JP2002516820A - 低分子量ペプチド及び喘息及び炎症の治療方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 式ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ（式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒからなる群から選択される）を有するペプチド、及び製薬上許容される担体との混合物からなる医薬組成物が記載されている。肥満細胞の脱顆粒を阻害する方法、及び、例えば、喘息、リウマチ様関節炎及びアナフィラキシーからなる群から選択される疾病の結果の炎症を有する患者を治療する方法も記載されている。加えて、患者のサイトカインの放出を阻害し、患者のヒスタミン放出を阻害し、患者のロイコトリエンの放出を阻害し、患者の炎症部位へのリンパ球、好酸球及び好中球の付着、移動及び凝集を減少させ、患者の炎症部位におけるＩｇＥ抗体の産生を減少させ、そして患者の炎症部位における血管透過性の上昇を阻害する方法も記載されている。これらの方法には上記した医薬組成物が使用される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】

発明の分野 本発明は肥満細胞脱顆粒阻害活性を有する低分子量ペプチド、及び炎症を治療
する方法に関するものであり、そして特に炎症の治療に有用なＮ−ホルミル−メ
チオニルペプチドに関する。更に詳細には、本発明は、例えば喘息、リウマチ様
関節炎及びアナフィラキシーなどの肥満細胞脱顆粒に係わる疾病又は状態を治療
する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】

発明の背景 喘息は複雑な疾患である。喘息の開始やその炎症性急性憎悪には遺伝的及び環
境的要因：アレルギー、ウイルス感染、刺激原：などが共に関係している。喘息
患者（成人及び子供）の半分以上はアレルギーを有している。実際のところ、ハ
ウスダストのだに糞便に対するアレルギーが上記疾病の発生や急性憎悪の出現の
主要な要因である。幼児期における呼吸器シンシチウムウイルス（respiratory
syncytial virus）による感染も喘息の発生と非常に関係しており、そしてウイ
ルスによる呼吸器感染はしばしば急性エピソード（acute episodes）を誘発する
。

【０００３】 ３０年前の、気管支拡張ベータ_２−アゴニスト（ベータ_２レセプターに選択的
なアドレナリン作動性アゴニスト）の導入は喘息の治療に大変革をもたらした。
これらの作用剤は、アルファ−及びベータ−アドレナリン作動性レセプターを共
に刺激するイソプロテレノールのような非選択的アドレナリン作動性レセプター
アゴニストより強力であり且つより長く（４〜６時間）作用することが証明され
た。ベータ_２−アゴニスト（β_２−アゴニスト）は症状を急速に軽減し、そして
また、運動のような刺激又は極めて冷たい空気の吸入によって引き起こされる急
性気管支収縮に対しても防御する。使用頻度を喘息制御の指標として使用するこ
ともできる。最近、特に長く作用するベータ_２−アゴニスト−サルメテロール（
１２時間まで持続）が米国で導入された。サルメテロールは非常に強力なため、
炎症徴候を隠蔽する可能性がある；それ故、サルメテロールは抗炎症剤と一緒に
使用すべきである。

【０００４】 テオフィリンは比較的弱い気管支拡張剤であり、治療域は狭く（毒性を回避す
るために、血中値のモニタリングが推奨される）そして医薬品の相互干渉を起こ
し易い（肝シトクロムＰ４５０医薬品代謝酵素に対する競合のため、この同じ系
で代謝される幾つかの重要な医薬品の血漿値が変化する）。

【０００５】 中程度の喘息は毎日の吸入抗炎症性コルチコステロイド又は肥満細胞インヒビ
ター（クロモリンナトリウム又はネドクロミル）と吸入ベータ_２−アゴニストで
必要に応じて（１日当たり３〜４回）処置されて、前進的な症状又はアレルゲン
誘発性若しくは運動誘発性喘息が軽減される。クロモリンナトリウムとネドクロ
ミルは気管支けいれんや炎症を阻止するが、通常はアレルゲン又は運動に関連し
た喘息に対してだけ、そしてそれ故、典型的には若年喘息患者に対してだけ有効
である。吸入コルチコステロイドは炎症、気道過剰反応性及び閉塞を改善し、そ
して急性憎悪数を減少させる。しかしながら、効果が現れるまでに１か月かかり
、そして顕著な改善が生じるには１年までの期間が必要である。最も頻繁な副作
用は嗄声及び口腔カンジダ症である。より重篤な副作用（部分的な副腎抑圧、成
長阻害及び骨形成低下）が報告されているが、これらはより高い投与量を用いた
場合にだけ生じる。ベクロメタゾン、トリアムシノロン及びフルニソリドは多分
、ｍｇ対ｍｇで同様な力価を有している；より新しい承認医薬、ブデソニドやフ
ルチカソンはより強力であり、そして全身的な副作用がより少ないと報告されて
いる。

【０００６】 軽度の疾病を有する患者でさえ、粘膜及び上皮の浸潤を含む気道炎症を常に示
しており、Ｔ細胞、肥満細胞及び好酸球が活性化されている。Ｔ細胞や肥満細胞
は、好酸球増殖及び成熟並びにＩｇＥ抗体の産生を助長するサイトカインを放出
し、そしてこれらは順次、微細血管透過性を高め、上皮を破壊し、そして神経反
射及び粘膜分泌腺を刺激する。その結果は、喘鳴、咳込み及び呼吸困難によって
悪化した気道の過剰反応性、気管支収縮及び過剰分泌である。

【０００７】 伝統的に、喘息は経口及び吸入気管支拡張剤で治療されてきた。これらの作用
剤は喘息の症状を和らげるが、原因となる炎症には全く役立たない。喘息の病因
学における炎症の重要性に関する最近１０年間の認識からコルチコステロイドの
使用増加につながっているが、多くの患者は制御されない喘息に苦しみ続けてい
る。 科学者達はロイコトリエン（これにはＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥのサブタイプがあ
る）が喘息で重要な役割を果たしていると報告している。これらは気道平滑筋け
いれん、血管透過性上昇、浮腫、粘液産生増加、気道粘液線毛輸送低下及び白血
球化学走性を引き起こす。

【０００８】 これに関連するプロスタグランジン化合物と同様に、ロイコトリエンは細胞膜
でアラキドン酸から合成される。肥満細胞、好酸球、マクロファージ、単球及び
好塩基球内のアラキドン酸は、ホスホリパーゼＡ２の活性化によって膜リン脂質
から形成される。アラキドン酸は形成された後、主要な２つの経路：シクロオキ
シゲナーゼ経路（この経路は種々のプロスタグランジンとトロンボキサンを産生
する）及び５−リポキシゲナーゼ経路（この経路はロイコトリエンを産生する）
によって代謝される。アラキドン酸代謝の概略図は図４に示されている。プロス
タグランジン、トロンボキサン及びロイコトリエンはまとめてエイコサノイドと
して知られている。

【０００９】 抗ロイコトリエンは、炎症性カスケードの初期段階に干渉する能力を有する抗
喘息作用剤の異なるクラスのメンバーである。ロイコトリエンはプロスタグラン
ジンに関連のある炎症性物質である。これらは共に細胞膜内でアラキドン酸から
産生される。アラキドン酸は、肥満細胞、好酸球、マクロファージ、単球及び好
塩基球内で形成された後、主要な２つの経路：（１）シクロオキシゲナーゼ経路
（この経路はプロスタグランジンとトロンボキサンを産生する）及び（２）５−
リポキシゲナーゼ経路（この経路は細胞質内でロイコトリエンを産生する）によ
って代謝される。ロイコトリエンは医科学でアナフィラキシーの遅反応性物質（
「ＳＲＳ−Ａ」）として良く知られている。ロイコトリエンは気管支炎症におい
て重要な役割を果たす。これらは種々の白血球（例えば、好中球、好酸球及び単
球）の血管への移動、付着及び凝集を誘導し、毛細管の透過性を高め、そして気
管支や血管平滑筋の狭窄を引き起こす。これらの結果には間質浮腫、白血球の化
学走性、粘液産生、気道粘液線毛機能不全及び肺の気管支けいれんが含まれる。
あるクラスのロイコトリエン、例えば、システイニルロイコトリエン（ＬＴＤ_４ ）は特に強力な気管支収縮剤であり、ヒスタミンより概ね１００〜１，０００倍
活性である。ロイコトリエンは、システイニルロイコトリエンを含めて、脱顆粒
中に肥満細胞から放出される。

【００１０】 ロイコトリエンレセプターを遮断するか又は酵素５−リポキシゲナーゼの遮断
によってロイコトリエン合成を防止する多数の抗ロイコトリエンが研究中であり
、そして商業的に使用されている。ロイコトリエンインヒビターは作用が異なっ
ている：或るものは５−リポキシゲナーゼを直接遮断し、或るものは５−リポキ
シゲナーゼを活性化するタンパク質を阻害し、そして或るものはタンパク質上の
アラキドネートの結合部位からアラキドネートを排除する。ロイコトリエンアン
タゴニストは、対照的に、気道過敏性、気管支収縮及び過剰分泌に介在するレセ
プター自体を遮断する。

【００１１】 ヒト肺肥満細胞は、インビトロでのＩｇＥ刺激後に腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、
ＩＬ−４及びＩＬ−５を産生する（Chest 1997年；112：523〜529）。これは、
気管支内生検標本の免疫組織化学的分析によって、ＩＬ−６産生と一緒に確認さ
れている。さらに、肥満細胞数及びＴＮＦは、正常対象と比較したとき、喘息患
者では統計的により顕著である。ＴＮＦ及びＩＬ−４は、気管支脈管構造の内皮
層における血管細胞付着分子−１（ＶＣＡＭ−１） − 免疫グロビンスーパーフ
ァミリーの付着分子 − 発現の上方調節を強めることができる。好酸球、好塩基
球及び単核細胞は、ＶＣＡＭ−１と相互作用する超遅延活性化抗原４（ＶＬＡ−
４）インテグリンをこれら細胞の表面に表示する。かくして、ＶＬＡ−４／ＶＣ
ＡＭ−１の相互作用によって、ＴＮＦやＩＬ−４は循環中の白血球の補充を助長
する。肥満細胞が、予め形成されたサイトカイン（ＴＮＦ）をＩｇＥ介在性刺激
で放出できること又は他のもの（ＩＬ−４、ＩＬ−５）を急速に合成できること
が、気管支炎症に導く初期事象であろう。実際に、サイトカインを更に産生する
ことによるＴＨ２クローンの誘導や活性化は、炎症反応の最終エフェクターとし
て作用する好酸球の活性化や補充を助長する。順次、白血球（特に、ＴＨ２細胞
）によって産生されるサイトカインは粘膜肥満細胞の発生、活性化及び初回感作
に特に顕著な影響を与え、その結果、正の炎症前ループを促進する。最近の調査
結果によって、ヒト肥満細胞がＩＬ−８を産生しそしてマウス肺由来肥満細胞が
、単球化学誘引タンパク質−１及びマクロファージ炎症性タンパク質−１の両ケ
モカイン（chemokines）を発現することが示されている。これは、肥満細胞が、
白血球補充に伝統的に関与しているサイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＴＮＦ
）に加えて、気道で好酸球及び多形核白血球に対して作用する更なる強力な化学
誘引物質（ＩＬ−８）も合成することを示唆している。さらに、ヒスタミン放出
因子として作用するケモカインは肥満細胞の脱顆粒を誘発するので、これらは自
己分泌活性化ループを更に維持する可能性がある。

【００１２】 肥満細胞はまた、インビトロでのＩｇＥ合成に関して、ＩＬ−４と一緒に、必
要とされる細胞接触を提供する（好塩基球と同様に）ためにＢ細胞増殖で重要な
役割も果たしており、そしてこのことは肥満細胞がＴ細胞とは無関係にＩｇＥ産
生を直接調節でき、そしてＩｇＥ架橋によって、アトピー性喘息で中心的な役割
を果たしていると考えられるＴ細胞のサブセット、ＴＨ２の局所的な応答を開始
するのに十分な量のＩＬ−４を産生できることを示唆している。さらに、肥満細
胞はＴリンパ球に対する抗原提示細胞としても作用することができるので、喘息
の免疫網における肥満細胞のより大きな役割さえ示唆している。

【００１３】 Ｎ−ホルミル−メチオニル−ロイシル−フェニルアラニンによる肥満細胞脱顆
粒の阻害はInflammation、５巻、１号、１３〜１６頁（１９８１年）に報告され
た。そこでは、２つの構造的に異なるケモタクティックペプチド（chemotactic
peptides）、即ちペプスタチン及びＮ−ホルミル−メチオニル−ロイシル−フェ
ニルアラニンが、ラット皮膚において４０／８０、抗ラットＩｇＥ血清、又はウ
シ肺から単離された巨大分子陰イオン透過性因子の皮内注射でもたらされた血管
透過性上昇を阻害することが報告された。これらのペプチドが肥満細胞に直接作
用するように見えることも報告されている。

【００１４】 ヒトにおける炎症性疾患、特に、例えば、喘息、関節炎及びアナフィラキシー
の治療が重要であるため、副作用のより少ない新規な生物活性化合物の探求が継
続されている。喘息の炎症過程の文脈の範囲内において本発明の新規ペプチドの
介入による肥満細胞脱顆粒阻害は図４（図６も参照）に視覚的に表されている。

【００１５】

【課題を解決するための手段】

発明の概要 本発明は、肥満細胞脱顆粒阻害活性を有するＮ−ホルミル−メチオニル−ロイ
シル（本明細書では、「ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ」と記す。ｆはホルミル基を示す。
）ペプチド、及び製薬上許容される担体とからなる新規な医薬組成物を提供する
。特に有用なこのようなペプチドは、式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
なる群から選択される基を示す。） を有するペプチドである。このようなペプチドは炎症の治療、そして特に喘息、
関節炎及びアナフィラキシーに関連した炎症の治療に有用である。これらのペプ
チドはまた、慢性閉塞性肺疾患及び慢性炎症性腸疾患の治療にも有用である。

【００１６】 本発明によれば、哺乳動物の炎症を治療する方法は、式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
なる群から選択される基を示す。） を有するペプチドの抗炎症有効量を、哺乳動物に投与することからなる。喘息に
関連した炎症を治療するためには、好ましい投与態様は吸入である。関節炎に関
連した炎症を治療するためには、好ましい投与態様は適当な薬理学的に許容され
る担体を使用する局所的適用又は皮内注入である。

【００１７】 本発明はまた、肥満細胞の脱顆粒を阻害する方法も提供する。この方法は肥満
細胞を、式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
なる群から選択される基を示す。） を有するペプチドの脱顆粒阻害量と接触させることからなる。

【００１８】 さらに、本発明はまた、サイトカイン、ヒスタミン及びロイコトリエンの放出
を阻害する方法も提供する。サイトカインの放出を阻害する方法は、式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
なる群から選択される基を示す。） を有するペプチドのサイトカイン放出阻害有効量を、患者に投与することからな
る。ヒスタミンの放出を阻害する方法は、式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
なる群から選択される基を示す。）を有するペプチドのヒスタミン放出阻害有効
量を、患者に投与することからなる。ロイコトリエンの放出を阻害する方法は式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
なる群から選択される基を示す。） を有するペプチドのロイコトリエン放出阻害有効量を、患者に投与することから
なる。

【００１９】 もう１つの実施態様によれば、本発明は患者の炎症部位へのリンパ球、好酸球
及び好中球の付着、移動及び凝集を減少させる方法を提供する。この方法は、式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
なる群から選択される基を示す。）を有するペプチドの治療的阻害有効量を上記
患者に投与することからなる。

【００２０】 また、本発明は患者の炎症部位におけるＩｇＥ抗体の産生を減少させそしてＩ
ｇＥ架橋を減少させるか又は遮断する方法も提供する。この方法は、式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
なる群から選択される基を示す。） を有するペプチドのＩｇＥ抗体産生阻害有効量を上記患者に投与することからな
る。 加えて、本発明は患者の炎症部位における血管透過性の上昇を阻害する方法を
提供する。この方法は、式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
なる群から選択される基を示す。） を有するペプチドの血管透過性阻害有効量を上記患者に投与することからなる。 本発明の或る好ましい実施態様では、慢性炎症を有する患者は本発明のペプチ
ドを他の活性成分と組み合わせて投与することによって利益を得ることができる
。本発明に従って上記のように組み合わせるために特に有用な他の活性成分は、
例えば、抗ロイコトリエン、ベータ_２アゴニスト（β_２アゴニスト）、コルチコ
ステロイド等である。 また、本発明は前記した治療方法に用いられる治療剤を提供する。

【００２１】 本発明の詳細な説明 本発明に従えば、式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
なる群から選択される基を示す。なお、ｆはＮ−ホルミル基を示す。） を有する或る低分子量ペプチドは肥満細胞の脱顆粒阻害に関して驚くべき活性を
有していることが見いだされた。その結果、このようなペプチドはサイトカイン
（例えば、ＴＮＦのような）並びにヒスタミン及びロイコトリエンの放出を阻害
するので、これらは、例えば喘息、関節炎及びアナフィラキシーのような多様な
病気から生じる炎症の治療に有用である。上記ペプチドはまた、慢性閉塞性肺疾
患及び慢性炎症性腸疾患の治療にも有用である。 本発明の好ましい実施態様によれば、上記ペプチドはまた、炎症性組織への好
酸球、好塩基球及び好中球の浸潤を減少させることもできる。リンパ球、好酸球
及び好中球は本発明の好ましいペプチドに応答して化学走性を示すことはない。
さらに、本発明の好ましい化合物は心臓、肝臓及び肺のような生命器官に対して
ほとんど毒性を示さない。

【００２２】 本発明のペプチドは慣用の低分子量ペプチド化学技術によって製造することが
できる。これらのペプチドは、投与するために使用するとき、製薬的に許容可能
な担体又は希釈剤と共に無菌条件下で製造される。 医薬組成物の投与量は、対象及び使用される特定の投与経路に依存して変動す
るであろう。投与量は１日当たり０．１から１００，０００μｇ／ｋｇまで、更
に好ましくは１から１０，０００μｇ／ｋｇまでの範囲であることができる。最
も好ましい投与量は約１から１００μｇ／体重ｋｇまで、更に好ましくは約１か
ら１０μｇ／体重ｋｇまでの範囲である。投与量は典型的には、状態の重篤度に
依存して、１日１回から４〜６時間毎までで投与される。急性状態では、上記ペ
プチドを４〜６時間毎に投与することが好ましい。維持又は治療用途では、１日
１回又は２回だけ投与することが好ましい。好ましくは、投与経路及び状態の重
篤度に依存して、１日当たり約０．１８から約１６ｍｇまでのペプチドが投与さ
れる。特定の組成物の多数回投与量の送達に望ましい時間間隔は、せいぜい定型
的な実験法を使用して、当該技術分野の通常の技倆を有する者が決定することが
できる。

【００２３】 投与経路には経口、非経口、直腸、膣内、局所、経鼻、眼、直接注入等が含ま
れる。好ましい実施態様では、本発明のペプチドは抗炎症有効量又は肥満細胞の
脱顆粒を阻害する投与量で患者に投与される。例示的な医薬組成物は、抗炎症効
果を提供するか又は肥満細胞の脱顆粒を阻害し、典型的には製薬的に許容可能な
担体中に含まれている治療的有効量の本発明によるペプチドである。

【００２４】 本明細書で使用されそして以下で更に十分に記載されている用語「製薬的に許
容可能な担体」又は「製薬上許容される担体」には、ヒト又は他の動物に投与す
るのに適している１つ若しくはそれより多くの適合可能な固形若しくは液体充填
希釈剤又はカプセル化物質が含まれる。かくして、本発明では、用語「担体」は
天然又は合成の有機又は無機成分を意味し、そして本発明の上記分子は適用を助
長するために上記成分と組み合わされる。用語「治療的有効量」とは、治療され
ている特定の状態に対して所望の結果をもたらすか又は所望の影響を発揮する本
発明組成物の量である。同じ成分を組み入れている組成物の製造においては種々
の濃度を使用して、治療すべき患者の年齢、状態の重篤度、治療期間及び投与態
様の変動に対応することができる。

【００２５】 上記担体はまた、適合可能でなければならない。本明細書で使用するとき、用
語「適合可能な」又は「許容される」とは、医薬組成物の成分が所望の製薬的有
効性を実質的に損なわないような態様で本発明の低分子量ペプチドと、そして互
いに混合できることを意味する。

【００２６】 本発明の低分子量ペプチドは典型的には、それ自体で（そのままで）投与され
る。しかしながら、これらペプチドは製薬的に許容可能な塩（製薬上許容される
塩）の形態で投与することができる。このような製薬的に許容可能な塩には次の
酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、
ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン
酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸及びベンゼンスルホン酸から製造さ
れる塩が含まれるが、これらに限定されない。また、製薬的に許容可能な塩はカ
ルボン酸基のアルカリ金属又はアルカリ土類金属塩、例えばナトリウム、カリウ
ム又はカルシウム塩として製造することもできる。かくして、本発明は、１つ又
はそれより多くの製薬的に許容可能な担体及び任意に、他の任意の治療成分と一
緒に本発明のペプチドを含んでいる医療用途用の医薬組成物を提供する。

【００２７】 本発明の組成物には、経口、直腸、膣内、局所、経鼻、眼又は非経口投与に適
する組成物が含まれ、そしてこれらは全て本発明の物質を使用する投与経路とし
て使用することができる。本発明のペプチドを含有する医薬組成物はまた、１つ
又はそれより多くの製薬的に許容可能な担体を含有することもでき、そしてこの
ような担体には安定化剤（長期貯蔵を促進するために）、乳化剤、結合剤、濃厚
化剤、塩、保存剤、溶媒、分散媒体、被覆剤、抗菌剤及び抗真菌剤、等張化剤及
び吸収遅延化剤等のような賦形剤を含めることができる。製薬的に活性の物質に
対してこのような媒体や作用剤を使用することは当該技術分野で良く知られてい
る。慣用の媒体又は作用剤が本発明のペプチドと適合不能である場合を除いて、
これらを製薬製剤中で使用することが本発明では意図されている。補助的な活性
成分を本発明の組成物に組み入れることもできる。 経口投与に適する組成物は喘息の治療に好ましい。典型的には、このような組
成物は吸入エアゾール、噴霧剤、シロップ又は錠剤として製造される。局所投与
に適する組成物は関節炎の治療用に好ましいが、経口用組成物も好都合であるこ
とができる。典型的には、このような局所用組成物はクリーム、軟膏又は溶液と
して調製される。

【００２８】 上記組成物は好都合には単位投与量形態で提供することができ、そして薬学分
野で周知の任意の方法で調製することができる。これらの方法は典型的には、本
発明の活性成分を、１つ又はそれより多くの副成分を構成する担体と組み合わせ
る段階を含んでいる。

【００２９】 吸入投与に適する本発明の組成物は、例えば、エアゾール又は吸入溶液として
提供することができる。典型的なエアゾール組成物の１例は、トリクロロモノフ
ルオロメタンとジクロロジフルオロメタンにオレイン酸を加えた混合物中に懸濁
した所望の量のミクロクリスタリンペプチドからなっている。典型的な溶液の１
例は、無菌生理食塩水（可溶性のために、任意に、約５％（ｖ／ｖ）のジメチル
スルホキシド（「ＤＭＳＯ」））、塩化ベンザルコニウム及び硫酸（ｐＨを調節
するために）に溶解するか又は懸濁した所望量のペプチドからなっている。

【００３０】 経口投与に適する本発明の組成物はまた、カプセル、カシェ剤、錠剤又はトロ
ーチ剤（これらは各々予め定められた量の本発明のペプチドを含有している）の
ような分離した単位として提供することができるか、或いはリポソーム内に又は
水溶液若しくは非水溶液中の懸濁物として、例えばシロップ、エリキシル又はエ
マルジョンとして含有されていることができる。錠剤製剤基剤の例には、不活性
成分としてのコーンスターチ、ラクトース及びステアリン酸マグネシウムが含ま
れる。シロップ製剤基剤の例には、クエン酸、着色染料、香味剤、ヒドロキシプ
ロピルメチルセルロース、サッカリン、安息香酸ナトリウム、クエン酸ナトリウ
ム及び精製水が含まれる。

【００３１】 非経口投与に適する組成物は好都合には、本発明の分子の無菌水性製剤を含ん
でおり、そしてこれは好ましくは受容者の血液と等張である。この水性製剤は、
適当な分散化又は湿潤化剤及び懸濁化剤を使用して既知の方法に従って処方する
ことができる。無菌の注射用製剤はまた、非毒性の非経口的に許容可能な希釈剤
又は溶媒中の無菌注射用溶液又は懸濁液、例えば１，３−ブタンジオール溶液で
あることもできる。使用できる許容可能な媒体及び溶媒のなかには、水、リンゲ
ル溶液及び等張塩化ナトリウム溶液がある。水溶液中では、約１０％（ｖ／ｖ）
までのＤＭＳＯ又はトラップソル（Trappsol）を使用して幾つかのペプチドの可
溶性を維持することができる。また、無菌の固定油を溶媒又は懸濁化媒体として
好都合に使用することができる。この目的では、合成モノ又はジグリセリドを含
む多数の固定油を使用することができる。加えて、注射剤の製造では脂肪酸（例
えば、オレイン酸又は中性脂肪酸）を使用することができる。さらに、プルロニ
ックブロックコポリマーは、３７℃で何週間又は何か月にも亘って固形物形態か
ら放出される時間に基づいて化合物を注入するために４℃で脂質と共に処方する
ことができる。

【００３２】 局所投与に適する組成物は、トラップソル若しくはＤＭＳＯ中のペプチド溶液
として、又はクリーム、軟膏若しくはローションとして提供することができる。
典型的には、約０．１〜約２．５％の活性成分が基剤又は担体中に組み入れられ
る。クリーム製剤基剤の例には、精製水、ペトロラタム、ベンジルアルコール、
ステアリルアルコール、プロピレングリコール、ミリスチン酸イソプロピル、ポ
リオキシル４０ステアレート、カルボマー９３４、ラウリル硫酸ナトリウム、酢
酸ジナトリウム、水酸化ナトリウム、及び任意にＤＭＳＯが含まれる。軟膏製剤
基剤の例には、白色ペトロラタム及び任意に鉱油、セスキオレイン酸ソルビタン
並びにＤＭＳＯが含まれる。ローション製剤基剤の例にはカルボマー９４０、プ
ロピレングリコール、ポリソルベート４０、ステアリン酸プロピレングリコール
、コレステロール及び関連ステロール、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン
酸ソルビタン、アセチルアルコール、トリエタノールアミン、アスコルビン酸、
シメチコン及び精製水が含まれる。

【００３３】 肥満細胞脱顆粒の阻害を測定するためのラット皮膚モデル アレルギー誘導性の喘息は、生物が過剰感作されるようになる物質（アレルゲ
ン）の暴露から生じる。アレルゲンに暴露されると、肺の肥満細胞の脱顆粒が生
じ、ロイコトリエンやヒスタミンが放出される。ロイコトリエンやヒスタミンの
放出に応答して、毛細管の透過性は劇的に上昇し、そして血漿は毛細管から周囲
組織に漏出する。このような暴露から生じる呼吸器の症状は軽度（痒み及びくし
ゃみ）から、アナフィラキシーによる極めて慢性の死亡症例を含む潜在的に致死
的（喘息）までの範囲である。

【００３４】 この現象を実験的に証明するために、ラット皮膚を肺の代わりに使用する。こ
のモデルでは、実験用ラットの血漿は色素トリパンブルーで標識する。この可溶
性色素は血漿自体の受動的マーカーとして血流中で運ばれ、そして肝細胞から排
出される。無傷の血管は、毛細管系を含めて、この色素を通常の状況下で保持す
る。肥満細胞の脱顆粒を誘導する（ロイコトリエン及びヒスタミン放出を生じさ
せる）化合物を皮膚に注入して、アレルゲン誘導性脱顆粒を刺激する。これらの
実験では、化合物４８／８０をこの目的で使用した：その後ロイコトリエン及び
ヒスタミンを放出した場合には、毛細管透過性が高まり、そして青く着色した血
漿は毛細管から漏出し、そして注入部位周囲の皮膚を青く着色する。青色化領域
は注入した化合物４８／８０の量の尺度である。

【００３５】 化合物は、注入前に化合物４８／８０と混合することによって「抗ロイコトリ
エン」及び／又は「抗ヒスタミン」活性について試験することができる。試験化
合物がロイコトリエン又はヒスタミン放出を阻害する場合、試験化合物を全く有
していない化合物４８／８０を注入した同じラットの注入部位と比較したとき、
より小さな直径の青色化領域が観察される。抗ロイコトリエン及び抗ヒスタミン
活性が高い場合には、青色化は実際に全体的に阻害されている。

【００３６】 実験 ラット皮膚モデルを開始しそしてこれは有効であった。種々のペプチドを、抗
ロイコトリエン及び／又は抗ヒスタミン活性について予め定められた投与量で試
験した。選択した投与量によって、比較用の標準化合物であるｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅ
ｕ−Ｐｈｅとの一般的な比較が可能になった。 「投与量応答（dose response）」滴定は幾つかの化合物について行いそして
標準化合物と比較した。推定上の阻害化合物のより少ない連続投与量を使用して
、毛細管透過性の連続的なサイズ面積減少を観察して、最初に予め決定した投与
量試験で観察されたロイコトリエン及び／又はヒスタミン放出の阻害を確認する
。

【００３７】 材料及び方法 試薬は、ケタミン、即ち種々の動物用供給者から入手した動物用麻酔薬を除い
て、シグマ（Sigma）又はアルドリッヒ（Aldrich）から入手した。使用したラッ
トは、ビーアンドケイ・インターナショナル（B&K International）から購入し
た時点で２２０〜２４０ｇの雄スプラーグ・ドゥリー品種であった。 ラット皮膚反応のために、ラットは１０ｍｇ／ｍｌのケタミン０．２５ｍｌで
麻酔した。生理食塩水（無菌ろ過）中１．０ｍｌのトリパンブルーを尾部静脈に
投与し、そしてラットの背中の毛を剃った。ラット当たり４ケ所の皮内注入部位
を試験及び対照注入用に使用した。 化合物４８／８０は生理食塩水中１．５ｍｇ／ｍｌのストック溶液として調製
した。この物質は水溶液中で潜在的に不安定であることが見いだされたので、そ
れぞれの日に新たに調製した。有効値までの生理食塩水中連続希釈物を各ラット
への注入直前に調製した。

【００３８】 ペプチドはＤＭＳＯ中２３ｍＭのストック溶液（stock solution）として調製
し、そして実験間では−２０℃で貯蔵した。使用時に、凍結ストック溶液を解凍
し、そして５μｌのＤＭＳＯ対０．１ｍｌの水性化合物４８／８０の比率を得る
ように、適当な量のＤＭＳＯと一緒に、化合物４８／８０の希釈物に適当な分別
物を添加した。この結果、ある種のペプチドの溶解性を維持するにはＤＭＳＯの
５％溶液が必要になった。５％ＤＭＳＯの影響は対照実験によってゼロであるこ
とが証明された。

【００３９】 注入用には、０．１ｍｌの化合物４０／８０、＋／−の試験化合物を、麻酔し
、着色し、そして剃毛したラットの皮内に注入した。１５分間のインキュベーシ
ョン後、ラットを頸椎脱臼法で屠殺し、そして背中の皮膚を剥離し、そしてライ
トボックス上に置いた。背後から照明された皮膚の画像は、ＣＣＤビデオキャプ
チャーカメラ及び両立式ハードウェア／ソフトウェアを使用してデジタル化した
。このデジタル化した画像を、科学的グラフィックス分析ソフトウェアパッケー
ジを使用して分析し、そして毛細管透過性領域（青色化）を積算しそして更に分
析するために数値を得た。 投与量応答曲線は、約０．０１μｇから約１５μｇまでの種々の投与量の化合
物４８／８０を使用して生成させた。これらの結果は図１に示す。ラット間の変
動（例えば、皮膚の厚さ）に基づいて化合物４８／８０の一定投与量に対する毛
細管透過性領域の直径に広範な変動が認められた。更に試験を行うために化合物
４８／８０の０．１５μｇ投与量を選択した。

【００４０】

【実施例】

実施例１ 投与量応答曲線は、化合物４８／８０の選択投与量０．１５μｇを使用して、
標準化合物、ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅについて作成した。０〜約２３０ｎＭ
のｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅの投与量を試験し、そしてこれらの結果は図２に
示す。化合物４８／８０によって誘導された脱顆粒阻害が明白に示された。

【００４１】 実施例２〜１１ 幾つかのｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕペプチドは、１００ナノモルの試験ペプチド及び
０．１５μｇの化合物４８／８０の投与量を使用して、ラット皮膚モデルで誘導
された脱顆粒の阻害について試験した。固有のゼロ−ペプチド−投与量４８／８
０対照を各実験用の各ラットに含め、そして阻害％は対照（０％阻害）に対する
相対的用語で表した。４８／８０によってもたらされた肥満細胞脱顆粒パーセン
トも測定した。これらの結果は下記に表示する。

【００４２】 表１ 実施例 ペプチド 阻害％ 脱顆粒％ ２ ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ（先行技術） ３０ ６０ ３ Ｎ−アセチル−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ ０ ９８ ４ Ｎ−ｔ−ＢＯＣ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ ０ − ５ ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−（ヨード）Ｐｈｅ ０ − ６ ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ（ベンジルアミド） ０ − ７ ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ ０ − ８ ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ（メチルエステル） ０ − ９ ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ １００ １〜３ １０ ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ ５５ ３０ １１ ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ ０ −

【００４３】 実施例１２ 投与量応答曲線は、０．１５μｇの化合物４８／８０の選択された投与量を使
用して、ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅについて作成した。０〜約２３０
ｎＭのｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅの投与量を試験し、そしてこれらの
結果は図３に示す。化合物４８／８０によって誘導された脱顆粒を驚くほど顕著
に阻害することが明白に示された。ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅによる
誘導性脱顆粒阻害は標準化合物ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅより予期されなかっ
たほどかなり良好であった。

【００４４】 肥満細胞脱顆粒阻害のためのＯＶＡ誘導性気管支喘息マウスモデル 喘息は複雑な疾病であり、そしてこれは気道閉塞と持続性気管支過剰応答性の
自発的憎悪を特徴としている。気道粘膜下組織の活性化Ｔリンパ球、好酸球及び
マクロファージ／単球による慢性的浸潤はもう１つの確立された特徴である。サ
イトカインの発現及び炎症性メディエイタの放出を伴う炎症メカニズムは、気管
支収縮や気管支過剰応答性の病因論の基礎となっている。しかしながら、多くの
病因メカニズム、例えば、症状の持続及び慢性的炎症を誘導するメカニズムやこ
の疾病を制御しそして防止するために必要な介在は依然として不明のままである
。 単回吸入アレルゲン投与によって或る個人及び動物モデルでは気道応答性の急
性増加が誘導され得るということは長い間認識されていた。しかしながら、アレ
ルゲンの反復吸入は気道応答性のより顕著で、持続的で且つ長期の増加を証明し
ている。長期的アレルゲン反復吸入のこのマウスモデルは、肺におけるアレルギ
ー疾患の長期的影響を研究しそしてヒト肺の気道過剰応答性の誘導に関与する細
胞、メカニズム、分子及びメディエイタを明確に叙述するために使用されてきた
。

【００４５】 材料及び方法 試薬： 結晶性ＯＶＡはピアース・ケム・コ・（Pierce Chem. Co.）（イリノ
イ州ロックフォード）から入手し、硫酸カリウムアルミニウム（ミョウバン）は
シグマ・ケム・コ・（Sigma Chem. Co.）（ミズーリー州セントルイス）から入
手し、発熱物質不含蒸留水はバクスター・ヘルスケア・コーポレーション（Baxt
er, Healthcare Corporation）（イリノイ州ディアフィールド）から入手し、０
．９％塩化ナトリウム（通常の生理食塩水）はリムホムド（Lymphomed）（イリ
ノイ州ディアフィールド）から入手し、そしてトラップソル（商標）ＨＰＢ−Ｌ
１００（水性ヒドロキシプロピルベータシクロデキストリン；４５重量／容量％
水溶液）はシクロデキストリン・テクノロジーズ・デベロップメント・インク・
（Cyclodextrin Technologies Development, Inc.）(フロリダ州ゲインスビル)
から入手した。ＯＶＡ（５００μｇ／ｍｌ（通常の生理食塩水））は蒸留水中１
０％（重量／容量）の等量のミョウバンと混合した。この混合物（１０Ｎ Ｎａ
ＯＨを使用して、ｐＨ６．５）は室温で６０分間インキュベートした後７５０Ｇ
で５分間遠心分離した；ペレットを蒸留水中で再度懸濁して元の容量としそして
１時間以内に使用した。

【００４６】 選択的な５−リポキシゲナーゼインヒビター、ジロイトン（Zileuton）（Ｎ−
［１−ベンゾ［ｂ］チエン−２−イルエチル］−Ｎ−ヒドロキシウレア；J. Pha
rmacol Exp Ther. 1991年；256：929〜937）はドクター・ベル（Dr. Bell）及び
ドクター・ジョージ・ダブリュ．カーター（Dr. George W. Carter）（Abbott L
aboratories, イリノイ州アボットパート）の好意で提供された。ジロイトンは
トラップソル（登録商標名）に溶解した。ヒスタテク・インク・（Histatek, In
c.）（ワシントン州シアトル）は肥満細胞脱顆粒インヒビター、ｆ−Ｍｅｔ−Ｌ
ｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ（「ＨＫ−Ｘ」）を提供した。 雌ＢＡＬＢ／ｃワンス（Once）（購入時に６〜８週齢；D and K、ワシントン
州シアトル）はこの研究のために慣用の条件下で収容した。

【００４７】 アレルゲン免疫化／抗原投与プロトコール： マウスに０．２ｍｌ（１００μ
ｇ）のＯＶＡをミョウバンと共に、標準（図５Ａ）及び消散（図５Ｂ）の異なる
プロトコールに基づいて腹腔内注入で投与した（J. Exp Med. 1996年；184：148
3〜1494）。これらの異なるプロトコールに従って、マウスは、それぞれ別の日
に０．０５ｍｌの通常の生理食塩水中１００μｇのＯＶＡの鼻腔内投与量及び０
．０５ｍｌの通常の生理食塩水中５０μｇのＯＶＡの鼻腔内投与量を投与する前
に、通常の生理食塩水中０．２ｍｌの腹腔内ケタミン（０．４４ｍｇ／ｍｌ）／
キシラジン（６．３ｍｇ／ｍｌ）で麻酔した。２つの対照群を使用した。従って
、最初の群には、ミョウバンを有する通常の生理食塩水を腹腔内に、そしてミョ
ウバンを有していない通常の生理食塩水を鼻腔内に投与し；第２の群にはミョウ
バンを有するＯＶＡを腹腔内に、ミョウバンを有していないＯＶＡを鼻腔内に、
そして通常の生理食塩水を単独で投与した。

【００４８】 組織学的試験 気管及び左肺（右肺は気管支肺胞洗浄検査（「ＢＡＬ」）用に使用する）を取
得し、そして１０％中性ホルムアルデヒド溶液中に室温で６〜１５時間固定した
。パラフィン内に埋め込んだ後、組織を５μｍの切片に切断し、そして種々の染
色又は免疫標識で更に処理した。ディスコム（Discombe）の好酸球染色はメチレ
ンブルーの対比染色で細胞数を計数するために使用した。単位気道面積（２，２
００μｍ^２）当たりの好酸球数は形態計測法で測定した（J. Pathol. 1992年；1
66：395〜404；Am Rev Respir Dis. 1993年；147：448〜456）。線維形成はマッ
ソン（Masson）のトリクローム染色で同定した。気道粘液は次の染色方法で同定
した：メチレンブルー、ヘマトキシリン及びエオシン、ムチカルミン、アルシア
ンブルー、並びにアルシアンブルー／過ヨウ素酸−シッフ（ＰＡＳ）反応（Troy
er, H.、Principles and Techniques of Histochemistry中の「炭水化物（Carbo
hydrates）」、Little, Brown and Company、マサチューセッツ州ボストン、198
0年：89〜121；Sheehan, D. C. 他、Theory and Practice of Histotechnology
中の「炭水化物（Carbohydrates）」、Battle Press、オハイオ州コロンバス、1
980年：159〜179）。ムチンはムチカルミン溶液で染色した；メタニルイエロー
対比染色を使用した。酸性ムチン及びスルフェート化粘液物質はアルシアンブル
ー、ｐＨ２．５で染色した；核ファストレッド対比染色を使用した。中性及び酸
性粘液物質はアルシアンブルー、ｐＨ２．５及びＰＡＳ反応によって同定した。
気道の粘液プラグ化度（直径０．５〜０．８ｍｍ）も形態計測法で評価した。粘
液による気道直径の閉塞パーセントは、図の凡例に記載したように０から４＋ま
での半定量目盛りで分類した。組織学的及び形態計測分析はプロトコール設計を
知らされていない者によって実施された。

【００４９】 肺機能試験 ２８日目の、通常の生理食塩水か又はＯＶＡのどちらかを最後に鼻腔内投与し
て２４時間後に、メタコリンの静脈内注入に対する肺力学は、以前に記載された
（10、1958年；192：364〜368；J. Appl. Physiol. 1988年；64：2318〜2323；J
. Exp. Med. 1996年；184：1483〜1494）方法を修正したプレチスモグラフ法に
よってマウスでインビボで測定した。肺機能試験完了時に、各マウスは、心臓穿
刺によって瀉血し、そして更に分析するために気管を有する肺組織を取得した。

【００５０】 気管支肺胞洗浄検査 左肺を気管支幹で結紮して止血した後、右肺を通常の生理食塩水０．４ｍｌで
３回洗浄した。プールした試料の０．０５ｍｌ分別物から得られる気管支肺胞洗
浄検査（ＢＡＬ）流動体中細胞は血球計を使用して計数し、そして残っている流
動体は２００Ｇで４℃で１０分間遠心分離した。上清液はエイコサノイド分析を
実施するまで−７０℃で貯蔵した。１０％ウシ血清アルブミン（「ＢＳＡ」）を
含有する通常の生理食塩水に上記細胞ペレットを再度懸濁した後、ＢＡＬ細胞塗
沫標本をガラススライド上に作成した。好酸球を染色するために、乾燥スライド
をディスコム希釈液（蒸留水中０．０５％の水性エオシン及び５％のアセトン（
容量／容量）；J. Exp. Med. 1970年；131：1271〜1287）で５〜８分間染色し、
水で０．５分間洗浄し、そして０．０７％のメチレンブルーで２分間対比染色し
た。

【００５１】 気道粘液糖タンパク質のアッセイ ＢＡＬ流動体中の粘液糖タンパク質は、スロットブロッティング及びＰＡＳ染
色でアッセイした（Anal. Biochem. 1989年；182：160〜164；Am. J. Respir. C
ell Mol. Biol. 1995年；12：296〜306）。ニトロセルロース膜（０．２μｍの
孔サイズ；Schleicher & Schuell、ニューハンプシャー州キーン）を蒸留水で湿
らせ、そしてその後、ミニフォルド（Minifold）ＩＩ ７２ウェルスロットブロ
ット装置（Schleicher & Schuell）に入れる前に通常の生理食塩水中に浸したＢ
ＡＬ流動体試料（０．０５ｍｌ）及びヒト呼吸器ムチン糖タンパク質（Am. J. R
espir. Cell Mol. Biol. 1991年；5：71〜79）のストック溶液（２μｍ／ｍｌ）
の分別物（０．０５〜０．７５ｍｌ）を水吸引真空でニトロセルロース膜上にブ
ロットし、そして粘液糖タンパク質はＰＡＳ反応によって可視化した。反射率デ
ンシトメトリーを実施してＰＡＳ染色を定量した。次いで、これらの画像は以下
に記載する画像処理システムで分析した。ＢＡＬ試料のＰＡＳ反応性の積算強度
は、ヒト呼吸器ムチンについての標準曲線と比較して定量した。

【００５２】 免疫細胞化学 モノクローナル抗体：ＣＤ１１ｃ（ＤＡＢ法）及びＭａｃ１（Beringer Mannh
eim、Hitomouse Kitを使用するＡＢＣ法、Zymed）を使用して、脈管構造、気道
及び線維症領域内／周辺の炎症性細胞型、例えば樹状細胞、マクロファージ及び
リンパ球を同定した。

【００５３】 形態計測法及び画像分析 画像は全て捕捉し、そしてエイチピー・デスクスキャン・ツー（HP DeskScan
II）ソフトウェア（MicrosoftR Windows（登録商標名）版）を用いるスキャンジ
ェット・ツー・シーエックス・スキャナー（ScanJet II CX Scanner）（Hewlett
Packard、カリフォルニア州パロアルト））によってデジタル化した。このシス
テムは、イメージ・プロ・プラス（Image-ProR Plus）・バージョン１．１、ウ
インドウズ（登録商標名）用ソフトウェア（Media Cybernetics、メリーランド
州シルバースプリング）を使用するデル・ディメンジョン（Dell Dimension）Ｘ
ＰＳ Ｐ９０コンピューター（Dell Corporation、テキサス州オースチン）と連
結した。画像は、極めて高い解像グラフィックスモード（１，２８０×１，０２
４ピクセル、７８．９ｋＨｚの水平スキャニング周波数、７４Ｈｚの垂直スキャ
ニング周波数）を有するデル・ウルトラスキャン（Dell Ultrascan）１７ＥＳモ
ニターを使用して２５６グレイレベルのスケールで評価した。

【００５４】 ロイコトリエンインヒビター試験 気道炎症における５−リポキシゲナーゼ産生物の役割を評価するために、図５
に記載された日のそれぞれ鼻腔内抗原投与３０分前に５−リポキシゲナーゼイン
ヒビター、ジロイトン（３５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内投与した。１組の動物では、
腹腔内ＯＶＡ前にジロイトンも投与した。３５ｍｇ／ｋｇのジロイトンはＢＳＡ
抗原を腹腔内投与され受動的に感作されたラットではシステイニルロイコトリエ
ン放出を約９５％阻害する（J. Pharmacol Exp. Ther. 1991年；256：929〜937
）。

【００５５】 本発明の化合物ＨＫ−Ｘ 化合物ＨＫ−Ｘは上記した方法と同じ方法を使用して、５ｍｇ／ｋｇ及び１０
ｍｇ／ｋｇを投与した。

【００５６】 統計的分析 肺機能データは、保護最小有意差方法（Statview II、Abacus Concepts、カリ
フォルニア州バークレイ）を使用して変動分析（ＡＮＯＶＡ）で評価した。この
方法は考えられる全ての対応のある方式比較を評価するために多数のｔ統計値を
使用し、そして均等及び非均等の両方のペアサイズに適用することができる。他
のデータは組合せ実験の平均値±ＳＥとして報告する。差は、独立した平均値に
ついてのスチューデントの対応のあるｔ検定で有意性（Ｐ＜０．０５）を分析し
た。

【００５７】 １．好酸球（表２Ａ〜２Ｂ） ＯＶＡ処置マウスの１、２及び３か月群における気道の好酸球数はそれぞれ４
４．８３％から３７．４０％にそして１９．１５％に有意に減少した（Ｐ＜０．
０２５）。たとえＯＶＡ処置群では同じ時間経過で他の２つの群より好酸球数が
はるかに多い（Ｐ＜０．０２５）としても、ジロイトンは一般的に１〜３か月で
好酸球を減少させることができよう。しかしながら、本発明のＨＫ−Ｘ化合物は
好酸球を１か月では同等に減少させたが、２及び３か月でははるかにより有益に
減少させた。

【００５８】

【００５９】 表２Ｂ： 気道組織の好酸球の割合 処置時間 生理食塩水 ＯＶＡ ジロイトン ＨＫ−Ｘ ２８日間 １．０ ４４．８ １５．８ １４．２

【００６０】 ２．他の炎症細胞 他の炎症細胞は、外来タンパク質の気道内導入後に非特異的な炎症応答を示す
。リンパ球を気道内に補充したが、リンパ球は対照群では実質的に存在していな
かった。ブーツ（boot）偽感作マウス及びＯＶＡ感作マウスではＯＶＡ抗原投与
後に好中球を補充したが、これらの大多数はＯＶＡ感作群の気道内に提供した。
広範囲にわたる細胞質の周辺部に鎌形核を有する特異的な多核巨細胞（融合マク
ロファージ）が時折見られた。ＯＶＡで感作しそしてこれを抗原投与した動物で
だけ、ラングハンス巨細胞と球状白血球の両方が観察された。これらは通常、大
気道に関連した連結組織中に存在していた。プラズマ細胞は気道近辺及び局所的
リンパ組織で時折見られた。

【００６１】 ３． 気道プラグ（aieway plag）（表３） ムチン： 同じ処置をした３つの群で差異はなかったが、時間経過は異なって
いた（Ｐ＞０．０５）。ＯＶＡ処置群は生理食塩水、ジロイトン（Ｐ＜０．０５
）及びＨＫ−Ｘ化合物で処置した群より高い得点を有していた。

【００６２】 表３： 気道の粘液プラグ得点 処置時間 生理食塩水 ＯＶＡ ジロイトン ＨＫ−Ｘ ２８日間 ０．７ ２．８ １．３ １．４ 気道プラグ％ ＞５％ ５５％ １６％ １９％

【００６３】 喘息は気道の慢性的炎症状態である。ヒトにおいては、喘息が一度確立される
と、気道の過剰応答性は数年間安定したままの可能性がある。これはアレルゲン
吸入、検出可能な気道炎症又は上皮剥離が無くても明らかに持続する。かくして
、喘息は気道の超微細構造における不可逆的（又は少なくとも緩慢な可逆性）変
化のため、永続的になる可能性がある。 軽度の喘息では、これらのエピソード又は「発作」は比較的頻繁でなく、そし
て吸入気管支拡張剤で良好に処置される（元に戻される）。原因となっている明
白且つ慢性的な気道炎症の強さは、気管支拡張剤では殆ど元に戻らない、より頻
繁で、強く且つ長時間の発作と関連があり、そして多分連結していると思われる
。この原因は近年益々明らかになってきている。Ｔｈ２−リンパ球、好酸球、肥
満細胞、そして多分血小板の活性化されたか又は感作された浸潤物から主として
なっている炎症は、血管周囲（間質）空間の膨張及びメディエイタ／増殖因子の
放出を引き起こし、そしてこれらによって基底膜の肥厚化、上皮損傷及び脱落、
粘液産生、及び過形成、感作並びに気道平滑筋の部分的収縮が引き起こされる。
これらの結果は全て、気道応答性の上昇を支持しており、そして環境的刺激に対
する応答閾を低下させるので、発作をより頻繁にしそして強力にする。

【００６４】 上記形態学的変化は肺機能に直接且つ強力な影響を与えるであろう。急性喘息
マウスモデル及び長期間喘息マウスモデルでの実験では、上記形態学的変化を支
持する肺機能の顕著な病態生理学的変化が観察されている。アレルゲン吸入は、
気道内皮のみでのＥ選択発現、及び好酸球浸潤と気道応答性増加の両方、並びに
他のタイプの炎症細胞（ラングハンスタイプの球状白血球及び多核巨細胞（融合
マクロファージ））を誘導するだけでなく、気道並びに肺胞内皮及び上皮での好
酸球及び肥満細胞発現を高めることが見いだされ、喘息性肺内部の非特異的炎症
反応が示唆された。

【００６５】 化合物ＨＫ−Ｘは、ＯＶＡ処置（ＯＶＡ）及び対照マウスの気道での粘液蓄積
を阻害する。気道の粘液閉塞分布は、偽感作及び生理食塩水投与マウス（生理食
塩水、ｎ＝４）、並びにＨＫ−Ｘ処置無し（ＯＶＡ、ｎ＝４）又は有り（ＨＫ−
Ｘ／ＯＶＡ、ｎ＝８）でのＯＶＡ感作／抗原投与マウスから決定した。気道直径
の粘液閉塞は形態計測的に次のようにアッセイした： ０、 粘液無し； ＋、 〜１０％閉塞； ＋＋、 〜３０％閉塞； ＋＋＋、 〜６０％閉塞； ＋＋＋＋、〜８０％閉塞。 各マウスの肺全体に無作為的に分布している１０個の気道を粘液閉塞について形
態計測的にアッセイした。

【００６６】 図６Ａ、６Ｂ及び図７Ｃ、７Ｄは、化合物ＨＫ−Ｘが、ＯＶＡを使用して喘息
を誘導したラットの肥満細胞の脱顆粒を阻害する能力、及びそれによって化合物
ＨＫ−Ｘで喘息を治療する効果に関する可視的な組織学的証拠を提供する。図６
Ａは、ＯＶＡ感作／抗原投与マウスの気道（ＡＷ）内腔に分泌された豊富な粘液
を示している。図６Ｂは、好酸球及び他の炎症細胞（矢印で示されている）によ
る間質組織の広範囲な浸潤を示している。図７Ｃは、化合物ＨＫ−Ｘインヒビタ
ーを鼻腔内ＯＶＡ前に投与したとき、気道（ＡＷ）内腔での気道粘液放出が顕著
に低下することを示している。好酸球による間質組織浸潤も、ＯＶＡ抗原投与単
独と比較して（図７Ｃを図６Ａ及び６Ｂと比較）、化合物ＨＫ−Ｘ処置後に減少
する。図７Ｄは、生理食塩水処置対照マウスでは気道（ＡＷ）に粘液及び細胞が
無いことを示している。気管支上皮は連結組織細胞で浸潤されているが、気管支
周囲の間質空間に白血球は存在していない。

【００６７】 気道マクロファージは、喘息患者のアレルゲン投与肺からＢＡＬ流動体中に回
収されたマクロファージで報告されたものに類似する大きな活性化の徴候を示し
た（Am. Rev. Respir. Dis. 1987年；135：433〜440）。マクロファージや樹状
細胞は肺の抗原提示細胞として機能し、そして気道上皮およびその周辺部位に表
現型変化を開始し得るサイトカインの分泌に直接的又は間接的に導く可能性があ
る。気道の慢性炎症を刺激すると気道上皮や線維芽細胞の増殖を直接誘導し、そ
してその結果これら領域周辺にコラーゲン沈着を誘導する可能性がある。活性化
されたマクロファージや樹状細胞は、後期抗原投与中においては他の炎症細胞と
比較して上記領域では高いままであった。

【００６８】 気道上皮は、主として顕著な胚細胞過形成のために、特に大気道で肥厚化した
が、小及び更には末端細気管支でも肥厚化した。胚細胞の正常な円柱状線毛細胞
に対する比率は対照群と比較して非常に増大した。一方、対照気道（小及び大の
両者とも）は時折胚細胞を有していただけであり、ＯＶＡ投与肺から得られた切
片は、大気道の１００％及び小気道の一部は全気道上皮細胞の８８％までが胚細
胞を含有していることを示した。洗浄されなかった肺では、粘液は胚細胞内及び
幾つかの気道で見ることができ、時には内腔を完全に閉塞していた。細胞屑はこ
れらの粘液プラグに引っかかっていた。胚細胞過形成は対照群では見られなかっ
たので、ＯＶＡの「非アレルギー」効果又は気管内投与技術によるものではあり
得なかった。小気道の胚細胞の中にはこの特徴を有していないものもあり、多分
、呼吸樹のＯＶＡ分布が均一でなかったことを示している。

【００６９】 図８は、このマウス喘息モデルにおける粘液プラグの形成に対する５μｇ／ｋ
ｇ及び１０μｇ／ｋｇの投与量の化合物ＨＫ−Ｘによる処置結果のヒストグラム
である。上記投与量は共に小気道内の粘液産生を顕著に減少させる。

【００７０】 誘導性ＩＩ型コラーゲン関節炎マウスモデル マウスモデルを使用して、誘導性ＩＩ型コラーゲン関節炎の組織学的、Ｘ線写
真的及び臨床的出現に対する本発明化合物の効果を評価する。 自己免疫疾患は顕著で且つ慢性的な疾病状態及び能力欠損を引き起こす。関節
炎には多くの形態があり、自己免疫疾患の１つのファミリーを代表する。臨床領
域では、リウマチ様関節炎（ＲＡ）は重篤な関節形成異常疾患の最も一般的な形
態である。臨床医は全てＲＡが進行性疾患であることに同意する。 マウスＣＩＡで生起する関節炎病変の組織病理学は、ヒト患者のＲＡとの膨大
な類似性を共有している。それ故、マウスＣＩＡはＲＡの潜在的治療法を研究す
るために容認されたモデルである。

【００７１】 材料及び方法 マウス： 体重２５グラムのＤＢＡ／１（２）雄マウス（Jackson Laboratori
es、メイン州バーハーバー又はB&K Universal、ワシントン州ケント）をこの研
究のために使用する。このマウスの系統は異種ＩＩ型コラーゲン注入によってＣ
ＩＡに罹りやすい。ウシコラーゲン（ＢＣ）、完全フロイントアジュバント（Ｃ
ＦＡ）及び不完全フロイントアジュバント（ＩＣＦＡ）はシグマ・ケミカル（Si
gma Chemical）から入手することができる。免疫化用の抗原は０．１Ｍ酢酸で処
理しそしてＣＦＡ又はＩＣＦＡを使用して処方化した。

【００７２】 関節炎の誘導 免疫化プロトコール： マウスに、試験期間中予め設定した間隔でＣＦＡ中１
００μｇのＩＩ型コラーゲンを注入する。 関節炎の発生について予め設定した間隔でマウスを試験する。関節炎の推定上
の徴候には、２回連続して観測される前及び／又は後足の少なくとも１つの足指
関節の浮腫と紅斑が含まれる。

【００７３】 関節炎の確証的診断 関節の組織学的試験： 適当な間隔で屠殺した動物の足指関節を取り出し、固
定し、脱カルシウム化し、パラフィンに埋め込み、切断し、そして全体的な細胞
及び構造的特徴を観察しそして適宜、各関節のパンヌスの軟骨性マトリックスを
検出するために染色する。細胞充実性の程度及び炎症面積は、組織学的顕微鏡写
真のデジタル化を使用しそして上記した標準的な面積及びポイント計数技術を適
用して定量する。 足指関節のＸ線写真的評価を行って、ＩＩ型コラーゲンによる免疫化後の関節
変化の発生を検出する。この研究ではマンモグラフィー画像化システムを修正し
た。関節の軟組織（パンヌス）の平均面積は、コンピューターデジタル化Ｘ線写
真を、各Ｘ線写真に含まれている内部標準と比較した隣接硬組織の密度変化と一
緒に分析して決定する。硬組織及びパンヌス領域の密度変化の基線対照として使
用するために、同じ期間に亘って更に別のマウスを使用し、そして密度及び面積
データを比較する。対照と実験マウスの密度及び面積の差異の有意性は、各時間
点で対応のあるＴ検定を使用して評価する。

【００７４】 関節炎評価 動物は関節炎の開始について毎日観察する。関節炎指数は０から４までの尺度
で、各足の関与重篤度を等級付けして得る。得点は関節周囲の紅斑及び浮腫、並
びに関節の変形の程度に基づいている。後足の膨潤も、一定張力のカリパスを使
用して踝中央から踝側面までの踝の厚みを測定して定量する。

【００７５】 実験の設計 化合物ＨＫ−Ｘの抗関節炎効果を評価するために、最適の送達メカニズム（単
数又は複数）に関するヒト患者での経験に基づいて投与経路を選択する。 ＨＫ−Ｘ及びプレドニゾロンの投与量： ペプチドの別異且つ推定上の治療レ
ベルを代表する投与量を、経皮（ＴＣ）（吸収性）経路と足注入の両方で局所部
位に入れる。関節内空間への直接注入は非常に外傷性であるので人工物を生じさ
せるように思われる。それ故、方法論として、関節内空間に隣接する足底（ＦＰ
）への医薬品注入を選択する。対照マウスにも陽性対照としてプレドニゾロン（
実験的及び臨床的自己免疫疾患の治療で証明されている強力な抗炎症剤）を注入
する。

【００７６】 先ず、１０匹の群（対照を加える）の各マウスにコラーゲンを５０日間毎日注
入する。３及び１８日目に、マウスに５又は１０μｇ／ｋｇの化合物ＨＫ−Ｘを
０．１Ｍ酢酸中１ｍｇ／ｍｌの溶液で注入する。５０日目に、組織学試験のため
にマウスを瀉血する。

【００７７】 次いで、各１０匹のマウスの８つの群（Ａ〜Ｉ）は次の特定のプロトコールに
従って処置する。 Ａ群は、１回目のＣＦＡプラスＢＣ、２回目のＩＣＦＡプラスＢＣで免疫化し
、そして処置しない（対照）。 Ｂ群は、１回目のＣＦＡプラスＢＣ、２回目のＩＣＦＡプラスＢＣで免疫化し
、そして５ｍｇ／ｋｇのプレドニゾロンの投与を２回目のＩＣＦＡプラスＢＣ後
の日に開始しそして２０日間継続する。 Ｃ群は、１回目のＣＦＡプラスＢＣ、２回目のＩＣＦＡプラスＢＣで免疫化し
、そして４ｍｇ／ｋｇ（高投与量）の化合物ＨＫ−ＸのＴＣ投与を２回目のＩＣ
ＦＡプラスＢＣ後の日に開始しそして２０日間継続する。

【００７８】 Ｄ群は、１回目のＣＦＡプラスＢＣ、２回目のＩＣＦＡプラスＢＣで免疫化し
、そして０．４ｍｇ／ｋｇ（低投与量）の化合物ＨＫ−ＸのＴＣ投与を２回目の
ＩＣＦＡプラスＢＣ後の日に開始しそして２０日間継続する。 Ｅ群は、１回目のＣＦＡプラスＢＣ、２回目のＩＣＦＡプラスＢＣで免疫化し
、そして４ｍｇ／ｋｇ（高投与量）の化合物ＨＫ−ＸのＴＣ投与を２回目のＩＣ
ＦＡプラスＢＣ後の日に開始しそして２０日間継続する。 Ｆ群は、１回目のＣＦＡプラスＢＣ、２回目のＩＣＦＡプラスＢＣで免疫化し
、そして０．４ｍｇ／ｋｇ（低投与量）の化合物ＨＫ−ＸのＴＣ投与を２回目の
ＩＣＦＡプラスＢＣ後の日に開始しそして２０日間継続する。

【００７９】 Ｇ群は、１回目のＣＦＡ、２回目のＩＣＦＡで免疫化し、そして１０ｍｌのＤ
ＭＳＯのＴＣ投与を２回目のＩＣＦＡプラスＢＣ後の日に開始しそして２０日間
継続する（対照）。 Ｈ群は、１回目のＣＦＡ、２回目のＩＣＦＡで免疫化し、そして１０ｍｌのＤ
ＭＳＯのＦＰ投与を２回目のＩＣＦＡプラスＢＣ後の日に開始しそして２０日間
継続する（対照）。 Ｉ群は、１回目のＣＦＡ、２回目のＩＣＦＡで免疫化し、そして１０ｍｌの生
理食塩水のＦＰ投与を２回目のＩＣＦＡプラスＢＣ後の日に開始しそして２０日
間継続する（対照）。

【００８０】 各群の動物は、２回目の免疫化直後及び屠殺直前にＸ線を照射する。屠殺後、
適宜、足を取り外しそして組織学的検査用に処理する。化合物ＨＫ−Ｘによる処
置は関節炎の程度を低下させることが認められる。

【００８１】 本発明は好ましい実施態様に関連して詳細に記載した。しかしながら、本明細
書及び図面を考慮することによって、当該技術分野の熟練者は、前記請求の範囲
で特定されている本発明の精神及び範囲内で修正を加えそして改良を行うことが
できることが認められよう。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、種々の濃度の化合物４８／８０に対する毛細管透過性領域を示す対数
投与量応答曲線である。

【図２】 図２は、種々の濃度のｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅによる毛細管透過性阻害の
投与量応答曲線である。

【図３】 図３は、種々の濃度の本発明の好ましいペプチドによる毛細管透過性阻害の投
与量応答曲線である。

【図４】 図４は、アラキドン酸代謝の主要な経路の概略説明図であり、肥満細胞脱顆粒
阻害を更に説明している。

【図５】 図５Ａ及びＢはＯＶＡ誘導性気管支喘息マウスモデルにおいて使用した標準（
５Ａ）及び消散（５Ｂ）の異なるプロトコールの概略説明図である。

【図６】 図６Ａ及びＢは、治療マウスと対照マウスにおける、ＯＶＡ誘導性喘息を阻害
する本発明化合物による治療の比較組織病理学を示している図面に代わる顕微鏡
写真である。

【図７】 図７Ｃ及びＤは、治療マウスと対照マウスにおける、ＯＶＡ誘導性喘息を阻害
する本発明化合物による治療の比較組織病理学を示している図面に代わる顕微鏡
写真である。

【図８】 図８はマウス喘息モデルの粘液プラグ形成に対する本発明による治療結果を示
しているヒストグラムである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 37/02 Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｋ 5/08 Ｃ０７Ｋ 5/08 5/10 5/10 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ， ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，Ｌ Ｓ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ， ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，Ｅ Ｅ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，Ｕ Ｚ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims (23)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
   なる群から選択される基を示す。） を有するペプチド、及び製薬上許容される担体からなる医薬組成物。
2. 【請求項２】 ペプチドが、式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ で表されるペプチドである請求項１に記載の医薬組成物。
3. 【請求項３】 上記ペプチドが、式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ で表されるペプチドである請求項１に記載の医薬組成物。
4. 【請求項４】 担体が、上記ペプチドを経口投与するために選択される担体
   である請求項１に記載の医薬組成物。
5. 【請求項５】 担体が、上記ペプチドを吸入投与するために選択される担体
   である請求項１に記載の医薬組成物。
6. 【請求項６】 医薬組成物が、エアゾール組成物である請求項１に記載の医
   薬組成物。
7. 【請求項７】 担体が、上記ペプチドを局所的に投与するために選択される
   担体である請求項１に記載の医薬組成物。
8. 【請求項８】 担体が、上記ペプチドを錠剤で投与するために選択される担
   体である請求項１に記載の医薬組成物。
9. 【請求項９】 肥満細胞に、式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
   なる群から選択される基を示す。） を有するペプチドを接触させてなる肥満細胞の脱顆粒を阻害する方法。
10. 【請求項１０】 式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
    なる群から選択される基を示す。） を有するペプチドの治療的有効量を、患者に投与することからなる喘息を治療す
    る方法。
11. 【請求項１１】 式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
    なる群から選択される基を示す。） を有するペプチドの抗炎症有効量を、患者に投与することからなる炎症を治療す
    る方法。
12. 【請求項１２】 炎症が、喘息、リウマチ様関節炎及びアナフィラキシーか
    らなる群から選択される疾病の結果である請求項１１に記載の方法。
13. 【請求項１３】 炎症が、リウマチ様関節炎の結果である請求項１１に記載
    の方法。
14. 【請求項１４】 炎症が、アナフィラキシーの結果である請求項１１に記載
    の方法。
15. 【請求項１５】 式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
    なる群から選択される基を示す。） を有するペプチドのサイトカイン放出阻害有効量を、患者に投与することからな
    るサイトカインの放出を阻害する方法。
16. 【請求項１６】 式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
    なる群から選択される基を示す。） を有するペプチドのヒスタミン放出阻害有効量を、患者に投与することからなる
    ヒスタミンの放出を阻害する方法。
17. 【請求項１７】 式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
    なる群から選択される基を示す。）を有するペプチドのロイコトリエン放出阻害
    有効量を、患者に投与することからなるロイコトリエンの放出を阻害する方法。
18. 【請求項１８】 式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
    なる群から選択される基を示す。） を有するペプチドの治療的阻害有効量を、患者に投与することからなる炎症部位
    へのリンパ球、好酸球及び好中球の付着、移動及び凝集を減少させる方法。
19. 【請求項１９】 式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
    なる群から選択される基を示す。） を有するペプチドのＩｇＥ抗体産生阻害有効量を、患者に投与することからなる
    炎症部位におけるＩｇＥ抗体の産生を減少させる方法。
20. 【請求項２０】 式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
    なる群から選択される基を示す。） を有するペプチドのＩｇＥ架橋阻害有効量を、患者に投与することからなる炎症
    部位におけるＩｇＥ架橋を減少させる方法。
21. 【請求項２１】 式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
    なる群から選択される基を示す。） を有するペプチドの血管透過性阻害有効量を、患者に投与することからなる炎症
    部位における血管透過性の上昇を阻害する方法。
22. 【請求項２２】 （ｉ）式 ｆ−Ｍｅｔ−Ｌｅｕ−Ｘ （式中、ＸはＴｙｒ、Ｔｙｒ−Ｐｈｅ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ及びＰｈｅ−Ｔｙｒから
    なる群から選択される基を示す。） を有するペプチド、及び （ｉｉ）他の活性成分からなる 抗炎症有効量を、患者に投与することからなる慢性炎症を治療する方法。
23. 【請求項２３】 他の活性成分が、抗ロイコトリエン、β_２アゴニスト及び
    コルチコステロイドからなる群から選択されるものである請求項２２に記載の方
    法。