PL194348B1 - Szczepionki DNA i zastosowanie polimerów kwasu akrylowego albo metakrylowego oraz kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylowej oraz zastosowanie karbopolu - Google Patents
Szczepionki DNA i zastosowanie polimerów kwasu akrylowego albo metakrylowego oraz kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylowej oraz zastosowanie karbopoluInfo
- Publication number
- PL194348B1 PL194348B1 PL99343602A PL34360299A PL194348B1 PL 194348 B1 PL194348 B1 PL 194348B1 PL 99343602 A PL99343602 A PL 99343602A PL 34360299 A PL34360299 A PL 34360299A PL 194348 B1 PL194348 B1 PL 194348B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- virus
- gene
- vaccine
- adjuvant
- bovine
- Prior art date
Links
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 title claims abstract description 40
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 62
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 66
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 claims abstract description 33
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 14
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims abstract description 13
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 12
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 90
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 80
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims description 44
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 27
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 22
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 claims description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 15
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 13
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 12
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 10
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 241000271566 Aves Species 0.000 claims description 9
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 241000711450 Infectious bronchitis virus Species 0.000 claims description 8
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 8
- 241000701931 Canine parvovirus Species 0.000 claims description 7
- 241000711798 Rabies lyssavirus Species 0.000 claims description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 7
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 7
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 7
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 7
- 208000009305 pseudorabies Diseases 0.000 claims description 7
- 201000010740 swine influenza Diseases 0.000 claims description 7
- 241000606748 Actinobacillus pleuropneumoniae Species 0.000 claims description 6
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 claims description 6
- 241000589969 Borreliella burgdorferi Species 0.000 claims description 6
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 claims description 6
- 241000713800 Feline immunodeficiency virus Species 0.000 claims description 6
- 241000711475 Feline infectious peritonitis virus Species 0.000 claims description 6
- 241000282324 Felis Species 0.000 claims description 6
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 claims description 6
- 241000680578 Canid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 5
- 241000711506 Canine coronavirus Species 0.000 claims description 5
- 241000701047 Gallid alphaherpesvirus 2 Species 0.000 claims description 5
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 5
- 206010044302 Tracheitis Diseases 0.000 claims description 5
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 claims description 5
- 241000282465 Canis Species 0.000 claims description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000701063 Gallid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 4
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 claims description 4
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 claims description 4
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims description 4
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 4
- RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 2-(hydroxymethyl)-2-(prop-2-enoxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(CO)(CO)COCC=C RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 241000701083 Bovine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 3
- 241001492322 Bovine alphaherpesvirus 5 Species 0.000 claims description 3
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 claims description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims description 3
- 241000710778 Pestivirus Species 0.000 claims description 3
- QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N Vinyl ether Chemical compound C=COC=C QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940086737 allyl sucrose Drugs 0.000 claims description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960000834 vinyl ether Drugs 0.000 claims description 3
- 241001519465 Avian metapneumovirus Species 0.000 claims description 2
- 241000193449 Clostridium tetani Species 0.000 claims description 2
- 241000701087 Felid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 2
- 241000714165 Feline leukemia virus Species 0.000 claims description 2
- 241000701915 Feline panleukopenia virus Species 0.000 claims description 2
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 claims description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 claims description 2
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 claims 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 claims 1
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 claims 1
- 241001135989 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Species 0.000 claims 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 claims 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 14
- 229960001631 carbomer Drugs 0.000 abstract description 12
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 abstract description 5
- 125000005395 methacrylic acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 29
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 21
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 20
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- 101150039660 HA gene Proteins 0.000 description 14
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 14
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 14
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 13
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 13
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 13
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 13
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 13
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 11
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 11
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 11
- 101150082239 G gene Proteins 0.000 description 9
- 101150118742 NP gene Proteins 0.000 description 9
- 101150029683 gB gene Proteins 0.000 description 9
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 8
- 108700001237 Nucleic Acid-Based Vaccines Proteins 0.000 description 8
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 8
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 7
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 7
- 241000711895 Bovine orthopneumovirus Species 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 244000309466 calf Species 0.000 description 6
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 6
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 5
- 101150034814 F gene Proteins 0.000 description 5
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 5
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 101150036031 gD gene Proteins 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 5
- 101150111062 C gene Proteins 0.000 description 4
- 101150082674 E2 gene Proteins 0.000 description 4
- 101710081079 Minor spike protein H Proteins 0.000 description 4
- 101150080862 NA gene Proteins 0.000 description 4
- 108700006640 OspA Proteins 0.000 description 4
- 241000711902 Pneumovirus Species 0.000 description 4
- 208000005342 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 4
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000768957 Acholeplasma phage L2 Uncharacterized 37.2 kDa protein Proteins 0.000 description 3
- 101000823746 Acidianus ambivalens Uncharacterized 17.7 kDa protein in bps2 3'region Proteins 0.000 description 3
- 101000916369 Acidianus ambivalens Uncharacterized protein in sor 5'region Proteins 0.000 description 3
- 101000769342 Acinetobacter guillouiae Uncharacterized protein in rpoN-murA intergenic region Proteins 0.000 description 3
- 101000823696 Actinobacillus pleuropneumoniae Uncharacterized glycosyltransferase in aroQ 3'region Proteins 0.000 description 3
- 101000786513 Agrobacterium tumefaciens (strain 15955) Uncharacterized protein outside the virF region Proteins 0.000 description 3
- 101000618005 Alkalihalobacillus pseudofirmus (strain ATCC BAA-2126 / JCM 17055 / OF4) Uncharacterized protein BpOF4_00885 Proteins 0.000 description 3
- 102100020724 Ankyrin repeat, SAM and basic leucine zipper domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 3
- 101000967489 Azorhizobium caulinodans (strain ATCC 43989 / DSM 5975 / JCM 20966 / LMG 6465 / NBRC 14845 / NCIMB 13405 / ORS 571) Uncharacterized protein AZC_3924 Proteins 0.000 description 3
- 101000823761 Bacillus licheniformis Uncharacterized 9.4 kDa protein in flaL 3'region Proteins 0.000 description 3
- 101000819719 Bacillus methanolicus Uncharacterized N-acetyltransferase in lysA 3'region Proteins 0.000 description 3
- 101000789586 Bacillus subtilis (strain 168) UPF0702 transmembrane protein YkjA Proteins 0.000 description 3
- 101000792624 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YbxH Proteins 0.000 description 3
- 101000790792 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YckC Proteins 0.000 description 3
- 101000819705 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YlxR Proteins 0.000 description 3
- 101000948218 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YtxJ Proteins 0.000 description 3
- 101000718627 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki Putative RNA polymerase sigma-G factor Proteins 0.000 description 3
- 101000641200 Bombyx mori densovirus Putative non-structural protein Proteins 0.000 description 3
- 101000947633 Claviceps purpurea Uncharacterized 13.8 kDa protein Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 101000948901 Enterobacteria phage T4 Uncharacterized 16.0 kDa protein in segB-ipI intergenic region Proteins 0.000 description 3
- 101000805958 Equine herpesvirus 4 (strain 1942) Virion protein US10 homolog Proteins 0.000 description 3
- 101000790442 Escherichia coli Insertion element IS2 uncharacterized 11.1 kDa protein Proteins 0.000 description 3
- 101000788354 Escherichia phage P2 Uncharacterized 8.2 kDa protein in gpA 5'region Proteins 0.000 description 3
- 101000770304 Frankia alni UPF0460 protein in nifX-nifW intergenic region Proteins 0.000 description 3
- 101000797344 Geobacillus stearothermophilus Putative tRNA (cytidine(34)-2'-O)-methyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 101000748410 Geobacillus stearothermophilus Uncharacterized protein in fumA 3'region Proteins 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 206010069767 H1N1 influenza Diseases 0.000 description 3
- 101000772675 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) UPF0438 protein HI_0847 Proteins 0.000 description 3
- 101000631019 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) Uncharacterized protein HI_0350 Proteins 0.000 description 3
- 101000768938 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Uncharacterized 8.9 kDa protein in int-C1 intergenic region Proteins 0.000 description 3
- 101000785414 Homo sapiens Ankyrin repeat, SAM and basic leucine zipper domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 101000782488 Junonia coenia densovirus (isolate pBRJ/1990) Putative non-structural protein NS2 Proteins 0.000 description 3
- 101000811523 Klebsiella pneumoniae Uncharacterized 55.8 kDa protein in cps region Proteins 0.000 description 3
- 101000818409 Lactococcus lactis subsp. lactis Uncharacterized HTH-type transcriptional regulator in lacX 3'region Proteins 0.000 description 3
- 101000878851 Leptolyngbya boryana Putative Fe(2+) transport protein A Proteins 0.000 description 3
- 208000016604 Lyme disease Diseases 0.000 description 3
- 101000758828 Methanosarcina barkeri (strain Fusaro / DSM 804) Uncharacterized protein Mbar_A1602 Proteins 0.000 description 3
- 101001122401 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus (isolate United Kingdom/H123990006/2012) Non-structural protein ORF3 Proteins 0.000 description 3
- 101001055788 Mycolicibacterium smegmatis (strain ATCC 700084 / mc(2)155) Pentapeptide repeat protein MfpA Proteins 0.000 description 3
- 101000740670 Orgyia pseudotsugata multicapsid polyhedrosis virus Protein C42 Proteins 0.000 description 3
- 208000009620 Orthomyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000769182 Photorhabdus luminescens Uncharacterized protein in pnp 3'region Proteins 0.000 description 3
- 101000961392 Pseudescherichia vulneris Uncharacterized 29.9 kDa protein in crtE 3'region Proteins 0.000 description 3
- 101000731030 Pseudomonas oleovorans Poly(3-hydroxyalkanoate) polymerase 2 Proteins 0.000 description 3
- 101001065485 Pseudomonas putida Probable fatty acid methyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 101000711023 Rhizobium leguminosarum bv. trifolii Uncharacterized protein in tfuA 3'region Proteins 0.000 description 3
- 101000948156 Rhodococcus erythropolis Uncharacterized 47.3 kDa protein in thcA 5'region Proteins 0.000 description 3
- 101000917565 Rhodococcus fascians Uncharacterized 33.6 kDa protein in fasciation locus Proteins 0.000 description 3
- 101000790284 Saimiriine herpesvirus 2 (strain 488) Uncharacterized 9.5 kDa protein in DHFR 3'region Proteins 0.000 description 3
- 101000936719 Streptococcus gordonii Accessory Sec system protein Asp3 Proteins 0.000 description 3
- 101000788499 Streptomyces coelicolor Uncharacterized oxidoreductase in mprA 5'region Proteins 0.000 description 3
- 101001102841 Streptomyces griseus Purine nucleoside phosphorylase ORF3 Proteins 0.000 description 3
- 101000708557 Streptomyces lincolnensis Uncharacterized 17.2 kDa protein in melC2-rnhH intergenic region Proteins 0.000 description 3
- 101000649826 Thermotoga neapolitana Putative anti-sigma factor antagonist TM1081 homolog Proteins 0.000 description 3
- 101150093578 VP2 gene Proteins 0.000 description 3
- 101000827562 Vibrio alginolyticus Uncharacterized protein in proC 3'region Proteins 0.000 description 3
- 101000778915 Vibrio parahaemolyticus serotype O3:K6 (strain RIMD 2210633) Uncharacterized membrane protein VP2115 Proteins 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 3
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 241000710780 Bovine viral diarrhea virus 1 Species 0.000 description 2
- 101150008820 HN gene Proteins 0.000 description 2
- 101000617805 Homo sapiens Staphylococcal nuclease domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000830894 Homo sapiens Targeting protein for Xklp2 Proteins 0.000 description 2
- 101900328733 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Glycoprotein 5 Proteins 0.000 description 2
- 101150010882 S gene Proteins 0.000 description 2
- 101000942603 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) Condensin complex subunit 3 Proteins 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000725681 Swine influenza virus Species 0.000 description 2
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- 101000963191 Xenopus laevis Maternal DNA replication licensing factor mcm3 Proteins 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 101150061458 cav gene Proteins 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 108010058147 pseudorabies virus glycoprotein D Proteins 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 20-hydroxyecdysone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@@](C)(O)[C@H](O)CCC(C)(O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 0.000 description 1
- 101000621943 Acholeplasma phage L2 Probable integrase/recombinase Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 101000618348 Allochromatium vinosum (strain ATCC 17899 / DSM 180 / NBRC 103801 / NCIMB 10441 / D) Uncharacterized protein Alvin_0065 Proteins 0.000 description 1
- XFTWUNOVBCHBJR-UHFFFAOYSA-N Aspergillomarasmine A Chemical compound OC(=O)C(N)CNC(C(O)=O)CNC(C(O)=O)CC(O)=O XFTWUNOVBCHBJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000781117 Autographa californica nuclear polyhedrosis virus Uncharacterized 12.4 kDa protein in CTL-LEF2 intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 101000708323 Azospirillum brasilense Uncharacterized 28.8 kDa protein in nifR3-like 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101000770311 Azotobacter chroococcum mcd 1 Uncharacterized 19.8 kDa protein in nifW 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101000748761 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized MFS-type transporter YcxA Proteins 0.000 description 1
- 101000765620 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YlxP Proteins 0.000 description 1
- 101000916134 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YqxJ Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101000754349 Bordetella pertussis (strain Tohama I / ATCC BAA-589 / NCTC 13251) UPF0065 protein BP0148 Proteins 0.000 description 1
- 241000712005 Bovine respirovirus 3 Species 0.000 description 1
- 206010006811 Bursitis Diseases 0.000 description 1
- 101100379376 Caenorhabditis elegans apx-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000827633 Caldicellulosiruptor sp. (strain Rt8B.4) Uncharacterized 23.9 kDa protein in xynA 3'region Proteins 0.000 description 1
- 108010066310 Canid herpesvirus 1 glycoprotein B Proteins 0.000 description 1
- 108010037810 Canid herpesvirus 1 glycoprotein D Proteins 0.000 description 1
- 101900009576 Canine coronavirus Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 101000947628 Claviceps purpurea Uncharacterized 11.8 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101000686796 Clostridium perfringens Replication protein Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102100036912 Desmin Human genes 0.000 description 1
- 108010044052 Desmin Proteins 0.000 description 1
- 101150029662 E1 gene Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 108010015149 Equid herpesvirus 4 glycoprotein D Proteins 0.000 description 1
- 101000788129 Escherichia coli Uncharacterized protein in sul1 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000788370 Escherichia phage P2 Uncharacterized 12.9 kDa protein in GpA 3'region Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004729 Feline Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 101000787096 Geobacillus stearothermophilus Uncharacterized protein in gldA 3'region Proteins 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 101000976889 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Uncharacterized 19.2 kDa protein in cox-rep intergenic region Proteins 0.000 description 1
- 241000405147 Hermes Species 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 241000702626 Infectious bursal disease virus Species 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 101000827627 Klebsiella pneumoniae Putative low molecular weight protein-tyrosine-phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 201000008197 Laryngitis Diseases 0.000 description 1
- 108010031571 Marek's disease virus glycoprotein B Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 101001130841 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus (isolate United Kingdom/H123990006/2012) Non-structural protein ORF5 Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000010359 Newcastle Disease Diseases 0.000 description 1
- 101710087110 ORF6 protein Proteins 0.000 description 1
- 241000702619 Porcine parvovirus Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 101000974028 Rhizobium leguminosarum bv. viciae (strain 3841) Putative cystathionine beta-lyase Proteins 0.000 description 1
- 101000756519 Rhodobacter capsulatus (strain ATCC BAA-309 / NBRC 16581 / SB1003) Uncharacterized protein RCAP_rcc00048 Proteins 0.000 description 1
- 101000948219 Rhodococcus erythropolis Uncharacterized 11.5 kDa protein in thcD 3'region Proteins 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 101150027674 S1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100021996 Staphylococcal nuclease domain-containing protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 101000936711 Streptococcus gordonii Accessory secretory protein Asp4 Proteins 0.000 description 1
- 101000929863 Streptomyces cinnamonensis Monensin polyketide synthase putative ketoacyl reductase Proteins 0.000 description 1
- 101000788468 Streptomyces coelicolor Uncharacterized protein in mprR 3'region Proteins 0.000 description 1
- 101000845085 Streptomyces violaceoruber Granaticin polyketide synthase putative ketoacyl reductase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- 208000003217 Tetany Diseases 0.000 description 1
- 101000711771 Thiocystis violacea Uncharacterized 76.5 kDa protein in phbC 3'region Proteins 0.000 description 1
- 235000008322 Trichosanthes cucumerina Nutrition 0.000 description 1
- 244000078912 Trichosanthes cucumerina Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 101710095001 Uncharacterized protein in nifU 5'region Proteins 0.000 description 1
- 101000711318 Vibrio alginolyticus Uncharacterized 11.6 kDa protein in scrR 3'region Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 201000006465 actinobacillosis Diseases 0.000 description 1
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 210000004381 amniotic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 210000005045 desmin Anatomy 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- -1 e.g. Chemical group 0.000 description 1
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 229940052303 ethers for general anesthesia Drugs 0.000 description 1
- 208000005098 feline infectious peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150098622 gag gene Proteins 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001492 haemagglutinating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229940022007 naked DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000037368 penetrate the skin Effects 0.000 description 1
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 108700004029 pol Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150088264 pol gene Proteins 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 108700010945 porcine parvovirus VP2 Proteins 0.000 description 1
- 101150059999 pro gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000004994 reproductive system Anatomy 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
1. Szczepionka DNA, znamienna tym, ze obejmuje (i) nagi plazmidowy DNA obejmujacy i wyra- zajacy in vivo polinukleotyd kodujacy antygenowy peptyd, korzystnie gen czynnika patogennego; oraz (ii) przynajmniej jeden adiuwant wybrany z grupy obejmujacej polimery kwasu akrylowego albo metakry- lowego oraz kopolimery bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych. 9. Zastosowanie zwiazku wybranego z grupy obejmujacej polimery kwasu akrylowego albo me- takrylowego i kopolimery bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylowej, jak okreslone w zastrz. 1, jako adiuwanta w szczepionce DNA zawierajacej i wyrazajacej in vivo heterologiczna sekwencje nukle- otydowa. 10. Szczepionka DNA, znamienna tym, ze obejmuje (i) nagi plazmidowy DNA obejmujacy i wyra- zajacy in vivo polinukleotyd kodujacy antygenowy polipeptyd, który obejmuje antygen wirusa konskiego zapalenia nosa i pluc, wirusa konskiej grypy, choroby Aujeszky'ego, zakaznego zapalenia nozdrzy i tchawicy u bydla (IBR), herpes wirusa bydla lub choroby Carre, i (ii) przynajmniej jeden adiuwant obej- mujacy karbopol. PL PL PL
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku są szczepionki DNA i zastosowanie polimerów kwasu akrylowego albo metakrylowego oraz kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylowej oraz zastosowanie karbopolu.
Szczepionki DNA zwane są również szczepionkami plazmidowymi albo polinukleotydowymi, które obejmują i wyrażają in vivo jeden albo wiele genów heterologicznych. W takich ulepszonych szczepionkach, stosowane są określone adiuwanty odpowiednie do zastosowania w takich szczepionkach.
W zgłoszeniach patentowych WO-A-90 11092, WO-A-93 19183, WO-A-94 21797, WO-A-95 11307 i WO-A-95 20660 opisano wykorzystanie ostatnio opracowanej techniki szczepionek polinukleotydowych. Wiadomo, że w szczepionkach tych stosuje się plazmid zdolny do wyrażania w komórkach gospodarza genu wprowadzonego do plazmidu, który koduje immunogen. Zaproponowano wszystkie drogi podawania tj. dootrzewnową, dożylną, domięśniową, przezskórną, śródskórną, śluzówkową itp. Można zastosować również różne sposoby szczepienia, np. używając DNA, który został osadzony na powierzchni cząstek złota, wystrzelonych w taki sposób, że przenikają do komórek skóry zwierzęcia (Tang i in., Nature 365, 152-154, 1992) oraz wtryskiwaczy do wstrzyknięć, które umożliwiają transfekowanie do skóry, mięśni, tkanki tłuszczowej i tkanek sutka (Furth i in., Analytical Biochemistry, 205, 365-368, 1992).
Takie szczepionki polinukleotydowe można stosować w postaci nagiego DNA albo w postaci kompleksu z liposomami albo lipidami kationowymi.
Celem wynalazku jest zwiększenie skuteczności szczepionek DNA przez dostarczenie nowych formulacji szczepionek, które są proste i łatwe do wytworzenia.
Celem wynalazku jest również dostarczenie szczepionek w postaci roztworów, które nie powodują silnego oddziaływania pomiędzy DNA i innymi składnikami i które są zdolne do inicjacji tworzenia kompleksu.
Celem wynalazku jest również dostarczenie takich roztworów, które umożliwiają, przez proste zmieszanie, wytworzenie stabilnych szczepionek, formułowanych w postaci ciekłej albo w postaci umożliwiającej łatwe przygotowanie szczepionki w formie ciekłej przez zmieszanie bezpośrednio przed zastosowaniem.
Zgłaszający stwierdził nieoczekiwanie, że związki z klasy karbomerów spełniają te różne cele i są w szczególności zdolne do działania jako adiuwanty dla szczepionek z nagiego DNA w sposób prosty, ale w bardzo korzystnych proporcjach.
Szczepionka DNA według wynalazku obejmuje (i) nagi plazmidowy DNA obejmujący i wyrażający in vivo polinukleotyd kodujący antygenowy peptyd, korzystnie gen czynnika patogennego, oraz (ii) przynajmniej jeden adiuwant wybrany z grupy obejmującej polimery kwasu akrylowego albo metakrylowego oraz kopolimery bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych.
Korzystnie szczepionka według wynalazku jako adiuwant zawiera polimer kwasu akrylowego albo metakrylowego usieciowany eterem polialkenylowym cukru albo polialkoholu, korzystniej usieciowany allilo-sacharozą albo allilo-pentaerytritolem.
W korzystnym wykonaniu wynalazku szczepionka obejmuje jako adiuwant kopolimer bezwodnika maleinowego i etylenu, usieciowany, przykładowo, eterem diwinylowym.
W korzystnym wykonaniu wynalazku szczepionka według wynalazku zawiera związek będący adiuwantem w ilości 0,01% do 2% wag./obj., korzystniej w ilości 0,06% do 1% wag./obj., jeszcze korzystniej 0,1% do 0,6% wag./obj.
Korzystnie szczepionka według wynalazku obejmuje nagi plazmidowy DNA zawierający i wyrażający sekwencję patogenu świni, konia, psa, bydła, kota albo ptaków, korzystniej obejmuje przynajmniej jedną sekwencję patogenu wybranego z następującej grupy: wirus choroby Aujeszky'ego, wirus grypy świń, wirus zespołu oddechowo-rozrodczego świń, wirus parwowirozy świń, wirus cholery świń, Actinobacillus pleuropneumoniae, wirus zapalenia nosa i płuc koni, wirus grypy koni, Clostridium tetani, wschodni wirus zapalenia mózgu, zachodni wirus zapalenia mózgu, wenezuelski wirus zapalenia mózgu, B. burgdorferi, wirus psiej zarazy, psi parwowirus, psi koronawirus, psi wirus herpes, wirus wścieklizny, wirus herpes typu 1 albo 5 bydła, bydlęcy wirus oddechowy, bydlęcy pestiwirus, bydlęcy wirus paragrypy typu 3, wirus białaczki kotów, wirus panleukopenii kotów, wirus zakaźnego zapalenia otrzewnej kotów, koci wirus herpes, koci wirus kalciwirozy, koci wirus niedoboru odporności, wirus choroby Marek'a, wirus choroby Newcastle, wirus choroby Gumboro, wirus zakaźnego zapalenia
PL 194 348 B1 oskrzeli ptaków, wirus zakaźnej anemii ptaków, wirus zakaźnego zapalenia krtani i tchawicy, wirus leukozy ptaków, ptasi pneumowirus, wirus ptasiej grypy.
W zakres wynalazku wchodzi również zastosowanie związku wybranego z grupy obejmującej polimery kwasu akrylowego albo metakrylowego i kopolimery bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylowej, jako adiuwanta w szczepionce DNA zawierającej i wyrażającej in vivo heterologiczną sekwencję nukleotydową.
Wynalazek dotyczy też szczepionki DNA, która obejmuje (i) nagi plazmidowy DNA obejmujący i wyrażający in vivo polinukleotyd kodujący antygenowy polipeptyd, który obejmuje antygen wirusa końskiego zapalenia nosa i płuc, wirusa końskiej grypy, choroby Aujeszky'ego, zakaźnego zapalenia nozdrzy i tchawicy u bydła (IBR), wirusa herpes bydła lub choroby Carre, i (ii) przynajmniej jeden adiuwant obejmujący karbopol, korzystnie adiuwant w ilości 0,01% do 2% wag./obj, korzystniej adiuwant w stężeniu 0,06% do 1% wag./obj.
W korzystnym wykonaniu szczepionki według wynalazku nagi plazmidowy DNA jest w formie kolistej, przy czym plazmid dodatkowo obejmuje miejsce inicjacji replikacji, promotor i sekwencję terminującą transkrypcję.
Wynalazek również obejmuje zastosowanie karbopolu jako adiuwanta w szczepionce, którą jest plazmidowy DNA zawierający i wyrażający in vivo polinukleotyd kodujący antygenowy peptyd, który obejmuje antygen wirusa końskiego zapalenia nosa i płuc, wirusa końskiej grypy, choroby Aujeszky'ego, zakaźnego zapalenia nozdrzy i tchawicy u bydła (IBR), bydlęcego wirusa herpes lub choroby Carre (CDV). Korzystnie karbopol występuje w szczepionce w ilości od 0,01% do 2% wag./obj, korzystniej w stężeniu od 0,06% do 1% wag./obj.
Szczepionka DNA może obejmować nagi DNA, w szczególności kolisty plazmid, superskręcony albo inny, albo liniową cząsteczkę DNA, zawierającą i wyrażającą in vivo sekwencję nukleotydową kodującą polipeptyd antygenowy, korzystnie gen czynnika patogennego.
W znaczeniu tu zastosowanym nagi DNA oznacza, jak to jest obecnie powszechnie przyjęte, jednostkę transkrypcyjną DNA w postaci sekwencji polinukleotydowej obejmującej przynajmniej jedną sekwencję nukleotydową kodującą polipeptyd antygenowy albo antygen o pojedynczej wartościowości oraz elementy konieczne do jego ekspresji in vivo. Korzystne są postacie kołowe plazmidu, superskręcone i inne.
Jako wartościowość określa się przynajmniej jeden antygen dostarczający ochrony przed patogenem, przy czym wartościowość może zawierać, jako podwartościowość, jeden albo wiele genów naturalnych albo modyfikowanych, jednego albo wielu szczepów danego patogenu.
Korzystnymi związkami będącymi adiuwantami są polimery kwasu akrylowego i metakrylowego, które są usieciowane, zwłaszcza eterami polialkenylowymi cukrów oraz polialkoholi. Związki te znane są pod nazwą karbomerów (Pharmeuropa tom 8, nr 2, Czerwiec 1996). Specjaliści w dziedzinie mogą się również odnieść do US-A-2 909 462 (włączony tu jako odnośnik), który opisuje takie polimery akrylowe sieciowane związkiem polihydroksylowanym zawierającym przynajmniej 3 grupy hydroksylowe, korzystnie nie więcej niż 8, przy czym atomy wodoru przynajmniej trzech grup hydroksylowych są zastąpione przez nienasycone rodniki alifatyczne o przynajmniej 2 atomach węgla. Korzystne rodniki zawierają od 2 do 4 atomów węgla, np. grup winylowych, allilowych i innych nienasyconych etylenowych. Rodniki nienasycone same mogą zawierać inne podstawniki, takie jak metyl. Produkty sprzedawane pod nazwą Carbopol® (BF Goodrich, Ohio, USA) są szczególnie odpowiednie. Są one usieciowane allilo-sacharozą albo allilo-pentaerytritolem. Można tu wymienić Carbopol® 974P, 934P i 971P.
Wśród kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych, korzystne są kopolimery EMA® (Monsanto), które są kopolimerami bezwodnika maleinowego i etylenu, liniowe albo usieciowane, przykładowo usieciowane eterem diwinylowym. W tej kwestii można się odnieść do publikacji Fields i in., Nature 186:778-780, 1960, włączonej tu jako referencje.
Z punktu widzenia budowy, polimery kwasu akrylowego albo metakrylowego oraz kopolimery ®
EMA® są korzystnie utworzone z jednostek podstawowych o następującym wzorze:
R, R,
----ę-(CH,),— ę—(CHj,---COOH COOH
PL 194 348 B1 w którym:
R1 i R2, które są identyczne albo różne, oznaczają H albo CH3; x =0 albo 1, korzystnie x =1; y =1 albo 2, przy czym x+ y=2;
Dla kopolimerów EMA®, x =0,y= 2. Dla karbomerów x =y= 1.
Rozpuszczenie tych polimerów w wodzie daje roztwór kwaśny, który należy zneutralizować, korzystnie do pH fizjologicznego, w celu otrzymania roztworu adiuwanta, do którego włączona będzie szczepionka. Grupy karboksylowe polimeru są wtedy częściowo w postaci COO-.
Korzystnie, roztwór adiuwanta stosowanego w rozwiązaniach według wynalazku, zwłaszcza karbomeru, wytwarza się w wodzie destylowanej, korzystnie w obecności chlorku sodu, przy czym otrzymany roztwór ma pH kwasowe. Roztwór wyjściowy rozcieńcza się przez dodanie go do pożądanej ilości (w celu otrzymania pożądanego stężenia końcowego), albo istotnej części tej ilości, wody albo roztworu fizjologicznego NaCl (NaCl 9 g/l) w całości albo partiami z równoczesną albo późniejszą neutralizacją (pH 7,3 do 7,4), korzystnie przy użyciu NaOH. Roztwór ten o fizjologicznym pH stosuje się do mieszania ze szczepionką, którą można przechowywać w postaci liofilizowanej, ciekłej albo zamrożonej.
Stężenie polimeru w końcowej kompozycji szczepionki wynosi 0,01% do 2% wag./obj., w szczególności 0,06% do 1% wag./obj., korzystnie od 0,1% do 0,6% wag./obj.
Szczepionka według wynalazku do szczepienia świń, w szczególności do szczepienia przeciwko chorobie Aujeszky'ego (PRV albo wirus pseudowścieklizny), wirusa świńskiej grypy (SIV), świńskiego wirusa układu rozrodczego i oddechowego (wirus PRRS), wirusa świńskiej parwowirozy (wirus PPV), wirusa świńskiej cholery (wirus HCV) i bakterii odpowiedzialnych za aktinobacillozę (A. pleuropneumoniae). Plazmidy stosowane w szczepionkach według wynalazku obejmują, dla każdej wartościowości, jeden albo wiele genów kodujących główne immunogeny uwzględnianych czynników patogennych. Można wymienić w szczególności geny gB i gD wirusa choroby Aujeszky'ego, geny HA, NP i N wirusa świńskiej grypy, ORF5 (E), ORF3 i ORF6 (M) wirusa PRRS, VP2 wirusa parwowirozy, E2, E1 + E2, E1 + E2 + C wirusa cholery świń i apxl, apxII i apxIII dla A. pleuropneumoniae. Korzystnie można powołać formulacje szczepionek polinukleotydowych opisane w zgłoszeniu patentowym WO-A-98 03 658 (FR-A-2,751,224), przeciwko chorobie układu rozrodczego i oddechowego świń. W zgłoszeniu tym opisano w szczególności wiele plazmidów, które można bezpośrednio zastosować jako przykłady w kontekście niniejszego wynalazku w kombinacji z adiuwantem stosowanym w wynalazku. Specjaliści w tej dziedzinie mogą wykorzystać i połączyć z adiuwantem stosowanym w rozwiązaniach według wynalazku, plazmidy opisane szczegółowo w uprzednich zgłoszeniach, konkretnie pAB090 zawierający gen gB wirusa PRV, pAB098 zawierający gen gD wirusa PRV, pPB143 zawierający gen HA świńskiej grypy, szczepu H1N1, pPB142 zawierający gen NP świńskiej grypy, szczepu H1N1, pPB144 zawierający gen HA wirusa świńskiej grypy, szczepu H3N2, pPB132 zawierający gen NP świńskiej grypy, szczepu H3N2, pAB025 zawierający ORF5 wirusa PRRS, szczepu Lelystad, pAB001 zawierający ORF5 wirusa PRRS, szczepu USA, pAB091 zawierający ORF3 wirusa PRRS, szczepu Lelystad, pAB092 zawierający ORF3 wirusa PRRS, szczepu USA, pAB004 zawierający gen VP2 świńskiego parwowirusa, pAB069 zawierający gen E1 wirusa świńskiej cholery (HCV), pAB061 zawierający gen E2 wirusa świńskiej cholery (HCV), pAB162 zawierający delecyjny gen apxl A. pleuropneumoniae, pPB163 zawierający delecyjny gen apxII A. pleuropneumoniae, pPB174', pPB189 i pPB190 zawierające delecyjny gen apxIII A. pleuropneumoniae.
W przypadku szczepienia koni należy w szczególności wymienić szczepienie przeciwko końskiemu wirusowi zapalenia płuc i nosa (EHV), szczególnie typu 1 (EHV-1) i typu 4 (EHV-4), przeciwko końskiemu wirusowi grypy EIV, przeciwko tężcowi (Cl. tetani), przeciwko wschodniemu zapaleniu mózgu (EEV), zachodniemu zapaleniu mózgu (WEV) i wenezuelskiemu zapaleniu mózgu (VEV), jak również przeciwko wirusowi z Lyme (B. Burgdorferi), końskiemu zapaleniu stawów (EAV) i wściekliźnie. Wśród genów kodujących główne immunogeny, które można zastosować w szczepionkach według wynalazku, można wymienić geny gB i gD końskiego wirusa zapalenia płuc i nosa, zwłaszcza typów 1 i 4, geny HA, NA i NP wirusa grypy końskiej, podjednostkę C, ewentualnie modyfikowaną przez mutację albo delecję, dla wartościowości tężca, geny C i E2 zapalenia mózgu i opon mózgowych, geny OspA, OspB i p100 choroby z Lyme, geny E, M i N końskiego zapalenia stawów, oraz gen G wścieklizny. Takie szczepionki polinukleotydowe opisano w szczególności w zgłoszeniach patentowych WO-A-98 03 198 (FR-A-2,761,226). W zgłoszeniu tym opisano szereg plazmidów, które można bezpośrednio zastosować w szczególności według niniejszego wynalazku, w kombinacji z adiuwanPL 194 348 B1 tami odpowiednimi dla szczepionek według wynalazku. Specjaliści w tej dziedzinie mogą wykorzystać i połączyć z adiuwantem stosowanym w rozwiązaniach według wynalazku plazmid jak to szczegółowo opisano w tym zgłoszeniu, konkretnie, pAB042, zawierający gen gB wirusa EHV-1; pAB031, zawierający gen gB wirusa EHV-4; pAB013, zawierający gen gD wirusa EHV-1; pAB032, zawierający gen gD wirusa EHV-4; pAB043, zawierający gen HA końskiego wirusa grypy, szczep Prague; pAB033 zawierający gen końskiego wirusa grypy, szczep Suffolk; pAB099 zawierający gen HA końskiej grypy, szczep Fontainebleau; pAB085 zawierający gen NP końskiej grypy, szczep Prague; npAB084 obejmujący gen NP końskiej grypy; szczepu Jillin, pAB070 zawierający gen podjednostki C toksyny tężca; pAB017 zawierający gen OspA Borrelia burgdorferi; pAB094 zawierający gen E2 wirusa wschodniego zapalenia mózgu; pAB096 zawierający gen E2 wirusa zachodniego zapalenia mózgu; pAB095 zawierający gen C wirusa zachodniego zapalenia mózgu; pAB098 zawierający gen E2 wirusa wenezuelskiego zapalenia mózgu; pAB097 zawierający gen C wirusa wenezuelskiego zapalenia mózgu oraz pAB041 kodujący gen G wirusa wścieklizny.
Szczepionkę według wynalazku można stosować do szczepienia psów w szczególności do szczepienia przeciwko wirusowi pomoru psów (choroba Carre) (CDV), psiej parwowirozie (CPV), psiemu koronawirusowi (CCV), psiemu wirusowi herpes (CHV), chorobie z Lyme i wściekliźnie. Wśród genów kodujących główne immunogeny, które można zastosować w kontekście niniejszego wynalazku, można wymienić w szczególności geny HA, F, M i N wirusa zarazy psiej, gen VP2 psiego parwowirusa, geny S i M psiego koronawirusa (CCV), geny gB i gD wirusa CHV, OspA i OspB i p100 B. burgdorferi (choroba z Lyme) oraz gen G wścieklizny. Takie formulacje szczepionek polinukleotydowych są opisane w szczególności w zgłoszeniu patentowym WO-A-98 03 199 (FR-A-2,751,227). Specjaliści w dziedzinie mogą wykorzystać plazmidy opisane w tym zgłoszeniu, w kombinacji z adiuwantami jak w szczepionce według wynalazku. Konkretnymi plazmidami opisanymi w tym zgłoszeniu są pAB044 zawierający gen HA CDV; pAB036 zawierający gen F CDV; pAB024 zawierający gen VP2 psiego parwowirusa; pAB021 zawierający gen S CCV; pAB022 zawierający gen gB CHV, pAB038 zawierający gen gD CHV, pAB017 zawierający gen OspA B. burgdorferi i pAB041 zawierający gen G wirusa wścieklizny.
Szczepionkę według wynalazku można zastosować do szczepienia bydła w szczególności do szczepienia przeciwko bydlęcemu wirusowi herpes typu 1 albo 5 (BHV-1 i BHV-5, odpowiedzialnych za nerwową postać choroby), bydlęcemu oddechowemu wirusowi syncytialnemu (BRSV), wirusowi choroby śluzówek albo bydlęcemu pestiwirusowi (BVD), bydlęcemu wirusowi paragrypy typu 3 (BPI-3). Wśród genów kodujących główne immunogeny umożliwiające szczepienie przeciwko tym wirusom, można wymienić w szczególności geny gB i gD bydlęcego wirusa herpes, F i G bydlęcego oddechowego wirusa syncytialnego, E2, C + E1+ E2 i E1+ E2 wirusa choroby śluzówek, HN i F dla bydlęcego wirusa paragrypy typu 3. Takie formulacje szczepionek opisano w szczególności w zgłoszeniu patentowym WO-A-98 03 200 (Fr-A-2,751,229), włączonym tu jako odnośnik. Specjaliści w dziedzinie mogą zastosować plazmidy opisane w tym zgłoszeniu, w połączeniu z adiuwantami odpowiednimi dla szczepionek według wynalazku. W szczególności, mogą połączyć z adiuwantami, plazmidy opisane konkretnie w tym zgłoszeniu, a mianowicie pPB156 zawierającym gen gB BHV-1, pAB087 zawierającym gen gD BHV-1, pAB011 zawierającym gen F BRSV, pAB012 zawierającym gen G BRSV; pAB058 zawierającym gen G BRSV; pAB058 zawierającym gen C BVD; pAB059 zawierającym gen E1 BVD, pAB060 zawierającym gen E2 BVD, pAB071 zawierającym gen HN BPI-3, pAB072 zawierającym gen F BPI-3.
Szczepionki według wynalazku można zastosować do szczepienia kotów w szczególności do szczepienia przeciwko wirusowi kociej białaczki FeLV, w szczególności podtypów A i B, wirusowi kociej panleukemii (FPV), kociego zakaźnego zapalenia otrzewnej (FIPV), wirusowi koryzy albo wirus hermes (FHV), wirusowi kociej kalciwirozy (FCV), kociemu wirusowi niedoboru odporności (FIV) oraz wirusowi wścieklizny (rabdowirus). Wśród genów kodujących główne immunogeny umożliwiające szczepienie przeciwko patogenom, można wspomnieć w szczególności geny env i gag/pol kociej białaczki, VP2 panleukopenii, M i modyfikowane S (FR-A-2,724,385) dla zakaźnego zapalenia otrzewnej, gB i gD dla koryzy, kapsydu dla kalciwirozy, env i gag/pro dla kociego niedoboru odporności i G dla wścieklizny. Szczepionka polinukleotydowa jest opisana w zgłoszeniu patentowym WO-A-98 03 660 (FR-A-2,751,223). Specjaliści w tej dziedzinie mogą wykorzystać i połączyć z adiuwantem stosowanym w rozwiązaniach według wynalazku plazmidy opisane w tym zgłoszeniu. W szczególności, można połączyć adiuwanty z plazmidami opisanymi w tym zgłoszeniu, konkretnie pPB179 zawierającym gen env wirusa FeLV-A, pPB180 zawierającym gen env FeLV-B, pPB181 zawierającym gen gag/pol FeLV-A,
PL 194 348 B1 pAB009 zawierającym gen VP2 FPV, pAB053 zawierającym modyfikowany gen S (FR-A-2 724 385) wirusa FIPV, pAB052 zawierającym gen M FIPV, pAB056 zawierającym gen N FIPV, pAB028 zawierającym gen gB FHV, pAB029 zawierającym gen gD FHV, pAB010 zawierającym gen C FCV, pAB030 zawierającym gen env FIV, pAB083 zawierającym gen gag/pro FIV i pAB041 zawierającym gen G wirusa wścieklizny.
Szczepionki według wynalazku można zastosować do szczepienia gatunków ptasich w szczególności w szczepieniu przeciwko wirusowi choroby Marek'a (MDV), wirusowi choroby Newcastle (NDV), wirusowi choroby Gumboro (IBDV albo wirus zakaźnej choroby kaletek), wirusowi zakaźnego zapalenia oskrzeli (IBV), wirusowi zakaźnej anemii (CAV), wirusowi zakaźnego zapalenia krtani i oskrzeli (ILTV), wirusowi zapalenia mózgu (AEV albo ptasi wirus leukozy ALV), wirusowi pneumowirozy albo pneumowirusowi oraz wirusowi ptasiej grypy. Wśród genów kodujących główne immunogeny, które można zastosować w niniejszym wynalazku, można wspomnieć w szczególności geny gB i gD wirusa choroby Marek'a, HN i F wirusa choroby Newcastle, VP2 wirusa choroby Gumboro,S, M i N wirusa zakaźnego zapalenia oskrzeli, C + NS1 wirusa zakaźnej anemii, gB i gD wirusa zakaźnego zapalenia krtani i oskrzeli, envi gag/pro wirusa zapalenia mózgu, F i G wirusa pneumowirozy oraz HA, N i NP ptasiej grypy. Takie szczepionki polinukleotydowe są opisane w zgłoszeniu patentowym WO-A-98 03 659 (FR-A-2,751,225). Specjaliści w dziedzinie mogą wykorzystać plazmidy opisane w tym zgłoszeniu i połączyć z adiuwantem stosowanym w rozwiązaniach według wynalazku. W szczególności, specjaliści w dziedzinie mogą połączyć z adiuwantami, plazmidy opisane konkretnie w tym zgłoszeniu, konkretnie pAB045 zawierający gen gB MDV, pAB080 zawierający gen gD MDV, pAB046 zawierający gen HN NDV, pAB047 zawierający gen F NDV, pAB048 zawierający gen S1 IBV, pAB080 zawierający gen M IBV, pAB081 zawierający gen N IBV, pAB054 zawierający gen VP1 CAV, pAB055 zawierający gen VP2 CAV, pAB076 zawierający gen gB ILTV, pAB089 zawierający gen env AEV, pAB081 zawierający gen gag/pro AEV, pAB082 zawierający gen G pneumowirusa, pAB077 zawierający gen HA grypy ptasiej, szczep H2N2, pAB078 zawierający gen HA grypy ptasiej, szczep H7N7, pAB088 zawierający gen NP grypy ptasiej, szczep H1N1, pAB079 zawierający gen N grypy ptasiej, szczep H7N1.
Każdy nagi, w szczególności plazmidowy, DNA obejmuje promotor zdolny do przeprowadzenia w komórce gospodarza, ekspresji wprowadzonego genu pod jego kontrolą. Ogólnie, będą to silne promotory eukariotyczne, zaś w szczególności wczesny promotor wirusa cytomegalii CMV-IE, pochodzenia ludzkiego albo mysiego, albo innego pochodzenia, jak ze szczura, świni albo świnki morskiej. W bardziej ogólny sposób, promotor może być pochodzenia wirusowego albo komórkowego. Jako promotory wirusowe inne niż CMV-IE można wspomnieć promotor wczesny albo późny wirusa SV40, albo promotor LTR wirusa mięsaka Rous'a. Może to być również promotor pochodzący z wirusa, z którego pochodzi gen, przykładowo aktualny promotor genu. Jako promotory komórkowe, można wymienić promotor genu cytoszkieletu, jak np. promotor desminy (Bolmont i in., J. Submicros. Cyt. Patol., 1990, 22:117-122); i Zhenlin i in., Gene 1989, 78:243-254), albo promotor aktyny. Gdy w nagim DNA, w szczególności plazmidowym, występuje kilka promotorów, mogą one występować w tej samej jednostce transkrypcyjnej albo w różnych jednostkach.
Oczywiście, szczepionka może obejmować dla każdej z wartościowości opisanych wyżej, kilka genów w tym samym nagim, w szczególności plazmidowym DNA i/lub kilka nagich, w szczególności plazmidowych DNA może zawierać jeden albo wiele genów tego samego wirusa.
Możliwe są również rekombinowane szczepionki multiwalentne, tzn. zawierające jeden albo korzystnie dwa albo kilka nagich, w szczególności plazmidowych DNA wyrażających antygeny dla dwóch albo więcej chorób, w postaci mieszaniny w roztworze adiuwanta opisanym w wynalazku.
W szczepionkach gotowych do użycia, nagi DNA, w szczególności plazmidowy, występuje w ilościach normalnie stosowanych i opisanych w literaturze.
Szczepionki według wynalazku mogą być podawane drogą pozajelitową, korzystnie domięśniową, śródskórną albo drogą śluzówkową w jednej albo wielu dawkach.
Wynalazek zostanie poniżej bardziej szczegółowo opisany przy pomocy nieograniczających przykładowych wykonań, które odnoszą się do następujących Figur.
Fig. 1: Sekwencja genu hemaglutyniny (HA) końskiego wirusa grypy szczepu Newmarket 2/93.
Fig. 2: Sekwencja genu hemaglutyniny (HA) końskiego wirusa grypy szczepu Kentucky 1/94.
Fig. 3: Sekwencja genu neuraminidazy (NA) końskiego wirusa grypy szczepu Newmarket 2/93.
Fig. 4: Sekwencja genu neuraminidazy (NA) końskiego wirusa grypy szczepu Kentucky 1/94.
Fig. 5: Sekwencja genu nukleoproteiny (NP) końskiego wirusa grypy szczepu Newmarket 2/93.
Fig. 6: Sekwencja genu nukleoproteiny (NP) końskiego wirusa grypy szczepu Kentucky 1/94.
PL 194 348 B1
Lista sekwencji:
Id. Sekw. nr 1: Oligonukleotyd CCL007
Id. Sekw. nr 2: Oligonukleotyd CCL018
Id. Sekw. nr 3: Sekwencja genu HA, EIV szczepu Newmarket 2/93
Id. Sekw. nr 4: Oligonukleotyd CCL020
Id. Sekw. nr 5: Sekwencja genu HA, EIV szczepu Kentucky 1/94
Id. Sekw. nr 6: Oligonukleotyd AB260
Id. Sekw. nr 7: Oligonukleotyd AB262
Id. Sekw. nr 8: Sekwencja genu NA, EIV szczepu Newmarket 2/93
Id. Sekw. nr 9: Sekwencja genu NA, EIV szczepu Kentucky 1/94
Id. Sekw. nr 10: Oligonukleotyd CCL019
Id. Sekw. nr 11: Oligonukleotyd CCL021
Id. Sekw. nr 12: Sekwencja genu NP, EIV szczepu Newmarket 2/93
Id. Sekw. nr 13: Sekwencja genu NP, EIV szczepu Kentucky 1/94
P r zyk ł a d 1: Adiuwant ®
Karbomerem zastosowanym według wynalazku jest karbopol (Carbopol® 974P) wytwarzany przez BF Goodrich (MW około 3 milionów).
®
Roztwór podstawowy zawierający 1,5% wag./obj. Carbopol® 974P przygotowano w wodzie destylowanej zawierającej chlorek sodu w ilości 1g/l.
®
Roztwór wyjściowy zastosowano do wytworzenia roztworu Carbopol w roztworze fizjologicznym soli 4 mg/ml. Roztwór wyjściowy wlano do roztworu fizjologicznego soli (albo do większości roztworu) w całości albo partiami, ustalono pH przy użyciu NaOH (przykładowo 1 N albo bardziej stężonym) do wartości około 7,2-7,4.
®
Otrzymano w ten sposób gotowy do użycia roztwór Carbopol®.
P r zyk ł a d 2: Hodowla wirusów
Wirusy hodowano na odpowiednim układzie komórkowym do uzyskania efektu cytopatycznego. Układy komórkowe do zastosowania dla każdego wirusa są znane specjalistom. Pokrótce, komórki wrażliwe na zastosowany wirus, hodowane w minimalnej niezbędnej pożywce Eagle'a (pożywka MEM) albo innej odpowiedniej pożywce, zaszczepia się badanym szczepem wirusowym stosując wielokrotność zakażenia równej 1. Zakażone komórki inkubuje się w 37°C przez okres czasu konieczny do wystąpienia całkowitego efektu cytopatycznego (średnio 36 godzin).
P r zyk ł a d 3: Ekstrakcja wirusowych genomowych DNA
Po hodowli, nadsącz i rozłożone komórki zbiera się i całą zawiesinę wirusa wiruje się przy 1000 g przez 10 minut w 4°C w celu usunięcia resztek komórkowych. Cząstki wirusowe zbiera się przez ultrawirowanie przy 400000 g przez godzinę w 4°C. Osad pobiera się w minimalnej objętości buforu (10 mM Tris, 1 mM EDTA). Zatężoną zawiesinę wirusa traktuje się proteinazą K (100 mg/ml) w obecności soli sodowej siarczanu dodecylu (SDS, 0,5%) przez 2 godziny w 37°C. Wirusowy DNA ekstrahuje się mieszaniną fenolu z chloroformem, a następnie precypituje się 2 objętościami absolutnego etanolu. Po nocy w -20°C, DNA wiruje się przy 10000 g przez 15 minut w 4°C. Osad DNA suszy się i pobiera w minimalnej objętości sterylnej, ultraczystej wody. Tak przygotowany preparat można poddać trawieniu enzymami restrykcyjnymi.
P r zyk ł a d 4: Izolowanie wirusowych genomowych RNA
Wirusy RNA oczyszcza się według dobrze znanych specjalistom technik. Genomowe wirusowe RNA izoluje się stosując technikę ekstrakcji z tiocyjanianem guanidyny/mieszaniną fenol/chloroform, opisaną przez Chomczynski i Sacchi (Anal. Biochem., 1987, 162:156-159).
P r zyk ł a d 5: Techniki biologii molekularnej
Wszystkie konstrukcje plazmidowe wytworzono stosując standardowe techniki biologii molekularnej opisane przez Sambrook i in., Molecular Cloning: A Laboroatory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989). Wszystkie fragmenty restrykcyjne zastosowane do niniejszego wynalazku wyizolowano stosując zestaw Geneclean (BIO101 Inc., La Jolla, CA).
P r zyk ł a d 6: Technika RT-PCR.
Swoiste oligonukleotydy (zawierające na końcach 5' miejsca restrykcyjne w celu ułatwienia klonowania amplifikowanych fragmentów) syntetyzowano w sposób pokrywający całkowicie regiony kodujące amplifikowanych genów (patrz, przykłady). Reakcję odwrotnej transkrypcji (RT)i reakcję łańcuchową polimerazy (PCR) przeprowadzono w oparciu o standardowe techniki (Sambrook i in., Molecular Cloning: A Laboroatory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989). Reakcje RT-PCR prze8
PL 194 348 B1 prowadzano z parą swoistych starterów, stosując jako matrycę ekstrahowany wirusowy DNA. Amplifikowany komplementarny DNA ekstrahowano mieszaniną fenol/chloroform/alkohol izoamylowy (25:24:1) po czym trawiono enzymami restrykcyjnymi.
P r z y k ł a d 7: Plazmid pVR1012
Plazmid pVR1012 otrzymano z Vical Inc., San Diego, CA, USA. Jego konstrukcję opisano w Hartikka i in., Hum. Gene Ther., 1996, 7:1205-1217).
P r z y k ł a d 8: Konstruowanie plazmidu pCCL027 (gen HA EIV szczepu Newmarket 2/93) Reakcję RT-PCR według techniki opisanej w przykładzie 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa końskiej grypy (EIV) (szczepu Newmarket 2/93) (Daly i in., J. Gen. Virol., 1996, 77:661-671), według techniki opisanej w przykładzie 4, stosując następujące oligonukleotydy:
CCL007 (40-mer) (Id. Sekw. nr 1)
5' TTGTCGACTCAATCATGAAGACAACCATTATTTTGATACT3'
CCL018 (34-mer) (Id. Sekw. nr 2)
5' TTGGATCCTTACTCAAATGCAAATGTTGCACCTG3'
W celu wyizolowania genu kodującego glikoproteinę HA wirusa końskiej grypy (szczep Newmarket 2/93) (Fig. 1, Id. Sekw. nr 3) w postaci fragmentu PCR, wielkości około 1750 bp. Fragment ten oczyszczono, a następnie poddano ligacji z wektorem pCRII (Nr kat. K2000-01, Invitrogen Corp., Carlsbad, CA) w celu otrzymania plazmidu pCCL026. Plazmid pCCL026 trawiono enzymami restrykcyjnymi SalI i NotI w celu wyizolowania fragmentu 1751 bp zawierającego gen HA EIV Newmarket 3/93. Fragment ten poddano ligacji z plazmidem pVR1012 (patrz, przykład 7), uprzednio trawionym Sall i Notl w celu otrzymania plazmidu pCCL027 (6642 bp).
P r z y k ł a d 9: Konstruowanie plazmidu pPB242 (gen HA EIV szczepu Kentucky 1/94)
Reakcję RT-PCR według techniki opisanej w przykładzie 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa końskiej grypy (EIV) (szczepu Kentucky 1/94) (Daly i in., J. Gen. Virol., 1996, 77:661-671), według techniki opisanej w przykładzie 4, stosując następujące oligonukleotydy:
CCL007 (40-mer) (Id. Sekw. nr 1)
5' TTGTCGACTCAATCATGAAGACAACCATTATTTTGATACT3'
CCL020 (34-mer) (Id. Sekw. nr 4)
5' TTGGATCCTTACTCAAATGCAAATGTTGCATCTG3'
W celu wyizolowania genu kodującego glikoproteinę HA wirusa końskiej grypy (szczep Kentucky 1/94) (Fig. 2, Id. Sekw. nr 5) w postaci fragmentu PCR, wielkości około 1750 bp. Fragment ten oczyszczono, a następnie poddano ligacji z wektorem pCRII (Nr kat. K2000-01, Invitrogen Corp., Carlsbad, CA) w celu otrzymania plazmidu pCCL028. Plazmid pCCL028 trawiono enzymami restrykcyjnymi SacI i BamHI w celu wyizolowania fragmentu 1153 bp (fragment A) zawierającego część 3' genu HA EIV Kentucky 1/94. Plazmid pCCL028 poddano trawieniu SacI i EcoRV w celu wyizolowania fragmentu SacI-EcoRV wielkości 621 bp (Fragment B) zawierającego część 5' genu HA EIV szczepu Kentucky 1/94. Fragmenty A i B połączono ze sobą w plazmidzie pVR1012 (patrz, przykład 7), uprzednio trawionym EcoRV i BamHI w celu otrzymania plazmidu pPB242 (6688 bp).
P r z y k ł a d 10: Konstruowanie plazmidu pAB142 (gen NA EIV Newmarket 2/93)
Reakcję RT-PCR według techniki opisanej w przykładzie 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa końskiej grypy (EIV) (szczepu Newmarket 2/93) (Daly i in., J. Gen. Virol., 1996, 77:661-671), według techniki opisanej w przykładzie 4, stosując następujące oligonukleotydy:
AB260 (35-mer) (Id. Sekw. nr 6)
5' TTTGTCGACATGAAYCCAAATCAAAARATAATAAC3'
AB262 (32-mer) (Id. Sekw. nr 7)
5' TTTGGATCCYTACATCTTRTCGATGTCAAAGG3'
W celu wyizolowania genu kodującego neuraminidazę NA wirusa końskiej grypy (szczep Newmarket 2/93) (Fig. 3, Id. Sekw. nr 8) w postaci fragmentu PCR, wielkości około 1430 bp. Fragment ten oczyszczono, a następnie trawiono enzymami restrykcyjnymi SalI i BamHI w celu wyizolowania fragmentu 1418 bp zawierającego gen NA EIV Newmarket 3/93. Fragment ten poddano ligacji z plazmidem pVR1012 (patrz, przykład 7), uprzednio trawionym Sall i BamHI w celu otrzymania plazmidu pAB142 (6287 bp).
P r z y k ł a d 11: Konstruowanie plazmidu pPB246 (gen NA EIV Kentucky 1/94)
Reakcję RT-PCR według techniki opisanej w przykładzie 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa końskiej grypy (EIV) (szczepu Kentucky 1/94) (Daly i in., J. Gen. Virol., 1996, 77:661-671), według techniki opisanej w przykładzie 4, stosując oligonukleotydy AB260 i AB262 (przykład 10), w celu wyPL 194 348 B1 izolowania genu kodującego neuraminidazę (NA) glikoproteinę wirusa końskiej grypy (szczep Kentucky 1/94) (Fig. 4, Id. Sekw. nr 9) w postaci fragmentu PCR, wielkości około 1430 bp. Fragment ten oczyszczono, a następnie trawiono enzymami restrykcyjnymi Sall i BamHI w celu wyizolowania fragmentu 1418 bp zawierającego gen NA EIV Kentucky 1/94. Fragment ten poddano ligacji z plazmidem pVR1012 (patrz, przykład 7), uprzednio trawionym SalI i BamHI w celu otrzymania plazmidu pAB116 (6287 bp).
Przykład 12: Konstruowanie plazmidu pPB245 (gen NP EIV Newmarket 2/93)
Reakcję RT-PCR według techniki opisanej w przykładzie 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa końskiej grypy (EIV) (szczepu Newmarket 2/93) (Daly i in., J. Gen. Virol., 1996, 77:661-671), według techniki opisanej w przykładzie 4, stosując następujące oligonukleotydy:
CCL019 (25-mer) (Id. Sekw. nr 10)
5' TTGTCGACCATGGCGTCTCAAGGCAC3'
CCL021 (28-mer) (Id. Sekw. nr 11)
5' TTTCTAGACTTTAAYTGTCAWACTCYTC3'
W celu wyizolowania genu kodującego nukleoproteinę (NP) wirusa końskiej grypy (szczep Newmarket 2/93) (Fig. 5, Id. Sekw. nr 12) w postaci fragmentu PCR, wielkości około 1520 bp. Fragment ten oczyszczono, a następnie trawiono enzymami restrykcyjnymi SalIi XbaIw celu wyizolowania fragmentu 1506 bp zawierającego gen NP EIV Newmarket 3/93. Fragment ten poddano ligacji z plazmidem pVR1012 (patrz, przykład 7), uprzednio trawionym SalI XbaI w celu otrzymania plazmidu pPB245 (6389 bp).
Przykład 13: Konstruowanie plazmidu pPB246 (gen NP EIV Kentucky 1/94)
Reakcję RT-PCR według techniki opisanej w przykładzie 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa końskiej grypy (EIV) (szczepu Kentucky 1/94) (Daly i in., J. Gen. Virol., 1996, 77:661-671), według techniki opisanej w przykładzie 4, stosując oligonukleotydy CCL019 i CCL021 (przykład 12), w celu wyizolowania genu kodującego nukleoproteinę (NP) wirusa końskiej grypy (szczep Kentucky 1/94) (Fig. 6, Id. Sekw. nr 13) w postaci fragmentu PCR, wielkości około 1520 bp. Fragment ten oczyszczono, a następnie trawiono enzymami restrykcyjnymi SalIi XbaI w celu wyizolowania fragmentu 1506 bp zawierającego gen NP ELV Kentucky 1/94. Fragment ten poddano ligacji z plazmidem pVR1012 (patrz, przykład 7), uprzednio trawionym Salli Xbal w celu otrzymania plazmidu pPB246 (6389 bp).
Przykład 14: Konstruowanie plazmidu pPB156 (gen gB BHV-1)
Konstrukcję opisano w WO-A-98 03200.
Przykład 15: Konstruowanie plazmidu pAB087 (gen gD BHV-1)
Konstrukcję opisano w WO-A-98 03200.
Przykład 16: Konstruowanie plazmidu pAB090 (gen gB PRV)
Konstrukcję opisano w WO-A-98 03658.
Przykład 17: Konstruowanie plazmidu pPB098 (gen gD PRV)
Konstrukcję opisano w WO-A-98 03658.
Przykład 18: Konstruowanie plazmidu pAB044 (gen HA CDV)
Konstrukcję opisano w WO-A-98 03199.
Przykład 19: Konstruowanie plazmidu pAB036 (gen F CDV)
Konstrukcję opisano w WO-A-98 03199.
Przykład 20: Konstruowanie plazmidu pAB041 (gen G wirusa wścieklizny)
Konstrukcję opisano w WO-A-98 03199.
Przykład 21: Zastosowanie u koni
Badana szczepionka stanowiła mieszaninę 3 plazmidów, pCCL027 (przykład 8), pAB142 (przykład 10) i pPB245 (przykład 12), zawierających i wyrażających, odpowiednio, geny HA, NA i NP wirusa EIV szczepu Newmarket 2/93. Mieszaninę tę połączono z opisanym karbomerem.
Protokół szczepienia/ ekspozycji wyglądał następująco:
| Grupa | Liczba koni | Szczepionka | Rozcieńczalnik | Dawka |
| A | 5 | pCCL027 + pAB142 + pPB245 | roztwór soli | 3x 400 mg |
| B | 5 | pCCL027 + pAB142 + pPB245 | Carbopol® 974P | 3x 400 mg |
| C | 6 | szczepionka dostępna w handlu | --- | 1x dawka zalecana |
| D kontrola | 5 | --- | --- | --- |
PL 194 348 B1
Do badania zastosowano kuce (Welsh Mountain Ponies) w wieku 7-8 miesięcy, nie posiadające wykrywalnych przeciwciał przeciwko wirusom H3N8 i H7N7, mierzone przez SHR (pojedyncza hemoliza radialna). Kuce rozdzielono losowo do 4 grup.
Konie szczepiono w D0 i D35 drogą domięśniową. Szczepionkę dostępną w handlu stosowano u grupy C w objętości 1ml.
Kuce w grupie A i B otrzymywały 2 dawki po 5 ml w D0 i D35 w głębokim wstrzyknięciu domięśniowym w kark.
W D56, trzy tygodnie po drugim szczepieniu, kuce zakażono przez ekspozycję na aerozol otrzymany z około 1 ml płynu owodniowego, zawierającego w sumie 107,3 EID50 wirusa grypy Aequi2/Sussex/89, przy użyciu urządzenia do rozpylania ULTRA 2000 (De Vilbiss, Somerset, PA), jak to opisano w Mumford i in., Equine Vet. J. 1990, 22:93-98.
Po ekspozycji, kuce obserwowano w celu stwierdzenia objawów klinicznych (ustalenie oceny klinicznej) oraz temperatury. Codziennie przeprowadzano wymazy z nosa od dnia 0 po ekspozycji do 10 dnia po ekspozycji, w celu zmierzenia ilości wirusa wydzielanego przez konie.
Na koniec, pobierano próbki krwi, przed i po ekspozycji (dni D0, D7, D14, D35, D49, D56, D63 i D70) w celu zmierzenia kinetyki pojawiania się przeciwciał oraz poziomu przeciwciał SRH i IHA (przeciwciała hemoaglutynujące) dla każdej ze szczepionych grup.
P r zyk ł a d 22: Zastosowanie u świń
Skuteczność szczepionki plazmidowej połączonej z karbomerem badano na świniach w modelu szczepienia/ekspozycji na chorobę Aujeszky'ego. Badana szczepionka stanowiła mieszaninę 2 plazmidów pAB090 (przykład 16) i pPB098 (przykład 17), zawierających i wyrażających, odpowiednio, gen gB i gD wirusa PRV. Mieszaninę połączono z opisanym karbomerem.
Zastosowany protokół szczepienia/ ekspozycji wyglądał następująco:
| Grupa | Liczba świń | Szczepionka | Rozcieńczalnik | Dawka |
| A | 6 | pPB098 + pAB090 | roztwór soli | 2x 200 mg |
| B | 6 | pPB098 + pAB090 | Carbopol® 974P | 2x 200 mg |
| C | 6 | Geskypur | --- | 1x dawka zalecana |
| D kontrola | 6 | --- | --- | --- |
W dniu D0, świnie w grupie A i B szczepiono mieszaniną plazmidów pPB098 i pAB090 (200 m g każdego z plazmidów), w połączeniu z karbomerem we wstrzyknięciu domięśniowym w objętości 2 ml.
Świnie w grupie C otrzymały wstrzyknięcie dostępnej w handlu szczepionki Geskypur (szczepionka podjednostkowa, Merial, Francja) domięśniowo w objętości 2 ml.
Świń w grupie D nie szczepiono.
W D21 wszystkie świnie eksponowano na 2 ml (po 1 ml na nozdrze) zawiesiny wirusa szczepu ekspozycyjnego choroby Aujeszky'ego, NIA3 (rozcieńczenie 1/5 roztworu wyjściowego o mianie 108,25 CCID50/ml).
Po ekspozycji, świnie obserwowano w kierunku śmiertelności i kryterium delta G7 (pojedyncze ważenie w D0 i D7). Codziennie pobierano wymazy z nozdrzy w celu zmierzenia ilości wirusa wydalanego po ekspozycji.
Na koniec, pobierano próbki krwi w D0, D7, D14, D21 i D28 w celu zmierzenia kinetyki poziomu przeciwciał neutralizujących wirusa choroby Aujeszky'ego (PRV). Wykonano również ELISA na przeciwciała przeciwko PRV w celu określenia izotypów IgG1 i IgG2, w surowicy świń szczepionych i nie szczepionych.
P r zyk ł a d 23: Zastosowanie u bydła
Skuteczność szczepionki plazmidowej połączonej z karbomerem badano na modelu szczepienia/ekspozycji na zakaźne zapalenie nozdrzy i tchawicy u bydła (IBR) albo BHV-1. Badaną szczepionkę stanowiła mieszanina 2 plazmidów, pPB156 (przykład 14) i pAB087 (przykład 15), zawierających i wyrażających, odpowiednio, geny gB i gD wirusa BHV-1. Mieszaninę połączono z karbomerem.
PL 194 348 B1
Protokół szczepienia/ ekspozycji wyglądał następująco:
| Grupa | Liczba cieląt | Szczepionka | Rozcieńczalnik | Dawka |
| A | 6 | pAB087 + pPB156 | roztwór soli | 2x 300 mg |
| B | 6 | pAB087 + pPB156 | Carbopol® 974P | 2x 300 mg |
| C | 6 | Ibepur | --- | 1x dawka zalecana |
| D kontrola | 6 | --- | --- | --- |
W D0 cielętom w grupie A i B podawano mieszaninę plazmidów pPAB087 i pPB156 (300 mg każdego z plazmidów), w połączeniu z karbomerem, drogą domięśniową w objętości 5 ml.
Cielęta w grupie C otrzymały wstrzyknięcie dostępnej w handlu szczepionki Ibepur (szczepionka podjednostkowa, Merial, Francja) drogą domięśniową w objętości 2 ml. Cieląt w grupie D nie szczepiono.
W D21, grupy A, B i C otrzymały drugie wstrzyknięcie szczepionki według tego samego schematu co w D0.
W D35, cielęta eksponowano na 2,5 ml (po 1,25 na nozdrze) zawiesiny wirusa ekspozycyjnego BHV-1, szczepu B901 (rozcieńczenie 1/5 roztworu wyjściowego o mianie 108,15 CCID50/ml).
Po ekspozycji, cielęta obserwowano pod kątem objawów klinicznych (ustalenie oceny klinicznej). Codziennie pobierano wymazy z nozdrzy w celu zmierzenia ilości wirusa wydalanego po ekspozycji. Na koniec, pobierano próbki krwi w D0, D7, D14, D21, D35 i D49 w celu zmierzenia kinetyki poziomu przeciwciał neutralizujących wirusa bydlęcego zapalenia nozdrzy i tchawicy (BHV-1). Wykonano również ELISA na przeciwciała przeciwko BHV-1 w celu określenia izotypów IgG1 i IgG2, w surowicy świń szczepionych i nie szczepionych.
P r zyk ł a d 24: Zastosowanie u psów
Skuteczność szczepionki plazmidowej połączonej z karbomerem badano na modelu szczepienia/ekspozycji na chorobę Carre (CDV). Badaną szczepionkę stanowiła mieszanina 2 plazmidów, pAB044 (przykład 18) i pAB036 (przykład 19), zawierających i wyrażających, odpowiednio, geny HA i F wirusa CDV. Mieszaninę połączono z karbomerem.
Protokół szczepienia/ ekspozycji wyglądał następująco:
| Grupa | Liczba psów | Szczepionka | Rozcieńczalnik | Dawka |
| A | 6 | pAB036 + pAB041 | roztwór soli | 2x 200 mg |
| B | 6 | pAB036 + pAB041 | Carbopol® 974P | 2x 200 mg |
| C | 6 | Eurican | --- | 1x dawka zalecana |
| D kontrola | 6 | --- | --- | --- |
Psy w A, B i C szczepiono w dniu D0 i D28 drogą domięśniową. Psy w grupie A i B, do każdego szczepienia wstrzyknięcie roztworu zawierającego 400 mg w sumie (2 x 200 mg) w objętości 1ml.
Psy w grupie C szczepiono szczepionką Eurican (CHPPI2), która jest szczepionką sprzedawaną przez Merial, Francja. Jedna dawka zalecana przez producenta zawiera około 104 pfu szczepu Onderstepoort CDV, jak również wartościowości przeciwko zapaleniu wątroby Rubarth'a, psiej parwowirozie i wirusowi paragrypy typu 2.
Ekspozycję przeprowadzono w dniu D49 przez domózgowe podanie rozcieńczenia 1/10 szczepu ekspozycyjnego CDV „Synder-Hill (partia wytworzona i dostarczona przez USDA, USA).
Obserwację kliniczną przeprowadzano codziennie przez 21 dni po ekspozycji w celu rejestrowania objawów (stan ogólny, objawy oczno-nosowe, objawy ze strony układu pokarmowego, objawy neurologiczne, temperatura) (rejestrowanie zgodne z zasadami Farmakopei Europejskiej). Psy doświadczalne również codziennie ważono.
Ochronę oceniano według następujących kryteriów:
- średnia ocena kliniczna dla każdej z grup,
- poziom wiremii CDV po ekspozycji (pomiar ilości wirusa w limfocytach w D56, D61, D66, D70),
PL 194 348 B1
- liczba krwinek w próbkach krwi zebranych w D48, D54, D56, D59, D63i D70 (tzn. -1, 5, 7, 10, 14i 21 dni po ekspozycji),
- ciężar ciała po ekspozycji.
Dla wszystkich tych kryteriów, średni poziom dla każdej grupy porównywano ze sobą nawzajem oraz ze średnim poziomem grupy kontrolnej.
Próbki krwi pobrane w dniu D0, D14, D28, D56 i D70 w celu miareczkowania przeciwciał testem ELISA oraz przeciwciał neutralizujących wirusa choroby Carre.
Claims (16)
- Zastrzeżenia patentowe1. Szczepionka DNA, znamienna tym, że obejmuje (i) nagi plazmidowy DNA obejmujący i wyrażający in vivo polinukleotyd kodujący antygenowy peptyd, korzystnie gen czynnika patogennego; oraz (ii) przynajmniej jeden adiuwant wybrany z grupy obejmującej polimery kwasu akrylowego albo metakrylowego oraz kopolimery bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych.
- 2. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że jako adiuwant zawiera polimer kwasu akrylowego albo metakrylowego usieciowany eterem polialkenylowym cukru albo polialkoholu.
- 3. Szczepionka według zastrz. 2, znamienna tym, że polimer jest usieciowany allilo-sacharozą albo allilo-pentaerytritolem.
- 4. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że obejmuje, jako adiuwant, kopolimer bezwodnika maleinowego i etylenu, usieciowany, przykładowo, eterem diwinylowym.
- 5. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że zawiera związek będący adiuwantem w ilości 0,01% do 2% wag./obj.
- 6. Szczepionka według zastrz. 5, znamienna tym, że zawiera związek będący adiuwantem w ilości 0,06% do 1% wag./obj., korzystnie, 0,1% do 0,6% wag./obj.
- 7. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że obejmuje nagi plazmidowy DNA zawierającyi wyrażający sekwencję patogenu świni, konia, psa, bydła, kota albo ptaków.
- 8. Szczepionka według zastrz. 7, znamienna tym, że obejmuje przynajmniej jedną sekwencję patogenu wybranego z następującej grupy:- wirus choroby Aujeszky'ego,- wirus grypy świń,- wirus zespołu oddechowo-rozrodczego świń,- wirus parwowirozy świń,- wirus cholery świń,- Actinobacillus pleuropneumoniae,- wirus zapalenia nosa i płuc koni,- wirus grypy koni,- Clostridium tetani,- wschodni wirus zapalenia mózgu,- zachodni wirus zapalenia mózgu,- wenezuelski wirus zapalenia mózgu,- B. burgdorferi,- wirus psiej zarazy,- psi parwowirus,- psi koronawirus,- psi wirus herpes,- wirus wścieklizny,- wirus herpes typu 1 albo 5 bydła,- bydlęcy wirus oddechowy,- bydlęcy pestiwirus,- bydlęcy wirus paragrypy typu 3,- wirus białaczki kotów,- wirus panleukopenii kotów,- wirus zakaźnego zapalenia otrzewnej kotów,- koci wirus herpes,- koci wirus kalciwirozy,PL 194 348 B1- koci wirus niedoboru odporności,- wirus choroby Marek'a,- wirus choroby Newcastle,- wirus choroby Gumboro,- wirus zakaźnego zapalenia oskrzeli ptaków,- wirus zakaźnej anemii ptaków,- wirus zakaźnego zapalenia krtani i tchawicy,- wirus leukozy ptaków,- ptasi pneumowirus,- wirus ptasiej grypy.
- 9. Zastosowanie związku wybranego z grupy obejmującej polimery kwasu akrylowego albo metakrylowego i kopolimery bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylowej, jak określone w zastrz. 1, jako adiuwanta w szczepionce DNA zawierającej i wyrażającej in vivo heterologiczną sekwencję nukleotydową.
- 10. Szczepionka DNA, znamienna tym, że obejmuje (i) nagi plazmidowy DNA obejmujący i wyrażający in vivo polinukleotyd kodujący antygenowy polipeptyd, który obejmuje antygen wirusa końskiego zapalenia nosa i płuc, wirusa końskiej grypy, choroby Aujeszky'ego, zakaźnego zapalenia nozdrzy i tchawicy u bydła (IBR), herpes wirusa bydła lub choroby Carre, i (ii) przynajmniej jeden adiuwant obejmujący karbopol.
- 11. Szczepionka według zastrz. 10, znamienna tym, że zawiera adiuwant w ilości 0,01% do 2% wag./obj.
- 12. Szczepionka według zastrz. 11, znamienna tym, że zawiera adiuwant w stężeniu 0,06% do 1% wag./obj.
- 13. Szczepionka według zastrz. 10, znamienna tym, że nagi plazmidowy DNA jest w formie kolistej, przy czym plazmid dodatkowo obejmuje miejsce inicjacji replikacji, promotor i sekwencję terminującą transkrypcję.
- 14. Zastosowanie karbopolu jako adiuwanta w szczepionce, którą jest plazmidowy DNA zawierający i wyrażający in vivo polinukleotyd kodujący antygenowy peptyd, który obejmuje antygen wirusa końskiego zapalenia nosa i płuc, wirusa końskiej grypy, choroby Aujeszky'ego, zakaźnego zapalenia nozdrzy i tchawicy u bydła (IBR), bydlęcego wirusa herpes lub choroby Carre (CDV).
- 15. Zastosowanie według zastrz. 14, znamienne tym, że karbopol występuje w szczepionce w ilości od 0,01% do 2% wag./obj.
- 16. Zastosowanie według zastrz. 14, znamienne tym, że karbopol występuje w szczepionce w stężeniu od 0,06% do 1% wag./obj.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9804409A FR2776928B1 (fr) | 1998-04-03 | 1998-04-03 | Vaccins adn adjuves |
| PCT/FR1999/000666 WO1999051269A1 (fr) | 1998-04-03 | 1999-03-22 | Vaccins adn adjuves |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL343602A1 PL343602A1 (en) | 2001-08-27 |
| PL194348B1 true PL194348B1 (pl) | 2007-05-31 |
Family
ID=9525029
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL99343602A PL194348B1 (pl) | 1998-04-03 | 1999-03-22 | Szczepionki DNA i zastosowanie polimerów kwasu akrylowego albo metakrylowego oraz kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylowej oraz zastosowanie karbopolu |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7163926B1 (pl) |
| EP (1) | EP1066055B1 (pl) |
| JP (1) | JP2002510651A (pl) |
| AR (1) | AR037062A1 (pl) |
| AT (1) | ATE353670T1 (pl) |
| AU (1) | AU744964B2 (pl) |
| BR (1) | BR9909342A (pl) |
| CA (1) | CA2327389C (pl) |
| CY (1) | CY1108013T1 (pl) |
| DE (1) | DE69935136T2 (pl) |
| DK (1) | DK1066055T3 (pl) |
| ES (1) | ES2283105T3 (pl) |
| FR (1) | FR2776928B1 (pl) |
| PL (1) | PL194348B1 (pl) |
| PT (1) | PT1066055E (pl) |
| WO (1) | WO1999051269A1 (pl) |
| ZA (1) | ZA992478B (pl) |
Families Citing this family (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2804026B1 (fr) * | 2000-01-21 | 2004-06-11 | Merial Sas | Vaccination contre l'herpesvirose canine et vaccins |
| US6551598B2 (en) | 2000-01-21 | 2003-04-22 | Merial | Vaccination against canine herpesvirosis and vaccines therefor |
| KR20040075003A (ko) * | 2001-12-14 | 2004-08-26 | 제네트로닉스, 인코포레이티드 | 펄스 전기장을 이용한 입자보조 폴리뉴클레오티드 면역화방법 |
| US7959929B2 (en) | 2005-04-21 | 2011-06-14 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Materials and methods for respiratory disease control in canines |
| US11865172B2 (en) | 2005-04-21 | 2024-01-09 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Materials and methods for respiratory disease control in canines |
| US7682619B2 (en) | 2006-04-06 | 2010-03-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Canine influenza virus |
| UA100370C2 (uk) | 2006-12-11 | 2012-12-25 | Мериал Лимитед | Спосіб вакцинації птахів проти salmonella |
| CL2008001806A1 (es) * | 2007-06-20 | 2008-09-05 | Wyeth Corp | Composicion de vacuna en emulsion agua en aceite que comprende un antigeno y un adyuvante en la fase acuosa; y metodo de elaboracion. |
| GB0805356D0 (en) * | 2008-03-25 | 2008-04-30 | Isis Innovation | Vaccine adjuvant composition |
| WO2009137577A2 (en) | 2008-05-08 | 2009-11-12 | Merial Limited | Leishmania vaccine using sand fly salivary immunogen |
| BR122019001455B1 (pt) * | 2008-10-24 | 2021-01-19 | Merial, Inc. | vacina contra o vírus da doença equina africana |
| WO2013012446A1 (en) | 2011-07-20 | 2013-01-24 | Merial Limited | Recombinant feline leukemia virus vaccine containing optimized feline leukemia virus envelope gene |
| US20130177591A1 (en) | 2012-01-10 | 2013-07-11 | Merial Limited | Lipid Based Adjuvants for DNA Plasmids |
| JP6201166B2 (ja) | 2012-03-20 | 2017-09-27 | メリアル インコーポレイテッド | 変異糖タンパク質ｃを含む組換えウマヘルペスウイルス‐１ワクチン及びその使用 |
| CN108578679A (zh) | 2012-08-30 | 2018-09-28 | 梅里亚有限公司 | 嵌合ksac蛋白的表达和由高压产生可溶性蛋白的方法 |
| WO2016210097A1 (en) * | 2015-06-23 | 2016-12-29 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Novel equine parvovirus and uses thereof |
| CA3027877A1 (en) | 2016-06-17 | 2017-12-21 | Merial, Inc. | Novel immunogenic formulations comprising linear or branched polyacrylic acid polymer adjuvants |
| JP2023532878A (ja) * | 2020-07-07 | 2023-08-01 | アミリス，インコーポレイティド | ワクチンアジュバントならびにそれを合成及び使用する方法 |
| CN114272368A (zh) * | 2021-12-16 | 2022-04-05 | 成都博宠生物科技有限公司 | 一种猪瘟和猪伪狂犬二联疫苗及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3920811A (en) * | 1972-12-22 | 1975-11-18 | Cutter Lab | Adjuvant compositions |
| JPH0832637B2 (ja) * | 1985-02-14 | 1996-03-29 | アクゾ・エヌ・ヴエー | 合成免疫原 |
| ZA881694B (en) * | 1987-03-17 | 1988-09-06 | Akzo N.V. | Adjuvant mixture |
| US6004563A (en) * | 1990-11-07 | 1999-12-21 | American Home Products Corporation | Feline vaccine compositions and method for preventing chlamydia infections or diseases using the same |
| EP0532833A1 (en) * | 1991-05-28 | 1993-03-24 | Miles Inc. | Vaccine for equine rhinopneumonitis |
| DE69333416D1 (de) * | 1992-06-01 | 2004-03-18 | Univ Melbourne Parkville | Immunologisches Verfahren für die Detektion von Pferde-Herpesvirus Typ 1 und 4 glycoprotein G Antikörper |
| WO1995011700A1 (en) * | 1993-10-29 | 1995-05-04 | Pharmos Corp. | Submicron emulsions as vaccine adjuvants |
| BE1008977A5 (fr) * | 1994-12-27 | 1996-10-01 | Solvay | Adjuvants pour vaccins. |
| US6300118B1 (en) * | 1995-06-07 | 2001-10-09 | American Home Products Corporation | Plasmids comprising a genetically altered feline immunodeficiency virus genome |
| US5820869A (en) * | 1995-06-07 | 1998-10-13 | American Home Products Corporation | Recombinant raccoon pox viruses and their use as an effective vaccine against feline immunodeficiency virus infection |
| FR2751226B1 (fr) * | 1996-07-19 | 1998-11-27 | Rhone Merieux | Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies du cheval |
| GB9623051D0 (en) * | 1996-11-06 | 1997-01-08 | Schacht Etienne H | Delivery of DNA to target cells in biological systems |
| US6406705B1 (en) * | 1997-03-10 | 2002-06-18 | University Of Iowa Research Foundation | Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant |
| CA2293826A1 (en) * | 1997-06-11 | 1998-12-17 | Brigitte Gicquel | Attenuated recombinant mycobacteria useful as immunogens or as vaccine components |
| WO1999004009A1 (en) * | 1997-07-14 | 1999-01-28 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Method of dna vaccination using dna encoding antigen and encoding il6 |
| GB9726398D0 (en) * | 1997-12-12 | 1998-02-11 | Isis Innovation | Polypeptide and coding sequences |
| US6444799B1 (en) * | 1997-12-31 | 2002-09-03 | Csl Limited | P. gingivalis polynucleotides and uses thereof |
-
1998
- 1998-04-03 FR FR9804409A patent/FR2776928B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-03-22 DE DE69935136T patent/DE69935136T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-22 DK DK99909069T patent/DK1066055T3/da active
- 1999-03-22 CA CA2327389A patent/CA2327389C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-22 JP JP2000542039A patent/JP2002510651A/ja active Pending
- 1999-03-22 ES ES99909069T patent/ES2283105T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-22 PT PT99909069T patent/PT1066055E/pt unknown
- 1999-03-22 AT AT99909069T patent/ATE353670T1/de active
- 1999-03-22 PL PL99343602A patent/PL194348B1/pl unknown
- 1999-03-22 BR BR9909342-1A patent/BR9909342A/pt not_active Application Discontinuation
- 1999-03-22 EP EP99909069A patent/EP1066055B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-22 AU AU28448/99A patent/AU744964B2/en not_active Expired
- 1999-03-22 WO PCT/FR1999/000666 patent/WO1999051269A1/fr not_active Ceased
- 1999-03-31 ZA ZA9902478A patent/ZA992478B/xx unknown
- 1999-03-31 AR ARP990101458A patent/AR037062A1/es unknown
-
2000
- 2000-10-02 US US09/677,672 patent/US7163926B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-05-09 CY CY20071100615T patent/CY1108013T1/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69935136D1 (de) | 2007-03-29 |
| EP1066055A1 (fr) | 2001-01-10 |
| CA2327389A1 (en) | 1999-10-14 |
| ATE353670T1 (de) | 2007-03-15 |
| US7163926B1 (en) | 2007-01-16 |
| AU744964B2 (en) | 2002-03-07 |
| EP1066055B1 (fr) | 2007-02-14 |
| ES2283105T3 (es) | 2007-10-16 |
| PL343602A1 (en) | 2001-08-27 |
| FR2776928A1 (fr) | 1999-10-08 |
| CY1108013T1 (el) | 2013-09-04 |
| ZA992478B (en) | 2000-10-10 |
| FR2776928B1 (fr) | 2000-06-23 |
| DE69935136T2 (de) | 2007-11-29 |
| JP2002510651A (ja) | 2002-04-09 |
| WO1999051269A1 (fr) | 1999-10-14 |
| PT1066055E (pt) | 2007-05-31 |
| DK1066055T3 (da) | 2007-06-11 |
| CA2327389C (en) | 2011-06-14 |
| AU2844899A (en) | 1999-10-25 |
| AR037062A1 (es) | 2004-10-20 |
| BR9909342A (pt) | 2000-12-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2319504C2 (ru) | Вакцина собак против бешенства (варианты), способ вакцинации (варианты), набор для вакцинации (варианты) | |
| RU2305559C2 (ru) | Вакцина свиней против респираторных патологий и патологий репродукции свиней | |
| US7163926B1 (en) | Adjuvant-containing vaccines | |
| CA2260858C (en) | Polynucleotide vaccine formulation against pathologies of the horse | |
| US6376473B1 (en) | Polynucleotide vaccine formula in particular against bovine respiratory pathology | |
| KR100768114B1 (ko) | 애완 동물 및 스포츠용 동물을 위한 ｄｎａ 백신 | |
| PL191551B1 (pl) | Kompozycje immunogenne, plazmidy, zastosowania plazmidów, zestawy oraz szczepionki | |
| KR20000065258A (ko) | 조류 폴리뉴클레오티드 백신 제제 | |
| JP2003502345A5 (pl) | ||
| US7078388B2 (en) | DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines | |
| PL209304B1 (pl) | Szczepionka DNA obejmująca plazmid zawierający kwas nukleinowy kodujący immunogen wirusa opryszczki bydła typu 1 (BHV-1) | |
| AU2005202233B2 (en) | DNA vaccines for pets and sport animals | |
| US7294338B2 (en) | Polynucleotide vaccine formula against canine pathologies, in particular respiratory and digestive pathologies |