extended Spe
ctrum Beta-Lactamase) ＳＭＡ：メルカプト酢酸ナトリウム (Mercaptoacetic A
cid Sodium salt) ＭＰＡ：２−メルカプトプロピオン酸 (2-Mercaptoprop
ionic Acid) ＳＭＰ：２−メルカプトプロピオン酸ナトリウム (2-Me
rcaptopropionic Acid Sodium salt) ＤＰＡ：ジピコリン酸（2,6-pyridinedicarboxylic aci
d） ＣＡＺ：セフタジジム ＩＰＭ：イミペネム ＮＣＣＬＳ：米国臨床検査標準委員会 (National Commi
tee for Clinical Laboratory Standards) ＭＩＣ：最小発育阻止濃度 (Minimum Inhibitory Conce
ntration) ＭＨＡ：ミューラー・ヒントン寒天培地 (Mueller Hint
on Agar) ＭＨＢ：ミューラー・ヒントン液体培地 (Mueller Hint
on Broth) ＣＡＭＨＡ：陽イオン調整ミューラー・ヒントン寒天培
地 (Cation Adjusted Mueller Hinton Agar) ＣＡＭＨＢ：陽イオン調整ミューラー・ヒントン液体培
地 (Cation Adjusted Mueller Hinton Broth)
【０００３】
【従来の技術】β−ラクタム薬（β−ラクタム系抗菌
薬）は、その分子構造母核中にβ−ラクタム環を持つ抗
菌薬の総称でペニシリンの発見以来、多くのβ−ラクタ
ム薬が開発されている。このβ−ラクタム薬の開発に伴
い、その分子構造中のβ−ラクタム環を加水分解して、
その抗菌作用を無効化する酵素β−ラクタマーゼを産生
する耐性菌（β−ラクタマーゼ産生菌）が出現した。β
−ラクタマーゼはクラスＡ〜Ｄ型に分類される。このう
ちクラスＢ型酵素はその活性中心に亜鉛などの金属イオ
ンを有しているので、メタロ−β−ラクタマーゼ（ＭＢ
Ｌ）と呼ばれている。ＭＢＬの阻害剤としてはチオール
化合物やＥＤＴＡなどが知られている（特開２０００−
２２４９９８号公報）。
薬）は、その分子構造母核中にβ−ラクタム環を持つ抗
菌薬の総称でペニシリンの発見以来、多くのβ−ラクタ
ム薬が開発されている。このβ−ラクタム薬の開発に伴
い、その分子構造中のβ−ラクタム環を加水分解して、
その抗菌作用を無効化する酵素β−ラクタマーゼを産生
する耐性菌（β−ラクタマーゼ産生菌）が出現した。β
−ラクタマーゼはクラスＡ〜Ｄ型に分類される。このう
ちクラスＢ型酵素はその活性中心に亜鉛などの金属イオ
ンを有しているので、メタロ−β−ラクタマーゼ（ＭＢ
Ｌ）と呼ばれている。ＭＢＬの阻害剤としてはチオール
化合物やＥＤＴＡなどが知られている（特開２０００−
２２４９９８号公報）。
【０００４】ＭＢＬ産生菌は、ＭＢＬを産生することに
より、ペニシリン系からセフェム系、セファマイシン
系、カルバペネム系抗菌薬に至るまでの幅広い範囲のβ
−ラクタム薬に耐性を獲得した。近年になって、これら
のβ−ラクタム薬に耐性を示す緑膿菌やセラチア菌など
のグラム陰性桿菌（ＭＢＬ産生菌）が各地の医療施設か
ら分離され問題となっている。ＭＢＬをプラスミド性に
産生する菌は、これまでわが国でのみ分離されてきた
が、最近、外国においても分離され、海外の専門家の間
でも関心が高まりつつある（Lancet.,352,546;1998)。
より、ペニシリン系からセフェム系、セファマイシン
系、カルバペネム系抗菌薬に至るまでの幅広い範囲のβ
−ラクタム薬に耐性を獲得した。近年になって、これら
のβ−ラクタム薬に耐性を示す緑膿菌やセラチア菌など
のグラム陰性桿菌（ＭＢＬ産生菌）が各地の医療施設か
ら分離され問題となっている。ＭＢＬをプラスミド性に
産生する菌は、これまでわが国でのみ分離されてきた
が、最近、外国においても分離され、海外の専門家の間
でも関心が高まりつつある（Lancet.,352,546;1998)。
【０００５】ＭＢＬ産生菌は、セファロスポリナーゼ過
剰産生株などと類似の薬剤耐性パターンを示すが、後者
がカルバペネム薬に感受性を示すのに対し、ＭＢＬ産生
菌は、当初カルバペネム薬に感受性を示している株も、
カルバペネム薬の存在下で酵素の産生が誘導され、やが
てカルバペネム薬に耐性を示すようになる。従って、有
効かつ適正な化学療法を実施する上で、両者を早期に識
別できる検査方法の確立が必要となっていた。
剰産生株などと類似の薬剤耐性パターンを示すが、後者
がカルバペネム薬に感受性を示すのに対し、ＭＢＬ産生
菌は、当初カルバペネム薬に感受性を示している株も、
カルバペネム薬の存在下で酵素の産生が誘導され、やが
てカルバペネム薬に耐性を示すようになる。従って、有
効かつ適正な化学療法を実施する上で、両者を早期に識
別できる検査方法の確立が必要となっていた。
【０００６】ＭＢＬ産生菌は、第３世代セフェム系やセ
ファマイシン系に高度耐性を示し、カルバペネム系にも
低度〜高度耐性を示す。しかし、同様に第３世代セフェ
ム系に高度耐性を示すセファロスポリナーゼ過剰産生株
などとＭＢＬ産生菌とを病院の検査室において日常的に
実施されている薬剤感受性試験や酵素学的な検査方法に
より識別することはこれまでは不可能であった。このた
め、ＰＣＲ法によるＭＢＬ遺伝子を検出する方法以外に
確実にＭＢＬを判別する方法はなかった（臨床と微生
物.,26(2),153,1999)。
ファマイシン系に高度耐性を示し、カルバペネム系にも
低度〜高度耐性を示す。しかし、同様に第３世代セフェ
ム系に高度耐性を示すセファロスポリナーゼ過剰産生株
などとＭＢＬ産生菌とを病院の検査室において日常的に
実施されている薬剤感受性試験や酵素学的な検査方法に
より識別することはこれまでは不可能であった。このた
め、ＰＣＲ法によるＭＢＬ遺伝子を検出する方法以外に
確実にＭＢＬを判別する方法はなかった（臨床と微生
物.,26(2),153,1999)。
【０００７】この現状に鑑み、国立感染症研究所の荒川
らはＭＢＬ産生菌を容易に判別することが可能なディス
ク拡散法を開発し、既にＪ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ．に文献発表を行い(J.Clin.Microbiol.,38(1),40,
2000)、また特許出願も行っている(特願平１１−２６８
９７号)。この方法は合計３枚の濾紙ディスクを用いる
方法である。まず、直径６．３５mmの濾紙ディスクに、
ＭＢＬ阻害剤としてメルカプト酢酸（ＭＡＡ）、メルカ
プトプロピオン酸（ＭＰＡ）、メルカプトエタノール等
のチオール化合物を含浸させたＭＢＬ阻害剤ディスクを
作成する。次いで、ＣＡＺなどのβ−ラクタム薬を含有
する乾燥ディスク２枚を、被検菌を塗布した寒天平板上
に距離を置いて静置し、一方のＣＡＺディスクに近接し
てＭＢＬ阻害剤ディスクを静置し、阻害剤の影響下で形
成される阻止円の形状と、阻害剤の影響のない通常の阻
止円の形状の違いを観察し、ＭＢＬ産生菌であるかどう
かを判定するものである。この方法では、得られる阻止
円の形状・大きさがＭＢＬ阻害剤ディスクの有無で全く
異なるため、ＭＢＬ産生菌であるかどうか容易に判定す
ることができる。
らはＭＢＬ産生菌を容易に判別することが可能なディス
ク拡散法を開発し、既にＪ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ．に文献発表を行い(J.Clin.Microbiol.,38(1),40,
2000)、また特許出願も行っている(特願平１１−２６８
９７号)。この方法は合計３枚の濾紙ディスクを用いる
方法である。まず、直径６．３５mmの濾紙ディスクに、
ＭＢＬ阻害剤としてメルカプト酢酸（ＭＡＡ）、メルカ
プトプロピオン酸（ＭＰＡ）、メルカプトエタノール等
のチオール化合物を含浸させたＭＢＬ阻害剤ディスクを
作成する。次いで、ＣＡＺなどのβ−ラクタム薬を含有
する乾燥ディスク２枚を、被検菌を塗布した寒天平板上
に距離を置いて静置し、一方のＣＡＺディスクに近接し
てＭＢＬ阻害剤ディスクを静置し、阻害剤の影響下で形
成される阻止円の形状と、阻害剤の影響のない通常の阻
止円の形状の違いを観察し、ＭＢＬ産生菌であるかどう
かを判定するものである。この方法では、得られる阻止
円の形状・大きさがＭＢＬ阻害剤ディスクの有無で全く
異なるため、ＭＢＬ産生菌であるかどうか容易に判定す
ることができる。
【０００８】しかしながら、上記判定方法では、ＭＢＬ
産生菌であるかどうかは定性的に判定できるが、定量的
な最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を求めることはできな
い。また、使用したチオール化合物（ＭＢＬ阻害剤）は
揮発性であるため、阻害剤ディスクは乾燥ができず、用
時調製で用いるしかなく、操作性にやや問題が残った。
産生菌であるかどうかは定性的に判定できるが、定量的
な最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を求めることはできな
い。また、使用したチオール化合物（ＭＢＬ阻害剤）は
揮発性であるため、阻害剤ディスクは乾燥ができず、用
時調製で用いるしかなく、操作性にやや問題が残った。
【０００９】また、本発明者らはＭＡＡ、ＭＰＡ、ＳＭ
Ａ等のチオール化合物（ＭＢＬ阻害剤）とＣＡＺ等のβ
−ラクタム薬を用いた微量液体希釈法によるＭＩＣ測定
も試みた。この方法は、９６穴マイクロプレートを用
い、２倍の希釈系列でＣＡＺ０．２５−１２８μg/mlを
含有する液体培地の希釈系列と、一定量のＭＢＬ阻害剤
及びＣＡＺ０．２５−１２８μg/mlを含有する液体培地
希釈系列との組合せを用い、被検菌を培養し、ＭＩＣを
測定する方法である。この方法でＣＡＺ単独のＭＩＣ及
びＣＡＺ／ＭＰＡ合剤のＭＩＣが容易に測定でき、また
その差もＭＢＬ産生菌では明確であった。
Ａ等のチオール化合物（ＭＢＬ阻害剤）とＣＡＺ等のβ
−ラクタム薬を用いた微量液体希釈法によるＭＩＣ測定
も試みた。この方法は、９６穴マイクロプレートを用
い、２倍の希釈系列でＣＡＺ０．２５−１２８μg/mlを
含有する液体培地の希釈系列と、一定量のＭＢＬ阻害剤
及びＣＡＺ０．２５−１２８μg/mlを含有する液体培地
希釈系列との組合せを用い、被検菌を培養し、ＭＩＣを
測定する方法である。この方法でＣＡＺ単独のＭＩＣ及
びＣＡＺ／ＭＰＡ合剤のＭＩＣが容易に測定でき、また
その差もＭＢＬ産生菌では明確であった。
【００１０】しかしながら、使用したチオール化合物
（ＭＢＬ阻害剤）は、揮発性であり、悪臭を発する。そ
のため、特に試薬の調製時にその悪臭が検査室全体に広
がり、このままルーチン検査として用いるには問題が多
いものであった。このため、本発明者らは、ＭＢＬ阻害
剤としてチオール化有機酸を用い、この有機酸を適当な
アルカリ塩とすることにより、その不揮発化を図り、不
揮発化したＭＢＬ阻害剤が揮発性のチオール化有機酸と
同様なＭＢＬ阻害作用があることを見出し、この阻害剤
を用いたメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の薬剤感受性
試験方法を既に提案している（特願２０００−１２１９
８２号）。
（ＭＢＬ阻害剤）は、揮発性であり、悪臭を発する。そ
のため、特に試薬の調製時にその悪臭が検査室全体に広
がり、このままルーチン検査として用いるには問題が多
いものであった。このため、本発明者らは、ＭＢＬ阻害
剤としてチオール化有機酸を用い、この有機酸を適当な
アルカリ塩とすることにより、その不揮発化を図り、不
揮発化したＭＢＬ阻害剤が揮発性のチオール化有機酸と
同様なＭＢＬ阻害作用があることを見出し、この阻害剤
を用いたメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の薬剤感受性
試験方法を既に提案している（特願２０００−１２１９
８２号）。
【００１１】
【発明が解決すべき課題】しかしながら、本発明者のそ
の後の研究によれば、使用したＭＢＬ阻害剤とβ−ラク
タム薬とを混合して乾燥を行うと、β−ラクタム薬の保
存安定性が悪く、短期間で力価の低下が認められた。特
にカルバペネム系抗菌薬では、乾燥直後に力価の低下が
顕著であった。そのため、９６穴マイクロプレートを乾
燥してルーチン検査として用いるには未だ問題があっ
た。
の後の研究によれば、使用したＭＢＬ阻害剤とβ−ラク
タム薬とを混合して乾燥を行うと、β−ラクタム薬の保
存安定性が悪く、短期間で力価の低下が認められた。特
にカルバペネム系抗菌薬では、乾燥直後に力価の低下が
顕著であった。そのため、９６穴マイクロプレートを乾
燥してルーチン検査として用いるには未だ問題があっ
た。
【００１２】従って本発明は、β−ラクタム薬の保存安
定性が良く、長期間に亘ってβ−ラクタム薬の力価を安
定時に維持できるので、ルーチン検査に有用でＭＩＣ測
定が可能なＭＢＬ産生菌の感受性試験方法及びそれに使
用する多穴容器を提供でき、さらにβラクタム薬および
ＭＢＬ阻害剤の２薬を合剤として含有する乾燥した濾紙
ディスクを提供すること、さらに進めて、βラクタム薬
およびＭＢＬ阻害剤の２薬を合剤として含有する乾燥し
たＭＩＣ測定用の多穴容器を提供することを目的とす
る。
定性が良く、長期間に亘ってβ−ラクタム薬の力価を安
定時に維持できるので、ルーチン検査に有用でＭＩＣ測
定が可能なＭＢＬ産生菌の感受性試験方法及びそれに使
用する多穴容器を提供でき、さらにβラクタム薬および
ＭＢＬ阻害剤の２薬を合剤として含有する乾燥した濾紙
ディスクを提供すること、さらに進めて、βラクタム薬
およびＭＢＬ阻害剤の２薬を合剤として含有する乾燥し
たＭＩＣ測定用の多穴容器を提供することを目的とす
る。
【００１３】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく鋭意研究した結果、メルカプト基を有さな
い、キレート作用の強いジカルボン酸誘導体をＭＢＬ阻
害剤として用いることにより、β−ラクタム系抗菌薬の
力価の低下をきたすことなく、チオール化有機酸と同様
のＭＢＬ阻害作用があることを見いだし、本発明を完成
した。
を解決すべく鋭意研究した結果、メルカプト基を有さな
い、キレート作用の強いジカルボン酸誘導体をＭＢＬ阻
害剤として用いることにより、β−ラクタム系抗菌薬の
力価の低下をきたすことなく、チオール化有機酸と同様
のＭＢＬ阻害作用があることを見いだし、本発明を完成
した。
【００１４】本発明は、β−ラクタム薬を含有する液体
培地と、β−ラクタム薬およびＭＢＬ阻害剤としてジカ
ルボン酸誘導体を含有する液体培地との組合せを用いる
ＭＢＬ産生菌の薬剤感受性試験方法を提供する。
培地と、β−ラクタム薬およびＭＢＬ阻害剤としてジカ
ルボン酸誘導体を含有する液体培地との組合せを用いる
ＭＢＬ産生菌の薬剤感受性試験方法を提供する。
【００１５】本発明に使用するＭＢＬ阻害剤であるジカ
ルボン酸誘導体は、β−ラクタム系抗菌薬の力価に影響
を及ぼすことなく、かつ細菌毒性の少ないジカルボン酸
誘導体である限り、公知のものの中から適宜選択するこ
とができる。そのようなジカルボン酸誘導体の中でも、
特にピリジン置換誘導体が好ましい。このピリジン置換
誘導体としては、例えば、２，３−ピリジンジカルボン
酸、２，４−ピリジンジカルボン酸、２，５−ピリジン
ジカルボン酸、２，６−ピリジンジカルボン酸、３，４
−ピリジンジカルボン酸、および３，５−ピリジンジカ
ルボン酸から成る群から選択される少なくとも１種が挙
げられるが、特に２，６−ピリジンジカルボン酸（ＤＰ
Ａ：ジピコリン酸）が好ましい。
ルボン酸誘導体は、β−ラクタム系抗菌薬の力価に影響
を及ぼすことなく、かつ細菌毒性の少ないジカルボン酸
誘導体である限り、公知のものの中から適宜選択するこ
とができる。そのようなジカルボン酸誘導体の中でも、
特にピリジン置換誘導体が好ましい。このピリジン置換
誘導体としては、例えば、２，３−ピリジンジカルボン
酸、２，４−ピリジンジカルボン酸、２，５−ピリジン
ジカルボン酸、２，６−ピリジンジカルボン酸、３，４
−ピリジンジカルボン酸、および３，５−ピリジンジカ
ルボン酸から成る群から選択される少なくとも１種が挙
げられるが、特に２，６−ピリジンジカルボン酸（ＤＰ
Ａ：ジピコリン酸）が好ましい。
【００１６】また、本発明で用いるβ−ラクタム薬は、
その分子構造母核中にβ−ラクタム環を持つ抗菌薬の中
から適宜選択すれば良い。その具体例としては、セフタ
ジジム、セフォタキシム、セフトリアキソン、セフポド
キシム、セフピロム、セフェピムなどの第三・第四世代
セフェム系抗菌薬、セフメタゾール、セフミノクスなど
の第二・第三世代セファマイシン系抗菌薬、イミペネ
ム、パニペネム、メロペネムなどのカルバペネム系抗菌
薬から成る群から選択される少なくとも１種が挙げられ
る。これらのβ−ラクタム薬の中でも、セフタジジム
（ＣＡＺ）やイミペネム（ＩＰＭ）が好ましく用いられ
る。
その分子構造母核中にβ−ラクタム環を持つ抗菌薬の中
から適宜選択すれば良い。その具体例としては、セフタ
ジジム、セフォタキシム、セフトリアキソン、セフポド
キシム、セフピロム、セフェピムなどの第三・第四世代
セフェム系抗菌薬、セフメタゾール、セフミノクスなど
の第二・第三世代セファマイシン系抗菌薬、イミペネ
ム、パニペネム、メロペネムなどのカルバペネム系抗菌
薬から成る群から選択される少なくとも１種が挙げられ
る。これらのβ−ラクタム薬の中でも、セフタジジム
（ＣＡＺ）やイミペネム（ＩＰＭ）が好ましく用いられ
る。
【００１７】本発明のＭＢＬ生産菌の薬剤感受性試験方
法をより具体的に説明すると、β−ラクタム薬０．２５
−１２８μg/mlを含有する液体培地と、β−ラクタム薬
０．２５−１２８μg/mlおよびＭＢＬ阻害剤としてジカ
ルボン酸誘導体１００−１６００μg/mlを含有する液体
培地との組合せを用いる。β−ラクタム薬の含有量が
０．２５μg/ml未満になると、その抗菌作用が低下し、
逆に１２８μg/mlを超えると、抗菌薬が溶解し難くな
る。また、ＭＢＬ阻害剤であるジカルボン酸の含有量が
１００μg/ml未満になると、ＭＢＬ阻害効果が得られ
ず、逆に１６００μg/mlを超えると、菌の発育を阻害す
る。
法をより具体的に説明すると、β−ラクタム薬０．２５
−１２８μg/mlを含有する液体培地と、β−ラクタム薬
０．２５−１２８μg/mlおよびＭＢＬ阻害剤としてジカ
ルボン酸誘導体１００−１６００μg/mlを含有する液体
培地との組合せを用いる。β−ラクタム薬の含有量が
０．２５μg/ml未満になると、その抗菌作用が低下し、
逆に１２８μg/mlを超えると、抗菌薬が溶解し難くな
る。また、ＭＢＬ阻害剤であるジカルボン酸の含有量が
１００μg/ml未満になると、ＭＢＬ阻害効果が得られ
ず、逆に１６００μg/mlを超えると、菌の発育を阻害す
る。
【００１８】本発明に用いる液体培地としては、微量液
体希釈法に用いられる一般的な液体培地であれば、特に
制限されない。その具体例としては、ミューラー・ヒン
トン液体培地、陽イオン調整ミューラー・ヒントン液体
培地、ブレインハートインフュージョン液体培地、トリ
プトソイ液体培地、ＡＢＣＭ液体培地、溶血液加ミュー
ラー・ヒントン液体培地、シェドラー液体培地、ブルセ
ラ液体培地、溶血液添加ブルセラ液体培地が挙げられ
る。これらの液体培地の中でも、特にミューラー・ヒン
トン液体培地（ＭＨＢ）や陽イオン調整ミューラー・ヒ
ントン液体培地（ＣＡＭＨＢ）が好ましく用いられる。
体希釈法に用いられる一般的な液体培地であれば、特に
制限されない。その具体例としては、ミューラー・ヒン
トン液体培地、陽イオン調整ミューラー・ヒントン液体
培地、ブレインハートインフュージョン液体培地、トリ
プトソイ液体培地、ＡＢＣＭ液体培地、溶血液加ミュー
ラー・ヒントン液体培地、シェドラー液体培地、ブルセ
ラ液体培地、溶血液添加ブルセラ液体培地が挙げられ
る。これらの液体培地の中でも、特にミューラー・ヒン
トン液体培地（ＭＨＢ）や陽イオン調整ミューラー・ヒ
ントン液体培地（ＣＡＭＨＢ）が好ましく用いられる。
【００１９】また、本発明は、上記で説明したＭＢＬ産
生菌の薬剤感受性試験に用いる多穴容器であって、多穴
容器の各穴にβ−ラクタム薬を含有する液体培地と、β
−ラクタム薬およびＭＢＬ阻害剤としてジカルボン酸誘
導体を含有する液体培地とを分注したＭＢＬ産生菌の薬
剤感受性試験に用いる多穴容器も提供する。多穴容器と
しては、この業界で通常使用されているものであれば、
特に限定されないが、一般的には９６穴マイクロプレー
トが好ましく用いられる。この多穴容器は、生培地など
の液体培地を分注した容器として供給されても良いが、
保存安定性を考慮すると、使用時まで凍結保存した形態
で供給されることが好ましい。本発明においては、各穴
の薬剤のみを乾燥固定化した多穴容器として供給されて
も良いし、薬剤を含有する液体培地を乾燥固定化した多
穴容器として供給されても良い。乾燥固定化方法として
は、薬剤や培地成分が変質しない限り、特に制限され
ず、自然乾燥、送風乾燥、凍結乾燥といった一般的な乾
燥方法が挙げられる。
生菌の薬剤感受性試験に用いる多穴容器であって、多穴
容器の各穴にβ−ラクタム薬を含有する液体培地と、β
−ラクタム薬およびＭＢＬ阻害剤としてジカルボン酸誘
導体を含有する液体培地とを分注したＭＢＬ産生菌の薬
剤感受性試験に用いる多穴容器も提供する。多穴容器と
しては、この業界で通常使用されているものであれば、
特に限定されないが、一般的には９６穴マイクロプレー
トが好ましく用いられる。この多穴容器は、生培地など
の液体培地を分注した容器として供給されても良いが、
保存安定性を考慮すると、使用時まで凍結保存した形態
で供給されることが好ましい。本発明においては、各穴
の薬剤のみを乾燥固定化した多穴容器として供給されて
も良いし、薬剤を含有する液体培地を乾燥固定化した多
穴容器として供給されても良い。乾燥固定化方法として
は、薬剤や培地成分が変質しない限り、特に制限され
ず、自然乾燥、送風乾燥、凍結乾燥といった一般的な乾
燥方法が挙げられる。
【００２０】更に、本発明は、ＭＢＬ阻害剤としてジカ
ルボン酸誘導体を含有するディスクをも提供する。本発
明のディスクは、円形である限りその直径は特に問わな
いが、一般的に使用されているＫＢディスクと同様の直
径６．３５mmの濾紙ディスクに一定量のジカルボン酸誘
導体を添加・乾燥したものが好ましい。ジカルボン酸誘
導体の含浸量は、濾紙ディスク一枚当たり０．１−３mg
が適当である。
ルボン酸誘導体を含有するディスクをも提供する。本発
明のディスクは、円形である限りその直径は特に問わな
いが、一般的に使用されているＫＢディスクと同様の直
径６．３５mmの濾紙ディスクに一定量のジカルボン酸誘
導体を添加・乾燥したものが好ましい。ジカルボン酸誘
導体の含浸量は、濾紙ディスク一枚当たり０．１−３mg
が適当である。
【００２１】本発明に用いるジカルボン酸誘導体として
は、上述したように、公知のものの中から適宜選択する
ことができ、その中でも、特にピリジン置換誘導体が好
ましい。このピリジン置換誘導体としては、例えば、
２，３−ピリジンジカルボン酸、２，４−ピリジンジカ
ルボン酸、２，５−ピリジンジカルボン酸、２，６−ピ
リジンジカルボン酸、３，４−ピリジンジカルボン酸、
および３，５−ピリジンジカルボン酸から成る群から選
択される少なくとも１種が挙げられるが、特に２，６−
ピリジンジカルボン酸（ＤＰＡ：ジピコリン酸）が好ま
しい。
は、上述したように、公知のものの中から適宜選択する
ことができ、その中でも、特にピリジン置換誘導体が好
ましい。このピリジン置換誘導体としては、例えば、
２，３−ピリジンジカルボン酸、２，４−ピリジンジカ
ルボン酸、２，５−ピリジンジカルボン酸、２，６−ピ
リジンジカルボン酸、３，４−ピリジンジカルボン酸、
および３，５−ピリジンジカルボン酸から成る群から選
択される少なくとも１種が挙げられるが、特に２，６−
ピリジンジカルボン酸（ＤＰＡ：ジピコリン酸）が好ま
しい。
【００２２】本発明は、β−ラクタム薬を含有するディ
スクとβ−ラクタム薬およびＭＢＬ阻害剤を含有するデ
ィスクとの組合せを用いるＭＢＬ産生菌の薬剤感受性試
験方法でもあり得る。本発明においては、β−ラクタム
薬を含有するディスクと、β−ラクタム薬およびＭＢＬ
阻害剤を含有するディスクとを被検菌を接種した寒天平
板上に静置し、培養後の阻止円の直径の違いにより、Ｍ
ＢＬ産生菌かどうか容易に判定することができる。
スクとβ−ラクタム薬およびＭＢＬ阻害剤を含有するデ
ィスクとの組合せを用いるＭＢＬ産生菌の薬剤感受性試
験方法でもあり得る。本発明においては、β−ラクタム
薬を含有するディスクと、β−ラクタム薬およびＭＢＬ
阻害剤を含有するディスクとを被検菌を接種した寒天平
板上に静置し、培養後の阻止円の直径の違いにより、Ｍ
ＢＬ産生菌かどうか容易に判定することができる。
【００２３】
【発明の効果】本発明は、チオール基を有していないキ
レート作用を有するジカルボン酸誘導体をＭＢＬ阻害剤
として用いているので、β−ラクタム薬系抗菌剤の保存
安定性を向上させることができる。従って本発明によれ
ば、β−ラクタム薬系抗菌剤の力価に影響を及ぼすこと
なく、一般検査室でのＭＢＬ産生菌のＭＩＣ測定が可能
となると共に、一般病院や検査センターの細菌検査の自
動化・システム化にも対応が可能である。
レート作用を有するジカルボン酸誘導体をＭＢＬ阻害剤
として用いているので、β−ラクタム薬系抗菌剤の保存
安定性を向上させることができる。従って本発明によれ
ば、β−ラクタム薬系抗菌剤の力価に影響を及ぼすこと
なく、一般検査室でのＭＢＬ産生菌のＭＩＣ測定が可能
となると共に、一般病院や検査センターの細菌検査の自
動化・システム化にも対応が可能である。
【００２４】また、本発明は、β−ラクタム薬およびＭ
ＢＬ阻害剤としてジカルボン酸を含有するディスクの製
造および供給が可能となる。従って本発明によれば、β
−ラクタム薬を含有するディスクとβ−ラクタム薬およ
びＭＢＬ阻害剤としてジカルボン酸を含有するディスク
との組合せを用いるＭＢＬ産生菌鑑別方法の開発が容易
となる。
ＢＬ阻害剤としてジカルボン酸を含有するディスクの製
造および供給が可能となる。従って本発明によれば、β
−ラクタム薬を含有するディスクとβ−ラクタム薬およ
びＭＢＬ阻害剤としてジカルボン酸を含有するディスク
との組合せを用いるＭＢＬ産生菌鑑別方法の開発が容易
となる。
【００２５】ＭＢＬ産生菌は、ＥＳＢＬ産生菌よりも臨
床上の薬剤耐性の問題は大きいが、未だ標準的な国際試
験法が確立されていないのが現状である。本発明によ
り、一般的な検査室で簡易にＭＢＬ産生菌の鑑別やＭＩ
Ｃ測定が可能となるので、このような国際標準法の作製
が可能となる。
床上の薬剤耐性の問題は大きいが、未だ標準的な国際試
験法が確立されていないのが現状である。本発明によ
り、一般的な検査室で簡易にＭＢＬ産生菌の鑑別やＭＩ
Ｃ測定が可能となるので、このような国際標準法の作製
が可能となる。
【００２６】
【実施例】以下、本発明を実施例に基づき更に詳細に説
明するが、本発明はこれによって限定されるものではな
い。
明するが、本発明はこれによって限定されるものではな
い。
【００２７】実施例１ 薬剤感受性試験用マイクロプレ
ートの作成 ＮＣＣＬＳ標準法の微量液体希釈法に準じてβ−ラクタ
ム薬としてＣＡＺおよびＩＰＭ０．２５−１２８μg/ml
を含有するＣＡＭＨＢの２倍希釈系列を作成し、９６穴
マイクロプレートに１００μlずつ分注した。同様にそ
の希釈系列にＭＢＬ阻害剤２５−３２００μg/mlを添加
したＣＡＭＨＢ２倍希釈系列を９６穴マイクロプレート
に１００μlずつ分注した。
ートの作成 ＮＣＣＬＳ標準法の微量液体希釈法に準じてβ−ラクタ
ム薬としてＣＡＺおよびＩＰＭ０．２５−１２８μg/ml
を含有するＣＡＭＨＢの２倍希釈系列を作成し、９６穴
マイクロプレートに１００μlずつ分注した。同様にそ
の希釈系列にＭＢＬ阻害剤２５−３２００μg/mlを添加
したＣＡＭＨＢ２倍希釈系列を９６穴マイクロプレート
に１００μlずつ分注した。
【００２８】
(1)ＣＡＺ ０．２５−１２８μg/ml
(2)ＣＡＺ／ＭＰＡ ０．２５／２００−１２８／２００μg/ml
(3)ＣＡＺ／ＳＭＰ ０．２５／２００−１２８／２００μg/ml
(4)ＣＡＺ／ＳＭＡ ０．２５／２５−１２８／２５μg/ml
(5)ＣＡＺ／ＳＭＡ ０．２５／５０−１２８／５０μg/ml
(6)ＣＡＺ／ＳＭＡ ０．２５／１００−１２８／１００μg/ml
(7)ＣＡＺ／ＳＭＡ ０．２５／２００−１２８／２００μg/ml
(8)ＣＡＺ／ＳＭＡ ０．２５／４００−１２８／４００μg/ml
(9)ＣＡＺ／ＳＭＡ ０．２５／８００−１２８／８００μg/ml
(10)ＣＡＺ／ＳＭＡ ０．２５／１６００−１２８／１６００μg/ml
(11)ＣＡＺ／ＳＭＡ ０．２５／３２００−１２８／３２００μg/ml
(12)ＣＡＺ／ＤＰＡ ０．２５／２５−１２８／２５μg/ml
(13)ＣＡＺ／ＤＰＡ ０．２５／５０−１２８／５０μg/ml
(14)ＣＡＺ／ＤＰＡ ０．２５／１００−１２８／１００μg/ml
(15)ＣＡＺ／ＤＰＡ ０．２５／２００−１２８／２００μg/ml
(16)ＣＡＺ／ＤＰＡ ０．２５／４００−１２８／４００μg/ml
(17)ＣＡＺ／ＤＰＡ ０．２５／８００−１２８／８００μg/ml
(18)ＣＡＺ／ＤＰＡ ０．２５／１６００−１２８／１６００μg/ml
(19)ＣＡＺ／ＤＰＡ ０．２５／３２００−１２８／３２００μg/ml
(20)ＩＰＭ ０．２５−１２８μg/ml
(21)ＩＰＭ／ＭＰＡ ０．２５／２００−１２８／２００μg/ml
(22)ＩＰＭ／ＳＭＰ ０．２５／２００−１２８／２００μg/ml
(23)ＩＰＭ／ＳＭＡ ０．２５／２５−１２８／２５μg/ml
(24)ＩＰＭ／ＳＭＡ ０．２５／５０−１２８／５０μg/ml
(25)ＩＰＭ／ＳＭＡ ０．２５／１００−１２８／１００μg/ml
(26)ＩＰＭ／ＳＭＡ ０．２５／２００−１２８／２００μg/ml
(27)ＩＰＭ／ＳＭＡ ０．２５／４００−１２８／４００μg/ml
(28)ＩＰＭ／ＳＭＡ ０．２５／８００−１２８／８００μg/ml
(29)ＩＰＭ／ＳＭＡ ０．２５／１６００−１２８／１６００μg/ml
(30)ＩＰＭ／ＳＭＡ ０．２５／３２００−１２８／３２００μg/ml
(31)ＩＰＭ／ＤＰＡ ０．２５／２５−１２８／２５μg/ml
(32)ＩＰＭ／ＤＰＡ ０．２５／５０−１２８／５０μg/ml
(33)ＩＰＭ／ＤＰＡ ０．２５／１００−１２８／１００μg/ml
(34)ＩＰＭ／ＤＰＡ ０．２５／２００−１２８／２００μg/ml
(35)ＩＰＭ／ＤＰＡ ０．２５／４００−１２８／４００μg/ml
(36)ＩＰＭ／ＤＰＡ ０．２５／８００−１２８／８００μg/ml
(37)ＩＰＭ／ＤＰＡ ０．２５／１６００−１２８／１６００μg/ml
(38)ＩＰＭ／ＤＰＡ ０．２５／３２００−１２８／３２００μg/ml
【００２９】上記(1)−(38)の希釈系列マイクロプレー
トにＭＢＬ産生菌（K.pneumoniae 4134）および非産生
菌（K.pneumoniae 4153）それぞれ１株を接種し、３５
℃で１晩培養したところ、遊離のＭＢＬ阻害剤としてＭ
ＰＡを含む(2),(21)は、強い悪臭がしたが、ＭＢＬ産生
菌と非産生菌とでは、ＭＩＣ値の顕著な（３管＝８倍以
上）相違が認められた。同様に、ＭＢＬ阻害剤１００−
１６００μg/mlを含むその他の系列ではＭＢＬ産生菌と
非産生菌とで明らかな発育の違いが見られた。これに対
し、ＭＢＬ阻害剤２５〜５０μg/mlを含む(4),(5),(1
2),(13),(23),(24),(31),(32)ではＭＢＬ産生菌と非産
生菌ともに発育し、阻害剤を含まない(1),(20)と同様で
あり、産生菌と非産生菌との区別がつかなかった。ま
た、ＭＢＬ阻害剤３２００μg/mlを含む(11),(19),(3
0),(38)ではＭＢＬ産生菌と非産生菌とも発育せず、そ
れぞれの区別がつかなかった。なお、本プレートを−７
０℃で凍結保存したが、６ヶ月後でも使用可能であっ
た。
トにＭＢＬ産生菌（K.pneumoniae 4134）および非産生
菌（K.pneumoniae 4153）それぞれ１株を接種し、３５
℃で１晩培養したところ、遊離のＭＢＬ阻害剤としてＭ
ＰＡを含む(2),(21)は、強い悪臭がしたが、ＭＢＬ産生
菌と非産生菌とでは、ＭＩＣ値の顕著な（３管＝８倍以
上）相違が認められた。同様に、ＭＢＬ阻害剤１００−
１６００μg/mlを含むその他の系列ではＭＢＬ産生菌と
非産生菌とで明らかな発育の違いが見られた。これに対
し、ＭＢＬ阻害剤２５〜５０μg/mlを含む(4),(5),(1
2),(13),(23),(24),(31),(32)ではＭＢＬ産生菌と非産
生菌ともに発育し、阻害剤を含まない(1),(20)と同様で
あり、産生菌と非産生菌との区別がつかなかった。ま
た、ＭＢＬ阻害剤３２００μg/mlを含む(11),(19),(3
0),(38)ではＭＢＬ産生菌と非産生菌とも発育せず、そ
れぞれの区別がつかなかった。なお、本プレートを−７
０℃で凍結保存したが、６ヶ月後でも使用可能であっ
た。
【００３０】実施例２ 微量液体希釈法（ＭＩＣ法）に
よるＭＢＬ産生菌および非産生菌の確認 ＰＣＲ法によりＭＢＬ産生菌であることが確認されてい
るKlebsiella pneumoniae ２株、Pseudomonas aerugino
sa １３株、Serratia marcescens ３４株、および同様
にＰＣＲ法によりＭＢＬ非産生菌として確認されている
ＥＳＢＬ産生Klebsiella pneumoniae ２株、ペニシリナ
ーゼ（ＰＣＮ）産生Klebsiella pneumoniae ２株、セフ
ァロスポリナーゼ（ＣＰＮ）産生Klebsiella pneumonia
e ２株を試験菌として用い、実施例１で作製したマイク
ロプレートのＣＡＺ０．２５−１２８μg/mlを含有する
ＣＡＭＨＢ液体培地（希釈系列）とＣＡＺ／ＤＰＡ０．
２５／４００−１２８／４００μg/mlを含有するＣＡＭ
ＨＢ液体培地（希釈系列）との組合せ、及びＩＰＭ０．
２５−１２８μg/mlを含有するＣＡＭＨＢ液体培地（希
釈系列）とＩＰＭ／ＤＰＡ０．２５／４００−１２８／
４００μg/mlを含有するＣＡＭＨＢ液体培地（希釈系
列）との組合せを用い、ＮＣＣＬＳガイドラインに従
い、微量液体希釈法で試験菌を培養し、ＭＩＣを測定し
た。純培養した試験菌の集落を釣菌し、トリプトソイブ
イヨンに懸濁させＭｃＦａｒｌａｎｄ濁度が０．５にな
るまで培養したものを希釈し、培地１mlあたりの菌数が
約１０４個になるようにマイクロタイタープレートの各
穴に接種し、３５℃で１８時間好気培養したのち、それ
ぞれの最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を測定した。β−ラ
クタム薬／ＭＢＬ阻害剤合剤のＭＩＣがβ−ラクタム薬
単独のＭＩＣより３管（８倍）以上離れているものをＭ
ＢＬ産生菌と判定した。その結果を表１に示す。なお、
本実施例の判定基準はＮＣＣＬＳのＥＳＢＬ産生菌判定
基準に準拠し、それと同一にした。
よるＭＢＬ産生菌および非産生菌の確認 ＰＣＲ法によりＭＢＬ産生菌であることが確認されてい
るKlebsiella pneumoniae ２株、Pseudomonas aerugino
sa １３株、Serratia marcescens ３４株、および同様
にＰＣＲ法によりＭＢＬ非産生菌として確認されている
ＥＳＢＬ産生Klebsiella pneumoniae ２株、ペニシリナ
ーゼ（ＰＣＮ）産生Klebsiella pneumoniae ２株、セフ
ァロスポリナーゼ（ＣＰＮ）産生Klebsiella pneumonia
e ２株を試験菌として用い、実施例１で作製したマイク
ロプレートのＣＡＺ０．２５−１２８μg/mlを含有する
ＣＡＭＨＢ液体培地（希釈系列）とＣＡＺ／ＤＰＡ０．
２５／４００−１２８／４００μg/mlを含有するＣＡＭ
ＨＢ液体培地（希釈系列）との組合せ、及びＩＰＭ０．
２５−１２８μg/mlを含有するＣＡＭＨＢ液体培地（希
釈系列）とＩＰＭ／ＤＰＡ０．２５／４００−１２８／
４００μg/mlを含有するＣＡＭＨＢ液体培地（希釈系
列）との組合せを用い、ＮＣＣＬＳガイドラインに従
い、微量液体希釈法で試験菌を培養し、ＭＩＣを測定し
た。純培養した試験菌の集落を釣菌し、トリプトソイブ
イヨンに懸濁させＭｃＦａｒｌａｎｄ濁度が０．５にな
るまで培養したものを希釈し、培地１mlあたりの菌数が
約１０４個になるようにマイクロタイタープレートの各
穴に接種し、３５℃で１８時間好気培養したのち、それ
ぞれの最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）を測定した。β−ラ
クタム薬／ＭＢＬ阻害剤合剤のＭＩＣがβ−ラクタム薬
単独のＭＩＣより３管（８倍）以上離れているものをＭ
ＢＬ産生菌と判定した。その結果を表１に示す。なお、
本実施例の判定基準はＮＣＣＬＳのＥＳＢＬ産生菌判定
基準に準拠し、それと同一にした。
【００３１】
【表１】
────────────────────────────────
菌名 type 薬剤名
────────────────────────────────
CAZ IPM
────────────────────────────────
Klebsiella pneumoniae 4137 MBL MBL
Klebsiella pneumoniae 4635 MBL MBL
Klebsiella pneumoniae 4153 PCN
Klebsiella pneumoniae 4154 PCN
Klebsiella pneumoniae 4144 CPN
Klebsiella pneumoniae 4145 CPN
Klebsiella pneumoniae 4120 ESBL
Klebsiella pneumoniae 4124 ESBL
Pseudomonas aeruginosa 5103 MBL MBL MBL
Pseudomonas aeruginosa 5106 MBL MBL MBL
Pseudomonas aeruginosa 5109 MBL MBL MBL
Pseudomonas aeruginosa 5110 MBL MBL MBL
Pseudomonas aeruginosa 5112 MBL MBL MBL
Pseudomonas aeruginosa 5101 MBL MBL MBL
Pseudomonas aeruginosa 5100 MBL MBL MBL
Pseudomonas aeruginosa 5107 MBL MBL MBL
Pseudomonas aeruginosa 5108 MBL MBL MBL
Pseudomonas aeruginosa 5111 MBL MBL MBL
Pseudomonas aeruginosa 5104 MBL MBL MBL
Pseudomonas aeruginosa 5105 MBL MBL
Pseudomonas aeruginosa 5102 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5118 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5147 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5113 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5135 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5131 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5142 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5146 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5123 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5143 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5130 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5141 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5114 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5116 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5158 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5134 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5144 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5145 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5150 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5138 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5154 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5161 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5115 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5125 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5119 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5140 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5139 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5132 MBL MBL
Serratia marcescens 5159 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5162 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5133 MBL MBL
Serratia marcescens 5122 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5151 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5149 MBL MBL MBL
Serratia marcescens 5152 MBL MBL MBL
────────────────────────────────
感度 96% 96%
────────────────────────────────
特異性 100% 100%
────────────────────────────────
一致率 96% 96%
────────────────────────────────
【００３２】上記表１において、感度とは（ＭＢＬ産生
菌と正しく判定された菌数）／（全ＭＢＬ産生菌数）を
表し、特異性とは（非ＭＢＬ産生菌と正しく判定された
菌数）／（全非ＭＢＬ産生菌数）を表し、一致率とは
（ＭＢＬ・非ＭＢＬ産生菌と正しく判定された菌数）／
（全検体数）を表している。言い換えれば、感度はＭＢ
Ｌ産生菌がＭＢＬ産生菌として正しく判定される確率を
いい、特異性はＭＢＬ産生菌でないものがＭＢＬ産生菌
でないと判定される確率をいい、一致率はそれぞれが正
しく判定される確率を表す。つまりＣＡＺで言えば、感
度は４７／４９＝９６％となり、特異性は６／６＝１０
０％となり、一致率は５３／５５＝９６％となる。
菌と正しく判定された菌数）／（全ＭＢＬ産生菌数）を
表し、特異性とは（非ＭＢＬ産生菌と正しく判定された
菌数）／（全非ＭＢＬ産生菌数）を表し、一致率とは
（ＭＢＬ・非ＭＢＬ産生菌と正しく判定された菌数）／
（全検体数）を表している。言い換えれば、感度はＭＢ
Ｌ産生菌がＭＢＬ産生菌として正しく判定される確率を
いい、特異性はＭＢＬ産生菌でないものがＭＢＬ産生菌
でないと判定される確率をいい、一致率はそれぞれが正
しく判定される確率を表す。つまりＣＡＺで言えば、感
度は４７／４９＝９６％となり、特異性は６／６＝１０
０％となり、一致率は５３／５５＝９６％となる。
【００３３】表１の結果より、ＣＡＺでＭＢＬ産生菌と
判定された菌数は４７株であるので、その感度は４７／
４９＝９６％であり、また特異性は１００％であった。
ＭＢＬの一致率は９６％と高く、本発明は一般の微生物
検査室でのＭＢＬ産生菌の簡易スクリーニング法として
有用性が高いと考えられる。さらにＩＰＭと組み合わせ
れば、ＭＢＬ産生菌は２株増えて４９株と判定される。
つまり感度は４９／４９＝１００％、特異性は６／６＝
１００％、一致率は５５／５５＝１００％とさらに高率
となる。被検菌数をさらに増やして確認すれば、本方法
はＭＢＬ産生菌の確認試験として使用できる可能性があ
る。
判定された菌数は４７株であるので、その感度は４７／
４９＝９６％であり、また特異性は１００％であった。
ＭＢＬの一致率は９６％と高く、本発明は一般の微生物
検査室でのＭＢＬ産生菌の簡易スクリーニング法として
有用性が高いと考えられる。さらにＩＰＭと組み合わせ
れば、ＭＢＬ産生菌は２株増えて４９株と判定される。
つまり感度は４９／４９＝１００％、特異性は６／６＝
１００％、一致率は５５／５５＝１００％とさらに高率
となる。被検菌数をさらに増やして確認すれば、本方法
はＭＢＬ産生菌の確認試験として使用できる可能性があ
る。
【００３４】実施例３ 薬剤を固定化乾燥したプレート
の作成及びＭＩＣの測定 液体培地１００μlを加えて溶解した時に下記の濃度と
なるようにＣＡＺ及びＣＡＺ／ＤＰＡの薬剤２倍希釈系
列溶液を調製し、９６穴マイクロプレートに適量分注
し、４５℃で６０分間送風乾燥し、薬剤を固定化乾燥し
たプレートを作成した。 (1)ＣＡＺ ０．２５−１２８μg/ml (2)ＣＡＺ／ＤＰＡ ０．２５／４００−１２８／４００μg/ml 薬剤を固定化乾燥したプレートの各穴にＣＡＭＨＢ１０
０μlを分注し薬剤を溶解し、実施例２で使用したＭＢ
Ｌ産生菌４９株、ＭＢＬ非産生菌６株を接種し、実施例
２と同様に操作し、ＭＩＣを測定した。その結果、本薬
剤を固定化乾燥したプレートも、実施例２と同様の菌の
発育を示し、感度・特異性・一致率も同一成績であっ
た。ＭＢＬ阻害剤は不揮発性の有機酸であるので、乾燥
プレートとして作製・保存してもそのＭＢＬ阻害作用は
保持されていた。
の作成及びＭＩＣの測定 液体培地１００μlを加えて溶解した時に下記の濃度と
なるようにＣＡＺ及びＣＡＺ／ＤＰＡの薬剤２倍希釈系
列溶液を調製し、９６穴マイクロプレートに適量分注
し、４５℃で６０分間送風乾燥し、薬剤を固定化乾燥し
たプレートを作成した。 (1)ＣＡＺ ０．２５−１２８μg/ml (2)ＣＡＺ／ＤＰＡ ０．２５／４００−１２８／４００μg/ml 薬剤を固定化乾燥したプレートの各穴にＣＡＭＨＢ１０
０μlを分注し薬剤を溶解し、実施例２で使用したＭＢ
Ｌ産生菌４９株、ＭＢＬ非産生菌６株を接種し、実施例
２と同様に操作し、ＭＩＣを測定した。その結果、本薬
剤を固定化乾燥したプレートも、実施例２と同様の菌の
発育を示し、感度・特異性・一致率も同一成績であっ
た。ＭＢＬ阻害剤は不揮発性の有機酸であるので、乾燥
プレートとして作製・保存してもそのＭＢＬ阻害作用は
保持されていた。
【００３５】実施例４ ＭＢＬ阻害剤を含有した乾燥デ
ィスクの作製及び保存安定性 遊離のチオール化有機酸、及びチオール化有機酸の塩を
含む乾燥ディスクと、チオール基を有していない有機酸
を含む乾燥ディスクとを作製し、ディスク拡散法を行い
阻止円直径を測定した。 (1)ＳＭＡ（２．９mg/ディスク含有） (2)ＭＰＡ（２．７mg/ディスク含有） (3)ＤＰＡ（０．５mg/ディスク含有） 市販のＳＭＡ、ＭＰＡを精製水に溶解し、１．０モルの
水溶液を作製した。ＤＰＡは、０．０５モルのＥＨＥＰ
Ｅ緩衝液ｐＨ７．０に溶解し、最終濃度０．１２モルの
ＤＰＡ水溶液を作製した。ＫＢディスク用の直径６．３
５mmの濾紙ディスクに上記の各調製溶液２５μlを滴下
し、５０℃で６０分間乾燥し、ＳＭＡディスク、ＭＰＡ
ディスク、ＤＰＡディスクを作製した。ＰＣＲ法であら
かじめＭＢＬ産生菌であることが確認されている肺炎桿
菌（K.pneumoniae)１株、および霊菌（S.marcescens）
１株、緑膿菌（P.aeruginosa）２株を用いて、J.Clin.M
icrobiol.,38(1),40,2000に従った方法で操作し、その
阻止円の直径を測定した。ＮＣＣＬＳのディスク法（標
準法）に準じて、純培養した試験菌の集落を釣菌し、ト
リプトソイブイヨンに懸濁させ、ＭｃＦａｒｌａｎｄ濁
度が０．５になるまで培養したものを綿棒を用いてミュ
ーラーヒントン寒天培地（ＭＨＡ）表面に均一に接種し
た。菌を接種した寒天平板培地表面上に２枚のＫＢディ
スクＣＡＺ（栄研化学製）を３〜５cm離して接置し、ど
ちらか片方のＫＢディスクＣＡＺからさらに１．５〜２
ｃｍ離してＭＢＬ阻害剤ディスク（ＳＭＡディスク、Ｍ
ＰＡディスク、もしくはＤＰＡディスク）を載せ、３５
℃で１８時間好気培養し、各ＣＡＺディスクの周囲に形
成された阻止円直径をシャーレの裏からmm単位で正確に
測定した。また上記作製の各ＭＢＬ阻害剤を含有したデ
ィスクを３７℃に保存して１週間毎に試験を行い、４週
目まで測定を行った。その結果を表２〜表６に示す。
ィスクの作製及び保存安定性 遊離のチオール化有機酸、及びチオール化有機酸の塩を
含む乾燥ディスクと、チオール基を有していない有機酸
を含む乾燥ディスクとを作製し、ディスク拡散法を行い
阻止円直径を測定した。 (1)ＳＭＡ（２．９mg/ディスク含有） (2)ＭＰＡ（２．７mg/ディスク含有） (3)ＤＰＡ（０．５mg/ディスク含有） 市販のＳＭＡ、ＭＰＡを精製水に溶解し、１．０モルの
水溶液を作製した。ＤＰＡは、０．０５モルのＥＨＥＰ
Ｅ緩衝液ｐＨ７．０に溶解し、最終濃度０．１２モルの
ＤＰＡ水溶液を作製した。ＫＢディスク用の直径６．３
５mmの濾紙ディスクに上記の各調製溶液２５μlを滴下
し、５０℃で６０分間乾燥し、ＳＭＡディスク、ＭＰＡ
ディスク、ＤＰＡディスクを作製した。ＰＣＲ法であら
かじめＭＢＬ産生菌であることが確認されている肺炎桿
菌（K.pneumoniae)１株、および霊菌（S.marcescens）
１株、緑膿菌（P.aeruginosa）２株を用いて、J.Clin.M
icrobiol.,38(1),40,2000に従った方法で操作し、その
阻止円の直径を測定した。ＮＣＣＬＳのディスク法（標
準法）に準じて、純培養した試験菌の集落を釣菌し、ト
リプトソイブイヨンに懸濁させ、ＭｃＦａｒｌａｎｄ濁
度が０．５になるまで培養したものを綿棒を用いてミュ
ーラーヒントン寒天培地（ＭＨＡ）表面に均一に接種し
た。菌を接種した寒天平板培地表面上に２枚のＫＢディ
スクＣＡＺ（栄研化学製）を３〜５cm離して接置し、ど
ちらか片方のＫＢディスクＣＡＺからさらに１．５〜２
ｃｍ離してＭＢＬ阻害剤ディスク（ＳＭＡディスク、Ｍ
ＰＡディスク、もしくはＤＰＡディスク）を載せ、３５
℃で１８時間好気培養し、各ＣＡＺディスクの周囲に形
成された阻止円直径をシャーレの裏からmm単位で正確に
測定した。また上記作製の各ＭＢＬ阻害剤を含有したデ
ィスクを３７℃に保存して１週間毎に試験を行い、４週
目まで測定を行った。その結果を表２〜表６に示す。
【００３６】
【表２】
ＭＢＬ産生菌 ディスク作製当日測定成績
────────────────────────────────
菌名 薬剤名 （阻止円直径 mm）
────────────────────────────────
CAZ CAZ/SMA CAZ/MPA CAZ/DPA
────────────────────────────────
K.pneumoniae 4635 7 24 11 13
S.marcescens 4636 7 24 11 13
P.aeruginosa 4637 7 23 10 12
P.aeruginosa 4638 7 23 10 12
────────────────────────────────
【００３７】
【表３】
ＭＢＬ産生菌 ディスク作製後３７℃１週間保存の測定成績
────────────────────────────────
菌名 薬剤名 （阻止円直径 mm）
────────────────────────────────
CAZ CAZ/SMA CAZ/MPA CAZ/DPA
────────────────────────────────
K.pneumoniae 4635 7 24 0 13
S.marcescens 4636 7 24 0 13
P.aeruginosa 4637 7 23 0 12
P.aeruginosa 4638 7 23 0 12
────────────────────────────────
【００３８】
【表４】
ＭＢＬ産生菌 ディスク作製後３７℃２週間保存の測定成績
────────────────────────────────
菌名 薬剤名 （阻止円直径 mm）
────────────────────────────────
CAZ CAZ/SMA CAZ/MPA CAZ/DPA
────────────────────────────────
K.pneumoniae 4635 7 24 0 13
S.marcescens 4636 7 24 0 13
P.aeruginosa 4637 7 23 0 12
P.aeruginosa 4638 7 23 0 12
────────────────────────────────
【００３９】
【表５】
ＭＢＬ産生菌 ディスク作製後３７℃３週間保存の測定成績
────────────────────────────────
菌名 薬剤名 （阻止円直径 mm）
────────────────────────────────
CAZ CAZ/SMA CAZ/MPA CAZ/DPA
────────────────────────────────
K.pneumoniae 4635 7 24 0 13
S.marcescens 4636 7 24 0 13
P.aeruginosa 4637 7 23 0 12
P.aeruginosa 4638 7 23 0 12
────────────────────────────────
【００４０】
【表６】
ＭＢＬ産生菌 ディスク作製後３７℃４週間保存の測定成績
────────────────────────────────
菌名 薬剤名 （阻止円直径 mm）
────────────────────────────────
CAZ CAZ/SMA CAZ/MPA CAZ/DPA
────────────────────────────────
K.pneumoniae 4635 7 24 7 13
S.marcescens 4636 7 24 7 13
P.aeruginosa 4637 7 23 7 12
P.aeruginosa 4638 7 23 7 12
────────────────────────────────
【００４１】各菌の阻止円直径は表２−表６に示すとお
りであった。本実施例の判定基準はＮＣＣＬＳ法のＥＳ
ＢＬ産生菌確認試験と同様に、本発明におけるＣＡＺデ
ィスクとＣＡＺ／ＳＭＡ（ＤＰＡ）ディスクの阻止円直
径の差が５mm以上の時、試験菌をＭＢＬ産生菌と判定す
ることにした。表２において、各菌（ＭＢＬ産生菌）は
ＣＡＺディスクとＣＡＺ／ＳＭＡディスクの組合せで阻
止円径の差が５mm以上であるので、ＭＢＬと判定され
た。またＣＡＺディスクとＣＡＺ／ＤＰＡディスクに関
しても同様に全ての菌においてその阻止円径の差が５mm
以上であるので、ＭＢＬと判定された。しかし、ＣＡＺ
ディスクとＣＡＺ／ＭＰＡディスクに関しては全ての菌
の阻止円径の差が５mm未満であるのでＭＢＬとは判定さ
れなかった。これは、ＭＰＡディスク作製の乾燥時にＭ
ＰＡが揮発し、ディスク中のＭＰＡ含有量が減少した影
響と考えられる。表３−表６においても同様な結果であ
り、ＣＡＺ／ＳＭＡディスクとＣＡＺ／ＤＰＡのディス
クは３７℃保存で少なくとも４週間安定してＭＢＬを判
定することが可能であった。これは冷所保存であれば１
年間以上の保存安定性に相当する。
りであった。本実施例の判定基準はＮＣＣＬＳ法のＥＳ
ＢＬ産生菌確認試験と同様に、本発明におけるＣＡＺデ
ィスクとＣＡＺ／ＳＭＡ（ＤＰＡ）ディスクの阻止円直
径の差が５mm以上の時、試験菌をＭＢＬ産生菌と判定す
ることにした。表２において、各菌（ＭＢＬ産生菌）は
ＣＡＺディスクとＣＡＺ／ＳＭＡディスクの組合せで阻
止円径の差が５mm以上であるので、ＭＢＬと判定され
た。またＣＡＺディスクとＣＡＺ／ＤＰＡディスクに関
しても同様に全ての菌においてその阻止円径の差が５mm
以上であるので、ＭＢＬと判定された。しかし、ＣＡＺ
ディスクとＣＡＺ／ＭＰＡディスクに関しては全ての菌
の阻止円径の差が５mm未満であるのでＭＢＬとは判定さ
れなかった。これは、ＭＰＡディスク作製の乾燥時にＭ
ＰＡが揮発し、ディスク中のＭＰＡ含有量が減少した影
響と考えられる。表３−表６においても同様な結果であ
り、ＣＡＺ／ＳＭＡディスクとＣＡＺ／ＤＰＡのディス
クは３７℃保存で少なくとも４週間安定してＭＢＬを判
定することが可能であった。これは冷所保存であれば１
年間以上の保存安定性に相当する。
【００４２】実施例５ 同一ディスクにＣＡＺ／ＤＰＡ
を含有する乾燥ディスクの作成及び使用 栄研化学（株）製の直径６．３５mmのＫＢディスクＣＡ
Ｚ（３０μg含有）に０．１２モルのＤＰＡ溶液２５μl
を滴下し、５０℃で６０分間乾燥し、ＣＡＺ／ＤＰＡデ
ィスクを作製した。また、同様にＫＢディスク用の直径
６．３５mmの濾紙ディスクにＤＰＡ溶液２５μlを滴下
し、５０℃で６０分間乾燥し、ＤＰＡディスクを作製し
た。ＰＣＲ法であらかじめＭＢＬ産生菌であることが確
認されている肺炎桿菌１株、霊菌１株、および緑膿菌２
株を用いて、ＮＣＣＬＳのディスク法に準じて純培養し
た試験菌の集落を釣菌し、トリプトソイブイヨンに懸濁
させＭｃＦａｒｌａｎｄ濁度が０．５になるまで培養し
たものを綿棒を用いてＭＨＡ表面に均一に接種した。そ
の上にＫＢディスクＣＡＺを置き、それより３cm以上離
してＣＡＺ／ＤＰＡディスクを置き、さらに３cm以上離
してＤＰＡディスクを置き、３５℃で１８時間好気培養
し、ＣＡＺディスク、ＣＡＺ／ＤＰＡディスク、および
ＤＰＡディスクの阻止円直径を測定した。
を含有する乾燥ディスクの作成及び使用 栄研化学（株）製の直径６．３５mmのＫＢディスクＣＡ
Ｚ（３０μg含有）に０．１２モルのＤＰＡ溶液２５μl
を滴下し、５０℃で６０分間乾燥し、ＣＡＺ／ＤＰＡデ
ィスクを作製した。また、同様にＫＢディスク用の直径
６．３５mmの濾紙ディスクにＤＰＡ溶液２５μlを滴下
し、５０℃で６０分間乾燥し、ＤＰＡディスクを作製し
た。ＰＣＲ法であらかじめＭＢＬ産生菌であることが確
認されている肺炎桿菌１株、霊菌１株、および緑膿菌２
株を用いて、ＮＣＣＬＳのディスク法に準じて純培養し
た試験菌の集落を釣菌し、トリプトソイブイヨンに懸濁
させＭｃＦａｒｌａｎｄ濁度が０．５になるまで培養し
たものを綿棒を用いてＭＨＡ表面に均一に接種した。そ
の上にＫＢディスクＣＡＺを置き、それより３cm以上離
してＣＡＺ／ＤＰＡディスクを置き、さらに３cm以上離
してＤＰＡディスクを置き、３５℃で１８時間好気培養
し、ＣＡＺディスク、ＣＡＺ／ＤＰＡディスク、および
ＤＰＡディスクの阻止円直径を測定した。
【００４３】
【表７】
ＭＢＬ産生菌の測定成績
────────────────────────────────
菌名 薬剤名 （阻止円直径 mm）
────────────────────────────────
CAZ CAZ/DPA DPA
────────────────────────────────
K.pneumoniae 4635 7 13 0
S.marcescens 4636 7 13 0
P.aeruginosa 4637 7 12 0
P.aeruginosa 4638 7 12 0
────────────────────────────────
【００４４】各菌の阻止円直径は表７に示すとおりであ
った。表７に示すように、各菌（ＭＢＬ産生菌）はＣＡ
ＺディスクとＣＡＺ／ＤＰＡディスクとの組合せにおい
て、全ての菌の阻止円直径の差が５mm以上であるので、
ＭＢＬと判定された。また、ＤＰＡディスク単独での発
育阻止はＣＡＺ／ＤＰＡディスクの発育阻止に比べて顕
著に小さく、故にＤＰＡ自身の抗菌力は、ほとんど無視
できると考えられ、ＣＡＺディスクとＣＡＺ／ＤＰＡデ
ィスクとの組み合わせでＭＢＬの判定が可能であった。
った。表７に示すように、各菌（ＭＢＬ産生菌）はＣＡ
ＺディスクとＣＡＺ／ＤＰＡディスクとの組合せにおい
て、全ての菌の阻止円直径の差が５mm以上であるので、
ＭＢＬと判定された。また、ＤＰＡディスク単独での発
育阻止はＣＡＺ／ＤＰＡディスクの発育阻止に比べて顕
著に小さく、故にＤＰＡ自身の抗菌力は、ほとんど無視
できると考えられ、ＣＡＺディスクとＣＡＺ／ＤＰＡデ
ィスクとの組み合わせでＭＢＬの判定が可能であった。
【００４５】実施例６ ＭＢＬ阻害剤を含有した寒天培
地平板の作製とその使用 ＤＰＡを含有するＣＡＭＨＡとＤＰＡを含有しないＣＡ
ＭＨＡとを２分画シャーレに分注し、寒天平板を作成し
た。ＫＢディスクＣＡＺを静置し、その阻止円の形成を
観た。市販のＤＰＡを０．０５モルのＥＨＥＰＥ緩衝液
ｐＨ７．０に溶解し、８０００μg/mlのＤＰＡ溶液を作
製した。あらかじめ１２１℃で１５分間の高圧滅菌した
ＣＡＭＨＡ培地を５０℃に冷却し、ＣＡＭＨＡ１９mlに
対してＤＰＡ溶液１mlを加えて撹拌し均一な寒天培地溶
液にした。分画シャーレの一画にＣＡＭＨＡ１０mlを分
注し、もう一画にＤＰＡを含有したＣＡＭＨＡ１０mlを
分注した。寒天培地が固化後、シャーレの蓋をずらして
寒天表面の凝水を乾燥させ、ＣＡＭＨＡ平板を作製し
た。ＰＣＲ法であらかじめＭＢＬ産生菌であることが確
認されている肺炎桿菌１株、霊菌１株、および緑膿菌２
株を用いて、ＮＣＣＬＳのディスク法に準じて純培養し
た試験菌の集落を釣菌し、トリプトソイブイヨンに懸濁
させてＭｃＦａｒｌａｎｄ濁度が０．５になるまで培養
したものを綿棒を用いてＣＡＭＨＡ表面とＤＰＡを含有
したＣＡＭＨＡ表面とに均一に接種した。２分画シャー
レの各培地上にＫＢディスクＣＡＺを１枚ずつおき、培
養後各ＣＡＺディスクの阻止円直径を測定した。
地平板の作製とその使用 ＤＰＡを含有するＣＡＭＨＡとＤＰＡを含有しないＣＡ
ＭＨＡとを２分画シャーレに分注し、寒天平板を作成し
た。ＫＢディスクＣＡＺを静置し、その阻止円の形成を
観た。市販のＤＰＡを０．０５モルのＥＨＥＰＥ緩衝液
ｐＨ７．０に溶解し、８０００μg/mlのＤＰＡ溶液を作
製した。あらかじめ１２１℃で１５分間の高圧滅菌した
ＣＡＭＨＡ培地を５０℃に冷却し、ＣＡＭＨＡ１９mlに
対してＤＰＡ溶液１mlを加えて撹拌し均一な寒天培地溶
液にした。分画シャーレの一画にＣＡＭＨＡ１０mlを分
注し、もう一画にＤＰＡを含有したＣＡＭＨＡ１０mlを
分注した。寒天培地が固化後、シャーレの蓋をずらして
寒天表面の凝水を乾燥させ、ＣＡＭＨＡ平板を作製し
た。ＰＣＲ法であらかじめＭＢＬ産生菌であることが確
認されている肺炎桿菌１株、霊菌１株、および緑膿菌２
株を用いて、ＮＣＣＬＳのディスク法に準じて純培養し
た試験菌の集落を釣菌し、トリプトソイブイヨンに懸濁
させてＭｃＦａｒｌａｎｄ濁度が０．５になるまで培養
したものを綿棒を用いてＣＡＭＨＡ表面とＤＰＡを含有
したＣＡＭＨＡ表面とに均一に接種した。２分画シャー
レの各培地上にＫＢディスクＣＡＺを１枚ずつおき、培
養後各ＣＡＺディスクの阻止円直径を測定した。
【００４６】
【表８】
ＭＢＬ産生菌の測定成績
────────────────────────────────
菌名 培地（CAZディスクの阻止円直径 mm）
────────────────────────────────
CAMHA DPA含有CAMHA
────────────────────────────────
K.pneumoniae 4635 7 24
S.marcescens 4636 7 24
P.aeruginosa 4637 7 23
P.aeruginosa 4638 7 23
────────────────────────────────
【００４７】各菌の阻止円直径は表８に示すとおりであ
った。表８に示すように、各菌（ＭＢＬ産生菌）はＣＡ
ＭＨＡ上のＣＡＺディスクとＳＭＡＤＰＡを含有したＣ
ＡＭＨＡ上のＣＡＺディスクとの組合せにおいて、全て
の菌の阻止円直径の差が５mm以上であるので、ＭＢＬと
判定された。
った。表８に示すように、各菌（ＭＢＬ産生菌）はＣＡ
ＭＨＡ上のＣＡＺディスクとＳＭＡＤＰＡを含有したＣ
ＡＭＨＡ上のＣＡＺディスクとの組合せにおいて、全て
の菌の阻止円直径の差が５mm以上であるので、ＭＢＬと
判定された。
【００４８】
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 池戸 正成
栃木県下都賀郡野木町野木143 栄研化学
株式会社生物化学研究所
Ｆターム(参考） 4B029 AA08 GA03 GB05
4B063 QA06 QQ05 QQ61 QQ98 QR41
QR68 QR74 QS39 QX01
Claims (15)
- 【請求項１】β−ラクタム薬を含有する液体培地と、β
−ラクタム薬およびメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤と
してジカルボン酸誘導体を含有する液体培地との組合せ
を用いることを特徴とするメタロ−β−ラクタマーゼ産
生菌の薬剤感受性試験方法。 - 【請求項２】ジカルボン酸誘導体がピリジン置換誘導体
である請求項１記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産生菌
の薬剤感受性試験方法。 - 【請求項３】ピリジン置換誘導体が２，３−ピリジンジ
カルボン酸、２，４−ピリジンジカルボン酸、２，５−
ピリジンジカルボン酸、２，６−ピリジンジカルボン
酸、３，４−ピリジンジカルボン酸、および３，５−ピ
リジンジカルボン酸から成る群から選択される少なくと
も１種である請求項２記載のメタロ−β−ラクタマーゼ
産生菌の薬剤感受性試験方法。 - 【請求項４】β−ラクタム薬がセフタジジム、セフォタ
キシム、セフトリアキソン、セフポドキシム、セフピロ
ム、セフェピム、セフメタゾール、セフミノクス、イミ
ペネム、パニペネム、およびメロペネムから成る群から
選択される少なくとも１種である請求項１記載のメタロ
−β−ラクタマーゼ産生菌の薬剤感受性試験方法。 - 【請求項５】β−ラクタム薬０．２５−１２８μg/mlを
含有する液体培地と、β−ラクタム薬０．２５−１２８
μg/mlおよびメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤としてジ
カルボン酸誘導体１００−１６００μg/mlを含有する液
体培地との組合せを用いる請求項１乃至４記載のメタロ
−β−ラクタマーゼ産生菌の薬剤感受性試験方法。 - 【請求項６】液体培地がミューラー・ヒントン液体培
地、陽イオン調整ミューラー・ヒントン液体培地、ブレ
インハートインフュージョン液体培地、トリプトソイ液
体培地、ＡＢＣＭ液体培地、溶血液加ミューラー・ヒン
トン液体培地、シェドラー液体培地、ブルセラ液体培
地、および溶血液添加ブルセラ液体培地から成る群から
選択される請求項１記載のメタロ−β−ラクタマーゼ産
生菌の薬剤感受性試験方法。 - 【請求項７】請求項１乃至６記載の薬剤感受性試験に用
いる多穴容器であって、該多穴容器の各穴にβ−ラクタ
ム薬を含有する液体培地と、β−ラクタム薬およびメタ
ロ−β−ラクタマーゼ阻害剤としてジカルボン酸誘導体
を含有する液体培地とを分注したことを特徴とするメタ
ロ−β−ラクタマーゼ産生菌の薬剤感受性試験に用いる
多穴容器。 - 【請求項８】使用時まで凍結保存されている請求項７記
載の多穴容器。 - 【請求項９】請求項１乃至６記載の薬剤感受性試験に用
いる多穴容器であって、該多穴容器の各穴にβ−ラクタ
ム薬と、β−ラクタム薬およびメタロ−β−ラクタマー
ゼ阻害剤としてジカルボン酸誘導体とを分注し、各穴の
薬剤を乾燥固定化したことを特徴とするメタロ−β−ラ
クタマーゼ産生菌の薬剤感受性試験に用いる多穴容器。 - 【請求項１０】請求項１乃至６記載の薬剤感受性試験に
用いる多穴容器であって、該多穴容器の各穴にβ−ラク
タム薬を含有する液体培地と、β−ラクタム薬およびメ
タロ−β−ラクタマーゼ阻害剤としてジカルボン酸誘導
体を含有する液体培地とを分注し、各穴の薬剤を含有す
る液体培地を乾燥固定化したことを特徴とするメタロ−
β−ラクタマーゼ産生菌の薬剤感受性試験に用いる多穴
容器。 - 【請求項１１】メタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤として
ジカルボン酸誘導体を含有することを特徴とするディス
ク。 - 【請求項１２】ジカルボン酸誘導体がピリジン置換誘導
体である請求項１１記載のディスク。 - 【請求項１３】ピリジン置換誘導体が２，３−ピリジン
ジカルボン酸、２，４−ピリジンジカルボン酸、２，５
−ピリジンジカルボン酸、２，６−ピリジンジカルボン
酸、３，４−ピリジンジカルボン酸、および３，５−ピ
リジンジカルボン酸から成る群から選択される少なくと
も１種である請求項１２記載のディスク。 - 【請求項１４】β−ラクタム薬を含有するディスクとβ
−ラクタム薬およびメタロ−β−ラクタマーゼ阻害剤と
してジカルボン酸誘導体を含有するディスクとの組合せ
を用いることを特徴とするメタロ−β−ラクタマーゼ産
生菌の薬剤感受性試験方法。 - 【請求項１５】β−ラクタム薬を含有するディスクとメ
タロ−β−ラクタマーゼ阻害剤としてジカルボン酸誘導
体を含有する寒天平板培地とを用いることを特徴とする
メタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の薬剤感受性試験方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001331756A JP3964178B2 (ja) | 2001-10-30 | 2001-10-30 | メタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の薬剤感受性試験方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001331756A JP3964178B2 (ja) | 2001-10-30 | 2001-10-30 | メタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の薬剤感受性試験方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003135093A true JP2003135093A (ja) | 2003-05-13 |
| JP3964178B2 JP3964178B2 (ja) | 2007-08-22 |
Family
ID=19147264
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001331756A Expired - Lifetime JP3964178B2 (ja) | 2001-10-30 | 2001-10-30 | メタロ−β−ラクタマーゼ産生菌の薬剤感受性試験方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3964178B2 (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005056820A1 (ja) * | 2003-12-15 | 2005-06-23 | Japan Health Sciences Foundation | クラスC型β‐ラクタマーゼ産生菌の簡易検出法 |
| JP2005341827A (ja) * | 2004-06-01 | 2005-12-15 | Kyokuto Seiyaku Kogyo Kk | 薬剤感受性試験用プレート |
| JP2010213598A (ja) * | 2009-03-16 | 2010-09-30 | Kyokuto Seiyaku Kogyo Kk | 抗菌薬の微生物に対する有効性の検査方法 |
| WO2010114037A1 (ja) * | 2009-03-31 | 2010-10-07 | 明治製菓株式会社 | メタロ－β－ラクタマーゼ産生菌の判定方法 |
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-
2001
- 2001-10-30 JP JP2001331756A patent/JP3964178B2/ja not_active Expired - Lifetime
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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