ES2266193T3 - Metodo de expansion de celulas madre epiteliales. - Google Patents
Metodo de expansion de celulas madre epiteliales. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2266193T3 ES2266193T3 ES01927340T ES01927340T ES2266193T3 ES 2266193 T3 ES2266193 T3 ES 2266193T3 ES 01927340 T ES01927340 T ES 01927340T ES 01927340 T ES01927340 T ES 01927340T ES 2266193 T3 ES2266193 T3 ES 2266193T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- stem cells
- epithelial stem
- amniotic membrane
- membrane
- amniotic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
- A61F2/02—Prostheses implantable into the body
- A61F2/14—Eye parts, e.g. lenses, corneal implants; Implanting instruments specially adapted therefor; Artificial eyes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61F—FILTERS IMPLANTABLE INTO BLOOD VESSELS; PROSTHESES; DEVICES PROVIDING PATENCY TO, OR PREVENTING COLLAPSING OF, TUBULAR STRUCTURES OF THE BODY, e.g. STENTS; ORTHOPAEDIC, NURSING OR CONTRACEPTIVE DEVICES; FOMENTATION; TREATMENT OR PROTECTION OF EYES OR EARS; BANDAGES, DRESSINGS OR ABSORBENT PADS; FIRST-AID KITS
- A61F2/00—Filters implantable into blood vessels; Prostheses, i.e. artificial substitutes or replacements for parts of the body; Appliances for connecting them with the body; Devices providing patency to, or preventing collapsing of, tubular structures of the body, e.g. stents
- A61F2/02—Prostheses implantable into the body
- A61F2/14—Eye parts, e.g. lenses, corneal implants; Implanting instruments specially adapted therefor; Artificial eyes
- A61F2/142—Cornea, e.g. artificial corneae, keratoprostheses or corneal implants for repair of defective corneal tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
- A61L27/3813—Epithelial cells, e.g. keratinocytes, urothelial cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3839—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by the site of application in the body
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0068—General culture methods using substrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/90—Substrates of biological origin, e.g. extracellular matrix, decellularised tissue
- C12N2533/92—Amnion; Decellularised dermis or mucosa
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Injerto quirúrgico para aplicar en un sitio receptor, en donde dicho injerto se caracteriza porque el injerto comprende: una membrana amniótica que comprende células amnióticas y una matriz extracelular íntegra; y células madre epiteliales expandidas sobre dicha membrana amniótica.
Description
Método de expansión de células madre
epiteliales.
La presente invención se refiere a una
deficiencia de células madre epiteliales y células madre límbicas y,
más específicamente, a un método e injerto para tratar este problema
de deficiencia de células madre epiteliales en, por ejemplo, la
reconstrucción de la superficie corneal.
En relación con el ojo, la superficie ocular
normal está cubierta por los epitelios corneal, límbico y
conjuntivo. Sus distintos fenotipos celulares, junto con una
película lagrimal preocular estable, mantienen la integridad de la
superficie ocular. Graves daños del epitelio límbico, debidos a:
quemaduras químicas o térmicas, síndrome de
Stevens-Johnson, penfigoide cicatricial ocular,
múltiples cirugías y crioterapias en la región límbica, el uso de
lentes de contacto y una grave infección microbiana, pueden dar
origen a una deficiencia de células madre límbicas y epiteliales. La
deficiencia de células madre epiteliales del limbo suele
manifestarse con conjuntivalización, vascularización, inflamación
crónica y crecimiento fibroso hacia la superficie corneal y
opacificación de la córnea.
Cuando la deficiencia límbica es unilateral o
bilateral con afectación asimétrica, está indicado el trasplante
autólogo de tejido límbico. Un problema importante del trasplante
límbico autólogo es que se deben retirar del ojo contralateral sano
uno o dos injertos límbicos, que comprenden la zona del limbo entre
las 2 y las 3 en el reloj. Ha habido un informe que describe la
complicación potencial en los ojos donantes. Los experimentos con
conejos también han demostrado que se puede producir una deficiencia
límbica si, subsiguientemente, se elimina el epitelio corneal
central del ojo donante que ha sido sometido a una retirada límbica
previa. Pellegrini et al., Lancet 1997;
349:990-993, han informado sobre el trasplante de
capas de células epiteliales de la córnea, expandida en una capa de
nutrición de fibroblastos 3T3, para la reconstrucción de la
superficie corneal en dos pacientes con deficiencia límbica
total.
Recientemente, Kim y Tseng, Cornea 1995;
15:473-84, han demostrado que el trasplante de la
membrana amniótica, como sustitución del sustrato, es efectivo en la
reconstrucción de la superficie de la córnea en conejos con
deficiencia total de células madre epiteliales del limbo.
Schwab et al. (Reunión anual de la
Asociación de Investigación de la Visión y Oftalmología, vol
40(4), 9 a 14 de mayo de 1999, página 5578) describen un
injerto compuesto de epitelio corneal consistente en membrana
amniótica y células madre epiteliales de la córnea. Las células
epiteliales se expanden in vitro y se siembran en placas
sobre membrana amniótica exenta de células epiteliales.
Schwab I.R. (Transactions of the American
Oph-thalmological Society, vol. 97, 1999, págs.
891-986) también describe células madre epiteliales
de la córnea expandidas in vitro y aplicadas sobre una
membrana amniótica denudada (es decir, eliminación del epitelio
amniótico) para formar un injerto compuesto.
En un ejemplo de esta invención, células madre
límbicas y células epiteliales, procedentes de una pequeña biopsia
límbica, tomada de un ojo sano, se expanden en cultivo sobre una
membrana amniótica especialmente tratada. La utilización de una
membrana de este tipo como sustrato ayuda a restaurar un estroma
límbico no inflamado y a expandir las poblaciones de células madre
límbicas y células madre epiteliales. El "producto" resultante
se puede trasplantar, como injerto, sobre una superficie corneal
denudada tras una queratectomía superficial para eliminar el
crecimiento fibrovascular. Para zonas del cuerpo dañadas diferentes
del ojo, la biopsia de células epiteliales sanas se lleva a cabo en
una zona de tejido adyacente, que tiene las mismas o similares
características biológicas/histológicas, es decir, es
histocompatible con la zona dañada.
La biopsia límbica se lleva a cabo en un ojo
sano, que puede ser el ojo contralateral de un paciente o de otro
individuo vivo. Se esteriliza el párpado ocular con Betadine®
(povidona yodada). Bajo condiciones de esterilidad, se separan del
margen del limbo 1 a 2 mm^{2} de tejido límbico que contiene
células epiteliales y parte del tejido estromático de la córnea, y
se escinde del estroma corneal superficial por queratectomía
laminar, con una hoja Beaver® Nº 66 (Becton Dickinson, Franklin
Lakes, NJ). El tejido se deposita en una placa de 35 mm que contiene
1,5 ml de medio de cultivo, que tiene por ml: DMEM (medio de Eagle
modificado por Dulbecco) y F12 de Ham (relación 1:1), suplementado
con DMSO (dimetilsulfóxido) al 0,5%, 2 \mug de EGF (factor de
crecimiento epidérmico) de ratón, 1 \mug de insulina bovina, 0,1
\mug de toxina del cólera, y 5% de suero bovino fetal, y se envía
de inmediato al laboratorio para cultivo bajo una campana estéril de
flujo laminar.
La membrana amniótica (adquirida de Bio Tissue,
Miami, FL) se utiliza como sistema de cultivo, y se obtiene, procesa
y conserva de la forma señalada por Tseng SCG en Am. J.
Ophthalmol. 1997; 124:765-774, y Tseng, Patente
de EE.UU. 6.452.142.
La membrana amniótica, con la cara de membrana
basal hacia arriba, se fija uniformemente sobre una placa de
cultivo, y se incuba a 37ºC bajo CO_{2} al 5% y aire al 95%, en un
incubador humidificado durante la noche previa a su uso. Se lleva a
cabo el cultivo del explante límbico de la forma anteriormente
descrita (Tsai y Tsen, Invest Ophthalmol Vis Sci 1988;
29:97-108; y Tsai et al., Invest
Ophthalmol Vis Sci 1994; 35:3865-2875), con
algunas modificaciones. En lugar de la transferencia sobre un
sustrato plástico, como se enseña en estas referencias
bibliográficas, el explante límbico con las células madre
epiteliales se planta/transfiere sobre la cara de membrana basal de
la membrana amniótica en una placa de 35 mm que contiene 1 ml del
medio de cultivo anteriormente descrito. El medio se cambia cada dos
días, y el cultivo se mantiene durante 2 a 3 semanas, momento en el
que las células madre han crecido y difundido para formar una capa
celular que abarca una superficie de aproximadamente 2 a 3 cm de
diámetro, para la reconstrucción de la superficie corneal. Para
otros procedimientos de reparación tisular, se puede emplear mayor o
menor superficie de capa de células madre epiteliales, en función de
las necesidades.
Siguiendo con el ejemplo de la reparación
corneal, tras la periotomía del limbo, se eliminan la cicatriz
conjuntival y los tejidos inflamados hasta denudar la esclerótica.
El tejido fibrovascular de la córnea se elimina por queratectomía
laminar con hojas Beaver Nº 57 y 66, de manera similar a la descrita
para el trasplante de aloinjerto límbico (Tsai y Tseng,
Cornea 1994; 13:389-400). Para los pacientes
con daño parcial a total del limbo corneal, pero con una córnea
central normal, se utilizan las células madre epiteliales del limbo
cultivadas con la membrana amniótica como injerto sectorial del
limbo corneal, o un equivalente del limbo, diseñado de acuerdo con
el tamaño del ojo del receptor, y que se trasplanta a la
correspondiente zona del limbo del receptor (desde 90º hasta 360º).
Para los pacientes con daño total de la superficie límbica y
corneal, el nuevo injerto se utiliza como tejido corneal laminar
completo, o un equivalente del limbo corneal, que se trasplanta como
queratoplastia laminar para recubrir toda la zona.
Se fija una capa, de tamaño adecuado, de células
madre epiteliales, cultivadas sobre el sustrato de membrana
amniótica tratada, para recubrir la totalidad del defecto, con la
cara epitelial hacia arriba, que se puede identificar fácilmente por
tinción fluorescente o por la presencia del explante original, que
está unido de forma libre. A continuación, se asegura el injerto
sobre el sitio dañado. Para una córnea dañada, este aseguramiento se
puede llevar a cabo mediante suturas interrumpidas de nailon
10-0 sobre la cara corneal, y suturas interrumpidas
de Vicryl® 8-0 hacia el borde conjuntival que lo
rodea, con anclaje epi-esclerótico. Durante todo el
procedimiento, la capa de células madre epiteliales cultivadas se
protege contra la exposición, secado y abrasión por medio de un
recubrimiento de ácido hialurónico (hialuronato) sódico Healon®
(Pharmacia & Upjohn AB, Uppsala, Suecia). El tejido del explante
original se puede separar desde la membrana amniótica al final de la
intervención quirúrgica. Si este injerto se encuentra sobre la
córnea, se aplica sobre el ojo un parche de presión durante la
noche, se coloca una lente de contacto terapéutica al día siguiente,
durante una semana; y se administra una solución tópica de acetato
de prednisolona al 1% cuatro veces al día durante la primera semana,
y dos veces a la semana durante las dos semanas siguientes, seguida
de fluorometolona al 0,1% dos veces al día, durante 2 a 3 meses,
dependiendo de la gravedad de la inflamación conjuntival alrededor
del área quirúrgica.
Como se ha señalado anteriormente, el explante
se cultiva sobre la cara de membrana basal de la membrana amniótica
especialmente tratada. Después de 2 a 3 semanas, las células madre
epiteliales crecen hasta formar una capa de aproximadamente 2 a 3
cm^{2} de tamaño sobre la membrana amniótica. La preparación sobre
soporte plano demuestra que la capa de células madre es negativa a
la tinción con PAS y azul Alcian; y la membrana amniótica desnuda se
tiñe de color púrpura. Exámenes histológicos demuestran que la capa
epitelial está compuesta por 4 a 5 capas de células madre en el
margen de la capa, y 1 a 4 capas celulares en la zona situada entre
el margen y el tejido del explante original. Los exámenes
ultraestructurales revelan la presencia de espacios intercelulares
sueltos y amplios, y la estructura de la membrana basal, con
condensación focal de una sustancia de base electrónicamente densa
en el punto de unión de las células basales con la membrana
amniótica.
Con respecto a una realización de la invención
específica para el tratamiento oftalmológico, un período de
seguimiento medio (\pm DE) de 14,8 \pm 1,9 meses muestra grados
variables de mejoría visual, sobre la base de la escala de agudeza
visual de Snellen. Todos los ojos exhiben una reepitelización
completa en 2 a 4 días, con un período medio (\pm DE) de 2,7 \pm
0,8 días. Las superficies corneales reconstruidas muestran reducción
de la inflamación y regresión de la vascularización en el plazo de 1
a 2 semanas. Un mes después de la operación, la claridad de la
córnea ha mejorado y la superficie es suave y humectable.
Dependiendo de la zona de la lesión del limbo
corneal, las células madre epiteliales cultivadas, expandidas sobre
un sustrato especialmente preparado de membrana amniótica, se pueden
usar como equivalente del limbo o un equivalente del limbo
corneal.
En el conejo, se ha informado de la existencia
de una deficiencia límbica del ojo donante, debida a la eliminación
de una sección relativamente grande del limbo para trasplante. De
esta forma, el nuevo método y el injerto resultante de esta
invención reduce de forma sustancial las complicaciones potenciales
del ojo donante, ya que sólo se separa una pequeña sección de limbo.
Adicionalmente, este método se puede llevar a cabo también en ojos
con deficiencia límbica bilateral con afectación asimétrica. La
expansión ex vivo de células madre epiteliales autólogas,
sobre una membrana amniótica especialmente pretratada, proporciona
suficientes células madre epiteliales para trasplante en 2 a 3
semanas. Para pacientes con deficiencia límbica total y bilateral,
se debe considerar el uso, según esta invención, de limbos de
fuentes compatibles, por ejemplo, de otro individuo vivo
relacionado.
El uso para trasplante de células madre
epiteliales autólogas, basadas sobre una membrana amniótica
pretratada de manera exclusiva, ofrece también todos los efectos
beneficiosos inherentes al trasplante de membrana amniótica,
incluidas la facilitación de epitelización, la reducción de la
inflamación y de la formación de tejido cicatricial, y la
sustitución de sustrato cuando el tejido estromático subyacente está
destruido. De manera aún más importante, la membrana amniótica,
pretratada de acuerdo con Tseng, proporciona un sustrato natural
para la conservación y expansión de las células madre epiteliales,
que forman la masa celular autóloga necesaria para la reconstrucción
de la córnea. Adicionalmente, dado que se trasplantan solamente
células autólogas, no se precisa inmunosupresión después del
trasplante. Para células madre alogénicas trasplantas de esta forma,
es posible reducir la incidencia de rechazos, gracias a que se
trasplantan solamente células madre epiteliales, sin otros tipos de
célula.
Tal como se ha indicado anteriormente, este
injerto único, y el método para su desarrollo, mediante el empleo de
una membrana amniótica especialmente pretratada, sobre la que se
expanden las células madre epiteliales de un explante, tiene usos
adicionales, más allá de la cirugía ocular, por ejemplo, en la
reparación de zonas de piel quemada; sobre todo, cuando el sitio
donante del explante debe ser pequeño. De la misma forma, la biopsia
a partir de la cual se obtiene el pequeño explante, no necesita ser
de tejido límbico. El explante debe contener tejido sano, células
madre epiteliales y ser histocompatible con el sitio receptor del
injerto. Si la biopsia no se puede realizar en la misma zona del
cuerpo que el sitio del receptor, se puede seleccionar para el
explante una zona similar del cuerpo; tal como en el ejemplo
preferido de un ojo dañado, en el que éste es el sitio receptor, y
el otro ojo, es decir, el ojo sano, proporciona el explante
donante.
Se considera que se ha descrito de forma
suficiente un injerto y método quirúrgico inventivo únicos para que
los expertos en la técnica puedan llevar a la práctica la invención,
sin necesidad de una experimentación importante.
Claims (11)
1. Injerto quirúrgico para aplicar en un sitio
receptor, en donde dicho injerto se caracteriza porque el
injerto comprende:
- una membrana amniótica que comprende células amnióticas y una matriz extracelular íntegra; y
- células madre epiteliales expandidas sobre dicha membrana amniótica.
2. Injerto quirúrgico según la reivindicación 1,
en el cual dicha membrana amniótica tiene una membrana basal,
caracterizado porque dichas células madre epiteliales se
expanden sobre dicha cara de membrana basal.
3. Injerto quirúrgico según la reivindicación 1
ó 2, caracterizado porque el tejido límbico, procedente de
una biopsia practicada en el limbo de un ojo sano, es la fuente de
dichas células madre epiteliales.
4. Injerto quirúrgico según la reivindicación 1,
en el cual dicha membrana amniótica tiene una cara de membrana
basal; caracterizado porque dichas células madre epiteliales
se originan a partir de tejido tratado en un medio de cultivo que, a
continuación, se transfiere a dicha membrana amniótica; y dichas
células madre epiteliales se cultivan ex vivo sobre dicha
cara de membrana basal de dicha membrana amniótica.
5. Injerto quirúrgico según cualquier
reivindicación precedente, caracterizado porque la fuente de
dichas células madre epiteliales es tejido tomado de un sitio sano,
biológicamente correspondiente, e histocompatible con el sitio
receptor.
6. Método para crear un injerto quirúrgico para
un sitio receptor dañado, en donde dicho método se
caracteriza por las etapas de:
caracteriza por las etapas de:
- a)
- colocar, como explante, una biopsia sobre una membrana amniótica; dicha membrana amniótica comprende células amnióticas y una matriz extracelular que conserva su integridad, y en donde dicha biopsia contiene células madre epiteliales; y
- b)
- permitir la expansión de dichas células madre epiteliales sobre dicha membrana amniótica.
7. Método según la reivindicación 6, en el cual
dicha membrana amniótica tiene una cara de membrana basal;
caracterizado porque dicha etapa de colocación incluye situar
dicho explante sobre dicha cara de membrana basal.
8. Método según la reivindicación 7,
caracterizado porque el citado proceso determina que las
células madre epiteliales se posicionen boca arriba con respecto al
sitio receptor dañado.
9. Método según cualquiera de las
reivindicaciones 6 a 8, caracterizado porque dicha etapa de
expansión incluye: cultivar dicho explante en un medio de cultivo,
antes de la citada etapa de colocación.
10. Método según cualquiera de las
reivindicaciones 6 a 9, en el que dicha etapa de expansión se
caracteriza por: cultivar dicha membrana amniótica, con su
explante, durante un período de tiempo suficiente para que dichas
células madre epiteliales se hayan expandido hasta una superficie de
aproximadamente 2 a 3 cm de diámetro.
11. Método según cualquiera de las
reivindicaciones 6 a 10, caracterizado porque se elimina
dicho explante de dicha membrana amniótica, después de fijar
quirúrgicamente dicho injerto al sitio receptor.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US20003600P | 2000-04-27 | 2000-04-27 | |
US200036P | 2000-04-27 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2266193T3 true ES2266193T3 (es) | 2007-03-01 |
Family
ID=22740051
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES01927340T Expired - Lifetime ES2266193T3 (es) | 2000-04-27 | 2001-04-25 | Metodo de expansion de celulas madre epiteliales. |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP1276431B1 (es) |
JP (1) | JP5612801B2 (es) |
CN (1) | CN1296102C (es) |
AT (1) | ATE329632T1 (es) |
AU (2) | AU2001253802B2 (es) |
CA (1) | CA2406282C (es) |
DE (1) | DE60120676T2 (es) |
ES (1) | ES2266193T3 (es) |
HK (1) | HK1056989A1 (es) |
PT (1) | PT1276431E (es) |
TW (1) | TW506827B (es) |
WO (1) | WO2001080760A1 (es) |
Families Citing this family (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100940765B1 (ko) * | 2001-11-19 | 2010-02-10 | 아르브라스트 가부시키가이샤 | 각막 상피형 시트, 및 그의 제조 방법 |
US20060234377A1 (en) * | 2003-02-06 | 2006-10-19 | Teruo Okano | Cell sheets for ectocornea formation, method of producing the same and method of using the same |
WO2004070023A1 (ja) * | 2003-02-06 | 2004-08-19 | Cellseed Inc. | 前眼部関連細胞シート、3次元構造体、及びそれらの製造法 |
EP1731177A4 (en) * | 2004-03-11 | 2009-07-22 | Arblast Co Ltd | BIOLOGICAL TISSUE SHEET, METHOD OF FORMATION THEREOF AND TRANSPLANTATION METHOD USING THE SHEET |
JP4576545B2 (ja) * | 2004-05-27 | 2010-11-10 | 独立行政法人理化学研究所 | 羊膜由来因子による胚性幹細胞の培養方法 |
CN100336567C (zh) * | 2004-10-19 | 2007-09-12 | 北京科宇联合干细胞生物技术有限公司 | 医用角膜贴片 |
WO2006075602A1 (ja) * | 2005-01-14 | 2006-07-20 | Arblast Co., Ltd. | 羊膜を用いたシート状組成物及びその作製方法 |
JP4863655B2 (ja) * | 2005-06-17 | 2012-01-25 | 国立大学法人 東京医科歯科大学 | 細胞含有シート |
TWI407967B (zh) * | 2006-04-28 | 2013-09-11 | Ray Jui Fang Tsai | 人類角膜內皮幹細胞之擴增方法 |
CN102166375B (zh) * | 2011-02-16 | 2013-04-10 | 中国海洋大学 | 一种组织工程人角膜上皮的重建方法 |
CN103007349B (zh) * | 2012-12-13 | 2014-07-09 | 吉林省拓华生物科技有限公司 | 负载干细胞的大面积羊膜贴片的制备方法 |
CN115671398B (zh) * | 2022-11-22 | 2024-03-01 | 首都医科大学附属北京同仁医院 | 一种3d打印仿生角膜缘移植物及其制备方法和用途 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IL47062A (en) * | 1975-04-10 | 1979-07-25 | Yeda Res & Dev | Process for diminishing antigenicity of tissues to be usedas transplants by treatment with glutaraldehyde |
JPS63260549A (ja) * | 1987-04-17 | 1988-10-27 | 石川 統一 | 補綴材料およびその製造方法 |
US5135915A (en) * | 1988-10-14 | 1992-08-04 | Genentech, Inc. | Method for the treatment of grafts prior to transplantation using TGF-.beta. |
JP2905719B2 (ja) * | 1995-03-31 | 1999-06-14 | 東洋紡績株式会社 | 複合医用材料 |
US6152142A (en) * | 1997-02-28 | 2000-11-28 | Tseng; Scheffer C. G. | Grafts made from amniotic membrane; methods of separating, preserving, and using such grafts in surgeries |
US5932205A (en) * | 1997-07-24 | 1999-08-03 | Wang; Ming X. | Biochemical contact lens for treating photoablated corneal tissue |
-
2001
- 2001-04-25 PT PT01927340T patent/PT1276431E/pt unknown
- 2001-04-25 AT AT01927340T patent/ATE329632T1/de active
- 2001-04-25 JP JP2001577863A patent/JP5612801B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-25 CA CA2406282A patent/CA2406282C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-25 ES ES01927340T patent/ES2266193T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-25 EP EP01927340A patent/EP1276431B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-25 CN CNB018081649A patent/CN1296102C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-25 AU AU2001253802A patent/AU2001253802B2/en not_active Ceased
- 2001-04-25 DE DE60120676T patent/DE60120676T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-25 AU AU5380201A patent/AU5380201A/xx active Pending
- 2001-04-25 WO PCT/US2001/013321 patent/WO2001080760A1/en active IP Right Grant
- 2001-04-26 TW TW090110005A patent/TW506827B/zh not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-12-22 HK HK03109312A patent/HK1056989A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HK1056989A1 (en) | 2004-03-12 |
TW506827B (en) | 2002-10-21 |
EP1276431A1 (en) | 2003-01-22 |
CA2406282A1 (en) | 2001-11-01 |
DE60120676T2 (de) | 2007-05-24 |
AU2001253802B2 (en) | 2006-11-30 |
DE60120676D1 (de) | 2006-07-27 |
WO2001080760A8 (en) | 2003-05-30 |
JP2003532466A (ja) | 2003-11-05 |
CA2406282C (en) | 2012-06-12 |
EP1276431A4 (en) | 2003-08-06 |
AU5380201A (en) | 2001-11-07 |
JP5612801B2 (ja) | 2014-10-22 |
CN1426289A (zh) | 2003-06-25 |
PT1276431E (pt) | 2006-11-30 |
CN1296102C (zh) | 2007-01-24 |
ATE329632T1 (de) | 2006-07-15 |
EP1276431B1 (en) | 2006-06-14 |
WO2001080760A1 (en) | 2001-11-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US7347876B2 (en) | Method for expansion of epithelial stem cells | |
Anderson et al. | Amniotic membrane transplantation for partial limbal stem cell deficiency | |
Gospodarowicz et al. | Transplantation of cultured bovine corneal endothelial cells to species with nonregenerative endothelium: the cat as an experimental model | |
ES2345767T3 (es) | Queratinocitos utilizables como substancia biologicamente activa para el tratamiento de heridas. | |
US7611895B2 (en) | Method for growth of human conjunctival tissue equivalents for research, clinical ocular surface transplantation and tissue engineering | |
US20050214259A1 (en) | Corneal endothelium-like sheet and method of constructing the same | |
US10052411B2 (en) | Methods of treating corneal related diseases by corneal endothelial preparation which enables cells to grow in vivo | |
ES2266193T3 (es) | Metodo de expansion de celulas madre epiteliales. | |
Hartmann et al. | Human and porcine anterior lens capsule as support for growing and grafting retinal pigment epithelium and iris pigment epithelium | |
He et al. | Growing human corneal epithelium on collagen shield and subsequent transfer to denuded cornea in vitro | |
AU2001253802A1 (en) | Method for expansion of epithelial stem cells | |
CN101437939B (zh) | 人类角膜内皮细胞的扩增方法 | |
Scuderi et al. | Transplantation of autologous cultivated conjunctival epithelium for the restoration of defects in the ocular surface | |
Alvarado et al. | Corneal endothelial replacement. I. In vitro formation of an endothelial monolayer. | |
CA2097243A1 (en) | Differentiated ocular surface epithelial cell cultures, process for the preparation and carrier for uses thereof | |
KR20040024859A (ko) | 각막 치료용 적층체 및 그 제조방법 | |
McCulley et al. | In vitro transfer of rabbit corneal epithelium from carriers to denuded corneas or cryolathed lenticules | |
EP3399028A1 (en) | Method for culturing limbal stem cells by using amniotic slide support | |
Sangwan | Cultivated Limbal Stem Cell Transplantation—The Surgical Technique | |
Solomon | Ocular Surface Reconstruction | |
Noriko Koizumi et al. | Limbal stem cell deficiencies and ocular surface reconstruction | |
Vlahović et al. | In vitro kultivacija limbalnog transplantata mačke |