PL194348B1 - Szczepionki DNA i zastosowanie polimerów kwasu akrylowego albo metakrylowego oraz kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylowej oraz zastosowanie karbopolu - Google Patents

Szczepionki DNA i zastosowanie polimerów kwasu akrylowego albo metakrylowego oraz kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylowej oraz zastosowanie karbopolu

Info

Publication number
PL194348B1
PL194348B1 PL99343602A PL34360299A PL194348B1 PL 194348 B1 PL194348 B1 PL 194348B1 PL 99343602 A PL99343602 A PL 99343602A PL 34360299 A PL34360299 A PL 34360299A PL 194348 B1 PL194348 B1 PL 194348B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
virus
gene
vaccine
adjuvant
bovine
Prior art date
Application number
PL99343602A
Other languages
English (en)
Other versions
PL343602A1 (en
Inventor
Jean-Christophe Francis Audonnet
Jules Maarten Minke
Original Assignee
Merial Sas
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=9525029&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL194348(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Merial Sas filed Critical Merial Sas
Publication of PL343602A1 publication Critical patent/PL343602A1/xx
Publication of PL194348B1 publication Critical patent/PL194348B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

1. Szczepionka DNA, znamienna tym, ze obejmuje (i) nagi plazmidowy DNA obejmujacy i wyra- zajacy in vivo polinukleotyd kodujacy antygenowy peptyd, korzystnie gen czynnika patogennego; oraz (ii) przynajmniej jeden adiuwant wybrany z grupy obejmujacej polimery kwasu akrylowego albo metakry- lowego oraz kopolimery bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych. 9. Zastosowanie zwiazku wybranego z grupy obejmujacej polimery kwasu akrylowego albo me- takrylowego i kopolimery bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylowej, jak okreslone w zastrz. 1, jako adiuwanta w szczepionce DNA zawierajacej i wyrazajacej in vivo heterologiczna sekwencje nukle- otydowa. 10. Szczepionka DNA, znamienna tym, ze obejmuje (i) nagi plazmidowy DNA obejmujacy i wyra- zajacy in vivo polinukleotyd kodujacy antygenowy polipeptyd, który obejmuje antygen wirusa konskiego zapalenia nosa i pluc, wirusa konskiej grypy, choroby Aujeszky'ego, zakaznego zapalenia nozdrzy i tchawicy u bydla (IBR), herpes wirusa bydla lub choroby Carre, i (ii) przynajmniej jeden adiuwant obej- mujacy karbopol. PL PL PL

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku są szczepionki DNA i zastosowanie polimerów kwasu akrylowego albo metakrylowego oraz kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylowej oraz zastosowanie karbopolu.
Szczepionki DNA zwane są również szczepionkami plazmidowymi albo polinukleotydowymi, które obejmują i wyrażają in vivo jeden albo wiele genów heterologicznych. W takich ulepszonych szczepionkach, stosowane są określone adiuwanty odpowiednie do zastosowania w takich szczepionkach.
W zgłoszeniach patentowych WO-A-90 11092, WO-A-93 19183, WO-A-94 21797, WO-A-95 11307 i WO-A-95 20660 opisano wykorzystanie ostatnio opracowanej techniki szczepionek polinukleotydowych. Wiadomo, że w szczepionkach tych stosuje się plazmid zdolny do wyrażania w komórkach gospodarza genu wprowadzonego do plazmidu, który koduje immunogen. Zaproponowano wszystkie drogi podawania tj. dootrzewnową, dożylną, domięśniową, przezskórną, śródskórną, śluzówkową itp. Można zastosować również różne sposoby szczepienia, np. używając DNA, który został osadzony na powierzchni cząstek złota, wystrzelonych w taki sposób, że przenikają do komórek skóry zwierzęcia (Tang i in., Nature 365, 152-154, 1992) oraz wtryskiwaczy do wstrzyknięć, które umożliwiają transfekowanie do skóry, mięśni, tkanki tłuszczowej i tkanek sutka (Furth i in., Analytical Biochemistry, 205, 365-368, 1992).
Takie szczepionki polinukleotydowe można stosować w postaci nagiego DNA albo w postaci kompleksu z liposomami albo lipidami kationowymi.
Celem wynalazku jest zwiększenie skuteczności szczepionek DNA przez dostarczenie nowych formulacji szczepionek, które są proste i łatwe do wytworzenia.
Celem wynalazku jest również dostarczenie szczepionek w postaci roztworów, które nie powodują silnego oddziaływania pomiędzy DNA i innymi składnikami i które są zdolne do inicjacji tworzenia kompleksu.
Celem wynalazku jest również dostarczenie takich roztworów, które umożliwiają, przez proste zmieszanie, wytworzenie stabilnych szczepionek, formułowanych w postaci ciekłej albo w postaci umożliwiającej łatwe przygotowanie szczepionki w formie ciekłej przez zmieszanie bezpośrednio przed zastosowaniem.
Zgłaszający stwierdził nieoczekiwanie, że związki z klasy karbomerów spełniają te różne cele i są w szczególności zdolne do działania jako adiuwanty dla szczepionek z nagiego DNA w sposób prosty, ale w bardzo korzystnych proporcjach.
Szczepionka DNA według wynalazku obejmuje (i) nagi plazmidowy DNA obejmujący i wyrażający in vivo polinukleotyd kodujący antygenowy peptyd, korzystnie gen czynnika patogennego, oraz (ii) przynajmniej jeden adiuwant wybrany z grupy obejmującej polimery kwasu akrylowego albo metakrylowego oraz kopolimery bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych.
Korzystnie szczepionka według wynalazku jako adiuwant zawiera polimer kwasu akrylowego albo metakrylowego usieciowany eterem polialkenylowym cukru albo polialkoholu, korzystniej usieciowany allilo-sacharozą albo allilo-pentaerytritolem.
W korzystnym wykonaniu wynalazku szczepionka obejmuje jako adiuwant kopolimer bezwodnika maleinowego i etylenu, usieciowany, przykładowo, eterem diwinylowym.
W korzystnym wykonaniu wynalazku szczepionka według wynalazku zawiera związek będący adiuwantem w ilości 0,01% do 2% wag./obj., korzystniej w ilości 0,06% do 1% wag./obj., jeszcze korzystniej 0,1% do 0,6% wag./obj.
Korzystnie szczepionka według wynalazku obejmuje nagi plazmidowy DNA zawierający i wyrażający sekwencję patogenu świni, konia, psa, bydła, kota albo ptaków, korzystniej obejmuje przynajmniej jedną sekwencję patogenu wybranego z następującej grupy: wirus choroby Aujeszky'ego, wirus grypy świń, wirus zespołu oddechowo-rozrodczego świń, wirus parwowirozy świń, wirus cholery świń, Actinobacillus pleuropneumoniae, wirus zapalenia nosa i płuc koni, wirus grypy koni, Clostridium tetani, wschodni wirus zapalenia mózgu, zachodni wirus zapalenia mózgu, wenezuelski wirus zapalenia mózgu, B. burgdorferi, wirus psiej zarazy, psi parwowirus, psi koronawirus, psi wirus herpes, wirus wścieklizny, wirus herpes typu 1 albo 5 bydła, bydlęcy wirus oddechowy, bydlęcy pestiwirus, bydlęcy wirus paragrypy typu 3, wirus białaczki kotów, wirus panleukopenii kotów, wirus zakaźnego zapalenia otrzewnej kotów, koci wirus herpes, koci wirus kalciwirozy, koci wirus niedoboru odporności, wirus choroby Marek'a, wirus choroby Newcastle, wirus choroby Gumboro, wirus zakaźnego zapalenia
PL 194 348 B1 oskrzeli ptaków, wirus zakaźnej anemii ptaków, wirus zakaźnego zapalenia krtani i tchawicy, wirus leukozy ptaków, ptasi pneumowirus, wirus ptasiej grypy.
W zakres wynalazku wchodzi również zastosowanie związku wybranego z grupy obejmującej polimery kwasu akrylowego albo metakrylowego i kopolimery bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylowej, jako adiuwanta w szczepionce DNA zawierającej i wyrażającej in vivo heterologiczną sekwencję nukleotydową.
Wynalazek dotyczy też szczepionki DNA, która obejmuje (i) nagi plazmidowy DNA obejmujący i wyrażający in vivo polinukleotyd kodujący antygenowy polipeptyd, który obejmuje antygen wirusa końskiego zapalenia nosa i płuc, wirusa końskiej grypy, choroby Aujeszky'ego, zakaźnego zapalenia nozdrzy i tchawicy u bydła (IBR), wirusa herpes bydła lub choroby Carre, i (ii) przynajmniej jeden adiuwant obejmujący karbopol, korzystnie adiuwant w ilości 0,01% do 2% wag./obj, korzystniej adiuwant w stężeniu 0,06% do 1% wag./obj.
W korzystnym wykonaniu szczepionki według wynalazku nagi plazmidowy DNA jest w formie kolistej, przy czym plazmid dodatkowo obejmuje miejsce inicjacji replikacji, promotor i sekwencję terminującą transkrypcję.
Wynalazek również obejmuje zastosowanie karbopolu jako adiuwanta w szczepionce, którą jest plazmidowy DNA zawierający i wyrażający in vivo polinukleotyd kodujący antygenowy peptyd, który obejmuje antygen wirusa końskiego zapalenia nosa i płuc, wirusa końskiej grypy, choroby Aujeszky'ego, zakaźnego zapalenia nozdrzy i tchawicy u bydła (IBR), bydlęcego wirusa herpes lub choroby Carre (CDV). Korzystnie karbopol występuje w szczepionce w ilości od 0,01% do 2% wag./obj, korzystniej w stężeniu od 0,06% do 1% wag./obj.
Szczepionka DNA może obejmować nagi DNA, w szczególności kolisty plazmid, superskręcony albo inny, albo liniową cząsteczkę DNA, zawierającą i wyrażającą in vivo sekwencję nukleotydową kodującą polipeptyd antygenowy, korzystnie gen czynnika patogennego.
W znaczeniu tu zastosowanym nagi DNA oznacza, jak to jest obecnie powszechnie przyjęte, jednostkę transkrypcyjną DNA w postaci sekwencji polinukleotydowej obejmującej przynajmniej jedną sekwencję nukleotydową kodującą polipeptyd antygenowy albo antygen o pojedynczej wartościowości oraz elementy konieczne do jego ekspresji in vivo. Korzystne są postacie kołowe plazmidu, superskręcone i inne.
Jako wartościowość określa się przynajmniej jeden antygen dostarczający ochrony przed patogenem, przy czym wartościowość może zawierać, jako podwartościowość, jeden albo wiele genów naturalnych albo modyfikowanych, jednego albo wielu szczepów danego patogenu.
Korzystnymi związkami będącymi adiuwantami są polimery kwasu akrylowego i metakrylowego, które są usieciowane, zwłaszcza eterami polialkenylowymi cukrów oraz polialkoholi. Związki te znane są pod nazwą karbomerów (Pharmeuropa tom 8, nr 2, Czerwiec 1996). Specjaliści w dziedzinie mogą się również odnieść do US-A-2 909 462 (włączony tu jako odnośnik), który opisuje takie polimery akrylowe sieciowane związkiem polihydroksylowanym zawierającym przynajmniej 3 grupy hydroksylowe, korzystnie nie więcej niż 8, przy czym atomy wodoru przynajmniej trzech grup hydroksylowych są zastąpione przez nienasycone rodniki alifatyczne o przynajmniej 2 atomach węgla. Korzystne rodniki zawierają od 2 do 4 atomów węgla, np. grup winylowych, allilowych i innych nienasyconych etylenowych. Rodniki nienasycone same mogą zawierać inne podstawniki, takie jak metyl. Produkty sprzedawane pod nazwą Carbopol® (BF Goodrich, Ohio, USA) są szczególnie odpowiednie. Są one usieciowane allilo-sacharozą albo allilo-pentaerytritolem. Można tu wymienić Carbopol® 974P, 934P i 971P.
Wśród kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych, korzystne są kopolimery EMA® (Monsanto), które są kopolimerami bezwodnika maleinowego i etylenu, liniowe albo usieciowane, przykładowo usieciowane eterem diwinylowym. W tej kwestii można się odnieść do publikacji Fields i in., Nature 186:778-780, 1960, włączonej tu jako referencje.
Z punktu widzenia budowy, polimery kwasu akrylowego albo metakrylowego oraz kopolimery ®
EMA® są korzystnie utworzone z jednostek podstawowych o następującym wzorze:
R, R,
----ę-(CH,),— ę—(CHj,---COOH COOH
PL 194 348 B1 w którym:
R1 i R2, które są identyczne albo różne, oznaczają H albo CH3; x =0 albo 1, korzystnie x =1; y =1 albo 2, przy czym x+ y=2;
Dla kopolimerów EMA®, x =0,y= 2. Dla karbomerów x =y= 1.
Rozpuszczenie tych polimerów w wodzie daje roztwór kwaśny, który należy zneutralizować, korzystnie do pH fizjologicznego, w celu otrzymania roztworu adiuwanta, do którego włączona będzie szczepionka. Grupy karboksylowe polimeru są wtedy częściowo w postaci COO-.
Korzystnie, roztwór adiuwanta stosowanego w rozwiązaniach według wynalazku, zwłaszcza karbomeru, wytwarza się w wodzie destylowanej, korzystnie w obecności chlorku sodu, przy czym otrzymany roztwór ma pH kwasowe. Roztwór wyjściowy rozcieńcza się przez dodanie go do pożądanej ilości (w celu otrzymania pożądanego stężenia końcowego), albo istotnej części tej ilości, wody albo roztworu fizjologicznego NaCl (NaCl 9 g/l) w całości albo partiami z równoczesną albo późniejszą neutralizacją (pH 7,3 do 7,4), korzystnie przy użyciu NaOH. Roztwór ten o fizjologicznym pH stosuje się do mieszania ze szczepionką, którą można przechowywać w postaci liofilizowanej, ciekłej albo zamrożonej.
Stężenie polimeru w końcowej kompozycji szczepionki wynosi 0,01% do 2% wag./obj., w szczególności 0,06% do 1% wag./obj., korzystnie od 0,1% do 0,6% wag./obj.
Szczepionka według wynalazku do szczepienia świń, w szczególności do szczepienia przeciwko chorobie Aujeszky'ego (PRV albo wirus pseudowścieklizny), wirusa świńskiej grypy (SIV), świńskiego wirusa układu rozrodczego i oddechowego (wirus PRRS), wirusa świńskiej parwowirozy (wirus PPV), wirusa świńskiej cholery (wirus HCV) i bakterii odpowiedzialnych za aktinobacillozę (A. pleuropneumoniae). Plazmidy stosowane w szczepionkach według wynalazku obejmują, dla każdej wartościowości, jeden albo wiele genów kodujących główne immunogeny uwzględnianych czynników patogennych. Można wymienić w szczególności geny gB i gD wirusa choroby Aujeszky'ego, geny HA, NP i N wirusa świńskiej grypy, ORF5 (E), ORF3 i ORF6 (M) wirusa PRRS, VP2 wirusa parwowirozy, E2, E1 + E2, E1 + E2 + C wirusa cholery świń i apxl, apxII i apxIII dla A. pleuropneumoniae. Korzystnie można powołać formulacje szczepionek polinukleotydowych opisane w zgłoszeniu patentowym WO-A-98 03 658 (FR-A-2,751,224), przeciwko chorobie układu rozrodczego i oddechowego świń. W zgłoszeniu tym opisano w szczególności wiele plazmidów, które można bezpośrednio zastosować jako przykłady w kontekście niniejszego wynalazku w kombinacji z adiuwantem stosowanym w wynalazku. Specjaliści w tej dziedzinie mogą wykorzystać i połączyć z adiuwantem stosowanym w rozwiązaniach według wynalazku, plazmidy opisane szczegółowo w uprzednich zgłoszeniach, konkretnie pAB090 zawierający gen gB wirusa PRV, pAB098 zawierający gen gD wirusa PRV, pPB143 zawierający gen HA świńskiej grypy, szczepu H1N1, pPB142 zawierający gen NP świńskiej grypy, szczepu H1N1, pPB144 zawierający gen HA wirusa świńskiej grypy, szczepu H3N2, pPB132 zawierający gen NP świńskiej grypy, szczepu H3N2, pAB025 zawierający ORF5 wirusa PRRS, szczepu Lelystad, pAB001 zawierający ORF5 wirusa PRRS, szczepu USA, pAB091 zawierający ORF3 wirusa PRRS, szczepu Lelystad, pAB092 zawierający ORF3 wirusa PRRS, szczepu USA, pAB004 zawierający gen VP2 świńskiego parwowirusa, pAB069 zawierający gen E1 wirusa świńskiej cholery (HCV), pAB061 zawierający gen E2 wirusa świńskiej cholery (HCV), pAB162 zawierający delecyjny gen apxl A. pleuropneumoniae, pPB163 zawierający delecyjny gen apxII A. pleuropneumoniae, pPB174', pPB189 i pPB190 zawierające delecyjny gen apxIII A. pleuropneumoniae.
W przypadku szczepienia koni należy w szczególności wymienić szczepienie przeciwko końskiemu wirusowi zapalenia płuc i nosa (EHV), szczególnie typu 1 (EHV-1) i typu 4 (EHV-4), przeciwko końskiemu wirusowi grypy EIV, przeciwko tężcowi (Cl. tetani), przeciwko wschodniemu zapaleniu mózgu (EEV), zachodniemu zapaleniu mózgu (WEV) i wenezuelskiemu zapaleniu mózgu (VEV), jak również przeciwko wirusowi z Lyme (B. Burgdorferi), końskiemu zapaleniu stawów (EAV) i wściekliźnie. Wśród genów kodujących główne immunogeny, które można zastosować w szczepionkach według wynalazku, można wymienić geny gB i gD końskiego wirusa zapalenia płuc i nosa, zwłaszcza typów 1 i 4, geny HA, NA i NP wirusa grypy końskiej, podjednostkę C, ewentualnie modyfikowaną przez mutację albo delecję, dla wartościowości tężca, geny C i E2 zapalenia mózgu i opon mózgowych, geny OspA, OspB i p100 choroby z Lyme, geny E, M i N końskiego zapalenia stawów, oraz gen G wścieklizny. Takie szczepionki polinukleotydowe opisano w szczególności w zgłoszeniach patentowych WO-A-98 03 198 (FR-A-2,761,226). W zgłoszeniu tym opisano szereg plazmidów, które można bezpośrednio zastosować w szczególności według niniejszego wynalazku, w kombinacji z adiuwanPL 194 348 B1 tami odpowiednimi dla szczepionek według wynalazku. Specjaliści w tej dziedzinie mogą wykorzystać i połączyć z adiuwantem stosowanym w rozwiązaniach według wynalazku plazmid jak to szczegółowo opisano w tym zgłoszeniu, konkretnie, pAB042, zawierający gen gB wirusa EHV-1; pAB031, zawierający gen gB wirusa EHV-4; pAB013, zawierający gen gD wirusa EHV-1; pAB032, zawierający gen gD wirusa EHV-4; pAB043, zawierający gen HA końskiego wirusa grypy, szczep Prague; pAB033 zawierający gen końskiego wirusa grypy, szczep Suffolk; pAB099 zawierający gen HA końskiej grypy, szczep Fontainebleau; pAB085 zawierający gen NP końskiej grypy, szczep Prague; npAB084 obejmujący gen NP końskiej grypy; szczepu Jillin, pAB070 zawierający gen podjednostki C toksyny tężca; pAB017 zawierający gen OspA Borrelia burgdorferi; pAB094 zawierający gen E2 wirusa wschodniego zapalenia mózgu; pAB096 zawierający gen E2 wirusa zachodniego zapalenia mózgu; pAB095 zawierający gen C wirusa zachodniego zapalenia mózgu; pAB098 zawierający gen E2 wirusa wenezuelskiego zapalenia mózgu; pAB097 zawierający gen C wirusa wenezuelskiego zapalenia mózgu oraz pAB041 kodujący gen G wirusa wścieklizny.
Szczepionkę według wynalazku można stosować do szczepienia psów w szczególności do szczepienia przeciwko wirusowi pomoru psów (choroba Carre) (CDV), psiej parwowirozie (CPV), psiemu koronawirusowi (CCV), psiemu wirusowi herpes (CHV), chorobie z Lyme i wściekliźnie. Wśród genów kodujących główne immunogeny, które można zastosować w kontekście niniejszego wynalazku, można wymienić w szczególności geny HA, F, M i N wirusa zarazy psiej, gen VP2 psiego parwowirusa, geny S i M psiego koronawirusa (CCV), geny gB i gD wirusa CHV, OspA i OspB i p100 B. burgdorferi (choroba z Lyme) oraz gen G wścieklizny. Takie formulacje szczepionek polinukleotydowych są opisane w szczególności w zgłoszeniu patentowym WO-A-98 03 199 (FR-A-2,751,227). Specjaliści w dziedzinie mogą wykorzystać plazmidy opisane w tym zgłoszeniu, w kombinacji z adiuwantami jak w szczepionce według wynalazku. Konkretnymi plazmidami opisanymi w tym zgłoszeniu są pAB044 zawierający gen HA CDV; pAB036 zawierający gen F CDV; pAB024 zawierający gen VP2 psiego parwowirusa; pAB021 zawierający gen S CCV; pAB022 zawierający gen gB CHV, pAB038 zawierający gen gD CHV, pAB017 zawierający gen OspA B. burgdorferi i pAB041 zawierający gen G wirusa wścieklizny.
Szczepionkę według wynalazku można zastosować do szczepienia bydła w szczególności do szczepienia przeciwko bydlęcemu wirusowi herpes typu 1 albo 5 (BHV-1 i BHV-5, odpowiedzialnych za nerwową postać choroby), bydlęcemu oddechowemu wirusowi syncytialnemu (BRSV), wirusowi choroby śluzówek albo bydlęcemu pestiwirusowi (BVD), bydlęcemu wirusowi paragrypy typu 3 (BPI-3). Wśród genów kodujących główne immunogeny umożliwiające szczepienie przeciwko tym wirusom, można wymienić w szczególności geny gB i gD bydlęcego wirusa herpes, F i G bydlęcego oddechowego wirusa syncytialnego, E2, C + E1+ E2 i E1+ E2 wirusa choroby śluzówek, HN i F dla bydlęcego wirusa paragrypy typu 3. Takie formulacje szczepionek opisano w szczególności w zgłoszeniu patentowym WO-A-98 03 200 (Fr-A-2,751,229), włączonym tu jako odnośnik. Specjaliści w dziedzinie mogą zastosować plazmidy opisane w tym zgłoszeniu, w połączeniu z adiuwantami odpowiednimi dla szczepionek według wynalazku. W szczególności, mogą połączyć z adiuwantami, plazmidy opisane konkretnie w tym zgłoszeniu, a mianowicie pPB156 zawierającym gen gB BHV-1, pAB087 zawierającym gen gD BHV-1, pAB011 zawierającym gen F BRSV, pAB012 zawierającym gen G BRSV; pAB058 zawierającym gen G BRSV; pAB058 zawierającym gen C BVD; pAB059 zawierającym gen E1 BVD, pAB060 zawierającym gen E2 BVD, pAB071 zawierającym gen HN BPI-3, pAB072 zawierającym gen F BPI-3.
Szczepionki według wynalazku można zastosować do szczepienia kotów w szczególności do szczepienia przeciwko wirusowi kociej białaczki FeLV, w szczególności podtypów A i B, wirusowi kociej panleukemii (FPV), kociego zakaźnego zapalenia otrzewnej (FIPV), wirusowi koryzy albo wirus hermes (FHV), wirusowi kociej kalciwirozy (FCV), kociemu wirusowi niedoboru odporności (FIV) oraz wirusowi wścieklizny (rabdowirus). Wśród genów kodujących główne immunogeny umożliwiające szczepienie przeciwko patogenom, można wspomnieć w szczególności geny env i gag/pol kociej białaczki, VP2 panleukopenii, M i modyfikowane S (FR-A-2,724,385) dla zakaźnego zapalenia otrzewnej, gB i gD dla koryzy, kapsydu dla kalciwirozy, env i gag/pro dla kociego niedoboru odporności i G dla wścieklizny. Szczepionka polinukleotydowa jest opisana w zgłoszeniu patentowym WO-A-98 03 660 (FR-A-2,751,223). Specjaliści w tej dziedzinie mogą wykorzystać i połączyć z adiuwantem stosowanym w rozwiązaniach według wynalazku plazmidy opisane w tym zgłoszeniu. W szczególności, można połączyć adiuwanty z plazmidami opisanymi w tym zgłoszeniu, konkretnie pPB179 zawierającym gen env wirusa FeLV-A, pPB180 zawierającym gen env FeLV-B, pPB181 zawierającym gen gag/pol FeLV-A,
PL 194 348 B1 pAB009 zawierającym gen VP2 FPV, pAB053 zawierającym modyfikowany gen S (FR-A-2 724 385) wirusa FIPV, pAB052 zawierającym gen M FIPV, pAB056 zawierającym gen N FIPV, pAB028 zawierającym gen gB FHV, pAB029 zawierającym gen gD FHV, pAB010 zawierającym gen C FCV, pAB030 zawierającym gen env FIV, pAB083 zawierającym gen gag/pro FIV i pAB041 zawierającym gen G wirusa wścieklizny.
Szczepionki według wynalazku można zastosować do szczepienia gatunków ptasich w szczególności w szczepieniu przeciwko wirusowi choroby Marek'a (MDV), wirusowi choroby Newcastle (NDV), wirusowi choroby Gumboro (IBDV albo wirus zakaźnej choroby kaletek), wirusowi zakaźnego zapalenia oskrzeli (IBV), wirusowi zakaźnej anemii (CAV), wirusowi zakaźnego zapalenia krtani i oskrzeli (ILTV), wirusowi zapalenia mózgu (AEV albo ptasi wirus leukozy ALV), wirusowi pneumowirozy albo pneumowirusowi oraz wirusowi ptasiej grypy. Wśród genów kodujących główne immunogeny, które można zastosować w niniejszym wynalazku, można wspomnieć w szczególności geny gB i gD wirusa choroby Marek'a, HN i F wirusa choroby Newcastle, VP2 wirusa choroby Gumboro,S, M i N wirusa zakaźnego zapalenia oskrzeli, C + NS1 wirusa zakaźnej anemii, gB i gD wirusa zakaźnego zapalenia krtani i oskrzeli, envi gag/pro wirusa zapalenia mózgu, F i G wirusa pneumowirozy oraz HA, N i NP ptasiej grypy. Takie szczepionki polinukleotydowe są opisane w zgłoszeniu patentowym WO-A-98 03 659 (FR-A-2,751,225). Specjaliści w dziedzinie mogą wykorzystać plazmidy opisane w tym zgłoszeniu i połączyć z adiuwantem stosowanym w rozwiązaniach według wynalazku. W szczególności, specjaliści w dziedzinie mogą połączyć z adiuwantami, plazmidy opisane konkretnie w tym zgłoszeniu, konkretnie pAB045 zawierający gen gB MDV, pAB080 zawierający gen gD MDV, pAB046 zawierający gen HN NDV, pAB047 zawierający gen F NDV, pAB048 zawierający gen S1 IBV, pAB080 zawierający gen M IBV, pAB081 zawierający gen N IBV, pAB054 zawierający gen VP1 CAV, pAB055 zawierający gen VP2 CAV, pAB076 zawierający gen gB ILTV, pAB089 zawierający gen env AEV, pAB081 zawierający gen gag/pro AEV, pAB082 zawierający gen G pneumowirusa, pAB077 zawierający gen HA grypy ptasiej, szczep H2N2, pAB078 zawierający gen HA grypy ptasiej, szczep H7N7, pAB088 zawierający gen NP grypy ptasiej, szczep H1N1, pAB079 zawierający gen N grypy ptasiej, szczep H7N1.
Każdy nagi, w szczególności plazmidowy, DNA obejmuje promotor zdolny do przeprowadzenia w komórce gospodarza, ekspresji wprowadzonego genu pod jego kontrolą. Ogólnie, będą to silne promotory eukariotyczne, zaś w szczególności wczesny promotor wirusa cytomegalii CMV-IE, pochodzenia ludzkiego albo mysiego, albo innego pochodzenia, jak ze szczura, świni albo świnki morskiej. W bardziej ogólny sposób, promotor może być pochodzenia wirusowego albo komórkowego. Jako promotory wirusowe inne niż CMV-IE można wspomnieć promotor wczesny albo późny wirusa SV40, albo promotor LTR wirusa mięsaka Rous'a. Może to być również promotor pochodzący z wirusa, z którego pochodzi gen, przykładowo aktualny promotor genu. Jako promotory komórkowe, można wymienić promotor genu cytoszkieletu, jak np. promotor desminy (Bolmont i in., J. Submicros. Cyt. Patol., 1990, 22:117-122); i Zhenlin i in., Gene 1989, 78:243-254), albo promotor aktyny. Gdy w nagim DNA, w szczególności plazmidowym, występuje kilka promotorów, mogą one występować w tej samej jednostce transkrypcyjnej albo w różnych jednostkach.
Oczywiście, szczepionka może obejmować dla każdej z wartościowości opisanych wyżej, kilka genów w tym samym nagim, w szczególności plazmidowym DNA i/lub kilka nagich, w szczególności plazmidowych DNA może zawierać jeden albo wiele genów tego samego wirusa.
Możliwe są również rekombinowane szczepionki multiwalentne, tzn. zawierające jeden albo korzystnie dwa albo kilka nagich, w szczególności plazmidowych DNA wyrażających antygeny dla dwóch albo więcej chorób, w postaci mieszaniny w roztworze adiuwanta opisanym w wynalazku.
W szczepionkach gotowych do użycia, nagi DNA, w szczególności plazmidowy, występuje w ilościach normalnie stosowanych i opisanych w literaturze.
Szczepionki według wynalazku mogą być podawane drogą pozajelitową, korzystnie domięśniową, śródskórną albo drogą śluzówkową w jednej albo wielu dawkach.
Wynalazek zostanie poniżej bardziej szczegółowo opisany przy pomocy nieograniczających przykładowych wykonań, które odnoszą się do następujących Figur.
Fig. 1: Sekwencja genu hemaglutyniny (HA) końskiego wirusa grypy szczepu Newmarket 2/93.
Fig. 2: Sekwencja genu hemaglutyniny (HA) końskiego wirusa grypy szczepu Kentucky 1/94.
Fig. 3: Sekwencja genu neuraminidazy (NA) końskiego wirusa grypy szczepu Newmarket 2/93.
Fig. 4: Sekwencja genu neuraminidazy (NA) końskiego wirusa grypy szczepu Kentucky 1/94.
Fig. 5: Sekwencja genu nukleoproteiny (NP) końskiego wirusa grypy szczepu Newmarket 2/93.
Fig. 6: Sekwencja genu nukleoproteiny (NP) końskiego wirusa grypy szczepu Kentucky 1/94.
PL 194 348 B1
Lista sekwencji:
Id. Sekw. nr 1: Oligonukleotyd CCL007
Id. Sekw. nr 2: Oligonukleotyd CCL018
Id. Sekw. nr 3: Sekwencja genu HA, EIV szczepu Newmarket 2/93
Id. Sekw. nr 4: Oligonukleotyd CCL020
Id. Sekw. nr 5: Sekwencja genu HA, EIV szczepu Kentucky 1/94
Id. Sekw. nr 6: Oligonukleotyd AB260
Id. Sekw. nr 7: Oligonukleotyd AB262
Id. Sekw. nr 8: Sekwencja genu NA, EIV szczepu Newmarket 2/93
Id. Sekw. nr 9: Sekwencja genu NA, EIV szczepu Kentucky 1/94
Id. Sekw. nr 10: Oligonukleotyd CCL019
Id. Sekw. nr 11: Oligonukleotyd CCL021
Id. Sekw. nr 12: Sekwencja genu NP, EIV szczepu Newmarket 2/93
Id. Sekw. nr 13: Sekwencja genu NP, EIV szczepu Kentucky 1/94
P r zyk ł a d 1: Adiuwant ®
Karbomerem zastosowanym według wynalazku jest karbopol (Carbopol® 974P) wytwarzany przez BF Goodrich (MW około 3 milionów).
®
Roztwór podstawowy zawierający 1,5% wag./obj. Carbopol® 974P przygotowano w wodzie destylowanej zawierającej chlorek sodu w ilości 1g/l.
®
Roztwór wyjściowy zastosowano do wytworzenia roztworu Carbopol w roztworze fizjologicznym soli 4 mg/ml. Roztwór wyjściowy wlano do roztworu fizjologicznego soli (albo do większości roztworu) w całości albo partiami, ustalono pH przy użyciu NaOH (przykładowo 1 N albo bardziej stężonym) do wartości około 7,2-7,4.
®
Otrzymano w ten sposób gotowy do użycia roztwór Carbopol®.
P r zyk ł a d 2: Hodowla wirusów
Wirusy hodowano na odpowiednim układzie komórkowym do uzyskania efektu cytopatycznego. Układy komórkowe do zastosowania dla każdego wirusa są znane specjalistom. Pokrótce, komórki wrażliwe na zastosowany wirus, hodowane w minimalnej niezbędnej pożywce Eagle'a (pożywka MEM) albo innej odpowiedniej pożywce, zaszczepia się badanym szczepem wirusowym stosując wielokrotność zakażenia równej 1. Zakażone komórki inkubuje się w 37°C przez okres czasu konieczny do wystąpienia całkowitego efektu cytopatycznego (średnio 36 godzin).
P r zyk ł a d 3: Ekstrakcja wirusowych genomowych DNA
Po hodowli, nadsącz i rozłożone komórki zbiera się i całą zawiesinę wirusa wiruje się przy 1000 g przez 10 minut w 4°C w celu usunięcia resztek komórkowych. Cząstki wirusowe zbiera się przez ultrawirowanie przy 400000 g przez godzinę w 4°C. Osad pobiera się w minimalnej objętości buforu (10 mM Tris, 1 mM EDTA). Zatężoną zawiesinę wirusa traktuje się proteinazą K (100 mg/ml) w obecności soli sodowej siarczanu dodecylu (SDS, 0,5%) przez 2 godziny w 37°C. Wirusowy DNA ekstrahuje się mieszaniną fenolu z chloroformem, a następnie precypituje się 2 objętościami absolutnego etanolu. Po nocy w -20°C, DNA wiruje się przy 10000 g przez 15 minut w 4°C. Osad DNA suszy się i pobiera w minimalnej objętości sterylnej, ultraczystej wody. Tak przygotowany preparat można poddać trawieniu enzymami restrykcyjnymi.
P r zyk ł a d 4: Izolowanie wirusowych genomowych RNA
Wirusy RNA oczyszcza się według dobrze znanych specjalistom technik. Genomowe wirusowe RNA izoluje się stosując technikę ekstrakcji z tiocyjanianem guanidyny/mieszaniną fenol/chloroform, opisaną przez Chomczynski i Sacchi (Anal. Biochem., 1987, 162:156-159).
P r zyk ł a d 5: Techniki biologii molekularnej
Wszystkie konstrukcje plazmidowe wytworzono stosując standardowe techniki biologii molekularnej opisane przez Sambrook i in., Molecular Cloning: A Laboroatory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989). Wszystkie fragmenty restrykcyjne zastosowane do niniejszego wynalazku wyizolowano stosując zestaw Geneclean (BIO101 Inc., La Jolla, CA).
P r zyk ł a d 6: Technika RT-PCR.
Swoiste oligonukleotydy (zawierające na końcach 5' miejsca restrykcyjne w celu ułatwienia klonowania amplifikowanych fragmentów) syntetyzowano w sposób pokrywający całkowicie regiony kodujące amplifikowanych genów (patrz, przykłady). Reakcję odwrotnej transkrypcji (RT)i reakcję łańcuchową polimerazy (PCR) przeprowadzono w oparciu o standardowe techniki (Sambrook i in., Molecular Cloning: A Laboroatory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989). Reakcje RT-PCR prze8
PL 194 348 B1 prowadzano z parą swoistych starterów, stosując jako matrycę ekstrahowany wirusowy DNA. Amplifikowany komplementarny DNA ekstrahowano mieszaniną fenol/chloroform/alkohol izoamylowy (25:24:1) po czym trawiono enzymami restrykcyjnymi.
P r z y k ł a d 7: Plazmid pVR1012
Plazmid pVR1012 otrzymano z Vical Inc., San Diego, CA, USA. Jego konstrukcję opisano w Hartikka i in., Hum. Gene Ther., 1996, 7:1205-1217).
P r z y k ł a d 8: Konstruowanie plazmidu pCCL027 (gen HA EIV szczepu Newmarket 2/93) Reakcję RT-PCR według techniki opisanej w przykładzie 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa końskiej grypy (EIV) (szczepu Newmarket 2/93) (Daly i in., J. Gen. Virol., 1996, 77:661-671), według techniki opisanej w przykładzie 4, stosując następujące oligonukleotydy:
CCL007 (40-mer) (Id. Sekw. nr 1)
5' TTGTCGACTCAATCATGAAGACAACCATTATTTTGATACT3'
CCL018 (34-mer) (Id. Sekw. nr 2)
5' TTGGATCCTTACTCAAATGCAAATGTTGCACCTG3'
W celu wyizolowania genu kodującego glikoproteinę HA wirusa końskiej grypy (szczep Newmarket 2/93) (Fig. 1, Id. Sekw. nr 3) w postaci fragmentu PCR, wielkości około 1750 bp. Fragment ten oczyszczono, a następnie poddano ligacji z wektorem pCRII (Nr kat. K2000-01, Invitrogen Corp., Carlsbad, CA) w celu otrzymania plazmidu pCCL026. Plazmid pCCL026 trawiono enzymami restrykcyjnymi SalI i NotI w celu wyizolowania fragmentu 1751 bp zawierającego gen HA EIV Newmarket 3/93. Fragment ten poddano ligacji z plazmidem pVR1012 (patrz, przykład 7), uprzednio trawionym Sall i Notl w celu otrzymania plazmidu pCCL027 (6642 bp).
P r z y k ł a d 9: Konstruowanie plazmidu pPB242 (gen HA EIV szczepu Kentucky 1/94)
Reakcję RT-PCR według techniki opisanej w przykładzie 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa końskiej grypy (EIV) (szczepu Kentucky 1/94) (Daly i in., J. Gen. Virol., 1996, 77:661-671), według techniki opisanej w przykładzie 4, stosując następujące oligonukleotydy:
CCL007 (40-mer) (Id. Sekw. nr 1)
5' TTGTCGACTCAATCATGAAGACAACCATTATTTTGATACT3'
CCL020 (34-mer) (Id. Sekw. nr 4)
5' TTGGATCCTTACTCAAATGCAAATGTTGCATCTG3'
W celu wyizolowania genu kodującego glikoproteinę HA wirusa końskiej grypy (szczep Kentucky 1/94) (Fig. 2, Id. Sekw. nr 5) w postaci fragmentu PCR, wielkości około 1750 bp. Fragment ten oczyszczono, a następnie poddano ligacji z wektorem pCRII (Nr kat. K2000-01, Invitrogen Corp., Carlsbad, CA) w celu otrzymania plazmidu pCCL028. Plazmid pCCL028 trawiono enzymami restrykcyjnymi SacI i BamHI w celu wyizolowania fragmentu 1153 bp (fragment A) zawierającego część 3' genu HA EIV Kentucky 1/94. Plazmid pCCL028 poddano trawieniu SacI i EcoRV w celu wyizolowania fragmentu SacI-EcoRV wielkości 621 bp (Fragment B) zawierającego część 5' genu HA EIV szczepu Kentucky 1/94. Fragmenty A i B połączono ze sobą w plazmidzie pVR1012 (patrz, przykład 7), uprzednio trawionym EcoRV i BamHI w celu otrzymania plazmidu pPB242 (6688 bp).
P r z y k ł a d 10: Konstruowanie plazmidu pAB142 (gen NA EIV Newmarket 2/93)
Reakcję RT-PCR według techniki opisanej w przykładzie 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa końskiej grypy (EIV) (szczepu Newmarket 2/93) (Daly i in., J. Gen. Virol., 1996, 77:661-671), według techniki opisanej w przykładzie 4, stosując następujące oligonukleotydy:
AB260 (35-mer) (Id. Sekw. nr 6)
5' TTTGTCGACATGAAYCCAAATCAAAARATAATAAC3'
AB262 (32-mer) (Id. Sekw. nr 7)
5' TTTGGATCCYTACATCTTRTCGATGTCAAAGG3'
W celu wyizolowania genu kodującego neuraminidazę NA wirusa końskiej grypy (szczep Newmarket 2/93) (Fig. 3, Id. Sekw. nr 8) w postaci fragmentu PCR, wielkości około 1430 bp. Fragment ten oczyszczono, a następnie trawiono enzymami restrykcyjnymi SalI i BamHI w celu wyizolowania fragmentu 1418 bp zawierającego gen NA EIV Newmarket 3/93. Fragment ten poddano ligacji z plazmidem pVR1012 (patrz, przykład 7), uprzednio trawionym Sall i BamHI w celu otrzymania plazmidu pAB142 (6287 bp).
P r z y k ł a d 11: Konstruowanie plazmidu pPB246 (gen NA EIV Kentucky 1/94)
Reakcję RT-PCR według techniki opisanej w przykładzie 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa końskiej grypy (EIV) (szczepu Kentucky 1/94) (Daly i in., J. Gen. Virol., 1996, 77:661-671), według techniki opisanej w przykładzie 4, stosując oligonukleotydy AB260 i AB262 (przykład 10), w celu wyPL 194 348 B1 izolowania genu kodującego neuraminidazę (NA) glikoproteinę wirusa końskiej grypy (szczep Kentucky 1/94) (Fig. 4, Id. Sekw. nr 9) w postaci fragmentu PCR, wielkości około 1430 bp. Fragment ten oczyszczono, a następnie trawiono enzymami restrykcyjnymi Sall i BamHI w celu wyizolowania fragmentu 1418 bp zawierającego gen NA EIV Kentucky 1/94. Fragment ten poddano ligacji z plazmidem pVR1012 (patrz, przykład 7), uprzednio trawionym SalI i BamHI w celu otrzymania plazmidu pAB116 (6287 bp).
Przykład 12: Konstruowanie plazmidu pPB245 (gen NP EIV Newmarket 2/93)
Reakcję RT-PCR według techniki opisanej w przykładzie 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa końskiej grypy (EIV) (szczepu Newmarket 2/93) (Daly i in., J. Gen. Virol., 1996, 77:661-671), według techniki opisanej w przykładzie 4, stosując następujące oligonukleotydy:
CCL019 (25-mer) (Id. Sekw. nr 10)
5' TTGTCGACCATGGCGTCTCAAGGCAC3'
CCL021 (28-mer) (Id. Sekw. nr 11)
5' TTTCTAGACTTTAAYTGTCAWACTCYTC3'
W celu wyizolowania genu kodującego nukleoproteinę (NP) wirusa końskiej grypy (szczep Newmarket 2/93) (Fig. 5, Id. Sekw. nr 12) w postaci fragmentu PCR, wielkości około 1520 bp. Fragment ten oczyszczono, a następnie trawiono enzymami restrykcyjnymi SalIi XbaIw celu wyizolowania fragmentu 1506 bp zawierającego gen NP EIV Newmarket 3/93. Fragment ten poddano ligacji z plazmidem pVR1012 (patrz, przykład 7), uprzednio trawionym SalI XbaI w celu otrzymania plazmidu pPB245 (6389 bp).
Przykład 13: Konstruowanie plazmidu pPB246 (gen NP EIV Kentucky 1/94)
Reakcję RT-PCR według techniki opisanej w przykładzie 6 przeprowadzono z genomowym RNA wirusa końskiej grypy (EIV) (szczepu Kentucky 1/94) (Daly i in., J. Gen. Virol., 1996, 77:661-671), według techniki opisanej w przykładzie 4, stosując oligonukleotydy CCL019 i CCL021 (przykład 12), w celu wyizolowania genu kodującego nukleoproteinę (NP) wirusa końskiej grypy (szczep Kentucky 1/94) (Fig. 6, Id. Sekw. nr 13) w postaci fragmentu PCR, wielkości około 1520 bp. Fragment ten oczyszczono, a następnie trawiono enzymami restrykcyjnymi SalIi XbaI w celu wyizolowania fragmentu 1506 bp zawierającego gen NP ELV Kentucky 1/94. Fragment ten poddano ligacji z plazmidem pVR1012 (patrz, przykład 7), uprzednio trawionym Salli Xbal w celu otrzymania plazmidu pPB246 (6389 bp).
Przykład 14: Konstruowanie plazmidu pPB156 (gen gB BHV-1)
Konstrukcję opisano w WO-A-98 03200.
Przykład 15: Konstruowanie plazmidu pAB087 (gen gD BHV-1)
Konstrukcję opisano w WO-A-98 03200.
Przykład 16: Konstruowanie plazmidu pAB090 (gen gB PRV)
Konstrukcję opisano w WO-A-98 03658.
Przykład 17: Konstruowanie plazmidu pPB098 (gen gD PRV)
Konstrukcję opisano w WO-A-98 03658.
Przykład 18: Konstruowanie plazmidu pAB044 (gen HA CDV)
Konstrukcję opisano w WO-A-98 03199.
Przykład 19: Konstruowanie plazmidu pAB036 (gen F CDV)
Konstrukcję opisano w WO-A-98 03199.
Przykład 20: Konstruowanie plazmidu pAB041 (gen G wirusa wścieklizny)
Konstrukcję opisano w WO-A-98 03199.
Przykład 21: Zastosowanie u koni
Badana szczepionka stanowiła mieszaninę 3 plazmidów, pCCL027 (przykład 8), pAB142 (przykład 10) i pPB245 (przykład 12), zawierających i wyrażających, odpowiednio, geny HA, NA i NP wirusa EIV szczepu Newmarket 2/93. Mieszaninę tę połączono z opisanym karbomerem.
Protokół szczepienia/ ekspozycji wyglądał następująco:
Grupa Liczba koni Szczepionka Rozcieńczalnik Dawka
A 5 pCCL027 + pAB142 + pPB245 roztwór soli 3x 400 mg
B 5 pCCL027 + pAB142 + pPB245 Carbopol® 974P 3x 400 mg
C 6 szczepionka dostępna w handlu --- 1x dawka zalecana
D kontrola 5 --- --- ---
PL 194 348 B1
Do badania zastosowano kuce (Welsh Mountain Ponies) w wieku 7-8 miesięcy, nie posiadające wykrywalnych przeciwciał przeciwko wirusom H3N8 i H7N7, mierzone przez SHR (pojedyncza hemoliza radialna). Kuce rozdzielono losowo do 4 grup.
Konie szczepiono w D0 i D35 drogą domięśniową. Szczepionkę dostępną w handlu stosowano u grupy C w objętości 1ml.
Kuce w grupie A i B otrzymywały 2 dawki po 5 ml w D0 i D35 w głębokim wstrzyknięciu domięśniowym w kark.
W D56, trzy tygodnie po drugim szczepieniu, kuce zakażono przez ekspozycję na aerozol otrzymany z około 1 ml płynu owodniowego, zawierającego w sumie 107,3 EID50 wirusa grypy Aequi2/Sussex/89, przy użyciu urządzenia do rozpylania ULTRA 2000 (De Vilbiss, Somerset, PA), jak to opisano w Mumford i in., Equine Vet. J. 1990, 22:93-98.
Po ekspozycji, kuce obserwowano w celu stwierdzenia objawów klinicznych (ustalenie oceny klinicznej) oraz temperatury. Codziennie przeprowadzano wymazy z nosa od dnia 0 po ekspozycji do 10 dnia po ekspozycji, w celu zmierzenia ilości wirusa wydzielanego przez konie.
Na koniec, pobierano próbki krwi, przed i po ekspozycji (dni D0, D7, D14, D35, D49, D56, D63 i D70) w celu zmierzenia kinetyki pojawiania się przeciwciał oraz poziomu przeciwciał SRH i IHA (przeciwciała hemoaglutynujące) dla każdej ze szczepionych grup.
P r zyk ł a d 22: Zastosowanie u świń
Skuteczność szczepionki plazmidowej połączonej z karbomerem badano na świniach w modelu szczepienia/ekspozycji na chorobę Aujeszky'ego. Badana szczepionka stanowiła mieszaninę 2 plazmidów pAB090 (przykład 16) i pPB098 (przykład 17), zawierających i wyrażających, odpowiednio, gen gB i gD wirusa PRV. Mieszaninę połączono z opisanym karbomerem.
Zastosowany protokół szczepienia/ ekspozycji wyglądał następująco:
Grupa Liczba świń Szczepionka Rozcieńczalnik Dawka
A 6 pPB098 + pAB090 roztwór soli 2x 200 mg
B 6 pPB098 + pAB090 Carbopol® 974P 2x 200 mg
C 6 Geskypur --- 1x dawka zalecana
D kontrola 6 --- --- ---
W dniu D0, świnie w grupie A i B szczepiono mieszaniną plazmidów pPB098 i pAB090 (200 m g każdego z plazmidów), w połączeniu z karbomerem we wstrzyknięciu domięśniowym w objętości 2 ml.
Świnie w grupie C otrzymały wstrzyknięcie dostępnej w handlu szczepionki Geskypur (szczepionka podjednostkowa, Merial, Francja) domięśniowo w objętości 2 ml.
Świń w grupie D nie szczepiono.
W D21 wszystkie świnie eksponowano na 2 ml (po 1 ml na nozdrze) zawiesiny wirusa szczepu ekspozycyjnego choroby Aujeszky'ego, NIA3 (rozcieńczenie 1/5 roztworu wyjściowego o mianie 108,25 CCID50/ml).
Po ekspozycji, świnie obserwowano w kierunku śmiertelności i kryterium delta G7 (pojedyncze ważenie w D0 i D7). Codziennie pobierano wymazy z nozdrzy w celu zmierzenia ilości wirusa wydalanego po ekspozycji.
Na koniec, pobierano próbki krwi w D0, D7, D14, D21 i D28 w celu zmierzenia kinetyki poziomu przeciwciał neutralizujących wirusa choroby Aujeszky'ego (PRV). Wykonano również ELISA na przeciwciała przeciwko PRV w celu określenia izotypów IgG1 i IgG2, w surowicy świń szczepionych i nie szczepionych.
P r zyk ł a d 23: Zastosowanie u bydła
Skuteczność szczepionki plazmidowej połączonej z karbomerem badano na modelu szczepienia/ekspozycji na zakaźne zapalenie nozdrzy i tchawicy u bydła (IBR) albo BHV-1. Badaną szczepionkę stanowiła mieszanina 2 plazmidów, pPB156 (przykład 14) i pAB087 (przykład 15), zawierających i wyrażających, odpowiednio, geny gB i gD wirusa BHV-1. Mieszaninę połączono z karbomerem.
PL 194 348 B1
Protokół szczepienia/ ekspozycji wyglądał następująco:
Grupa Liczba cieląt Szczepionka Rozcieńczalnik Dawka
A 6 pAB087 + pPB156 roztwór soli 2x 300 mg
B 6 pAB087 + pPB156 Carbopol® 974P 2x 300 mg
C 6 Ibepur --- 1x dawka zalecana
D kontrola 6 --- --- ---
W D0 cielętom w grupie A i B podawano mieszaninę plazmidów pPAB087 i pPB156 (300 mg każdego z plazmidów), w połączeniu z karbomerem, drogą domięśniową w objętości 5 ml.
Cielęta w grupie C otrzymały wstrzyknięcie dostępnej w handlu szczepionki Ibepur (szczepionka podjednostkowa, Merial, Francja) drogą domięśniową w objętości 2 ml. Cieląt w grupie D nie szczepiono.
W D21, grupy A, B i C otrzymały drugie wstrzyknięcie szczepionki według tego samego schematu co w D0.
W D35, cielęta eksponowano na 2,5 ml (po 1,25 na nozdrze) zawiesiny wirusa ekspozycyjnego BHV-1, szczepu B901 (rozcieńczenie 1/5 roztworu wyjściowego o mianie 108,15 CCID50/ml).
Po ekspozycji, cielęta obserwowano pod kątem objawów klinicznych (ustalenie oceny klinicznej). Codziennie pobierano wymazy z nozdrzy w celu zmierzenia ilości wirusa wydalanego po ekspozycji. Na koniec, pobierano próbki krwi w D0, D7, D14, D21, D35 i D49 w celu zmierzenia kinetyki poziomu przeciwciał neutralizujących wirusa bydlęcego zapalenia nozdrzy i tchawicy (BHV-1). Wykonano również ELISA na przeciwciała przeciwko BHV-1 w celu określenia izotypów IgG1 i IgG2, w surowicy świń szczepionych i nie szczepionych.
P r zyk ł a d 24: Zastosowanie u psów
Skuteczność szczepionki plazmidowej połączonej z karbomerem badano na modelu szczepienia/ekspozycji na chorobę Carre (CDV). Badaną szczepionkę stanowiła mieszanina 2 plazmidów, pAB044 (przykład 18) i pAB036 (przykład 19), zawierających i wyrażających, odpowiednio, geny HA i F wirusa CDV. Mieszaninę połączono z karbomerem.
Protokół szczepienia/ ekspozycji wyglądał następująco:
Grupa Liczba psów Szczepionka Rozcieńczalnik Dawka
A 6 pAB036 + pAB041 roztwór soli 2x 200 mg
B 6 pAB036 + pAB041 Carbopol® 974P 2x 200 mg
C 6 Eurican --- 1x dawka zalecana
D kontrola 6 --- --- ---
Psy w A, B i C szczepiono w dniu D0 i D28 drogą domięśniową. Psy w grupie A i B, do każdego szczepienia wstrzyknięcie roztworu zawierającego 400 mg w sumie (2 x 200 mg) w objętości 1ml.
Psy w grupie C szczepiono szczepionką Eurican (CHPPI2), która jest szczepionką sprzedawaną przez Merial, Francja. Jedna dawka zalecana przez producenta zawiera około 104 pfu szczepu Onderstepoort CDV, jak również wartościowości przeciwko zapaleniu wątroby Rubarth'a, psiej parwowirozie i wirusowi paragrypy typu 2.
Ekspozycję przeprowadzono w dniu D49 przez domózgowe podanie rozcieńczenia 1/10 szczepu ekspozycyjnego CDV „Synder-Hill (partia wytworzona i dostarczona przez USDA, USA).
Obserwację kliniczną przeprowadzano codziennie przez 21 dni po ekspozycji w celu rejestrowania objawów (stan ogólny, objawy oczno-nosowe, objawy ze strony układu pokarmowego, objawy neurologiczne, temperatura) (rejestrowanie zgodne z zasadami Farmakopei Europejskiej). Psy doświadczalne również codziennie ważono.
Ochronę oceniano według następujących kryteriów:
- średnia ocena kliniczna dla każdej z grup,
- poziom wiremii CDV po ekspozycji (pomiar ilości wirusa w limfocytach w D56, D61, D66, D70),
PL 194 348 B1
- liczba krwinek w próbkach krwi zebranych w D48, D54, D56, D59, D63i D70 (tzn. -1, 5, 7, 10, 14i 21 dni po ekspozycji),
- ciężar ciała po ekspozycji.
Dla wszystkich tych kryteriów, średni poziom dla każdej grupy porównywano ze sobą nawzajem oraz ze średnim poziomem grupy kontrolnej.
Próbki krwi pobrane w dniu D0, D14, D28, D56 i D70 w celu miareczkowania przeciwciał testem ELISA oraz przeciwciał neutralizujących wirusa choroby Carre.

Claims (16)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Szczepionka DNA, znamienna tym, że obejmuje (i) nagi plazmidowy DNA obejmujący i wyrażający in vivo polinukleotyd kodujący antygenowy peptyd, korzystnie gen czynnika patogennego; oraz (ii) przynajmniej jeden adiuwant wybrany z grupy obejmującej polimery kwasu akrylowego albo metakrylowego oraz kopolimery bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych.
  2. 2. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że jako adiuwant zawiera polimer kwasu akrylowego albo metakrylowego usieciowany eterem polialkenylowym cukru albo polialkoholu.
  3. 3. Szczepionka według zastrz. 2, znamienna tym, że polimer jest usieciowany allilo-sacharozą albo allilo-pentaerytritolem.
  4. 4. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że obejmuje, jako adiuwant, kopolimer bezwodnika maleinowego i etylenu, usieciowany, przykładowo, eterem diwinylowym.
  5. 5. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że zawiera związek będący adiuwantem w ilości 0,01% do 2% wag./obj.
  6. 6. Szczepionka według zastrz. 5, znamienna tym, że zawiera związek będący adiuwantem w ilości 0,06% do 1% wag./obj., korzystnie, 0,1% do 0,6% wag./obj.
  7. 7. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że obejmuje nagi plazmidowy DNA zawierającyi wyrażający sekwencję patogenu świni, konia, psa, bydła, kota albo ptaków.
  8. 8. Szczepionka według zastrz. 7, znamienna tym, że obejmuje przynajmniej jedną sekwencję patogenu wybranego z następującej grupy:
    - wirus choroby Aujeszky'ego,
    - wirus grypy świń,
    - wirus zespołu oddechowo-rozrodczego świń,
    - wirus parwowirozy świń,
    - wirus cholery świń,
    - Actinobacillus pleuropneumoniae,
    - wirus zapalenia nosa i płuc koni,
    - wirus grypy koni,
    - Clostridium tetani,
    - wschodni wirus zapalenia mózgu,
    - zachodni wirus zapalenia mózgu,
    - wenezuelski wirus zapalenia mózgu,
    - B. burgdorferi,
    - wirus psiej zarazy,
    - psi parwowirus,
    - psi koronawirus,
    - psi wirus herpes,
    - wirus wścieklizny,
    - wirus herpes typu 1 albo 5 bydła,
    - bydlęcy wirus oddechowy,
    - bydlęcy pestiwirus,
    - bydlęcy wirus paragrypy typu 3,
    - wirus białaczki kotów,
    - wirus panleukopenii kotów,
    - wirus zakaźnego zapalenia otrzewnej kotów,
    - koci wirus herpes,
    - koci wirus kalciwirozy,
    PL 194 348 B1
    - koci wirus niedoboru odporności,
    - wirus choroby Marek'a,
    - wirus choroby Newcastle,
    - wirus choroby Gumboro,
    - wirus zakaźnego zapalenia oskrzeli ptaków,
    - wirus zakaźnej anemii ptaków,
    - wirus zakaźnego zapalenia krtani i tchawicy,
    - wirus leukozy ptaków,
    - ptasi pneumowirus,
    - wirus ptasiej grypy.
  9. 9. Zastosowanie związku wybranego z grupy obejmującej polimery kwasu akrylowego albo metakrylowego i kopolimery bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylowej, jak określone w zastrz. 1, jako adiuwanta w szczepionce DNA zawierającej i wyrażającej in vivo heterologiczną sekwencję nukleotydową.
  10. 10. Szczepionka DNA, znamienna tym, że obejmuje (i) nagi plazmidowy DNA obejmujący i wyrażający in vivo polinukleotyd kodujący antygenowy polipeptyd, który obejmuje antygen wirusa końskiego zapalenia nosa i płuc, wirusa końskiej grypy, choroby Aujeszky'ego, zakaźnego zapalenia nozdrzy i tchawicy u bydła (IBR), herpes wirusa bydła lub choroby Carre, i (ii) przynajmniej jeden adiuwant obejmujący karbopol.
  11. 11. Szczepionka według zastrz. 10, znamienna tym, że zawiera adiuwant w ilości 0,01% do 2% wag./obj.
  12. 12. Szczepionka według zastrz. 11, znamienna tym, że zawiera adiuwant w stężeniu 0,06% do 1% wag./obj.
  13. 13. Szczepionka według zastrz. 10, znamienna tym, że nagi plazmidowy DNA jest w formie kolistej, przy czym plazmid dodatkowo obejmuje miejsce inicjacji replikacji, promotor i sekwencję terminującą transkrypcję.
  14. 14. Zastosowanie karbopolu jako adiuwanta w szczepionce, którą jest plazmidowy DNA zawierający i wyrażający in vivo polinukleotyd kodujący antygenowy peptyd, który obejmuje antygen wirusa końskiego zapalenia nosa i płuc, wirusa końskiej grypy, choroby Aujeszky'ego, zakaźnego zapalenia nozdrzy i tchawicy u bydła (IBR), bydlęcego wirusa herpes lub choroby Carre (CDV).
  15. 15. Zastosowanie według zastrz. 14, znamienne tym, że karbopol występuje w szczepionce w ilości od 0,01% do 2% wag./obj.
  16. 16. Zastosowanie według zastrz. 14, znamienne tym, że karbopol występuje w szczepionce w stężeniu od 0,06% do 1% wag./obj.
PL99343602A 1998-04-03 1999-03-22 Szczepionki DNA i zastosowanie polimerów kwasu akrylowego albo metakrylowego oraz kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylowej oraz zastosowanie karbopolu PL194348B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9804409A FR2776928B1 (fr) 1998-04-03 1998-04-03 Vaccins adn adjuves
PCT/FR1999/000666 WO1999051269A1 (fr) 1998-04-03 1999-03-22 Vaccins adn adjuves

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL343602A1 PL343602A1 (en) 2001-08-27
PL194348B1 true PL194348B1 (pl) 2007-05-31

Family

ID=9525029

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL99343602A PL194348B1 (pl) 1998-04-03 1999-03-22 Szczepionki DNA i zastosowanie polimerów kwasu akrylowego albo metakrylowego oraz kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnej alkenylowej oraz zastosowanie karbopolu

Country Status (17)

Country Link
US (1) US7163926B1 (pl)
EP (1) EP1066055B1 (pl)
JP (1) JP2002510651A (pl)
AR (1) AR037062A1 (pl)
AT (1) ATE353670T1 (pl)
AU (1) AU744964B2 (pl)
BR (1) BR9909342A (pl)
CA (1) CA2327389C (pl)
CY (1) CY1108013T1 (pl)
DE (1) DE69935136T2 (pl)
DK (1) DK1066055T3 (pl)
ES (1) ES2283105T3 (pl)
FR (1) FR2776928B1 (pl)
PL (1) PL194348B1 (pl)
PT (1) PT1066055E (pl)
WO (1) WO1999051269A1 (pl)
ZA (1) ZA992478B (pl)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2804026B1 (fr) * 2000-01-21 2004-06-11 Merial Sas Vaccination contre l'herpesvirose canine et vaccins
US6551598B2 (en) 2000-01-21 2003-04-22 Merial Vaccination against canine herpesvirosis and vaccines therefor
EP1474153A4 (en) * 2001-12-14 2005-12-14 Genetronics Inc PARTICLE-ASSISTED IMMUNIZATION METHODS BASED ON THE USE OF A PULSE ELECTRIC FIELD
US11865172B2 (en) 2005-04-21 2024-01-09 University Of Florida Research Foundation, Inc. Materials and methods for respiratory disease control in canines
US7959929B2 (en) 2005-04-21 2011-06-14 University Of Florida Research Foundation, Inc. Materials and methods for respiratory disease control in canines
US7682619B2 (en) 2006-04-06 2010-03-23 Cornell Research Foundation, Inc. Canine influenza virus
UA100370C2 (uk) 2006-12-11 2012-12-25 Мериал Лимитед Спосіб вакцинації птахів проти salmonella
CL2008001806A1 (es) 2007-06-20 2008-09-05 Wyeth Corp Composicion de vacuna en emulsion agua en aceite que comprende un antigeno y un adyuvante en la fase acuosa; y metodo de elaboracion.
GB0805356D0 (en) * 2008-03-25 2008-04-30 Isis Innovation Vaccine adjuvant composition
BRPI0915605B8 (pt) 2008-05-08 2021-09-08 The Government Of The Us Secretary Of The Dept Of Healt & Human Services Vacina de leishmania usando imunógeno salivar de mosca tipo borrachudo
KR101719005B1 (ko) * 2008-10-24 2017-03-22 메리얼 인코포레이티드 아프리카 마역 바이러스에 대한 백신
WO2013012446A1 (en) 2011-07-20 2013-01-24 Merial Limited Recombinant feline leukemia virus vaccine containing optimized feline leukemia virus envelope gene
WO2013106558A1 (en) 2012-01-10 2013-07-18 Merial Limited Lipid based adjuvants for dna - plasmid vaccines
ES2711878T3 (es) 2012-03-20 2019-05-08 Merial Inc Vacuna contra el virus del herpes equino 1 recombinante que contiene glicoproteína C mutada y usos de la misma
AU2013308623B2 (en) 2012-08-30 2017-03-02 Merial, Inc. Hyperbaric device and methods for producing inactivated vaccines and for refolding/solubilizing recombinant proteins
WO2016210097A1 (en) * 2015-06-23 2016-12-29 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Novel equine parvovirus and uses thereof
US11554170B2 (en) 2016-06-17 2023-01-17 Sanofi Pasteur Sa Immunogenic formulations comprising linear or branched polyacrylic acid polymer adjuvants
WO2022011031A1 (en) * 2020-07-07 2022-01-13 Amyris, Inc. Vaccine adjuvants and methods of synthesizing and using the same
CN114272368A (zh) * 2021-12-16 2022-04-05 成都博宠生物科技有限公司 一种猪瘟和猪伪狂犬二联疫苗及其制备方法和应用

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3920811A (en) * 1972-12-22 1975-11-18 Cutter Lab Adjuvant compositions
CA1267087A (en) * 1985-02-14 1990-03-27 Nicolaas Visser Synthetic immunogen
ES2052685T3 (es) * 1987-03-17 1994-07-16 Akzo Nv Metodo para producir un adyuvante libre.
US6004563A (en) * 1990-11-07 1999-12-21 American Home Products Corporation Feline vaccine compositions and method for preventing chlamydia infections or diseases using the same
EP0532833A1 (en) * 1991-05-28 1993-03-24 Miles Inc. Vaccine for equine rhinopneumonitis
DE69333416D1 (de) * 1992-06-01 2004-03-18 Univ Melbourne Parkville Immunologisches Verfahren für die Detektion von Pferde-Herpesvirus Typ 1 und 4 glycoprotein G Antikörper
WO1995011700A1 (en) * 1993-10-29 1995-05-04 Pharmos Corp. Submicron emulsions as vaccine adjuvants
BE1008977A5 (fr) * 1994-12-27 1996-10-01 Solvay Adjuvants pour vaccins.
US6300118B1 (en) * 1995-06-07 2001-10-09 American Home Products Corporation Plasmids comprising a genetically altered feline immunodeficiency virus genome
US5820869A (en) * 1995-06-07 1998-10-13 American Home Products Corporation Recombinant raccoon pox viruses and their use as an effective vaccine against feline immunodeficiency virus infection
FR2751226B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-27 Rhone Merieux Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies du cheval
GB9623051D0 (en) * 1996-11-06 1997-01-08 Schacht Etienne H Delivery of DNA to target cells in biological systems
US6406705B1 (en) * 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
EP0991767A1 (en) * 1997-06-11 2000-04-12 Institut Pasteur Attenuated recombinant mycobacteria useful as immunogens or as vaccine components
WO1999004009A1 (en) * 1997-07-14 1999-01-28 Wisconsin Alumni Research Foundation Method of dna vaccination using dna encoding antigen and encoding il6
GB9726398D0 (en) * 1997-12-12 1998-02-11 Isis Innovation Polypeptide and coding sequences
US6444799B1 (en) * 1997-12-31 2002-09-03 Csl Limited P. gingivalis polynucleotides and uses thereof

Also Published As

Publication number Publication date
PL343602A1 (en) 2001-08-27
ES2283105T3 (es) 2007-10-16
CY1108013T1 (el) 2013-09-04
FR2776928B1 (fr) 2000-06-23
CA2327389C (en) 2011-06-14
EP1066055A1 (fr) 2001-01-10
PT1066055E (pt) 2007-05-31
BR9909342A (pt) 2000-12-12
DE69935136T2 (de) 2007-11-29
WO1999051269A1 (fr) 1999-10-14
FR2776928A1 (fr) 1999-10-08
AU744964B2 (en) 2002-03-07
DK1066055T3 (da) 2007-06-11
DE69935136D1 (de) 2007-03-29
JP2002510651A (ja) 2002-04-09
US7163926B1 (en) 2007-01-16
EP1066055B1 (fr) 2007-02-14
ZA992478B (en) 2000-10-10
AU2844899A (en) 1999-10-25
AR037062A1 (es) 2004-10-20
CA2327389A1 (en) 1999-10-14
ATE353670T1 (de) 2007-03-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2319504C2 (ru) Вакцина собак против бешенства (варианты), способ вакцинации (варианты), набор для вакцинации (варианты)
RU2305559C2 (ru) Вакцина свиней против респираторных патологий и патологий репродукции свиней
US7163926B1 (en) Adjuvant-containing vaccines
US6558674B1 (en) Polynucleotide vaccine formulation against pathologies of the horse
US6376473B1 (en) Polynucleotide vaccine formula in particular against bovine respiratory pathology
PL191551B1 (pl) Kompozycje immunogenne, plazmidy, zastosowania plazmidów, zestawy oraz szczepionki
KR100768114B1 (ko) 애완 동물 및 스포츠용 동물을 위한 ｄｎａ 백신
KR20000065258A (ko) 조류 폴리뉴클레오티드 백신 제제
JP2003502345A5 (pl)
US7078388B2 (en) DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines
PL209304B1 (pl) Szczepionka DNA obejmująca plazmid zawierający kwas nukleinowy kodujący immunogen wirusa opryszczki bydła typu 1 (BHV-1)
AU2005202233B2 (en) DNA vaccines for pets and sport animals
US7294338B2 (en) Polynucleotide vaccine formula against canine pathologies, in particular respiratory and digestive pathologies
AU776827B2 (en) Polynucleotide vaccine formula, particularly for treating bovine respiratory disease