JP2002508181A5 - - Google Patents
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Description
【特許請求の範囲】
【請求項１】 心筋トロポニンＩおよび心筋トロポニンＣを含む一本鎖ポリペプチドをコードする遺伝子配列。
【請求項２】 リンカーポリペプチド配列に対するリンカー遺伝子配列が、心筋トロポニンＩと心筋トロポニンＣの遺伝子配列の間に挟まれている、請求項１記載の遺伝子配列。
【請求項３】 請求項１または２記載の遺伝子配列を含む複製し得るクローニングまたは発現ベヒクル。
【請求項４】 プラスミドである請求項３記載のベヒクル。
【請求項５】 請求項３記載のベヒクルで形質転換された宿主細胞。
【請求項６】 請求項１または２記載の遺伝子配列を含む複製し得るクローニングまたは発現ベヒクルで形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ。
【請求項７】 （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）として同定された請求項２記載の遺伝子配列。
【請求項８】 （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）に示された配列を有する複製し得るクローニングまたは発現ベヒクル。
【請求項９】 請求項８記載のベヒクルで形質転換された宿主細胞。
【請求項１０】 Ｅ．ｃｏｌｉである請求項９記載の宿主細胞。
【請求項１１】 アメリカン タイプ カルチャー コレクションに寄託され、ＡＴＣＣ９８６２０を与えられた請求項１０記載のＥ．ｃｏｌｉ。
【請求項１２】 遺伝子リンカー配列が、約１８から約１５０ヌクレオチドを含む請求項２記載の遺伝子配列。
【請求項１３】 心筋トロポニンＩと心筋トロポニンＣを含む一本鎖ポリペプチド。
【請求項１４】 ペプチドリンカー配列が、心筋トロポニンＩと心筋トロポニンＣの間に挟まれた、請求項１３記載のポリペプチド。
【請求項１５】 （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）に記載のアミノ酸配列を有する請求項１４記載のポリペプチド。
【請求項１６】 ペプチドリンカー配列が約６乃至５０のアミノ酸を有する請求項１３記載のポリペプチド。
【請求項１７】 Ｎ末端において、ペプチドリンカー配列によって、心筋トロポニンＣのＣ末端に結合され、ペプチドリンカーの配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２で特定された、心筋トロポニンＩを含む一本鎖ポリペプチド。
【請求項１８】 一本鎖ポリペプチドがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４で特定された配列を含む一本鎖ポリペプチドである請求項１７記載の一本鎖ポリペプチド。
【請求項１９】 心筋トロポニンＩの配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６で特定された、請求項１７記載の一本鎖ポリペプチド。
【請求項２０】 請求項１７記載の一本鎖ポリペプチドをコードするポリペプチドヌクレオチド。
【請求項２１】 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４で特定された配列を含む一本鎖ポリペプチドをコードする請求項２０記載のポリヌクレオチド。
【請求項２２】 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３で特定された配列を含むポリヌクレオチドである請求項２１記載のポリヌクレオチド。
【請求項２３】 コードされた心筋トロポニンＩの配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６で特定された、請求項２０記載のポリヌクレオチド。
【請求項２４】 トロポニンＩをコードするポリヌクレオチド配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５で特定された配列を含む請求項２３記載のポリヌクレオチド。
【請求項２５】 請求項２０記載のポリヌクレオチドを含むクローニングまたは発現ベクター。
【請求項２６】 請求項２５記載の発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項２７】 Ｅ．ｃｏｌｉである請求項２６記載の宿主細胞。
【請求項２８】 アメリカン タイプ カルチャー コレクションに寄託され、ＡＴＣＣ９８６２０を与えられた請求項２７記載のＥ．ｃｏｌｉ。
【請求項２９】 請求項１７記載の一本鎖ポリペプチドを含むトロポニンＩ測定用の対照またはキャリブレーター組成物。
【請求項３０】 試料中のトロポニンＩを定量するための方法であって、以下のステップを含む方法：
ａ） 標準として請求項１７記載の一本鎖トロポニンＩの既知量を検出し、
ｂ） 試料中のトロポニンＩの未知の量を検出し、
ｃ） 試料中のトロポニンＩの未知の量を、標準としての一本鎖ポリペプチドの既知の量で補正する。
【請求項１】 心筋トロポニンＩおよび心筋トロポニンＣを含む一本鎖ポリペプチドをコードする遺伝子配列。
【請求項２】 リンカーポリペプチド配列に対するリンカー遺伝子配列が、心筋トロポニンＩと心筋トロポニンＣの遺伝子配列の間に挟まれている、請求項１記載の遺伝子配列。
【請求項３】 請求項１または２記載の遺伝子配列を含む複製し得るクローニングまたは発現ベヒクル。
【請求項４】 プラスミドである請求項３記載のベヒクル。
【請求項５】 請求項３記載のベヒクルで形質転換された宿主細胞。
【請求項６】 請求項１または２記載の遺伝子配列を含む複製し得るクローニングまたは発現ベヒクルで形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ。
【請求項７】 （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）として同定された請求項２記載の遺伝子配列。
【請求項８】 （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）に示された配列を有する複製し得るクローニングまたは発現ベヒクル。
【請求項９】 請求項８記載のベヒクルで形質転換された宿主細胞。
【請求項１０】 Ｅ．ｃｏｌｉである請求項９記載の宿主細胞。
【請求項１１】 アメリカン タイプ カルチャー コレクションに寄託され、ＡＴＣＣ９８６２０を与えられた請求項１０記載のＥ．ｃｏｌｉ。
【請求項１２】 遺伝子リンカー配列が、約１８から約１５０ヌクレオチドを含む請求項２記載の遺伝子配列。
【請求項１３】 心筋トロポニンＩと心筋トロポニンＣを含む一本鎖ポリペプチド。
【請求項１４】 ペプチドリンカー配列が、心筋トロポニンＩと心筋トロポニンＣの間に挟まれた、請求項１３記載のポリペプチド。
【請求項１５】 （ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）に記載のアミノ酸配列を有する請求項１４記載のポリペプチド。
【請求項１６】 ペプチドリンカー配列が約６乃至５０のアミノ酸を有する請求項１３記載のポリペプチド。
【請求項１７】 Ｎ末端において、ペプチドリンカー配列によって、心筋トロポニンＣのＣ末端に結合され、ペプチドリンカーの配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２で特定された、心筋トロポニンＩを含む一本鎖ポリペプチド。
【請求項１８】 一本鎖ポリペプチドがＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４で特定された配列を含む一本鎖ポリペプチドである請求項１７記載の一本鎖ポリペプチド。
【請求項１９】 心筋トロポニンＩの配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６で特定された、請求項１７記載の一本鎖ポリペプチド。
【請求項２０】 請求項１７記載の一本鎖ポリペプチドをコードするポリペプチドヌクレオチド。
【請求項２１】 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４で特定された配列を含む一本鎖ポリペプチドをコードする請求項２０記載のポリヌクレオチド。
【請求項２２】 ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３で特定された配列を含むポリヌクレオチドである請求項２１記載のポリヌクレオチド。
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【請求項２４】 トロポニンＩをコードするポリヌクレオチド配列がＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５で特定された配列を含む請求項２３記載のポリヌクレオチド。
【請求項２５】 請求項２０記載のポリヌクレオチドを含むクローニングまたは発現ベクター。
【請求項２６】 請求項２５記載の発現ベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項２７】 Ｅ．ｃｏｌｉである請求項２６記載の宿主細胞。
【請求項２８】 アメリカン タイプ カルチャー コレクションに寄託され、ＡＴＣＣ９８６２０を与えられた請求項２７記載のＥ．ｃｏｌｉ。
【請求項２９】 請求項１７記載の一本鎖ポリペプチドを含むトロポニンＩ測定用の対照またはキャリブレーター組成物。
【請求項３０】 試料中のトロポニンＩを定量するための方法であって、以下のステップを含む方法：
ａ） 標準として請求項１７記載の一本鎖トロポニンＩの既知量を検出し、
ｂ） 試料中のトロポニンＩの未知の量を検出し、
ｃ） 試料中のトロポニンＩの未知の量を、標準としての一本鎖ポリペプチドの既知の量で補正する。
一本鎖トロポニンＩ−トロポニンＣポリペプチドを発現するＥ．ｃｏｌｉ株は１９９７年１２月１８日、アメリカン タイプ カルチャー コレクションに寄託され、ＡＴＣＣ９８６２０を与えられた。
実施例３
一本鎖トロポニンＩ−Ｃポリペプチドの安定性
トロポニンＩを含む３つの調製物の安定性を４℃、７日間貯蔵の間、行った。調製物は、（１）標準法で調製した組換えトロポニンＩ；（２）組換えトロポニンＩおよび組換えＣの非共有結合複合体、および（３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に示すような、間に挟まれたリンカーペプチドを有するトロポニンＩおよびトロポニンＣを含む一本鎖ポリペプチドであった。組換えトロポニンＩおよび組換えトロポニンＣの非共有結合複合体は、米国特許５，８３４，２１０号および６，０６０，２７８号明細書記載の方法によって調製された。簡単に云うと、ヒト心筋トロポニンＣおよび修飾トロポニンＩをＥ．ｃｏｌｉで発現させた。トロポニンＩは、その発現を増加させるために、６つの付加的Ｎ末端アミノ酸残基と組替え産物として遺伝子工学処理した。尿素の存在下、修飾トロポニンＩは、トロポニンＣ、ＣａＣｌ２およびＭｇＣｌ２と結合させた、そしてトロポニンＩ−トロポニンＣ複合体の形成を促進するためゆっくりと振とうした。
一本鎖トロポニンＩ−Ｃポリペプチドの安定性
トロポニンＩを含む３つの調製物の安定性を４℃、７日間貯蔵の間、行った。調製物は、（１）標準法で調製した組換えトロポニンＩ；（２）組換えトロポニンＩおよび組換えＣの非共有結合複合体、および（３）ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４に示すような、間に挟まれたリンカーペプチドを有するトロポニンＩおよびトロポニンＣを含む一本鎖ポリペプチドであった。組換えトロポニンＩおよび組換えトロポニンＣの非共有結合複合体は、米国特許５，８３４，２１０号および６，０６０，２７８号明細書記載の方法によって調製された。簡単に云うと、ヒト心筋トロポニンＣおよび修飾トロポニンＩをＥ．ｃｏｌｉで発現させた。トロポニンＩは、その発現を増加させるために、６つの付加的Ｎ末端アミノ酸残基と組替え産物として遺伝子工学処理した。尿素の存在下、修飾トロポニンＩは、トロポニンＣ、ＣａＣｌ２およびＭｇＣｌ２と結合させた、そしてトロポニンＩ−トロポニンＣ複合体の形成を促進するためゆっくりと振とうした。
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