JP2002534062A

JP2002534062A - Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ抗原

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Publication number: JP2002534062A
Application number: JP2000589563A
Authority: JP
Inventors: ジウリオラッティ，
Original assignee: カイロンエセ．ピー．アー．
Priority date: 1998-12-18
Filing date: 1999-12-17
Publication date: 2002-10-15
Also published as: US8114401B2; DK1140997T3; ATE371668T1; EP1140997B1; EP1857464B1; WO2000037494A3; DE69937004D1; GB9828000D0; US20130156775A1; US20060188516A1; PT1140997E; EP1857464A2; CA2355876A1; EP1598362A3; EP1857464A3; JP2010220622A; EP1140997A2; ATE516299T1; ES2292261T3; WO2000037494A2

Abstract

(57)【要約】本発明は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ由来の抗原性タンパク質に関する。詳細には、これは、慢性に感染した患者血清またはセロコンバージョンした患者の血清由来の抗体により認識される抗原に関する。感染の結果としてヒトにおいて免疫原性である、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓによってコードされるタンパク質は、二次元電気泳動マップのウエスタンブロットを用いて同定された。いくつかの公知の免疫原は、免疫原として以前には公知ではないタンパク質、および発現された遺伝子産物として以前には報告されていないタンパク質として、同定された。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（クラミジア抗原）本発明は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ由来の抗原性タンパ
ク質に関する。詳細には、これは、慢性に感染した患者血清またはセロコンバー
ジョンした患者の血清由来の抗体により認識される抗原に関する。

【０００２】（背景）Ｃｈｌａｍｙｄｉａは、風土性の性感染症、トラコーマ、感染性肺炎、および
種々の他の疾患症候群の原因である真核生物細胞の偏性細胞内寄生生物である。
それらは、排他的真正細菌の系統学的な分科であり、任意の他の公知の生物体に
密接な関係を有さない。それらは、それ自体の目（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌｅｓ）
に分類され、これは、単一の科（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｃｅａｅ）を含み、次に、
これは単一の属（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ）を含む。４つのＣｈｌａｍｙｄｉａ種が
現在、公知である。Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、
Ｃ．ｐｅｃｏｒｕｍおよびＣ．ｐｓｉｔｔａｃｉ［例えば、引用文献１を参照の
こと］。Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ（血清型亜型Ｄ）のゲノム配列は、現在公
表されている［２］。

【０００３】Ｃ．Ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓのヒトの血清改変体（「血清型亜型」）は、２つ
のバイオ改変体（「ｂｉｏｖａｒ」）に分けられる。血清型亜型Ａ〜Ｋは、主に
眼の組織（Ａ〜Ｃ）または泌尿生殖器管（Ｄ〜Ｋ）において上皮性感染を誘発す
る。血清型亜型Ｌ１、Ｌ２およびＬ３は、浸潤性の性病性リンパ肉芽腫（ＬＧＶ
）の因子である。

【０００４】クラミジア感染自体が疾患を生じるが、幾人かの患者においては、症候群の重
篤度は、実際には、異常な宿主免疫応答に起因していると考えられる。感染を排
除することの失敗は持続的な免疫刺激を生じ、そして宿主を助けることよりも、
これは、重篤な結果（不妊および失明を含む）を伴う慢性感染を生じる［３］。

【０００５】さらに、天然のクラミジア感染により与えられる防御は、通常、不完全で、一
過性で、そして株特異的である。

【０００６】疾患の深刻な性質に起因して、適切なワクチンを提供することが所望される。
これらは、（ａ）クラミジア感染に対する、またはクラミジア誘導性疾患に対す
る免疫のために（予防ワクチン接種）、あるいは（ｂ）確立された慢性クラミジ
ア感染の根絶のために（治療ワクチン接種）有用であり得る。しかし、細胞内寄
生生物であることから、この細菌は、一般に抗体媒介免疫応答を逃れ得る。

【０００７】種々の抗原性タンパク質が、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓについて記載されて
おり、そして特に細胞表面が、詳細な検索の標的となっている［例えば、１，４
］。これらとしては、例えば、ｐｇｐ３［５，６，７］、ＭＯＭＰ［８］、Ｈｓ
ｐ６０（ＧｒｏＥＬ）［９］およびＨｓｐ７０（ＤｎａＫ様）［１０］が挙げら
れる。しかし、これらの全てが有効なワクチンであると証明されたわけではなく
、そして、ワクチン開発における使用に適切な抗原および免疫原を提供するため
、天然の感染の間に免疫応答を惹起するクラミジア抗原を同定することが本発明
の目的である。

【０００８】（発明の詳細な説明）本発明は、感染の結果、ヒトにおいて免疫原性である、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ
ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓによりコードされるタンパク質の同定に基づく。

【０００９】本発明は、１５頁（ＰＣＴ英文）の表ＩＩに列挙されたような、タンパク質、
５、６、７、８、９、１１、１３、１４、１５、１６、１７、１８、２０、２１
、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３
、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５
、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、または５５の分子
量およびｐＩの特徴を有するＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓタンパク質を提供する
。

【００１０】これらは、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓのＬ２株において、１６頁（ＰＣＴ英
文）の表ＩＩＩに開示されたＮ末端アミノ酸配列を有するタンパク質を含む。

【００１１】本発明はまた、これらのＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓタンパク質に同一の配列
を有するタンパク質を提供する。特定のタンパク質に依存して、同一性の程度は
、好ましくは、５０％より大きい（例えば、６５％、８０％、９０％、９５％、
９８％、９９％以上）。これらの相同なタンパク質としては、変異体、対立遺伝
子改変体、血清型改変体、およびバイオ改変体が挙げられる。タンパク質の間の
同一性は、好ましくは、ＭＰＳＲＣＨプログラム（ＯｘｆｏｒｄＭｏｌｅｃｕ
ｌａｒ）において実行されるようなＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索ア
ルゴリズムにより決定される。これは、パラメーターｇａｐｏｐｅｎｐｅｎ
ａｌｔｙ＝１２、およびｇａｐｅｘｔｅｎｓｉｏｎｐｅｎａｌｔｙ＝１を有
するアフィンギャップ検索を用いる。代表的には、２つのタンパク質の間の５０
％以上の同一性は、機能的に等価の指標とみなされる。

【００１２】本発明は、さらに、本発明のＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓタンパク質のフラグ
メントを含むタンパク質を提供する。このフラグメントは、このタンパク質から
少なくともｎの連続するアミノ酸を含むべきであり、そして特定のタンパク質に
依存して、ｎは、７以上（例えば、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、
５０、１００以上）である。好ましくは、このフラグメントは、このタンパク質
由来のエピトープを含む。

【００１３】本発明のタンパク質は、当然ながら、種々の手段（例えば、組換え発現、細胞
培養物からの精製、化学合成など）により、そして種々の形態（例えば、ネイテ
ィブ、融合など）で調製され得る。それらは、好ましくは、実質的に単離された
または精製された形態（すなわち、実質的に他のＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓま
たは宿主細胞タンパク質を含まない）で調製される。

【００１４】さらなる局面に従って、本発明は、これらのタンパク質に結合する抗体を提供
する。これらは、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であってもよく
、そして、任意の適切な手段により生成されてもよい。

【００１５】さらなる局面に従って、本発明は、本発明のタンパク質およびタンパク質のフ
ラグメントをコードする核酸を提供する。この核酸に配列同一性を有する核酸が
また提供される。特定の核酸に依存して、同一性の程度は、好ましくは、５０％
より大きい（例えば、６５％、８０％、９０％、９５％、９８％、９９％以上）
。

【００１６】さらに、本発明は、好ましくは「高ストリンジェンシー」な条件（例えば、０
．１×ＳＳＣ、０．５％ＳＤＳ溶液中、６５℃）下で、この核酸にハイブリダ
イズし得る核酸を提供する。この核酸のフラグメントもまた提供される。このフ
ラグメントは、この配列由来の少なくともｎの連続するヌクレオチドを含むべき
であり、そして特定の配列に依存して、ｎは１０以上である（例えば、１２、１
４、１５、１８、２０、２５、３０、３５、４０以上）。

【００１７】本発明は、上記の核酸に相補的（例えば、アンチセンスまたはプローブする目
的のため）な配列を含む核酸を提供することもまた理解されるべきである。

【００１８】本発明に従う核酸は、当然ながら、多くの方法（例えば、化学合成により、ゲ
ノムライブラリーもしくはｃＤＮＡライブラリー、または生物体自体から、など
）で調製され得、そして種々の形態（例えば、一本鎖、二本鎖、ベクター、プロ
ーブ、など）をとり得る。

【００１９】さらに、用語「核酸」は、ＤＮＡおよびＲＮＡ、そしてまたそれらのアナログ
（例えば、改変された骨格を含むもの）、そしてまたペプチド核酸（ＰＮＡ）な
どを含む。

【００２０】さらなる局面に従って、本発明は、本発明の核酸を含むベクター（例えば、発
現ベクター）およびこのようなベクターで形質転換された宿主細胞を提供する。

【００２１】さらなる局面に従って、本発明は、本発明に従うタンパク質、抗体および/ま
たは核酸を含む組成物を提供する。これらの化合物は、免疫原性組成物（ワクチ
ンを含む）として、例えば、または診断試薬として、適切であり得る。

【００２２】本発明はまた、医薬として（例えば、ワクチンとして）、または診断試薬とし
ての使用のための、本発明に従う核酸、タンパク質、または抗体を提供する。詳
細には、本発明は、クラミジア免疫原としての使用のため、（１５頁（ＰＣＴ英
文）の表ＩＩに列挙されたような）タンパク質５、６、７、８、９、１０、１１
、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３
、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５
、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７
、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、または５５を提供する。表ＩＩ
に記載のタンパク質のいくつかは、それ自体、公知であり得ると考えられるが、
それらが免疫原性であるとは開示されていない。

【００２３】本発明はまた、以下の製造における、本発明に従う核酸、タンパク質、または
抗体の使用を提供する：（ｉ）Ｃｈｌａｍｙｄｉａに起因する感染を処置または
予防するための医薬、（ｉｉ）Ｃｈｌａｍｙｄｉａの存在またはＣｈｌａｍｙｄ
ｉａに対して惹起された抗体の存在を検出するための診断試薬、および/あるい
は（ｉｉｉ）Ｃｈｌａｍｉｄｉａに対して抗体を惹起し得る試薬。Ｃｈｌａｍｙ
ｄｉａは、任意の種または株であってもよいが、好ましくは、Ｃ．ｔｒａｃｈｏ
ｍａｔｉｓである。好ましい実施形態では、本発明は、このような製造における
使用のための表ＩＩの５５タンパク質のタンパク質を提供する。

【００２４】本発明はまた、患者を処置する方法を提供する。この方法は、本発明に従う核
酸、タンパク質および/または抗体の治療的有効量を患者に投与する工程を包含
する。

【００２５】さらなる局面に従って、本発明は、種々のプロセスを提供する。

【００２６】本発明のタンパク質を生成するためのプロセスが提供される。このプロセスは
、タンパク質発現を誘導する条件下で本発明に従う宿主細胞を培養する工程を包
含する。

【００２７】本発明のタンパク質または核酸を生成するためのプロセスが提供される。ここ
で、タンパク質または核酸は、化学的手段を用いて部分的にまたは全体として合
成される。

【００２８】本発明の核酸を検出するためのプロセスが提供される。このプロセスは、以下
の工程：（ａ）本発明に従う核酸プローブを、二重鎖を形成するハイブリダイズ
条件下で、生物学的サンプルに接触させる工程：および（ｂ）この二重鎖を検出
する工程、を包含する。

【００２９】本発明のタンパク質を検出するためのプロセスが提供される。このプロセスは
、以下の工程：（ａ）本発明に従う抗体を、抗体−抗原複合体の形成に適切な条
件下で、生物学的サンプルに接触させる工程；および（ｂ）この複合体を検出す
る工程、を包含する。同様に、本発明は、サンプル中の抗クラミジア抗体を検出
するためのプロセスを提供する。このプロセスは、以下の工程：（ａ）本発明に
従うタンパク質を、抗体−抗原複合体の形成に適切な条件下で、生物学的サンプ
ルと接触させる工程；および（ｂ）この複合体を検出する工程、を包含する。

【００３０】本発明はまた、これらのプロセスにおける使用に適切な試薬を備えるキットを
提供する。

【００３１】本発明に従う核酸プローブ、およびこのプローブにより形成された二重鎖を検
出するための手段を備えるキットが、提供される。本発明に従う抗体、およびこ
の抗体により形成された抗体−抗原複合体を検出するための手段を備えるキット
が提供される。本発明に従うタンパク質、およびこのタンパク質により形成され
た抗体−抗原複合体を検出するための手段を備えるキットが提供される。

【００３２】疑いを回避するため、用語「含む、備える（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「
を含む、が挙げられる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、および「からなる（ｃｏｎｓ
ｉｓｔｉｎｇ）」を包含する。例えば、Ｘを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」
組成物は、排他的にＸから構成されてもよいし、またはＸ以外に何かを含んでも
（例えば、Ｘ＋Ｙ）よい。

【００３３】（実施例）（ヒト血清）血清（表１）は、生殖管のクラミジア属感染に応答した女性から得た。１７の
血清（Ａ〜Ｑ）を、低い４症例の生殖管感染および２症例の続発性不妊症（ｓｅ
ｃｏｎｄａｒｙｓｔｅｒｉｌｉｔｙ）を含む腹腔鏡検査で確認した１３症例の
ＰＩＤ（骨盤炎症疾患）から得た。全ての血清は、精製したＣ．ｔｒａｃｈｏｍ
ａｔｉｓＬ２基本小体［１１］を用いた標準の微小免疫蛍光試験（ＭＩＦ）に
対して陽性であり、そしてｐｇｐ３抗原［５］をコードしたプラスミドを用いる
ＥＬＩＳＡ試験により、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ免疫血清として確認した。

【００３４】健康な血液ドナー由来の１０のセロネガティブコントロール血清の群を、同じ
方法で免疫ブロッティングすることにより、かつ非特異的反応の発生を除外する
ために患者の血清と同じ希釈を用いて試験した。

【００３５】ほとんどの血清は、ＢｉｏｂａｎｑｕｅｄｅＰｉｃａｒｄｉｅ（Ａｍｉｅ
ｎｓ、Ｆｒａｎｃｅ）のＣｈｌａｍｙｄｉａ収集から得た。いくつかのＰＩＤお
よび健康な血液ドナー由来のコントロール血清は、ＯｓｐｅｄａｌｅＰｏｌｉ
ｃｌｉｎｉｃｏＳ．Ｏｒｓｏｌａ（Ｂｏｌｏｇｎａ，Ｉｔａｌｙ）から得た。

【００３６】（タンパク質サンプルの調製）精製したクラミジア属細胞を参考文献１２に記載のように、Ｖｅｒｏ細胞培養
中のＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ種Ｌ２／３４３／Ｂｕを通常の手順に従って増
殖し、続く２サイクルの密度勾配遠心分離［１３］によって得た。精製した基本
小体（ＥＢ）調製物の平均タンパク質濃度を、ビウレットアッセイを用いて決定
した。アリコート（２ｍｇタンパク質／ｍｌ）を、続く電気泳動分析のために−
２０℃で水中に貯蔵した。使用した細胞は、主にＥＢの形態であり、現在までに
知られているクラミジアの抗原の全ては、網様体（ｒｅｔｉｃｕｌａｒｂｏｄ
ｙ）よりもむしろ基本小体に見出される。

【００３７】（クラミジアのタンパク質の分離）クラミジアのタンパク質を高分解能２Ｄ電気泳動を用いて分離し、本質的に参
考文献１４および１５に記載されるようなイモビリン（ｉｍｍｏｂｉｌｉｎｅ）
／ポリアクリルアミド系を用いて実施した。分析ゲルについては、１枚のゲル当
たり約４５μｇの総基本小体タンパク質を使用した。（微小配列決定のための）
セミプレパレーティブゲル（ｓｅｍｉｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅｇｅｌ）につい
ては、約１ｍｇタンパク質を使用した。ＥＢタンパク質のアリコートを低速度の
遠心分離によってペレットにし、そして８Ｍ尿素、４％ＣＨＡＰＳ（３−［（３
−クロラミドプロピル）ジメチルアンモニウム］−１−プロパンスルホネート）
、４０ｍＭトリス塩基、６５ｍＭジチオエリトリトール（ＤＴＥ）および微量
のブロモフェノールブルー中に再懸濁した。

【００３８】等電点電気泳動を、非線形の３〜１０のｐＨ勾配（ＩＰＧｓｔｒｉｐｓ，Ａ
ｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ）を提供するイモビリン
片上で実施した。電圧は、最初の３時間の間、直線的に３００〜３５００Ｖまで
上昇させ、次いで５０００Ｖで２２時間安定化させた（総電圧−時間の積は、１
１０ｋＶｈである）。電気泳動の後、ＩＰＧストリップを、６Ｍ尿素、３０％グ
リセロール、２％ＳＤＳ、０．０５ＭＴｒｉｓＨＣｌ、ｐＨ６．８、および２
％ＤＴＥに対して１２分平衡化させた。二次元を９〜１６％ポリアクリルアミド
直線勾配ゲル（１８ｃｍ×２０ｃｍ×１．５ｍｍ）上、４０ｍＡ／ゲル定電流
で、色素の前面がゲルの底面に到達するまで約５時間の間、Ｌａｅｍｍｌｉ系に
おいて実施した。分析ゲルをアンモニア性の硝酸銀を用いて染色した［１６］。
タンパク質マップをレーザーフォトデンシトメーター（ｌａｓｅｒｐｈｏｔｏ
ｄｅｎｓｉｔｏｍｅｔｅｒ）（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｙｎａｍｉｃｓ）を用い
てスキャンし、次いでＭｅｌａｎｉｅＩＩコンピューターソフトウェア（Ｂ
ｉｏ−Ｒａｄ）を用いて分析された電子ファイル（ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｆｉ
ｌｅ）に変換した。

【００３９】図１は、イムノブロット上の同定されたタンパク質に使用した注釈付き参照Ｅ
Ｂマップ（ａｎｎｏｔａｔｅｄｒｅｆｅｒｅｎｃｅＥＢｍａｐ）を示す。
参照マップに関するＭＷおよびｐＩ座標を、参照タンパク質として働くヒト血清
タンパク質とのクラミジアタンパク質の共同移動（ｃｏ−ｍｉｇｒａｔｉｏｎ）
により較正した。血清タンパク質に使用した等電点の値は、参考文献１７に記載
の等電点の値である。

【００４０】（免疫ブロット分析）免疫ブロットの結果を図２および表ＩＩに要約する。

【００４１】二次元電気泳動の後、ゲルをニトロセルロース膜［１８］上に電気ブロットし
、そして参考文献１９に記載されたように改変された標準の手順にしたがって処
理した。簡単には、免疫検出の前に、膜を３％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸中の０
．２％（ｗ／ｖ）ＰｏｎｃｅａｕＳで３分間染色し、そして選択されたアンカ
ースポットの位置をブロット上に印をつけ、免疫ブロットと銀染色マップとの整
合を補助した。免疫反応性スポットは、患者の血清（１５００〜５０００×希釈
）を用いて室温で一晩インキュベートし、続いてペルオキシダーゼと結合体化し
たウサギ抗ヒトＩｇＧ（Ｃａｐｐｅｌ、７０００×希釈）とインキュベートし、
そして化学発光ベースのキット（ＰｈａｒｍａｃｉａＡｍｅｒｓｈａｍＢｉ
ｏｔｅｃｈ）を用いる検出によって検出した。

【００４２】代表的には、６つの同一の２Ｄマップを各実験に関して並行して調製し、５つ
を、ニトロセルロース上にブロットし、そして１つを、引き続く免疫ブロットと
の相関関係および参照マップに対するコンピューターに補助されたマッチングの
ために硝酸銀を用いて染色した。

【００４３】免疫ブロット上のスポットシグナルは、ほとんどいつも銀染色ゲル上のスポッ
トに対応する。しかし、少なくとも２つの実例（図１のスポット１３および１４
）において、免疫ブロット分析は、銀染色マップにおいて見えなかったタンパク
質スポットを検出した。これは、この技術が、優れた感度を有し、かつ系統的な
プロテオミクス（ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ）研究の価値ある手段としてもまた考慮
されるべきであることを示す。

【００４４】免疫ブロットと図１に示される参照マップとのマッチングを補助するために、
ニトロセルロースブロットに、一過性ＰｏｎｃｅａｕＲｅｄ染色を用いて、多
くの内部「アンカー」スポットに印をつけた。血清とのインキュベーションおよ
び化学発光による結合抗体の検出の後、免疫ブロット画像を参照マップに整合し
、そしてスポットを対応するｐＩおよびＭＷ座標（表ＩＩ参照のこと）に割り当
てた。スポット（または等電点の一連のスポット）の位置および形が、以前に同
定されたＥＢ抗原と一致した場合、そのような抗原に対する免疫応答を記録した
。他の全ての場合において、免疫ブロットスポットは、染色された領域（または
、複合体スポットパターンの場合は、座標領域）の重心（ｂａｒｉｃｅｎｔｒｅ
）において得られたＭＷおよびｐＩ座標によって同定した。ＭＷおよびｐＩ値が
、電気泳動的に決定され、そして＋／−１０％の潜在的な平均誤差を有し得るこ
とが理解される。より高いＭＷの測定は、低精度である傾向がある。

【００４５】コントロールブロットは全く空であったが、患者のブロットは、平均約１５を
有する２〜２８で変化した多数のスポットを含む、個々に異なるパターンを示す
（表ＩＩを参照のこと）。免疫反応性スポットの数は、血清ＭＩＦ力価と相関し
ない（表ＩおよびＩＩを参照のこと）。それ故、ブロットパターンは、単に抗体
力価の差違ではなく、体液性応答において、事実上の個々の多様性を反映するよ
うである。このことをまた、種々の希釈での各血清の結果を比較することによっ
て確認した。

【００４６】代表的なイムノブロットの結果を、図２に示す。試験した血清すべてについて
一定である唯一の特徴は、システインリッチな外膜タンパク質ＯＭＰ２に起因す
ると以前に同定された、スポットの複合クラスターに対する抗体の存在であった
[１２]。このクラスターは、図１においてスポットとして示される−「１」と表
示されたスポットすべてが、単一の抗原としてスコア付けされたが、通常はＯＭ
Ｐ２の反応性に関連するようである、より低いＭＷおよびｐＩ値を有する多数の
付属スポットは、別々にスコア付けされた。なぜなら、ＯＭＰ２ポリペプチドに
対するこれらの関係が、未だ不明であるからである。ＯＭＰ２タンパク質はクラ
ミジア特異的であり、そしていかなる関連する抗原性の変化も生じるようではな
いので、このタンパク質は、本研究において、クラミジア感染のおそらく最良の
マーカーと見なされ得る。

【００４７】観察された次の最も頻出したスポットは、以下に対応する：・スポット２−ＧｒｏＥＬ様（ｈｓｐ６０）タンパク質（１５／１７の患者）・スポット３−主要外膜タンパク質ＭＯＭＰ（１３／１７の患者）・スポット４−ＤｎａＫ様（ｈｓｐ７０）タンパク質（１１／１７の患者）。

【００４８】これら公知の免疫原との反応性は、本研究において使用されるヒト血清の質を
示す、内部コントロールとして見なされ得る。しかし、これらのブロットに対す
るｐｇｐ３の反応性の欠如が、顕著である。なぜなら、これらの血清すべては、
ｐｇｐ３の精製された可溶性形態を用いる確認ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、陽
性であることが見出されているからである。このことは、ヒト感染におけるｐｇ
ｐ３に対する抗体応答が、主に、正確にフォールディングされたタンパク質構造
においてのみ利用可能なエピトープに対して生じ、この応答がこれらの実験にお
いて失われたことを、示唆する。

【００４９】以下のタンパク質に対する患者の免疫反応もまた、検出された[参考文献１２
参照]：・スポット１０−タンパク質伸長因子ＥＦ−Ｔｕ（８／１７）・スポット１９−リボソームタンパク質Ｓ１（５／１７）・スポット１２−リボソームタンパク質Ｌ７／Ｌ１２（７／１７）。

【００５０】これら公知のタンパク質に加えて、いくつかの新規な免疫反応性タンパク質が
、１１／１７〜１／１７の範囲の頻度で検出された。これらのタンパク質のＭＷ
およびｐＩの特徴を、表ＩＩに示す。さらに、少数の場合において、さらなる分
析を、データベースの相同性検索で補足した、Ｎ末端アミノ酸配列決定によって
実施した。

【００５１】（スポットの小配列決定）２Ｄ地図を上記のように調製した。参考文献２０におけるように、１泳動当り
１ｍｇの総ＥＢタンパク質から開始し、続いて、ポリビニリデンジフルオリド膜
（ＢｉｏＲａｄＰＶＤＦ膜、２０×２０ｃｍ、孔径０．２μｍ）上にブロット
した。このブロットを、５０％水性メタノール中にある０．１％（ｗ／ｖ）Ｃｏ
ｏｍａｓｓｉｅＢｒｉｌｌｉａｎｔＢｌｕｅＲ２５０を用いて５分間染色
し、そして４０％メタノール、１０％酢酸中で脱色した。膜を３７℃で乾燥し、
そしてさらなる分析のために−２０℃で保存した。選択したタンパク質スポット
を切り出し、そしてフェニルチオヒダントイン−アミノ酸分析機モデル１２０Ａ
およびコントロール／ＤａｔａＭｏｄｕｌｅモデル９００Ａ（Ａｐｐｌｉｅｄ
ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＩｎｃ．）とオンライン接続した、自動Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ／ＰｅｐｔｉｄｅＳｅｑｕｅｎｃｅｒ（ｍｏｄ４７０Ａ；Ａｐｐｌｉｅｄ
ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓＩｎｃ．）を使用して、エドマン分解によるアミノ酸
配列決定に供した。同様のブロットから代表的には３個または４個の等価なスポ
ットを、そのスポット中のタンパク質の推定相対モル量に従って、使用した。

【００５２】この配列決定の結果を、１６頁の表ＩＩＩに示す。

【００５３】（配列のコンピューター分析）Ｎ末端配列のデータを使用して、タンパク質の類似性についてのデータベース
検索を、ＮＣＢＩ[ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ]
から入手可能なＢＬＡＳＴプログラム[２１]およびＧＣＧソウトウェア（Ｗｉｓ
ｃｏｎｓｉｎＰａｃｋａｇｅＶｅｒｓｉｏｎ９．０）のプログラム[２２]
を使用して、実施した。理論上のｐＩ値およびＭＷ値を、ＥｘＰＡＳｙインター
ネットサーバー[ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｅｘｐａｓｙ．ｃｈ]から入手可能なｐ
Ｉ／ＭＷコンピュータープログラムによって算出した。

【００５４】これら通常のデータベースに加えて、ＣｌａｍｙｄｉａＧｅｎｏｍｅＰｒ
ｏｊｅｃｔ[ｈｔｔｐ：／／ｃｈｌａｍｙｄｉａ−ｗｗｗ．ｂｅｒｋｅｌｅｙ．
ｅｄｕ：４２３１]により提供される、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓＤ／ＵＷ
−３／Ｃｘ株のゲノム配列決定データを検索した。この研究はＣ．ｔｒａｃｈｏ
ｍａｔｉｓ血液型亜型Ｌ２株（リンパ肉芽腫次亜種）（これは、異なる病原性表
現型を有する）を使用したが、いくつかのタンパク質配列が、この血液型亜型Ｄ
遺伝子に確実に関連し得る。

【００５５】Ｎ末端のデータを用いたこれらの検索によって、７つの免疫反応性スポットを
（上記の７つに加えて）以下の公知の配列に関連付けることが可能になった：・スポット１５：ペリプラズムペプチダーゼであると推測される（この血液亜型
Ｄのゲノムデータベースにおいて、現在はｈｔｒＡと注釈が付いている）。・スポット１８および４６：外膜タンパク質であると推測される（このゲノムデ
ータベースにおいて、現在はｏｍｐＢと注釈が付いている）。・スポット２１：そのアミノ酸配列は、以前に記載されたどのタンパク質とも一
致しないが、ＥＦ−Ｔｕからの内部配列に対する相同性を示す。このタンパク質
は、ＥＦ−Ｔｕの分解産物またはプロセシング産物、あるいはその変異体であり
得る。・スポット２４：ＲＮＡポリメラーゼαサブユニット（ｒｐｏＡ）。・スポット２５：細菌のロイシンペプチダーゼに対して相同（（このゲノムデー
タベースにおいて、現在はｐｅｐＡと注釈が付いている）。・スポット３８：ＧＴＰ結合タンパク質であると推測される（現在は、ｙｃｈＦ
と注釈が付いている）。

【００５６】スポット２６、３１および３３のＮ末端配列は、公開された血液型亜型Ｄ配列
を含む、データベースのどの配列にも一致しない。

【００５７】表ＩＶは、いくつかの免疫反応性抗原の同定（いくつかは推定）の要旨を示す
。これらは、以前の２Ｄマッピングデータとの比較、または上記で得られたＮ末
端配列決定データとの相同性検索のいずれかによって、得られた。

【００５８】（特に興味深いタンパク質）これらのイムノブロットから同定された以下のタンパク質が、特に興味深い：（スポット２４）このスポットは、そのＭＷ／ｐＩの位置およびそのＮ末端配列に基づいて、Ｃ
．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓＲＮＡポリメラーゼ（ｇｉ６２００２９）のα鎖で
あると考えられる。このＲＮＡＰα鎖は、以前に記載されている[２３]が、クラ
ミジア免疫原としては、未だ報告されていない。４人の患者が、このタンパク質
に対する反応性を示した。このことは、これが、クラミジア感染の結果としてヒ
トにおいて免疫原性であることを示す。Ｃｌａｍｙｄｉａの細胞内に寄生する性
質は、この性質が一般的に、抗体媒介性免疫応答を回避し得ることを意味するが
、上記で示される抗体の反応性は、その免疫系が、自然感染の間にこれらのタン
パク質に遭遇することを示し、そして抗体の形成はまた、例えば、Ｔ細胞媒介性
免疫応答を惹起することを補助し得る。

【００５９】（スポット１８および４６）スポット１８および４６は、血清型Ｄのゲノム中のｏｍｐＢ遺伝子（推定外膜
タンパク質をコードすると注釈される）に相同であるようである。Ｎ末端配列な
らびにｐＩ値およびＭＷ値（推定理論値５．０６／３４．５に対して、少なくと
もスポット１８については、５．０８／３４．０９）は、推定Ｎ末端シグナルペ
プチドの切断後の、ｏｍｐＢ遺伝子産物の予想特性と一致する。

【００６０】スポット４６および１８の両方が、クラミジア外膜複合体の精製調製物の２Ｄ
電気泳動マップ中に存在することもまた、見出された。これもまた、スポット１
８および４６が血清型ＤのｏｍｐＢ遺伝子のホモログを示すという考えを支持す
る。

【００６１】このタンパク質が２つの異なる電気泳動種として現れる理由を調べなかったが
、この型のスポットのずれは、通常、アミノ酸配列変化および／またはいくつか
のアミノ酸残基の真の誘導体化もしくは人為的な誘導体化のいずれかに起因した
、アミノ酸組成の変化と関連する。

【００６２】５名の患者が、このタンパク質に対する反応性を示した。このことは、このタ
ンパク質が、クラミジア感染の結果としてヒトにおいて免疫原性であることを実
証する。

【００６３】（スポット２５）このスポットは、そのＭＷ／ｐＩ位置およびそのＮ末端配列（両方を、公開さ
れた血液型亜型Ｄの配列ｐｅｐＡと比較）に基づくと、アミノペプチダーゼであ
ると考えられる。４名の患者が、このタンパク質に対する反応性を示した。この
ことは、このタンパク質がクラミジア感染の結果としてヒトにおいて免疫原性で
あることを実証する。

【００６４】（スポット３８）このスポットは、そのＭＷ／ｐＩ位置およびそのＮ末端配列（両方を、公開さ
れた血液型亜型Ｄの配列ｙｃｈＦと比較）に基づくと、ＧＴＰ結合タンパク質で
あると考えられる。２名の患者が、このタンパク質に対する反応性を示した。こ
のことは、このタンパク質がクラミジア感染の結果としてヒトにおいて免疫原性
であることを実証する。

【００６５】（スポット１５）このスポットは、そのＭＷ／ｐＩ位置およびそのＮ末端配列（両方を、公開さ
れた血液型亜型Ｄの配列ｈｔｒＡと比較）に基づくと、ストレス誘導性プロテア
ーゼであると考えられる。７名の患者が、このタンパク質に対する反応性を示し
た。このことは、このタンパク質がクラミジア感染の結果としてヒトにおいて免
疫原性であることを実証する。

【００６６】（スポット８）９名の患者が、タンパク質スポット８に対する反応性を示した。このタンパク
質スポットを、Ｎ末端配列決定によって特徴づけることができなかった。しかし
、このタンパク質スポットは、確かに以下の「配列型（ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｉ
ｏｎｔｙｐｅ）２」アミノ酸組成（モル％）を有する：

【００６７】

【数１】ＣｙｓおよびＴｒｐは、この型の分析では決定されず、そしてＧｌｕ／Ｇｌｎと
Ａｓｐ／Ａｓｎとを区別することができない。

【００６８】繰り返して試みられたにも拘わらず、Ｎ末端配列を得ることができないことは
、そのＮ末端残基が、いくつかの形態の修飾（例えば、リポタンパク質）に起因
してブロックされていることを示唆する。修飾は、しばしば、真核生物における
膜結合型タンパク質に特徴的であるが、細菌種における外表面タンパク質または
分泌型タンパク質に特徴的でもある（例えば、リポタンパク質［２４］マイコプ
ラズマ外膜タンパク質［２５］、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓのＦＨＡビルレンス因
子［２６］など）。

【００６９】（スポット１２）このスポットは、リボソームタンパク質Ｌ７／Ｌ１２に起因すると考えられる
。７名の患者が、このタンパク質に対する反応性を示した。このことは、このタ
ンパク質がクラミジア感染の結果としてヒトにおいて免疫原性であることを実証
する。このタンパク質は、クラミジアにおいて以前に記載されたが［登録番号Ｐ
３８００１］、クラミジア免疫原であると報告されたことは一度もなかった。し
かし、Ｂｒｕｃｅｌｌａ感染における免疫原として記載された［２７、２８］。

【００７０】（スポット１９）このスポットは、リボソームタンパク質Ｓ１に起因にすると考えられる。５名
の患者が、このタンパク質に対する反応性を示した。このことは、このタンパク
質がクラミジア感染の結果としてヒトにおいて免疫原性であることを実証する。
このタンパク質は、クラミジアにおいて以前に記載されたが［登録番号Ｐ３８０
１６］、免疫原であると報告されたことは一度もなかった。

【００７１】（スポット１０）このスポットは、タンパク質合成伸長因子ＥＦ−Ｔｕに起因すると考えられる
。８名の患者が、このタンパク質に対する反応性を示した。このことは、このタ
ンパク質がクラミジア感染の結果としてヒトにおいて免疫原性であることを実証
する。クラミジアＥＦ−Ｔｕは、以前に記載されたが［登録番号Ｐ２６６２２］
、免疫原であると報告されたことは一度もなかった。

【００７２】（スポット１０、１２、１５、１９および２４）慢性感染において、免疫病理反応を誘発し得る保存された微生物抗原に対する
、あり得る以前の感作の重要性を仮定すると、これらの新たな免疫反応性抗原の
うちのいくつかが、細菌タンパク質の保存されたファミリーに属することは注目
すべきである：４つの血清（２３％）がスポット２４（ＲＮＡポリメラーゼのα
サブユニット）と反応した；５つ（２９％）がスポット１９（リボソームタンパ
ク質Ｓ１）を認識した；８つ（４７％）がスポット１０（ＥＦ−Ｔｕ）を認識し
た；７つ（４１％）がスポット１５（ＨｔｒＡ（Ｓ２Ｃペプチダーゼ）ファミリ
ーの推定ストレス誘導性プロテアーゼ）を認識した；そして７つの血清（４１％
）がスポット１２（リボソームタンパク質Ｌ７／Ｌ１２）を認識した。この研究
において使用した血清の群において、１２／１７（７６％）がこれらの５つの抗
原（ｈｓｐ６０抗原およびｈｓｐ７０抗原を含む）と反応し、そして全ての血清
が１と７との間（平均３．７個）のクラミジアタンパク質（他の細菌においてホ
モログを有する）と反応する抗体を有した。

【００７３】クラミジア病理における免疫学的感作機構に関する役割を仮定する理論は、ｈ
ｓｐ６０ＧｒｏＥＬ様抗原に関して記載される［２９］ように、実際には、他
のいくつかの共通する細菌抗原（この細菌抗原は、他の細菌感染に置いて免疫原
性であり得る）に拡張されるべきである。例えば、タンパク質伸長因子ＥＦ−Ｔ
ｕは、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅの感染の急性期の間に免
疫原性であり、そしてＬ７／Ｌ１２およびＨｔｒＡストレス誘導性プロテアーゼ
ホモログの両方がＢｒｕｃｅｌｌａ感染において免疫原性である。ＥＦ−Ｔｕの
場合において、細菌細胞におけるこのタンパク質の豊富さは、免疫系によるその
「注目度（ｖｉｓｉｂｉｌｉｔｙ）」に好都合であり得る。しかし、ＥＦ−Ｔｕ
が外膜およびペリプラズム細胞画分に関連すると記載され［３０］、そしてより
最近では、データにより、ペプチド伸長におけるその機能に加えて、ＥＦ−Ｔｕ
がタンパク質折り畳みに関与するシャペロン活性およびストレスからの防御もま
た有することが示唆される［３１］ことに注意すべきである。Ｌ７／Ｌ１２リボ
ソームタンパク質に対する応答は特に興味を引く。なぜなら、Ｂｒｕｃｅｌｌａ
ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ感染において、相同なＬ７／Ｌ１２抗原は、ＤＴＨ細胞
媒介応答を誘導する［２７］からである。さらに、ＢＡＬＢ／ＣマウスにＬ７／
Ｌ１２を用いてワクチン接種することは、Ｂ．ａｂｏｒｔｕｓによる感染に対す
る防御を与えることが示された［３２］。Ｌ７／Ｌ１２に対する抗体がＣ．ｔｒ
ａｃｈｏｍａｔｉｓに感染した患者においてかなり頻繁に存在するというこの予
測外の知見は、おそらく、クラミジア誘導性疾患においてもまた、この抗原に対
してさらなる注意が払われるべきであることを示唆する。

【００７４】（スポット５、６、７および９）これらのタンパク質は、利用可能なゲノム配列といまだ全く相関付けられてお
らず、そして未だ配列決定されてもいないが、試験された血清におけるそれらの
保有率（ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ）（＞５０％）を考慮すると、明らかに興味深い
。

【００７５】本発明は、上記で例示としてのみ記載されるにすぎず、そして本発明の範囲お
よび趣旨内にとどまりつつ、改変が行われ得ることは理解される。

【００７６】（表Ｉ）患者血清の要旨第１欄における文字は、表ＩＩに示される文字と対応する。第２欄におけるコ
ードは、起源血清コレクションをいう。それぞれの患者に関する病理学は、子宮
頚管炎（下部生殖器感染）、ＰＩＤまたは不妊（感染の次の）として広範に示さ
れる。全ての血清を、精製Ｌ２基本小体を用いるＭＩＦアッセイによって特徴付
けた。表中に示されるＭＩＦ力価は、最大で２倍希釈であり、これは、陽性シグ
ナルを示した。「最適希釈」は、弱いスポットでのシグナルの喪失なしに最低限
のバックグラウンドを与えることが見出された希釈である。

【００７７】

【表１】（表ＩＩ）タンパク質スポットとの患者の反応性

【００７８】

【表２】（表ＩＩＩ）タンパク質のＮ末端配列

【００７９】

【表３】（表ＩＶ）抗原の同定「ＣＴ−Ｄ遺伝子」は、参考文献２から命名される遺伝子をいい、Ｃ．ｔｒａ
ｃｈｏｍａｔｉｓＤ中のホモログタンパク質をコードするような遺伝子の名称
を与える。最後の欄における理論的なｐＩ／ＭＷ値を、実験値と比較して、ＣＴ
−Ｄ遺伝子配列から計算した。

【００８０】

【表４】（参考文献）（本明細書中にその全体を援用されるものの内容）

【００８１】

【化１】

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、注釈付き参照２Ｄ電気泳動ＥＢマップを示し、免疫反応性タンパク質
スポット（標識された１〜５５）の位置もまた示す。同じタンパク質の一連の等
電点として現れるスポットの群を、一緒に囲み、そして同じ識別番号に分類した
。

【図２Ａ】図２は、典型的な免疫ブロットを示す。全マップ領域を示す。より簡単な比較
のために、主要な公知の免疫原は、印を付けている。他のスポットの同定に関し
ては、図１および表ＩＩを参照する。ブロットＡは、ＰＩＤ患者ＪＯ５１（ＭＩ
Ｆ力価２５６）由来でありかつ血清希釈は、１：５０００を有する。ブロットＢ
は、続発性不妊症によって影響された患者ＪＯ３５（ＭＩＦ力価６４）由来であ
りかつ血清希釈１：２５００を有する。ブロットＣは、ブロットＢに類似するが
、患者ＪＯ５２に由来する。ブロットＤは、ＰＩＤ患者ＪＯ３１（ＭＩＦ力価２
５６）由来でありかつ血清希釈１：５０００を有する。

【図２Ｂ】図２は、典型的な免疫ブロットを示す。全マップ領域を示す。より簡単な比較
のために、主要な公知の免疫原は、印を付けている。他のスポットの同定に関し
ては、図１および表ＩＩを参照する。ブロットＡは、ＰＩＤ患者ＪＯ５１（ＭＩ
Ｆ力価２５６）由来でありかつ血清希釈は、１：５０００を有する。ブロットＢ
は、続発性不妊症によって影響された患者ＪＯ３５（ＭＩＦ力価６４）由来であ
りかつ血清希釈１：２５００を有する。ブロットＣは、ブロットＢに類似するが
、患者ＪＯ５２に由来する。ブロットＤは、ＰＩＤ患者ＪＯ３１（ＭＩＦ力価２
５６）由来でありかつ血清希釈１：５０００を有する。

【図２Ｃ】図２は、典型的な免疫ブロットを示す。全マップ領域を示す。より簡単な比較
のために、主要な公知の免疫原は、印を付けている。他のスポットの同定に関し
ては、図１および表ＩＩを参照する。ブロットＡは、ＰＩＤ患者ＪＯ５１（ＭＩ
Ｆ力価２５６）由来でありかつ血清希釈は、１：５０００を有する。ブロットＢ
は、続発性不妊症によって影響された患者ＪＯ３５（ＭＩＦ力価６４）由来であ
りかつ血清希釈１：２５００を有する。ブロットＣは、ブロットＢに類似するが
、患者ＪＯ５２に由来する。ブロットＤは、ＰＩＤ患者ＪＯ３１（ＭＩＦ力価２
５６）由来でありかつ血清希釈１：５０００を有する。

【図２Ｄ】図２は、典型的な免疫ブロットを示す。全マップ領域を示す。より簡単な比較
のために、主要な公知の免疫原は、印を付けている。他のスポットの同定に関し
ては、図１および表ＩＩを参照する。ブロットＡは、ＰＩＤ患者ＪＯ５１（ＭＩ
Ｆ力価２５６）由来でありかつ血清希釈は、１：５０００を有する。ブロットＢ
は、続発性不妊症によって影響された患者ＪＯ３５（ＭＩＦ力価６４）由来であ
りかつ血清希釈１：２５００を有する。ブロットＣは、ブロットＢに類似するが
、患者ＪＯ５２に由来する。ブロットＤは、ＰＩＤ患者ＪＯ３１（ＭＩＦ力価２
５６）由来でありかつ血清希釈１：５０００を有する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 31/10 Ｃ０７Ｋ 16/12 ４Ｃ０８５Ｃ０７Ｋ 14/295 ＺＮＡＣ１２Ｐ 19/34 Ａ４Ｈ０４５ 16/12 21/02 ＣＣ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｐ 19/34 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ 21/02 5/00 ＡＣ１２Ｑ 1/68 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 AA13 BA41 BA50 BA58 CA04 CA09 DA02 4B063 QA01 QA19 QQ02 QQ03 QQ06 QQ79 QQ96 QR02 QR08 QR14 QR31 QR33 QR42 QR58 QX02 4B064 AF27 AG01 AG27 CA10 CA19 CC24 DA13 DA15 4B065 AA01X AA01Y AA90X AB06 CA23 CA24 CA25 CA44 CA46 4C084 AA02 AA03 AA07 AA13 BA02 NA14 ZB352 4C085 AA13 AA14 BB11 4H045 AA10 AA11 BA09 BA10 BA54 CA11 DA86 EA29 EA52 FA72

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】１５頁の表ＩＩに記載のようなタンパク質５、６、７、８、
９、１１、１３、１４、１５、１６、１７、１８、２０、２１、２２、２３、２
４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３
６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４
８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、または５５の分子量特性およびｐＩ
特性を有する、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓタンパク質。
【請求項２】Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓのＬ２株において、１６頁の表
ＩＩＩに開示されるＮ末端アミノ酸配列を有する、請求項１に記載のタンパク質
。
【請求項３】請求項１に記載のタンパク質に５０％以上の配列同一性を有
する、タンパク質。
【請求項４】請求項１に記載のＣ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓタンパク質の
少なくとも７つの連続するアミノ酸のフラグメントを含む、タンパク質。
【請求項５】請求項１から４のいずれか一項に記載のタンパク質に結合す
る、抗体。
【請求項６】請求項１〜４のいずれか一項に記載のタンパク質をコードす
る、核酸。
【請求項７】請求項６の核酸に５０％以上の配列同一性を有する、核酸。
【請求項８】請求項６に記載の核酸にハイブリダイズし得る、核酸。
【請求項９】請求項６に記載の核酸の１０以上連続するヌクレオチドのフ
ラグメントを含む、核酸。
【請求項１０】請求項６に記載の核酸を含む、ベクター。
【請求項１１】請求項１０に記載のベクターで形質転換された、宿主細胞
。
【請求項１２】請求項１から４のいずれか一項に記載のタンパク質、請求
項５に記載の抗体、および／または請求項６から９のいずれか一項に記載の核酸
を含む、組成物。
【請求項１３】医薬として、または診断試薬として用いるための、請求項
１から４のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項５に記載の抗体、および／
または請求項６から９のいずれか一項に記載の核酸。
【請求項１４】クラミジアの免疫原として用いるための（１５頁の表ＩＩ
に記載のような）タンパク質５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１
４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２
６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３
８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５
０、５１、５２、５３、５４、または５５の分子量特性およびｐＩ特性を有する
、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓタンパク質。
【請求項１５】Ｃｈｌａｍｙｄｉａによる感染の処置または予防のための
医薬の製造における、請求項１から４のいずれか一項に記載のタンパク質、請求
項５に記載の抗体、および／または請求項６から９のいずれか一項に記載の核酸
の、使用。
【請求項１６】Ｃｈｌａｍｙｄｉａの存在の検出のための診断試薬、また
はＣｈｌａｍｙｄｉａに対して惹起される抗体の製造における、請求項１から４
のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項５に記載の抗体、および／または請
求項６から９のいずれか一項に記載の核酸の、使用。
【請求項１７】Ｃｈｌａｍｙｄｉａに対する抗体を惹起し得る試薬の製造
における、請求項１から４のいずれか一項に記載のタンパク質、請求項５に記載
の抗体、および／または請求項６から９のいずれか一項に記載の核酸の、使用。
【請求項１８】請求項１から４のいずれか一項に記載のタンパク質、請求
項５に記載の抗体、および／または請求項６から９のいずれか一項に記載の核酸
の、治療的有効量を患者に投与する工程を包含する、患者を処置する方法。
【請求項１９】タンパク質の発現を誘導する条件下で、請求項１１に記載
の宿主細胞を培養する工程を包含する、請求項１から４のいずれか一項に記載の
タンパク質を産生するためのプロセス。
【請求項２０】請求項１から４のいずれか一項に記載のタンパク質または
請求項６から９のいずれか一項に記載の核酸を産生するためのプロセスであって
、該タンパク質または該核酸が、一部または全体において化学的手段を用いて合
成される、プロセス。
【請求項２１】請求項６から９のいずれか一項に記載の核酸を検出するた
めプロセスであって、以下の工程：（ａ）ハイブリダイズする条件下で、核酸プ
ローブを生物学的サンプルに接触させて二重鎖を形成する工程；および（ｂ）該
二重鎖を検出する工程、を包含する、プロセス。
【請求項２２】請求項１から４のいずれか一項に記載のタンパク質を検出
するためのプロセスであって、該プロセスは、以下の工程：（ａ）抗体−抗原複
合体の形成のために適切な条件下で、請求項５に記載の抗体を生物学的サンプル
に接触させる工程；および（ｂ）該複合体を検出する工程、を包含する、プロセ
ス。
【請求項２３】請求項５に記載の抗体を検出するためのプロセスであって
、該プロセスは、以下の工程：（ａ）抗体−抗原複合体の形成のために適切な条
件下で、請求項１から４のいずれか一項に記載のタンパク質を生物学的サンプル
に接触させる工程；および（ｂ）該複合体を検出する工程、を包含する、プロセ
ス。
【請求項２４】請求項２１から２３のいずれか一項に記載のプロセスにお
ける使用のために適切な試薬を含む、キット。