JP2002515899A - 羊膜から作成した移植片、ならびにそのような移植片を外科で分離、保存、および使用する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 人間の羊膜からの外科移植片を作成、格納、および使用する方法、その結果生じた移植片、ならびに格納溶液である。羊膜は、絨毛膜を分離した人間の胎盤から獲得される。羊膜のシートをあるサイズに切断し、濾紙上にマウントする。羊膜の細胞は、好ましくは格納溶液中で凍結および解凍する間に死滅させる。格納溶液は、媒質および高浸透圧性物質を含み、羊膜の水和状態が維持される。格納する前に膜に治療物質を含浸させ、従来の外科的な治癒またはその他の治療に使用することもできる。

Description

【発明の詳細な説明】 羊膜から作成した移植片、ならびにそのような移植片を外科で分離、保存、およ び使用する方法技術分野 本発明は、傷ついた眼の修復に特に使用することができる羊膜移植片に関する 。本発明には、移植片用の羊膜を分離および保存する方法、この方法によって生 み出された移植片、ならびにこれらの移植片を使用しながら眼その他の器官を修 復する方法も含まれる。背景技術 術語： 羊膜は２つの主な構成要素、基底膜および支質を有する。羊膜の基底膜が占め る側は、「基底膜側」と呼ばれる。羊膜の支質が占める側は、「支質側」と呼ば れる。自家移植片は同じレシピエントから移植された組織である。皮下トンネル 中で使用される場合には、羊膜の自家移植片は永久構造となる。対照的に、同種 移植片は、ガラス質状の材料で置換される。同種移植片は、同種の別の個体のド ナーからレシピエントに移植された組織である。 以前の診療応用例： 羊膜および絨毛膜を含む胚胎膜は１９１０年に文書化された外科手術で使用さ れており、１９７９年にＴｒｅｌｆｏｒｄおよびＴｒｅｌｆｏｒｄ Ｓａｕｄｅ ｒによって再検討されている。ＴｒｅｌｆｏｒｄおよびＴｒｅｌｆｏｒｄ−Ｓａ ｕｄｅｒによる、Ｔｈｅ Ａｍｎｉｏｎ ｉｎ Ｓｕｒｇｅｒｙ、Ｐａｓｔ ａ ｎｄ Ｐｒｅｓｅｎｔ、１３４ Ａｍ Ｊ．ＯＢＳＴＥＴ．ＧＹＮＥＣＯＬ ８ ３３（１９７９年）を参照されたい。最初、胚胎膜は、１９１０年にＤａｖｉｓ により、温かいパラフィンの被覆および包帯を追加して火傷および潰瘍した皮膚 のために胚胎膜を使用し、６つのケースのうち１つで成功したと述べた。Ｄｅ ａｌ Ｄｅｆｅｃｔｓ ｗｉｔｈ Ｆｅｔａｌ Ｍｅｍｂｒａｎｅｓ、２３ Ａ ＲＣＨＩＶＥＳ ＯＦ ＯＰＴＨＡＭＯＬＯＧＹ ５２２（１９４０）を参照さ れたい。１９５２年に、Ｄｏｕｇｌａｓは、絨毛膜はさらに有効に皮膚に使用す ることができると考えた。１９６２年にＭａｓｓｅｅとその同僚らは、犬で胚胎 膜を使用し、全摘出後に骨盤を治療した。ただし、人間での実験は失敗した。 １９３５年にはＢｒｉｎｄｅａｕに、また１９３７年にはＢｕｒｇｅｒによっ て、分離した羊膜のみが、人工の膣を形成する際の移植片として使用された。１ ９４１年から１９４８年の間に、Ｋｕｂａｎｙｉが、火傷、外傷性の皮膚の創傷 、および腸皮膚のフィステルを有する患者に対して、癒着の溶解のための外科手 術に続いて「生体」羊膜を使用した。「アムニオプラスチン(amnioplastin)」と 呼ばれる技術で保存された分離した羊膜は、１９４０年にＣｈａｏとその同僚ら によって最初に報告された。Ｃｈａｏは、継続的な硬膜の修復、末梢神経の損傷 、結膜移植片、ならびに腱および屈筋の修復にアムニオプラスチンを使用した。 ロシアの文献では、この技術は１９４２年にｐｉｋｉｎによって新しい外傷にも 使用された。 全ての報告は熱狂的であるが、「アムニオプラスチン」についての言及は実質 的な説明なくこの文献から消えた。保存された分離した非生体羊膜に関する重要 な報告は、３０年間発見されなかった。さらに、この期間に治療の失敗があって も、それらは報告されなかった。この研究の隙間は、前述のＴｒｅｌｆｏｒｄと その同僚らの研究によって１９７２年に終了する。Ｔｒｅｌｆｏｒｄは、初期の 形態で保存された分離した羊膜を使用し、支質側を下にした配置でよりしっかり した「生着」が実現することを示した。Ｒｏｂｓｏｎとその同僚らは１９７２年 に、部分厚の皮膚の創傷に使用したときには「生着」が起こらず、羊膜がはがれ たと述べた。１９７３年以降に、Ｔｒｅｌｆｏｒｄとその同僚らは、骨盤腹膜を 置換するため、茎状移植片処置において露出した深い表面を覆うため、また糖尿 病患者の治癒していない皮膚の創傷を治療するために全厚の皮膚の創傷の包帯と して、全舌切除の外科的欠損を覆う移植片として、また臍ヘルニアおよび頭部の 損傷に続く随脳膜炎の癒着の予防における生物学的包帯として、これを使用する ことを報告した。 以前の準備および保存の方法： 上述の全ての応用例では、除去され、使用前に特殊な溶液中で「生きた状態で 」保存された１つまたは複数の生体組織を使用していたことが分かった。例えば ｄ のロック溶液」中に入れ、帝王切開の１〜１５時間後に組織を患者に移植した。 １９８０年以降に現れた報告では、生体羊膜が使用されていることについて触れ ている（３４ Ｊ．ＲＥＰＲＯＤＵＣＴＩＶＥ ＭＥＤ、１９８（１９８９年） および２７ Ｊ．ＰＥＤＩＡＴＲＩＣ ＳＵＲＧＥＲＹ ８８２（１９９２年） を参照されたい）。「アムニオプラスチン」については、Ｃｈａｏとその同僚ら が、羊膜を分離し、それを７０％アルコール中に置き、その後使用する前にこれ をオーブンで乾燥させた。Ｒｏｂｓｏｎとその同僚らは、羊膜を０．０２５％Ｎ ａＯＨ溶液ですすぎ、ペニシリンを含む食塩水中に４℃で格納すれば６週間まで 殺菌状態のままであることを示した。Ｔｒｅｌｆｏｒｄとその同僚らは、ポリミ キシン、アンピシリン、ゲンタマイシン、およびアムホテリシンＢを加えた０５ Ｎ食塩水中に４℃で格納された羊膜が４時間後に殺菌状態となり、少なくとも４ ８時間はそのままであることを発見した。発明の開示 新しい方法で獲得および保存された人間の羊膜は、潰瘍化による永続的な角膜 の上皮欠損の治癒の促進、炎症、血管形成、および瘢痕の低減、上皮の表現型の 回復、眼球表面の再構築でのさらに別の多くの使用、ならびに翼状片の「強膜露 出」除去中の結膜の自家移植片の代替となる基質としての使用において有効な移 植片となる。さらに、輪部の同種移植片と組み合わせて使用するときには、羊膜 移植は、進んだ眼球の瘢痕性類天庖瘉、スティーブンス・ジョンソン症候群、化 学的／熱性火傷、無虹彩、アトピー性角膜炎、および突発性輪部幹細胞欠乏症の 患者の眼球表面の再構築に有効である。胎盤を獲得および洗浄した後で、鈍的剥 離によって絨毛膜から羊膜を分離し、上皮表面が濾紙の方に向かないようにして 濾紙上で平らにし、切断して小さなシートにする。これらのシートは、例えば１ 対１（ｖ／ｖ）の比でＤｕｌｂｅｃｃｏのＭｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅ ｄｉｕｍおよびグリセロールからなる媒質中に格納され、移植片として使用する 直前まで−８０℃で凍結される。使用する日に室温まで解凍されたとき、移植片 膜の細胞は死んでいる。膜の濾紙と接着した側は、外科手術部位の反対側である 。発明を実行する最良の方式 移植片を選択、準備、および保存する方法： 人間の羊膜からの移植片を準備および保存するために、下記の方法を使用する ものとする。 最初に、分娩後できる限り速やかに胎盤をとる。胎盤は、正常かつ健康な乳児 の選択的帝王切開（Ｃ／Ｓ）分娩の直後にとることが好ましい。 血液によって伝達される病気のいかなる可能性も回避するために、妊婦は、従 来の血清学的検査を使用してＨＩＶ−１、ＨＩＶ−２、ＨＴＬＶ−１、Ｂ型肝炎 ウィルス、Ｃ型肝炎ウィルス、梅毒について事前にスクリーニングを受ける。母 体の血液が血清学的に陰性であると分かった胎盤のみをこの方法では使用して、 羊膜移植片を生成する。 上記選択基準を満たす人間の胎盤は、アイスバケットに格納した無菌のプラス チック・バッグに入れて研究所に移送される。組織培養で日常的に使用される下 記の手順を無菌状態で実行する。 １．層流フードの下で、胎盤を平衡食塩水で数回すすいで余分な血塊を除去する 。平衡食塩水は、例えばＡｌｃｏｎ Ｉｎｃ．、６２０１ Ｓｏｕｔｈ Ｆｒｅ ｅｗａｙ、Ｆｏｒｔ Ｗｏｒｔｈ、ＴＸ、７６１０１からＢＳＳ^(R)という商標 で市販されている。このすすぎ液は、洗浄および保存の際の補助となるように抗 生物質も含むものとする。有効な抗生物質の処方の一例では、ペニシリンを５０ μｇ／ｍｌ、ストレプトマイシンを５０μｇ／ｍｌ、ネオマイシンを１００μｇ ／ｍｌ、アムホテリシンＢを２．５μｇ／ｍｌ含む。さらに、移植片を配置した 後でレシピエントに転移するその他の物質を含むように、膜を処置することがで きる。移植片膜に含浸させることができる物質の例としては、外科手術領域の治 癒やその他の療法の助けとなる治療物質、ホルモン、ポリペプチドがある。 ２．２組の鉗子を用いて、上記の抗生物質を含む平衡食塩水中に浸されている間 に、胎盤の羊膜は鈍的剥離によって残りの絨毛膜から容易に分離される。 ３．次いで分離したシート状の羊膜を、平坦にしたときに上皮表面が上向きにな るように、例えば無菌ニトロセルロース・フィルタの基質上にマウント／付着さ せる。こうして、支質／線維芽細胞層がフィルタ上に存在する。基底膜は支質層 の上にあり、上皮は基底膜の上にある。フィルタは、羊膜および次に論じる支質 媒質に対して不活性であるとする。フィルタは、漂白剤または塩素を含まないも のとし、格納媒質中にあるとき、特にその中で凍結および解凍されるときに安定 であるとする。このようなフィルタの１つの供給元はＭｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｉｎ ｃ．であり、製品番号１６２−０１８０で販売されている。その他の有効な基質 としては、全てＢｉｏｒａｄ製の、ニトロセルロース膜１６２−０１１５，支持 体付きニトロセルロース膜１６２−００９０，およびブロット吸収性濾紙１６２ −０１１８がある。 ニトロセルロース・フィルタ上に付着／マウントされた羊膜のシートは、例え ば２．５〜３．０ｃｍ×２．０〜２．５ｃｍ、１．２〜１．５ｃｍ×１．７５〜 ２．０ｃｍなど、様々なサイズに切断され、凍結点以下の温度で培地中に格納さ れる。移植片（切片およびフィルタにマウントしたシート状の羊膜）を凍結させ 、その後使用する直前にそれらを解凍することにより、おそらくは培地中の液体 から氷晶が膜中で形成されることによって膜の細胞が死滅することを理解するこ とは重要である。細胞を死滅させることにより、その結果生じる移植片が外科手 術後に拒絶されない。しかし、凍結および解凍しても、細胞外マトリックスの完 全性は変化しない。その他の従来の手段によって細胞を死滅させることもできる が、凍結／解凍法の使用では、格納された膜または完成した移植片に不利な影響 を与えてこれが「生着」しないようにする、または拒絶されるようにして、眼な どの治癒を損なう可能性のある物質または状態が導入されない。前述のように、 従来技術では細胞を生体（生きた状態）に保つために媒質を使用し、細胞を死滅 させることの大きな利点を認識していなかった。 凍結点以下であればいかなる温度でも働くが、−８０℃の温度を通常は使用し て移植片を格納する。さらに、この保存方法は、このようにして格納および凍結 された膜の切断シートがドライアイス中で長距離輸送されるときでも、１年を超 える長期の格納の無菌性および効力に関して有効である。 有効な媒質の一例は、５０％のＤｕｂｅｃｃｏ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌ ｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（以下「ＤＭＥＭ媒質」とする）（ＧＩＢＣＯ製）、およ び５０％のグリセロール（ｖ／ｖ）からなる。３０％〜５０％のグリセロールが 使用可能である。グリセロールの機能は羊膜の水和状態を維持することである。 不足した、または過剰な水和は有害であり、意図した目的には６０％〜９０％の 水和が有効である。グリセロールは血漿増量剤とも呼ばれる高腫脹性または高浸 透圧性物質として機能する。その他の使用可能な高浸透圧性物質の例としては、 デキストラン、アルブミン、およびマンニトールがある。ＤＭＥＭなどの格納媒 質の一般的な目的は、羊膜に栄養素を供給し、羊膜の電解質平衡を維持すること である。適当な格納媒質のその他の例としては、全てＬｌｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌ ｏｇｉｅｓ製のＬｉｅｂｏｗｉｔｚ’ｓ媒質、ＭＥＭ、およびＮＣＴＣがある。 濾紙上の羊膜のシートが「短期間」、すなわち採取してから２４時間以内に使 用される場合には、格納媒質を使用することは不可欠ではないが、前述のように 細胞は死滅させなければならない。 前述の方法によって準備された移植片 前述の方法に従って準備および保存された、絨毛膜が除去された人間の胎盤か らの羊膜を含む移植片。この移植片は、平衡食塩水および抗生物質ですすいであ る。移植片は、それに吸収された治療物質を含むことができる。移植片は、前述 のように適当な特性を有する濾紙上にマウントされる。移植片は、培地および高 腫脹性剤の組成物中に凍結温度で格納される。使用する前に、移植片を解凍する 。 準備した羊膜を外科手術移植片として使用する方法： 永続的な上皮欠損および潰瘍を有する眼において、眼球後の麻酔注射の後で、 外科用スポンジ（適当な外科用スポンジの一例は、Ａｌｃｏｎ Ｉｎｃ．、６２ ０１ Ｓｏｕｔｈ Ｆｒｅｅｗａｙ、Ｆｏｒｔ Ｗｏｒｔｈ、ＴＸ、７６１３４ −２０９９からＭＩＣＲＯＳＰＯＮＧＥ^(R)という商標で販売されている）およ び０．１２鉗子を用いて潰瘍の基部を鮮創し、潰瘍の縁部に隣接する癒着性の乏 しい上皮も、上皮の癒着性が高くなる領域に除去する。最近格納媒質から取り出 されて室温に解凍された羊膜を、ニトロセルロース濾紙からはがし、支質表面を 眼の方に向け、膜／移植片シートの余分な縁部を切除することによって欠損を覆 うように適合させて、レシピエントの目に移植する。その他の場合には反対側を 使用することもできる。次いで、不連続な１０−０ナイロン縫合、場合によって は連続な１０−０ナイロン縫合によってこのようにした膜を欠損の縁部に固定す る。結び目を埋めた後で、良好に近似した羊膜が潰瘍床を充填した結果、角膜表 面は滑らかになる。深い潰瘍を除けば、一般に１つの層の膜で十分である。しか し、２つ以上の層を使用することも可能である。包帯コンタクトレンズは、ネオ マイシン、硫酸ポリミキシンＢ、およびデキサメタゾンを含む局所的抗生物質眼 軟膏とともに適用される。このような適当な抗生物質眼軟膏は、Ａｌｃｏｎ Ｌ ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．、６２０１ Ｓｏｕｔｈ Ｆｒｅｅｗａｙ、 Ｆｏｒｔ Ｗｏｒｔｈ、ＴＸ、７６１３４からＭＡＸＩＴＲＯＬ^(R)という商標 で販売されている。 ｔｔｈのそれより有効である。さらに、本発明は、腫瘍、病巣、および瘢痕組織 を外科的に除去する間に損傷を受けた結膜表面を再構築するために使用すること もできる。印象細胞診断法で、再構築された結膜が、正常な対照より多数の杯状 細胞を有する正常な上皮表現型を回復することを証明することができる。杯状細 胞はムチンを分泌し、杯状の形状をしている。本発明の方法によって生成された 膜は、パッチとして使用される場合には、それぞれ近視および乱視を矯正するた め、また角膜の疾病部分を除去するために現在患者に使用される手順であるエキ シマレーザ光屈折角膜切開術および治療的角膜切開術によって引き起こされる、 瘢痕の形態の角膜のヘーズを低減させることができる。また、この方法および生 成物は、単独で、または幹細胞移植組織とともに使用して、輪部幹細胞の欠乏に つながる様々な原因によって損傷を受けた表面を再構築することができる。 この羊膜移植片は、ブレブ漏出を矯正することによって緑内障の外科手術の成 功を促進するために使用することができる。本明細書の本発明に従って作成した 羊膜移植片を外科的に使用することにより、帯状角膜症の再発を防止し、筋肉外 科手術中の癒着を防止し、眼形成外科手術中の眼窩の再構築を補助することがで きる。帯状角膜症は角膜表面上のカルシウムの沈着である。 上述の眼での使用に加えて、本発明の羊膜は、火傷または外科的な皮膚の創傷 を覆う移植片または包帯として使用する、全ての会陰内外科手術、または腹部、 胸腔、および心膜を覆う漿膜表面上でのその他の再構築において癒着を防止する ために使用する、口腔、鼻腔、気道、胃腸管、および尿路を内張りする全ての粘 膜の表面を再構築するために使用する、脳外科手術において硬膜の修復をサポー トする基質として使用する、中枢および末梢神経系の神経再生を促進する基質と して使用する、軟部組織を再構築して関節または腱の修復における癒着を防止す るために使用することができるものと考えられる。 外科医、科学者、研究者らは、下記の論文に提供された情報から利益を得るこ とになると考えられる。 本発明の方法および生成物の好ましい実施例について説明し、それらの修正形 態について言及したが、本発明の趣旨および範囲を逸脱することなく、添付の請 求の範囲内でその他の変更、変形、および修正を行うこともできる。産業上の適用 本発明の目的は、羊膜から作成した移植片を準備することである。 本発明の別の目的は、長期間格納することのできる羊膜から作成した移植片を 準備することである。 本発明の別の目的は、レシピエントに付着させたときにこのレシピエントに送 り出すことができる物質を含むように処置された移植片を準備することである。 本発明の別の目的は、翼状片の「強膜露出」除去の間に結膜の自家移植片の代 替となる改良された基質を提供することである。 本発明の別の目的は、結膜組織弁の代替となる改良された基質を提供し、潰瘍 による角膜の上皮欠損の治癒を促進することである。 本発明の別の目的は、眼瞼癒着溶解の場合に結膜表面を再構築する、改善され た方法を提供することである。 本発明の別の目的は、腫瘍、病巣、および瘢痕組織を結膜または角膜表面から 外科的に除去する改善された方法を提供することである。 本発明の別の目的は、エキシマレーザ光屈折／治療的角膜切開術によって引き 起こされる角膜のヘーズを低減させることである。 本発明の別の目的は、ブレブ漏出を矯正することによって緑内障の外科手術の 成功を促進することである。 本発明の別の目的は、帯状角膜症の再発を防止することである。 本発明の目的および従来技術に勝る利点、ならびに従来技術との相違点は、下 記の考察、すなわち胚形成および組織学、構成要素、基本研究の応用例、ならび に好ましい実施例の説明を、その結果生じた改良された移植片の多数の提案され た使用法の説明とあわせて読めば完全に理解されるであろう。 胚形成および組織学： 胞胚移植プロセスの初期に、胚の塊と隣接するトロホブラストとの間に空間が 発生する。羊膜上皮は胎児の外胚葉（胚盤）から派生する。上皮細胞に加えて、 線維芽細胞状の細胞の層がこの胚から派生することもあるが、これは確実ではな い。人間の羊膜の重要な「失われた」要素は、平滑筋細胞、神経、リンパ管、お よび最も重要な血管である。人間の羊膜は、正常な肺胞の発達の７日目および８ 日目くらいに発達する可能性が高い。羊膜は、羊膜腔が拡大する妊娠の１０週目 から１２週目の間に絨毛膜と融合する。羊膜は期間まで無血管のままとなる。界 面すなわち中間ゾーンによって羊膜と絨毛膜とを分離することができるのはこの ためである。正常な羊膜は０．２〜０．５ｍｍの厚さとなる。 組織学的には、羊膜は５つの層からなる。内側表面は、基底膜上にある単純な 立方体状上皮からなる。無血管支質は胎児の間葉を含み、緻密層、線維芽細胞層 、および海綿層を含む。羊膜には４つの異なる解剖学的部分が存在する。第１に 、反転した羊膜は、平滑絨毛膜と隣接する部分である。第２に、胎盤の羊膜は絨 毛膜の血管の外膜表面と直接隣接する胎盤の胎児表面の上に重なる。第３に、羊 膜は、Ｗｈａｒｔｏｎの膠質と隣接する臍帯も覆う。Ｗｈａｒｔｏｎの膠質は、 臍帯の血管が横切る細胞外マトリックスである。第４に、２羊膜２絨毛膜双胎妊 娠では羊膜が「融合」し、前者では融合した平滑絨毛膜と隣接し、後者では羊膜 は羊膜と融合する。 構成要素： 人体の異なる組織は、膠原およびグリコサミノグリカン（以下「ＧＡＧｓ」と する）の異なる構成要素を有する。羊膜の支質は膠原ＩおよびＩＩＩならびにフ ィブロネクチンを含み、膠原タイプＶおよびＶＩＩの椎弓板周囲の分布を有する ことが分かっている。羊膜の基底板は、タイプＩＶの膠原線線維、ラミニン、硫 酸ヘパリンプロテオグリカンのネットワークを含む。羊膜の膠原線維は基質を含 まずに密に分布し、厚い膠原層を形成する。人間および猿の胎盤では、ヒアルロ ン酸（以下「ＨＡ」とする）が、発見された唯一のＧＡＧｓであると考えられる が、この発見は依然として羊膜では示されていない。この構成要素の特徴は、妊 娠中に認められる引張り強さの一因となる。 羊膜の基底膜側は、上皮の成長を支持して上皮の極性を維持するために使用す ることができる。人間の線維芽細胞またはＡ４３１上皮癌細胞が成長するときに は、羊膜の支質側は、分離した膠原に匹敵するが、培養する細胞の成長における 平らな形成表面より大きいことが分かっている。ボイデン箱中に差し込めば、こ の膜は、基底膜を介した白血球血管外遊出、血管内皮侵入、および腫瘍細胞転移 のプロセス中の多形核球細胞遊出（以下「ＰＭＮ遊出」とする）の研究に使用す ることができる。羊膜には神経が分布していないが、鳥類の羊膜は、アセチルコ リン、ノルエピネフリン、ヒスタミン、Ｓ−ヒドロキシトリプタミン、ＶＩＰ、 ｕｒｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ、ニューロテンシン、およびソマトスタチン−２８を 含む、神経伝達物質のための少なくとも１１個の異なるタイプの受容器を表出す る。 基本研究の応用例： その基底膜の内容物を利用することにより、人間の羊膜を基質として使用して 、抹消および中枢神経系のニューロンを培養し、また中枢神経系に移植されたと きの軸索の再生を促進することができる。この効果は生体細胞に依存せずに表れ 、受容者の再生力を促進する羊膜のマトリックスによって媒介され、重傷の末梢 神経の再生において神経生長因子（以下「ＮＧＦ」とする）を付加するとさらに 改善することができる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．人間の羊膜を獲得し、外科手術の移植片として使用するために準備する方法 であって、 人間の胎盤を獲得してこれを洗浄する段階と、 前記胎盤の羊膜をその絨毛膜から分離する段階と、 前記膜の上皮表面が前記基質の方を向かないようにして前記羊膜を基質上にマウ ントする段階と、 前記膜を移植片として使用する前に前記膜の細胞を死滅させる段階と を含む方法。 ２．前記細胞を死滅させる前記段階が、前記羊膜を液体中で凍結させる段階と、 前記羊膜を移植片として使用する前に解凍する段階とによって達成される請求項 １に記載の方法。 ３．前記凍結が前記マウントの後に実施され、前記解凍が使用する直前に実施さ れる請求項２に記載の方法。 ４．前記液体が媒質によって構成される請求項２に記載の方法。 ５．前記液体が高浸透圧性試薬によっても構成される請求項４に記載の方法。 ６．前記液体が、ＤＭＥＭ媒質およびグリセロールによって構成される請求項２ に記載の方法。 ７．前記基質が無菌ニトロセルロース・フィルタであり、 前記羊膜を前記フィルタから分離し、 前記膜を外科手術個所に、前記膜の支質層が前記個所に向くようにして移植片と して固定する、 請求項１に記載の方法。 ８．前記外科手術個所が人間の目である請求項７に記載の方法。 ９．翼状片の強膜露出除去中の自家移植片、 潰瘍による角膜上皮の欠損の治癒の促進、 眼瞼癒着溶解の場合の結膜表面の構築、 瘢痕の低減、 正常な上皮表現型の維持、 腫瘍、病巣、および瘢痕組織の結膜または角膜表面からの除去、 エキシマレーザによって引き起こされる角膜のヘーズの低減、 ブレブ漏出の矯正の促進、 帯状角膜症の再発防止、 眼形成外科手術中の眼窩の再構築の補助、 様々な原因による輪舞幹細胞の欠乏によって損傷を受けた角膜表面の再構築のい ずれか１つのために前記移植片を利用する請求項８に記載の方法。 １０．皮膚の創傷を覆う包帯、 外科手術中の癒着の防止、 粘膜表面の再構築、 硬膜の修復の基質としてのサポート、 基質としての神経修復の促進、 軟部組織の再構築、および 瘢痕の低減 のいずれか１つのために前記羊膜移植片を利用する請求項１に記載の方法。 １１．前記移植片を配置した後で前記移植片のレシピエントに転移させるための 、治療物質、ホルモン、ポリペプチドの少なくとも１つを前記羊膜に含める請求 項１に記載の方法。 １２．前記獲得が、人間の女性から帝王切開分娩中に行われる請求項１に記載の 方法。 １３．請求項１の方法による羊膜からなる外科移植片。 １４．請求項５の方法による羊膜からなる外科移植片。 １５．前記膜が移植片として使用される前にその細胞が死滅している人間の羊膜 からなる外科移植片。 １６．前記膜が表面を有する支質層を有し、 前記表面が、外科手術個所に適用される前記移植片の表面である請求項１５に記 載の外科移植片。 １７．前記支質層の前記表面が前記基質の方を向くようにして、前記膜が基質に マウントされる請求項１６に記載の外科移植片。 １８．基底層の前記表面が前記基質の方を向くようにして、前記膜が基質にマウ ントされる請求項１６に記載の外科移植片。 １９．前記膜が、抗生物質、細胞ホルモン、ポリペプチド、治療物質の少なくと も１つを含む請求項１５に記載の外科移植片。 ２０．前記羊膜を凍結状態で格納するための媒質および高浸透圧性物質と組み合 わせる請求項１５に記載の外科移植片。 ２１．前記媒質がＤＭＥＭであり、 前記高浸透圧性物質がグリセロールである、 請求項２０に記載の外科移植片。 ２２．媒質と、 高浸透圧性物質と を含む、羊膜の移植片のための格納溶液。 ２３．前記媒質がＤＭＥＭの機能属性を有する請求項２２に記載の格納溶液。 ２４．前記高浸透圧性物質がグリセロールである請求項２３に記載の格納溶液。 ２５．前記ＤＭＥＭおよび前記グリセロールの量がそれぞれ約５０％および５０ ％（Ｖ／Ｖ）である請求項２４に記載の格納溶液。