JP2002510651A - アジュバンド含有ワクチン - Google Patents
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ＤＮＡワクチンの効果が向上した、単純且つ容易に製造できる新規なワクチン処方。
【解決手段】 抗原性ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、好ましくは病原性遺伝子が組み込まれ且つインビボで発現する裸のＤＮＡと、アクリル酸またはメタクリル酸のポリマーおよび無水マレイン酸とアルケニル誘導体のコポリマーの中から選択されるアジュバンド化合物とからなるＤＮＡワクチン。アジュバンド化合物はカルボメールまたはエマ(登録商標)が好ましい。
Description
【０００１】
本発明は、１種または複数の異種遺伝子が組込まれ且つインビボで発現するＤ
ＮＡワクチン（プラスミドワクチンまたはポリヌクレオチドワクチンともいわれ
る）の改良に関するものである。 本発明は特に、上記改良型ワクチンと、このワクチン製造でのアジュバンド化
合物の使用と、ワクチン接種方法とに関するものである。 本発明のさらに他の対象は上記ワクチンの製造方法にある。
ＮＡワクチン（プラスミドワクチンまたはポリヌクレオチドワクチンともいわれ
る）の改良に関するものである。 本発明は特に、上記改良型ワクチンと、このワクチン製造でのアジュバンド化
合物の使用と、ワクチン接種方法とに関するものである。 本発明のさらに他の対象は上記ワクチンの製造方法にある。
【０００２】
国際特許出願第ＷＯ−Ａ−９０ １１０９２号、第ＷＯ−Ａ−９３ １９１８
３号、第ＷＯ−Ａ−９４ ２１７９７号、第ＷＯ−Ａ−９５ １１３０７号およ
び第ＷＯ−Ａ−９５ ２０６６０号ではポリヌクレオチドワクチンの最近の改良
方法が用いられている。これらの特許に記載のワクチンではプラスミドに挿入さ
れた遺伝子を宿主の細胞中で発現し且つ免疫原をコード化するプラスミドを用い
ており、全ての投与経路（腹腔内、静脈内、筋肉内、経皮、皮内、粘膜、その他
）が提案されている。これ以外のワクチン接種手段、例えば金粒子の表面に堆積
させたＤＮＡを動物の皮膚細胞内に挿入するように噴射する方法（Tang達、Natu
re 356,152-154, 1992）、液体ジェット注射器を用いて皮膚、筋肉、脂肪細胞お
よび乳腺細胞内へ同時に形質移入する方法（Furth達、Anarytical Biochemistry
, 205, 365-368, 1992）を用いることもできる。 これらのポリヌクレオチドワクチンは裸のＤＮＡとして用いられるか、リポゾ
ームまたはカチオン性の脂質との錯体の形で用いられる。
３号、第ＷＯ−Ａ−９４ ２１７９７号、第ＷＯ−Ａ−９５ １１３０７号およ
び第ＷＯ−Ａ−９５ ２０６６０号ではポリヌクレオチドワクチンの最近の改良
方法が用いられている。これらの特許に記載のワクチンではプラスミドに挿入さ
れた遺伝子を宿主の細胞中で発現し且つ免疫原をコード化するプラスミドを用い
ており、全ての投与経路（腹腔内、静脈内、筋肉内、経皮、皮内、粘膜、その他
）が提案されている。これ以外のワクチン接種手段、例えば金粒子の表面に堆積
させたＤＮＡを動物の皮膚細胞内に挿入するように噴射する方法（Tang達、Natu
re 356,152-154, 1992）、液体ジェット注射器を用いて皮膚、筋肉、脂肪細胞お
よび乳腺細胞内へ同時に形質移入する方法（Furth達、Anarytical Biochemistry
, 205, 365-368, 1992）を用いることもできる。 これらのポリヌクレオチドワクチンは裸のＤＮＡとして用いられるか、リポゾ
ームまたはカチオン性の脂質との錯体の形で用いられる。
【０００３】
本発明の目的は、単純且つ容易に製造できる新規なワクチン処方を提供してＤ
ＮＡワクチンの効果を向上させることにある。 本発明の他の目的は、ＤＮＡと他の成分との間に錯体形成のような強い相互作
用を引き起こさない別の解決策を提供することにある。 本発明のさらに他の目的は、液体の安定した形に調整されたワクチンを単に混
合するか、使用直前に混合することで簡単に液体ワクチンを製造することができ
るようにすることにある。 本件出願人は、驚くべきことに、これらの種々の目的にはカルボメール化合物
が適しており、特に単純な方法で、しかも極めて有利な比率で裸のＤＮＡワクチ
ン用のアジュバンドとして用いることができるということを発見した。
ＮＡワクチンの効果を向上させることにある。 本発明の他の目的は、ＤＮＡと他の成分との間に錯体形成のような強い相互作
用を引き起こさない別の解決策を提供することにある。 本発明のさらに他の目的は、液体の安定した形に調整されたワクチンを単に混
合するか、使用直前に混合することで簡単に液体ワクチンを製造することができ
るようにすることにある。 本件出願人は、驚くべきことに、これらの種々の目的にはカルボメール化合物
が適しており、特に単純な方法で、しかも極めて有利な比率で裸のＤＮＡワクチ
ン用のアジュバンドとして用いることができるということを発見した。
【０００４】
本発明の対象は、抗原性ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、好まし
くは病原性遺伝子が組込まれ且つインビボで発現する裸のＤＮＡ、特にスーパー
コイルまたはその他の形をした環状ワクチン用プラスミドまたは線形ＤＮＡ分子
と、アクリル酸またはメタクリル酸のポリマーおよび無水マレイン酸とアルケニ
ル誘導体とのコポリマーの中から選択される少なくとも１種のアジュバンド化合
物とからなるＤＮＡワクチンにある。
くは病原性遺伝子が組込まれ且つインビボで発現する裸のＤＮＡ、特にスーパー
コイルまたはその他の形をした環状ワクチン用プラスミドまたは線形ＤＮＡ分子
と、アクリル酸またはメタクリル酸のポリマーおよび無水マレイン酸とアルケニ
ル誘導体とのコポリマーの中から選択される少なくとも１種のアジュバンド化合
物とからなるＤＮＡワクチンにある。
【０００５】
裸のＤＮＡとは、現在一般的に認められているように、抗原性ポリペプチドま
たは一価の抗原をコード化する少なくとも一種のヌクレオチド配列と、インビボ
発現に必要な要素とからなるポリヌクレオチド配列の形をしたＤＮＡ転写ユニッ
トを意味する。スーパーコイル（super-enroulee）またはその他の形の環状プラ
スミドの形が好ましい。本発明で抗原価(valence)とは病原体に対する保護を提 供する少なくとも一種の抗原体を意味し、が副抗原価(sous-valence)として該当
する病原体の一種または複数種の菌株の一種または複数種の自然遺伝子または変
性遺伝子を含むことができる。
たは一価の抗原をコード化する少なくとも一種のヌクレオチド配列と、インビボ
発現に必要な要素とからなるポリヌクレオチド配列の形をしたＤＮＡ転写ユニッ
トを意味する。スーパーコイル（super-enroulee）またはその他の形の環状プラ
スミドの形が好ましい。本発明で抗原価(valence)とは病原体に対する保護を提 供する少なくとも一種の抗原体を意味し、が副抗原価(sous-valence)として該当
する病原体の一種または複数種の菌株の一種または複数種の自然遺伝子または変
性遺伝子を含むことができる。
【０００６】 好ましいアジュバンド化合物は砂糖(sucre)またはポリアルコールのポリアル ケニルエーテルで架橋したアクリル酸またはメタクリル酸ポリマーである。これ
らの化合物はカルボメール(carbomere)の用語で知られている（Pharmeuropa Vol
.8, No.2, June 1996）。米国特許出願第２，９０９，４６２号も参照のこと。 この特許の内容は本明細書の一部をなす。この特許には少なくとも３つ、好まし
くは８つ以下のポリヒドロキシル基を有し、少なくとも３つのヒドロキシルの水
素原子が少なくとも２つの炭素原子を有する不飽和脂肪族基で置換されたポリヒ
ドロキシル化合物で架橋されたアクリルポリマーが記載されている。好ましい基
は２〜４個の炭素原子を含むもの、例えばビニル、アリル、その他のエチレン性
不飽和基である。不飽和基自体が他の置換基、例えばメチルを含むことができる
。カルボポール(Carbopol、登録商標)（BF Goodrich社製、オハイオ、アメリカ 合衆国）の名称で市販の製品が特に適している。これはアリルサッカロースまた
はアリルペンタエリスリトールで架橋されている。これらの中で特にカルボポー
ル(Carbopol、登録商標) 974P、934Pおよび971Pを挙げることができる。
らの化合物はカルボメール(carbomere)の用語で知られている（Pharmeuropa Vol
.8, No.2, June 1996）。米国特許出願第２，９０９，４６２号も参照のこと。 この特許の内容は本明細書の一部をなす。この特許には少なくとも３つ、好まし
くは８つ以下のポリヒドロキシル基を有し、少なくとも３つのヒドロキシルの水
素原子が少なくとも２つの炭素原子を有する不飽和脂肪族基で置換されたポリヒ
ドロキシル化合物で架橋されたアクリルポリマーが記載されている。好ましい基
は２〜４個の炭素原子を含むもの、例えばビニル、アリル、その他のエチレン性
不飽和基である。不飽和基自体が他の置換基、例えばメチルを含むことができる
。カルボポール(Carbopol、登録商標)（BF Goodrich社製、オハイオ、アメリカ 合衆国）の名称で市販の製品が特に適している。これはアリルサッカロースまた
はアリルペンタエリスリトールで架橋されている。これらの中で特にカルボポー
ル(Carbopol、登録商標) 974P、934Pおよび971Pを挙げることができる。
【０００７】 無水マレイン酸とアルケニル誘導体とのコポリマーの中では線形または架橋し
たコポリマー、例えばジビニルエーテルで架橋した無水マレイン酸とエチレンと
のコポリマーであるエマ(ＥＭＡ、登録商標)(Monsanto社製)が好ましい。これに
関してはJ. Fields 達、Nature, 186: 778-780, 4 June 1960を参照できる。こ の文献は本明細書の一部をなす。 構造の点からはアクリル酸またはメタクリル酸のポリマーおよびコポリマーＥ
ＭＡは下記式の基本単位であるのが好ましい：
たコポリマー、例えばジビニルエーテルで架橋した無水マレイン酸とエチレンと
のコポリマーであるエマ(ＥＭＡ、登録商標)(Monsanto社製)が好ましい。これに
関してはJ. Fields 達、Nature, 186: 778-780, 4 June 1960を参照できる。こ の文献は本明細書の一部をなす。 構造の点からはアクリル酸またはメタクリル酸のポリマーおよびコポリマーＥ
ＭＡは下記式の基本単位であるのが好ましい：
【０００８】
【化１】
【０００９】 （ここで、 Ｒ1とＲ2はＨまたはＣＨ3を表し、互いに同一でも異なっていてもよく、 ｘ＝０または１、好ましくはｘ＝１であり、 ｘ＋ｙ＝２、ｙ＝１または２である）。 コポリマーのエマ（ＥＭＡ、登録商標）ではｘ＝０、ｙ＝２であり、カルボメ
ールではｘ＝ｙ＝１である。 これらのポリマーを水に溶解すると酸性溶液となり、この溶液を好ましくは生
理学的ｐＨに中和してアジュバンド溶液とし、それとワクチンとを組み合わせる
。ポリマーのカルボキシル基の一部はＣＯＯ-状態にある。
ールではｘ＝ｙ＝１である。 これらのポリマーを水に溶解すると酸性溶液となり、この溶液を好ましくは生
理学的ｐＨに中和してアジュバンド溶液とし、それとワクチンとを組み合わせる
。ポリマーのカルボキシル基の一部はＣＯＯ-状態にある。
【００１０】 好ましくは、本発明のアジュバンド、特にカルボメール溶液は塩化ナトリウム
の存在下の蒸留水中に作るのが好ましい。得られた溶液は酸性ｐＨである。この
原液にＮａＣｌを入れた水、好ましくは生理食塩水（ＮａＣｌ ９ｇ／ｌ）の必
要量（望ましい最終濃度を得るための量）を１回または複数回に分けて添加して
希釈し、それと同時にまたは後で、好ましくはＮａＯＨを用いて中和（ｐＨ７．
３〜７．４）する。生理学的ｐＨのこの溶液はワクチン、特に凍結乾燥状態、液
状または凍結状態で貯蔵されたワクチンとの混合にそのまま用いられる。 最終ワクチン組成物中でのポリマー含有量は０．０１〜２％ｗ／ｖ、特に０．
０６〜１％ｗ／ｖ、好ましくは０．１〜０．６％ｗ／ｖである。
の存在下の蒸留水中に作るのが好ましい。得られた溶液は酸性ｐＨである。この
原液にＮａＣｌを入れた水、好ましくは生理食塩水（ＮａＣｌ ９ｇ／ｌ）の必
要量（望ましい最終濃度を得るための量）を１回または複数回に分けて添加して
希釈し、それと同時にまたは後で、好ましくはＮａＯＨを用いて中和（ｐＨ７．
３〜７．４）する。生理学的ｐＨのこの溶液はワクチン、特に凍結乾燥状態、液
状または凍結状態で貯蔵されたワクチンとの混合にそのまま用いられる。 最終ワクチン組成物中でのポリマー含有量は０．０１〜２％ｗ／ｖ、特に０．
０６〜１％ｗ／ｖ、好ましくは０．１〜０．６％ｗ／ｖである。
【００１１】 ブタのワクチン接種では特にオーエスキー病ウイルス（ＰＲＶまたは仮性狂犬
病ウイルス）、ブタインフルエンザウイルス（ＳＩＶ）、ブタ生殖器および呼吸
器症候群ウイルス（ＰＲＲＳウイルス）、ブタパルボウイルス病ウイルス（ＰＰ
Ｖウイルス）、ブタコレラウイルス（ＨＣＶウイルス）およびアクチノバチルス
症(A. pleuropneumniae)の原因となる細菌に対するワクチン接種に本発明を適用
できる。本発明に使用できるプラスミドはて該当する病原体の主たる免疫原をコ
ード化する一種または複数種の遺伝子を各抗原価に対して含んでいる。特にオー
エスキー病ウイルスに対するｇＢおよびｇＤ遺伝子、ブタインフルエンザウイル
スに対するＨＡ、ＮＰおよびＮ遺伝子、ＰＲＲＳウイルスに対するＯＲＦ５（Ｅ
）、ＯＲＦ３およびＯＲＦ６（Ｍ）遺伝子、パルボウイルス病ウイルスに対する
ＶＰ２、ブタコレラウイルスに対するＥ２、Ｅ１＋Ｅ２、Ｅ１＋Ｅ２＋Ｃおよび
A. pleuropneumoniaeに対するａｐｘＩ、ａｐｘＩＩおよびａｐｘＩＩＩを挙げ ることができる。
病ウイルス）、ブタインフルエンザウイルス（ＳＩＶ）、ブタ生殖器および呼吸
器症候群ウイルス（ＰＲＲＳウイルス）、ブタパルボウイルス病ウイルス（ＰＰ
Ｖウイルス）、ブタコレラウイルス（ＨＣＶウイルス）およびアクチノバチルス
症(A. pleuropneumniae)の原因となる細菌に対するワクチン接種に本発明を適用
できる。本発明に使用できるプラスミドはて該当する病原体の主たる免疫原をコ
ード化する一種または複数種の遺伝子を各抗原価に対して含んでいる。特にオー
エスキー病ウイルスに対するｇＢおよびｇＤ遺伝子、ブタインフルエンザウイル
スに対するＨＡ、ＮＰおよびＮ遺伝子、ＰＲＲＳウイルスに対するＯＲＦ５（Ｅ
）、ＯＲＦ３およびＯＲＦ６（Ｍ）遺伝子、パルボウイルス病ウイルスに対する
ＶＰ２、ブタコレラウイルスに対するＥ２、Ｅ１＋Ｅ２、Ｅ１＋Ｅ２＋Ｃおよび
A. pleuropneumoniaeに対するａｐｘＩ、ａｐｘＩＩおよびａｐｘＩＩＩを挙げ ることができる。
【００１２】 特に有利なものとしてはブタ生殖器および呼吸器疾病に関する国際特許出願第
ＷＯ−Ａ−９８ ０３６５８号＝フランス国特許出願第２，７５１，２２４号( これらの特許の内容は本発明の一部をなす)に記載のポリヌクレオチドワクチン 処方を挙げることができる。この特許には本発明のアジュバンドと組み合わせて
直接使用することができる複数のプラスミドが記載されている。当業者は本発明
のアジュバンドと、この特許明細書に記載の下記のプラスミドを組み合わせるこ
とができる：ＰＲＶウイルスのｇＢ遺伝子からなるｐＡＢ０９０、ＰＲＶウイル
スのｇＤ遺伝子からなるｐＰＢ０９８、ブタインフルエンザ、Ｈ１Ｎ１菌株のＨ
Ａ遺伝子からなるｐＰＢ１４３、ブタインフルエンザ、Ｈ１Ｎ１菌株のＮＰ遺伝
子からなるｐＰＢ１４２、ブタインフルエンザ、Ｈ３Ｎ２菌株のＨＡ遺伝子から
なるｐＰＢ１４４、ブタインフルエンザ、Ｈ３Ｎ２菌株のＮＰ遺伝子からなるｐ
ＰＢ１３２、ＰＲＲＳウイルス、Lelystad菌株のＯＲＦ５からなるｐＡＢ０２５
、ＰＲＲＳウイルス、USA菌株のＯＲＦ５からなるｐＡＢ００１、ＰＲＲＳウイ ルス、Lelystad菌株のＯＲＦ３からなるｐＡＢ０９１、ＰＲＲＳウイルス、USA 菌株のＯＲＦ３からなるｐＡＢ０９２、ブタパルボウイルスのＶＰ２遺伝子から
なるｐＡＢ００４、ブタコレラウイルス（ＨＣＶ）のＥ１遺伝子からなるｐＡＢ
０６９、ブタコレラウイルス（ＨＣＶ）のＥ２遺伝子からなるｐＡＢ０６１、A.
pleuropneumoniaeの欠失ａｐｘＩ遺伝子からなるｐＡＢ１６２、A. pleuropneu
moniaeの欠失ａｐｘＩＩ遺伝子からなるｐＰＢ１６３、A. pleuropneumoniaeの 欠失ａｐｘＩＩＩ遺伝子からなるｐＰＢ１７４‘、ｐＰＢ１８９およびｐＰＢ１
９０。
ＷＯ−Ａ−９８ ０３６５８号＝フランス国特許出願第２，７５１，２２４号( これらの特許の内容は本発明の一部をなす)に記載のポリヌクレオチドワクチン 処方を挙げることができる。この特許には本発明のアジュバンドと組み合わせて
直接使用することができる複数のプラスミドが記載されている。当業者は本発明
のアジュバンドと、この特許明細書に記載の下記のプラスミドを組み合わせるこ
とができる：ＰＲＶウイルスのｇＢ遺伝子からなるｐＡＢ０９０、ＰＲＶウイル
スのｇＤ遺伝子からなるｐＰＢ０９８、ブタインフルエンザ、Ｈ１Ｎ１菌株のＨ
Ａ遺伝子からなるｐＰＢ１４３、ブタインフルエンザ、Ｈ１Ｎ１菌株のＮＰ遺伝
子からなるｐＰＢ１４２、ブタインフルエンザ、Ｈ３Ｎ２菌株のＨＡ遺伝子から
なるｐＰＢ１４４、ブタインフルエンザ、Ｈ３Ｎ２菌株のＮＰ遺伝子からなるｐ
ＰＢ１３２、ＰＲＲＳウイルス、Lelystad菌株のＯＲＦ５からなるｐＡＢ０２５
、ＰＲＲＳウイルス、USA菌株のＯＲＦ５からなるｐＡＢ００１、ＰＲＲＳウイ ルス、Lelystad菌株のＯＲＦ３からなるｐＡＢ０９１、ＰＲＲＳウイルス、USA 菌株のＯＲＦ３からなるｐＡＢ０９２、ブタパルボウイルスのＶＰ２遺伝子から
なるｐＡＢ００４、ブタコレラウイルス（ＨＣＶ）のＥ１遺伝子からなるｐＡＢ
０６９、ブタコレラウイルス（ＨＣＶ）のＥ２遺伝子からなるｐＡＢ０６１、A.
pleuropneumoniaeの欠失ａｐｘＩ遺伝子からなるｐＡＢ１６２、A. pleuropneu
moniaeの欠失ａｐｘＩＩ遺伝子からなるｐＰＢ１６３、A. pleuropneumoniaeの 欠失ａｐｘＩＩＩ遺伝子からなるｐＰＢ１７４‘、ｐＰＢ１８９およびｐＰＢ１
９０。
【００１３】 ウマのワクチン接種では特にウマ鼻肺炎ウイルス（ＥＨＶ）の特に１型（ＥＨ
Ｖ−１）および４型（ＥＨＶ−４）、ウマインフルエンザウイルスＥＩＶ、破傷
風（Cl. tetani）、東部脳炎ウイルス（ＥＥＶ）、西部脳炎ウイルス（ＷＥＶ）
およびベネズエラ脳炎ウイルス（ＶＥＶ）と、ライム病（B. burgdorferi）、ウ
マ関節炎（ＥＡＶ）および狂犬病に対するワクチン接種を挙げることができる。
本発明で使用できる主な免疫原をコード化する遺伝子の内、特に１型および４型
のウマ鼻肺炎原子価に対するｇＢおよびｇＤ遺伝子、ウマインフルエンザに対す
るＨＡ、ＮＡおよびＮＰ遺伝子、必要に応じて変異または欠失によって破傷風抗
原用に変性されたＣサブユニット、脳炎に対するＣおよびＥ２遺伝子、ライム病
に対するＯｓｐＡ、ＯｓｐＢおよびｐ１００遺伝子、ウマ関節炎に対するＥ、Ｍ
およびＮ遺伝子と狂犬病に対するＧ遺伝子を挙げることができる。ウマの病原体
に対するポリヌクレオチドワクチン処方は国際特許出願第ＷＯ−Ａ−９８ ０３
６５１９８号＝フランス国特許出願第２，７５１，２２６号(これらの特許の内 容は本明細書の一部を成す)に記載されている。この特許には本発明のアジュバ ンドと組み合わせて本発明の実施例として直接使用できる複数のプラスミドが記
載されている。当業者は本発明のアジュバンドとこの特許明細書に記載された下
記のプラスミドを組み合わせることができる：ＥＨＶ−１ウイルスのｇＢ遺伝子
からなるｐＡＢ０４２、ＥＨＶ−４ウイルスのｇＢ遺伝子からなるｐＡＢ０３１
、ＥＨＶ−１ウイルスのｇＤ遺伝子からなるｐＡＢ０１３、ＥＨＶ−４ウイルス
のｇＤ遺伝子からなるｐＡＢ０３２、ウマインフルエンザ、Prague菌株のＨＡ遺
伝子からなるｐＡＢ０４３、ウマインフルエンザ、Suffolk菌株のＨＡ遺伝子か らなるｐＡＢ０３３、ウマインフルエンザ、Fontainebleau菌株のＨＡ遺伝子か らなるｐＡＢ０９９、ウマインフルエンザ、Prague菌株のＮＰ遺伝子からなるｐ
ＡＢ０８５、ウマインフルエンザ、Jillin菌株のＮＰ遺伝子からなるｐＡＢ０８
４、破傷風毒素のＣサブユニットの遺伝子からなるｐＡＢ０７０、Borrilia bur
gdorferiのＯｓｐＡ遺伝子からなるｐＡＢ０１７、東部脳炎ウイルスのＥ２遺伝
子からなるｐＡＢ０９４、東部脳炎ウイルスのＣ遺伝子からなるｐＡＢ０９３、
西部脳炎ウイルスのＥ２遺伝子からなるｐＡＢ０９６、西部脳炎ウイルスのＣ遺
伝子からなるｐＡＢ０９５、ベネズエラ脳炎ウイルスのＥ２遺伝子からなるｐＡ
Ｂ０９８、東部脳炎ウイルスのＣ遺伝子からなるｐＡＢ０９７および狂犬病ウイ
ルスのＧ遺伝子からなるｐＡＢ０４１。
Ｖ−１）および４型（ＥＨＶ−４）、ウマインフルエンザウイルスＥＩＶ、破傷
風（Cl. tetani）、東部脳炎ウイルス（ＥＥＶ）、西部脳炎ウイルス（ＷＥＶ）
およびベネズエラ脳炎ウイルス（ＶＥＶ）と、ライム病（B. burgdorferi）、ウ
マ関節炎（ＥＡＶ）および狂犬病に対するワクチン接種を挙げることができる。
本発明で使用できる主な免疫原をコード化する遺伝子の内、特に１型および４型
のウマ鼻肺炎原子価に対するｇＢおよびｇＤ遺伝子、ウマインフルエンザに対す
るＨＡ、ＮＡおよびＮＰ遺伝子、必要に応じて変異または欠失によって破傷風抗
原用に変性されたＣサブユニット、脳炎に対するＣおよびＥ２遺伝子、ライム病
に対するＯｓｐＡ、ＯｓｐＢおよびｐ１００遺伝子、ウマ関節炎に対するＥ、Ｍ
およびＮ遺伝子と狂犬病に対するＧ遺伝子を挙げることができる。ウマの病原体
に対するポリヌクレオチドワクチン処方は国際特許出願第ＷＯ−Ａ−９８ ０３
６５１９８号＝フランス国特許出願第２，７５１，２２６号(これらの特許の内 容は本明細書の一部を成す)に記載されている。この特許には本発明のアジュバ ンドと組み合わせて本発明の実施例として直接使用できる複数のプラスミドが記
載されている。当業者は本発明のアジュバンドとこの特許明細書に記載された下
記のプラスミドを組み合わせることができる：ＥＨＶ−１ウイルスのｇＢ遺伝子
からなるｐＡＢ０４２、ＥＨＶ−４ウイルスのｇＢ遺伝子からなるｐＡＢ０３１
、ＥＨＶ−１ウイルスのｇＤ遺伝子からなるｐＡＢ０１３、ＥＨＶ−４ウイルス
のｇＤ遺伝子からなるｐＡＢ０３２、ウマインフルエンザ、Prague菌株のＨＡ遺
伝子からなるｐＡＢ０４３、ウマインフルエンザ、Suffolk菌株のＨＡ遺伝子か らなるｐＡＢ０３３、ウマインフルエンザ、Fontainebleau菌株のＨＡ遺伝子か らなるｐＡＢ０９９、ウマインフルエンザ、Prague菌株のＮＰ遺伝子からなるｐ
ＡＢ０８５、ウマインフルエンザ、Jillin菌株のＮＰ遺伝子からなるｐＡＢ０８
４、破傷風毒素のＣサブユニットの遺伝子からなるｐＡＢ０７０、Borrilia bur
gdorferiのＯｓｐＡ遺伝子からなるｐＡＢ０１７、東部脳炎ウイルスのＥ２遺伝
子からなるｐＡＢ０９４、東部脳炎ウイルスのＣ遺伝子からなるｐＡＢ０９３、
西部脳炎ウイルスのＥ２遺伝子からなるｐＡＢ０９６、西部脳炎ウイルスのＣ遺
伝子からなるｐＡＢ０９５、ベネズエラ脳炎ウイルスのＥ２遺伝子からなるｐＡ
Ｂ０９８、東部脳炎ウイルスのＣ遺伝子からなるｐＡＢ０９７および狂犬病ウイ
ルスのＧ遺伝子からなるｐＡＢ０４１。
【００１４】 イヌのワクチン接種では特にイヌジステンパー（カレ病）ウイルス（ＣＤＶ）
、イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）、イヌコロナウイルス（ＣＣＶ）、イヌヘルペ
スウイルス（ＣＨＶ）、ライム病および狂犬病に対するワクチン接種に本発明を
適用できる。本発明で使用できる主な免疫原をコード化する遺伝子の内、特にイ
ヌジステンパーウイルスに対するＨＡ、Ｆ、ＭおよびＮ遺伝子、イヌパルボウイ
ルスに対するＶＰ２遺伝子、イヌコロナウイルス（ＣＣＶ）に対するＳおよびＭ
遺伝子、ＣＨＶウイルスに対するｇＢおよびｇＤ遺伝子、B. burgdorferi(ライ ム病) に対するＯｓｐＡ、ＯｓｐＢおよびｐ１００遺伝子および狂犬病に対する
Ｇ遺伝子を挙げることができる。このようなポリヌクレオチドワクチン処方は国
際特許出願第ＷＯ−Ａ−９８ ０３１９９号＝フランス国特許出願第２，７５１
，２２７号(これら特許の内容は本明細書の一部を成す)に記載されている。当業
者はこの特許明細書に記載のプラスミドを本発明のアジュバンドと組み合わさせ
ることができる。特に、本発明のアジュバンドとこの特許明細書に記載の下記の
特有なプラスミドとを組み合わせることができる：ＣＤＶのＨＡ遺伝子からなる
ｐＡＢ０４４、ＣＤＶのＦ遺伝子からなるｐＡＢ０３６、イヌパルボウイルスの
ＶＰ２遺伝子からなるｐＡＢ０２４、ＣＣＶのＳ遺伝子からなるｐＡＢ０２１、
ＣＣＶのＭ遺伝子からなるｐＡＢ０２２、ＣＨＶのｇＢ遺伝子からなるｐＡＢ０
３７、ＣＨＶのｇＤ遺伝子からなるｐＡＢ０３８、B. burgdorferiのＯｓｐＡ遺
伝子からなるｐＡＢ０１７および狂犬病ウイルスのＧ遺伝子からなるｐＡＢ０４
１。
、イヌパルボウイルス（ＣＰＶ）、イヌコロナウイルス（ＣＣＶ）、イヌヘルペ
スウイルス（ＣＨＶ）、ライム病および狂犬病に対するワクチン接種に本発明を
適用できる。本発明で使用できる主な免疫原をコード化する遺伝子の内、特にイ
ヌジステンパーウイルスに対するＨＡ、Ｆ、ＭおよびＮ遺伝子、イヌパルボウイ
ルスに対するＶＰ２遺伝子、イヌコロナウイルス（ＣＣＶ）に対するＳおよびＭ
遺伝子、ＣＨＶウイルスに対するｇＢおよびｇＤ遺伝子、B. burgdorferi(ライ ム病) に対するＯｓｐＡ、ＯｓｐＢおよびｐ１００遺伝子および狂犬病に対する
Ｇ遺伝子を挙げることができる。このようなポリヌクレオチドワクチン処方は国
際特許出願第ＷＯ−Ａ−９８ ０３１９９号＝フランス国特許出願第２，７５１
，２２７号(これら特許の内容は本明細書の一部を成す)に記載されている。当業
者はこの特許明細書に記載のプラスミドを本発明のアジュバンドと組み合わさせ
ることができる。特に、本発明のアジュバンドとこの特許明細書に記載の下記の
特有なプラスミドとを組み合わせることができる：ＣＤＶのＨＡ遺伝子からなる
ｐＡＢ０４４、ＣＤＶのＦ遺伝子からなるｐＡＢ０３６、イヌパルボウイルスの
ＶＰ２遺伝子からなるｐＡＢ０２４、ＣＣＶのＳ遺伝子からなるｐＡＢ０２１、
ＣＣＶのＭ遺伝子からなるｐＡＢ０２２、ＣＨＶのｇＢ遺伝子からなるｐＡＢ０
３７、ＣＨＶのｇＤ遺伝子からなるｐＡＢ０３８、B. burgdorferiのＯｓｐＡ遺
伝子からなるｐＡＢ０１７および狂犬病ウイルスのＧ遺伝子からなるｐＡＢ０４
１。
【００１５】 ウシのワクチン接種では特に１型または５型ウシヘルペスウイルス（疾病の神
経型によってＢＨＶ−１およびＢＨＶ−５）、ウシ呼吸系発疹ウイルス（ＢＲＳ
Ｖ）、粘膜病ウイルスまたはウシペスチウイルス（ＢＶＤ）、３型ウシパライン
フルエンザウイルス（ＢＰＩ−３）に対するワクチン接種に本発明を適用できる
。これらのウイルスに対するワクチン接種を可能にする主な免疫原をコード化す
る遺伝子の内、特にウシヘルペスウイルスに対するｇＢおよびｇＤ遺伝子、ウシ
呼吸系発疹ウイルスに対するＦおよびＧ遺伝子、粘膜病ウイルスに対するＥ２、
Ｃ＋Ｅ１＋Ｅ２およびＥ１＋Ｅ２遺伝子、３型ウシパラインフルエンザウイルス
に対するＨＮおよびＦ遺伝子を挙げることができる。このようなポリヌクレオチ
ドワクチン処方は国際特許出願第ＷＯ−Ａ−９８ ０３２００号＝フランス国特
許出願第２，７５１，２２９号(これらの特許に記載の内容は本明細書の一部を なす)に記載されている。当業者はこの特許明細書に記載のプラスミドを本発明 のアジュバンドと組み合わせて使用することができる。当業者は特にこの特許明
細書に記載の特有の下記のプラスミドと本発明のアジュバンドとを組み合わせる
ことができる：ＢＨＶ−１のｇＢ遺伝子からなるｐＰＢ１５６、ＢＨＶ−１のｇ
Ｄ遺伝子からなるｐＡＢ０８７、ＢＲＳＶのＦ遺伝子からなるｐＡＢ０１１、Ｂ
ＲＳＶのＧ遺伝子からなるｐＡＢ０１２、ＢＶＤのＣ遺伝子からなるｐＡＢ０５
８、ＢＶＤのＥ１遺伝子からなるｐＡＢ０５９、ＢＶＤのＥ２遺伝子からなるｐ
ＡＢ０６０、ＢＰＩ−３のＨＮ遺伝子からなるｐＡＢ０７１、ＢＰＩ−３のＦ遺
伝子からなるｐＡＢ０７２。
経型によってＢＨＶ−１およびＢＨＶ−５）、ウシ呼吸系発疹ウイルス（ＢＲＳ
Ｖ）、粘膜病ウイルスまたはウシペスチウイルス（ＢＶＤ）、３型ウシパライン
フルエンザウイルス（ＢＰＩ−３）に対するワクチン接種に本発明を適用できる
。これらのウイルスに対するワクチン接種を可能にする主な免疫原をコード化す
る遺伝子の内、特にウシヘルペスウイルスに対するｇＢおよびｇＤ遺伝子、ウシ
呼吸系発疹ウイルスに対するＦおよびＧ遺伝子、粘膜病ウイルスに対するＥ２、
Ｃ＋Ｅ１＋Ｅ２およびＥ１＋Ｅ２遺伝子、３型ウシパラインフルエンザウイルス
に対するＨＮおよびＦ遺伝子を挙げることができる。このようなポリヌクレオチ
ドワクチン処方は国際特許出願第ＷＯ−Ａ−９８ ０３２００号＝フランス国特
許出願第２，７５１，２２９号(これらの特許に記載の内容は本明細書の一部を なす)に記載されている。当業者はこの特許明細書に記載のプラスミドを本発明 のアジュバンドと組み合わせて使用することができる。当業者は特にこの特許明
細書に記載の特有の下記のプラスミドと本発明のアジュバンドとを組み合わせる
ことができる：ＢＨＶ−１のｇＢ遺伝子からなるｐＰＢ１５６、ＢＨＶ−１のｇ
Ｄ遺伝子からなるｐＡＢ０８７、ＢＲＳＶのＦ遺伝子からなるｐＡＢ０１１、Ｂ
ＲＳＶのＧ遺伝子からなるｐＡＢ０１２、ＢＶＤのＣ遺伝子からなるｐＡＢ０５
８、ＢＶＤのＥ１遺伝子からなるｐＡＢ０５９、ＢＶＤのＥ２遺伝子からなるｐ
ＡＢ０６０、ＢＰＩ−３のＨＮ遺伝子からなるｐＡＢ０７１、ＢＰＩ−３のＦ遺
伝子からなるｐＡＢ０７２。
【００１６】 ネコのワクチン接種では特にネコ白血病ウイルスＦｅＬＶの特にＡおよびＢ亜
型、ネコ汎白血球減少症(ＦＰＶ)、ネコ感染性腹膜炎ウイルス(ＦＩＰＶ)、鼻感
冒ウイルスまたはネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）、ネコカリチウイルス（ＦＣ
Ｖ）、ネコ免疫不全症ウイルス(ＦＩＶ)および狂犬病ウイルス（ラブドウイルス
）に対するワクチン接種に本発明を適用できる。これらの病原体に対するワクチ
ン接種を可能にする主な免疫原をコード化する遺伝子の内、特にネコ白血病ウイ
ルスに対するｅｎｖおよびｇａｇ／ｐｏｌ遺伝子、汎白血球減少症に対するＶＰ
２遺伝子、感染性腹膜炎ウイルスに対するＭおよび修正Ｓ遺伝子（フランス国特
許出願第２，７２４，３８５号、この特許の内容は本明細書の一部をなす）、鼻
感冒に対するｇＢおよびｇＤ遺伝子、カリチウイルスに対するカプシド、ネコ免
疫不全症に対するｅｎｖおよびｇａｇ／ｐｒｏ遺伝子および狂犬病に対するＧ遺
伝子を挙げることができる。ポリヌクレオチドワクチン処方は国際特許出願第Ｗ
Ｏ−Ａ−９８ ０３６６０号＝フランス国特許出願第２，７５１，２２３号(こ れらの内容は本明細書の一部をなす)に記載されている。当業者はこの特許明細 書に記載のプラスミドを本発明のアジュバンドと組み合わせることができる。当
業者はこの特許の明細書に記載の下記の特有のプラスミドと本発明のアジュバン
ドとをとを組み合わせることができる：ＦｅＬＶ−Ａウイルスのｅｎｖ遺伝子か
らなるｐＰＢ１７９、ＦｅＬＶ−Ｂウイルスのｅｎｖ遺伝子からなるｐＰＢ１８
０、ＦｅＬＶ−Ａウイルスのｇａｇ／ｐｏｌ遺伝子からなるｐＰＢ１８１、ＦＰ
ＶのＶＰ２遺伝子からなるｐＡＢ００９、ＦＩＰＶウイルスの修正Ｓ遺伝子（フ
ランス国特許出願第２，７２４，３８５号）からなるｐＡＢ０５３、ＦＩＰＶの
Ｍ遺伝子からなるｐＡＢ０５２、ＦＩＰＶのＮ遺伝子からなるｐＡＢ０５６、Ｆ
ＨＶのｇＢ遺伝子からなるｐＡＢ０２８、ＦＨＶのｇＤ遺伝子からなるｐＡＢ０
２９、ＦＣＶのＣ遺伝子からなるｐＡＢ０１０、ＦＩＶのｅｎｖ遺伝子からなる
ｐＡＢ０３０、ＦＩＶのｇａｇ／ｐｒｏ遺伝子からなるｐＡＢ０８３および狂犬
病ウイルスのＧ遺伝子からなるｐＡＢ０４１。
型、ネコ汎白血球減少症(ＦＰＶ)、ネコ感染性腹膜炎ウイルス(ＦＩＰＶ)、鼻感
冒ウイルスまたはネコヘルペスウイルス（ＦＨＶ）、ネコカリチウイルス（ＦＣ
Ｖ）、ネコ免疫不全症ウイルス(ＦＩＶ)および狂犬病ウイルス（ラブドウイルス
）に対するワクチン接種に本発明を適用できる。これらの病原体に対するワクチ
ン接種を可能にする主な免疫原をコード化する遺伝子の内、特にネコ白血病ウイ
ルスに対するｅｎｖおよびｇａｇ／ｐｏｌ遺伝子、汎白血球減少症に対するＶＰ
２遺伝子、感染性腹膜炎ウイルスに対するＭおよび修正Ｓ遺伝子（フランス国特
許出願第２，７２４，３８５号、この特許の内容は本明細書の一部をなす）、鼻
感冒に対するｇＢおよびｇＤ遺伝子、カリチウイルスに対するカプシド、ネコ免
疫不全症に対するｅｎｖおよびｇａｇ／ｐｒｏ遺伝子および狂犬病に対するＧ遺
伝子を挙げることができる。ポリヌクレオチドワクチン処方は国際特許出願第Ｗ
Ｏ−Ａ−９８ ０３６６０号＝フランス国特許出願第２，７５１，２２３号(こ れらの内容は本明細書の一部をなす)に記載されている。当業者はこの特許明細 書に記載のプラスミドを本発明のアジュバンドと組み合わせることができる。当
業者はこの特許の明細書に記載の下記の特有のプラスミドと本発明のアジュバン
ドとをとを組み合わせることができる：ＦｅＬＶ−Ａウイルスのｅｎｖ遺伝子か
らなるｐＰＢ１７９、ＦｅＬＶ−Ｂウイルスのｅｎｖ遺伝子からなるｐＰＢ１８
０、ＦｅＬＶ−Ａウイルスのｇａｇ／ｐｏｌ遺伝子からなるｐＰＢ１８１、ＦＰ
ＶのＶＰ２遺伝子からなるｐＡＢ００９、ＦＩＰＶウイルスの修正Ｓ遺伝子（フ
ランス国特許出願第２，７２４，３８５号）からなるｐＡＢ０５３、ＦＩＰＶの
Ｍ遺伝子からなるｐＡＢ０５２、ＦＩＰＶのＮ遺伝子からなるｐＡＢ０５６、Ｆ
ＨＶのｇＢ遺伝子からなるｐＡＢ０２８、ＦＨＶのｇＤ遺伝子からなるｐＡＢ０
２９、ＦＣＶのＣ遺伝子からなるｐＡＢ０１０、ＦＩＶのｅｎｖ遺伝子からなる
ｐＡＢ０３０、ＦＩＶのｇａｇ／ｐｒｏ遺伝子からなるｐＡＢ０８３および狂犬
病ウイルスのＧ遺伝子からなるｐＡＢ０４１。
【００１７】 鳥類のワクチン接種では特にマレク病ウイルス（ＭＤＶ）、ニューカッスル病
ウイルス（ＮＤＶ）、ガンボロ病ウイルス（ＩＢＤＶまたは感染性嚢状病ウイル
ス）、感染性気管支炎ウイルス（ＩＢＶ）、感染性貧血症ウイルス（ＣＡＶ）、
感染性喉頭気管炎ウイルス（ＩＬＴＶ）、脳脊髄炎ウイルス（ＡＥＶまたはトリ
白血病ウイルスＡＬＶ）、肺炎ウイルス性ウイルス(pneumovirosis virus)また は肺炎ウイルス(pneumovirus)およびトリインフルエンザウイルスに対するワク チン接種に本発明を適用できる。本発明で使用できる主な免疫原をコード化する
遺伝子の内、特にマレク病ウイルスに対するｇＢおよびｇＤ遺伝子、ニューカッ
スル病ウイルスに対するＨＮおよびＦ遺伝子、ガンボロ病ウイルスに対するＶＰ
２遺伝子、感染性気管支炎ウイルスに対するＳ、ＭおよびＮ遺伝子、感染性喉頭
気管炎ウイルスに対するｇＢおよびｇＤ遺伝子、脳脊髄炎ウイルスに対するｅｎ
ｖおよびｇａｇ／ｐｒｏ遺伝子、肺炎ウイルス性ウイルスに対するＦおよびＧ遺
伝子およびトリインフルエンザウイルスに対するＨＡ、ＮおよびＮＰ遺伝子を挙
げることができる。このようなポリヌクレオチドワクチン処方は国際特許出願第
ＷＯ−Ａ−９８ ０３６５９号＝フランス国特許出願第２，７５１，２２５号( この特許の内容は本明細書の一部をなす)に記載されている。当業者はたの特許 の明細書に記載のプラスミドを本発明のアジュバンドと組み合わせることができ
る。特に、当業者はこの特許の明細書に記載の下記の特有のプラスミドと本発明
のアジュバンドとを組み合わせることができる：ＭＤＶのｇＢ遺伝子からなるｐ
ＡＢ０４５、ＭＤＶのｇＤ遺伝子からなるｐＡＢ０８０、ＮＤＶのＨＮ遺伝子か
らなるｐＡＢ０４６、ＮＤＶのＦ遺伝子からなるｐＡＢ０４７、ＩＢＤＶのＶＰ
２遺伝子からなるｐＡＢ０４８、ＩＢＶのＳ１遺伝子からなるｐＡＢ０４９、Ｉ
ＢＶのＭ遺伝子からなるｐＡＢ０５０、ＩＢＶのＮ遺伝子からなるｐＡＢ０５１
、ＣＡＶのＶＰ１遺伝子からなるｐＡＢ０５４、ＣＡＶのＶＰ２遺伝子からなる
ｐＡＢ０５５、ＩＬＴＶのｇＢ遺伝子からなるｐＡＢ０７６、ＩＬＴＶのｇＤ遺
伝子からなるｐＡＢ０８９、ＡＥＶのｅｎｖ遺伝子からなるｐＡＢ０８６、ＡＥ
Ｖのｇａｇ／ｐｒｏ遺伝子からなるｐＡＢ０８１、肺炎ウイルスのＧ遺伝子から
なるｐＡＢ０８２、トリインフルエンザ、Ｈ２Ｎ２菌株のＨＡ遺伝子からなるｐ
ＡＢ０７７、トリインフルエンザ、Ｈ７Ｎ７菌株のＨＡ遺伝子からなるｐＡＢ０
７８、トリインフルエンザ、Ｈ１Ｎ１菌株のＮＰ遺伝子からなるｐＡＢ０８８、
トリインフルエンザ、Ｈ７Ｎ１菌株のＮ遺伝子からなるｐＡＢ０７９。
ウイルス（ＮＤＶ）、ガンボロ病ウイルス（ＩＢＤＶまたは感染性嚢状病ウイル
ス）、感染性気管支炎ウイルス（ＩＢＶ）、感染性貧血症ウイルス（ＣＡＶ）、
感染性喉頭気管炎ウイルス（ＩＬＴＶ）、脳脊髄炎ウイルス（ＡＥＶまたはトリ
白血病ウイルスＡＬＶ）、肺炎ウイルス性ウイルス(pneumovirosis virus)また は肺炎ウイルス(pneumovirus)およびトリインフルエンザウイルスに対するワク チン接種に本発明を適用できる。本発明で使用できる主な免疫原をコード化する
遺伝子の内、特にマレク病ウイルスに対するｇＢおよびｇＤ遺伝子、ニューカッ
スル病ウイルスに対するＨＮおよびＦ遺伝子、ガンボロ病ウイルスに対するＶＰ
２遺伝子、感染性気管支炎ウイルスに対するＳ、ＭおよびＮ遺伝子、感染性喉頭
気管炎ウイルスに対するｇＢおよびｇＤ遺伝子、脳脊髄炎ウイルスに対するｅｎ
ｖおよびｇａｇ／ｐｒｏ遺伝子、肺炎ウイルス性ウイルスに対するＦおよびＧ遺
伝子およびトリインフルエンザウイルスに対するＨＡ、ＮおよびＮＰ遺伝子を挙
げることができる。このようなポリヌクレオチドワクチン処方は国際特許出願第
ＷＯ−Ａ−９８ ０３６５９号＝フランス国特許出願第２，７５１，２２５号( この特許の内容は本明細書の一部をなす)に記載されている。当業者はたの特許 の明細書に記載のプラスミドを本発明のアジュバンドと組み合わせることができ
る。特に、当業者はこの特許の明細書に記載の下記の特有のプラスミドと本発明
のアジュバンドとを組み合わせることができる：ＭＤＶのｇＢ遺伝子からなるｐ
ＡＢ０４５、ＭＤＶのｇＤ遺伝子からなるｐＡＢ０８０、ＮＤＶのＨＮ遺伝子か
らなるｐＡＢ０４６、ＮＤＶのＦ遺伝子からなるｐＡＢ０４７、ＩＢＤＶのＶＰ
２遺伝子からなるｐＡＢ０４８、ＩＢＶのＳ１遺伝子からなるｐＡＢ０４９、Ｉ
ＢＶのＭ遺伝子からなるｐＡＢ０５０、ＩＢＶのＮ遺伝子からなるｐＡＢ０５１
、ＣＡＶのＶＰ１遺伝子からなるｐＡＢ０５４、ＣＡＶのＶＰ２遺伝子からなる
ｐＡＢ０５５、ＩＬＴＶのｇＢ遺伝子からなるｐＡＢ０７６、ＩＬＴＶのｇＤ遺
伝子からなるｐＡＢ０８９、ＡＥＶのｅｎｖ遺伝子からなるｐＡＢ０８６、ＡＥ
Ｖのｇａｇ／ｐｒｏ遺伝子からなるｐＡＢ０８１、肺炎ウイルスのＧ遺伝子から
なるｐＡＢ０８２、トリインフルエンザ、Ｈ２Ｎ２菌株のＨＡ遺伝子からなるｐ
ＡＢ０７７、トリインフルエンザ、Ｈ７Ｎ７菌株のＨＡ遺伝子からなるｐＡＢ０
７８、トリインフルエンザ、Ｈ１Ｎ１菌株のＮＰ遺伝子からなるｐＡＢ０８８、
トリインフルエンザ、Ｈ７Ｎ１菌株のＮ遺伝子からなるｐＡＢ０７９。
【００１８】 裸のＤＮＡ、特に各プラスミドは挿入された遺伝子を宿主の細胞内で発現させ
るプロモータを有している。一般にはヒトまたはマウス起源の強真核性プロモー
タ、特にサイトメガロウイルスの早期(precoce)プロモータＣＭＶ−ＩＥであり 、場合によってはラット、ブタまたはモルモット等の他の動物を起源とすること
もある。一般的に、プロモータはウイルス起源のものでも、細胞起源のものでも
よい。ＣＭＶ−ＩＥの他のウイルス性プロモータとしてはＳＶ４０ウイルス早期
または後期(tardif)プロモータ或いはラウス肉腫ウイルスＬＴＲプロモータを挙
げることができる。さらに、プロモータは遺伝子を起源とするウイルスのプロモ
ータ、例えば遺伝子の実際のプロモータでもよい。細胞性プロモータとしてはデ
スミンプロモータ（Bolmont達、Journal of Submicroscopic Cytology and Path
ology, 1990, 22, 117-122およびZhenlin達、Gene, 1989, 78, 243-254）等の細
胞骨格遺伝子のプロモータまたはアクチンプロモータを挙げることができる。複
数の遺伝子が同じ裸のＤＮＡ、特にプラスミド中に存在する場合には、それらの
遺伝子は同一の転写ユニットまたは２つの異なるユニット中に存在できる。
るプロモータを有している。一般にはヒトまたはマウス起源の強真核性プロモー
タ、特にサイトメガロウイルスの早期(precoce)プロモータＣＭＶ−ＩＥであり 、場合によってはラット、ブタまたはモルモット等の他の動物を起源とすること
もある。一般的に、プロモータはウイルス起源のものでも、細胞起源のものでも
よい。ＣＭＶ−ＩＥの他のウイルス性プロモータとしてはＳＶ４０ウイルス早期
または後期(tardif)プロモータ或いはラウス肉腫ウイルスＬＴＲプロモータを挙
げることができる。さらに、プロモータは遺伝子を起源とするウイルスのプロモ
ータ、例えば遺伝子の実際のプロモータでもよい。細胞性プロモータとしてはデ
スミンプロモータ（Bolmont達、Journal of Submicroscopic Cytology and Path
ology, 1990, 22, 117-122およびZhenlin達、Gene, 1989, 78, 243-254）等の細
胞骨格遺伝子のプロモータまたはアクチンプロモータを挙げることができる。複
数の遺伝子が同じ裸のＤＮＡ、特にプラスミド中に存在する場合には、それらの
遺伝子は同一の転写ユニットまたは２つの異なるユニット中に存在できる。
【００１９】 ワクチンは上記の各抗原価に対して同じ裸のＤＮＡの複数の遺伝子、特にプラ
スミドおよび／または同じウイルスの一種または複数の遺伝子からなる複数の裸
のＤＮＡ、特にプラスミドと組み合わせることができるということは理解できよ
う。 本発明のさらに他の対象は、多価の組換えワクチンすなわち２つ以上の疾病の
抗原を１つまたは好ましくは２つ以上発現する組換えベクターを裸のＤＮＡ、特
にプラスミドを本発明のアジュバンド溶液中に混合物の状態で含むものにある。 すぐ使用可能な状態のワクチンには裸のＤＮＡ、特にプラスミドが文献記載の
一般的な量で存在する。
スミドおよび／または同じウイルスの一種または複数の遺伝子からなる複数の裸
のＤＮＡ、特にプラスミドと組み合わせることができるということは理解できよ
う。 本発明のさらに他の対象は、多価の組換えワクチンすなわち２つ以上の疾病の
抗原を１つまたは好ましくは２つ以上発現する組換えベクターを裸のＤＮＡ、特
にプラスミドを本発明のアジュバンド溶液中に混合物の状態で含むものにある。 すぐ使用可能な状態のワクチンには裸のＤＮＡ、特にプラスミドが文献記載の
一般的な量で存在する。
【００２０】 本発明のさらに他の対象は、非経口、好ましくは皮下、筋肉内または皮内経路
或いは粘膜経路で本発明のＤＮＡワクチンを一回またはそれ以上の投与回数で投
与するワクチン接種方法にある。 本発明のさらに他の対象はた、上記アジュバンドを含有したＤＮＡワクチンの
製造での本発明アジュバンド化合物の使用にある。 以下、添付図面を参照して本発明をより詳細に説明するが、本発明が下記実施
例に限定されるものではない。 図面のリスト：
或いは粘膜経路で本発明のＤＮＡワクチンを一回またはそれ以上の投与回数で投
与するワクチン接種方法にある。 本発明のさらに他の対象はた、上記アジュバンドを含有したＤＮＡワクチンの
製造での本発明アジュバンド化合物の使用にある。 以下、添付図面を参照して本発明をより詳細に説明するが、本発明が下記実施
例に限定されるものではない。 図面のリスト：
【００２１】配列のリスト ： 配列番号１： オリゴヌクレオチド ＣＣＬ００７ 配列番号２： オリゴヌクレオチド ＣＣＬ０１８ 配列番号３： ＨＡ遺伝子、ＥＩＶ Newmarket 2/93株の配列 配列番号４： オリゴヌクレオチド ＣＣＬ０２０ 配列番号５： ＨＡ遺伝子、ＥＩＶ Kentucky 1/94株の配列 配列番号６： オリゴヌクレオチド ＡＢ２６０ 配列番号７： オリゴヌクレオチド ＡＢ２６２ 配列番号８： ＮＡ遺伝子、ＥＩＶ Newmarket 2/93株の配列 配列番号９： ＮＡ遺伝子、ＥＩＶ Kentucky 1/94株の配列 配列番号１０： オリゴヌクレオチド ＣＣＬ０１９ 配列番号１１： オリゴヌクレオチド ＣＣＬ０２１ 配列番号１２： ＮＰ遺伝子、ＥＩＶ Newmarket 2/93株の配列 配列番号１３： ＮＰ遺伝子、ＥＩＶ Kentucky 1/94株の配列
【００２２】
【実施例】実施例１ アジュバンド 本発明のワクチンに用いられるカルボメールはBF Goodrich社製のカルボポー ル 974P(Carbopol、登録商標)である（分子量約３００万）。 先ず、１．５％ｗ／ｖのカルボポール 974Pを含む原液を１ｇ／ｌの比率で塩 化ナトリウムを含む蒸留水中に作る。この原液を４ｍｇ／ｍｌの生理食塩水を用
いたカルボポール溶液を作るのに用いる。原液を全生理食塩水（または必要に応
じてその大部分）に、一回または必要に応じて複数回に分けて注ぎ、それぞれＮ
ａＯＨ(例えば１Ｎまたはそれ以上に濃縮した)を用いてｐＨを約７．３〜７．４
の値に調整する。 こうしてすぐに使用可能な状態のカルボポール溶液が得られる。
いたカルボポール溶液を作るのに用いる。原液を全生理食塩水（または必要に応
じてその大部分）に、一回または必要に応じて複数回に分けて注ぎ、それぞれＮ
ａＯＨ(例えば１Ｎまたはそれ以上に濃縮した)を用いてｐＨを約７．３〜７．４
の値に調整する。 こうしてすぐに使用可能な状態のカルボポール溶液が得られる。
【００２３】実施例２ ウイルスの培養 ウイルスを細胞変性効果が得られるまで適切な細胞系で培養する。各ウイルス
に用いる細胞系は当業者に公知である。簡単にいうとイーグル最小必須培地（「
ＭＥＭ」培地）またはその他の適切な培地で培養し、使用するウイルスに感受性
の細胞に感染多重度１で上記ウイルス株を接種する。感染した細胞を完全な細胞
変性効果が現れるのに必要な時間（平均３６時間）、３７℃で保温する。
に用いる細胞系は当業者に公知である。簡単にいうとイーグル最小必須培地（「
ＭＥＭ」培地）またはその他の適切な培地で培養し、使用するウイルスに感受性
の細胞に感染多重度１で上記ウイルス株を接種する。感染した細胞を完全な細胞
変性効果が現れるのに必要な時間（平均３６時間）、３７℃で保温する。
【００２４】実施例３ ウイルスのゲノムＤＮＡの抽出 培養後、上澄み液および溶解細胞を回収し、ウイルスの顕濁液を＋４℃で１０
分間１０００ｇで遠心分離し、細胞片を除去する。ウイルスの粒子を＋４℃で１
時間４００、０００ｇの超遠心分離で回収する。ペレットを最小量（１０ｍＭの
トリス、１ｍＭのＥＤＭＡ）のバッファに溶解する。この濃縮ウイルス顕濁液を
３７℃で２時間、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）（０．５％最終）の存在下
でプロティナーゼＫ(１００μｇ／ｍｌ最終)を用いて処理する。ウイルスＤＮＡ
はフェノール／クロロホルム混合物を用いて抽出し、２倍量の無水エタノールを
用いて沈殿させる。−２０℃で一晩置いて、ＤＮＡを＋４℃で１５分間、１０、
０００ｇで遠心分離する。ＤＮＡペレットを乾燥し、最小量の超滅菌水に溶解す
る。これを制限酵素で消化する。
分間１０００ｇで遠心分離し、細胞片を除去する。ウイルスの粒子を＋４℃で１
時間４００、０００ｇの超遠心分離で回収する。ペレットを最小量（１０ｍＭの
トリス、１ｍＭのＥＤＭＡ）のバッファに溶解する。この濃縮ウイルス顕濁液を
３７℃で２時間、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）（０．５％最終）の存在下
でプロティナーゼＫ(１００μｇ／ｍｌ最終)を用いて処理する。ウイルスＤＮＡ
はフェノール／クロロホルム混合物を用いて抽出し、２倍量の無水エタノールを
用いて沈殿させる。−２０℃で一晩置いて、ＤＮＡを＋４℃で１５分間、１０、
０００ｇで遠心分離する。ＤＮＡペレットを乾燥し、最小量の超滅菌水に溶解す
る。これを制限酵素で消化する。
【００２５】実施例４ ウイルスのゲノムＲＮＡの単離 ＲＮＡウイルスを当業者に周知の方法で精製した。各ウイルスのゲノムウイル
スＲＮＡをP. ChomczynskiとN. Scchi(Anal. Biochm, 1987. 162. 156-159)に記
載の「チオシアン酸グアニジン／フェノール−クロロホルム」抽出法を用いて単
離した。
スＲＮＡをP. ChomczynskiとN. Scchi(Anal. Biochm, 1987. 162. 156-159)に記
載の「チオシアン酸グアニジン／フェノール−クロロホルム」抽出法を用いて単
離した。
【００２６】実施例５ 分子生物学的方法 J. Sambrook 達（Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 第２版、Cold H
arbor Laboratory, Cold Spring Harbor、ニューヨーク、１９８９年）に記載の
標準的な分子生物学的方法を用いて全てのプラスミド構成を作った。本発明のた
めに用いた全ての制限断片は「Geneclean」キット（BIO101 Inc. La Jolla, CA ）を用いて単離した。
arbor Laboratory, Cold Spring Harbor、ニューヨーク、１９８９年）に記載の
標準的な分子生物学的方法を用いて全てのプラスミド構成を作った。本発明のた
めに用いた全ての制限断片は「Geneclean」キット（BIO101 Inc. La Jolla, CA ）を用いて単離した。
【００２７】実施例６ ＲＴ−ＰＣＲ法 増幅すべき遺伝子のコード領域を完全にカバーするように、特定のオリゴヌク
レオチド（増幅断片のクローン化を容易にするためにその5末端に制限部位を含 む）を合成した(各実施例参照)。逆転写反応（ＲＴ）およびポリメラーゼによる
鎖反応（ＰＣＲ）を標準的な方法（J. Sambrook 達、Molecular Cloning: A Lab
oratory Manual、 第２版、Cold Harbor Laboratory、 Cold Spring Harbor、ニ
ューヨーク、１９８９年）で実施した。各ＲＴ−ＰＣＲ反応は一対の特定アンプ
リマー(amplimer)を用い、抽出したウイルスのゲノムＲＮＡをテンプレートとし
てもいちて実施した。増幅した補助ＤＮＡは制限酵素で消化する前にフェノール
／クロロホルム／イソアミルアルコール（２５：２４：１）を用いて抽出した。
レオチド（増幅断片のクローン化を容易にするためにその5末端に制限部位を含 む）を合成した(各実施例参照)。逆転写反応（ＲＴ）およびポリメラーゼによる
鎖反応（ＰＣＲ）を標準的な方法（J. Sambrook 達、Molecular Cloning: A Lab
oratory Manual、 第２版、Cold Harbor Laboratory、 Cold Spring Harbor、ニ
ューヨーク、１９８９年）で実施した。各ＲＴ−ＰＣＲ反応は一対の特定アンプ
リマー(amplimer)を用い、抽出したウイルスのゲノムＲＮＡをテンプレートとし
てもいちて実施した。増幅した補助ＤＮＡは制限酵素で消化する前にフェノール
／クロロホルム／イソアミルアルコール（２５：２４：１）を用いて抽出した。
【００２８】実施例７ プラスミドｐＶＲ１０１２ プラスミドｐＶＲ１０１２は米国カリフォルニア州サンディエゴのバイカル社
(Vical Inc.)から得た。その構成はJ. Hartikka 達（Human Gene Therapy. 1996
. 7. 1205-1217）に記載されている。この文献に記載の内容は本願明細書の一部
をなす。
(Vical Inc.)から得た。その構成はJ. Hartikka 達（Human Gene Therapy. 1996
. 7. 1205-1217）に記載されている。この文献に記載の内容は本願明細書の一部
をなす。
【００２９】実施例８ プラスミドｐＣＣＬ０２７（Newmarket 2/93 ＥＩＶ ＨＡ遺伝子）の構成 実施例６で説明したＲＴ−ＰＣＲ反応を実施例４に記載の方法で生成したウマ
インフルエンザウイルス（ＥＩＶ）（Newmarket 2/93 株）（Daly達、J. Gen, V
irol. 1996. 77. 661-671）のゲノムＲＮＡおよび下記オリゴヌクレオチドを用 いて実施して、約１７５０ｂｐのＰＣＲ断片の形でウマインフルエンザウイルス
（Newmarket 2/93 菌株）（図１、配列番号３）のＨＡグリコプロテインをコー ド化する遺伝子を単離した：
インフルエンザウイルス（ＥＩＶ）（Newmarket 2/93 株）（Daly達、J. Gen, V
irol. 1996. 77. 661-671）のゲノムＲＮＡおよび下記オリゴヌクレオチドを用 いて実施して、約１７５０ｂｐのＰＣＲ断片の形でウマインフルエンザウイルス
（Newmarket 2/93 菌株）（図１、配列番号３）のＨＡグリコプロテインをコー ド化する遺伝子を単離した：
【００３０】
【式１】
【００３１】 この断片を精製し、ベクターｐＣＲＩＩ（Cat#K2000-01,Invitrogen Corp. Ca
rlsbad, CA）と結合してプラスミドｐＣＣＬ０２６にした。次に、このプラスミ
ドｐＣＣＬ０２６を制限酵素ＳａｌＩおよびＮｏｔＩで消化してNewmarket 2/93
ＥＩＶ ＨＡ遺伝子を含む１７５１ｂｐのＳａｌＩ−ＮｏｔＩ断片を単離した 。この断片を予めＳａｌＩおよびＮｏｔＩで消化したプラスミドｐＶＲ１０１２
（実施例７参照）と結合してプラスミドｐＣＣＬ０２７にした（６６４２ｂｐ）
。
rlsbad, CA）と結合してプラスミドｐＣＣＬ０２６にした。次に、このプラスミ
ドｐＣＣＬ０２６を制限酵素ＳａｌＩおよびＮｏｔＩで消化してNewmarket 2/93
ＥＩＶ ＨＡ遺伝子を含む１７５１ｂｐのＳａｌＩ−ＮｏｔＩ断片を単離した 。この断片を予めＳａｌＩおよびＮｏｔＩで消化したプラスミドｐＶＲ１０１２
（実施例７参照）と結合してプラスミドｐＣＣＬ０２７にした（６６４２ｂｐ）
。
【００３２】実施例９ プラスミドｐＰＢ２４２（Kentucky 1/94 ＥＩＶ ＨＡ遺伝子）の構成 実施例６で説明したＲＴ−ＰＣＲ反応を実施例４に記載の方法で生成したウマ
インフルエンザウイルス（ＥＩＶ）（Kentucky 1/94 株）（Daly達、J. Gen, Vi
rol. 1996. 77. 661-671）のゲノムＲＮＡおよび下記オリゴヌクレオチドを用い
て実施して約１７５０ｂｐのＰＣＲ断片の形でウマインフルエンザウイルス（Ke
ntucky 1/94株）（図２、配列番号５）のＨＡグリコプロテインをコード化する 遺伝子を単離した：
インフルエンザウイルス（ＥＩＶ）（Kentucky 1/94 株）（Daly達、J. Gen, Vi
rol. 1996. 77. 661-671）のゲノムＲＮＡおよび下記オリゴヌクレオチドを用い
て実施して約１７５０ｂｐのＰＣＲ断片の形でウマインフルエンザウイルス（Ke
ntucky 1/94株）（図２、配列番号５）のＨＡグリコプロテインをコード化する 遺伝子を単離した：
【００３３】
【式２】
【００３４】 この断片を精製し、ベクターｐＣＲＩＩ（Cat#K2000-01,Invitrogen Corp. Ca
rlsbad, CA）と結合してプラスミドｐＣＣＬ０２８にした。次に、このプラスミ
ドｐＣＣＬ０２８を制限酵素ＳａｃＩおよびＢａｍＨＩで消化してKentucky 1/9
4 ＥＩＶ ＨＡ遺伝子の３‘部分を含む１１５３ｂｐのＳａｃＩ−ＢａｍＨＩ断
片(断片Ａ)を単離した。プラスミドｐＣＣＬ０２８を制限酵素ＳａｃＩおよびＥ
ｃｏＲＶで消化してKentucky 1/94 ＥＩＶ ＨＡ遺伝子の５‘部分を含む６２１
ｂｐのＳａｃＩ−ＥｃｏＲＶ断片(断片Ｂ)を単離した。断片ＡおよびＢを予めＥ
ｃｏＲＶおよびＢａｍＨＩで消化したプラスミドｐＶＲ１０１２（実施例７参照
）と結合してプラスミドｐＰＢ２４２（６６８８ｂｐ）にした。
rlsbad, CA）と結合してプラスミドｐＣＣＬ０２８にした。次に、このプラスミ
ドｐＣＣＬ０２８を制限酵素ＳａｃＩおよびＢａｍＨＩで消化してKentucky 1/9
4 ＥＩＶ ＨＡ遺伝子の３‘部分を含む１１５３ｂｐのＳａｃＩ−ＢａｍＨＩ断
片(断片Ａ)を単離した。プラスミドｐＣＣＬ０２８を制限酵素ＳａｃＩおよびＥ
ｃｏＲＶで消化してKentucky 1/94 ＥＩＶ ＨＡ遺伝子の５‘部分を含む６２１
ｂｐのＳａｃＩ−ＥｃｏＲＶ断片(断片Ｂ)を単離した。断片ＡおよびＢを予めＥ
ｃｏＲＶおよびＢａｍＨＩで消化したプラスミドｐＶＲ１０１２（実施例７参照
）と結合してプラスミドｐＰＢ２４２（６６８８ｂｐ）にした。
【００３５】実施例１０ プラスミドｐＡＢ１４２（Newmarket 2/93 ＥＩＶ ＮＡ遺伝子）の構成 実施例６で説明したＲＴ−ＰＣＲ反応を実施例４に記載の方法で生成したウマ
インフルエンザウイルス（ＥＩＶ）（Newmarket 2/93 株）（Daly達、J. Gen, V
irol. 1996. 77. 661-671）のゲノムＲＮＡおよび下記オリゴヌクレオチドを用 いて実施して約１４３０ｂｐのＰＣＲ断片の形でウマインフルエンザウイルス（
Newmarket 2/93 株）（図３、配列番号８）のノイラミニダーゼグリコプロテイ ンをコード化する遺伝子を単離した：
インフルエンザウイルス（ＥＩＶ）（Newmarket 2/93 株）（Daly達、J. Gen, V
irol. 1996. 77. 661-671）のゲノムＲＮＡおよび下記オリゴヌクレオチドを用 いて実施して約１４３０ｂｐのＰＣＲ断片の形でウマインフルエンザウイルス（
Newmarket 2/93 株）（図３、配列番号８）のノイラミニダーゼグリコプロテイ ンをコード化する遺伝子を単離した：
【００３６】
【式３】
【００３７】 この断片を精製し、制限酵素ＳａｌＩおよびＢａｍＨＩと結合してNewmarket
2/93 ＥＩＶ ＮＡ遺伝子を含む１４１８ｂｐのＳａｌＩ−ＢａｍＨＩ断片を単 離した。この断片を予めＳａｌＩおよびＢａｍＨＩで消化したプラスミドｐＶＲ
１０１２（実施例７参照）と結合してプラスミドｐＡＢ１４２にした（６２８７
ｂｐ）。
2/93 ＥＩＶ ＮＡ遺伝子を含む１４１８ｂｐのＳａｌＩ−ＢａｍＨＩ断片を単 離した。この断片を予めＳａｌＩおよびＢａｍＨＩで消化したプラスミドｐＶＲ
１０１２（実施例７参照）と結合してプラスミドｐＡＢ１４２にした（６２８７
ｂｐ）。
【００３８】実施例１１ プラスミドｐＰＢ２４６（Kentucky 1/94 ＥＩＶ ＮＡ遺伝子）の構成 実施例６で説明したＲＴ−ＰＣＲ反応を実施例４に記載の方法で生成したウマ
インフルエンザウイルス（ＥＩＶ）（Kentucky 1/94 株）（Daly達、J. Gen, Vi
rol. 1996. 77. 661-671）のゲノムＲＮＡおよび下記オリゴヌクレオチド：ＡＢ
２６０およびＡＢ２６２(実施例１０)を用いて実施して、約１４３０ｂｐのＰＣ
Ｒ断片の形でウマインフルエンザウイルス（Kentucky 1/94株）（図４、配列番 号９）のノイラミニダーゼ（ＮＡ）グリコプロテインをコード化する遺伝子を単
離した。この断片を精製し、制限酵素ＳａｌＩおよびＢａｍＨＩと結合してKent
ucky 1/94 ＥＩＶ ＮＡ遺伝子を含む１４１８ｂｐのＳａｌＩ−ＢａｍＨＩ断片
を単離した。この断片を予めＳａｌＩおよびＢａｍＨＩで消化したプラスミドｐ
ＶＲ１０１２（実施例７参照）と結合してプラスミドｐＡＢ１１６（６２８７ｂ
ｐ）にした。
インフルエンザウイルス（ＥＩＶ）（Kentucky 1/94 株）（Daly達、J. Gen, Vi
rol. 1996. 77. 661-671）のゲノムＲＮＡおよび下記オリゴヌクレオチド：ＡＢ
２６０およびＡＢ２６２(実施例１０)を用いて実施して、約１４３０ｂｐのＰＣ
Ｒ断片の形でウマインフルエンザウイルス（Kentucky 1/94株）（図４、配列番 号９）のノイラミニダーゼ（ＮＡ）グリコプロテインをコード化する遺伝子を単
離した。この断片を精製し、制限酵素ＳａｌＩおよびＢａｍＨＩと結合してKent
ucky 1/94 ＥＩＶ ＮＡ遺伝子を含む１４１８ｂｐのＳａｌＩ−ＢａｍＨＩ断片
を単離した。この断片を予めＳａｌＩおよびＢａｍＨＩで消化したプラスミドｐ
ＶＲ１０１２（実施例７参照）と結合してプラスミドｐＡＢ１１６（６２８７ｂ
ｐ）にした。
【００３９】実施例１２ プラスミドｐＰＢ２４５（Newmarket 2/93 ＥＩＶ ＮＰ遺伝子）の構成 実施例６で説明したＲＴ−ＰＣＲ反応を実施例４に記載の方法で生成したウマ
インフルエンザウイルス（ＥＩＶ）（Newmarket 2/93 株）（Daly達、J. Gen, V
irol. 1996. 77. 661-671）のゲノムＲＮＡおよび下記オリゴヌクレオチドを用 いて実施して約１５２０ｂｐのＰＣＲ断片の形でウマインフルエンザウイルス（
Newmarket 2/93 菌株）（図５、配列番号１２）の核蛋白質（ＮＰ）をコード化 する遺伝子を単離した：
インフルエンザウイルス（ＥＩＶ）（Newmarket 2/93 株）（Daly達、J. Gen, V
irol. 1996. 77. 661-671）のゲノムＲＮＡおよび下記オリゴヌクレオチドを用 いて実施して約１５２０ｂｐのＰＣＲ断片の形でウマインフルエンザウイルス（
Newmarket 2/93 菌株）（図５、配列番号１２）の核蛋白質（ＮＰ）をコード化 する遺伝子を単離した：
【００４０】
【式４】
【００４１】 この断片を精製し、制限酵素ＳａｌＩおよびＸｂａｌと結合してNewmarket 2/
93 ＥＩＶ ＮＰ遺伝子を含む１４１８ｂｐのＳａｌＩ−Ｘｂａｌ断片を単離し た。この断片を予めＳａｌＩおよびＸｂａｌで消化したプラスミドｐＶＲ１０１
２（実施例７参照）と結合してプラスミドｐＰＢ２４５にした（６３８９ｂｐ）
。
93 ＥＩＶ ＮＰ遺伝子を含む１４１８ｂｐのＳａｌＩ−Ｘｂａｌ断片を単離し た。この断片を予めＳａｌＩおよびＸｂａｌで消化したプラスミドｐＶＲ１０１
２（実施例７参照）と結合してプラスミドｐＰＢ２４５にした（６３８９ｂｐ）
。
【００４２】実施例１３ プラスミドｐＰＢ２４６（Kentucky 1/94 ＥＩＶ ＮＰ遺伝子）の構成 実施例６で説明したＲＴ−ＰＣＲ反応を実施例４に記載の方法で生成したウマ
インフルエンザウイルス（ＥＩＶ）（Kentucky 1/94 株）（Daly達、J. Gen, Vi
rol. 1996. 77. 661-671）のゲノムＲＮＡおよび下記オリゴヌクレオチド：ＣＣ
Ｌ０１９およびＣＣＬ０２１(実施例１２)を用いて実施して約１５２０ｂｐのＰ
ＣＲ断片の形でウマインフルエンザウイルス（Kentucky 1/94株）（図６、配列 番号１３）の核蛋白質（ＮＰ）をコード化する遺伝子を単離した。この断片を精
製し、制限酵素ＳａｌＩおよびＸｂａＩと結合しててKentucky 1/94 ＥＩＶ Ｎ
Ｐ遺伝子を含む１５０６ｂｐのＳａｌＩ−ＸｂａＩ断片を単離した。この断片を
予めＳａｌＩおよびＸｂａＩで消化したプラスミドｐＶＲ１０１２（実施例７参
照）と結合してプラスミドｐＰＢ２４６（６３８９ｂｐ）にした。
インフルエンザウイルス（ＥＩＶ）（Kentucky 1/94 株）（Daly達、J. Gen, Vi
rol. 1996. 77. 661-671）のゲノムＲＮＡおよび下記オリゴヌクレオチド：ＣＣ
Ｌ０１９およびＣＣＬ０２１(実施例１２)を用いて実施して約１５２０ｂｐのＰ
ＣＲ断片の形でウマインフルエンザウイルス（Kentucky 1/94株）（図６、配列 番号１３）の核蛋白質（ＮＰ）をコード化する遺伝子を単離した。この断片を精
製し、制限酵素ＳａｌＩおよびＸｂａＩと結合しててKentucky 1/94 ＥＩＶ Ｎ
Ｐ遺伝子を含む１５０６ｂｐのＳａｌＩ−ＸｂａＩ断片を単離した。この断片を
予めＳａｌＩおよびＸｂａＩで消化したプラスミドｐＶＲ１０１２（実施例７参
照）と結合してプラスミドｐＰＢ２４６（６３８９ｂｐ）にした。
【００４３】実施例１４ プラスミドｐＰＢ１５６（ＢＨＶ−１ ｇＢ遺伝子）の構成 この構成は国際特許第ＷＯ−Ａ−９８ ０３２００号に記載されている。実施例１５ プラスミドｐＡＢ０８７（ＢＨＶ−１ ｇＤ遺伝子）の構成 この構成は国際特許第ＷＯ−Ａ−９８ ０３２００号に記載されている。実施例１６ プラスミドｐＡＢ０９０（ＰＲＶ ｇＢ遺伝子）の構成 この構成は国際特許第ＷＯ−Ａ−９８ ０３６５８号に記載されている。実施例１７：プラスミドｐＰＢ０９８（ＰＲＶ ｇＤ遺伝子）の構成 この構成は国際特許第ＷＯ−Ａ−９８ ０３６５８号に記載されている。実施例１８ プラスミドｐＡＢ０４４（ＣＤＶ ＨＡ遺伝子）の構成 この構成は国際特許第ＷＯ−Ａ−９８ ０３１９９号に記載されている。実施例１９ プラスミドｐＡＢ０３６（ＣＤＶ Ｆ遺伝子）の構成 この構成は国際特許第ＷＯ−Ａ−９８ ０３１９９号に記載されている。実施例２０ プラスミドｐＡＢ０４１（狂犬病 Ｇ遺伝子）の構成 この構成は国際特許第ＷＯ−Ａ−９８ ０３１９９号に記載されている。
【００４４】実施例２１ ウマへの適用 テストするワクチンはＥＩＶウイルス株Newmarket 2/93のＨＡ、ＮＡおよびＮ
Ｐ遺伝子を含み且つ発現する３種のプラスミドｐＣＣＬ０２７（実施例８）、ｐ
ＡＢ１４２（実施例１０）とｐＰＢ２４５（実施例１２）との混合物である。本
発明じはこの混合物をカルボメールと組み合わせる。比較例として組み合わせな
いものも用意した。 ワクチン接種／感染プロトコルは下記表の通り：
Ｐ遺伝子を含み且つ発現する３種のプラスミドｐＣＣＬ０２７（実施例８）、ｐ
ＡＢ１４２（実施例１０）とｐＰＢ２４５（実施例１２）との混合物である。本
発明じはこの混合物をカルボメールと組み合わせる。比較例として組み合わせな
いものも用意した。 ワクチン接種／感染プロトコルは下記表の通り：
【００４５】
【表１】
【００４６】 この研究にはＳＲＨ（一元放射状拡散溶血反応）テストで測定したＨ３Ｎ８お
よびＨ７Ｎ７ウイルスに対する検出可能な抗体を有さない７〜８ヶ月のポニー( ウェルシュ・マウンテンポニー)を用いた。ポニーはランダムに４グループに分 布させた。 ウマにはＤ０〜Ｄ３５に筋肉内経路でワクチン接種した。Ｃグループに用いた
市販のワクチンは一回の投与量１ｍｌでウマに投与した。ＡおよびＢグループの
ポニーにはそれぞれ首の深い筋肉内注射でＤ０〜Ｄ３５に５ｍｌを２回分投与し
た。
よびＨ７Ｎ７ウイルスに対する検出可能な抗体を有さない７〜８ヶ月のポニー( ウェルシュ・マウンテンポニー)を用いた。ポニーはランダムに４グループに分 布させた。 ウマにはＤ０〜Ｄ３５に筋肉内経路でワクチン接種した。Ｃグループに用いた
市販のワクチンは一回の投与量１ｍｌでウマに投与した。ＡおよびＢグループの
ポニーにはそれぞれ首の深い筋肉内注射でＤ０〜Ｄ３５に５ｍｌを２回分投与し
た。
【００４７】 ２度目のワクチン接種から３週間後のＤ５６に、Mumford達、Equine Vet, J.,
22: 93-98, 1990に記載の方法で、ULTRA 2000モデル噴霧装置（De Villbiss, S
omerset PA）を用いて全部で１０7.3ＥＩＤ50のインフルエンザＡ−ウマ−２/Su
ssex／89ウイルスを含む約1ｍｌの尿膜腔液から得た煙霧剤に各ポニーを露出し て感染させた。 感染後、ポニーをモニターして、臨床的徴候（臨床スコアの確立）および体温
を観察した。感染０日から感染１０日後まで毎日鼻のスワブを作り、感染したウ
マそれぞれから排出されたウイルス量を測定した。 最後に、感染前と後のプロトコル中（Ｄ０、Ｄ７、Ｄ１４、Ｄ３５、Ｄ４９、
Ｄ５６、Ｄ６３およびＤ７０の日）に血液サンプルを集め、各ワクチン接種グル
ープに対するＳＲＨおよびＩＨＡ抗体（赤血球凝集抗体）の出現速度およびレベ
ルを測定した。
22: 93-98, 1990に記載の方法で、ULTRA 2000モデル噴霧装置（De Villbiss, S
omerset PA）を用いて全部で１０7.3ＥＩＤ50のインフルエンザＡ−ウマ−２/Su
ssex／89ウイルスを含む約1ｍｌの尿膜腔液から得た煙霧剤に各ポニーを露出し て感染させた。 感染後、ポニーをモニターして、臨床的徴候（臨床スコアの確立）および体温
を観察した。感染０日から感染１０日後まで毎日鼻のスワブを作り、感染したウ
マそれぞれから排出されたウイルス量を測定した。 最後に、感染前と後のプロトコル中（Ｄ０、Ｄ７、Ｄ１４、Ｄ３５、Ｄ４９、
Ｄ５６、Ｄ６３およびＤ７０の日）に血液サンプルを集め、各ワクチン接種グル
ープに対するＳＲＨおよびＩＨＡ抗体（赤血球凝集抗体）の出現速度およびレベ
ルを測定した。
【００４８】実施例２２ ブタへの適用 カルボメールと組み合わせた、或いは組み合わせないプラスミドワクチンの効
果をオーエスキー病のワクチン接種／感染モデルのブタで研究した。テストした
ワクチンはＰＲＶウイルスのｇＢおよびｇＤ遺伝子を含み、且つ発現する２種の
プラスミドｐＡＢ０９０（実施例１６）とｐＰＢ０９８（実施例１７）との混合
物である。この混合物を本発明ではカルボメールと組み合わせ、比較例では組み
合わせなかった。 ワクチン接種／感染プロトコルは下記表の通り：
果をオーエスキー病のワクチン接種／感染モデルのブタで研究した。テストした
ワクチンはＰＲＶウイルスのｇＢおよびｇＤ遺伝子を含み、且つ発現する２種の
プラスミドｐＡＢ０９０（実施例１６）とｐＰＢ０９８（実施例１７）との混合
物である。この混合物を本発明ではカルボメールと組み合わせ、比較例では組み
合わせなかった。 ワクチン接種／感染プロトコルは下記表の通り：
【００４９】
【表２】
【００５０】 Ｄ０では、グループＡとＢのブタに筋肉内経路でカルボメールと組み合わせた
、或いは組み合わせないプラスミドｐＰＢ０９８とｐＡＢ０９０（それぞれ２０
０μｇのプラスミド）の混合物を２ｍｌ量で接種した。 グループＣのブタには筋肉内経路で市販のワクチンGeskypur(サブユニットワ クチン、メリアル社、リヨン、フランス)を２ｍｌ量で接種した。 グループＤのブタにはワクチン接種しなかった。
、或いは組み合わせないプラスミドｐＰＢ０９８とｐＡＢ０９０（それぞれ２０
０μｇのプラスミド）の混合物を２ｍｌ量で接種した。 グループＣのブタには筋肉内経路で市販のワクチンGeskypur(サブユニットワ クチン、メリアル社、リヨン、フランス)を２ｍｌ量で接種した。 グループＤのブタにはワクチン接種しなかった。
【００５１】 Ｄ２１に全てのブタをオーエスキー病の感染菌株、ＮＩＡ３菌株のウイルス顕
濁液（１０8.25ＣＣＩＤ50ｍｌを滴定する原液の１／５希釈）２ｍｌ（１つの鼻
腔につき１ｍｌの割合で）で感染させた。 感染後、死亡およびデルタＧ７基準（感染のＤ０およびＤ７における個々の体
重）についてブタをモニターした。感染のＤ０からＤ７まで毎日、鼻のスワブを
作り、感染後に排出されたウイルス量を測定した。 プロトコルのＤ０、Ｄ７、Ｄ１４、Ｄ２１およびＤ２８に血液サンプルを集め
、出現速度およびオーエスキー病ウイルス（ＰＲＶ）の血清中和抗体のレベルを
測定した。アイソタイプＩｇＧ１とＩｇＧ２の抗ＰＲＶイライザ(ELISA)抗体も ワクチン接種した、或いはしていないブタから回収された血清で測定した。
濁液（１０8.25ＣＣＩＤ50ｍｌを滴定する原液の１／５希釈）２ｍｌ（１つの鼻
腔につき１ｍｌの割合で）で感染させた。 感染後、死亡およびデルタＧ７基準（感染のＤ０およびＤ７における個々の体
重）についてブタをモニターした。感染のＤ０からＤ７まで毎日、鼻のスワブを
作り、感染後に排出されたウイルス量を測定した。 プロトコルのＤ０、Ｄ７、Ｄ１４、Ｄ２１およびＤ２８に血液サンプルを集め
、出現速度およびオーエスキー病ウイルス（ＰＲＶ）の血清中和抗体のレベルを
測定した。アイソタイプＩｇＧ１とＩｇＧ２の抗ＰＲＶイライザ(ELISA)抗体も ワクチン接種した、或いはしていないブタから回収された血清で測定した。
【００５２】実施例２３ ウシに対する適用 カルボメールと組み合わせた、或いは組み合わせないプラスミドワクチンの効
果を感染性ウシ鼻気管炎（ＩＢＲ）またはＢＨＶ−１のワクチン接種／感染モデ
ルのウシで研究した。テストしたワクチンはＢＨＶ−１ウイルスのｇＢおよびｇ
Ｄ遺伝子を含み、且つ発現する２種のプラスミドｐＰＢ１５６（実施例１４）と
ｐＡＢ０８７（実施例１５）との混合物である。この混合物をカルボメールと組
み合わせ（本発明）或いは組み合わせなかった。 ワクチン接種／感染プロトコルは下記表の通り：
果を感染性ウシ鼻気管炎（ＩＢＲ）またはＢＨＶ−１のワクチン接種／感染モデ
ルのウシで研究した。テストしたワクチンはＢＨＶ−１ウイルスのｇＢおよびｇ
Ｄ遺伝子を含み、且つ発現する２種のプラスミドｐＰＢ１５６（実施例１４）と
ｐＡＢ０８７（実施例１５）との混合物である。この混合物をカルボメールと組
み合わせ（本発明）或いは組み合わせなかった。 ワクチン接種／感染プロトコルは下記表の通り：
【００５３】
【表３】
【００５４】 Ｄ０にグループＡとＢの子ウシに筋肉内経路でカルボメールと組み合わせた、
或いは組み合わせないプラスミドｐＡＢ０８７とｐＰＢ１５６（それぞれ３００
μｇのプラスミド）との混合物を５ｍｌ量で接種した。 グループＣの子ウシには筋肉内経路で市販のワクチンIbepur (サブユニットワ
クチン、メリアル社、リヨン、フランス)を２ｍｌ量で接種した。 グループＤのブタにはワクチン接種しなかった。 Ｄ２１では、グループＡ、ＢおよびＣにＤ０と同じ様式で２度目のワクチンを
注射した。
或いは組み合わせないプラスミドｐＡＢ０８７とｐＰＢ１５６（それぞれ３００
μｇのプラスミド）との混合物を５ｍｌ量で接種した。 グループＣの子ウシには筋肉内経路で市販のワクチンIbepur (サブユニットワ
クチン、メリアル社、リヨン、フランス)を２ｍｌ量で接種した。 グループＤのブタにはワクチン接種しなかった。 Ｄ２１では、グループＡ、ＢおよびＣにＤ０と同じ様式で２度目のワクチンを
注射した。
【００５５】 Ｄ３５に子ウシをＢＨＶ−１の感染株Ｂ９０１株のウイルス顕濁液（滴定値が
１０8.25ＣＣＩＤ50ｍｌの原液の１／５希釈）２．５ｍｌ（１つの鼻腔につき１
．２５ｍｌの割合で）で感染させた。 感染後、臨床的徴候について子ウシをモニターした(臨床スコアの確立)。感染
のＤ０からＤ１４まで毎日、鼻のスワブを作り、感染後に排出されたウイルスの
量を測定した。最後にプロトコルのＤ０、Ｄ７、Ｄ１４、Ｄ２１、Ｄ３５および
Ｄ４９に血液サンプルを集め、出現速度および感染性ウシ鼻気管炎（ＢＨＶ−１
）の血清中和抗体の水準を測定した。アイソタイプＩｇＧ１とＩｇＧ２の抗ＢＨ
Ｖ−１イライザ(ELISA)抗体もワクチン接種した、或いはしていない子ウシから 回収した血清で測定した。
１０8.25ＣＣＩＤ50ｍｌの原液の１／５希釈）２．５ｍｌ（１つの鼻腔につき１
．２５ｍｌの割合で）で感染させた。 感染後、臨床的徴候について子ウシをモニターした(臨床スコアの確立)。感染
のＤ０からＤ１４まで毎日、鼻のスワブを作り、感染後に排出されたウイルスの
量を測定した。最後にプロトコルのＤ０、Ｄ７、Ｄ１４、Ｄ２１、Ｄ３５および
Ｄ４９に血液サンプルを集め、出現速度および感染性ウシ鼻気管炎（ＢＨＶ−１
）の血清中和抗体の水準を測定した。アイソタイプＩｇＧ１とＩｇＧ２の抗ＢＨ
Ｖ−１イライザ(ELISA)抗体もワクチン接種した、或いはしていない子ウシから 回収した血清で測定した。
【００５６】実施例２３ イヌへの適用 カルボメールと組み合わせた、或いは組み合わせないプラスミドワクチンの効
果をカレ病（ＣＤＶ）のワクチン接種／感染モデルのイヌで研究した。テストし
たワクチンはＣＤＶウイルスのＨＡおよびＦ遺伝子を含み且つ発現する２種のプ
ラスミドｐＡＢ０４４（実施例１８）とｐＡＢ０３６（実施例１９）との混合物
である。この混合物を本発明に従ってカルボメールと組み合わせるか、或いは組
み合わせなかった。使用したワクチン接種／感染プロトコルは下記表の通り：
果をカレ病（ＣＤＶ）のワクチン接種／感染モデルのイヌで研究した。テストし
たワクチンはＣＤＶウイルスのＨＡおよびＦ遺伝子を含み且つ発現する２種のプ
ラスミドｐＡＢ０４４（実施例１８）とｐＡＢ０３６（実施例１９）との混合物
である。この混合物を本発明に従ってカルボメールと組み合わせるか、或いは組
み合わせなかった。使用したワクチン接種／感染プロトコルは下記表の通り：
【００５７】
【表４】
【００５８】 Ｄ０とＤ２８にグループＡ、ＢおよびＣのイヌに筋肉内経路でワクチン接種し
た。グループＡおよびＢのイヌには、各接種で１ｍｌ中に合わせて４００μｇ（
２×２００μｇ）を含むプラスミド溶液を一回注射した。 グループＣのイヌにはフランス、リヨンのメリアル社により市販のワクチンEU
RICAN(CHPPI2)を接種した。一回の市販投与量は約１０4ｐｆｕのOnderstepoort ワクチン菌株とルバース肝炎、イヌパルボウイルスおよび２型パラインフルエン
ザウイルスに対するワクチン抗原価を含む。
た。グループＡおよびＢのイヌには、各接種で１ｍｌ中に合わせて４００μｇ（
２×２００μｇ）を含むプラスミド溶液を一回注射した。 グループＣのイヌにはフランス、リヨンのメリアル社により市販のワクチンEU
RICAN(CHPPI2)を接種した。一回の市販投与量は約１０4ｐｆｕのOnderstepoort ワクチン菌株とルバース肝炎、イヌパルボウイルスおよび２型パラインフルエン
ザウイルスに対するワクチン抗原価を含む。
【００５９】 Ｄ４９に、ＣＤＶ「Synder-Hill」の感染菌株（ＵＳＡ、ＵＳＤＡが製造、提 供）の１／１０希釈を脳内投与して、感染させた。 臨床的モニタリングを感染後２１日間、毎日実施して徴候(一般的状態、眼鼻 の症状、消化症状、神経症状、体温)を記録した（欧州薬局方の規則に従った表 示法）。１週間に１度、感染したイヌの体重を量った。
【００６０】 保護効果は下記判定基準で推定した。 (1) 各グループの平均臨床スコア (2) ワクチン投与後のＣＤＶウイルス血症レベル（ワクチン投与後Ｄ５６、Ｄ ６１、Ｄ６６、Ｄ７０にリンパ球のウイルス負荷を測定） (3) Ｄ４８、Ｄ５４、Ｄ５６、Ｄ５９、Ｄ５６、Ｄ７７（すなわち感染後−１ 、５、７、１０、１４および２１日）集められた血液サンプルにおける血球数。 (4) 感染後の体重の変化。 これら全ての判定基準について各グループの平均水準を互いにおよび対照グル
ープの平均水準と比較した。 血液サンプルは、イライザ抗体およびカレ病ウイルス血清中和抗体の滴定のた
めＤ０、Ｄ１４、Ｄ２８、Ｄ５６およびＤ７０の日に回収した。
ープの平均水準と比較した。 血液サンプルは、イライザ抗体およびカレ病ウイルス血清中和抗体の滴定のた
めＤ０、Ｄ１４、Ｄ２８、Ｄ５６およびＤ７０の日に回収した。
【図１】 ウマインフルエンザウイルス菌株Newmarket 2/93の血球凝集素（Ｈ
Ａ）遺伝子の配列。
Ａ）遺伝子の配列。
【図２】 ウマインフルエンザウイルス菌株Kentucky 1/94の血球凝集素（Ｈ Ａ）遺伝子の配列。
【図３】 ウマインフルエンザウイルス菌株Newmarket 2/93のノイラミニダー
ゼ（ＮＡ）遺伝子の配列。
ゼ（ＮＡ）遺伝子の配列。
【図４】 ウマインフルエンザウイルス菌株Kentucky 1/94のノイラミニダー ゼ（ＮＡ）遺伝子の配列。
【図５】 ウマインフルエンザウイルス菌株Newmarket 2/93の核蛋白（ＮＰ）
遺伝子の配列。
遺伝子の配列。
【図６】 ウマインフルエンザウイルス菌株Kentucky 1/94の核蛋白（ＮＰ） 遺伝子の配列。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ， ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，Ｍ Ｎ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ， ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，Ｚ Ａ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C084 AA13 BA35 CA17 CA20 CA21 CA41 MA05 MA55 MA56 MA66 NA20 4C085 AA03 BA59 BA60 BA73 BA84 DD86 FF12 FF17 GG03 GG04
Claims (10)
- 【請求項１】 抗原性ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、好まし
くは病原性遺伝子が組み込まれ且つインビボで発現する裸のＤＮＡと、アクリル
酸またはメタクリル酸のポリマーおよび無水マレイン酸とアルケニル誘導体との
コポリマーの中から選択される少なくとも１種のアジュバンド化合物とからなる
ＤＮＡワクチン。 - 【請求項２】 アジュバンド化合物が砂糖またはポリアルコールのポリアル
ケニルエーテルで架橋されたアクリル酸またはメタクリル酸のポリマーである請
求項１に記載のワクチン。 - 【請求項３】 上記ポリマーがアリルサッカロースまたはアリルペンタエリ
スリトールで架橋されている請求項２に記載のワクチン。 - 【請求項４】 アジュバンド化合物がジビニルエーテル等で架橋された無水
マレイン酸とエチレンとのコポリマーである請求項１に記載のワクチン。 - 【請求項５】 ワクチン中のアジュバンド化合物の存在量が０．０１〜２％
ｗ／ｖである請求項１〜４のいずれか一項に記載のワクチン。 - 【請求項６】 濃度が０．０６〜１％ｗ／ｖ、好ましくは０．１〜０．６％
ｗ／ｖである請求項５に記載のワクチン。 - 【請求項７】 裸のＤＮＡがプラスミドである請求項１〜６のいずれか一項
に記載のワクチン。 - 【請求項８】 ブタ、ウマ、イヌ、ウシ、ネコまたは鳥類の病原体の配列が
組み込まれ且つ発現する裸のＤＮＡからなる請求項１〜７のいずれか一項に記載
のワクチン。 - 【請求項９】 下記の病原体の中から選択される少なくとも一つの配列を含
む請求項８に記載のワクチン： オージエスキー病ウイルス ブタインフルエンザウイルス ブタ生殖器／呼吸器症候群ウイルス ブタパルボウイルス ブタコレラウイルス アクチノバチルス症 ウマ鼻肺炎ウイルス ウマインフルエンザウイルス 破傷風（Cl. tetani） 東部脳炎ウイルス 西部脳炎ウイルス ベネズエラ脳炎ウイルス ライム病（B. burgdorferi） イヌジステンパーウイルス イヌパルボウイルス イヌコロナウイルス イヌヘルペスウイルス 狂犬病ウイルス １型または５型のウシヘルペスウイルス ウシ呼吸系発疹ウイルス ウシペスチウイルス ３型ウシパラインフルエンザウイルス ネコ白血病ウイルス ネコ汎白血球減少症 ネコ感染性腹膜炎ウイルス ネコヘルペスウイルス ネコカリチウイルス ネコ免疫不全症ウイルス マレク病ウイルス ニューカッスル病ウイルス ガンボロ病ウイルス トリ感染性気管支炎ウイルス トリ感染性貧血症ウイルス 感染性喉頭気管炎ウイルス トリ白血病ウイルス トリ肺炎ウイルス トリインフルエンザ。 - 【請求項１０】 請求項１〜９のいずれか一項に記載のアクリル酸またはメ
タクリル酸のポリマーおよび無水マレイン酸とアルケニル誘導体とのコポリマー
の中から選択される化合物の、異種ヌクレオチド配列が組み込まれ且つインビボ
で発現するＤＮＡワクチンでのアジュバンドとしての使用。
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| BE1008977A5 (fr) * | 1994-12-27 | 1996-10-01 | Solvay | Adjuvants pour vaccins. |
| US6300118B1 (en) * | 1995-06-07 | 2001-10-09 | American Home Products Corporation | Plasmids comprising a genetically altered feline immunodeficiency virus genome |
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| GB9623051D0 (en) * | 1996-11-06 | 1997-01-08 | Schacht Etienne H | Delivery of DNA to target cells in biological systems |
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