JP2009511636A - アルファウイルスレプリコン粒子による粘膜免疫および全身免疫 - Google Patents

アルファウイルスレプリコン粒子による粘膜免疫および全身免疫 Download PDF

Info

Publication number
JP2009511636A
JP2009511636A JP2008536763A JP2008536763A JP2009511636A JP 2009511636 A JP2009511636 A JP 2009511636A JP 2008536763 A JP2008536763 A JP 2008536763A JP 2008536763 A JP2008536763 A JP 2008536763A JP 2009511636 A JP2009511636 A JP 2009511636A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
antigens
antigen
virus
immunogenic composition
replicon particles
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2008536763A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2009511636A5 (ja
Inventor
マイケル バジディ，
Original Assignee
ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス， インコーポレイテッド
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス， インコーポレイテッド filed Critical ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス， インコーポレイテッド
Publication of JP2009511636A publication Critical patent/JP2009511636A/ja
Publication of JP2009511636A5 publication Critical patent/JP2009511636A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5258—Virus-like particles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/543—Mucosal route intranasal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/5555—Muramyl dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
    • C12N2740/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/36011—Togaviridae
    • C12N2770/36111—Alphavirus, e.g. Sindbis virus, VEE, EEE, WEE, Semliki
    • C12N2770/36141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2770/36143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/36011—Togaviridae
    • C12N2770/36111—Alphavirus, e.g. Sindbis virus, VEE, EEE, WEE, Semliki
    • C12N2770/36171—Demonstrated in vivo effect

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

被験体において免疫応答を誘導するためのアルファウイルスレプリコン粒子を含む組成物の粘膜および全身投与が記載される。また、本発明は、１以上の病原体（例えば、細菌、ウイルス、腫瘍など）に対する哺乳動物における免疫応答を誘導するかまたは発生させるための方法を提供する。本発明の一局面では、この方法は、（ｉ）第１ウイルスレプリコン粒子を含む第１組成物を哺乳動物の粘膜に投与すること、および（ｉｉ）第２ウイルスレプリコン粒子を含む第２組成物を哺乳動物の全身に投与することを、いずれかの順番で含む。ウイルスレプリコン粒子は、対象とする１以上（少なくとも１つ）の抗原（標的抗原）をコードする。

Description

（関連出願）
この出願は、２００５年１０月１８日に出願された米国仮出願第６０／７２７，７３１号（この教示は、その全体が、参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
（政府支援）
本発明は、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）からＲ２１承認１ Ｒ２１ ＡＩ５０４３０−０１およびＩＰＣＡＶＤ承認１ Ｕ１９ ＡＩ５１５９６によって、全体的または部分的に支援された。政府は、本発明において特定の権利を有する。
（技術分野）
本発明は、概して、粘膜および／または全身免疫技術を用いた免疫応答を調節するかまたは発生させる方法に関する。特に、本発明は、アルファウイルスレプリコン粒子を被験体に粘膜および／または全身に投与することによって、粘膜および／または全身区分で免疫応答を調節するかまたは発生させる方法に関する。
（発明の背景）
アルファウイルスレプリコンベクターは、現在、感染症を制御するワクチンを開発するためのベクター基盤として用いられている。このようなアルファウイルスレプリコンベクターは、Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅファミリーの遺伝的に、構造的に、および血清学的に近縁の節足動物媒介ウイルスの属を含むエンベロープを持ったポジティブ鎖のＲＮＡウイルスであるアルファウイルスから導き出されている。２６種の知られたウイルスおよびウイルスサブタイプは、アルファウイルス属のプロトタイプメンバーであるセムリキ森林熱ウイルス（Ｓｅｍｌｉｋｉ Ｆｏｒｅｓｔ ｖｉｒｕｓ：ＳＦＶ）、ロスリバーウイルス（Ｒｏｓｓ Ｒｉｖｅｒ ｖｉｒｕｓ：ＲＲＶ）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（Ｖｅｎｅｚｕｅｌａｎ ｅｑｕｉｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ：ＶＥＥ）およびシンドビスウイルス（Ｓｉｎｄｂｉｓ ｖｉｒｕｓ）（ＳＩＮ）を含むアルファウイルス属に分類されている。ワクチン用途のレプリコンベクターに現在構築されているアルファウイルスメンバーには、例えば、セムリキ森林熱ウイルス（Ｌｉｌｊｅｓｔｒｏｍ（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３５６−１３６１；Ｂｅｒｇｌｕｎｄら（１９９８）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１６：５６２−５６５）、ベネズエラウマ脳炎ウイルス（Ｐｕｓｈｋｏら（１９９７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２３９：３８９−４０１）、シンドビスウイルス（Ｘｉｏｎｇら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３：１１８８−１１９１；Ｄｕｂｅｎｓｋｙら（１９９６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：５０８−５１９；Ｈａｒｉｈａｒａｎら（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：９５０−９５８；Ｐｏｌｏら（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６：４５９８−４６０３）、および、例えば、ＶＥＥ由来レプリコンＲＮＡおよびＳＩＮ由来表面糖タンパク質（ＶＥＥ／ＳＩＮ）（Ｐｅｒｒｉら（２００３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７７：１０３９４−１０４０３）を含むそれらの組合せが含まれる。アルファウイルスを基礎としたレプリコンベクターは、ウイルス構造タンパク質遺伝子を欠損しているが、細胞質でのＲＮＡ自己増幅、およびアルファウイルスＲＮＡプロモータを介した挿入された異種遺伝子の発現に必要な複製エレメントを維持している。構造タンパク質遺伝子が存在しないことは、レプリコンが完全に欠陥であり、感染性ウイルスを産生することができないことを裏付けている。
アルファウイルスおよび他のレプリコンベクターに対する輸送戦略は、主に、ＲＮＡベクターを複製欠陥のウイルス様粒子にパッケージングすること、したがって、ウイルス感染に類似している、天然の受容体媒介の侵入過程を十分に引き出すことに焦点が絞られている。ＲＮＡベクターを囲っているレプリコン粒子は、パッケージングのために用いられる構造被覆タンパク質の親ウイルス供給源に基づく特定のインビボの細胞型に対する向性も示し、したがって、粘膜輸送および樹枝状細胞のインビボ標的化などの所望の特性を十分に引き出すことができる。アルファウイルスレプリコンベクターは、パッケージングに必要なウイルス構造タンパク質をコードしていないため、レプリコン粒子の産生は、トランスで、適した培養細胞中で構造タンパク質を産生することによって達成される。典型的には、アルファウイルス構造タンパク質の必須の相補体は、インビトロで転写されたレプリコンと構造タンパク質をコードするヘルパーＲＮＡの一時的な同時形質転換によるか、または１以上のＤＮＡ発現カセットからの構造タンパク質を発現するパッケージング細部株（ＰＣＬ）へのレプリコンの導入によって提供される。このようなレプリコン粒子の産生は、構造タンパク質に対する遺伝情報が存在しないままであるため、ベクターの複製欠陥性を保存する。
ＲＮＡワクチンに対するアルファウイルスレプリコン粒子戦略は、種々の動物モデルにおいて、多くの様々な抗原を用いて評価されている。アルファウイルスレプリコン粒子は、免疫後の細胞性、体液性および粘膜性免疫応答を誘導することが示されている。例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗原を発現しているアルファウイルスレプリコン粒子の粘膜投与は、ＨＩＶ抗原に対する免疫応答を誘導することが知られている（非特許文献１；非特許文献２）。呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ：ＲＳＶ）抗原を発現しているアルファウイルス粒子による全身または粘膜免疫は、ＲＳＶ抗原に対する免疫応答を誘導することも示されている。
Ｖａｊｄｙら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．（２００１）１８４：１６１３−１６１６ Ｇｕｐｔａら、Ｊ．Ｖｉｒｉｏｌ．（２００５）７９：７１３５−７１４５
これらの結果にもかかわらず、病原体に対する改善された免疫応答を得て、感染症を制御するためのワクチンの開発、およびそのためのワクチン化戦略の必要性が残されている。現在、ほとんどまたは全く効果のないワクチンおよび／または処置が施されている様々な病原体または癌に対する、哺乳動物における免疫応答を引き出し、誘導し、刺激し、増強しまたはブースト（ｂｏｏｓｔ）するためのワクチンの開発およびワクチン戦略の必要性が残されている。
（発明の概要）
本発明は、１以上の病原体（例えば、細菌、ウイルス、腫瘍など）に対する哺乳動物における免疫応答を誘導するかまたは発生させるための方法を提供する。本発明は、少なくとも１つの抗原に対する哺乳動物における免疫応答を誘導するかまたは発生させるための方法を提供する。本発明の一局面では、前記方法は、（ｉ）第１ウイルスレプリコン粒子を含む第１組成物を哺乳動物の粘膜に投与すること、および（ｉｉ）第２ウイルスレプリコン粒子を含む第２組成物を哺乳動物の全身に投与することを、いずれかの順番で含む。ウイルスレプリコン粒子は、対象とする１以上（少なくとも１つ）の抗原（標的抗原）をコードする。ウイルスレプリコン粒子には、アルファウイルスレプリコン粒子、アデノウイルスレプリコン粒子およびポックスウイルスレプリコン粒子が含まれる。特定の態様では、前記方法は、（ｉ）第１アルファウイルスレプリコン粒子を含む第１組成物を哺乳動物の粘膜に投与すること、および（ｉｉ）第２アルファウイルスレプリコン粒子を含む第２組成物を哺乳動物の全身に投与することを、いずれかの順番で含む。第１および第２ウイルスレプリコン粒子は、少なくとも１つの標的抗原を発現することができる。特定の態様では、第１および第２ウイルスレプリコン粒子は、同じ標的抗原または複数の抗原を発現することができる。別の態様では、第１および第２ウイルスレプリコン粒子は、少なくとも１つの異なる標的抗原を発現することができる。
本発明の別の局面では、前記方法は、（ｉ）アルファウイルスレプリコン粒子を含む第１組成物を哺乳動物の粘膜に投与すること、および（ｉｉ）非アルファウイルスレプリコン粒子を含む第２組成物を哺乳動物の全身に投与することを、いずれかの順番で含む。本発明の第３局面では、前記方法は、（ｉ）非アルファウイルスレプリコン粒子を含む第１組成物を哺乳動物の粘膜に投与すること、および（ｉｉ）アルファウイルスレプリコン粒子を含む第２組成物を哺乳動物の全身に投与することを、いずれかの順番で含む。前述の通り、これらの方法の各々において、ウイルスレプリコン粒子は、１以上（少なくとも１つ）の標的抗原をコードする。
本発明の第４局面では、前記方法は、（ｉ）第１ウイルスレプリコン粒子を含む有効量のプライミング組成物を粘膜投与経路を通じて哺乳動物に投与すること、および（ｉｉ）その後、第２ウイルスレプリコン粒子を含む有効量のブースティング組成物を全身投与経路を通じて哺乳動物に投与することを含む。本発明の別の局面では、前記方法は、（ｉ）第１ウイルスレプリコン粒子を含む有効量のプライミング組成物を全身投与経路を通じて哺乳動物に投与すること、および（ｉｉ）その後、第２ウイルスレプリコン粒子を含む有効量のブースティング組成物を粘膜投与経路を通じて哺乳動物に投与することを含む。ウイルスレプリコン粒子は、対象とする１以上（少なくとも１つ）の抗原（標的抗原）をコードする。第１および第２ウイルスレプリコン粒子は、同一であるかまたは異なったウイルスレプリコン粒子であり得る。特定の態様では、第１および第２ウイルスレプリコン粒子は、アルファウイルスレプリコン粒子である。第１および第２ウイルスレプリコン粒子は、少なくとも１つの標的抗原を発現することができる。特定の態様では、第１および第２ウイルスレプリコン粒子は、同じ標的抗原または複数の抗原を発現することができる。別の態様では、第１および第２ウイルスレプリコン粒子は、少なくとも１つの異なった標的抗原を発現することができる。
本発明の特定の局面では、哺乳動物の被験体において免疫応答を誘導するかまたは発生させる方法は、（ａ）１以上のウイルスレプリコンベクターまたは粒子を含む第１免疫原性組成物を粘膜投与経路を通じて該被験体に投与すること、該ベクターまたはは粒子は少なくとも１つの抗原を含む；および（ｂ）１以上のウイルスレプリコンベクターまたは粒子を含む第２免疫原性組成物を全身投与経路を通じて該被験体に投与すること、該ベクターまたは粒子は少なくとも１つの抗原を含む、を含み、それによって、該被験体における免疫応答を誘導するかまたは発生させる。別の局面では、哺乳動物の被験体における免疫応答を誘導するかまたは発生させる方法は、（ａ）１以上のウイルスレプリコンベクターまたは粒子を含む第１免疫原性組成物を全身投与経路を通じて該被験体に投与すること、該ベクターまたは粒子は少なくとも１つの抗原を含む；および（ｂ）１以上のウイルスレプリコンベクターまたは粒子を含む第２免疫原性組成物を粘膜投与経路を通じて該被験体に投与すること、該ベクターまたは粒子は少なくとも１つの抗原を含む、を含み、それによって、該被験体における免疫応答を誘導する。ウイルスレプリコンベクターおよび粒子は、１以上（少なくとも１つ）の標的抗原をコードする。第１および第２免疫原性組成物は、同一であるかまたは異なったウイルスレプリコンベクターまたは粒子を含むことができる。特定の態様では、第１および第２免疫原性組成物は、アルファウイルスレプリコンベクターまたは粒子であるウイルスレプリコンベクターまたは粒子を含む。一態様では、第１および第２免疫原性組成物のウイルスレプリコンベクターは、同一の標的抗原または複数の抗原を発現することができる。別の態様では、第１および第２免疫原性組成物のウイルスレプリコン粒子は、少なくとも１つの異なった標的抗原を発現することができる。
ある種の態様では、本明細書に記載されているウイルスレプリコン粒子および免疫原性組成物を投与して、哺乳動物の被験体をプライム（ｐｒｉｍｅ）する。プライミングは、本明細書中で使用するとき、少なくとも１つの同一の抗原または複数の抗原を含む、本明細書に記載されているウイルスレプリコン粒子または免疫原性組成物を用いた第２免疫に際して、本明細書に記載されているウイルスレプリコン粒子または免疫原性組成物を用いた第１免疫が標的抗原または複数の抗原に対する免疫応答の発生を可能にするいずれかの方法を意味し、ここで、第２免疫応答は、第１免疫が与えられない場合、または投与される第１免疫が抗原もしくは複数の抗原を発現しないベクターまたは粒子を含む場合に達成される免疫応答よりも大きい。プライミングには、時間ごと、日ごと、週ごと、月ごとまたは年ごとに、１回の服用または複数回の服用を含む処方計画が含まれる。特定の態様では、プライミング（またはプライミング免疫）には、少なくとも２つの投与（１以上の服用または複数の服用を含む）が含まれる。例えば、特定の態様では、粘膜投与経路を介した、本明細書に記載されている１以上のウイルスレプリコン粒子または免疫原性組成物の投与によるプライミングは、ウイルスレプリコン粒子（単数もしくは複数）または免疫原性組成物（単数もしくは複数）の少なくとも２回（例えば、２、３、４、５、６、７回以上）の粘膜投与（１以上の服用または複数の服用）を必要とする。同様に、全身投与経路を介した、本明細書に記載されている１以上のウイルスレプリコン粒子または免疫原性組成物の投与によるプライミングは、ウイルスレプリコン粒子（単数もしくは複数）または免疫原性組成物（単数もしくは複数）の少なくとも２回（例えば、２、３、４、５、６、７回以上）の全身投与（１以上の服用または複数の服用）を必要とする。粘膜投与と全身投与との間の時間間隔は、時間、日、週、月または年であり得る。さらに、ある種の態様では、反復工程は、同一であるかもしくは異なったウイルスレプリコン粒子または免疫原性組成物を用いて実行することができる。
他の態様では、本明細書に記載されているウイルスレプリコン粒子および免疫原性組成物は、ブースターとして投与され、哺乳動物の被験体のプライミング後に達成される免疫応答をブーストする。ブースターとして投与されるウイルスレプリコン粒子または免疫原性組成物には、プライミング工程によって投与される少なくとも１つの同一抗原が含まれる。特定の態様では、ブースティング（またはブースティング免疫）は、プライミング（またはプライミング免疫）後、約２週から２７週である。ブースティングは、１回の服用または複数回の服用を含み、時間ごと、日ごと、週ごと、月ごとまたは年ごとに投与される処方計画を含む。ある種の態様では、ブースティング（またはブースティング免疫）は、少なくとも１回の投与を含む。他の態様では、ブースティング（またはブースティング免疫）は、少なくとも２回の投与を含む（１以上の服用または複数回の服用を含む）。例えば、このような場合、特定の態様では、粘膜投与経路を介した、本明細書に記載されている１以上のウイルスレプリコン粒子または免疫原性組成物の投与によるブースティングは、ウイルスレプリコン粒子（単数もしくは複数）または免疫原性組成物（単数もしくは複数）の少なくとも２回（例えば、２、３、４、５、６、７回以上）の粘膜投与（１以上の服用又は複数回の服用を含む）を必要とする。同様に、このような場合、全身投与経路を介した、本明細書に記載されている１以上のウイルスレプリコン粒子または免疫原性組成物の投与によるブースティングは、ウイルスレプリコン粒子（単数もしくは複数）または免疫原性組成物（単数もしくは複数）の少なくとも２回（例えば、２、３、４、５、６、７回以上）の全身投与（１以上の投薬又は複数回の投薬を含む）を必要とする。粘膜投与と全身投与との間の時間間隔は、時間、日、週、月または年であり得る。さらに、ある種の態様では、反復工程は、同一であるかもしくは異なったウイルスレプリコン粒子または免疫原性組成物を用いて実行することができる。
本発明の他の局面では、ウイルスレプリコン粒子は、第１シリーズ（１以上の服用または複数回の服用を含む）の粘膜および／または全身免疫（プライミング免疫）、続く第２シリーズ（１以上の服用または複数回の服用を含む）のＤＮＡを基礎とした細菌またはウイルス輸送システムまたはタンパク質を基礎としたワクチンによる免疫（ブースティング免疫）のために用いることができる。別の局面では、ＤＮＡを基礎とした細菌もしくはウイルス輸送システムまたはタンパク質を基礎としたワクチンは、第１シリーズ（１以上の服用または複数回の服用を含む）の免疫（プライミング免疫）、続く第２シリーズ（１以上の服用または複数回の服用を含む）のウイルスレプリコン粒子を用いた免疫（ブースティング免疫）のために用いることができる。前記レプリコン粒子、またはＤＮＡを基礎とした、細菌もしくはウイルスを基礎とした、またはタンパク質を基礎としたワクチンを用いたプライミングまたはブースティング免疫は、粘膜もしくは全身、または同時の免疫および全身投与経路を介することができる。このようにして、これらの粘膜／全身プライム−全身／粘膜ブースト法を用いて、幅広い種々の抗原に対する免疫応答を誘導するかまたは発生させることができる。
粘膜投与は、例えば、経口、鼻内、胃内、肺内、腸内、直腸内、眼内および膣内投与であり得る。鼻内または経口投与が好ましい。全身投与は、例えば、筋内であり得る。本明細書に記載されている粘膜および／または全身に投与される組成物は、さらに、アジュバントおよび／輸送ビヒクルなどの１以上の追加の試薬を含むことができる。
本発明での使用に適した抗原は、細菌もしくはウイルスなどの病原体、または腫瘍由来であり得る。本発明での使用に適した細菌抗原には、例えば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、サブグループＡ、ＢおよびまたはＣ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよび／またはＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ由来の抗原が含まれる。本発明での使用に適したウイルス抗原には、例えば、Ａ型肝炎ウイルス（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ａ ｖｉｒｕｓ：ＨＡＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ：ＨＩＶ）、呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ：ＲＳＶ）、パラインフルエンザウイルス（ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ：ＰＩＶ）、インフルエンザ、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、単純疱疹ウイルス（ｈｅｒｐｅｓｕ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ：ＨＳＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）および／またはヒトパピローマウイルス（ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａ ｖｉｒｕｓ：ＨＰＶ）由来の抗原が含まれる。
本明細書に記載されている方法において、免疫応答は、体液性および／または細胞性免疫応答、全身免疫応答（例えば、ＩｇＧまたはサイトカイン産生）、粘膜免疫応答（例えば、ＩｇＡまたはサイトカイン産生）、あるいは全身および粘膜応答の組合せであり得る。
本明細書に記載されている方法において、粘膜および全身に投与されるウイルスベクターおよび粒子には、同一の病原体（例えば、細菌、ウイルスおよび／または腫瘍）由来の抗原をコードする配列が含まれ得る。ある種の態様では、同一のウイルスベクターまたは粒子は、粘膜および全身に投与される。他の態様では、異なったアルファウイルス粒子（例えば、同一抗原由来の異なった抗原、異なった形態の抗原、異なった病原体由来の抗原および／または異なったアルファウイルスを有することによる）は、粘膜および全身に投与される。
本明細書に記載されている方法において、免疫原性組成物は、さらに、１以上のポリペプチド抗原および／または１以上の抗原をコードする１以上のポリヌクレオチド（例えば、アルファウイルス、ポックスウイルスおよび／またはアデノウイルスレプリコンおよび／またはベクター）を含んでもよい。これらのポリペプチドおよび／またはポリヌクレオチドは、アルファウイルスレプリコンを含む組成物とは別々に（それより前またはそれより後で）、または同時に投与されてもよい。
本明細書に記載されている方法において、１以上のポリペプチド抗原および／または１以上の抗原をコードする１以上のポリヌクレオチド（例えば、アルファウイルスレプリコン、ポックスウイルスおよび／またはアデノウイルス粒子および／またはベクター）は、アルファウイルスレプリコンリボスイッチを含む組成物の代わりに、またはそれに加えて被験体に（粘膜または全身に）投与されてもよい。
本発明は、哺乳動物における免疫応答を誘導するかまたは発生させるためのキットも提供する。このキットには、（ｉ）第１ウイルスレプリコン粒子を含み、哺乳動物への粘膜投与のために調合される第１組成物、および（ｉｉ）第２ウイルスレプリコン粒子を含み、哺乳動物への全身投与のために調合される第２組成物が含まれ、いずれかの順番で順次投与される。ウイルスレプリコン粒子には、アルファウイルスレプリコン粒子、アデノウイルスレプリコン粒子およびポックスウイルスレプリコン粒子が含まれる。第１および第２ウイルスレプリコン粒子は、同一であるかまたは異なったウイルスレプリコン粒子であり得る。第１および第２組成物は、少なくとも１つの標的抗原を発現することが可能である。特定の態様では、第１および第２組成物は、同一の標的抗原または複数の抗原を発現することができる。別の態様では、第１および第２組成物は、少なくとも１つの異なった標的抗原を発現することができる。前記キットは、第１組成物の、第２組成物の、または第１および第２組成物の両方の１回または複数回の服用量を含むことができる。このようにして、特定の態様では、繰り返し投与を促進するために、キットは、１つまたは両方の組成物用の複数のバイアルを含むことができ、各バイアルには、各投与で被験体に投与すべき服用量が含まれる。キットは、さらに、このキットを使用するための取扱説明書を含むことができる。他の態様では、キットは、粘膜経路を介した哺乳動物に第１組成物を投与するためのアンプル、および／または全身経路を介した哺乳動物に第２組成物を投与するためのアンプルも含むことができる。
したがって、本発明は、限定されないが、下記の番号を付した態様を含む。
１．（ａ）１以上のアルファウイルスレプリコン粒子を含む第１免疫原性組成物を粘膜投与すること、アルファウイルスレプリコンウイルスは抗原をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む；および
（ｂ）１以上のアルファウイルスレプリコン粒子を含む第２免疫原性組成物を粘膜投与すること、アルファウイルスレプリコンウイルスは抗原をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含み、それによって被験体において免疫応答を誘導する
を含む、被験体において免疫応答を発生させる方法。
２．前記粘膜投与が、鼻内、直腸内および膣内からなる群から選択される、前記１に記載の方法。
３．前記全身投与が、筋内である、前記１に記載の方法。
４．工程（ａ）が、少なくとも２回行われる、前記１〜３のいずれか１つに記載の方法。
５．工程（ａ）が、少なくとも３回行われる、前記１〜３のいずれか１つに記載の方法。
６．工程（ｂ）が、少なくとも２回行われる、前記１〜５のいずれか１つに記載の方法。
７．少なくとも１つのアルファウイルスレプリコン粒子が、シンドビス（ＳＩＮ）由来である、前記１〜６のいずれか１つに記載の方法。
８．少なくとも１つのアルファウイルスレプリコン粒子が、ベネズエラウマ脳炎（ＶＥＥ）由来である、前記１〜６のいずれか１つに記載の方法。
９．少なくとも１つのアルファウイルスレプリコン粒子が、セムリキ森林熱ウイルス（ＳＦＶ）由来である、前記１〜６のいずれか１つに記載の方法。
１０．少なくとも１つのアルファウイルスレプリコン粒子が、キメラＶＥＥ／ＳＩＮレプリコン粒子である、前記１〜６のいずれか１つに記載の方法。
１１．少なくとも１つの抗原が、ウイルス抗原である、前記１〜１０のいずれか１つに記載の方法。
１２．前記ウイルス抗原が、ＨＩＶ、ＳＩＶまたはＦＩＶ由来である、前記１１に記載の方法。
１３．前記抗原が、ｇａｇ、ｅｎｖまたはｐｏｌポリペプチド由来である、前記１２に記載の方法。
１４．前記ウイルス抗原が、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）、パラインフルエンザウイルス（ＰＩＶ）およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）から選択されるウイルス由来である、前記１１に記載の方法。
１５．少なくとも１つの抗原が、細菌抗原である、前記１〜１０のいずれか１つに記載の方法。
１６．前記細菌抗原が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ由来である、前記１５に記載の方法。
１７．前記細菌抗原が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、サブグループＢおよびＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、サブグループＣからなる群から誘導される、前記１６に記載の方法。
１８．前記細菌抗原が、Ｓｔｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐｐ由来である、前記１５に記載の方法。
１９．少なくとも１つの抗原が、腫瘍抗原である、前記１〜１０のいずれか１つに記載の方法。
２０．前記第１および第２免疫原性組成物が、同一抗原を含む、前記１〜１９のいずれか１つに記載の方法。
２１．前記第１および第２免疫原性組成物が、異なった抗原を含む、前記１〜２９のいずれか１つに記載の方法。
２２．前記異なった抗原が、同一の病原体由来である、前記２１に記載の方法。
２３．前記異なった抗原が、異なった病原体由来である、請求項２１に記載の方法。
２４．前記第１および／または第２免疫原性組成物が、さらに追加の輸送ビヒクルを含む、前記１〜２３のいずれか１つに記載の方法。
２５．前記輸送ビヒクルが、微小粒子を含む、前記２４に記載の方法。
２６．前記第１および／または第２免疫原性組成物が、さらにアジュバントを含む、前記１〜２５のいずれか１つに記載の方法。
２７．前記第１および／または第２免疫原性組成物が、さらに１以上のポリペプチド抗原を含む、前記１〜２６のいずれか１つに記載の方法。
２８．前記免疫応答が、全身免疫応答である、前記１〜２７のいずれか１つに記載の方法。
２９．前記免疫応答が、粘膜免疫応答である、前記１〜２７のいずれか１つに記載の方法。
３０．前記免疫応答が、全身および粘膜免疫応答である、前記１〜２７のいずれか１つに記載の方法。
３１．工程（ａ）が工程（ｂ）に先行する、前記１〜３０のいずれか１つに記載の方法。
３２．工程（ｂ）が工程（ａ）に先行する、前記１〜３０のいずれか１つに記載の方法。
３３．１以上のポリペプチド抗原、または１以上の抗原をコードする１以上のポリヌクレオチドを被験体に投与することをさらに含む、前記１〜２７のいずれか１つに記載の方法。
３４．前記ポリペプチドが、アルファウイルスレプリコンベクター、ポックスウイルスレプリコンおよび／またはアデノウイルスレプリコンおよび／またはベクター上に担持される、前記３３に記載の方法。
本発明のこれらの局面および他の局面は、下記の詳細な説明および添付した図面を参照することにより明らかとなる。さらに、より詳細に特定の手法または組成物（例えば、アルファウイルスレプリコン粒子など）を説明する様々な参考文献は、下記に記載される。
（発明の詳細な説明）
本発明の実施には、別段の指示がない限り、当該技術分野の技術に含まれる、化学、生化学、分子生物学、免疫学および薬理学の従来の方法が採用される。このような技術は、文献において十分に説明されている。例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．Ｒ．（編集），Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第２０版（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，２０００）；Ｃｏｌｏｗｉｃｋ，Ｓ．およびＫａｐｌａｎ，Ｎ．（編集）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８４）；および、Ｗｅｉｒ，Ｄ．Ｍ．（編集）Ｗｅｉｒ’ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，第５版，（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９６）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第３版（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２００１）；Ｂｉｒｄｉ，Ｋ．Ｓ．（編集），Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｄ Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第２版（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，２００２）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら（編集），Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，第５版（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００２）；Ｒｅａｍ，Ｗ．およびＦｉｅｌｄ，Ｋ．Ｇ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ：Ａｎ Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９９）；Ｎｅｗｔｏｎ，Ｃ．Ｒ．＆Ｇｒａｈａｍ，Ａ．（編集），ＰＣＲ（Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ Ｓｅｒｉｅｓ），第２版（ＢＩＯＳ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９７）；Ｆｉｅｌｄｓ，Ｂ．Ｎ．ら（編集），Ｆｉｅｌｄｓ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第４版（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００１）。
本明細書中に引用されたすべての刊行物、特許および特許出願は、前掲のものも後掲のものも含め、全体として参照により本明細書中に援用される。
本明細書および添付した特許請求の範囲において、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、その内容から別段であることが明確に示されない限り複数形も含む。したがって、例えば、「１つの抗原」に言及することは、２つ以上のこのような抗原の混合物を含む。
本発明を説明する前に、本明細書において以下で使用される特定の用語の定義を記載する。
「ポリヌクレオチド」は、生物学的に活性な（例えば、免疫原性または治療用）タンパク質またはポリペプチドをコードする核酸分子である。このポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドの性質に依存して、ポリヌクレオチドは、例えば該ポリヌクレオチドが抗原をコードする場合、わずか１０個のヌクレオチドを含むことができる。さらに、「ポリヌクレオチド」は、二本鎖および一本鎖配列の両方を含むことができ、限定されないが、ウイルス、原核生物または真核生物のＭＲＮＡ由来のｃＤＮＡ、ウイルス（例えば、ＲＮＡおよびＤＮＡウイルスおよびレトロウイルス）または原核生物のＤＮＡ由来のゲノムＲＮＡおよびＤＮＡ、および、特に合成ＤＮＡ配列を意味する。この用語は、ＤＮＡおよびＲＮＡの既知の塩基類似体のいずれかを含む配列も表わし、天然の配列に対して、欠失、付加および置換などの改変（一般に、事実上保存的である）を含む。これらの改変は、部位特異的突然変異誘発によるなど、意図的なものであってもよく、または抗原を産生する宿主の突然変異など、偶発的なものであってよい。ポリヌクレオチドの改変は、例えば、宿主細胞中でのポリペプチド産物の発現を促進することをを含むいくつもの効果を有してもよい。
用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、アミノ酸残基の高分子を意味し、その産物の最小の長さであるものに限定されない。したがって、ペプチド、オリゴペプチド、二量体、多量体などがこの定義に含まれる。完全長のタンパク質およびそれらの断片の両方がこの定義に含まれる。これらの用語には、ポリペプチドの発現後の修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化なども含まれる。さらに、本発明の目的のために、「ポリペプチド」とは、タンパク質が所望の活性を維持する限り、本来の配列に対して、欠失、付加および置換などの改変（一般に、事実上保存的である）を含むタンパク質を意味する。これらの改変は、部位特異的突然変異誘発によるなど、意図的なものであってもよく、またはそのタンパク質を産生する宿主の突然変異もしくはＰＣＲ増幅によるエラーによるものなど、偶発的なものであってもよい。さらに、下記の効果の１以上を有する改変が行われてもよい：毒性の減少；細胞プロセッシングの促進（例えば、分泌、抗原提示など）；並びにＢ細胞および／またはＴ細胞に対する提示の促進。
「アルファレプリコンベクター」、「ＲＮＡレプリコンベクター」、「レプリコンベクター」または「レプリコン」とは、標的細胞内で、インビボにおいてそれ自身の増幅または自己複製を導くことができる核酸を意味する。例えば、米国特許第６，７６７，６６９号；同第６，４６５，６３４号；同第６，４５８，５６０号；同第６，４５１，５９２号；同第６，４２６，１９６号；同第６，３９１，６３２号；同第６，３７６，２３６号；同第６，３４２，３７２号；同第６，３２９，２０１号；同第６，２４２，２５９号；同第６，１０５，６９４号；同第６，０１５，６８６号；同第５，８４３，７２３号；同第５，８１４，４８２号；および同第５，７８９，２４５号を参照されたい。長年の間、アルファウイルスベクター、アルファウイルスベクター構築物、アルファウイルスレプリコン、アルファウイルスＲＮＡレプリコン、アルファウイルスベクターレプリコン、真核生物層状ベクター開始システム（Ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ Ｌａｙｅｒｅｄ Ｖｅｃｔｏｒ Ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ：ＥＬＶＩＳ）、アルファウイルスプラスミドレプリコンなどを含むいくつかの用語は、アルファウイルスレプリコンベクターを記載するものとして明らかになってきた。
「組換えアルファウイルス粒子」または「レプリコン粒子」とは、アルファウイルスＲＮＡベクターレプリコンを含むビリオン様の構造単位を意味する。一般的に、組換えアルファウイルス粒子には、１以上のアルファウイルスの構造タンパク質、脂質エンベロープおよびＲＮＡベクターレプリコンが含まれる。好ましくは、組換えアルファウイルス粒子は、アルファウイルスによってコードされるエンベロープ糖タンパク質が埋め込まれた、宿主細胞由来の脂質二重層、例えば原形質膜の内部に含まれるヌクレオキャプシド構築物を含む。この粒子は、アルファウイルスによって由来された粒子の向性を導く他の成分（例えば、標的エレメント、他のウイルス構造タンパク質、または他の受容体結合リガンド）も含み得る。アルファウイルスレプリコン粒子は、限定されないが、シンドビス（ＳＩＮ）、ベネズエラウマ脳炎（ＶＥＥ）および／またはセムリキ森林熱ウイルス（ＳＦＶ）を含む１以上のアルファウイルスから作ることができる。例えば、米国特許第６，７７０，２８３号；同第６，３７６，２３６号；同第６，０１５，６９４号；同第６，５３１，１３５号；および同第６，５２１，２３５号を参照されたい。キメラアルファウイルスレプリコン粒子（即ち、１を超えるアルファウイルス由来の配列を有する）は、例えば、米国特許出願公開第２００３／０２３２３２４号および第２００３／０１４８２６２号に記載されている。
「抗原」とは、宿主の免疫系を刺激して、固有の体液性および／または細胞性の抗原特異的反応を起こさせる、１以上のエピトープ（直線状、立体状または両方）を含む分子を意味する。この用語は、用語「免疫原」と同義的に用いられる。通常、１つのエピトープは、約３〜１５個、一般的には約５〜１５個のアミノ酸を含む。１個のＢ細胞エピトープは、通常、約５個のアミノ酸であるが、僅か３〜４個のアミノ酸であってもよい。ＣＴＬエピトープなどのＴ細胞エピトープは、少なくとも約７〜９個のアミノ酸を含み、ヘルパーＴ細胞エピトープは少なくとも約１２〜２０個のアミノ酸を含む。通常、エピトープは、約７〜１５個のアミノ酸、例えば９、１０、１２または１５個のアミノ酸を含む。用語「抗原」は、サブユニット抗原（即ち、天然において抗原が会合している生体全体から分離され、切り離される抗原）、並びに死滅したか、弱毒化されたか、または不活性化された細菌、ウイルス、真菌、寄生生物または他の微生物、並びに細胞表面受容体の細胞外ドメイン、およびＴ細胞エピトープを含み得る細胞内部分を含む腫瘍抗原を意味する。抗イディオタイプ抗体などの抗体、またはその断片、および抗原または抗原決定基を模倣することができる合成ペプチドミモトープも、本明細書中で使用される抗原の定義によれば含まれる。同様に、遺伝子治療およびＤＮＡ免疫化用途などのインビボでの抗原または抗原決定基を発現するオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドも本明細書中の抗原の定義に含まれる。
所定のタンパク質のエピトープは、当該技術分野において周知である、いくつものエピトープマッピング技術を用いて同定することができる。例えば、Ｍｏｒｒｉｓ，Ｇ．Ｅ．（編集），Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ），Ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，１９９６）を参照されたい。例えば、直線状エピトープは、例えば、固体支持体上で、タンパク質分子の一部に対応する多数のペプチドを合成し、同時に、これらのペプチドが支持体になお付着している間に、ペプチドを抗体と反応させることによって決定することができる。このような技術は、当該技術分野において知られており、例えば、米国特許第４，７０８，８７１号；Ｇｅｙｓｅａｙら（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３９９８−４００２；Ｇｅｙｓｅｎら（１９８６）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９−７１５に記載されている。
同様に、立体構造型エピトープは、例えば、ｘ線結晶学および核磁気共鳴によるなど、アミノ酸の空間的立体配置を測定することによって容易に同定される。例えば、上述のＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓを参照されたい。
本発明の目的のために、抗原は、腫瘍、および／またはいくつかの知られているかもしくはまだ特徴付けられていないウイルス、細菌、寄生生物および真菌のいずれに由来することができ、非制限的な実施例は、下記により詳細に記載されている。この用語は、免疫応答が望まれる種々の腫瘍抗原のいずれかまたは任意の他の抗原も意図している。さらに、本発明の目的のために、「抗原」とは、本明細書で定義される通り、タンパク質が免疫学的応答を誘発する能力を維持する限り、天然の配列に対して、欠失、付加および置換などの改変（一般に、事実上保存的である）を含むタンパク質を意味する。これらの改変は、部位特異的突然変異誘発によるなど、意図的なものであってもよく、または抗原を産生する宿主の突然変異によるなど、偶発的なものであってもよい。したがって、抗原（およびこれらの抗原をコードするポリヌクレオチド）は、野生型の生物から自然に誘導することができ、および／または、例えば知られている配列に基づいて、組換えてもしくは合成によって生成することができる。
用語「に由来する」とは、分子（例えば、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、アルファウイルスレプリコン粒子）の供給源を特定するために用いられる。第１ポリヌクレオチドが第２ポリヌクレオチド、そのｃＤＮＡ、その相補体の領域と同一または実質的に同一な塩基対配列を有する場合、あるいは第１ポリヌクレオチドが上記のような配列同一性を示す場合には、第１ポリヌクレオチドは第２ポリヌクレオチド「に由来する」。したがって、ウイルスの配列またはポリヌクレオチドが、（ｉ）ウイルス配列と同一または実質的に同一の配列を有するか、または（ｉｉ）上記のようなそのウイルスのポリペプチドに対して配列同一性を示す場合、そのウイルスの配列またはポリヌクレオチドは、特定のウイルス（例えば、種）「に由来する」。
（ｉ）第１ポリペプチドが第２ポリヌクレオチドに由来する第１ポリヌクレオチドによってコードされているか、または（ｉｉ）上記のような第２ポリペプチドに配列同一性を示す場合、第１ポリペプチドは第２ポリペプチド「に由来する」。したがって、（ｉ）ウイルス抗原がそのウイルスのポリヌクレオチドのオープン・リーディング・フレーム（ウイルスポリヌクレオチド）によってコードされているか、または（ｉｉ）上記のような配列同一性、および／または由来しているポリペプチドに対して抗原機能性を示せば、そのウイルス抗原は、特定のウイルスペプチド「に由来する」。同様に、（ｉ）アルファウイルスレプリコン粒子がそのアルファウイルスのポリヌクレオチドのオープン・リーディング・フレームによってコードされているか、または（ｉｉ）由来したアルファウイルス（単数もしくは複数）に対して、上記のような配列同一性を示す場合、アルファウイルスレプリコン粒子は、１以上のアルファウイルス「に由来する」。
抗原または組成物に対する「免疫学的応答」または「免疫応答」は、被験体において、対象とする組成物に存在する抗原に対する固有の体液性および／または細胞性の免疫応答の発生である。本発明の目的のために、「固有の体液性免疫応答」とは、樹枝状細胞または上皮細胞または内皮細胞などの抗原提示細胞由来のサイトカインまたは複数のサイトカインの誘導を意味する。固有の免疫応答は、樹枝状細胞などの固有の応答の開始に関連する細胞上のトール様受容体または他の細胞受容体に結合するアルファウイルスレプリコン粒子上の全構造または下部構造によって発生させることができる。「体液性免疫応答」とは、分泌性（ＩｇＡ）分子またはＩｇＧ分子を含む抗体分子によって仲介される免疫応答を意味し、「細胞性免疫応答」とは、Ｔリンパ球および／または他の白血球によって仲介される免疫応答である。細胞性免疫の１つの重要な局面は、細胞傷害性Ｔ細胞（「ＣＴＬ」）による抗原特異的反応を含む。ＣＴＬは、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）によってコードされるタンパク質とともに提示され、細胞表面上に発現するペプチド抗原に対して特異性を有する。ＣＴＬは、細胞内の微生物の破壊、またはこのような微生物に感染した細胞の溶解の誘導および促進を助ける。細胞性免疫の別の局面は、ヘルパーＴ細胞による抗原特異的反応を伴う。ヘルパーＴ細胞は、この機能を刺激するのを助けるように作用し、ＭＨＣ分子とともにペプチド抗原をそれら表面上に提示する細胞に対して、非特異的エフェクター細胞の活性を集中させる。「細胞性免疫反応」は、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋のＴ細胞に由来する白血球細胞を含む、活性化Ｔ細胞および／または他の白血球細胞によって産生されるサイトカイン、ケモカインおよび他のこのような分子の産生も意味する。さらに、ケモカイン反応は、投与された抗原に反応して、種々の白血球細胞または内皮細胞によって誘導され得る。
細胞性免疫応答を誘発する組成物またはワクチンは、ＭＨＣ分子とともに抗原を細胞表面に提示させることによって、脊椎動物の被験体を感作する働きをすることができる。細胞を媒介した免疫応答は、それらの表面で抗原を提示する細胞またはその周辺に向けられる。さらに、抗原特異的なＴリンパ球を産生させて、免疫された宿主を将来保護することが可能となる。
細胞を媒介した免疫学的応答を刺激する特定の抗原の能力は、多数のアッセイによって、例えば、リンパ球増殖（リンパ球の増殖）アッセイ、ＣＴＬ細胞傷害性細胞アッセイによるか、または感作された被験体の抗原に特異的なＴリンパ球をアッセイすることによって測定することができる。このようなアッセイは、当該技術分野において周知である。例えば、Ｅｒｉｃｋｓｏｎら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：４１８９−４１９９；Ｄｏｅら（１９９４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２３６９−２３７６を参照されたい。細胞を媒介した免疫応答を測定する最近の方法は、Ｔ細胞集団による細胞内サイトカインもしくはサイトカイン分泌の測定（例えば、ＥＬＩＳＰＯＴ技術による）、またはエピトープ特異的なＴ細胞の測定（例えば、四量体技術による）によるものが含まれる（ＭｃＭｉｃｈａｅｌ，Ａ．Ｊ．，およびＯ’Ｃａｌｌａｇｈａｎ，Ｃ．Ａ．（１９８８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７（９）：１３６７−１３７１；Ｍｃｈｅｙｚｅｒ−Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｍ．Ｇ．ら（１９９６）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．１５０：５−２１；Ｌａｌｖａｎｉ，Ａ．ら（１９９７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８６：８５９−８６５によって概説されている）。
このようにして、本明細書中で用いられる免疫学的応答は、ＣＴＬ、および／またはヘルパーＴ細胞の産生もしくは活性化を刺激するものであってよい。ケモカインおよび／またはサイトカインの産生も刺激され得る。対象とする抗原は、抗体を媒介した免疫応答も誘発し得る。したがって、免疫学的応答は、下記の効果の１つ以上を含み得る：Ｂ細胞による抗体（例えば、ＩｇＡまたはＩｇＧ）の産生；樹枝状細胞、並びに上皮細胞または内皮細胞などの抗原提示細胞による固有の免疫応答の活性化、サイトカイン、ケモカインまたは他の因子の分泌を含む；および／または対象とする組成物もしくはワクチンに存在する抗原または複数の抗原に特異的に指向されるサプレッサーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、もしくはヘルパーＴ細胞および／または（＊Ｔ細胞の活性化。これらの反応は、感染性を中和し、および／または抗体−補体、または抗体依存性の細胞傷害性（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ：ＡＤＣＣ）を媒介して、免疫された宿主に防御を提供するように機能する。このような応答は、当該技術分野において周知である、標準的なイムノアッセイおよび中和アッセイを用いて測定することができる。
「粘膜免疫応答」または「粘膜免疫」とは、体液性（即ち、Ｂ細胞）および／または細胞性（即ち、Ｔ細胞）応答の誘導を意味する。好ましくは、この免疫応答は、哺乳動物の被験体を免疫した抗原に対して特異的である。体液性粘膜免疫応答は、宿主への所望の抗原の導入に応答して、粘膜洗浄に存在する抗原特異的な抗体を測定することによってアッセイすることができる。この抗体応答は、好ましくは、主にＩｇＡまたはＩｇＧ抗体で構成される。細胞性粘膜免疫応答は、粘膜領域（例えば、膣もしくは胃腸管）から単離したリンパ球由来、または粘膜領域（例えば、生殖器部もしくは胃腸管）から流出するリンパ節由来のＴ細胞応答を測定することによってアッセイすることができる。
「免疫原性組成物」は、組成物が被験体に投与されると、被験体中で対象とする抗原性分子に対する体液性および／または細胞性免疫反応の発生をもたらす抗原分子を含む組成物である。免疫原性組成物は、注射、吸入、経口、鼻腔あるいは他のいずれかの非経口または粘膜（例えば、直腸内もしくは膣内）の投与経路などによって、受領者の被験体に直接導入することができる。
「サブユニットワクチン」とは、ウイルス、細菌、寄生生物または真菌などの対象とする病原体由来の抗原に由来するかまたはそれに相同である１以上の選択された抗原を含むが、全ての抗原は含まないワクチン組成物を意味する。このような組成物は、実質的には、無傷の病原細胞または病原性粒子、あるいはこのような細胞または粒子の溶解物を含まない。このようにして、「サブユニットワクチン」は、病原体に由来する少なくとも部分的に精製された（好ましくは実質的に精製された）免疫原性ポリペプチド、またはその類似体から調製することができる。したがって、サブユニットワクチンに含まれる抗原を得る方法は、標準的な精製技術、組換え生成、または合成生成を含み得る。
「粘膜的」または「粘膜の投与経路を介した」とは、鼻内、経口、膣内、直腸内などの任意の粘膜表面を介した体内への導入を意味する。粘膜投与は、皮下、筋内、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、皮内、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、静脈内または腹腔内投与によるなど、非粘膜表面への投与を意味する。
「同時投与」とは、２以上の組成物を生体または標的細胞に導入することを意味する。この用語には、いずれかの順番での投与または同時投与が含まれる。
「免疫調節因子」とは、免疫応答を調節する（特に、増加させる）ことができる分子、例えばタンパク質を意味する。免疫調節因子の非制限的な例には、ＩＬ−６、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３などのリンホカイン（サイトカインとしても知られている）；およびケモカイン（例えば、マクロファージ阻害因子などの分泌タンパク質）が含まれる。ある種のサイトカイン、例えば、ＴＲＡＮＣＥ、ｆｌｔ−３Ｌ、およびＣＤ４０Ｌの分泌形態は、ＡＰＣの免疫刺激性能力を増加することができる。本発明の実施において単独でまたは併用して用いられ得るサイトカインの非制限的な例には、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、インターロイキン３（ＩＬ−６）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、Ｇ−ＣＳＦ、顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−１アルファ（ＩＬ−１α）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、ＭＩＰ−１γ、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、ｃ−キットリガンド、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、腫瘍壊死因子関連活性化誘導サイトカイン（ＴＲＡＮＣＥ）およびｆｌｔ３リガンド（ｆｌｔ−３Ｌ）が含まれる。サイトカインは、例えば、ジェンザイム（Ｇｅｎｚｙｍｅ）（マサチューセッツ州フレーミングハム）、アムジェン（Ａｍｇｅｎ）（カリフォルニア州サウザンドオークス）、アール・アンド・ディーシステムズ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）（ワシントン州シアトル）などのいくつかの製造供給元から市販されている。多くのこれらの分子の配列も、例えば、ジーンバンク（ＧｅｎＢａｎｋ）データベースから利用可能である。必ずしも明確に記載されているわけではないが、野生型または精製したサイトカインと同じ生物活性を有する分子（例えば、組換え的に精製されているかまたはその突然変異体）、およびこれらの分子をコードする核酸は、本発明の精神および範囲内で用いられることが意図される。免疫調節因子は、本明細書に記載されている１つ、いくつかのまたは全ての組成物とともに含まれることができ、あるいは別々の製剤として採用することができる。
用語「プライミング」とは、第１免疫が提供されない場合、または投与される第１免疫が抗原を発現しないＤＮＡベクターを含む場合に達成される免疫応答と比較して、抗原を用いた免疫が、同じ抗原によるその後の再免疫に応じて所望の抗原に対するより高いレベルの免疫応答を誘導する任意の方法を意味する。この用語は、複数のプライミング投与も含む。プライミング投与は、全身または粘膜に投与され得る。好ましくは、プライミング投与は、粘膜経路、例えば鼻腔（ＩＮ）による。全身投与は、被験体の組織の物理的な裂け目によって特徴付けられる投与、および該組織の裂け目を通して医薬組成物の投与の任意の非経口的投与を含む。特に、非経口投与には、限定されないが、皮内、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、皮下、腹腔内、静脈内、動脈内、筋内、または胸骨内注射、静脈内、動脈内、または人工透析注入技術、および組織を介したいわゆる「無針」注射が含まれることが意図される。好ましくは、全身的非経口投与は、筋内投与である。ワクチンの投与経路は、予防または治療されるべき病原体または感染の同一性に応じて変更することができる。
「被験体」とは、限定されないが、ヒトおよびヒトでない霊長類を含む他の霊長類、例えばチンパンジーおよび他の類人猿およびサル種；家畜、例えばウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギおよびウマ；家用の哺乳動物、例えばイヌおよびネコ；マウス、ラットおよびモルモットなどのげっ歯類を含む実験室動物；家用の、野生および狩猟用の鳥、例えばニワトリ、シチメンチョウおよび他の家禽のトリ、アヒル、ガチョウを含むトリなどを含む脊索動物亜門のいずれかのメンバーを意味する。この用語は、特定の年齢を意味していない。したがって、成人および新生児の両方が対象となることを意図する。上述の脊椎動物の全ての免疫系を同様に操作するため、上述したシステムは、これらの脊椎動物種のいずれにも用いられることを意図する。
「脊椎動物の被験体」とは、限定されないが、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギおよびウマなどの哺乳動物；イヌおよびネコなどの家用動物；家用の、野生および狩猟用の鳥、例えば、ニワトリ、シチメンチョウおよび他の家禽のトリを含むオンドリおよびメンドリを含むトリを含む脊索動物亜門のいずれかのメンバーを意味する。この用語は、特定の年齢を意味しない。したがって、成人および新生児の両方が対象となることを意図する。
「哺乳動物の被験体」とは、任意の雄性または雌性哺乳動物を意味する。好ましくは、哺乳動物の被験体は、ヒトである。しかしながら、限定されないが、イヌ、ネコ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、マウス、ウサギおよびラットなどを含む他の霊長類、並びに哺乳類種もこの定義に包含される。
「医薬として許容される」または「薬理学的に許容される」とは、生物学的ではなく、および他には望ましくはないものではない物質を意味し、即ち、任意の望ましくない生物学的効果を引き起こさず、さらにそれを含む組成物の成分のいずれかと有害な形で相互作用することなしに製剤または組成物中のこの物質を個体に投与することができる。
高分子および／または微粒子の「有効量」または「薬学的に有効量」なる用語は、本明細書中で提供されるとき、所望の応答、例えば免疫学的応答、および対応する治療効果を提供するには非毒性ではあるが十分量の高分子および／または微粒子を意味し、あるいは、治療用タンパク質を輸送する場合には、下記に明示するように、被験体の治療を達成するのに十分な量を意味する。下記に指摘されるように、必要とされる正確な量は、被験体の種、年齢、および一般的な状態、治療される状態の重症度、および対象とする特定の高分子、投与形態などに依存して、被験体ごとに変更される。いずれかの個体の場合における適切な「有効な」量は、当業者により所定の実験を用いて測定可能である。
「医薬として許容される」または「薬理学的に許容される」とは、生物学的ではなく、および他には望ましくはないものではない物質を意味し、即ち、任意の望ましくない生物学的効果を引き起こさず、さらにそれを含む組成物の成分のいずれかと有害な形で相互作用することなしに、微粒子製剤とともに個体に投与することができる。
「生理学的なｐＨ」または「生理学的な範囲におけるｐＨ」とは、約７．２以上８．０以下の範囲、より典型的には約７．２以上７．６以下の範囲のｐＨを意味する。
本明細書中で使用するとき、「治療」とは、（ｉ）従来のワクチンなどの場合には、感染または再感染の防止、（ｉｉ）症状の減少または排除、および（ｉｉｉ）対象とする病原体または障害の実質的なまたは完全な排除のいずれかを意味する。治療は、予防的（感染前）または治療的（感染後）に達成することができる。
Ａ．アルファウイルスレプリコン粒子
上述した通り、いずれかのアルファウイルスレプリコン粒子は、本明細書に記載される方法において用いることができる。
一般的に、組換えアルファウイルス粒子は、１以上のアルファウイルスの構造タンパク質、脂質エンベロープおよびＲＮＡベクターレプリコンを含む。特に、組換えアルファウイルス粒子は、一般的に、原形質膜などの宿主細胞由来の脂質二重層内に含まれる核キャプシド構造を含み、その中に、１以上のアルファウイルスエンベロープ糖タンパク質（例えば、Ｅ２、Ｅ１）が包埋される。
Ａ．１．ヌクレオチド成分
さらに、上述したように、本明細書に記載される粒子は、典型的には、１以上のポリヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡ）を含む。粒子において見出される場合、これらのポリヌクレオチドは、１以上の構造タンパク質によって取り囲まれる（および相互作用する）。したがって、本明細書に記載されるレプリコン粒子は、典型的には、コード配列および非コード配列である種々の核酸配列を含む。一般的には、この組成物は、完全なアルファウイルスゲノムに満たないものを含む（例えば、アルファウイルスのゲノムに含まれるコード配列および／または非コード配列の全部に満たないものを含む）。
Ａ．１．Ａ．非コード配列
非コード配列の非制限的な例には、非構造タンパク質を媒介した増幅に必要な５’配列、３’近位遺伝子を発現させるための手段、サブゲノムｍＲＮＡ ５’末端非翻訳領域（サブゲノム５’ＮＴＲ）、および非構造タンパク質を媒介した増幅に必要な３’配列（米国特許第５，８４３，７２３号；同第６，０１５，６９４号；および同第５，８１４，４８２号；国際公開第ＷＯ９７／３８０８７号および同第ＷＯ００／６１７７２号）を含む。
適切な５’配列の非制限的な例には、同種ウイルス由来の天然のアルファウイルス５’末端、異種ウイルス由来の天然のアルファウイルス５’末端、同種ウイルスの非天然のＤＩアルファウイルス５’末端、異種ウイルスの非天然のＤＩアルファウイルス５’末端、非アルファウイルス由来のウイルス配列（例えば、トガウイルス、植物ウイルス）、細胞ＲＮＡ由来の配列（例えば、ｔＲＮＡエレメント）（例えば、Ｍｏｎｒｏｅら（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：３２７９−３２８３）、相同性を減らすための上記配列のいずれかの突然変異／欠失（例えば、Ｎｉｅｓｔｅｒｓら（１９９０）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６４：４１６２−４１６８；Ｎｉｅｓｔｅｒら（１９９０）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６４：１６３９−１６４７）、および／またはヘルペスにおける最小５’配列（約２００、２５０、３００、３５０、４００ヌクレオチドまで）。
レプリコン粒子のポリヌクレオチド配列は、一般的に、３’近位遺伝子（例えば、異種配列、ポリペプチドをコードする配列）を発現させるための手段も含む。このような手段の非制限的な例には、プロモーターなどの調節因子など、例えば、同種ウイルス由来の天然のアルファウイルスサブゲノムプロモーター、異種ウイルス由来の天然のアルファウイルスサブゲノムプロモーター、（相同または異種の）コアアルファウイルスサブゲノムプロモーター、コアサブゲノムプロモーターから上流または下流の最小配列、コアまたは天然のサブゲノムプロモーターの突然変異／欠失／付加、非アルファウイルス由来の適合性サブゲノムプロモーター（例えば、植物ウイルス）、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）、および／またはリボソームリードスルーエレメント（例えば、ＢｉＰ）が含まれる。
適したサブゲノムｍＲＮＡ ５’末端非翻訳領域（サブゲノム５’ＮＴＲ）には、限定されないが、同種ウイルス由来の天然のアルファウイルスサブゲノム５’ＮＴＲ、異種ウイルス由来の天然のアルファウイルスサブゲノム５’ＮＴＲ、非アルファウイルス由来のウイルス５’ＮＴＲ（例えば、植物ウイルス）、細胞遺伝子由来の５’ＮＴＲ（例えば、ベータ−グロビン）、および／または天然のアルファサブゲノム５’ＮＴＲに対して突然変異、欠失、および／または付加を含む配列が含まれる。
非構造タンパク質を媒介した増幅に必要な適切な３’配列の非制限的な例には、同種ウイルス由来の天然のアルファウイルス３’末端、異種ウイルス由来の天然のアルファウイルス３’末端、同種ウイルス由来の非天然のＤＩアルファウイルス３’末端、異種ウイルス由来の非天然のＤＩアルファウイルス３’末端、非アルファウイルス由来のウイルス配列（例えば、トガウイルス、植物ウイルス）、細胞ＲＮＡ由来の配列、相同性を減らすための上記配列の突然変異、欠失、または付加を含む配列（例えば、Ｋｕｈｎら（１９９０）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６４：１４６５−１４７６を参照されたい）、ヘルペスにおける最小配列（約２０、３０、５０、１００、２００ヌクレオチドまで）、および／または細胞修復３’アルファウイルスＣＳＥ由来の配列などの調節エレメントが含まれる。ポリアデニル化配列は、例えば、３’末端配列内にも導入され得る（例えば、Ｇｅｏｒｇｅら（２０００）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：９７７６−９７８５を参照されたい）。
Ａ．１．Ｂ．アルファウイルスコード配列
本明細書に記載されている粒子は、種々のアルファウイルスポリペプチド、例えば１以上の非構造（ｎｓＰ１、ｎｓＰ２、ｎｓＰ３、ｎｓＰ４）または構造（例えば、キャプシド、エンベロープ）アルファウイルスポリペプチドをコードする１以上の配列も含み得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０２３２３２４号および同第２００３／０１４８２６２号を参照されたい。
レプリコン粒子の１以上のヌクレオチド配列は、野生型と比較して修飾することができる。アルファウイルスコード配列に対する修飾には、限定されないが、例えば、１つのアルファウイルスおよび別のウイルス（例えば、アルファウイルス、トガウイルス、植物ウイルス）由来の配列を含むハイブリッド非構造タンパク質を用いるなど、全体的にまたは部分的に、ヌクレオチド突然変異、欠失、付加、または配列置換が含まれる。例えば、ある種の態様では、非構造タンパク質遺伝子をコードする配列において１以上の欠失が存在する。このような欠失は、非構造タンパク質（ｎｓＰ）１、２、３、または４、並びに１を超えるｎｓＰ遺伝子由来の欠失の組み合わせであってもよい。例としてであって、限定としては意図されないで、欠失は、少なくともＶＥＥ ｎｓＰ１アミノ酸残基１０１−１２０、４５０−４７０、４６０−４８０、４７０−４９０、または４８０−５００、Ｋｉｎｎｅｙら（１９８９）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：１９−３０における配列と比較して番号付けされる、をコードするヌクレオチド配列、並びに上記のいずれかに含まれるより小さい領域を包含し得る。
他の態様では、欠失は、少なくともＶＥＥ ｎｓＰ２アミノ酸残基９−２９、６１３−６３３、６５０−６７０、または７４０−７６０をコードする配列、並びに上記のいずれかに含まれるより小さい領域を包含することができる。別の態様では、欠失は、少なくともＶＥＥ ｎｓＰ３アミノ酸残基３４０−３７０、３５０−３８０、３６０−３９０、３７０−４００、３８０−４１０、３９０−４２０、４００−４３０、４１０−４４０、４２０−４５０、４３０−４６０、４４０−４７０、４５０−４８０、４６０−４９０、４７０−５００、４８０−５１０、４９０−５２０、５００−５３０、または４８８−５２２をコードする配列、並びに上記のいずれかに含まれるより小さい領域を包含し得る。別の態様では、欠失は、少なくともＶＥＥ ｎｓＰ４アミノ酸残基８−２８、または５５２−５７０をコードする配列、並びに上記のいずれかに含まれるより小さい領域を包含する。上記アミノ酸の範囲は、一例としてＶＥＥを用いて例示されるが、類型の欠失が他のアルファウイルスに用いられ得ることに留意されたい。例えば、他の態様では、修飾した非構造タンパク質は、アルファウイルスレプリコンのｎｓＰ４内の非常に保存された位置での修飾（例えば、欠失、付加、および／または置換）を含む。
非制限的な例として、シンドビスウイルス（ＳＩＮ）の３６８−４００、セムリキ森林熱ウイルス（ＳＦＶ）の３７５−４０７、およびベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥ）３８３−４１５のｎｓＰ４アミノ酸、並びに植物ブロムモザイクウイルス（ＢＭＶ）の２ａタンパク質のアミノ酸４６２−４９４を含むポリメラーゼ領域は、高度の配列保存を有し、修飾のための標的領域として機能を果たすことができる。さらに、この領域から隣接しているアミノ酸配列１、２または３個のアミノ酸の上流または下流への修飾も意図される。
一般的に、アミノ酸の番号付けは、主にポリタンパク質の長さにおける僅かな相違により、アルファウイルス間で幾分異なっており、異なったアルファウイルスの中でまたはそれらの間での整列によって、他のアルファウイルスにおける類似の領域を同定する手段が提供される（Ｋｉｎｎｅｙら（１９８９）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７０：１９−３０における典型的な整列を参照されたい）。好ましくは、本発明の非構造タンパク質遺伝子の欠失は、複数のアルファウイルスの中で保存されていないものとして考えられるアミノ酸の領域またはストレッチに限定される。さらに、保存された領域は、欠失の対象としてもよい。
アルファウイルスレプリコンまたはベクターのポリヌクレオチド成分を取り囲む（ある場合には相互作用する）構造タンパク質は、キャプシドタンパク質とエンベロープタンパク質の両方を含み得る。大部分の場合、ポリヌクレオチド成分は、ヌクレオキャプシドを形成するキャプシドタンパク質に囲まれている。次に、ヌクレオキャプシドは、エンベロープタンパク質を含む脂質エンベロープによって囲まれている。キャプシドタンパク質とエンベロープタンパク質の両方を有することが好ましいが、その両方は必要ではないことは理解されなければならない。
アルファウイルスのキャプシドタンパク質およびエンベロープタンパク質は、Ｓｔｒａｕｓｓら（１９９４）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．５８：４９１−５６２に一般的に説明されている。キャプシドタンパク質は、アルファウイルスの構造ポリタンパク質のＮ末端タンパク質であり、ポリタンパク質からのプロセッシング後、アルファウイルスＲＮＡおよび他のキャプシドタンパク質の単量体と相互作用して、ヌクレオキャプシド構造体を形成する。
アルファウイルスのエンベロープ糖タンパク質（例えば、Ｅ２、Ｅ１）は、受容体結合、および標的細胞への進入に機能的に関与する表面「スパイク」として、エンベロープを有する粒子から突き出ている。
これらの構造タンパク質（またはその領域）の１つまたはその両方は、野生型と比較して１以上の修飾を含み得る。「ハイブリッド」の構造タンパク質（例えば、２以上のアルファウイルス由来の配列を含むタンパク質）は、本発明の実施における使用も見出される。ハイブリッドタンパク質は、異なったアルファウイルス由来の１以上の領域を含むことができる。これらの領域は、隣接しているかまたは隣接していない場合もある。好ましくは、構造タンパク質の特定の領域（例えば、エンベロープタンパク質の細胞質尾部タンパク質またはキャプシドタンパク質のＲＮＡ結合ドメインなどの機能性領域）は、第１アルファウイルス由来である。該タンパク質の多量の「残りの」配列（例えば、指定した領域以外の任意の配列）は、第１アルファウイルスとは異なった１以上のアルファウイルス由来であり得る。約２５％〜１００％の間（またはその間のいずれかのパーセントの値）の「残りの」部分は、異なったアルファウイルス由来であることが好ましく、より好ましくは約３５％〜１００％の間（またはその間のいずれかのパーセントの値）、さらにより好ましくは約５０％〜１００％の間（またはその間のいずれかのパーセントの値）である。このハイブリッドにおける１以上の異なったアルファウイルス由来の配列は、隣接しているかまたは隣接していない場合もあり、換言すれば、１つのアルファウイルス由来の配列は、１以上の異なったアルファウイルス由来の配列によって分離することができる。
前記粒子は、他の成分（例えば、ビオチンなどの標的エレメント、他のウイルス構造タンパク質またはその部分、ハイブリッドエンベロープ、または他の受容体結合リガンド）も含むことができ、それらは、アルファウイルスに由来する粒子の向性を導く。一般的に、アルファウイルスＲＮＡと、レプリコン粒子またはヌクレオキャプシドを効率的に形成するのに必要である構造タンパク質との間の相互作用は、キャプシドタンパク質とＲＮＡ内に含まれるパッケージングシグナル（またはパッケージング配列）との間のＲＮＡ−タンパク質相互作用であってもよい。
免疫応答を発生させるために用いる場合、アルファウイルスレプリコン粒子は、少なくとも１つの抗原をコードする配列も含む。このような抗原は、下記に詳細に検討される。
Ａ．１．Ｃ．アルファウイルスレプリコン粒子の生成
本発明に係るキメラアルファウイルスレプリコン粒子は、公開された種々の方法を用いて生成することができる。このような方法には、例えば、インビトロにおいて転写されたレプリコンと欠損ヘルパーＲＮＡとの同時形質転換（Ｌｉｌｊｅｓｔｒｏｍ（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：１３５６−１３６１；Ｂｒｅｄｅｎｂｅｅｋら（１９９３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７：６４３９−６４４６；Ｆｒｏｌｏｖら（１９９７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１：２８１９−２８２９；Ｐｕｓｈｋｏら（１９９７）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２３９：３８９−４０１；米国特許第５，７８９，２４５号および同第５，８４２，７２３号）、またはプラスミドＤＮＡに基づくレプリコンと欠損ヘルパー構築物との同時形質転換（Ｄｕｂｅｎｓｋｙら（１９９６）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０：５０８−５１９）などの一時的なパッケージング法、並びに安定したパッケージング細胞株（ＰＣＬ）へのアルファウイルスレプリコンの導入（Ｐｏｌｏら（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６：４５９８−４６０３；米国特許第５，７８９，２４５号；同第５，８４２，７２３号；および同第６，０１５，６９４号；国際公開第ＷＯ９７／３８０８７号；同第ＷＯ９９／１８２２６号；同第ＷＯ００／６１７７２号；および同第ＷＯ００／３９３１８号）が含まれる。
好ましい態様では、安定したアルファウイルスパッケージング細胞株は、レプリコン粒子を生成するために利用される。ＰＣＬを、インビトロで転写されたレプリコンＲＮＡを用いて形質転換するか、プラスミドＤＮＡに基づくレプリコン（例えば、ＥＬＶＩＳベクター）を用いて形質転換するか、またはレプリコン粒子のシードストック（ｓｅｅｄ ｓｔｏｃｋ）を用いて感染させ、次に、培養上清中で高力価のパッケージされたレプリコン粒子を生成するのに十分な条件下で、および十分な時間でインキュベートすることができる。特に好ましい形態では、ＰＣＬは、２工程プロセスで利用されるが、第１工程として、レプリコン粒子のシードストックは、ＰＣＬをプラスミドＤＮＡに基づくレプリコンで形質転換することによって生成させる。次に、非常に大量のレプリコン粒子のストックは、第２工程において、ＰＣＬの新鮮な培養物にシードストックを感染させることによって生成される。この感染は、感染多重度（ＭＯＩ）＝０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、３、５、または１０を含む種々のＭＯＩを用いて行うことができる。好ましくは、感染は低いＭＯＩ（例えば、１未満）で実行される。１０８感染単位（ＩＵ）／ｍｌも超える力価のレプリコン粒子は、シードストックで感染させたＰＣＬから時間をかけて回収することができる。さらに、レプリコン粒子は、低多重感染の繰り返しによって、さらに無処理ＰＣＬの大量の培養物中で引き続き継代され得て、結果として、同一の高力価を有する商業規模の調製物が得られる。重要なことには、「分断」された構造遺伝子形状のＰＣＬを用いて、検出可能な汚染性ＲＣＶを含まないこれらのレプリコン粒子ストックを生成することができる。
アルファウイルスレプリコン粒子の大規模生成は、バイオリアクターを用いて行うことができる。好ましくは、バイオリアクターは、外部コンポーネントバイオリアクターであり、基質に接着した細胞の大量培養、増殖およびプロセス調節のための集積モジュールバイオリアクターシステムである。細胞（例えば、アルファウイルスパッケージング細胞）の接着および増殖は、組織培養処理された表面を有する容器またはチャンバー内で起り、これらの細胞は、細胞産生能の増加のために新鮮な培地とともにされる。気体、温度、ｐＨ、グルコースなどのパラメーターについてのモニターおよび調整が行われて、潅流ポンプを用いて粗ベクターを回収する。典型的には、外部バイオリアクターの個々のコンポーネントは、（すなわち、チューブを介して）連結している外部モジュールを分離する。外部コンポーネントは、ポンプ、容器、酸素供給装置、培養モジュール、および他の非標準的な部品であり得る。外部コンポーネントバイオリアクターの代表例は、ＣｅｌｌＣｕｂｅ（商標）システム（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｉｎｃ）である。
本明細書に記載されている外部コンポーネントバイオリアクターを用いることに加えて、従来の撹拌槽バイオリアクターも、ある種の場合には、アルファウイルスレプリコン粒子の生成のために用いることができる。撹拌槽バイオリアクター内では、アルファウイルスパッケージング細胞は、いずれかのマトリックスに付着していない（例えば、懸濁液中で浮動している）、またはマトリックス（例えば、ポリディスク、マイクロキャリアーまたはマクロキャリアー、ビーズ）に付着していてもよい。あるいは、中空糸培養システム（Ｈｏｌｌｏｗ Ｆｉｂｅｒ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｓｙｓｔｅｍ）を用いることができる。
回収後、アルファウイルスレプリコン粒子を含む粗培養上清は、回収物をフィルター（例えば、０．２μＭ、０．４５μＭ、０．６５μＭ、０．８μＭの孔径）を通して清澄化することができる。場合により、濾過して大きな細胞片を除去する前に、粗上清を低速遠心分離にかけてもよい。一態様では、クロマトグラフィーによる精製工程の前またはその後で、エンドヌクレアーゼ（例えば、ベンゾナーゼ（Ｂｅｎｚｏｎａｓｅ）、Ｓｉｇｍａ ＃Ｅ８２６３）をアルファウイルスレプリコン粒子の調製物に添加して、外来性核酸を消化する。さらに、この調製物は、いずれかの幅広く知られている方法の１つ（例えば、接線流濾過法）を用いて精製前に濃縮されてもよい。
粗製または清澄化されたアルファウイルスレプリコン粒子は、クロマトグラフィー技術（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー）によって濃縮および精製することができる。２以上のこのような精製法を連続して行うこともできる。好ましい態様では、イオン交換クロマトグラフィーの少なくとも１工程が行われ、テンタクルイオン交換樹脂などのイオン交換樹脂を利用し、サイズ排除クロマトグラフィーの少なくとも１工程が行われる。
簡潔に言えば、清澄化されたアルファウイルスレプリコン粒子のろ液は、帯電したイオン交換マトリックスまたは樹脂（例えば、陽イオンまたは陰イオンの交換）を含むカラムに充填され得る。このマトリックスまたは樹脂は、限定されないが、架橋されたアガロース、架橋されたポリスチレン、架橋されたスチレン、親水性ポリエーテル樹脂、アクリル樹脂、およびメタクリル酸に基づく樹脂を含む種々の物質からなっていてもよい。イオン交換体成分は、限定されないが、スルホプロピル陽イオン交換体、カルボキシメチル陽イオン交換体、スルホン酸交換体、スルホン酸メチル陽イオン交換体、およびＳＯ３−交換体からなるリストから選択される陽イオン交換体を含むことができる。他の態様では、イオン交換体成分は、限定されないが、ＤＥＡＥ，ＴＭＡＥおよびＤＭＡＥからなるリストから選択される陰イオン交換体を含むことができる。最も好ましくは、イオン交換クロマトグラフィーは、テンタクル陽イオン交換体を用いて行われるが、該イオン交換樹脂は、ＳＯ３−陽イオン交換体（例えば、ＦＲＡＣＴＯＧＥＬ（商標）ＥＤＭＳＯ３）を有するメタクリル酸を基礎とした樹脂である。
レプリコン粒子は、イオン交換樹脂に結合し、その後、塩（例えば、２５０ｍＭ以下のＮａＣｌ）を含むバッファーで１回以上洗浄することができる。次に、レプリコン粒子は、塩濃度を上昇させたバッファーを用いて、精製された形態でカラムから溶出することができる。好ましい態様では、塩濃度は、最小の３００ｍＭ、３５０ｍＭ、４００ｍＭ、４５０ｍＭまたは５００ｍＭである。溶出は、好ましくは、２８０ｎｍで分光光度計によいモニターされ得るが、レプリコン滴定アッセイ、発現転移（ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：ＴＯＥ）アッセイ、またはその後のクーマシーブルー染色またはウエスタンブロッティングを伴うタンパク質ゲル解析も可能である。
続いて、より高い塩の溶出バッファーは、例えば、適切な水性溶液で希釈されるか、または粒子を含む溶出液を分子排除カラムに通過させることによって、より望ましいバッファーと交換することができる。さらに、分子サイズ排除カラムの使用により、ある種の場合では、さらに精製することができる。例えば、一態様では、Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ−５００またはＳ−４００（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）クロマトグラフィーは、バッファー交換として、およびイオン交換カラムから溶出されたレプリコン粒子を含む分画をさらに精製するために用いることができる。この特定の樹脂を用いることにより、通常、レプリコン粒子は、遅れて空隙容量に溶出されるが、汚染物質のいくつかは分子量が小さく、カラムにより長時間保持されるため、純度レベルの改善を示す。しかしながら、サイズ排除と同様に、異なった組成の代わりの樹脂を用いることにより、同じであるかまたは改善された結果が得られる。これらの戦略において、Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ−１０００などの大きなサイズの樹脂を組み込むことによって、レプリコン粒子がマトリックスに進入し、したがって、より長時間保持されて、分画を可能にする。
Ｂ．抗原
本明細書に記載されている方法は、１以上のアルファウイルスレプリコン粒子の粘膜および全身投与を含むことができ、各粒子は、細菌、ウイルス、プリオン、腫瘍または他の疾患を引き起こす薬剤由来の抗原をコードする１以上のポリヌクレオチドを含む。
本発明の目的のために、いずれかの抗原を用いることができる。抗原は、いくつかの知られているウイルス、細菌、寄生生物および真菌のいずれか、並びに種々の腫瘍抗原のいずれかまたは免疫応答が望まれる他の抗原のいずれかに由来し得る。さらに、本発明の目的のために、「抗原」とは、タンパク質が免疫応答を誘発する能力を維持する限りにおいて、天然の配列に対して、欠失、付加および置換（一般に、事実上保存的である）などの修飾を含むタンパク質を意味する。これらの修飾は、部位特異的突然変異誘発を介するなど、意図的であってもよく、または抗原を産生する宿主の突然変異を介するなど、偶発的なものであってもよい。
本発明の実施において使用するための抗原には、粘膜表面を通じて感染するかまたは伝染する病原体由来のポリペプチド抗原が含まれる。粘膜表面を通じて伝染される病原体およびそれに由来する抗原の非制限的な典型例には、細菌性病原体（例えば、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、クラミジア、淋病および梅毒）、ウイルス抗原（例えば、ヒト免疫不全ウイルス（「ＨＩＶ」）、Ｂ型およびＣ型肝炎ウイルス（それぞれ、「ＨＢＶ」および「ＨＣＶ」）、ヒトパピローマウイルス（「ＨＰＶ」）、単純疱疹ウイルス（「ＨＳＶ」）など）、並びに寄生生物、真菌および癌抗原由来の抗原が含まれる。Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよびＣｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓの検討に関しては、Ｋａｌｍａｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２１：３８５−３８９；Ｒｅａｄら（２０００）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２８：１３９７−１４０６；Ｓｈｉｒａｉら（２０００）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８１（Ｓｕｐｐｌ．３）：Ｓ５２４−Ｓ５２７；国際公開第ＷＯ９９／２７１０５号；同第ＷＯ００／２７９９４号；同第ＷＯ００／３７４９４号；および同第ＷＯ９９／２８４５７号を参照されたい。
本発明との関連で利用するとき、「免疫原性部分」とは、適切な条件下で、免疫応答（即ち、細胞媒介性および体液性）を引き起こすことができる各抗原の部分を意味する。「部分」は、可変サイズであってよいが、好ましくは少なくとも９個のアミノ酸の長さであり、完全な抗原を含んでもよい。細胞媒介性免疫応答は、主要組織適合複合体（「ＭＨＣ」）クラスＩ提示、ＭＨＣクラスＩＩ提示、またはその両方を通じて媒介され得る。当業者に明らかであるように、本明細書に記載されている抗原の種々の免疫原性部分は、本明細書に記載されるように投与された場合に、免疫応答を誘導するために組み合わされてもよい。
さらに、免疫原性部分は、長さが変化してもよいが、一般的には、その部分は、少なくとも９個のアミノ酸の長さであり、完全な抗原を含んでもよい。特定の配列の免疫原性は、多くの場合、予測することは困難であるが、Ｔ細胞エピトープは、潜在的なＴヘルパー部位およびＣＴＬ部位のコード領域を走査するために、ＴＳＩＴＥＳ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ、メリーランド）などのコンピュータアルゴリズムを利用して予測され得る。この分析から、ペプチドを合成し、インビトロでの細胞傷害性アッセイにおける標的として用いてもよい。しかしながら、例えば、新規に導入したベクターに対する抗体の存在を検出するＥＬＩＳＡ、並びにガンマ−インターフェロンアッセイ、ＩＬ−２産生アッセイおよび増殖アッセイなどのＴヘルパー細胞を試験するアッセイを含む他のアッセイも利用することができる。
任意の抗原の免疫原性部分も他の方法によって選択することができる。例えば、ＨＬＡ Ａ２．１トランスジェニックマウスは、ウイルス抗原のヒトＴ細胞認識用モデルとして有用であることが示されている。簡単に言えば、インフルエンザおよびＢ型肝炎ウイルスシステムでは、マウスＴ細胞受容体レパートリーは、ヒトＴ細胞によって認識されるのと同じ抗原決定基を認識する。両方の系では、ＨＬＡ Ａ２．トランスジェニックマウスにおいて発生するＣＴＬ応答は、事実上、ＨＬＡ Ａ２．１ハプロタイプのヒトＣＴＬによって認識されるのと同じエピトープに向けられる（Ｖｉｔｉｅｌｌｏら（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１００７−１０１５；Ｖｉｔｉｅｌｌｏら（１９９２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ Ｖｉｒｕｓ Ｓｙｍｐｏｓｉａのアブストラクト）。
更なる免疫原性部分は、例えば、ＨＩＶゲノムまたは１以上のＭｅｎＢエピトープの種々の領域由来の１以上のエピトープを例えば含む様々な位置でコード配列を切断することによって得ることができる。上述したように、このようなドメインには、構造ドメイン、例えばＧａｇ、Ｇａｇ−ポリメラーゼ、Ｇａｇ−プロテアーゼ、逆転写酵素（ＲＴ）、インテグラーゼ（ＩＮ）およびＥｎｖが含まれる。構造ドメインは、多くの場合、ポリペプチド、例えば、ｐ５５、ｐ２４、ｐ６（Ｇａｇ）；ｐ１６０、ｐ１０、ｐ１５、ｐ３１、ｐ６５（ｐｏｌ、ｐｒｏｔ、ＲＴおよびＩＮ）；並びに、ｇｐ１６０、ｇｐ１２０およびｇｐ４１（Ｅｎｖ）にさらに再分割される。ＨＩＶおよび他の性感染症の更なるエピトープが知られており、あるいは当該技術分野において知られている方法を用いて容易に決定することができる。本発明には、例えば、国際公開第ＷＯ００／３９３０２号；同第ＷＯ００／３９３０４号；および同第ＷＯ００／３９３０３号に記載されるようなポリペプチドの分子変異体も含まれる。
本発明の実施に用いられる抗原には、限定されないが、下記に記載される１以上の抗原、または下記に記載される１以上の病原体由来の抗原が含まれる。抗原は、単独で、または抗原を任意に組み合わせて用いることができる（例えば、細菌性抗原の組み合わせの使用を説明している国際公開第ＷＯ０２／００２４９号を参照されたい）。この組み合わせには、同一の病原体由来の複数の抗原、異なった抗原由来の複数の抗原、または同一および異なった病原体由来の複数の抗原が含まれてもよい。このようにして、細菌性、ウイルス性、腫瘍および／または他の抗原が、同じ組成物中に含まれてもよく、または同じ被験体に別々に投与されてもよい。
免疫応答を引き起こすために用いられる抗原の組み合わせは、組み合わせで用いられることが概して好ましい。複数の病原体または抗原に対する免疫は、非経口輸送（投与回数を減らす場合）および粘膜輸送の両方に有益であり、それは、患者のコンプライアンスが改善され、薬剤の運搬／保存を促進するためである。免疫は、本明細書に記載されるように、予防的または治療的に用いることが可能である。
Ｂ．１．細菌性抗原
本発明での使用に適した細菌性抗原には、細菌から単離され、精製され、または由来し得るタンパク質、多糖、リポ多糖および外膜ベシクルが含まれる。さらに、細菌性抗原には、細菌の溶解物および不活性化した細菌製剤が含まれてもよい。細菌抗原は、組換え発現によって生成することができる。細菌性抗原には、好ましくは、細菌のライフサイクルの少なくとも１つの段階において細菌表面に晒されるエピトープが含まれる。細菌抗原には、下記に記載される１以上の細菌由来の抗原、並びに下記に同定されている特定の抗原例が含まれる。
Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ：Ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ抗原には、タンパク質類（例えば、国際公開第ＷＯ９９／２４５７８号；同第ＷＯ９９／３６５４４号；同第ＷＯ９９／５７２８０号；同第ＷＯ００／２２４３０号；同第ＷＯ９６／２９４１２号；Ｔｅｔｔｅｌｉｎら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：１８０９−１８１５；およびＰｉｚｚａら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８７：１８１６−１８２０に同定されるもの）、糖類（多糖、オリゴ糖またはリポ多糖を含む）、または外膜ベシクル（国際公開第ＷＯ０１／５２８８５号；Ｂｊｕｎｅら（１９９１）Ｌａｎｃｅｔ ３３８（８７７５）；１０９３−１０９６；Ｆｕｓｋａｓａｗａら（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７：２９５１−２９５８；およびＲｏｓｅｎｑｉｓｔら（１９９８）Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔｒａｎｄ ９２：３２３−３３３）を含みことでき、それらはＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓの血清学的グループ、例えばＡ、Ｃ、Ｗ１３５、Ｙ、および／またはＢから精製されるかまたは由来する。Ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓタンパク質抗原は、接着、自己トランスポーター、トキシン、Ｆｅ捕捉タンパク質、および膜結合タンパク質（好ましくは、内在性外膜タンパク質）から選択することができる。
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ：Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗原は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の糖（多糖またはオリゴ糖を含む）および／またはタンパク質を含むことができる。糖抗原は、血清型１、２、３、４、５、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆから選択することができる。タンパク質抗原は、国際公開第ＷＯ９８／１８９３１号；国際公開第ＷＯ９８／１８９３０号；米国特許第６，６９９，７０３号；米国特許第６，８００，７４４号；国際公開第ＷＯ９７／４３３０３号；および国際公開第ＷＯ９７／３７０２６号において同定されているタンパク質から選択することができる。Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅタンパク質は、ポリヒスチジントリアッドファミリー（ＰｈｔＸ）、コリン結合タンパク質ファミリー（ＣｂｐＸ）、ＣｂｐＸ切断形、ＬｙｔＸファミリー、ＬｙｔＸ切断形、ＣｂｐＸ切断形−ＬｙｔＸ切断形キメラタンパク質、肺炎球菌溶血素（Ｐｌｙ）、ＰｓｐＡ、ＰｓａＡ、Ｓｐ１２８、Ｓｐ１０１、Ｓｐ１３０、Ｓｐ１２５またはＳｐ１３３から選択することができる。Ｗａｔｓｏｎら（２０００）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．Ｊ．１９：３３１−３３２；Ｒｕｂｉｎら（２０００）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．４７：２６９−２８４；およびＪｅｄｒｚｅｊａｓら（２００１）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．６５：１８７−２０７も参照されたい。
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）：Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ抗原には、国際公開第ＷＯ０２／３４７７１号または国際公開第ＷＯ２００５／０３２５８２号において同定されているタンパク質（ＧＡＳ４０を含む）、ＧＡＳ Ｍタンパク質の断片の融合体（国際公開第ＷＯ０２／０９４８５１号；Ｄａｌｅ（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７：１９３−２００；およびＤａｌｅ（１９９６）Ｖａｃｃｉｎｅ １４（１０）：９４４−９４８において記載されているものを含む）；フィブロネクチン結合タンパク質タンパク質（Ｓｆｂ１）、連鎖球菌ヘム結合タンパク質（Ｓｈｐ）、およびストレプトリジンＳ（ＳａｇＡ）が含まれる。Ｄａｌｅら（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．１３：２２７−２４３；およびＦｅｒｒｅｔｔｉら（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９８：４６５８−４６６３も参照されたい。
Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ：モラクセラ抗原には、国際公開第ＷＯ０２／１８５９５号および同第ＷＯ９９／５８５６２号に同定されている抗原、外膜タンパク質抗原（ＨＭＷ−ＯＭＰ）、Ｃ−抗原、および／またはＬＰＳが含まれる。ＭｃＭｉｃｈａｅｌ（２０００）Ｖａｃｃｉｎｅ １９ Ｓｕｐｐｌ．１：Ｓ１０１−Ｓ１０７も参照されたい。
Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ：百日咳（Ｐｅｒｔｕｓｉｓ）抗原には、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉ由来の百日咳ホロトキシン（ＰＴ）および線維状赤血球凝集素（ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ ｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ：ＦＨＡ）、場合によりパータクチンおよび／または細胞凝集原２および３抗原との組み合わせが含まれる。例えば、Ｇｒｕｓｔｔａｆｓｓｏｎら（１９９６）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３３４：３４９−３５５；およびＲａｐｐｕｏｌｉら（１９９１）ＴＩＢＴＥＣＨ ９：２３２−２３８を参照されたい。
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ：スタフ・アウレウス抗原には、場合により、非毒性の組換えＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ外毒素Ａに結合された５型Ｓ．ａｕｒｅｕｓおよび８個の莢膜多糖類、例えばＳｔａｐｈＶＡＸ（商標）、または表面タンパク質由来の抗原、インバシン（ロイコシジン、キナーゼ、ヒアルロニダーゼ）、食作用的な取り込みを阻害する表面因子（カプセル、プロテインＡ）、カロテノイド、カタラーゼ産生、プロテインＡ、凝固酵素、凝固因子、および／または真核生物の細胞膜を溶解させる膜傷害トキシン（場合により、解毒される）（溶血素、白血球毒素、ロイコシジン）が含まれる。Ｋｕｒｏｄａら（２００１）Ｌａｎｃｅｔ ３５７：１２２５−１２４０を参照されたい。
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ：Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ抗原には、粘液結合抗原（ｓｌｉｍｅ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ：ＳＡＡ）が含まれる。
Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ（破傷風）：破傷風抗原には、破傷風トキソイド（ｔｅｔａｎｕｓ ｔｏｘｏｉｄ：ＴＴ）が含まれ、好ましくは、本発明の組成物とともに／結合させて担体タンパク質として用いられる。
Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ（ジフテリア）：ジフテリア抗原には、ジフテリアトキシン、好ましくは無毒化され、例えばＣＲＭ１９７が含まれる。さらに、ＡＤＰリボシル化を調節することができ、阻害することができ、またはそれと結合される抗原は、本発明の組成物との組み合わせ／同時投与／結合が意図される。ジフテリアトキソイドは、担体タンパク質として用いることができる。
Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ（Ｈｉｂ）：Ｈｉｂ抗原には、Ｈｉｂ糖抗原が含まれる。例えば、Ｃｏｓｔａｎｔｉｎｏら（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ １７：１２５１−１２６３を参照されたい。
Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ：Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ抗原には、内毒素Ａ、Ｗｚｚタンパク質、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ ＬＰＳ、より具体的にはＰＡＯ１（Ｏ５血清型）から単離したＬＰＳ、および／または外膜タンパク質Ｆ（ＯｐｒＦ）（Ｐｒｉｃｅら（２００１）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６９（５）：３５１０−３５１５）を含む外膜タンパク質が含まれる。
Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ。細菌性抗原は、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ由来であってもよい。
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）：Ｂ群連鎖球菌抗原には、国際公開第ＷＯ０２／３４７７１号、同第ＷＯ０３／０９３３０６号、同第ＷＯ０４／０４１１５７号または同第ＷＯ２００５／００２６１９号において同定されているタンパク質または糖抗原（タンパク質ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ２７６およびＧＢＳ３２２を含み、血清型Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ／Ｉｃ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩおよびＶＩＩＩ由来の糖抗原を含む）が含まれる。Ｓｃｈｕｃｈａｔ（１９９９）Ｌａｎｃｅｔ ３５３：５１−５６；および英国特許出願第００２６３３３．５号；同第００２８７２７．６号；および第０１５６４０．７号も参照されたい。
Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ：Ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ抗原には、Ｐｏｒ（またはポーリン）タンパク質、例えばＰｏｒＢ（Ｚｈｕら（２００４）Ｖａｃｃｉｎｅ ２２：６６０−６６９を参照されたい）、転移結合タンパク質、例えばＴｂｐＡおよびＴｂｐＢ（Ｐｒｉｃｅら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７１（１）：２７７−２８３を参照されたい）、不透過性タンパク質（Ｏｐａなど）、還元調節タンパク質（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ−ｍｏｄｉｆｉａｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ：Ｒｍｐ）、および外膜ベシクル（ｏｕｔｅｒ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｖｅｓｉｃｌｅ：ＯＭＶ）調節物（Ｐｌａｎｔｅら（２０００）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８２：８４８−８５５）を参照されたい；例えば、国際公開第ＷＯ９９／２４５７８号、同号ＷＯ９９／３６５４４号、同第ＷＯ９９／５７２８０号および同第ＷＯ０２／０７９２４３号も参照されたい）が含まれる。
Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ：Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ抗原には、血清型Ａ、Ｂ、ＢａおよびＣ（失明の原因となるトラコーマの薬物）、血清型Ｌ１、Ｌ２＆Ｌ３（性病性リンパ肉芽腫と関連する）、および血清型、Ｄ−Ｋ由来の抗原が含まれる。Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ抗原は、国際公開第ＷＯ００／３７４９４号、同第ＷＯ０３／０４９７６２号、同第ＷＯ０３／０６８８１１号または同第ＷＯ０５／００２６１９号において同定されている抗原も含むことができ、ＰｅｐＡ（ＣＴ０４５）、ＬｃｒＥ（ＣＴ０８９）、ＡｒｔＪ（ＣＴ３８１）、ＤｎａＫ（ＣＴ３９６）、ＣＴ３９８，ＯｍｐＨ様（ＣＴ２４２）、Ｌ７／Ｌ１２（ＣＴ３１６）、ＯｍｃＡ（ＣＴ４４４）、ＡｔｏｓＳ（ＣＴ４６７）、ＣＴ５４７、Ｅｎｏ（ＣＴ５８７）、ＨｒｔＡ（ＣＴ８２３）、およびＭｕｒＧ（ＣＴ７６１）を含む。
Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ（梅毒）：梅毒抗原には、ＴｍｐＡ抗原が含まれる。
Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ（軟性下疳を引きこす）：デュクレイ抗原には、外膜タンパク質（ＤｓｒＡ）が含まれる。
Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ：抗原には、三糖リピートまたは米国特許第６，７５６，３６１号において提供されている他のＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ由来の抗原が含まれる。
Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ：Ｈ ｐｙｌｏｒｉ抗原には、Ｃａｇ、Ｖａｃ、Ｎａｐ、ＨｏｐＸ、ＨｏｐＹおよび／またはウレアーゼ抗原が含まれる。例えば、国際公開第ＷＯ９３／１８１５０号；同第ＷＯ９９／５３３１０号；および同第ＷＯ９８／０４７０２号を参照されたい。
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ：抗原には、Ｓ．ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ抗原の１６０ｋＤａの血球凝集素が含まれる。
Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ抗原には、ＬＰＳ（Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００２年８月；７０（８）：４４１４）が含まれる。
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）：大腸菌抗原は、エンテロトキシン産生大腸菌（ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ：ＥＴＥＣ）、腸管凝集性大腸菌（ｅｎｔｅｒｏａｇｇｒｅｇａｔｉｖｅ Ｅ．ｃｏｌｉ：ＥａｇｇＥＣ）、散在的付着性大腸菌（ｄｉｆｆｕｓｅｌｙ ａｄｈｅｒｉｎｇ Ｅ．ｃｏｌｉ：ＤＡＥＣ）、病原性大腸菌（ｅｎｔｅｒｏｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ：ＥＰＥＣ）、および／または腸管出血性大腸菌（ｅｎｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ Ｅ．ｃｏｌｉ：ＥＨＥＣ）由来であり得る。
Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ（炭疽病）：Ｂ．ａｎｔｈｒａｃｉｓ抗原は、場合により無毒化され、Ａ成分（致死因子（ｌｅｔｈａｌ ｆａｃｔｏｒ：ＬＦ）および浮腫陰性（ｅｄｅｍａ ｆａｃｔｏｒ：ＥＦ））から選択されてもよく、その両方は、防御抗原（ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｎｔｉｇｅｎ：ＰＡ）として知られている共通のＢ成分を共有することができる。
Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ（伝染病）：伝染病抗原には、Ｆ１カプセル抗原（Ｇｒｏｓｆｅｌｄら（２００３）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７１（１）：３７４−３８３）、ＬＰＳ（Ｆｉｅｌｄｓら（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６７（１０）：５３９５−５４０８）、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ Ｖ抗原（Ｈｉｌｌら（１９９７）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６５（１１）：４４７６−４４８２）が含まれる。
Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ：Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ抗原には、リポタンパク質、ＬＰＳ、ＢＣＧ抗原、場合により陽イオン性脂質ベシクルに調合される抗原８５Ｂ（Ａｇ８５Ｂ）および／またはＥＳＡＴ−６の融合タンパク質（Ｏｌｓｅｎら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２（１０）：６１４８−６１５０）、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ（Ｍｔｂ）イソクエン酸脱水素酵素関連抗原（Ｂａｎｅｒｊｅｅら（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２６５２−１２６５７）および／またはＭＰＴ５１抗原（Ｓｕｚｕｋｉら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２（７）：３８２９−３８３７）が含まれる。
Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ：抗原には、外膜タンパク質Ａおよび／またはＢ（ＯｍｐＢ）を含む外膜タンパク質（Ｃｈａｏら（２００４）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１７０２（２）：１４５−１５２）、ＬＰＳおよび表面タンパク質抗原（ｓｕｒｆａｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｔｉｇｅｎ：ＳＰＡ）（Ｃａｒｌら（１９８９）Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．２ Ｓｕｐｐｌ：８１−９１）が含まれる。
Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ：細菌性抗原は、Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ由来であってもよい。
Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ：抗原には、国際公開第ＷＯ０２／０２６０６号において同定されているものが含まれる。
Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅ：抗原には、プロテイナーゼ抗原、ＬＰＳ、特にＶ．ｃｈｏｌｅｒａｅ ＩＩのリポ多糖類、Ｏ１イナバ（Ｉｎａｂａ）Ｏ特異的多糖類、Ｖ．ｃｈｏｌｅｒａｅ Ｏ１３９、ＩＥＭ１０８ワクチンの抗原（Ｌｉａｎｇら（２００３）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７１（１０）：５４９８−５５０４）および／または閉鎖帯トキシン（Ｚｏｎｕｌａ ｏｃｃｌｕｄｅｎｓ ｔｏｘｉｎ：Ｚｏｔ）が含まれる。
Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉ（腸チフス（ｔｙｐｈｏｉｄ ｆｅｖｅｒ））：抗原には、カプセル多糖類、好ましくは結合体（Ｖｉ、即ち、ｖａｘ−ＴｙＶｉ）が含まれる。
Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（ライム病）：抗原には、リポタンパク質（例えば、Ｏｓｐ Ａ、Ｏｓｐ Ｂ、Ｏｓｐ ＣおよびＯｓｐ Ｄ）、他の表面タンパク質、例えばＯｓｐ Ｅ関連タンパク質（Ｅｒｐｓ）、デコリン結合タンパク質（例えば、ＤｂｐＡ）、および抗原性可変ＶＩタンパク質、例えばｐ３９およびＰ３１に関連した抗原（内在性膜タンパク質（Ｎｏｐｐａら（２００３）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６９（５）：３３２３−３３３４）、ＶｌｓＥ抗原可変タンパク質（Ｌａｗｒｅｎｚら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｏｒｂｉｏｌ．３７（１２）３９９７−４００４）が含まれる。
Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ：抗原には、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの外膜タンパク質（ＯＭＰ）が含まれる。例えば、Ｒｏｓｓら（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ １９：４１３５−４１３２を参照されたい。
Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ：抗原には、ＯＭＰ Ａを含むＯＭＰ、または場合により破傷風トキソイドに結合した多糖が含まれる。
更なる細菌性抗原は、上記のいずれいかのカプセル抗原、多糖抗原またはタンパク質抗原であってもよい。更なる細菌性抗原には、外膜ベシクル（ＯＭＶ）調製物が含まれてもよい。さらに、抗原には、前述の細菌のいずれかの生存した、弱毒化した、および／または精製したバージョンが含まれる。
さらに、上記の細菌由来の糖類（多糖類、ＬＰＳ、ＬＯＳまたはオリゴ糖類）のいずれかは、担体タンパク質（例えば、ＣＲＭ１９７）などの別の薬物または抗原に結合することができる。このような結合は、米国特許第５，３６０，８９７号およびＲｏｙら（１９８４）Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．６２（５）：２７０−２７５に提供される、タンパク質上のアミノ酸に糖上のカルボニル部分の還元アミノ化によって達成される直接結合であってもよい。あるいは、糖類は、リンカーを介して、例えば、スクシンアミド、またはＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（１９９６）およびＣＲＣ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ（１９９３）に提供される他の連結と共に結合することができる。
Ｂ．２．ウイルス抗原
本発明の使用のためのウイルス抗原には、不活性化した（殺傷した）ウイルス、弱毒化したウイルス、スプリットウイルス製剤、精製したサブユニット製剤、ウイルスから単離され、精製されまたは由来し得るウイルスタンパク質、およびウイルス様粒子（Ｖｉｒｕｓ Ｌｉｋｅ Ｐａｒｔｉｃｌｅ：ＶＬＰ）が含まれる。ウイルス抗原は、細胞培養物または他の基質上で増殖したウイルス由来であってもよい。あるいは、ウイルス抗原は、組換えて発現することができる。ウイルス抗原には、好ましくは、ウイルスのライフサイクルの少なくとも１つの段階においてウイルス表面に晒されるエピトープが含まれる。ウイルス抗原は、好ましくは、複数の血清型または分離体の全体で保存されている。ウイルス抗原には、下記に記載される１以上のウイルス由来の抗原、並びに下記に同定されている特異的抗原例が含まれる。
オルトミクソウイルス（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｕｓ）：ウイルス抗原は、インフルエンザＡ、ＢおよびＣなどのオルトミクソウイルス由来であってもよい。オルトミクソウイルス抗原は、血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、核タンパク質（ＮＰ）、マトリックスタンパク質（Ｍ１）、膜タンパク質（Ｍ２）、１以上の転写酵素成分（ＰＢ１、ＰＢ２およびＰＡ）を含む１以上のウイルス性タンパク質から選択することができる。好ましい抗原には、ＨＡおよびＮＡが含まれる。インフルエンザＡの無数のＨＡが同定されている（Ｋａｗａｏｋａら（１９９０）Ｖｉｒｏｌ．１７９：７５９−７６７；Ｗｅｂｓｔｅｒら，Ａｎｔｉｇｅｎｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ ｔｙｐｅ Ａ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓｅｓ，”ｐｐ．１２７−１６８．Ｉｎ Ｐ．ＰａｌｅａｓｅおよびＤ．Ｗ．Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙ（編集），Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓｅｓ（ＮＹ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）。
インフルエンザ抗原は、大流行の間の（例年の）流感（ｆｌｕ）菌株由来であってもよい。あるいは、インフルエンザ抗原は、大流行の発生を引き起こすための潜在能力を有する菌株（即ち、現在循環している菌株における血球凝集素と比較して、新規な血球凝集素を有するインフルエンザ菌株、または鳥類に病原性であり、ヒトの集団に水平方法に伝染させる潜在能力を有するインフルエンザ、ヒトに病原性であるインフルエンザ菌株）由来であってもよい。
パラミクソビリダエ（Ｐａｒａｍｙｘｏｉｒｉｄａｅ）ウイルス：ウイルス抗原は、パラミクソビリダエウイルス、例えばニューモウイルス（Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓｅ）（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｕｓ）（ＰＩＶ）およびモルビリウイルス（Ｍｏｒｂｉｌｌｉｖｉｒｕｓ）（麻疹（Ｍｅａｓｌｅｓ））由来であってもよい。
ニューモウイルス：ウイルス抗原は、ニューモウイルス、例えば、呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ：ＲＳＶ）、ウシ呼吸器合胞体ウイルス、マウスのニューモニアウイルス、およびシチメンチョウの鼻気管炎ウイルス由来であってもよい。好ましくは、ニューモウイルスは、ＲＳＶである。ニューモウイルス抗原は、表面タンパク質融合物（Ｆ）、糖タンパク質（Ｇ）および小疎水性タンパク質（ＳＨ）、マトリックスタンパク質ＭおよびＭ２、核キャプシドタンパク質Ｎ、ＰおよびＬ、並びに非構造タンパク質ＮＳ１およびＮＳ２を含む１以上のタンパク質から選択され得る。好ましいニューモウイルス抗原には、Ｆ、ＧおよびＭが含まれる。例えば、Ｊｏｈｎｓｔｏｎｅら（２００４）Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８５（Ｐｔ１１）：３２２９−３２３８）を参照されたい。ニューモウイルス抗原は、キメラウイルスに製剤化するかまたはそれに由来さえもしてよい。例えば、キメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶおよびＰＩＶの両方の成分を含むことができる。
パラミクソウイルス：ウイルス抗原は、パラミクソウイルス、例えばパラインフルエンザウイルス・タイプ１−４（Ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ：ＰＩＶ）、マンプス（Ｍｕｍｐｓ）、センダイウイルス、シミアンウイルス５、ウシパラインフルエンザウイルスおよびニューキャッスル病ウイルス由来であってもよい。好ましくは、パラミクソウイルスは、ＰＩＶまたはマンプスである。パラミクソウイルス抗原は、下記のタンパク質：血球凝集素−ノイラミニダーゼ（ＨＮ）、融合タンパク質Ｆ１およびＦ２、核タンパク質（ＮＰ）、リンタンパク質（Ｐ）、巨大タンパク質（Ｌ）、およびマトリックスタンパク質（Ｍ）の１以上から選択されてもよい。好ましいパラミクソウイルスタンパク質には、ＨＮ、Ｆ１およびＦ２が含まれる。パラミクソウイルス抗原は、キメラウイルスに製剤化するかまたはそれに由来さえもしてよい。例えば、キメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶおよびＰＩＶの両方の成分を含むことができる。市販されているマンプスワクチンには、一価の形態であるか、または麻疹および風疹ワクチン（ＭＭＲ）と組み合わせられる生きた弱毒したマンプスウイルスが含まれる。
麻疹ウイルス（Ｍｏｒｂｉｌｌｉｖｉｒｕｓ）：ウイルス抗原は、麻疹ウイルス、例えば麻疹由来であってもよい。麻疹ウイルス抗原は、下記のタンパク質：血球凝集素（Ｈ）、糖タンパク質（Ｇ）、融合タンパク質（Ｆ）、巨大タンパク質（Ｌ）、核タンパク質（ＮＰ）、ポリメラーゼリンタンパク質（Ｐ）、およびマトリックス（Ｍ）の１以上から選択されることができる。市販されている麻疹ワクチンには、典型的には、マンプスおよび風疹（ＭＭＲ）と組み合わせた、生きた弱毒化した麻疹ウイルスが含まれる。
ピコルナウイルス（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｕｓ）：ウイルス抗原は、ピコルナウイルス、例えばエンテロウイルス（Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ）、ライノウイルス（Ｒｈｉｎｏｖｉｒｕｓ）、ヘパルナウイルス（Ｈｅｐａｒｎａｖｉｒｕｓ）、カルジオウイルス（Ｃａｒｄｉｏｖｉｒｕｓ）およびアプトウイルス（Ａｐｈｔｈｏｖｉｒｕｓ）由来であってもよい。ポリオウイルスなどのエンテロウイルス由来の抗原が好ましい。ピコルナウイルス（例えば、ポリオウイルスなど）は、例えば、Ｓｕｔｔｅｒら（２０００）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．４７：２８７−３０８；並びにＺｉｍｍｅｒｍａｎおよびＳｐａｎｎ（１９９９）Ａｍ．Ｆａｍ．Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ ５９：１１３−１１８，１２５−１２６）に記載されている。
エンテロウイルス：ウイルス抗原は、エンテロウイルス、例えばポリオウイルス・タイプ１、２または３、コクサッキーＡウイルス・タイプ１〜２２および２４、コクサッキー（Ｃｏｘｓａｃｋｉｅ）Ｂウイルス・タイプ１〜６、エコーウイルス（Ｅｃｈｏｖｉｒｕｓ）（ＥＣＨＯ）ウイルス）・タイプ１〜９、１１〜２８および２９〜３４、およびエンテロウイルス６８〜７１由来であってもよい。好ましくは、エンテロウイルスは、ポリオウイルスである。エンテロウイルス抗原は、好ましくは、下記のキャプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３およびＶＰ４の１以上から選択される。市販されているポリオワクチンには、不活性化したポリオワクチン（Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｐｏｌｉｏ Ｖａｃｃｉｎｅ：ＩＰＶ）および経口ポリオウイルスワクチン（Ｏｒａｌ ｐｏｌｉｏ ｖａｃｃｉｎｅ：ＯＰＶ）が含まれる。
ヘパルナウイルス：ウイルス抗原は、ヘパルナウイルス、例えばＡ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）由来であってもよい。例えば、Ｂｅｌｌら（２０００）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．Ｊ．１９：１１８７−１１８８；およびＩｗａｒｓｏｎ（１９９５）ＡＰＭＩＳ １０３：３２１−３２６を参照されたい。市販されているＨＡＶワクチンには、不活性化したＨＡＶワクチンが含まれる。
トガウイルス：ウイルス抗原は、トガウイルス、例えばルビウイルス（Ｒｕｂｉｖｉｒｕｓ）、アルファウイルス、またはアルテリウイルス（Ａｒｔｅｒｉｖｉｒｕｓ）由来であってもよい。ルベラウイルス（Ｒｕｂｅｌｌａ ｖｉｒｕｓ）などのルビウイルス由来の抗原が好ましい。トガウイルス抗原は、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｃ、ＮＳＰ−１、ＮＳＰＯ−２、ＮＳＰ−３またはＮＳＰ−４から選択することができる。市販されているルベラウイルスには、典型的には、マンプスおよび麻疹ワクチン（ＭＭＲ）と組み合わせる、生きた低温に適応したウイルスが含まれる。
フラビウイルス（Ｆｌａｖｉｖｉｒｕｓ）：ウイルス抗原は、フラビウイルス、例えばダニ媒介脳炎（Ｔｉｃｋ−ｂｏｒｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ：ＴＢＥ）、デング熱（Ｄｅｎｇｕｅ）（タイプ１、２、３または４）、黄熱病（Ｙｅｌｌｏｗ Ｆｅｖｅｒ）、日本脳炎、ウエストナイル脳炎、セントルイス脳炎、ロシア春夏脳炎、ポーワッサン脳炎由来であってもよい。フラビウイルス抗原は、ＰｒＭ、Ｍ、Ｃ、Ｅ、ＮＳ−１、ＮＳ−２ａ、ＮＳ２ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂ、およびＮＳ５から選択され得る。フラビウイルス抗原は、好ましくは、ＰｒＭ、ＭおよびＥから選択される。市販されているＴＢＥワクチンには不活性化されたウイルスが含まれる。
ペスチウイルス（Ｐｅｓｔｉｖｉｒｕｓ）：ウイルス抗原は、ペスチウイルス、例えばウシウイルス性下痢（Ｂｏｖｉｎｅ ｖｉｒａｌ ｄｉａｒｒｈｅａ：ＢＶＤＶ）、古典的ブタ熱（Ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｓｗｉｎｅ ｆｅｂｅｒ：ＣＳＦＶ）またはボーダー病（Ｂｏｒｄｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ：ＢＤＶ）由来であってもよい。
ヘパドナウイルス（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｕｓ）：ウイルス抗原は、ヘパドナウイルス、例えばＢ型肝炎ウイルス由来であってもよい。例えば、Ｇｅｒｌｉｃｈら（１９９０）Ｖａｃｃｉｎｅ ８ Ｓｕｐｐｌ：Ｓ６３−６８ ＆ ７９−８０を参照されたい。ヘパドナウイルス抗原は、表面抗原（Ｌ、ＭおよびＳ）、コア抗原（ＨＢｃ、ＨＢｅ）から選択され得る。さらに、ヘパドナウイルス抗原は、プレ表面配列、ｐｒｅ−Ｓ１およびｐｒｅ−Ｓ２（正式には、ｐｒｅ−Ｓと呼ばれる）、並びに上記の組合せ、例えばｓＡｇ／ｐｒｅ−Ｓ１、ｓＡｇ／ｐｒｅ−Ｓ２、ｓＡｇ／ｐｒｅ−ＳＩ／ｐｒｅ−Ｓ２、およびｐｒｅ−ＳＩ／ｐｒｅ−Ｓ２から選択されてもよい。例えば、ＨＢＶ構造の検討に関して、“ＨＢＶ Ｖａｃｃｉｎｅｓ−ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｔｏ ｌｉｃｅｎｓｅ：ａ ｃａｓｅ ｓｔｕｄｙ”ｉｎ Ｍａｃｋｅｔｔ，Ｍ．およびＷｉｌｌｉａｍｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ａｎｄ Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ，ｐｐ．１５９−１７５；および米国特許第４，７２２，８４０号；同第５，０９８，７０４号；および同第５，３２４，５１３号；Ｂｅａｍｅｓら（１９９５）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６９：６８３３−６８３８，Ｂｉｒｎｂａｕｍら（１９９０）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６４：３３１９−３３３０；およびＺｈｏｕら（１９９１）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６５：５４５７−５４６４を参照されたい。市販されているＨＢＶワクチンには、表面抗原Ｓタンパク質を含むサブユニットワクチンが含まれる。
Ｃ型肝炎ウイルス：ウイルス抗原は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）由来であってもよい。ＨＣＶ抗原は、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ１／Ｅ２、ＮＳ３４５ポリタンパク質、ＮＳ３４５−コアポリタンパク質、コア、および／または非構造領域由来のペプチド（Ｈｏｕｇｈｔｏｎら，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ（１９９１）１４：３８１）由来であってもよい。
ラブドウイルス（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｕｓ）：ウイルス抗原は、ラブドウイルス、例えばリッサウイルス（Ｌｙｓａｖｉｒｕｓ）（ラビエスウイルス）およびベシクロウイルス（Ｖｅｓｉｃｕｌｏｖｉｒｕｓ）（ＶＳＶ）由来であってもよい。ラブドウイルス（例えば、ラビエスウイルスなど）は、例えば、Ｄｒｅｓｓｅｎら（１９９７）Ｖａｃｃｉｎｅ １５ Ｓｕｐｐｌ：ｓ２−６；ＭＭＷＲ Ｍｏｒｂ．Ｍｏｒｔａｌ Ｗｋｌｙ Ｒｅｐ．１９９８年１月 １６：４７（１）：１２、１９）に記載されている。ラブドウイルス抗原は、糖タンパク質（Ｇ）、核タンパク質（Ｎ）、巨大タンパク質（Ｌ）、非構造タンパク質（ＮＳ）から選択され得る。市販されているラビエスウイルスワクチンは、ヒトの２倍体細胞またはアカゲザルの胎児肺細胞上で成長する死滅したウイルスを含む。
Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ；ウイルス抗原は、Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ、例えばノーウォークウイルス（Ｎｏｒｗａｌｋ ｖｉｒｕｓ）、およびノーウォーク様ウイルス（Ｎｏｒｗａｌｋ−ｌｉｋｅ ｖｉｒｕｓ）、例えばハワイウイルス（Ｈａｗａｉｉ ｖｉｒｕｓ）およびスノーマウンテンウイルス（Ｓｎｏｗ Ｍｏｕｎｔａｉｎ ｖｉｒｕｓ）由来であってもよい。
コロナウイルス：ウイルス抗原は、コロナウイルス、ＳＡＲＳ、ヒト呼吸器コロナウイルス、鳥類伝染性気管支炎（ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ：ＩＢＶ）、マウス肝炎ウイルス（Ｍｏｕｓｅ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ）、およびブタ伝染性胃腸炎ウイルス（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｂｌｅ ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ：ＴＧＥＶ）由来であってもよい。コロナウイルス抗原は、スパイク（Ｓ）、エンベロープ（Ｅ）、マトリックス（Ｍ）、核キャプシド（Ｎ）、および血球凝集素−エステラーゼ糖タンパク質（ＨＥ）から選択され得る。好ましくは、コロナウイルス抗原は、ＳＡＲＳウイルス由来である。ＳＡＲＳウイルス抗原は、国際公開第ＷＯ０４／９２３６０号に記載されている。
レトロウイルス：ウイルス抗原は、レトロウイルス、例えばオルトレオウイルス、ロタウイルス、オルビウイルス、またはコルチウイルス由来であってもよい。レオウイルスは、構造タンパク質であるλ１、λ２、λ３、μ１、μ２、δ１、δ２、もしくはδ３、または非構造タンパク質であるδＮＳ、μＮＳ、もしくはδ１ｓから選択することができる。好ましいレオウイルス抗原は、ロタウイルス由来であってもよい。ロタウイルス抗原は、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４（または切断された生成物のＶＰ５およびＶＰ８）、ＮＳＰ１、ＶＰ６、ＮＳＰ３、ＮＳＰ２、ＶＰ７、ＮＳＰ４、またはＮＳＰ５から選択することができる。好ましいロタウイルス抗原には、ＶＰ４（または切断された生成物のＶＰ５およびＶＰ８）、およびＶＰ７が含まれる。
パルボウイルス：ウイルス抗原は、パルボウイルス、例えばパルボウイルスＢ１９由来であってもよい。パルボウイルス抗原は、ＶＰ−１、ＶＰ−２、ＶＰ−３、ＮＳ−１およびＮＳ−２由来であってもよい。好ましくは、パルボウイルス抗原は、キャプシドタンパク質ＶＰ−２である。
デルタ肝炎ウイルス（ＨＤＶ）：ウイルス抗原は、ＨＤＶ、特にＨＤＶ由来のδ−抗原（例えば、米国特許第５，３７８，８１４号）由来であってもよい。
Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）：ウイルス抗原は、ＨＥＶ由来であってもよい。
Ｇ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）：ウイルス抗原は、ＨＧＶ由来であってもよい。
ヒトヘルペスウイルス：ウイルス抗原は、ヒトヘルペスウイルス、例えば単純疱疹ウイルス（Ｈｅｒｐｅｓ Ｓｉｍｐｌｅｘ Ｖｉｒｕｓｅｓ：ＨＳＶ）、水疱瘡ウイルス（Ｖａｒｉｃｅｌｌａ−ｚｏｓｔｅｒ ｖｉｒｕｓ：ＶＺＶ）、エプスタイン・バー・ウイルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ ｖｉｒｕｓ：ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ：ＣＭＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（Ｈｕｍａｎ Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ６）（ＨＨＶ６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ７）、およびヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ８）由来であってもよい。ヒトヘルペス抗原は、前初期タンパク質（α）、初期タンパク質（β）、および後期タンパク質（γ）から選択されてよもい。ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２菌株由来であり得る。ＨＳＶ抗原は、糖タンパク質であるｇＢ、ｇＣ、ｇＤおよびｇＨ、融合タンパク質（ｇＢ）、または免疫回避タンパク質（ｇＣ、ｇＥ、またはｇＩ）から選択されることができる。ＶＺＶ抗原は、コア、核キャプシド、テグメント、またはエンベロープタンパク質から選択されてもよい。生きた弱毒化したＶＺＶワクチンは、市販されている。ＥＢＶ抗原は、初期抗原（ｅａｒｌｙ ａｎｔｉｇｅｎ：ＥＡ）タンパク質、ウイルス性キャプシド抗原（ｖｉｒａｌ ｃａｐｓｉｄ ａｎｔｉｇｅｎ：ＶＣＡ）、および膜抗原（ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｔｉｇｅｎ：ＭＡ）の糖タンパク質から選択され得る。ＣＭＶ抗原は、キャプシドタンパク質、エンベロープ糖タンパク質（例えば、ｇＢおよびｇＨ）、およびテグメントタンパク質から選択することができる。（例えば、サイトメガロウイルスのタンパク質コード含量に関してはＣｈｅｅら，Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓｅｓ（Ｊ．Ｋ．ＭｃＤｏｕｇａｌｌ編集，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，１９９０）ｐｐ．１２５−１６９；種々のＨＳＶ−１をコードしたタンパク質の検討に関してはＭｃＧｅｏｃｈら（１９８８）Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６９：１５３１−１５７４；ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２ ｇＢおよびｇＤタンパク質、並びにそれらをコードする遺伝子の検討に関しては米国特許第５，１７１，５６８号；ＥＢＶゲノムにおけるタンパク質をコードする配列の同定に関してはＢａｅｒら（１９８４）Ｎａｔｕｒｅ ３１０：２０７−２１１；並びに、ＶＺＶの概説に関してはＤａｖｉｓｏｎおよびＳｃｏｔｔ（１９８６）Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．６７：１７５９−１８１６を参照されたい。）
パポバウイルス（Ｐａｐｏｖａｖｉｒｕｓ）：抗原は、パポバウイルス、例えばパピローマウイルスおよびポリオーマウイルス由来であってもよい。パピローマウイルスには、ＨＰＶ血清型１、２、４、５、６、８、１１、１３、１６、１８、３１、３３、３５、３９、４１、４２、４７、５１、５７、５８、６３および６５が含まれる。好ましくは、ＨＰＶ抗原は、血清型６、１１、１６または１８由来である。ＨＰＶ抗原は、キャプシドタンパク質（Ｌ１）および（Ｌ２）、もしくはＥ１−Ｅ７、またはそれらの融合体から選択することができる。ＨＰＶ抗原は、好ましくは、ウイルス様粒子（ｖｉｒｕｓ−ｌｉｋｅ ｐａｒｔｉｃｌｅ：ＶＬＰ）に製剤化される。ポリオーマウイルスウイルスにはＢＫウイルスおよびＪＫウイルスが含まれる。ポリオーマウイルス抗原は、ＶＰ１、ＶＰ２またはＶＰ３から選択されてもよい。
レトロウイルス：ウイルス抗原は、レトロウイルス、例えばオンコウイルス、レンチウイルスまたはスプマウイルス由来であってもよい。オンコウイルスは、ＨＴＬＶ−１（ＨＴＬＶ−２、ＨＴＬＶ−５またはＨＴＬＶ−１１由来であり得る。レンチウイルス抗原は、ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶ、ＡＲＶ、ＨＴＩ、Ｒなどとしても知られている）またはＨＩＶ−２由来であり得る。レトロウイルス抗原は、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｘ、ｔａｔ、ｒｅｘ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｕおよびｖｐｒから選択することができる。ＨＩＶ抗原は、ｇａｇ（例えば、ｐ２４ｇａｇおよびｐ５５ｇａｇ）、ｅｎｖ（例えば、ｇｐ１６０およびｇｐ４１）、ｐｏｌ、ｔａｔ、ｎｅｆ、ｒｅｖ、ｖｐｕ、ミニタンパク質（好ましくは、ｐ５５ｇａｇおよびｇｐ１４０ｖ欠損）から選択することができる。ＨＩＶ抗原は、例えば、ＨＩＶＩＩＩｂ、ＨＩＶＳＦ２、ＨＩＶＬＡＶ、ＨＩＶＬＡＩ、ＨＩＶＭＮ、ＨＩＶ−１ＣＭ２３５、ＨＩＶ−１ＵＳ４などの１以上のＨＩＶ菌株由来であってもよい。
ＨＩＶの種々の遺伝子サブタイプのメンバーを含む上記ＨＩＶのいずれかに由来するｇｐ１２０エンベロープタンパク質が知られ、報告され（例えば、多種のＨＩＶ分離体のエンベロープ配列の比較に関しては、Ｍｙｅｒｓら（１９９２）ロスアラモス・データベース（Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ Ｄａｔａｂａｓｅ），ロスアラモス・ナショナル・ラボラトリー（Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ），ニューメキシコ州ロスアラモス；Ｍｙｅｒｓら（１９９０）ヒトレトロウイルスおよびＡＩＤＳ（ニューメキシコ州ロスアラモス：ロスアラモス・ナショナル・ラボラトリー）；およびＭｏｄｒｏｗら（１９８７）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６１：５７０−５７８を参照されたい）、並びにこれらの分離体のいずれか由来の抗原は、本方法での使用を見出される。ｇｐ１６０およびｇｐ４１などの種々のエンベロープタンパク質、ｐ２４ｇａｇおよびｐ５５ｇａｇなどのｇａｇ抗原、並びにｐｏｌ領域由来のタンパク質のいずれかを含む多種のＨＩＶ分離体のいずれかに由来する他の免疫原性タンパク質は、本発明における使用にも適している。
さらに、ＨＩＶのオープン・リーディング・フレームに対して、異なった地理的な領域で見出される免疫原性の大きな可変により、特定の抗原の組み合わせは、特定の地理的な領域における投与に好ましい場合がある。簡潔に言えば、ＨＩＶの少なくとも８個の異なったサブタイプが同定され、これらのうち、サブタイプＢのウイルスは、北アメリカ、ラテンアメリカおよびカリブ海、ヨーロッパ、日本およびオーストラリアにより蔓延している。ほとんど全てのサブタイプは、サハラ以南のアフリカに存在し、サブタイプＡおよびＤは、中央および東アフリカを支配し、サブタイプＣは南アフリカである。サブタイプＣは、インドにも広がっており、最近では、南ブラジルにおいて特定されている。サブタイプＥは、初期には、タイにおいて特定されていて、中央アフリカ共和国にも存在している。サブタイプＦは、ブラジルおよびルーマニアにおいて報告された。報告されたごく最近のサブタイプは、Ｇであり、ロシアおよびガボンにおいて見つけられ、サブタイプＨは、ザールおよびカメルーンで見つけられた。Ｏ群のウイルスは、カメルーンで、およびガボンでも特定されている。したがって、当業者に明確になるように、一般的には、投与の地理的な領域に蔓延している特定のＨＩＶサブタイプに適切な投与のためのベクターを構築することが好ましい。特定の領域のサブタイプは、二次元二重免疫拡散法によって、またはその領域内で個体から単離したＨＩＶゲノム（またはその断片）の配列決定によって測定することができる。
上述したように、様々なＧａｇおよびＥｎｖ抗原が、ＨＩＶによって提示されてもいる。ＨＩＶ−１ Ｇａｇタンパク質は、ウイルス複製における集合、粒子の放出後のビリオン成熟、および初期の侵入後の工程に関与する（Ｆｒｅｅｄ，Ｅ．Ｏ．（１９９８）Ｖｉｒｏｌ．２５１：１−５）。
本発明のＥｎｖコード配列には、限定されないが、下記のＨＩＶによってコードされるポリペプチド：ｇｐ１６０、ｇｐ１４０、およびｇｐ１２０（例えば、ＨＩＶ−１ＳＦ２（「ＳＦ２」）Ｅｎｖポリペプチドの説明に関する米国特許第５，７９２，４５９号を参照されたい）をコードするポリヌクレオチド配列が含まれる。ＨＩＶ−１のエンベロープタンパク質は、約１６０ｋＤａの糖タンパク質（ｇｐ１６０）である。宿主細胞のウイルス感染中に、ｇｐ１６０は、宿主細胞のプロテアーゼによって切断され、ｐｇ１２０および内在性膜タンパク質であるｇｐ４１を形成する。ｇｐ４１タンパク質は、ビリオンの膜二重層に固定され（および橋渡しをし）、ｇｐ１２０セグメントは、周囲環境中に飛び出す。ｇｐ１２０とｇｐ４１との間には共有結合がないため、遊離したｇｐ１２０は、ビリオンおよび感染した細胞の表面から放出される。したがって、ｇｐ１６０には、ｇｐ１２０およびｇｐ４１のコード配列が含まれる。ポリペプチドｇｐ４１は、オリゴマー化ドメイン（ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎ：ＯＤ）および膜貫通ドメイン（ＴＭ）を含むいくつかのドメインから構成される。天然のエンベロープでは、オリゴマー化ドメインは、３つのｇｐ４１ポリペプチドの非共有結合に必要とされ、三量体構造を形成する：ｇｐ４１三量体（およびそれ自身）との非共有的な相互作用を通じて、ｇｐ１２０ポリペプチドは、三量体構造にも組み込まれる。切断部位（または複数の切断部位）は、およそ、ｇｐ１２０のポリペプチド配列とｇｐ４１に対応するポリペプチド配列との間に存在する。この切断部位は、その部位での切断を妨げるように突然変異され得る。得られるｇｐ１４０ポリペプチドは、ｇｐ１６０の切断形態に対応し、そこでは、ｇｐ４１の膜貫通ドメインが欠損している。このｇｐ１４０ポリペプチドは、ｇｐ４１部分のオリゴマー化ドメインの存在のために単量体およびオリゴ体（即ち、三量体）の形態で存在することができ、オリゴ体形態は、「ｏ］と記されてもよく、例えば、「ｏｇｐ１４０」は、オリゴ体ｇｐ１４０を意味する。切断部位が切断を妨げるように突然変異され、ｇｐ４１の膜貫通部分が欠損している状況では、得られるポリペプチド産物は、「突然変異された」ｇｐ１４０と示すことができる。当業者に明らかになるように、切断部位は、様々な方法で突然変異することができる。（例えば、国際公開第ＷＯ００／３９３０２号を参照されたい）。
ある種の態様では、１以上の抗原は、ＨＩＶ由来である。ＨＩＶの遺伝子は、プロウイルスＤＮＡの中心領域に位置し、３つの主要なクラス：（１）主要な構造タンパク質、Ｇａｇ、ＰｏｌおよびＥｎｖ；（２）調節タンパク質、ＴａｔおよびＲｅｖ、並びに（３）付属タンパク質、Ｖｐｕ、Ｖｐｒ、ＶｉｆおよびＮｒｆ、に分割された少なくとも９つのタンパク質をコードする。ＨＩＶＳＦ２から得られる抗原に関して本明細書中で例示されるが、他のＨＩＶ変異体から得られる配列は、本明細書の教示に従って、同じようにして操作することができる。このような他の変異体には、限定されないが、分離体のＨＩＶＩＩＩｂ、ＨＩＶＳＦ２、ＨＩＶ−１ＳＦ１６２、ＨＩＶ−１ＳＦ１７０、ＨＩＶＬＡＶ、ＨＩＶＬＡＩ、ＨＩＶＭＮ、ＨＩＶ−１ＣＭ２３５、ＨＩＶ−１ＵＳ４、多種のサブタイプ（例えば、Ａ〜Ｇ、およびＯ）由来の他のＨＩＶ−１菌株、ＨＩＶ２菌株、およい多様なサブタイプ（例えば、ＨＩＶ−２ＵＣ１およびＨＩＶ−２ＵＣ２）、並びにサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）から得られるＧａｇタンパク質をコードする配列が含まれる。（例えば、これらウイルスおよび他の関連ウイルスの説明に関しては、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第３版（Ｗ．Ｋ．Ｊｏｋｌｉｋ（編集）１９８８）；Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第２版（Ｂ．Ｎ．ＦｉｅｌｄｓおよびＤ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ（編集）１９９１）；Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第３版（Ｆｉｅｌｄｓ，Ｂ．Ｎ．，Ｄ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ，Ｐ．Ｍ．Ｈｏｗｌｅｙ（編集）１９９６，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡを参照されたい。）
さらに、Ｖａｃｃｉｎｅｓ，第４版（ＰｌｏｔｋｉｎおよびＯｒｅｎｓｔｅｉｎ編集，２００４年）；Ｍｅｄｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ 第４版（Ｍｕｒｒａｙら，編集，２００２年）；Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第３版（Ｗ．Ｋ．Ｊｏｋｌｉｋ編集，１９８８年）；およびＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第２版（Ｂ．Ｎ．ＦｉｅｌｄｓおよびＤ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ編集，１９９１年）に含まれる抗原および微生物が提供される。
Ｂ．３．真菌抗原
本発明において使用するための真菌抗原は、下記に記載される１以上の真菌由来であってもよい。
真菌抗原は、Ｄｅｒｍａｔｏｐｈｙｔｒｅｓ由来であってもよく、それには、Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ ｆｉｏｃｃｕｓｕｍ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ａｕｄｏｕｉｎｉ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｃａｎｉｓ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｄｉｓｔｏｒｔｕｍ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｅｑｕｉｎｕｍ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｇｙｐｓｕｍ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ ｎａｎｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒｉｃｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｅｑｕｉｎｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｇａｌｌｉｎａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｇｙｐｓｅｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｇｎｉｎｉ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｍｅｎｔａｇｒｏｐｈｙｔｅｓ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｑｕｉｎｃｋｅａｎｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｒｕｂｒｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｓｃｈｏｅｎｌｅｉｎｉ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｔｏｎｓｕｒａｎｓ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ、Ｔ．ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ ｖａｒ．ａｌｂｕｍ、ｖａｒ．ｄｉｓｃｏｉｄｅｓ、ｖａｒ．ｏｃｈｒａｃｅｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｖｉｏｌａｃｅｕｍおよび／またはＴｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ ｆａｖｉｆｏｒｍｅが含まれる。
真菌病原体は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｙｄｏｗｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｌａｖａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｇｌａｕｃｕｓ、Ｂｌａｓｔｏｓｃｈｉｚｏｍｙｃｅｓ ｃａｐｉｔａｔｕｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｅｎｏｌａｓｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、Ｃａｎｄｉｄａ ｋｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐａｒａｋｗｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｃａｎｄｉｄａ ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｄｉ、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｃａｒｒｉｏｎｉｉ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｄｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ ｃｌａｖａｔｕｍ、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ、Ｐｙｔｈｉｕｍｎ ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍ、Ｐｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ ｏｖａｌｅ、Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｂｏｕｌａｒｄｉｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｓｃｅｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ａｐｉｏｓｐｅｒｕｍ、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ ｂｅｉｇｅｌｉｉ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｍａｒｎｅｆｆｅｉ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｓｐｐ．、Ｆｏｎｓｅｃａｅａ ｓｐｐ．、Ｗａｎｇｉｅｌｌａ ｓｐｐ．、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｐｐ．、Ｂａｓｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｓｐｐ．、Ｃｏｎｉｄｉｏｂｏｌｕｓ ｓｐｐ．、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｐｐ、Ｍｕｃｏｒ ｓｐｐ、Ａｂｓｉｄｉａ ｓｐｐ、Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ｓｐｐ、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ ｓｐｐ、Ｓａｋｓｅｎａｅａ ｓｐｐ．、Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｐｐ、Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ ｓｐｐ、Ｈｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐｐ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｐ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓｐｐ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｓｐｐ、Ｍｏｎｏｌｉｎｉａ ｓｐｐ、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｐｐ、Ｐａｅｃｉｌｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐ、Ｐｉｔｈｏｍｙｃｅｓ ｓｐｐおよびＣｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐｐ．由来であってもよい。
Ｂ．４．ＳＴＤ抗原
本発明において使用に適した１以上の抗原は、性感染症（ｓｅｘｕａｌｌｙ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ ｄｉｓｅａｓｅ：ＳＴＤ）由来であってもよい。このような抗原は、１以上のＳＴＤ、例えばクラミジア、陰部ヘルペス、肝炎（例えばＨＣＶ）、陰部疣贅、淋病、梅毒および／または軟性下疳に対する予防または治療に対して提供されてもよい（国際公開第ＷＯ００／１５２５５号を参照されたい）。抗原は、１以上のウイルス性または細菌性ＳＴＤ由来であり得る。本発明において使用するためのウイルス性ＳＴＤ抗原は、例えば、ＨＩＶ、単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、および肝炎（ＨＣＶ）由来であってもよい。本発明において使用するための細菌性ＳＴＤ抗原は、例えば、Ｎｅｉｓｅｒｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｄｕｃｒｅｙｉ、Ｅ．ｃｏｌｉ、およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ由来であってもよい。
Ｂ．５．呼吸器抗原
本発明において使用に適した１以上の抗原は、呼吸器疾患を引き起こす病原体由来であり得る。例えば、呼吸器抗原は、呼吸器ウイルス、例えばオルトミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、ＶＺＶ、およびコロナウイルス（ＳＲＡＳ）由来であってもよい。呼吸器抗原は、呼吸器疾患を引き起こす細菌、例えば、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒａｃｉｓ、およびＭｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ由来であり得る。これらの病原体由来の特定の抗原の例は、上述されている。
Ｂ．６．小児抗原
本発明において使用に適した１以上の抗原は、小児被験体における使用に適した１以上の抗原を含むことができる。小児被験体は、典型的には、約３歳未満、または約２歳未満、または約１歳未満である。小児抗原は、６ヶ月、１、２または３年の経過に亘って、複数回投与され得る。小児抗原は、小児集団を標的とし得るウイルス、および／または小児集団が感染に感受性であるウイルス由来であってもよい。小児ウイルス抗原には、１以上のオルトミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよびマンプス）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ，コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、および水疱瘡ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バー・ウイルス（ＥＢＶ）由来の抗原が含まれる。小児細菌性抗原には、１以上のＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ（破傷風）、Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ（ジフテリア）、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ（Ｈｉｂ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、およびＥ．ｃｏｌｉ由来の抗原が含まれる。これらの病原体由来の特定の抗原の例は、上述されている。
Ｂ．７．高齢者または免疫不全における使用に適した抗原
本発明において使用に適した１以上の抗原には、高齢者または免疫不全の個体群における使用に適した１以上の抗原を含むことができる。このような個体群は、標的とされる抗原に対する免疫応答を改善するために、高い服用量またはアジュバントによる製剤と共に、より頻繁にワクチン化されることが必要となる場合がある。高齢者または免疫不全の個体群における使用のために標的化され得る抗原には、下記の病原体：Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ａ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ（破傷風）、Ｃｏｒｎｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ（ジフテリア）、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ Ｂ（Ｈｉｂ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、Ｃｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、オルトミクソウイルス（インフルエンザ）、ニューモウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよびマンプス）、モルビリウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、水疱瘡ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン・バー・ウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の１以上から由来する抗原が含まれる。これらの病原体由来の特定抗原の例は、上述される。
Ｂ．８．青年期ワクチンにおける使用に適した抗原
本発明において使用に適した１以上の抗原には、青年期被験体における使用に適した１以上の抗原が含まれてもよい。青年は、以前に投与された小児抗原の追加免疫を必要としている場合がある。青年における使用に適しているような小児抗原は、上述される。さらに、青年は、性活動の開始前に予防的または治療的免疫を確かなものにするために、ＳＴＤ病原体由来の抗原を受ける対象とされてもよい。青年における使用に適しているようなＳＴＤ抗原は、上述される。
Ｂ．８．腫瘍抗原
本発明において使用に適した１以上の抗原には、１以上の腫瘍抗原または癌抗原を含むことができる。腫瘍抗原は、例えば、ペプチド含有腫瘍抗原、例えばポリペプチド腫瘍抗原または糖タンパク質腫瘍抗原であり得る。腫瘍抗原は、例えば、糖含有腫瘍抗原、例えば糖質腫瘍抗原またはガングリオシド腫瘍抗原でもあり得る。腫瘍抗原は、さらに、例えば、ポリペプチド含有腫瘍抗原を発現するポリヌクレオチド含有腫瘍抗原、例えばＲＮＡベクター構築物またはＤＮＡベクター構築物、例えばプラスミドＤＮＡであり得る。
本発明の実施において使用するための腫瘍抗原は、多種多様な分子、例えば（ａ）ポリペプチド（例えば、長さにして８〜２０個のアミノ酸の範囲であり得るが、この範囲外の長さも一般的である）を含むポリペプチド含有腫瘍抗原、（ｂ）多糖類、ムチン類、ガングリオシド類、糖脂質類および糖タンパク質類を含む糖含有腫瘍抗原、および（ｃ）抗原性ポリペプチドを発現するポリヌクレオチドを包含する。
腫瘍抗原は、例えば：（ａ）癌細胞に関連した全長の分子、（ｂ）欠失、付加および／または置換された部分を有する分子を含む、前記分子のホモログおよび修飾形態、および（ｃ）これらの断片であり得る。腫瘍抗原は、組換えた形態で提供されることができる。腫瘍抗原には、例えば、ＣＤ８＋リンパ球によって認識されるクラスＩ制限抗原、またはＣＤ４＋リンパ球によって認識されるクラスＩＩ制限抗原が含まれる。
多数の腫瘍抗原が、当該技術分野において知られており、限定されないが：（ａ）癌−精巣抗原、例えばＮＹ−ＥＳＯ−１、ＳＳＸ２、ＳＣＰｌ、並びにＲＡＧＥ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥおよびＭＡＧＥファミリーポリペプチド、例えばＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６、およびＭＡＧＥ−１２（例えば、メラノーマ、肺、心臓および頸部、ＮＳＣＬＣ、乳房、胃腸、および膀胱腫瘍を対処するために用いられる）；（ｂ）突然変異した抗原、例えば、ｐ５３（種々の固形腫瘍、例えば結腸直腸、肺、頭部および頸部癌に関連する）、ｐ２１／Ｒａｓ（例えば、メラノーマ、膵臓癌および結腸直腸癌と関連する）、ＣＤＫ４（例えば、メラノーマと関連する）、ＭＵＭ１（例えば、メラノーマと関連する）、キャスパーゼ−８（例えば、頭部および頸部癌と関連する）、ＣＩＡ０２０５（例えば、膀胱癌と関連する）、ＨＬＡ−Ａ２−Ｒ１７０１、ベータカテニン（例えば、メラノーマと関連する）、ＴＣＲ（例えば、Ｔ細胞非ホジキンズリンパ腫と関連する）、ＢＣＲ−ａｂｌ（例えば、慢性骨髄性白血病と関連する）、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＫＩＡ０２０５、ＣＤＣ−２７、およびＬＤＬＲ−ＦＵＴ；（ｃ）過剰発現した抗原、例えば、ガレクチン４（例えば、結腸直腸癌と関連する）、ガレクチン９（例えば、ホジキン病と関連する）、プロテイナーゼ３（例えば、慢性骨髄性白血病と関連する）、ＷＴ１（例えば、種々の白血病と関連する）、炭酸脱水酵素（例えば、腎臓癌と関連する）、アルドラーゼＡ（例えば、肺癌と関連する）、ＰＲＡＭＥ（例えば、メラノーマと関連する）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ（例えば、乳房、結腸、肺および卵巣癌と関連する）、アルファ−フェトプロテイン（例えば、肝臓癌と関連する）、ＫＳＡ（例えば、結腸直腸癌と関連する）、ガストリン（例えば、膵臓癌および胃癌と関連する）、テロメラーゼ触媒タンパク質、ＭＵＣ−１（例えば、乳癌および卵巣癌と関連する）、Ｇ−２５０（例えば、腎細胞癌腫と関連する）、ｐ５３（例えば、乳癌、結腸癌と関連する）、および癌胎児性抗原（例えば、乳癌、肺癌、結腸直腸癌などの胃腸消化管の癌と関連する）；（ｄ）共通抗原、例えば、メラノーマ−メラニン細胞分化抗原、例えばＭＡＲＴ−１／メラン（Ｍｅｌａｎ）Ａ、ｇｐ１００、ＭＣ１Ｒ、メラニン細胞刺激ホルモン受容体、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質−１／ＴＲＰ１およびチロシナーゼ関連タンパク質２／ＴＲＰ２（例えば、メラノーマと関連する）；（ｅ）前立腺関連抗原、例えば、前立腺癌と関連するＰＡＰ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＰＳＨ−Ｐ１、ＰＳＨ−Ｐ１、ＰＳＭ−Ｐ２；（ｆ）免疫グロブリンアイソタイプ（メラノーマおよびＢ細胞リンパ腫と関連する）；および（ｇ）他の腫瘍抗原、例えば、（ｉ）シアリルＴｎおよびシアリルＬｅｘ（例えば、乳癌および結腸直腸癌と関連する）、並びに種々のムチンなどの糖タンパク質；糖タンパク質は担体タンパク質に結合し得る（例えば、ＭＵＣ−１はＫＬＨに結合し得る）、（ｉｉ）リポポリペプチド（例えば、脂質部分に連結したＭＵＣ−１）、（ｉｉｉ）担体タンパク質（例えば、ＫＬＨ）に結合し得る多糖類（例えば、グロボ（Ｇｌｏｂｏ）Ｈ合成六糖類、および（ｉｖ）担体タンパク質（例えば、ＫＬＨ）にも結合し得るＧＭ２、ＧＭ１２、ＧＤ２、ＧＤＳなどのガングリオシド（例えば脳、肺、癌、メラノーマと関連する）を含むポリペプチドおよび糖含有句応答原が含まれる。当該技術分野において知られている更なる腫瘍抗原には、ｐ１５、Ｈｏｍ／Ｍｅｌ−４、Ｈ−Ｒａｓ、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、エプスタイン・バー・ウイルス抗原、ＥＢＮＡ、Ｅ６およびＥ７を含むヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｂ型およびＣ型肝炎ウイルス抗原、ヒトＴ細胞リンパ向性ウイルス抗原、ＴＳＰ−１８０、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｍｎ−２３Ｈ１、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、ｐｌ６、ＴＡＧＥ、ＰＳＣＡ、ＣＴ７、４３−９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、ベータ−ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３（ＣＡ２７．２９＼ＢＣＡＡ）、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８＼ＫＰ１、ＣＯ−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ−ＣＯ−１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０（Ｍａｃ−２結合タンパク質＼シクロフィリンＣ関連タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳなどが含まれる。これらと他の細胞成分は、例えば、米国特許出願公開第２００２／０００７１７３号およびそこで引用されている参考文献に記載されている。
本発明に従ってポリヌクレオチド含有抗原は、典型的には、上記で列挙されたものなどのポリペプチド癌抗原をコードするポリヌクレオチドを含む。好ましいポリヌクレオチド含有抗原には、ＤＮＡまたはＲＮＡベクター構築物、例えばプラスミドベクター（例えば、ｐＣＭＶ）が含まれ、それらは、インビボにおいてポリペプチド癌抗原を発現することができる。
腫瘍抗原は、例えば、突然変異したかまたは改変した細胞成分由来であってもよい。改変後、細胞成分は、それらの制御的機能をもはや行わず、したがって、細胞は、制御されない増殖を被る場合がある。改変した細胞成分の典型例には、ｒａｓ、ｐ５３、Ｒｂ、ウィルムス腫瘍遺伝子によってコードされる改変されたタンパク質、ユビキチン、ムチン、ＤＣＣ、ＡＰＣ、およびＭＣＣ遺伝子によってコードされるタンパク質、並びに受容体または受容体様構造、例えば、ｎｅｕ、甲状腺ホルモン受容体、血小板由来増殖因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ：ＰＤＧＦ）受容体、インスリン受容体、上皮細胞増殖因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ：ＥＧＦ）受容体、およびコロニー刺激因子（ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ：ＣＳＦ）受容体が含まれる。これらと他の細胞成分は例えば、米国特許第５，６９３，５２２号およびそこで引用されている参考文献に記載されている。
さらに、１以上の細菌性抗原およびウイルス抗原は、癌の治療のための１以上の腫瘍抗原と同時に用いることができる。特に、担体タンパク質、例えばＣＲＭ１９７、破傷風トキソイド、またはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ抗原は、癌の治療のために、本発明の化合物と同時に／結合させて用いることができる。癌抗原の併用治療薬は、既存の治療薬と比較して、有効性および生物学的利用能の増加を示す。
癌または腫瘍抗原に関する更なる情報は、例えば、Ｍｏｉｎｇｅｏｎ（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ １９：１３０５−１３２６；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（２００１）Ｎａｔｕｒｅ ４１１：３８０−３８４；Ｄｅｒｍｉｎｅら（２００２）Ｂｒｉｔ．Ｍｅｄ．Ｂｕｌｌ．６２：１４９−１６２；Ｅｓｐｉｎｏｚａ−Ｄｅｌｇａｄｏ（２００２）Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ ７（ｓｕｐｐｌ ３）：２０−３３；Ｄａｖｉｓら（２００３）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌ．２３：３−２９；Ｖａｎ ｄｅｎ Ｅｙｎｄｅら（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：６１４−８１；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １８：１７５−１８２；Ｏｆｆｒｉｎｇａら（２０００）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：５７６−５８２；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９９９）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １０：２８１−２８７；Ｓａｈｉｎら（１９９７）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：７０９−７１６；Ｏｌｄら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：１１６３−１１６７；Ｃｈａｕｘら（１９９９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９：７６７−７７８；Ｇｏｌｄら（１９６５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１２２：４６７−４６８；Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎら（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４５：１−６；Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅｔａｌ．（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４５：１０−１９；Ｔａｙｌｏｒ−Ｐａｐａｄｉｍｉｔｒｉｏｕ（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ１８：１０５−１０７；Ｚｈａｏ Ｘ−Ｊら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：６７−７４；Ｔｈｅｏｂａｌｄら（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９２：１１９９３−１１９９７；Ｇａｕｄｅｒｎａｃｋ（１９９６）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２：３−９；国際公開第ＷＯ９１／０２０６２号；米国特許第６，０１５，５６７号；国際公開第ＷＯ０１／０８６３６号；国際公開第ＷＯ９６／３０５１４号；米国特許第５，８４６，５３８号；および米国特許第５，８６９，４４５号に見出すことができる。
Ｃ．輸送
本明細書に記載されている方法には、粘膜および全身（非経口）投与が含まれ、例えば、全身投与に関しては静脈内、筋内、腹腔内、皮下、経皮が含まれ、粘膜投与に関しては経口、直腸内、眼内、耳内または鼻内が含まれる。
組成物の全身投与の方法は周知であり、例えば、（１）血流への直接的な注入（例えば、静脈内投与）；（２）特定の組織または腫瘍への直接的な注入；（３）皮下投与；（４）経皮的表皮投与；（５）皮内投与；（６）腹腔内投与；（７）経皮投与（例えば、上皮細胞の第一層を除去するように処置されたかまたは処置されていなくてもよい皮膚表面上へのワクチンの投与）および／または（８）筋内投与が含まれる。非経口投与の他の方法には、肺投与、坐薬、無針注入、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）および皮下（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）適用が含まれる。
同様に、例えば、上述したＲｅｍｉｎｇｔｏｎに記載されるように、粘膜輸送の方法は、当該技術分野において知られており、鼻腔、直腸、経口および膣輸送が含まれる。例えば、場合により腸溶被覆した錠剤またはカプセル、液体、トランスジェニック植物は、経口投与に用いられてもよい。組成物が鼻内投与用である場合、組成物は、鼻内噴霧、鼻内液滴、ゲルまたは粉末の形態であってもい。
組成物の粘膜および／または全身投与に有用であり得る他の物理的な方法（例えば、アルファウイルスレプリコン粒子、ポックスウイルス粒子、アデノウイルス粒子、ポリペプチド、アルファウイルスレプリコンベクター、ポックスウイルスベクター、アデノウイルスベクターなど）には、限定されないが、リポフェクション（Ｆｅｌｇｅｒら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：７４１３−７４１７）、直接的なＤＮＡ注入（Ａｃｓａｄｉら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：８１５−８１８）；マイクロ発射照射（Ｗｉｌｌｉａｍｓら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：２７２６−２７３０）；いくつかのタイプのリポソーム（例えば、Ｗａｎｇら（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：７８５１−７８５５）；ＣａＰＯ４（Ｄｕｂｅｎｓｋｙら（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：７５２９−７５３３）；ＤＮＡリガンド（Ｗｕら（１９８９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１６９８５−１６９８７）；レプリコン粒子単独の投与；核酸単独の投与（国際公開第ＷＯ９０／１１０９２号）；または、死滅させたアデノウイルスに連結したＤＮＡの投与（Ｃｕｒｉｅｌら（１９９２），Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．３：１４７−１５４）が含まれ；受容体特異的なリガンドを利用したポリリジンなどのポリカチオン化合物を介する；並びにセンダイウイルスまたはアデノウイルスなどのソラーレン不活性化ウイルスを伴う。経皮投与には、浸透促進剤、障壁破壊剤またはそれらの組合せの使用が含まれてもよい。例えば、国際公開第ＷＯ９９／４３３５０号を参照されたい。さらに、投与は、直接的に（即ち、インビボに）、または取り出され（エクスビボ）、その後、戻された細胞のいずれかに投与することができる。
服用処置は、１回の服用スケジュールであるかまたは複数回の服用スケジュールであってもよい。組成物は、いずれかの順番で投与することができ、例えば、１回の粘膜投与後に１回の全身投与；複数回の粘膜投与後に１回の全身投与；複数回の粘膜投与後に複数回の全身投与；１回の全身投与後に１回の粘膜投与；複数回の全身投与後に１回の粘膜投与；複数回の全身投与後に複数回の粘膜投与；粘膜（１回以上）投与後に全身（１回以上）投与し、その後に更なる粘膜（１回以上）投与；全身（１回以上）投与後に粘膜（１回以上）投与し、その後に更なる全身（１回以上）投与；併用投与などであってもよい。
上述した通り、本明細書に記載されている方法は、好ましくは、少なくとも１回のプライミング工程、その後の少なくとも１回のブースティング工程を伴う。プライミング工程およびブースティング工程は、哺乳動物の被験体に１以上の抗原を投与することを伴う。好ましい態様では、プライミング工程は、少なくとも１つの抗原を含む組成物の粘膜投与を伴い、およびブースティング工程は、少なくとも１つの抗原を含む組成物の全身投与を伴う。
粘膜輸送は、エアロゾル、噴霧器によって、または鼻内に液体を挿入することによって達成することができる。あるいは、ブースティングは、坐薬、浣腸、膣洗浄、または対象とする異なった粘膜表面での直接的な免疫が望まれる他の吸入法によるものであってもよい。同様に、全身輸送は、全身輸送は、粘膜によって覆われていないいずれかの部位への投与（例えば、全身投与は、鼻腔、口、膣、気管、腸または直腸の粘膜表面への投与を除く）によって達成することができる。ある種の態様では、全身投与は、被験体の組織の物理的なブリーチングによって特徴付けられる投与、および組織へのブリーチを介した医薬組成物の投与の非経口経路による。特に、非経口投与は、限定されないが、皮内、経皮、皮下、腹腔内、静脈内、動脈内、筋内、または胸骨内注入、静脈、動脈、または腎臓透析注入技術、および組織を介したいわゆる「無針」注入を含むことが意図される。
プライミングおよび／またはブースティング組成物は、ポリペプチドおよび／またはＤＮＡワクチン組成物であってもよい。好ましくは、プライミングおよび／またはブースティングワクチンは、対象とする抗原をコードする核酸を担持するアルファウイルスレプリコン粒子を含む。適切なアルファウイルスレプリコン粒子の非制限的な例には、ＳＩＮ、ＶＥＥおよびキメラＶＥＥ／ＳＩＮレプリコン粒子が含まれる。下記の実施例では、例示的なプライミングＤＮＡワクチンは、抗原、例えばＥｎｖ（ｇｐ１２０、ｇｐ１４０、ｇ１６０）、Ｇａｇ、Ｐｒｏｔ、Ｐｏｌ、ｔａｔ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｐｒ、ｖｐｕ、ｖｉｆまたはそれらの組み合わせとしてのＨＩＶ遺伝子を含むアルファウイルスレプリコン粒子である。他の態様では、プライミングおよび／またはブースティング組成物は、ポックスウイルスレプリコン粒子を含む。ポックスウイルスレプリコン粒子の非制限的な例には、オルトポックスウイルス、パラポックスウイルス、アビポックスウイルス、カリポックスウイルス、レポリポックスウイルス、スイポックスウイルス、モルスシポックスウイルスおよびヤタポックスウイルスレプリコン粒子が含まれる。なお他の態様では、プライミングおよび／またはブースティング組成物は、アデノウイルスレプリコン粒子を含む。
場合により、プライミングおよび／またはブースティング工程には、ＤＮＡワクチン組成物、適量の任意の生物学的に活性な因子、例えばサイトカイン、インターロイキン、ケモカイン、リガンド、およびそれらの最適な組合せで投与することが含まれ、それらは、抗原をコードするＤＮＡワクチンで投与すると、抗原のみをコードするＤＮＡワクチンの投与の際に生じる免疫応答と比較して、抗原特異的な免疫応答を増加させる。
例示的なプライム−ブースト法は、下記の実施例に記載され、そこでは、被験体は、粘膜的にプライムされ、アルファウイルスレプリコン粒子で全身的にブーストされる。本発明に従って、アルファウイルスレプリコン粒子を用いた全身（例えば、ＩＭ）ブースティングに基づく免疫応答（例えば、ＩｇＡおよび／またはＩｇＧ）の導入および全身（ＩＭ）ブースティングは、粘液免疫を介したプライミングによって有意に増大され得る。
投与の間隔は、患者の年齢および組成物の性質などの因子によって変更され、これらの因子は、医師によって評価され得る。第１プライミングおよびブースティング服用量の投与は、一般的に、少なくとも２週間、典型的には少なくとも４週間離される。本発明の方法は、１を超える粘膜プライミング服用量、および／または１を超えるブースティング服用量、例えば、２以上のプライミング服用量、続く２以上のブースター服用量を含むことができる。用語「メモリ」ブーストとは、最初のブースト後に与えられる任意のブースティング服用量を意味する。「メモリ」ブーストが投与される時間は、最初のブースト後の数時間（例えば、１〜７２時間もしくはそれらの間の任意の時間点）、または数日（例えば、１〜９０日もしくはそれらの間の任意の時間点）から数ヶ月（例えば、１〜３６ヶ月もしくはそれらの間の任意の時間点）またはさらに数年で変更することができる。１を超えるメモリブーストは、互いに同じかまたは変化した時間間隔で投与することができる。同一または異なった免疫原性組成物は、各プライミング服用のために用いることができる。したがって、プライミングおよびブースティング服用は、それらの時期よるというよりはむしろ、投与経路によって区別することができる。
ある種の態様では、投与間の時期は、所望の免疫応答が生じる場合、免疫応答を評価し、続く免疫原性組成物を投与することによって決定することができる。被験体における免疫応答を測定する技術は知られており、限定されないが、膣洗浄および／または鼻内洗浄、体液（肺、膣、鼻など）、または組織（肺など）における体液性または細胞性免疫応答の測定が含まれる。
組成物が投与される哺乳動物は、典型的には、霊長類、例えば、ヒトである。ヒトは、小児または成人であってもよい。適切な下等哺乳動物にはマウスが含まれてもよい。
Ｄ．医薬組成物
上記の通り、本明細書に記載されている組成物（例えば、アルファウイルスレプリコン粒子）は、限定されないが、ペプチド、アジュバント、担体、ベヒクルまたは他の物質を含む追加の成分を含んでもよい。
したがって、ある種の態様では、アルファウイルスレプリコン粒子を含む組成物は、本明細書に記載され、１以上の医薬として許容される塩、担体、希釈剤、または賦形剤とともに投与することができる。
医薬として許容される塩には、限定されないが、鉱塩類、例えば塩酸塩類、臭化水素酸塩類、リン酸塩類、または硫酸塩類、並びに有機酸の塩類、例えば、酢酸塩類、プロピオン酸塩類、マロン酸塩類、または安息香酸塩類が含まれる。特に有用なタンパク質基質は、血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、免疫グロブリン分子、チログロブリン、オボアルブミン、破傷風トキシン、および当業者に周知な他のタンパク質である。本発明の組成物は、単独でまたは併用して、液体または賦形剤、例えば、水、生理食塩水、グリセロール、デキストロース、エタノールなど、ならびに湿潤剤、乳化剤、またはｐＨ緩衝剤などの物質も含むことができる。リポソームは、本発明の組成物のための担体として用いることもでき、このようなリポソームは上述されている。
ある種の態様では、組成物には、１以上のポリペプチド、例えば、１以上のポリペプチド抗原が含まれる。有効成分として免疫原性ポリペプチドを含む免疫原性化合物の調製は、当業者に知られている。典型的には、このような免疫原性化合物は、注入可能な液体溶液または懸濁液のいずれかとして調製される；注入前の液体中の溶液または懸濁液に適した固体形態も調製することができる。調製物は乳化することもでき、またはタンパク質はリポソーム中にカプセル化することもできる。ポリペプチド抗原は、例えば、上述したアルファウイルスレプリコン粒子を含む組成物の投与前、投与と同時、または投与後に、アルファウイルスレプリコン粒子から別々に投与されてもよい。ポリペプチド抗原は、粘膜、全身またはそれらの組合せの任意の経路によって投与することができる。
同様に、１以上の抗原をコードする１以上のポリヌクレオチドも被験体に投与することができる。ポリヌクレオチド抗原は、例えば、上述したアルファウイルスレプリコン粒子を含む組成物の投与前、投与と同時、または投与後に、アルファウイルスレプリコン粒子から別々に投与されてもよい。他の態様では、ポリヌクレオチド抗原は、ポックス（例えば、ワクチン）粒子および／またはアデノウイルス粒子を用いて投与される。例えば、Ｄｏｒｉａ−Ｒｏｓｅら（２００３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７７（２１）：１１５６３−１１５７７；Ｓｈａｙａｋｈｍｅｔｏｖら（２０００）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：２５６７−２５８３を参照されたい。ポリヌクレオチド抗原は、粘膜、全身またはそれらの組合せの任意の経路によって投与することができる。ある種の態様では、ポリヌクレオチドは、１以上のアルファウイルスレプリコン粒子ベクターを含み、各ベクターは、少なくとも１つの抗原性ポリペプチドをコードする少なくとも１つの配列を含む。他の態様では、ポリヌクレオチドは、例えば、カナリア痘ウイルスまたはワクシニアウイルス（例えば、Ｆｉｓｈｅｒ−Ｈｏｃｈら（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：３１７−３２１；Ｆｌｅｘｎｅｒら（１９８９）Ａｎｎ．ＮＹ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５６９：８６−１０３；Ｆｌｅｘｎｅｒら（１９９０）Ｖａｃｃｉｎｅ ８：１７−２１；米国特許第４，６０３，１１２号；同第４，７６９，３３０号；および同第５，０１７，４８７号；国際公開第ＷＯ８９／０１９７３号）を含む１以上のポックスウイルスベクターを含み、各ベクターは、少なくとも１つの抗原性ポリペプチドをコードする少なくとも１つの配列を含む。さらに他の態様では、ポリヌクレオチドは、１以上のアデノウイルスベクター（例えば、Ｂｅｒｋｎｅｒ（１９８８）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：６１６−６２７；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１−４３４を参照されたい）を含み、各ベクターは、１以上の抗原性ポリペプチドをコードする少なくとも１つの配列を含む。
さらに、上述した通り、粘膜または全身投与された免疫原性組成物は、１以上のベヒクルまたは担体を含むことができる。医薬として許容される担体は、当業者に周知である。医薬として許容される担体は、それ自体が、宿主に有害な抗体の産生を含んではならない。適した担体は、典型的には、タンパク質類、多糖類、ポリ乳酸類、ポリグリコール酸類、高分子アミン酸類、アミノ酸共重合体、脂質凝集体（例えば、油滴またはリポソーム）、および不活性なウイルス粒子などの大きな、緩やかに代謝される巨大分子である。粒子担体の例には、ポリメチル・メタクリレートポリマー由来のもの、並びにポリ（ラクチド類）およびポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド類）、ＰＬＧとして知られる、由来の微粒子が含まれる。例えば、Ｊｅｆｆｅｒｙら（１９９３）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１０：３６２−３６８；ＭｃＧｅｅら（１９９７）Ｊ．Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌ．１４（２）：１９７−２１０；Ｏ’Ｈａｇａｎら（１９９３）Ｖａｃｃｉｎｅ １１（２）：１４９−１５４を参照されたい。このような担体は、当業者に周知である。さらに、これらの担体は、免疫促進剤（「アジュバント」）として機能し得る。
１以上のアジュバントは、本明細書に記載されている組成物において用いることもできる。アジュバントは、抗原に対する免疫応答を特異的または非特異的に増加する物質であり、例えば、ＣｐＧオリゴおよびイミダゾキノリン化合物などの免疫増強剤が含まれる。
本明細書に記載されている組成物において用いることができるアジュバントの例には、限定されないが、１以上の下記に記載されるものが含まれる：
Ａ．油乳剤
本発明においてアジュバントとしての使用に適した油乳剤組成物および製剤（ムラミルペプチドまたは細菌細胞壁成分などの他の特定の免疫促進剤を伴うまたは伴わない）には、ＭＦ５９（マイクロ流動化剤を用いたサブミクロンのリボスイッチに製剤化された５％スクアレン、０．５％Ｔｗｅｅｎ ８０、および０．５％Ｓｐａｎ ８５）などのスクアレン−水乳剤が含まれる。国際公開第ＷＯ９０／１４８３７号を参照されたい。Ｐｏｄｄａ（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ １９：２６７３−２６８０；Ｆｒｅｙら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ ２１：４２３４−４２３７を参照されたい。ＭＦ５９は、ＦＬＵＡＤ（商標）インフルエンザウイルスの三価サブユニットワクチンにおけるアジュバントとして用いられる。
組成物における使用に特に好ましいアジュバントは、サブミクロンの水中油型乳剤である。本明細書において使用するための好ましいサブミクロンの水中油型乳剤は、可変量のＭＴＰ−ＰＥを場合により含むスクアレン／水乳剤、例えば、４〜５％ｗ／ｖスクアレン、０．２５〜１．０％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ８０（商標）（ポリオキシエチレンソルビタン・モノオレート）、および／または０．２５〜１．０％Ｓｐａｎ ８５（商標）（ソルビタン・トリオレエート）、および、場合により、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルアトミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒュイドロキシホスホホリロキシ（ｈｕｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈｏｐｈｏｒｙｌｏｘｙ））−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）を含むサブミクロンの水中油型乳剤、例えば、「ＭＦ５９」として知られているサブミクロンの水中油型乳剤である（国際公開第ＷＯ９０／１４８３７号；米国特許第６，２９９，８８４；米国特許第６，４５１，３２５；およびＯｔｔら，“ＭＦ５９−−Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｓａｆｅ ａｎｄ Ｐｏｔｅｎｔ Ａｄｊｕｖａｎｔ ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ”ｉｎ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ： Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．およびＮｅｗｍａｎ，Ｍ．Ｊ．編集）（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ）１９９５，ｐｐ．２７７−２９６）。ＭＦ５９は、４〜４％ｗ／ｖスクアレン（例えば、４．３％）、０．２５〜０．５％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ８０（商標）、および０．５％ ｗ／ｖ Ｓｐａｎ ８５（商標）を含み、および場合により様々な量のＭＴＰ−ＰＥを含み、モデル１１０Ｙマイクロ流動化剤（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ、マサチューセッツ州ニュートン）などの流動化剤を用いてサブミクロンの粒子に製剤化される。例えば、ＭＴＰ−ＰＥは、約０〜５００μｇ／服用、より好ましくは０〜２５０μｇ／服用、最も好ましくは０〜１００μｇ／服用の量で存在してもよい。本明細書中で使用するとき、用語「ＭＦ５９−０」は、ＭＴＰ−ＰＥを含まない上記の水中油型乳剤を意味し、用語ＭＦ５９−ＭＴＰは、ＭＴＰ−ＰＥを含む製剤を指す。例えば、「ＭＦ５９−１００」は、１００μｇのＭＴＰ−ＰＥ／服用を含む、などである。ＭＦ６９は、本明細書中で使用するとき、本明細書において使用するための別のサブミクロンの水中油型乳剤であって、４．３％ｗ／ｖスクアレン、０．２５％ｗ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ８０（商標）、および０．７５％ｗ／ｖ Ｓｐａｎ ８５（商標）、場合によりＭＴＰ−ＰＥを含む。なお別のサブミクロンの水中油型乳剤は、ＭＦ７５であり、ＳＡＦとしても知られ、１０％スクアレン、０．４％ Ｔｗｅｅｎ ８０（商標）、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含む、サブミクロン乳剤にマイクロ流動化されもする。ＭＦ７５−ＭＴＰは、１００〜４００μｇのＭＴＰ−ＰＥ／服用などのＭＴＰを含むＭＦ７５製剤を指す。
組成物における使用のためのサブミクロンの水中油型乳剤、それを製造する方法、および免疫促進剤、例えば、ムラミルペプチドは、国際公開第ＷＯ９０／１４８３７号；米国特許第６，２９９，８８４号；および米国特許第６，４５１，３２５号に詳細に記載されている。
完全フロインドアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロインドアジュバント（ＩＦＡ）は、本発明におけるアジュバントとして用いることもできる。
Ｂ．鉱物含有組成物
本発明において、アジュバントとしての使用に適した鉱物含有組成物には、鉱物塩類、例えば、アルミニウム塩類およびカルシウム塩類が含まれる。本発明は、水酸化物類（例えば、オキシ水酸化物類）、リン酸塩類（例えば、ヒドロキシリン酸塩類、オルトリン酸塩類）、硫化物類など（例えば、Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．およびＮｅｗｍａｎ，Ｍ．Ｊ．編集）（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ）１９９５，第８章および第９章を参照されたい）、または様々な鉱物化合物の混合物（例えば、場合により、過剰のリン酸塩を含む、リン酸塩アジュバントと水酸化物アジュバントとの混合物）などの鉱物塩類が、任意の適した形態（例えば、ゲル、結晶、非晶質など）をとる化合物を含み、塩に吸着していることが好ましい。鉱物を含む組成物は、金属塩の粒子として製剤化されてもよい（国際公開第ＷＯ００／２３１０５号）。
アルミニウム塩類は、Ａｌ３＋の服用量が、服用あたり０．２と１．０ｍｇとの間であるように、本発明のワクチンに含まれてもよい。
一態様では、本発明において使用するためのアルミニウムに基づくアジュバントは、ミョウバン（硫酸アルミニウムカリウム（ＡｌＫ（ＳＯ４）２））、または、リン酸緩衝液中で抗原をミョウバンと混合し、その後、水酸化アンモニウムまたは水酸化ナトリウムなどの塩基で滴定および沈殿することにより、インサイチュ（ｉｎ−ｓｉｔｕ）で形成される誘導体などのミョウバン誘導体である。
本発明のワクチン製剤において使用するための別のアルミニウムに基づくアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバント（Ａｌ（ＯＨ）３）または結晶オキシ水酸化アルミニウム（ＡｌＯＯＨ）であり、これは、約５００ｍ２／ｇの表面積をもつ、優れた吸着剤である。あるいは、水酸化アルミニウムアジュバントのヒドロキシル基のいくつかまたは全部の代わりにリン酸基を含む、リン酸アルミニウムアジュバント（ＡｌＰＯ４）またはアルミニウムヒドロキシリン酸塩が提供される。本明細書において提供される、好ましいリン酸アルミニウムアジュバントは、酸性、塩基性および中性の媒体中で非晶性であり、可溶性である。
別の実施形態において、本発明のアジュバントは、リン酸アルミニウムおよび水酸化アルミニウムをともに含む。これらのより具体的な態様では、アジュバントは、リン酸アルミニウムを水酸化アルミニウムより多くの量、例えば、水酸化アルミニウムに対するリン酸アルミニウムの重量で２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１または９：１より大きい比を有する。より具体的には、ワクチン中のアルミニウム塩類は、ワクチン服用あたり０．４〜１．０ｍｇ、またはワクチン服用あたり０．４〜０．８ｍｇ、またはワクチン服用あたり０．５〜０．７ｍｇ、またはワクチン服用あたり約０．６ｍｇで存在する。
一般的に、好ましいアルミニウムに基づくアジュバント、または複数のアルミニウムに基づくアジュバントの比、例えば、水酸化アルミニウムに対するリン酸アルミニウムの比は、抗原がアジュバントとして所望のｐＨで反対の電荷を担持するように、分子間の静電気引力を最適化することによって選択される。例えば、リン酸アルミニウムアジュバント（ｉｅｐ＝４）は、ｐＨ７．４でリゾチームを吸着するが、アルブミンは吸着しない。アルブミンが標的ならば、水酸化アルミニウムアジュバントが選択される（ｉｅｐ＝１１．４）。あるいは、リン酸塩による水酸化アルミニウムの前処理は、その等電点を低下させ、より塩基性の抗原に対して好ましいアジュバントとなる。
Ｃ．サポニン製剤
サポニン製剤も本発明においてアジュバントとしての使用に適している。サポニンは、広範な植物種の樹皮、葉、茎、根および花にも見出されるステロール配糖体およびトリテルペノイド配糖体の不均質なグループである。Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ Ｍｏｌｉｎａの木の樹皮から単離されたサポニンは、アジュバントとして幅広く研究されてきた。また、サポニンは、Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔａ（サルサプリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ））、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ブライズ・ベール（ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ））、およびＳａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（ソープ・ルート（ｓｏａｐ ｒｏｏｔ））からも商業的に得られる。サポニンのアジュバント製剤には、ＱＳ２１などの精製された製剤、およびＩＳＣＯＭなどの脂質製剤が含まれる。サポニンのアジュバント製剤には、ＳＴＩＭＵＬＯＮ（登録商標）アジュバント（Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．，マサチューセッツ州レキシントン）が含まれる。
サポニン組成物は、高速薄層クロマトグラフィー（ＨＰ−ＴＬＣ）および逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を用いて精製された。これらの技術を用いて、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃを含む特定の精製画分が同定されている。好ましくは、サポニンはＱＳ２１である。ＱＳ２１を製造する方法は、米国特許第５，０５７，５４０号に開示されている。サポニン製剤は、コレステロールなどのステロールを含むこともできる（国際公開第ＷＯ９６／３３７３９号を参照されたい）。
サポニンおよびコレステロールの組み合わせを用いて、免疫促進複合体（Ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｃｏｍｐｌｅｘ：ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる独特の粒子を形成することができる。ＩＳＣＯＭは、典型的には、ホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンなどのリン脂質も含む。既知のいずれのサポニンは、ＩＳＣＯＭに用いることができる。好ましくは、ＩＳＣＯＭには、Ｑｕｉｌ Ａ、ＱＨＡおよびＱＨＣの１以上が含まれる。ＩＳＣＯＭは、さらに、欧州特許第０１０９９４２号、国際公開第ＷＯ９６／１１７１１号および同第ＷＯ９６／３３７３９号に記載されている。場合により、ＩＳＣＯＭは、追加の界面活性剤を含まなくてもよい。国際公開第ＷＯ００／０７６２１号を参照されたい。
サポニンに基づいたアジュバントの開発に関する概説は、Ｂａｒｒら（１９９８）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．３２：２４７−２７１に見出すことができる。
Ｄ．ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）
ビロソームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）も、本発明においてアジュバントとして適している。これらの構造体は、一般的に、場合によりリン脂質と混合または調合される、ウイルスに由来する１以上のタンパク質を含む。それらは、一般的に、非病原性、非複製性であり、通常、天然のウイルスゲノムのいずれも含まない。ウイルスタンパク質は組換えて生成されるかまたは全ウイルスから単離され得る。ビロソームまたはＶＬＰにおける使用に適した、これらウイルスタンパク質には、インフルエンザウイルス（例えば、ＨＡまたはＮＡ）、Ｂ型肝炎ウイルス（例えば、コアまたはキャプシドタンパク質）、Ｅ型肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、シンドビスウイルス、ロタウイルス、口蹄疫ウイルス、レトロウイルス、ノーウォークウイルス、ヒトパピローマウイルス、ＨＩＶ、ＲＮＡファージ、Ｑβファージ（例えば、コートタンパク質）、ＧＡ−ファージ、ｆｒ−ファージ、ＡＰ２０５ファージ、およびＴｙ（例えば、レトロトランスポソンＴｙタンパク質ｐ１）由来のタンパク質が含まれる。ＶＬＰは、さらに、国際公開第ＷＯ０３／０２４４８０号；同第ＷＯ０３／０２４４８１号；Ｎｉｉｋｕｒａら（２００２）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２９３：２７３−２８０；Ｌｅｎｚら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６（９）：５３４６−５３５５；Ｐｉｎｔｏら（２００３）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８８：３２７−３３８；およびＧｅｒｂｅｒら（２００１）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５（１０）：４７５２−４７６０で検討されている。ビロソームは、さらに、例えば、Ｇｌｕｃｋら（２００２）Ｖａｃｃｉｎｅ ２０：Ｂ１０−Ｂ１６で検討されている。免疫増強した再構成インフルエンザビロソーム（ｉｍｍｕｎｏｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｎｇ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｏｓｏｍｅ：ＩＲＩＶ）は、鼻腔用の３価のＩＮＦＬＥＸＡＬ（商標）生成物（ＭｉｓｃｈｌｅｒおよびＭｅｔｃａｌｆｅ（２００２）Ｖａｃｃｉｎｅ ２０ Ｓｕｐｐｌ ５：Ｂ１７−２３）およびＩＮＦＬＵＶＡＣ ＰＬＵＳ（商標）生成物においてサブユニット抗原輸送システムとして用いられる。
Ｅ．細菌性または微生物性誘導体
本発明において使用に適したアジュバントには、下記のような細菌性または微生物性の誘導体が含まれる。
（１）腸内細菌性リポ多糖（ＬＰＳ）の非毒性誘導体：このような誘導体には、モノホスホリル脂質Ａ（Ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ ｌｉｐｉｇ：ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）が含まれる。３ｄＭＰＬは、４、５または６個のアシル化鎖を有する３脱−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａの混合物である。好ましい「小粒子」形態の３脱−Ｏ−アシル化モノホスホリル脂質Ａは、欧州特許第０６８９４５４号に開示されている。このような「小粒子」の３ｄＭＰＬは、０．２２ミクロンのメンブレンでろ過して滅菌するのに十分小さい（欧州特許第０６８９４５４号を参照されたい）。他の非毒性ＬＰＳ誘導体は、モノホスホリル脂質Ａの模倣体、例えばＲＣ−５２９などのリン酸アミノアルキルグルコサミニド誘導体が含まれる。Ｊｏｈｎｓｏｎら（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２７３−２２７８を参照されたい。
（２）脂質Ａ誘導体：脂質Ａ誘導体には、ＯＭ−１７４などのＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ由来の脂質Ａの誘導体が含まれる。ＯＭ−１７４は、例えばＭｅｒａｌｄｉら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ ２１：２４８５−２４９１；およびＰａｊａｋら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ ２１：８３６−８４２に記載されている。
（３）免疫刺激性オリゴヌクレオチド：本発明においてアジュバントとしての使用に適した免疫刺激性オリゴヌクレオチドまたは高分子には、ＣｐＧモチーフ（非メチル化シトシン、続くグアノシンを含み、リン酸エステル結合によって連結された配列）を含むヌクレオチド配列が含まれる。パリンドローム配列またはポリ（ｄＧ）配列を含む、細菌の二本鎖ＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドも免疫刺激性であることが示されている。ＣｐＧは、ホスホロチオエート修飾などのヌクレオチド修飾／アナログを含むことができ、二本鎖でも一本鎖でもよい。場合により、グアノシンは、２’−デオキシ−７−デアザグアノシンなどのアナログと置換されていてもよい。可能なアナログ置換の例に関しては、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３１（９）：２３９３−２４００；国際公開第ＷＯ０２／２６７５７号；および同第ＷＯ９９／６２９２３号を参照されたい。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント効果は、さらに、Ｋｒｉｅｇ（２００３）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９（７）：８３１−８３５；ＭｃＣｌｕｓｋｉｅら（２００２）ＦＥＭＳ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｉｏｌ．３２：１７９−１８５；国際公開第ＷＯ９８／４０１００号；米国特許第６，２０７，６４６号；米国特許第６，２３９，１１６号；および米国特許第６，４２９，１９９号において検討されている。
ＣｐＧ配列は、モチーフＧＴＣＧＴＴまたはＴＴＣＧＴＴなどのＴＬＲ９に対して指向される場合がある。Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３１（ｐａｒｔ ３）：６５４−６５８を参照されたい。ＣｐＧ配列は、ＣｐＧ−Ａ ＯＤＮなどのＴｈ１免疫応答を誘導するのに特異的であり得るか、またはＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮなどのＢ細胞反応を誘導するのにより特異的であり得る。ＣｐＧ−ＡおよびＣｐＧ−Ｂ ＯＤＮは、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０（８）：４０６１−４０６８；Ｋｒｉｅｇ（２００２）ＴＲＥＮＤＳ Ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３（２）：６４−６５；および国際公開第ＷＯ０１／９５９３５号において検討されている。好ましくは、ＣｐＧはＣｐＧ−Ａ ＯＤＮである。
好ましくは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’末端がレセプターを認識しやすいように構築されている。場合により、２つのＣｐＧオリゴヌクレオチド配列は、３’末端で結合して、「イムノマー（ｉｍｍｕｎｏｍｅｒ）」を形成することができる。例えば、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）ＢＢＲＣ ３０６：９４８−９５３；Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３１（ｐａｒｔ ３）：６６４−６５８；Ｂｈａｇａｔら（２００３）ＢＢＲＣ ３００：８５３−８６１；および国際公開第ＷＯ０３／０３５８３６号を参照されたい。
免疫刺激性オリゴヌクレオチドおよび高分子には、限定されないが、ポリビニル骨格（Ｐｉｔｈａら（１９７０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ２０４（１）：３９−４８；Ｐｉｔｈａら（１９７０）Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ ９（８）：９６５−９７７）、およびモルホリノ骨格（米国特許第５，１４２，０４７号；米国特許第５，１８５，４４４号）などの代替のポリマー骨格構造も含まれる。種々の他の帯電したポリヌクレオチドアナログおよび帯電していないポリヌクレオチドアナログは、当該技術分野において知られている。多数の骨格修飾は、当該技術分野において知られており、限定されないが、帯電していない連結（例えば、メチル・ホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、およびカルバメート）および帯電した連結（例えば、ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエート）が含まれる。
（４）ＡＤＰリボシル化トキシンおよびそれらの無毒化誘導体：細菌性ＡＤＰリボシル化トキシンおよびそれらの無毒化された誘導体は、本発明においてアジュバントとして用いることができる。好ましくは、このタンパク質は、Ｅ．ｃｏｌｉ（すなわち、Ｅ．ｃｏｌｉ易熱性エンテロトキシン「ＬＴ（ｌａｂｉｌｅ ｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ）」）、コレラ（「ＣＴ」）、または百日咳（「ＰＴ」）に由来する。無毒化したＡＤＰリボシル化トキシンを粘膜アジュバントとして用いることは、国際公開第ＷＯ９５／１７２１１号に記載され、非経口アジュバントとしては国際公開第ＷＯ９８／４２３７５号に記載されている。好ましくは、このアジュバントは、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２、およびＬＴＲ１９２Ｇなどの無毒化したＬＴ変異体である。ＡＤＰリボシル化トキシンおよびそれらの無毒化した誘導体、特にＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２をアジュバントとして用いることは、下記の参考文献に見出すことができる。Ｂｅｉｇｎｏｎら（２００２）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７０（６）：３０１２−３０１９；Ｐｉｚｚａら（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ １９：２５３４−２５４１；Ｐｉｚｚａら（２０００）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２９０（４−５）：４５５−４６１；Ｓｃｈａｒｔｏｎ−Ｋｅｒｓｔｅｎら（２０００）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６８（９）：５３０６−５３１３；Ｒｙａｎら（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．（１９９９）６７（１２）：６２７０−６２８０；Ｐａｒｔｉｄｏｓら（１９９９）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．６７（３）：２０９−２１６；Ｐｅｐｐｏｌｏｎｉら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅｓ ２（２）：２８５−２９３；およびＰｉｎｅら（２００２）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ ８５（１−３）：２６３−２７０。アミノ酸置換の数的な参照については、好ましくは、Ｄｏｍｅｎｉｇｈｉｎｉら（１９９５）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ １５（６）：１１６５−１１６７に記載されたＡＤＰリボシル化トキシンのＡおよびＢサブユニットの整列に基づく。
Ｆ．生体接着剤および粘膜接着剤
生体接着剤および粘膜接着剤は、本発明においてアジュバントとして用いることもできる。適切な生体接着剤には、エステル化されたヒアルロン酸ミクロスフィア（Ｓｉｎｇｈら（２００１）Ｊ．Ｃｏｎｔ．Ｒｅｌｅａｓｅ ７０：２６７−２７６）、またはポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖類およびカルボキシメチルセルロースの架橋誘導体などの粘膜接着剤が含まれる。キトサンおよびその誘導体も本発明においてアジュバントして用いることができる（国際公開第ＷＯ９９／２７９６０号を参照されたい）。
Ｇ．微粒子
微粒子は、本発明においてアジュバントとして用いることもできる。ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）を用いた、生物分解性であり無毒性の材料（例えば、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトンなど）から形成される微粒子（すなわち、直径にして約１００ｎｍ〜約１５０μｍ、より好ましくは直径にして約２００ｎｍ〜約３０μｍ、および最も好ましくは直径にして約５００ｎｍ〜約１０μｍの粒子）が好ましく、場合により、（例えば、ＳＤＳを用いて）負に帯電させた表面、または（例えば、ＣＴＡＢなどのカチオン性界面活性剤を用いて）正に帯電させた表面をもつように処理される。
Ｈ．リポソーム
本発明においてアジュバントとしての使用に適したリポソーム製剤の例は、米国特許第６，０９０，４０６号；米国特許第５，９１６，５８８号；および欧州特許第０６２６１６号に記載されている。
Ｉ．ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル製剤
本発明における使用に適したアジュバントには、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルが含まれる（例えば、国際公開第ＷＯ９９／５２５４９号を参照されたい）。このような製剤には、さらに、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（国際公開第ＷＯ０１／２１２０７号）、並びに、オクトキシノールなどの少なくとも１つの付加的な非イオン性界面活性剤と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤（国際公開第ＷＯ０１／２１１５２号）が含まれる。
好ましいポリオキシエチレンエーテルは、下記の群から選択される：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ｌａｕｒｅｔｈ ９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテル。
Ｊ．ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ）
本発明においてアジュバントとしての使用に適したＰＣＰＰ製剤は、例えば、Ａｎｄｒｉａｎｏｖら（１９９８）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ １９（１−３）：１０９−１１５；およびＰａｙｎｅら（１９９８）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．３１（３）：１８５−１９６に記載されている。
Ｋ．ムラミルペプチド
本発明においてアジュバントとしての使用に適したムラミルペプチドの例には、Ｎ−アセチル−ムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−１−アラニル−ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、およびＮ−アセチルムラミル−１−アラニル−ｄ−イソグルタミニル−１−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミンＭＴＰ−ＰＥ）が含まれる。
Ｌ．イミダゾキノリン化合物
本発明においてアジュバントとしての使用に適したイミダゾキノリン化合物の例には、イミキモドおよびそのアナログが含まれ、さらに、Ｓｔａｎｌｅｙ（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２７（７）：５７１−５７７；Ｊｏｎｅｓ（２００３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ ４（２）：２１４−２１８；および米国特許第４，６８９，３３８号；同第５，３８９，６４０号；同第５，２６８，３７６号；同第４，９２９，６２４号；同第５，２６６，５７５号；同第５，３５２，７８４号；同第５，４９４，９１６号；同第５，４８２，９３６号；同第５，３４６，９０５号；同第５，３９５，９３７号；同第５，２３８，９４４号；および同第５，５２５，６１２号に記載されている。
本発明においてアジュバントとしての使用に適したチオセミカルバゾン化合物の例、並びにそのような化合物を調合し、製造し、およびスクリーニングする方法には、国際公開第ＷＯ０４／６０３０８号に記載されるものが含まれる。チオセミカルバゾンは、ＴＮＦ−αなどのサイトカインを産生させるためにヒト末梢血単核細胞の刺激において特に効果的である。
Ｎ．トリプタントリン化合物
本発明においてアジュバントとしての使用に適したトリプタントリン化合物の例、並びにそのような化合物を調合し、製造し、およびスクリーニングする方法には、国際公開第ＷＯ０４／６４７５９号に記載されるものが含まれる。トリプタントリン化合物は、ＴＮＦ−αなどのサイトカインを産生させるためにヒト末梢血単核細胞の刺激において特に効果的である。
本発明は、上記で特定したアジュバントの１以上の局面の組み合わせも含むことができる。例えば、下記のアジュバント組成物を本発明において用いることができる。
（１）サポニンおよび水中油型乳剤（国際公開第ＷＯ９９／１１２４１号）；
（２）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋無毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）（国際公開第ＷＯ９４／００１５３号を参照されたい）；
（３）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋無毒性ＬＰＳ誘導体（例えば、３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；
（４）サポニン（例えば、ＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（場合により、＋ステロール）（国際公開第ＷＯ９８／５７６５９号）；
（５）３ｄＭＰＬと、例えばＱＳ２１および／または水中油型乳剤との組み合わせ（欧州特許第０８３５３１８号；欧州特許第０７３５８９８号；および欧州特許第０７６１２３１号を参照されたい）；
（６）１０％スクアレン、０．４％ Ｔｗｅｅｎ ８０、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ−ＭＤＰを含むＳＡＦであって、マイクロ流動化処理されてサブミクロンの乳剤になっているか、ボルテックス処理されて粒子サイズのより大きい乳剤になったもの；
（７）２％スクアレン、０．２％ Ｔｗｅｅｎ ８０を含むＲｉｂｉ（商標）アジュバントシステム（ＲＡＳ）、（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ，モンタナ州ハミルトン）、およびモノホスホリ脂質Ａ（ＭＰＬ）、ジミコール酸トレハロース（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））からなる群由来の１以上の細菌細胞壁成分；
（８）１以上の鉱物塩類（例えば、アルミニウム塩）＋ＬＰＳの無毒性誘導体（例えば、３ｄＰＭＬ）；
（９）１以上の鉱物塩類（例えば、アルミニウム塩）＋免疫刺激性オリゴヌクレオチド（例えば、ＣｐＧモチーフを含むヌクレオチド配列）。
Ｏ．ヒト免疫調節因子
本発明においてアジュバントとしての使用に適したヒト免疫調節因子には、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２など）、インターフェロン（例えば、インターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのサイトカインが含まれる。
アルミニウム塩類およびＭＦ５９は、注射可能なインフルエンザワクチンとともに用いられる好ましいアジュバントである。細菌性トキシンおよび生体接着剤は、粘膜輸送ワクチン、例えば、経鼻ワクチンとともに用いられる好ましいアジュバントである。
例えば、ある種の態様では、粘膜投与される免疫原性組成物は、さらに、粘膜アジュバントを含む。適したアジュバントには下記が含まれる：ＣｐＧ含有オリゴ、生物接着高分子、国際公開第ＷＯ９９／６２５４６号および同第ＷＯ００／５００７８号を参照されたい；Ｅ．ｃｏｌｉ易熱性エンテロトキシン（「ＬＴ」）もしくはその無毒化した変異体またはコレラトキシン（「ＣＴ」）もしくはその無毒化した変異体、あるいは生物分解性であり無毒性の材料から形成される微粒子。好ましいＬＴ変異体には、Ｋ６３またはＲ７２が含まれる。例えば、国際公開第ＷＯ９３／１３２０２号；同第ＷＯ９５／０１２７２１１号；同第ＷＯ９７／０２３４８号；および同ＷＯ０７／２９７７１号；欧州特許第ＥＰ０６２０８５０Ｂ１号；同第ＥＰ０８６９１８１Ｂ１号；および同第ＥＰ０７３２９３７Ｂ１号を参照されたい。
また、組成物は、凍結乾燥されてもよく、あるいは他には保存安定にしてもよい。
組成物は、好ましくは、「治療的に有効量」の対象とする高分子を含む。つまり、症状を妨げ、軽減し、排除しまたは診断するために、十分な応答を被験体に引き起こす組成物に、アルファウイルスレプリコン粒子／ポリペプチド抗原／ポリヌクレオチドベクター／などの量が含まれる。必要とされる正確な量は、数ある因子の中で、処置される被験体；処置されるべき被験体の年齢および一般的な状態；治療される状態の重症度；免疫学的応答の場合には、抗体を合成する被験体の免疫系の能力；所望される防御の程度および選択される粒子抗原、並びにその投与形態に依存して変化される。適切な有効量は、当業者によって容易に決定することができる。したがって、「治療的に有効量」は、日常的な試行を通じて決定し得る相対的に幅広い範囲にある。
例えば、本発明の目的のために、本明細書に記載されている組成物におけるアルファウイルスレプリコン粒子の力価は、好ましくは服用あたり約１０６ＩＵ（感染単位）、より好ましくは服用あたり約１０７ＩＵを超える、およびさらにより好ましくは服用あたり少なくとも約１０８ＩＵである。ポリペプチド抗原の服用量は、マイクログラムからミリグラムの量またはそれを超えて変化し、例えば、約１μｇ／服用〜約１０ｍｇ／服用（それらの間のいずれかの量を含む）、好ましくは約１００μｇ／服用〜約５ｍｇ／服用（それらの間のいずれかの量を含む）、およびより好ましくは約２５０μｇ／服用〜約７５０μｇ／服用（それらの間のいずれかの量を含む）である。ある種の態様では、約０．５ｍｇのタンパク質が、服用あたり投与される。
Ｅ．キット
標的抗原に対する粘膜免疫応答を誘導および増加するためのキットも本明細書に記載される。このようなキットは、好ましくは、標的抗原または免疫学的に活性なその断片に対する免疫応答をプライムするために有用な１以上の抗原をコードする核酸を含むアルファウイルスレプリコン粒子のプライミング量を含む。標的抗原または免疫学的に活性なその断片に対する免疫応答をブーストするために有用な１以上の抗原をコードする核酸を含むアルファウイルスレプリコン粒子を含む有効量のブースティングワクチン組成物もキットに含まれる。このキットは、プライミング組成物、ブースティング組成物またはプライミングとブースティングの両方の１回または複数回の服用量を含むことができる。したがって、特定の態様では、繰返し投与を促進するために、キットは、１つまたは両方の組成物に対する複数のバイアルを含み得て、各バイアルには、各投与時に被験体に投与される服用量が含まれる。
キットの他の成分には、各組成物を投与するためのアプリケーターが含まれる。用語「アプリケーター」とは、該用語が本明細書中で使用されるとき、ヒトまたは獣医的患者へのプライミングおよび／またはブースティング組成物をそれぞれ全身または粘膜に適用するためのデバイスを意味し、限定されないが、皮下注射器、遺伝子銃、噴霧器、点滴器、気管支鏡、坐薬、膣挿入可能な含浸もしくはコーティングされた物質、例えば、タンポン、潅水調製物、膣洗浄用溶液、貯留浣腸調製物、坐剤、または直腸もしくは結腸洗浄用溶液が含まれる。
さらに別の成分には、キットを用いるための取扱説明書が含まれる。キットを用いるための取扱説明書は、キットに使用される抗原による。このキットには、例えば、ともに提供されるアプリケーターを用いて、プライミングおよび／またはブースティング組成物をどのように適用するかに関する取扱説明書も含まれる。一例として、下記の実施例の組成物を採用する粘膜免疫の場合においては、取扱説明書には、プライミングＤＮＡワクチン組成物を粘膜（例えば、鼻内）にどのように投与するかについての指示、続いてブースティング組成物を全身（例えば、筋内）にどのように投与すべきかについての指示が含まれる。
下記の実施例は、例証として提示され、限定を目的とするものではない。
実施例１
キメラアルファウイルスを基礎としたレプリコン粒子を用いて粘膜および全身免疫の組合せ後のアカゲザル（ｒｈｅｓｕｓ ｍａｃａｑｕｅ）における増加した抗ＨＩＶ−ＥＮＶ抗体応答
ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）は、引き続いて世界中に重大な感染を引き起こし、後天性免疫不全症候群へと導く。大部分のＨＩＶ伝染は、膣粘膜を通じて起る。
鼻内（ＩＮ）免疫は、鼻に関連したリンパ系組織および肺だけでなく、げっ歯類において（Ｖａｊｄｙら（２００１）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８４：１６１３−１６１６；Ｇｕｐｔａら（２００５）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７９：７１３５−７１４５；Ｗｕら（１９９２）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６１：３１４−３２２；Ｇｉｕｌｉａｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：１１２３−１１３２；Ｕｇｏｚｚｏｌｉら（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９３：５６３−５７１；Ａｓａｎｕｍａら（１９９８）Ｖａｃｃｉｎｅ １６：１２５７−１２６２；Ｌｏｗｅｌｌら（１９９７）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７５：２９２−３０１）、並びにヒトおよびヒト以外の霊長類（Ｒｕｓｓｅｌｌら（１９９６）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ６４：１２７２−１２８３；Ｉｍａｏｋａ（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：５９５２−５９５８；Ｍｏｌｄｏｖｅａｎｕら（１９９５）Ｖａｃｃｉｎｅ １３：１００６−１０１２；Ｂｅｒｇｑｕｉｓｔら（１９９７）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６５：２６７６−２６８４）において、女性生殖系においても局所的免疫を誘導することが示されている。同様に、げっ歯類およびヒトの膣内および直腸内免疫は、生殖系における局所免疫を誘導もする。例えば、Ｖａｊｄｙら（２００１）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８４：１６１３−１６１６；Ｋｏｚｌｏｗｓｋｉら（１９９９）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１７９ Ｓｕｐｐｌ ３：Ｓ４９３−Ｓ４９８；Ｅｒｉｋｓｓｏｎら（１９９８）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６６：５８８９−５８９６）を参照されたい。
例えば、ＶＥＥ由来のキメラレプリコン粒子は、ＶＥＥ由来のレプリコンＲＮＡおよびＳＩＮ由来の表面糖タンパク質（ＶＥＥ／ＳＩＮ）を有し、ＨＩＶ−１ｇａｇ抗原を発現し、ベクターを用いたマウスの全身（ＩＭ）免疫化後、以前に記載したＳＩＮレプリコン粒子よりも有意に高い全身細胞媒介応答を誘導した（Ｐｅｒｒｉら（２００３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７７：１０３９４−１０４９３）。さらに、ＶＥＥ／ＳＩＮ発現ＨＩＶ−ｇａｇ（ＶＥＥ／ＳＩＮ−ｇａｇ）を用いた粘膜または全身免疫化により、結果として、細胞のＩＦＮγ応答の増大、およびＨＩＶ−ｇａｇを発現しているワクシニアウイルス（Ｇｕｐｔａら（２００５）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７９：７１３５−７１４５）を用いた膣への攻撃（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）に対する良好な防御をもたらした。さらに、タンパク質抗原およびアジュバントを用いた全身免疫後の粘膜は、全身のみまたは粘膜のみの免疫化と比較して、粘膜および全身免疫応答が増大することが示されている（Ｖａｊｄｙら（２００３）Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１０：８６−９４；Ｖａｊｄｙら（２００４）ＡＩＤＳ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ２０：１２６９−１２８１）。
したがって、粘膜プライム−全身ブーストの霊長類モデルを用いたレプリコン粒子の免疫原性を決定するために、下記の実験を行った。
Ａ．材料および方法
１．アルファウイルスレプリコン粒子の調製
ＶＥＥ／ＳＩＮ−Ｅｎｖ ｇｐ１４０およびＳＩＮ−Ｅｎｖ ｇｐ１４０または緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）レプリコン粒子は、Ｐｅｒｒｉら（２００３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７７：１０３９４−１０４９３において以前に記載されるように調製した。簡潔に言えば、レプリコン粒子は、Ｐｏｌｏら（１９９９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６：４５９８−４６０３に記載されるように、レプリコンと２つの欠陥ヘルパー、１つのヘルパーはキャプシドタンパク質を発現し、他方はエンベロープ糖タンパク質Ｅ２およびＥ１を発現する、に対応するインビトロで転写されたＲＮＡ種の同時トランスフェクションによって発生させた。ＢＨＫ−２１細胞におけるレプリコン粒子の力価は、Ｐｅｒｒｉら（２０００）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７４：９８０２−９８０７に記載されるように決定した。
ＨＩＶ Ｅｎｖ ｇｐ１４０またはＧＦＰを発現しているレプリコン粒子は、転写後の２０時間および３０時間で培養上清として回収し、ろ過によって浄化し、陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製した。レプリコン粒子力価は、１ｍｌあたりの感染単位（ＩＵ）として、発現したｇｐ１４０またはＧＦＰの細胞内染色、続く、連続希釈した粒子を用いたＢＨＫ−２１細胞の一晩の感染によって決定した。
２．動物および免疫
４匹の若齢のメスのアカゲザル（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ）は、グループあたりＨＩＶ−ｇｐ１４０をコードするＶＥＥ／ＳＩＮまたはＳＩＮレプリコン粒子の１０８（感染単位）ＩＵで、４週の間隔で３回鼻内（ＩＮＳ）に免疫され、次に、両グループは、１０８ＩＵ ＶＥＥ／ＳＩＮを用いて筋内（ＩＭ）に免疫された。さらに、４匹のメスのアカゲザルは、Ｅｎｖ ｇｐ１４０をコードするＰＬＧ−ＤＮＡの１ｍｇで、４週の間隔で２回鼻内に免疫され、次に、１０８ＩＵ ＶＥＥ／ＳＩＮを用いて筋内に免疫された。また、場合により、これらのグループは、下記（試験設計＃２）に示されるように、オリゴマーｇｐ１４０（ｏ−ｇｐ１４０タンパク質）を用いて２回筋内に免疫された。
Figure 2009511636
 末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を免疫前に回収し、血清、膣洗浄および唾液試料を各免疫後に２週で回収した。
全ての動物は、実験動物ケアの評価および認定のための協会（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ）の基準、並びにデービスの動物ケアおよび使用委員会（Ｄａｖｉｓ’ｓ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）でのカリフォルニア大学の基準に従って、カリフォルニア大学デービス霊長類研究センター（Ｄａｖｉｓ Ｐｒｉｍａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ）に収納した。研究員は、米国学術研究会議（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ）の研究資源協会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）の実験動物のケアおよび使用に関する委員会によって作成された「実験動物のケアおよび使用に関するガイド（Ｇｕｉｄｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌｓ）」を順守した。
３．試料の回収
全てのグループのマカク（ｍａｃａｑｕｅ）は、麻酔下で各免疫前および免疫２週間で採血した。ヘパリン化した全血の全量３０ｍｌを回収した。末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）は、標準的な手法を用いてフィコール（Ｆｉｃｏｌ）分離によって単離し、ＥＬＩＳＰＯＴアッセイに即座に用いられるかまたは後の使用のために凍結された。血漿は、同じ全血３０ｍｌから回収し、−２０℃で保存した。さらに、約１ｍｌの膣洗浄または唾液を麻酔科で各マカクから回収し、ドライアイス上で即座に凍結し、−８０℃で保存した。
４．ＥＬＩＳＡアッセイ
ＨＩＶ−１ ｏ−ｇｐ１４０ ｅｎｖ特異的な血清ＩｇＧの力価は、Ｖａｊｄｙら（２００４）ＡＩＤＳ Ｒｅｓ Ｈｕｍ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ２０（１１）：１２６９−８１およびＶａｊｄｙら（２００４）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．８２（６）：６１７−２７において以前に記載されるように、標準的なＥＬＩＳＡアッセイによって定量した。簡潔に言えば、ＥＬＩＳＡプレート（Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐによる９６ウェルＵ底）を５ｍｇ／ｍｌのｐ５５またはｏ−ｇｐ１４０タンパク質で被覆した。１×ＰＢＳ＋０．０３％ Ｔｗｅｅｎ ２０（Ｓｉｇｍａ）を用いて洗浄後、ウェルをブロックし、連続希釈した試料は、１×ＰＢＳ＋５％ヤギ血清（Ｇｉｂｃｏ Ｂｒｌ）＋０．０３％ Ｔｗｅｅｎ ２０（Ｓｉｇｍａ）から作製されたアッセイ希釈剤に添加された。血清標準は、定量の目的で各アッセイに含められた。試料および標準血清は、３７℃で１時間インキュベートされ、ＰＢＳ／０．０３％ Ｔｗｅｅｎで洗浄された。次に、試料をヤギ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｃａｌｔａｇ）の１：４０，０００希釈でインキュベートされ、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ−Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ ａｎｄ Ｐｅｒｒｙ）で発色させ、２ＮのＨＣｌで停止させた。各ウェルの最適密度は、Ｔｉｔｅｒｔｅｋを用いて４５０ｎｍで測定した。
膣洗浄および唾液試料は、Ｇｉｕｌａｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：１１２３−１１３２、およびＶａｊｄｙら（２００４）ＡＩＤＳ Ｒｅｓ Ｈｕｍ Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ ２０（１１）：１２６９−８１、およびＶａｊｄｙら（２００４）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．８２（６）：６１７−２７において以前に記載されているように、バイオルミネッセンス免疫吸着アッセイ（ＢＩＡ）を用いて、全体について、およびｇｐ１４０特異的なＩｇＡおよびＩｇＧについてアッセイされた。簡潔に言うと、ＥＬＩＳＡプレート（Ｄｙｎａｔｅｃｈから入手されるＭｉｃｒｏＬｉｔｅ）をはじめにｏ−ｇｐ１４０抗原（５ｍｇ／ｍｌ）またはヤギ抗アカゲザルＩｇＡまたはＩｇＧを用いて一晩被覆した。ブロック（５％ヤギ血清、２５ｍＭ Ｔｒｉｓ、１０ｍＭ ＥＧＴＡ、１５０ｍＭ ＫＣｌ、２ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、０．３％ Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ７．５）した後、プレートにブロッキングバッファー中の１：３に連続希釈した膣洗浄試料を添加した。プレートを１：１０００に希釈したヤギ抗アカゲザルＩｇＡまたはＩｇＧビオチン結合体（被覆抗体とは異なった供給原からである）を用いて発色させた。
次に、プレートを１：５００に希釈したストレプトアビジン−クラゲエクオリン結合体（ＳｅａＬｉｔｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ジョージア州ボガート）とともにインキュベートした。ルミネッセンスは、１０ｍＭ酢酸カルシウムで開始し、ルミノメーター（Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＭＬ３０００）を用いて測定した。定量は、３秒に対して積分された総発光を表す相対的な光単位数（任意の単位）に基づいた。力価は、平均のバックグラウンドを越えた少なくとも２つの標準偏差におけるカットオフ値に対するＲＬＵデータのログから直線的に外挿したログの希釈値を表す。
５．ＶＥＥ、ＳＩＮまたはＶＥＥ／ＳＩＮを用いたアカゲザルのエクスビボ（ｅｘ ｖｉｖｏ）感染
末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）は、未処置のアカゲザルから調製された。細胞は、１％ＲＰＭＩの５０μｌ中に２０×１０６／ｍｌで再懸濁させ、次に、１：１００の感染多重度（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ：ＭＯＩ）で、緑色蛍光遺伝子（ＧＦＰ）をそれぞれ発現している２５０μｌのＶＥＥ、または５００μｌのＶＥＥ／ＳＩＮもしくはＳＩＮを用いて感染させた。次に、細胞および粒子は、３７℃で振とうしながら９０分間インキュベートし、２４ウェルプレートに移し、一晩３７℃でインキュベートした。ＢＨＫ細胞を正の対照として用いた。翌日、細胞は、マウス抗ヒトＣＤ１４、ＣＤ１１ｂおよびＣＤ２０（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，カリフォルニア州サンディエゴ）を用いて表面を染色し、ＦＡＣＳによって分析した。
６．統計学的分析
統計学的分析は、マイクロソフトのエクセルソフトウェアで使用可能なスチューデントＴ検定を用いて行った。Ｆ検定は、まず、２つのグループの間での個々のログ値の分散が等しいかどうかについて測定するために行い、次に、スチューデントｔ検定（等分散を仮定する両側、二標本）は、９５％の信頼区間について行った。
Ｂ．結果
１．抗体応答：ＩｇＧ
雌性アカゲザルを上述したように免疫した。
１．Ａ．ＶＥＥ／ＳＩＮ対ＳＩＮレプリコン粒子
３回のＩＮ免疫後、ＶＥＥ／ＳＩＮで免疫した４匹のアカゲザルのうち３匹が抗体陽性となり、ＳＩＮで免疫した４匹のアカゲザルのうち２匹が抗体陽性となったが、有意差は、２つのグループ間で識別できなかった（表１）。興味深いことに、ＶＥＥ／ＳＩＮキメラレプリコン粒子を用いたＩＮ免疫は、ＳＩＮを用いたＩＮ免疫と比較して、より高い膣および唾液の抗ＨＩＶ−ｅｎｖ ＩｇＧ応答を誘導した（表１）。
表１および２に示されるように、抗ｇｐ１４０血清ＩｇＧ応答は、ＳＩＮまたはＶＥＥ／ＳＩＮを用いた鼻内プライミング免疫後に誘導されたが、ＶＥＥ／ＳＩＮを用いた筋内ブースティング免疫後に増大した。さらに、抗ｇｐ１４０膣ＩｇＧ応答は、ＳＩＮまたはＶＥＥ／ＳＩＮを用いた鼻内プライミング免疫後に誘導されたが、ＶＥＥ／ＳＩＮを用いた筋内ブースティング免疫後に増大しなかった。
Figure 2009511636
 １．Ｂ．試験設計＃２
さらに、追加のタンパク質ブーストを受けたグループのＩｇＧ力価も血清（図４、５および６）および膣洗浄（図７、８および９）から測定した。
これらの結果は、抗ｇｐ１４０血清ＩｇＧ応答が、レプリコン粒子を用いたプライミングＩＮ／Ｉｍ免疫後に、ＭＦ５９中のｏ−ｇｐ１４０タンパク質を用いた筋内ブースティング免疫ね気後に有意に増大した。同様に、抗ｇｐ１４０膣ＩｇＧ応答は、レプリコン粒子を用いたプライミングＩＮ／ＩＭ免疫後に、ＭＦ５９中のｏ−ｇｐ１４０タンパク質を用いた筋内ブースティング免疫後に有意に増大した。
２．抗体応答：ＩｇＡ
２．Ａ．ＶＥＥ／ＳＩＮレプリコン粒子
さらに、ＶＥＥ／ＳＩＮ対ＳＩＮレプリコン粒子を用いた３回の鼻内（ＩＮ）免疫、および続くＶＥＥ／ＳＩＮ粒子を用いた１回の筋内免疫後に、抗体応答は、両方のグループにおいて有意に増大した。ＶＥＥ／ＳＩＮレプリコン粒子で予めＩＮ免疫したアカゲザルは、ＳＩＮ粒子で予めＩＮ免疫したアカゲザルと比較して、有意に高い血清、並びに膣および唾液ＩｇＧ抗体応答を有した（表２）。特に、抗ｇｐ１４０血清ＩｇＡ応答は、ＳＩＮまたはＶＥＥ／ＳＩＮを用いた鼻内プライミング免疫後に誘導され、ＶＥＥ／ＳＩＮを用いた筋内ブースティング免疫後に増大した。さらに、抗ｇｐ１４０膣および唾液ＩｇＡ応答は、ＳＩＮまたはＶＥＥ／ＳＩＮを用いた鼻内プライミング免疫後に誘導されたｇ、ＶＥＥ／ＳＩＮを用いた筋内ブースティング免疫後に増大しなかった。
Figure 2009511636
 これらの結果は、ＩＮプライムし、およびＩＭブーストした動物における血清および粘膜ＩｇＧ応答が、ＩＭだけによって免疫された動物よりも強いことを示す。さらに、ＶＥＥ／ＳＩＮレプリコン粒子を用いたＩＮプライミングおよびＩＭブースティングは、結果として、ＳＩＮを用いたＩＮプライミング、その後のＶＥＥ／ＳＩＮ粒子を用いたＩＭブースティングよりも高い力価をもたらした。
３．Ｂ．試験設計＃２：ＩｇＡ
さらに、追加のタンパク質ブーストを受けたグループの血清（図１０、１１、１２）、膣洗浄（図１３、１４、１５）および唾液（図１６、１７、１８）由来のＩｇＡ力価も決定した。
抗ｇｐ１４０血清および膣ＩｇＡ応答は、レプリコン粒子を用いたプライミングＩＮ／ＩＭ免疫後、ＭＦ５９中のｏ−ｇｐ１４０タンパク質を用いた筋内ブースティング免疫後に有意に増大した。しかしながら、抗ｇｐ１４０唾液ＩｇＡ応答は、レプリコン粒子を用いたプライミングＩＮ／ＩＭ免疫後、ＭＦ５９中のｏ−ｇｐ１４０タンパク質を用いた筋内ブースティング免疫後に有意に増大しなかった。
４．ＰＢＭＣのエクスビボ感染と、ＶＥＥ、ＳＩＮおよびＶＥＥ／ＳＩＮ感染ＡＰＣとの比
特徴付け
ＶＥＥ／ＳＩＮおよびＳＩＮは、同じエンベロープ糖タンパク質構造を有するため、ＶＥＥ／ＳＩＮ対ＳＩＮの免疫増加についての機構として、標的細胞を感染するそれらの能力の可能性を排除することが望まれる。したがって、種々の細胞群を感染するレプリコン粒子の能力を測定するために、未処置のアカゲザル由来のＰＢＭＣをインビトロで、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）レポーターを発現しているＶＥＥ、ＶＥＥ／ＳＩＮまたはＳＩＮレプリコン粒子を用いて感染させた。
ＶＥＥレプリコン粒子は、ＶＥＥ／ＳＩＮ（ＶＥＥ対ＶＥＥ／ＳＩＮ、ｐ＜０．０２９）またはＳＩＮ（ＶＥＥ対ＳＩＮ、Ｐ＜０．００００５）と比較して高い割合の細胞を感染させたが、ＶＥＥ／ＳＩＮおよびＳＩＮレプリコン粒子は、同程度の割合の細胞を感染させた（図１）。さらに、図２に示されるように、ＣＤ１４＋単球系細胞は、レプリコン粒子の主要な標的であった。ＶＥＥレプリコン粒子は、相対的に低いレベルでＣＤ１１ｂ＋単球群を感染させた。ＣＤ２０＋Ｂ細胞群は、レプリコン粒子のいずれによっても感染されなかった。
これらのデータは、ＶＥＥ／ＳＩＮおよびＳＩＮレプリコン粒子が、同じ割合の細胞を感染させ、ＰＢＭＣ中のそれらの主要な標的は、ＣＤ１４＋単球系細胞であることを示す。したがって、ＶＥＥ／ＳＩＮ対ＳＩＮの免疫原性の増大は、それらの標的細胞群を感染させるそれらの能力における違いにはよらないようである。
５．タンパク質発現
同じ割合の細胞がＶＥＥ／ＳＩＮおよびＳＩＮを用いて感染されたので、コードされたタンパク質のより高い発現がＶＥＥ／ＳＩＮ対ＳＩＮの良好な免疫原性を説明できるかどうかについても測定した。
ＧＦＰを発現しているＶＥＥ／ＳＩＮ、ＳＩＮおよびＶＥＥを用いたＰＢＭＣのエクスビボ感染後、ＶＥＥ／ＳＩＮは、ＳＩＮ（ｐ＜０．００２）と比較して、有意に高いＧＦＰレベルを発現した（図３）。
これらのデータは、ＶＥＥ／ＳＩＮ対ＳＩＮの良好な免疫原性が、感染した標的細胞において対象とする遺伝子のより高い強度の発現による可能性があることを指示する。
したがって、本明細書に記載されている実験は、粘膜プライミングおよび非経口ブースティング免疫が被験体における免疫応答を刺激することを示す。
図１は、ＶＥＥ−ＧＦＰレプリコン粒子（左カラム）；ＳＩＮ−ＧＦＰレプリコン粒子（中央カラム）；またはＶＥＥ／ＳＩＮ−ＧＦＰレプリコン粒子（右カラム）で感染させた末梢血単核細胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ：ＰＭＢＣ）のパーセントを示すグラフである。図２は、ＶＥＥ−ＧＦＰレプリコン粒子（白色のバー）；ＳＩＮ−ＧＦＰレプリコン粒子（黒色のバー）；またはＶＥＥ／ＳＩＮ−ＧＦＰレプリコン粒子（灰色のバー）によってＰＢＭＣのＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１４＋およびＣＤ２０＋の感染を示すグラフである。図３は、ＶＥＥ−ＧＦＰレプリコン粒子（左カラム）；ＳＩＮ−ＧＦＰレプリコン粒子（中央カラム）；またはＶＥＥ／ＳＩＮ−ＧＦＰレプリコン粒子（右カラム）を含むＰＢＭＣにおけるＧＦＰの発現を示すグラフである。 図４は、試験設計＃２のグループ１の４匹の動物のｇｐ１４０ＩｇＧ血清力価を示すグラフである。 図５は、試験設計＃２のグループ２の４匹の動物のｇｐ１４０ＩｇＧ血清力価を示すグラフである。 図６は、試験設計＃２のグループ３の４匹の動物のｇｐ１４０ＩｇＧ血清力価を示すグラフである。 図７は、試験設計＃２のグループ１の４匹の動物の膣洗浄液におけるｇｐ１４０ＩｇＧを示すグラフである。 図８は、試験設計＃２のグループ２の４匹の動物の膣洗浄液におけるｇｐ１４０ＩｇＧを示すグラフである。 図９は、試験設計＃２のグループ３の４匹の動物の膣洗浄液におけるｇｐ１４０ＩｇＧを示すグラフである。 図１０は、試験設計＃２のグループ１の４匹の動物のｇｐ１４０ＩｇＡ血清力価を示すグラフである。 図１１は、試験設計＃２のグループ２の４匹の動物のｇｐ１４０ＩｇＡ血清力価を示すグラフである。 図１２は、試験設計＃２のグループ３の４匹の動物のｇｐ１４０ＩｇＡ血清力価を示すグラフである。 図１３は、試験設計＃２のグループ１の４匹の動物の膣洗浄液におけるｇｐ１４０ＩｇＡを示すグラフである。 図１４は、試験設計＃２のグループ２の４匹の動物の膣洗浄液におけるｇｐ１４０ＩｇＡを示すグラフである。 図１５は、試験設計＃２のグループ３の４匹の動物の膣洗浄液におけるｇｐ１４０ＩｇＡを示すグラフである。 図１６は、試験設計＃２のグループ１の４匹の動物の唾液におけるｇｐ１４０ＩｇＡ力価を示すグラフである。 図１７は、試験設計＃２のグループ２の４匹の動物の唾液におけるｇｐ１４０ＩｇＡ力価を示すグラフである。 図１８は、試験設計＃２のグループ３の４匹の動物の唾液におけるｇｐ１４０ＩｇＡ力価を示すグラフである。

Claims (27)

  1. 被験体において免疫応答を生じさせるための１以上のアルファウイルスレプリコン粒子を含む第１免疫原性組成物の粘膜投与、および１以上のアルファウイルスレプリコン粒子を含む第２免疫原性組成物の全身投与のための薬剤の製造における該第１免疫原性組成物および第２免疫原性組成物の使用であって、該第１および第２免疫原性組成物のアルファウイルスレプリコン粒子が抗原をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む、使用。
  2. 被験体において免疫応答を生じさせるための薬剤の製造における、１以上のアルファウイルスレプリコン粒子を含む第１免疫原性組成物、および１以上のアルファウイルスレプリコン粒子を含む第２免疫原性組成物の使用であって、該第１免疫原性組成物が粘膜投与され、および第２免疫原性組成物が別々にまたは連続して粘膜投与され、該第１および第２免疫原性組成物のアルファウイルスレプリコン粒子が抗原をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む使用。
  3. 被験体において免疫応答を生じさせるための粘膜投与のための薬剤の製造における、１以上のアルファウイルスレプリコン粒子を含む第１免疫原性組成物の使用であって、該被験体が連続して、１以上のアルファウイルスレプリコン粒子を含む第２免疫原性組成物を全身投与され、該第１および第２免疫原性組成物のアルファウイルスレプリコン粒子が抗原をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む使用。
  4. 被験体において免疫応答を生じさせるための全身投与のための薬剤の製造における、１以上のアルファウイルスレプリコン粒子を含む第２免疫原性組成物の使用であって、該被験体がすでに１以上のアルファウイルスレプリコン粒子を含む第１免疫原性組成物を投与されていて、該第１および第２免疫原性組成物のアルファウイルスレプリコン粒子が抗原をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む使用。
  5. 別々にまたは連続的に使用して被験体における免疫応答を生じさせるための、
    （ａ）１以上のアルファウイルスレプリコン粒子を含む粘膜投与のための第１免疫原性組成物であって、ここで、該アルファウイルスレプリコン粒子は抗原をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む、第１免疫原性組成物；および
    （ｂ）１以上のアルファウイルスレプリコン粒子を含む全身投与のための第２免疫原性組成物であって、ここで、該アルファウイルスレプリコン粒子は抗原をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む、第２免疫原性組成物
    を含む、複合調製物として生成物。
  6. （ａ）１以上のアルファウイルスレプリコン粒子を含む第１免疫原性組成物を被験体に粘膜投与する工程であって、ここで、該アルファウイルスレプリコン粒子は抗原をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む、工程；および
    （ｂ）１以上のアルファウイルスレプリコン粒子を含む第２免疫原性組成物を該被験体に全身投与する工程であって、ここで、該アルファウイルスレプリコン粒子は抗原をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む、工程
    を含み、それによって該被験体において免疫応答を誘導する、該被験体における免疫応答を生じさせるための方法。
  7. 前記粘膜投与が、鼻内、直腸内または膣内である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用、生成物または方法。
  8. 前記全身投与が、筋内である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用、生成物または方法。
  9. 前記被験体が、前記第１免疫原性組成物を少なくとも２回投与される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用、生成物または方法。
  10. 前記被験体が、前記第１免疫原性組成物を少なくとも３回投与される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の使用、生成物または方法。
  11. 前記被験体が、前記第２免疫原性組成物を少なくとも２回投与される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の使用、生成物または方法。
  12. 少なくとも１つのアルファウイルスレプリコン粒子が、シンドビス（Ｓｉｎｄｂｉｓ）（ＳＩＮ）、ベネズエラウマ脳炎（Ｖｅｎｅｚｕｅｌａｎ ｅｑｕｉｎｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ）（ＶＥＥ）、およびセムリキ森林熱ウイルス（Ｓｅｍｌｉｋｉ Ｆｏｒｅｓｔ ｖｉｒｕｓ）（ＳＦＶ）からなる群から選択されるアルファウイルス由来である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用、生成物または方法。
  13. 少なくとも１つのアルファウイルスレプリコン粒子が、キメラＶＥＥ／ＳＩＮレプリコン粒子である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の使用、生成物または方法。
  14. 少なくとも１つの抗原が、ウイルス抗原、細菌性抗原および腫瘍抗原からなる群から選択される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の使用、生成物または方法。
  15. 前記ウイルス抗原が、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ）（ＲＳＶ）、パラインフルエンザウイルス（ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ）（ＰＩＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ｈｕｍａｎ Ｃ ｖｉｒｕｓ）（ＨＣＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ）（ＨＩＶ）、単純疱疹ウイルス（ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ）（ＨＳＶ）、ヒトパピローマウイルス（ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａ ｖｉｒｕｓ）（ＨＰＶ）、およびＢ型肝炎ウイルス（ｈｕｍａｎ Ｂ ｖｉｒｕｓ）（ＨＢＶ）からなる群から選択されるウイルス由来である、請求項１４に記載の使用、生成物または方法。
  16. 前記第１および第２免疫原性組成物が、同一抗原を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の使用、生成物または方法。
  17. 前記第１および第２免疫原性組成物が、異なった抗原を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の使用、生成物または方法。
  18. 前記異なった抗原が、同じ病原体由来である、請求項１７に記載の使用、生成物または方法。
  19. 前記異なった抗原が、異なった病原体由来である、請求項１７に記載の使用、生成物または方法。
  20. 前記第１および／または第２免疫原性組成物が、追加の輸送ベヒクルをさらに含む、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の使用、生成物または方法。
  21. 前記第１および／または第２免疫原性組成物が、アジュバントをさらに含む、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の使用、生成物または方法。
  22. 前記第１および／または第２免疫原性組成物が、１以上のポリペプチド抗原をさらに含む、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の使用、生成物または方法。
  23. 前記免疫応答が、全身免疫応答、粘膜免疫応答、および全身と粘膜の両方の免疫応答からなる群から選択される、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の使用、生成物または方法。
  24. 前記第１免疫原性組成物が、前記第２免疫原性組成物の前に投与される、請求項１、２および５〜２３のいずれか１項に記載の使用、生成物または方法。
  25. 前記第２免疫原性組成物が、前記第１免疫原性組成物の前に投与される、請求項１、２および５〜２３のいずれか１項に記載の使用、生成物または方法。
  26. 被験体に投与するための１以上のポリペプチド抗原、または１以上の抗原をコードする１以上のポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の使用、生成物または方法。
  27. 前記ポリヌクレオチドが、アルファウイルスレプリコンベクター、ポックスウイルスレプリコン粒子、ポックスウイルスレプリコンベクター、アデノウイルスレプリコン粒子、アデノウイルスレプリコンベクターまたは前述のいずれかの組合せを介して投与される、請求項２６に記載の使用、生成物または方法。
JP2008536763A 2005-10-18 2006-10-17 アルファウイルスレプリコン粒子による粘膜免疫および全身免疫 Pending JP2009511636A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US72773105P 2005-10-18 2005-10-18
PCT/US2006/040699 WO2007047749A1 (en) 2005-10-18 2006-10-17 Mucosal and systemic immunizations with alphavirus replicon particles

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2009511636A true JP2009511636A (ja) 2009-03-19
JP2009511636A5 JP2009511636A5 (ja) 2009-10-08

Family

ID=37758614

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2008536763A Pending JP2009511636A (ja) 2005-10-18 2006-10-17 アルファウイルスレプリコン粒子による粘膜免疫および全身免疫

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20110223197A1 (ja)
EP (2) EP1945247A1 (ja)
JP (1) JP2009511636A (ja)
CN (1) CN101355960A (ja)
CA (1) CA2626253A1 (ja)
WO (1) WO2007047749A1 (ja)
ZA (1) ZA200804098B (ja)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2517869T3 (es) 2006-09-12 2014-11-04 Alphavax, Inc. Partículas de replicones de alfavirus emparejadas con antígenos proteicos como adyuvantes inmunológicos
US20100322965A1 (en) * 2008-01-11 2010-12-23 Rose John K Viral vaccine vectors
WO2011145108A2 (en) * 2010-05-15 2011-11-24 Serum Institute Of India Ltd. Purification of capsular polysaccharides
US9770463B2 (en) * 2010-07-06 2017-09-26 Glaxosmithkline Biologicals Sa Delivery of RNA to different cell types
PT2590676T (pt) * 2010-07-06 2016-11-04 Glaxosmithkline Biologicals Sa Partículas de transferência de tipo virião para moléculas de arn auto-replicante
EP2590626B1 (en) 2010-07-06 2015-10-28 GlaxoSmithKline Biologicals SA Liposomes with lipids having an advantageous pka-value for rna delivery
ES2646669T3 (es) 2010-07-06 2017-12-14 Glaxosmithkline Biologicals Sa Procedimientos de aumento de una respuesta inmunitaria mediante el suministro de ARN
WO2012006369A2 (en) 2010-07-06 2012-01-12 Novartis Ag Immunisation of large mammals with low doses of rna
PT4043040T (pt) 2010-08-31 2023-03-24 Glaxosmithkline Biologicals Sa Lipossomas pequenos para entrega de arn que codifica um imunogénio
PL3981427T3 (pl) 2010-08-31 2022-09-19 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Pegylowane liposomy do dostarczania rna kodującego immunogen
TR201903651T4 (tr) 2010-10-11 2019-04-22 Glaxosmithkline Biologicals Sa Antijen uygulama platformları.
JP2014520806A (ja) 2011-07-06 2014-08-25 ノバルティス アーゲー Ｒｎａ分子の送達のための有用なｎ：ｐ比を有するリポソーム
CA2840989A1 (en) 2011-07-06 2013-01-10 Novartis Ag Immunogenic combination compositions and uses thereof
CN102988966A (zh) * 2011-09-09 2013-03-27 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心 用于激发特异性粘膜免疫反应的方法、疫苗组合和试剂盒
EP3143144A4 (en) * 2014-05-16 2017-12-20 Yale University VIRUS LIKE VESICLES (VLVs) BASED VACCINES TO PREVENT OR TREAT CHRONIC HEPATITIS B VIRUS (HBV) INFECTION
AU2015259472A1 (en) * 2014-05-16 2016-11-10 Yale University Evolution of high-titer virus-like vesicles for vaccine applications
US9814769B2 (en) 2014-09-30 2017-11-14 Qatar University Vaccines against pathogenic Escherichia coli and methods of using the same
AU2017372731B2 (en) 2016-12-05 2024-05-23 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for enhancing gene expression
AU2018266705B2 (en) 2017-05-08 2023-05-04 Gritstone Bio, Inc. Alphavirus neoantigen vectors
CA3080425A1 (en) * 2017-11-06 2019-05-09 Intervet International B.V. Rabies virus vaccine
US11883476B2 (en) 2017-12-04 2024-01-30 Intervet Inc. Canine lyme disease vaccine
MX2020007077A (es) 2018-01-04 2020-10-28 Iconic Therapeutics Inc Anticuerpos anti-factor tisular, conjugados anticuerpo-farmaco y metodos relacionados.
AU2019210189A1 (en) * 2018-01-19 2020-08-06 Janssen Pharmaceuticals, Inc. Induce and enhance immune responses using recombinant replicon systems
CA3140019A1 (en) 2019-05-30 2020-12-03 Gritstone Bio, Inc. Modified adenoviruses
WO2022032196A2 (en) 2020-08-06 2022-02-10 Gritstone Bio, Inc. Multiepitope vaccine cassettes

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005502591A (ja) * 2001-01-12 2005-01-27 カイロン コーポレイション 核酸粘膜免疫

Family Cites Families (122)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5360897A (en) 1981-08-31 1994-11-01 The University Of Rochester Immunogenic conjugates of streptococcus pneumonial capsular polymer and toxin or in toxiad
US4603112A (en) 1981-12-24 1986-07-29 Health Research, Incorporated Modified vaccinia virus
US4769330A (en) 1981-12-24 1988-09-06 Health Research, Incorporated Modified vaccinia virus and methods for making and using the same
SE8205892D0 (sv) 1982-10-18 1982-10-18 Bror Morein Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin
US4708871A (en) 1983-03-08 1987-11-24 Commonwealth Serum Laboratories Commission Antigenically active amino acid sequences
IL73534A (en) 1983-11-18 1990-12-23 Riker Laboratories Inc 1h-imidazo(4,5-c)quinoline-4-amines,their preparation and pharmaceutical compositions containing certain such compounds
US5324513A (en) 1984-03-07 1994-06-28 Institut Pasteur Composition useful for the fabrication of vaccines
US5171568A (en) 1984-04-06 1992-12-15 Chiron Corporation Recombinant herpes simplex gb-gd vaccine
US6090406A (en) 1984-04-12 2000-07-18 The Liposome Company, Inc. Potentiation of immune responses with liposomal adjuvants
US5916588A (en) 1984-04-12 1999-06-29 The Liposome Company, Inc. Peptide-containing liposomes, immunogenic liposomes and methods of preparation and use
US5098704A (en) 1984-06-18 1992-03-24 Chiron Corporation Hepatitis surface antigen particle vaccine
US4722840A (en) 1984-09-12 1988-02-02 Chiron Corporation Hybrid particle immunogens
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
DE3650699T2 (de) 1985-03-15 1999-04-15 Antivirals Inc Immunotestmittel für Polynukleotid und Verfahren
GB8508845D0 (en) 1985-04-04 1985-05-09 Hoffmann La Roche Vaccinia dna
EP0251575B2 (en) 1986-06-17 2002-11-13 Chiron Corporation Hepatitis delta diagnostics and vaccines, their preparation and use
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
WO1989001973A2 (en) 1987-09-02 1989-03-09 Applied Biotechnology, Inc. Recombinant pox virus for immunization against tumor-associated antigens
NZ241926A (en) 1988-08-25 1993-08-26 Liposome Co Inc Immunisation dosage form comprising a salt of an organic acid derivative of a sterol and an antigen
ATE112687T1 (de) 1988-09-13 1994-10-15 Chiron Corp Mutanten des hiv-1 hüllproteins mit fehlenden hypervariabelen domänen.
US5238944A (en) 1988-12-15 1993-08-24 Riker Laboratories, Inc. Topical formulations and transdermal delivery systems containing 1-isobutyl-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amine
DE69032284T2 (de) 1989-03-21 1998-10-08 Vical Inc Expression von exogenen polynukleotidsequenzen in wirbeltieren
US4929624A (en) 1989-03-23 1990-05-29 Minnesota Mining And Manufacturing Company Olefinic 1H-imidazo(4,5-c)quinolin-4-amines
DK0474727T3 (da) 1989-05-19 1998-01-12 Genentech Inc HER2 ekstracellulært domæne
JPH0832638B2 (ja) 1989-05-25 1996-03-29 カイロン コーポレイション サブミクロン油滴乳剤を含んで成るアジュバント製剤
DK0444181T3 (da) 1989-08-04 2002-02-25 Schering Ag C-erbB-2 eksternt domæne: gp75
US6770283B1 (en) 1990-12-13 2004-08-03 Bioption Ab DNA expression systems based on alphaviruses
US5389640A (en) 1991-03-01 1995-02-14 Minnesota Mining And Manufacturing Company 1-substituted, 2-substituted 1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amines
US5268376A (en) 1991-09-04 1993-12-07 Minnesota Mining And Manufacturing Company 1-substituted 1H-imidazo[4,5-c]quinolin-4-amines
US5266575A (en) 1991-11-06 1993-11-30 Minnesota Mining And Manufacturing Company 2-ethyl 1H-imidazo[4,5-ciquinolin-4-amines
WO1993010814A1 (en) 1991-11-29 1993-06-10 Viagene, Inc. Anti-cancer immunotherapeutic vector constructs
IT1253009B (it) 1991-12-31 1995-07-10 Sclavo Ricerca S R L Mutanti immunogenici detossificati della tossina colerica e della tossina lt, loro preparazione ed uso per la preparazione di vaccini
GB9513371D0 (en) 1995-06-30 1995-09-06 Biocine Spa Immunogenic detoxified mutant toxins
WO1993018150A1 (en) 1992-03-02 1993-09-16 Biocine S.P.A. Helicobacter pylori proteins useful for vaccines and diagnostics
JP3755890B2 (ja) 1992-06-25 2006-03-15 スミスクライン・ビーチャム・バイオロジカルス（ソシエテ・アノニム） アジュバント含有ワクチン組成物
US5395937A (en) 1993-01-29 1995-03-07 Minnesota Mining And Manufacturing Company Process for preparing quinoline amines
US5869445A (en) 1993-03-17 1999-02-09 University Of Washington Methods for eliciting or enhancing reactivity to HER-2/neu protein
US5801005A (en) 1993-03-17 1998-09-01 University Of Washington Immune reactivity to HER-2/neu protein for diagnosis of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated
EP0812593B8 (en) 1993-03-23 2010-11-10 SmithKline Beecham Biologicals S.A. Vaccine compositions containing 3-0 deacylated monophosphoryl lipid a
US5352784A (en) 1993-07-15 1994-10-04 Minnesota Mining And Manufacturing Company Fused cycloalkylimidazopyridines
EP0708772B1 (en) 1993-07-15 2000-08-23 Minnesota Mining And Manufacturing Company IMIDAZO [4,5-c]PYRIDIN-4-AMINES
US6015686A (en) 1993-09-15 2000-01-18 Chiron Viagene, Inc. Eukaryotic layered vector initiation systems
GB9326174D0 (en) 1993-12-22 1994-02-23 Biocine Sclavo Mucosal adjuvant
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6239116B1 (en) 1994-07-15 2001-05-29 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US6429199B1 (en) 1994-07-15 2002-08-06 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules for activating dendritic cells
AUPM873294A0 (en) 1994-10-12 1994-11-03 Csl Limited Saponin preparations and use thereof in iscoms
US5482936A (en) 1995-01-12 1996-01-09 Minnesota Mining And Manufacturing Company Imidazo[4,5-C]quinoline amines
IL117483A (en) 1995-03-17 2008-03-20 Bernard Brodeur MENINGITIDIS NEISSERIA shell protein is resistant to proteinase K.
UA56132C2 (uk) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
US5792462A (en) 1995-05-23 1998-08-11 University Of North Carolina At Chapel Hill Alphavirus RNA replicon systems
GB9513261D0 (en) 1995-06-29 1995-09-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
GB9603314D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Biocine Spa Immunogenic detoxified mutant toxins
WO1997037026A1 (en) 1996-04-02 1997-10-09 Smithkline Beecham Corporation Novel compounds
JP4383530B2 (ja) 1996-04-05 2009-12-16 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス， インコーポレーテッド 細胞巨大分子合成の阻害が減少したアルファウイルスベクター
US6451592B1 (en) 1996-04-05 2002-09-17 Chiron Corporation Recombinant alphavirus-based vectors with reduced inhibition of cellular macromolecular synthesis
US6458560B1 (en) 1996-04-05 2002-10-01 Chiron Corporation Recombinant alphavirus-based vectors with reduced inhibition of cellular macromolecular synthesis
EP0934336A1 (en) 1996-05-14 1999-08-11 Smithkline Beecham Corporation Novel compounds
DE19630390A1 (de) 1996-07-26 1998-01-29 Chiron Behring Gmbh & Co Proteine, insbesondere Membranproteine von Helicobacter pylori, ihre Herstellung und Verwendung
WO1998018931A2 (en) 1996-10-31 1998-05-07 Human Genome Sciences, Inc. Streptococcus pneumoniae polynucleotides and sequences
US5842723A (en) 1996-11-25 1998-12-01 Burex Automotive America, Inc. Flexible connection arrangement for connecting a pipe of an exhaust system to an engine, especially in a motor vehicle
EP1005368B1 (en) 1997-03-10 2009-09-02 Ottawa Hospital Research Institute Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide in combination with alum as adjuvants
US6818222B1 (en) 1997-03-21 2004-11-16 Chiron Corporation Detoxified mutants of bacterial ADP-ribosylating toxins as parenteral adjuvants
GB9712347D0 (en) 1997-06-14 1997-08-13 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
US6800744B1 (en) 1997-07-02 2004-10-05 Genome Therapeutics Corporation Nucleic acid and amino acid sequences relating to Streptococcus pneumoniae for diagnostics and therapeutics
US6977074B2 (en) 1997-07-10 2005-12-20 Mannkind Corporation Method of inducing a CTL response
JP4426091B2 (ja) 1997-09-05 2010-03-03 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム サポニンを含有する水中油型エマルション
US6756361B1 (en) 1997-10-14 2004-06-29 Nabi Enterococcus antigens and vaccines
CA2671261A1 (en) 1997-11-06 1999-05-20 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Neisserial antigens
AU762606B2 (en) 1997-11-21 2003-06-26 Genset S.A. Chlamydia pneumoniae genomic sequence and polypeptides, fragments thereof and uses thereof, in particular for the diagnosis, prevention and treatment of infection
JP4058567B2 (ja) 1997-11-28 2008-03-12 大塚製薬株式会社 Ｔｓａ３０５遺伝子
GB9725084D0 (en) 1997-11-28 1998-01-28 Medeva Europ Ltd Vaccine compositions
ATE446368T1 (de) 1998-01-14 2009-11-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Antigene aus neisseria meningitidis
AU3311599A (en) 1998-02-25 1999-09-15 Iomai Corporation Use of skin penetration enhancers and barrier disruption agents to enhance the transcutaneous immune response induced by adp-ribosylating exotoxin
GB9807721D0 (en) 1998-04-08 1998-06-10 Chiron Spa Antigen
KR20010042573A (ko) 1998-04-09 2001-05-25 장 스테판느 애쥬번트 조성물
EP2261355A3 (en) 1998-05-01 2012-01-11 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Neisseria meningitidis antigens and compositions
GB9810193D0 (en) 1998-05-12 1998-07-08 Smithkline Beecham Biolog Novel compounds
ES2235489T3 (es) 1998-06-01 2005-07-01 Chiron Corporation Uso de polimeros de acido hialuronico para la administracion por las mucosas de antigenos y coadyuvantes de vacunas.
US6562798B1 (en) 1998-06-05 2003-05-13 Dynavax Technologies Corp. Immunostimulatory oligonucleotides with modified bases and methods of use thereof
US6105694A (en) 1998-06-29 2000-08-22 Baker Hughes Incorporated Diamond enhanced insert for rolling cutter bit
GB9817052D0 (en) 1998-08-05 1998-09-30 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
JP2004511201A (ja) 1998-10-09 2004-04-15 カイロン　コーポレイション ナイセリアゲノム配列およびそれらの使用方法
AU750587B2 (en) 1998-10-16 2002-07-25 Smithkline Beecham Biologicals (Sa) Adjuvant systems and vaccines
CA2350775A1 (en) 1998-11-12 2000-05-18 The Regents Of The University Of California Chlamydia pneumoniae genome sequence
GB9828000D0 (en) 1998-12-18 1999-02-10 Chiron Spa Antigens
US6602705B1 (en) 1998-12-31 2003-08-05 Chiron Corporation Expression of HIV polypeptides and production of virus-like particles
US6329201B1 (en) 1998-12-31 2001-12-11 Chiron Corporation Compositions and methods for packaging of alphavirus vectors
AU2596600A (en) 1998-12-31 2000-07-31 Chiron Corporation Modified hiv env polypeptides
ATE465266T1 (de) 1998-12-31 2010-05-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Zusammensetzungen und verfahren zur verpackung von alpavirus-vektoren
WO2000039304A2 (en) 1998-12-31 2000-07-06 Chiron Corporation Polynucleotides encoding antigenic hiv type c polypeptides, polypeptides and uses thereof
JP2002537355A (ja) 1999-02-26 2002-11-05 カイロン コーポレイション 抗原の粘膜送達のための生体接着剤およびアジュバントの使用
EP1175497B1 (en) 1999-04-14 2010-04-07 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Compositions and methods for generating an immune response utilizing alphavirus-based vector systems
AU6620300A (en) 1999-08-03 2001-02-19 Ohio State University, The Polypeptides and polynucleotides for enhancing immune reactivity to her-2 protein
WO2001021152A1 (en) 1999-09-24 2001-03-29 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Adjuvant comprising a polyxyethylene alkyl ether or ester and at least one nonionic surfactant
CN1391483A (zh) 1999-09-24 2003-01-15 史密丝克莱恩比彻姆生物有限公司 作为佐剂的聚氧乙烯脱水山梨醇酯和辛苯昔醇组合及其在疫苗中的应用
ES2507100T3 (es) 2000-01-17 2014-10-14 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Vacuna OMV suplementada contra meningococo
CA2396871A1 (en) 2000-01-20 2001-12-20 Ottawa Health Research Institute Immunostimulatory nucleic acids for inducing a th2 immune response
SK288007B6 (sk) 2000-06-29 2012-10-02 Glaxosmithkline Biologicals S. A. Multivalent vaccine composition, process for its producing, and its use
DE60139690D1 (de) 2000-07-03 2009-10-08 Novartis Vaccines & Diagnostic Immunisierung gegen chlamydia pneumoniae
KR100378014B1 (ko) 2000-08-21 2003-03-29 삼성에스디아이 주식회사 리튬 이차 전지용 전극 및 리튬 이차 전지
AU8743001A (en) 2000-08-28 2002-03-13 Aventis Pasteur Moraxella polypeptides and corresponding dna fragments and uses thereof
WO2002026757A2 (en) 2000-09-26 2002-04-04 Hybridon, Inc. Modulation of immunostimulatory activity of immunostimulatory oligonucleotide analogs by positional chemical changes
EP2189473A3 (en) 2000-10-27 2010-08-11 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Nucleic and proteins from streptococcus groups A & B
GB0103424D0 (en) 2001-02-12 2001-03-28 Chiron Spa Gonococcus proteins
US7407664B2 (en) 2001-05-18 2008-08-05 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention Peptide vaccines against group A streptococci
ES2345876T3 (es) 2001-05-31 2010-10-05 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Particulas de replicones de alfavirus quimericos.
US20030232324A1 (en) 2001-05-31 2003-12-18 Chiron Corporation Chimeric alphavirus replicon particles
US20030091593A1 (en) 2001-09-14 2003-05-15 Cytos Biotechnology Ag In vivo activation of antigen presenting cells for enhancement of immune responses induced by virus like particles
DE60234375D1 (de) 2001-09-14 2009-12-24 Cytos Biotechnology Ag VERPACKUNG VON IMMUNSTIMULIERENDEM CpG IN VIRUSÄHNLICHEN PARTIKELN: HERSTELLUNGSVERFAHREN UND VERWENDUNG
WO2003035836A2 (en) 2001-10-24 2003-05-01 Hybridon Inc. Modulation of immunostimulatory properties of oligonucleotide-based compounds by optimal presentation of 5' ends
JP4413617B2 (ja) 2001-12-12 2010-02-10 カイロン ソチエタ ア レスポンサビリタ リミタータ Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓに対する免疫化
ATE458496T1 (de) * 2002-01-14 2010-03-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Hiv-vakzine und anwendungsverfahren
GB0203403D0 (en) 2002-02-13 2002-04-03 Chiron Spa Chlamydia cytotoxic-T cell epitopes
GB0210128D0 (en) 2002-05-02 2002-06-12 Chiron Spa Nucleic acids and proteins from streptococcus groups A & B
EP1551357B1 (en) 2002-09-13 2014-07-16 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Group b streptococcus vaccine
CA2511646A1 (en) 2002-12-27 2004-07-22 Chiron Corporation Thiosemicarbazones as anti-virals and immunopotentiators
EP1594524B1 (en) 2003-01-21 2012-08-15 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Use of tryptanthrin compounds for immune potentiation
WO2004092360A2 (en) 2003-04-10 2004-10-28 Chiron Corporation The severe acute respiratory syndrome coronavirus
CA2526106A1 (en) 2003-06-26 2005-01-13 Chiron Corporation Immunogenic compositions for chlamydia trachomatis
CA2532369C (en) 2003-07-31 2016-07-26 Chiron Corporation Immunogenic compositions for streptococcus pyogenes

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005502591A (ja) * 2001-01-12 2005-01-27 カイロン コーポレイション 核酸粘膜免疫

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JPN5008016840; ＶＡＪＤＹ　ＭＩＣＨＡＥＬ: ＡＩＤＳ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　ＡＮＤ　ＨＵＭＡＮ　ＲＥＴＲＯＶＩＲＵＳＥＳ Ｖ２０　Ｎ１１, 200411, Ｐ１２６９-１２８１ *
JPN6012000431; Ｇｕｐｔａ　Ｓ　ｅｔ　ａｌ．: 'Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｖｉｒｕｓ　Ｇａｇ-ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｇａｍｍａ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ-ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　ｃｅｌｌｓ　ｆｏｌｌ' Ｊ　Ｖｉｒｏｌ． Ｖｏｌ．７９　ｎｏ．１１, 200506, ｐｐ．７１３５-７１４５ *
JPN6012042898; Ｖａｊｄｙ　Ｍ　ｅｔ　ａｌ．: 'Ｅｎｈａｎｃｅｄ　ｍｕｃｏｓａｌ　ａｎｄ　ｓｙｓｔｅｍｉｃ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｔｏ　Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ　ｐｙｌｏｒｉ　ａｎｔｉｇｅｎｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｍｕｃｏｓａｌ　ｐｒｉｍｉ' Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．１１０　Ｎｏ．１, 200309, ｐｐ．８６-９４ *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2007047749A1 (en) 2007-04-26
US20110223197A1 (en) 2011-09-15
ZA200804098B (en) 2014-10-29
CN101355960A (zh) 2009-01-28
EP2357000A1 (en) 2011-08-17
EP1945247A1 (en) 2008-07-23
CA2626253A1 (en) 2007-04-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2009511636A (ja) アルファウイルスレプリコン粒子による粘膜免疫および全身免疫
CA2421683C (en) Microparticles for delivery of the heterologous nucleic acids
US9795668B2 (en) Delivery of self-replicating RNA using biodegradable polymer particles
Plummer et al. Viral nanoparticles and virus‐like particles: platforms for contemporary vaccine design
Trovato et al. Novel antigen delivery systems
JP2017057227A (ja) 免疫原性組成物に使用するための生分解性ポリマーおよびカチオン性多糖を含むミクロ粒子
AU2018274922A1 (en) RSV immunization regimen
WO2014005958A1 (en) Immunogenic compositions and uses thereof
JP2009120620A (ja) 非経口初回抗原刺激後の粘膜追加免疫
ES2526196T3 (es) Constructos de encapsidación de replicones de alfavirus
US8173137B2 (en) Polycistronic HIV vector constructs
RU2295954C2 (ru) Микрочастицы для доставки гетерологичных нуклеиновых кислот
AU2001294897B2 (en) Microparticles for delivery of the heterologous nucleic acids
US20070134214A1 (en) Inactivated host cell delivery of polynucleotides encoding immunogens
AU2001294897A1 (en) Microparticles for delivery of the heterologous nucleic acids

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20090819

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20090819

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20100811

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20120110

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20120405

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20120405

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20120815

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20121116

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20121116

A911 Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911

Effective date: 20121211