JP2002121141A - 機能性素材、ｓｏｄ作用剤、血圧降下剤、血栓溶解剤及びその製造方法並びにその製造方法に用いる菌株 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 豆類煮汁を培養して得られ、優れた血栓溶解
作用、ＳＯＤ作用及びＡＣＥ作用を有する機能性素材及
びその製造方法並びにその製造方法に用いる菌株を提供
する。 【解決手段】 殺菌した大豆煮汁に菌株ＴＯＹＯ−１１
〜１３（受託番号；ＦＥＲＭ Ｐ−１７９１１号〜１７
９１３号）を植菌し、振盪培養を行って得られた培養物
を遠心分離し、得られた上澄液である機能性素材につい
て、血栓溶解活性、ＳＯＤ活性及びＡＣＥ阻害活性を調
べたところ、ＳＯＤ活性は３２．７〜３７．２％、ＡＣ
Ｅ阻害活性は９２．０〜９７．２％、及び血栓溶解活性
が２５．０ＦＵ／ｇ以上と優れた血栓溶解活性、ＳＯＤ
作用及びＡＣＥ阻害作用を示し、また、納豆の官能評価
の総合は４〜５であり、極めて良好な風味と性状（特に
糸引き性）を示した。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、血栓溶解作用、Ｓ
ＯＤ作用及びＡＣＥ阻害作用を有する機能性素材及びそ
の製造方法並びにその製造方法に用いる菌株に関し、更
に詳しくは、穀物抽出物、特に豆類煮汁を納豆菌又は枯
草菌により発酵培養することにより得られ、優れた血栓
溶解作用、ＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻害作用を有すると共
に、嗜好性にも優れ、安価に得られる機能性素材及びそ
の製造方法並びにその製造方法に用いる菌株に関する。

【０００２】

【従来の技術】スーパーオキシドジスムターゼ（以下、
「ＳＯＤ」という。）は、酸素分子の１電子還元で生成
するスーパーオキシドラジカル（Ｏ_２ ⁻）の不均化反応
を拡散律速に近い速さで触媒し、細胞内のＯ_２ ⁻濃度を
低下させる酵素である。Ｏ_２ ⁻に代表される活性酸素種
は、通常、生体内において活性化されたマクロファージ
などの食細胞から産生され、殺菌作用や殺腫瘍作用を示
す。しかし、これらの活性酸素種には選択毒性がなく、
正常細胞にも作用できる結果、生体に対して種々の障害
も引き起こすことが知られている。例えば、脂質の過酸
化による膜の損傷、タンパク質の酸化修飾によるタンパ
ク質の構造変化、ＤＮＡの切断等の結果、細胞に障害作
用を示し、様々な疾病の原因ともなることが明らかにさ
れている。

【０００３】従って、Ｏ_２ ⁻の除去酵素であるＳＯＤ
は、生体を活性酸素種から守るために存在するものであ
り、この活性酸素種を起因として生じると考えられる病
気等に有効であるとの観点から、近年、その反応機構、
生理機構等が研究されている〔「活性酸素−生物での生
成・消去・作用の分子機構」（新装版２刷、共立出版株
式会社発行、中野稔ら編著）２２３〜２３０頁）〕。ま
た、癌細胞ではＳＯＤ活性が低いという事実があり、更
に、ＳＯＤと発癌との直接因果関係は明らかではない
が、ＳＯＤ又はＳＯＤ様物質を癌細胞に注入すると、増
殖を抑えるという報告もある（同６４頁）。安全で且つ
ＳＯＤ作用（活性酸素濃度を減少させる作用のみなら
ず、これに起因して生じると考えられる種々の病気の予
防、改善の作用をも含む。）を有し、食品等に用いられ
るものがあれば、人の健康及び美容にとって非常に有用
であり、その必要性は極めて大きい。従来、このような
観点から、生体内において安全な天然物を主成分とし、
ＳＯＤ作用と同様の作用を有するものとして、例えば、
米糠・大豆発酵抽出物に緑茶抽出エキスを添加した活性
酸素抑制組成物及び血圧抑制剤が開発されている（特公
平８−４０号公報）。

【０００４】腎臓の傍糸球体紬胞から分泌されるレニン
は血中に存在し、これが血中のα２グロブリン画分に存
在するアンギオテンシノーゲンを加水分解することによ
り、アミノ酸１０残基からなるアンギオテンシンＩを生
成する。そして、このアンギオテンシンＩは、更にアン
ギオテンシンＩ変換酵素（以下、「ＡＣＥ」という。）
により加水分解されてアンギオテンシンＩＩを生成す
る。このアンギオテンシンＩＩは、副腎皮質からのアル
ドステロンの分泌を促進して、腎尿細管からのナトリウ
ムの再吸収を促進し、循環血液量を増加させると共に、
血管平滑筋を収縮させて血圧を上昇させる。このような
レニン−アンギオテンシン−アルドステロン昇圧系に作
用して、血圧の上昇を抑制する研究が進められた結果、
ＡＣＥの作用を阻害して血庄の上昇抑制をする薬剤とし
て、従来からカプトプリル等のＡＣＥ阻害剤が開発され
ている。

【０００５】高血圧対策には、上記ＡＣＥ阻害剤のよう
な降圧薬による薬物療法も重要であるが、同時に運動療
法及び食生活の改善などの生活習慣の改善が不可欠であ
る。そこで、最近は医食同源の考えの下、健康によい食
品を摂取することにより、高血圧の予防・改善を図るこ
とが行われ、このような観点から、食品あるいは食用原
料よりＡＣＥ阻害作用を有する成分を抽出、分離する研
究が進められている。そして、かつお節由来のペプチ
ド（医学のあゆみＶｏｌ．２９別冊Ｐ３０−３１）、発
酵乳カゼイン由来のペプチド(Ｊ．Ｄａｉｒｙ Ｓｃ
ｉ．Ｖｏｌ．７８，Ｎｏ．４，１９９５)、清酒とそ
の副産物由来のペプチド（日本農芸化学会誌 Ｖｏｌ．
６６，Ｎｏ．７，ｐｐ１０８１−１０８７，１９９
２）、シルクタンパク質由来のペプチド（特開平１０
−２９８１９９号公報）がＡＣＥ阻害活性を有すること
が知られている。

【０００６】そして、従来より、かかるＳＯＤ作用を有
する物質やＡＣＥ阻害作用を有する物質を利用して、特
定保健用食品や栄養補助食品が製造・販売されている。
そして上記のように、ＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻害作用
は、最近話題になっている生活習慣病における食生活の
予防因子として注目されているものであることから、そ
の両方の性質を備えた素材があれば、ＳＯＤ作用及びＡ
ＣＥ阻害作用の両方の作用により、更に優れた生活習慣
病の改善効果を奏することから好ましい。

【０００７】また、高血圧の原因としては、血管内部に
おいて血栓が生じることにより、血管内腔が狭窄するこ
とも挙げられる。かかる血栓症は高血圧の原因となるだ
けでなく、心筋梗塞、肺閉塞症等の生命にかかわる重大
な疾病を引き起こすおそれもある。従来より、血栓性疾
患の治療薬として、血栓の主成分であるフィブリン分解
に働く線溶酵素であるウロキナーゼ、ストレプトキナー
ゼ及び組織プラスミノーゲンアクチベーター等が用いら
れているが、これらはいずれも注射薬として開発された
ものであり、いずれも極めて高価であり、大量を長時間
点滴しなければならないという問題がある。しかも、ス
トレプトキナーゼは微生物由来で長時間静注すると出
血、ショックなどの副作用の問題が指摘されている。

【０００８】更に、一般にペプチド系の素材の場合、タ
ンパク質の加水分解によって疎水性のアミノ酸に富む苦
味ペプチドが露出してくることにより苦みを呈する結
果、特定保健用食品や栄養補助食品として利用する場合
に嗜好性が損なわれるおそれがあるという問題がある。
その苦味を低減するために、従来は各種食品素材の添
加、酵素分解など様々な工夫がなされているが十分とは
いえない。そこで、従来より、安価に得られ、血栓溶解
作用、ＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻害作用を有すると共に、
嗜好性にも優れた機能性素材が求められていた。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記実情に鑑
みてなされたものであり、穀物抽出物、特に豆類煮汁を
納豆菌又は枯草菌により発酵培養することにより得ら
れ、優れた血栓溶解作用、ＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻害作
用を有すると共に、嗜好性にも優れ、安価に得られる機
能性素材及びその製造方法並びにその製造方法に用いる
菌株を提供することを目的とする。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明者らは以前、米糠
類及び大豆類を含む培地に枯草菌を接種し、培養させ、
ろ過して製造した発酵液に活性酸素を抑制する効果があ
ることを発見し（特開平６−２８４８７２号公報）、ま
た、特定領域のｐＨの米糠類、大豆類を含む培地に枯草
菌を又は納豆菌を接種し、培養させ、ろ過して製造した
発酵液に、血中アルコール濃度を減少させる効果を見出
している（特開平３−２７２６５７号公報）。そこで、
引き続き発酵物と生理的作用との関係について検討した
ところ、納豆菌株及び類縁菌株を用いて穀物抽出物の発
酵培養を行うことにより、嗜好性を満足させると共に、
血栓溶解作用、ＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻害作用を有する
機能性素材を得ることができ、また、特定の菌株を使用
して発酵培養を行うことにより、さらに優れた血栓溶解
作用、ＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻害作用を有する機能性素
材が得られることを見い出して本発明を完成するに至っ
た。

【００１１】本発明の機能性素材は、穀物抽出物を含む
培地に納豆菌又は枯草菌を接種して発酵培養することに
より得られ、且つＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻害活性を有す
ることを特徴とする。本発明の機能性素材は、ＳＯＤ作
用及びＡＣＥ阻害作用の両者を併有する発酵培養物を含
有していることから、摂取することにより、ＳＯＤ作用
及びＡＣＥ阻害作用の両者を発揮することができる。ま
た、本発明の機能性素材は、血栓溶解作用をも有するも
のとすることができる。これにより、上記ＳＯＤ作用及
びＡＣＥ阻害作用と相俟って、更に高血圧症を改善する
と共に、血栓症が引き起こす心筋梗塞等の他の疾患をも
防止することができるので好ましい。よって、本発明の
機能性素材は、ＳＯＤ作用剤、血圧降下剤又は血栓溶解
剤として好適に用いることができる。ここで、「血栓溶
解作用」とは、フィブリン（繊維素）を分解する作用を
云う。

【００１２】本発明の機能性素材において、上記「穀物
抽出物」は、原料となる穀物を抽出することにより得ら
れるものであり、例えば、米糠類（米胚芽、脱脂米胚
芽、米糠及び脱脂米糠糖）、豆類（脱脂豆、キナ粉、豆
粉、豆カス及びこれらの加水分解物等）等の抽出物が挙
げられる。この中で、特に豆類抽出液を用いると、優れ
たＳＯＤ活性及びＡＣＥ阻害活性の両者を併有すると共
に、嗜好性に優れた機能性素材が得られるので好まし
く、更に、豆類煮汁を用いると、従来は廃棄処分されて
いた豆類煮汁廃液の有効利用を図ることもできるので好
ましい。また、本発明の機能性素材において、上記「穀
物抽出物」としては、抽出液をろ過したままの液でもよ
いし、これを濃縮した濃縮液でもよい。その他にも、凍
結乾燥等の公知の方法により溶媒を除去した固形物や粉
末化した粉末物でもよい。また、上記「穀物抽出物」を
得るための抽出方法、抽出条件については特に限定はな
い。例えば、抽出物の品質を維持できる限り、不純物除
去等の前処理をしてもよい。抽出溶媒としては、水又は
熱水の他、エタノール、酢酸エチル、ｎ−ヘキサン等の
有機溶媒や、これらの有機溶媒と水又は熱水との混合溶
媒等を用いることができる。

【００１３】本発明の機能性素材の上記「培地」として
は、上記納豆菌又は枯草菌が増殖できるものであれば特
に制限はない。通常は液体培地であるが、固形培地であ
ってもかまわない。また、上記「穀物抽出物」をそのま
ま培地として用いてもよい。

【００１４】本発明の機能性素材において、上記「納豆
菌」及び「枯草菌」は、菌学的に「納豆菌」及び「枯草
菌」に属するものであればよく、市販されている一般的
な納豆菌や枯草菌を用いることができるが、自然的又は
ニトロソグアニジン等の化学物質、Ｘ線、紫外線等によ
る人為的変異手段により得られ、菌学的性質が変異した
納豆菌や枯草菌の変異株であっても、ＳＯＤ作用及びＡ
ＣＥ阻害作用を有する機能性素材を産生する性質を失わ
ない限り利用することができる。この中で、納豆菌（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ Ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｎａｔｔｏ）に属
する納豆菌ＴＯＹＯ−１１（受託番号；ＦＥＲＭ Ｐ−
１７９１１号 以下「ＴＯＹＯ−１１」という。）、納
豆菌ＴＯＹＯ−１２（受託番号；ＦＥＲＭ Ｐ−１７９
１２号以下「ＴＯＹＯ−１２」という。）、又は納豆菌
ＴＯＹＯ−１３（受託番号；ＦＥＲＭ Ｐ−１７９１３
号 以下「ＴＯＹＯ−１３」という。）を用いると、よ
り優れた機能性素材が得られるので好ましい。

【００１５】本発明の他の機能性素材は、穀物抽出物を
含む培地にＴＯＹＯ−１１、ＴＯＹＯ−１２、又はＴＯ
ＹＯ−１３を接種して発酵培養することにより得られ、
且つ血栓溶解作用を有することを特徴とする。本発明の
他の機能性素材は、天然の食品素材を使用しているた
め、従来より用いられているウロキナーゼ等と比べて、
安価で且つ安全に血栓溶解作用を奏することができ、日
常の血栓予防用の機能性素材として利用できるので好ま
しい。よって、本発明の他の機能性素材は血栓溶解剤と
して好適に用いることができる。本発明の他の機能性素
材における上記「穀物抽出物」及び「培地」については
上述の通りである。

【００１６】本発明の機能性素材及び本発明の他の機能
性素材を得るための上記「発酵培養」の方法、条件につ
いては、発酵が行われる特に限定はなく、通常、発酵培
養は通気攪拌を行うことにより行われ、培養温度が４０
〜４５℃程度である。

【００１７】本発明の機能性素材及び本発明の他の機能
性素材の形態については特に限定はなく、水溶液若しく
は原液等の液状の他、吸液性粉末に含浸させた粉末品、
造粒した造粒品、増量剤等他の粉末成分を配合した錠
剤、又はマイクロカプセル等とすることができる。ま
た、本発明の機能性素材及び本発明の他の機能性素材
は、その性質を維持できる限り、他の物質を添加するこ
とができる。例えば、製造における計量を容易にするた
めに、水溶性に富んだコーンスターチ等を添加すること
ができる。即ち、本発明の機能性素材及び本発明の他の
機能性素材には、当該機能性素材だけで構成されるもの
だけでなく、当該機能性素材を含有するものも含まれ
る。

【００１８】本発明の機能性素材は、本発明のＳＯＤ作
用及びＡＣＥ阻害作用を有する機能性素材の製造方法に
示すように、穀物抽出物を含んだ培地に納豆菌又は枯草
菌を接種して発酵培養することにより得られる。また、
本発明の他の機能性素材は、本発明の血栓溶解作用を有
する機能性素材の製造方法に示すように、穀物抽出物を
含む培地にＴＯＹＯ−１１、ＴＯＹＯ−１２、又はＴＯ
ＹＯ−１３を接種して発酵培養することにより得られ
る。この場合、上記穀物抽出液として豆類抽出液、特に
豆類煮汁を用いると、従来は廃棄処分されていた豆類煮
汁廃液の有効利用となるので好ましい。また、本発明の
ＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻害作用を有する機能性素材の製
造方法においては、上記納豆菌として、菌株ＴＯＹＯ−
１１、ＴＯＹＯ−１２又はＴＯＹＯ−１３を用いると、
より優れた機能性素材が得られるので好ましい。更に、
本発明のＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻害作用を有する機能性
素材の製造方法においては、上記のように、得られた機
能性素材が血栓溶解作用を有するものとすることができ
る。

【００１９】本発明の機能性素材の製造方法における発
酵培養の方法、条件については、発酵が行われる特に限
定はなく、通常、発酵培養は通気攪拌を行うことにより
行われ、培養温度が４０〜４５℃程度である。また、上
記「穀物抽出物」、「培地」及び「納豆菌又は枯草菌」
については上述の通りである。

【００２０】本発明の菌株ＴＯＹＯ−１１、ＴＯＹＯ−
１２及びＴＯＹＯ−１３は、いずれも納豆菌（Ｂａｃｉ
ｌｌｕｓ Ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｎａｔｔｏ）に属し、穀
物抽出物、特に豆類抽出液を含む培地で発酵培養を行う
ことにより、特に優れたＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻害作用
を有する機能性素材を生産する能力を有する。本発明の
菌株ＴＯＹＯ−１１、ＴＯＹＯ−１２及びＴＯＹＯ−１
３は、平成１２年６月２１日付けで工業技術院生命工学
工業技術研究所に寄託し、受託番号ＦＥＲＭＰ−１７９
１１号（ＴＯＹＯ−１１）、ＦＥＲＭ Ｐ−１７９１２
号（ＴＯＹＯ−１２）及びＦＥＲＭ Ｐ−１７９１３号
（ＴＯＹＯ−１３）の受託番号を取得している。

【００２１】本発明の菌株ＴＯＹＯ−１１、ＴＯＹＯ−
１２及びＴＯＹＯ−１３は、下記の方法により分離・採
集された。即ち、愛知県大府市周辺の１０軒の農家より
入手した各稲わら１００ｇを約５ｃｍに切断し、無菌生
理食塩水約１０００ｍｌ中に入れて攪拌した後、１００
℃で１０分間沸騰水中で煮沸する。その液を供試菌液と
して０．１ｍｌ採取し、普通寒天平板培地にストリーク
し、３５℃で２４時間培養した。次いで、納豆試験法
（光琳）納豆菌簡易同定法よって、該当する菌コロニー
を採取することにより分離・採集した。

【００２２】本発明の菌株ＴＯＹＯ−１１、ＴＯＹＯ−
１２及びＴＯＹＯ−１３の菌学的性質は、以下に示す納
豆菌の菌学的性質を備え、且つ、実施例の表１の分離菌
５〜７に示すように、ｐＨ４．５〜１０．０と、市販の
納豆菌よりも広いｐＨの範囲で生育が確認されている。
よって、本発明の菌株ＴＯＹＯ−１１、ＴＯＹＯ−１２
及びＴＯＹＯ−１３は、様々なｐＨを有する穀物抽出物
において適用でき、しかも、培地のｐＨを調整すること
により、雑菌等の混入も抑えることができるので好まし
い。

【００２３】＜１＞納豆菌の菌学的性質 （１）形態 短桿菌、０．８〜１．０×２．０〜３．５μ、単一及び
２〜数個連結、運動性あり （２）染色 メチレンブルーで全体に染色、グラム染色陽性 （３）胞子形成 ２４時間以内に形成、０．７〜０．９×１．２〜１．６
μの円筒形 （４）培養基特異性 以下に示す普通寒天培地では生育良好、白色コロニー形
成（偏平、不正円形で周囲不規則）し、粘質物生産培地
（ＧＳＰ培地）では粘質物を形成。 普通寒天培地組成（ｐＨ７．０〜７．４） 肉エキス ５ｇ 寒天 １２〜１５ｇ ペプトン １０ｇ 水 １Ｌ ＮａＣｌ １〜２ｇ 粘質物生産培地（ＧＳＰ培地）組成（ｐＨ７．０） フィトンペプトン １５ｇ グルタミン酸ナトリウム一水和物 １５ｇ サッカロース ３０ｇ ＫＨ_２ＰＯ_４ ２．５ｇ Ｎａ_２ＨＰＯ_４ １．７ｇ ＮａＣｌ ０．５ｇ ＭｇＣｌ_２・７Ｈ_２Ｏ ０．５ｇ ビオチン １００μｇ 寒天 １５ｇ 水 １Ｌ （５）以下に示す蒸煮大豆作成法により得られる蒸煮大
豆にて糸引き性有り。大豆に３倍量の水を加え、２時間
放置後１２１℃で１５分オートクレーブした。滅菌シャ
ーレに適量分取し、菌希釈液を接種する。３５℃で２４
時間培養し、糸引き性を確認する。 （６）生理的性質 生育温度；普通寒天培地上５℃以下５５℃以上で生育
しない。 ｐＨ６．８、５．７で生育 酸素要求性、通性好気性 その他；インドール生成せず、Ｖｏｇｅｓ−Ｐｒｏｓ
ｋａｕｅｒ反応陽性、澱粉加水分解力あり、硝酸から亜
硝酸生成する、カタラーゼ陽性、メチルレッド反応陰
性、７％食塩耐性、ゼラチン、澱粉を加水分解 （７）糖の資化性 グルコース、アラビノース、マンニトール、キシロース
を資化する。 資化性確認培地（ｐＨ７．０） ペプトン ５ｇ 酵母エキス ３ｇ ＮａＣｌ ５ｇ ブロムクレゾールパープル ８ｍｇ 糖 １０ｇ 蒸留水 １Ｌ

【００２４】

【発明の実施の形態】以下、本発明の機能性素材及びそ
の製造方法並びにその製造方法に用いる菌株について、
実施例及び比較例を挙げて具体的に説明する。 （１）納豆菌の単離 愛知県大府市周辺の１０軒の農家より入手した各稲わら
１００ｇを約５ｃｍに切断し、無菌生理食塩水約１００
０ｍｌ中に入れて攪拌した後、１００℃で１０分間沸騰
水中で煮沸する。その液を供試菌液として０．１ｍｌ採
取し、普通寒天平板培地にストリークし、３５℃で２４
時間培養した。次いで納豆試験法（光琳）納豆菌簡易同
定法より該当する菌コロニーを採取した。得られた菌株
を納豆菌の菌学的性質に従い、分離選択を行った。そし
て、納豆菌の菌学的特性と一致した８菌株を単離し、分
離菌１〜８とした。標準品として市販の納豆菌３種類を
市販納豆菌１〜３として用いた。尚、分離菌５は菌株Ｔ
ＯＹＯ−１１であり、分離菌６は菌株ＴＯＹＯ−１２で
あり、分離菌７は菌株ＴＯＹＯ−１３である。

【００２５】また、分離菌１〜８及び市販納豆菌１〜３
が生育できる最高及び最低ｐＨを確認するため、アルカ
リ及び酸性領域での生育確認を以下のように行った。即
ち、肉汁培地を１２１℃で１５分間オートクレーブし、
１０％ＨＣｌ及び１０％ＮａＯＨでｐＨ調整を行い、３
３〜３７℃で培養を行った。生育確認は２４時間又は４
８時間まで行った。その結果を表１に示す。尚、表１
中、括弧内の数値は確認時間を示す。

【００２６】

【表１】

【００２７】（２）試料の調製 単離した上記分離菌１〜８及び市販納豆菌１〜３を用
い、これを普通寒天培地で３５℃、２４時間の条件で培
養を行い、次いで、１２１℃、１５分間の条件で殺菌し
た肉汁培地（上記普通寒天培地組成から寒天を除いた組
成）５ｍｌ入りの試験管に、１白金耳植菌し、３５℃、
２４時間の条件で振盪培養（１８０ｒｐｍ）を行った。
その後、１２１℃、１５分間の条件で殺菌した大豆煮汁
５ｍｌ入りの試験管に、上記上記分離菌１〜８及び市販
納豆菌１〜３の各菌株を最終濃度１×１０^４個／ｍｌと
なるように植菌し、３５℃、２４時間の条件で振盪培養
（１８０ｒｐｍ）を行った。得られた培養物を５０００
ｒｐｍで１０分間遠心分離し、得られた上澄液を本実施
例で用いる試料（実施例１〜８及び比較例１〜３）とし
た。

【００２８】 （３）ＳＯＤ活性及びＡＣＥ阻害活性の測定 上記方法により製造された実施例１〜８及び比較例１〜
３の各試料について、以下に示す方法により、ＳＯＤ活
性及びＡＣＥ阻害活性を測定した。ＳＯＤ活性は、測定
キットとして和光純薬工業製「ＳＯＤテストワコー」
（体外診断用医薬品、承認番号（６３ＡＭ）第０２８５
号）を用いて、ＮＢＴ還元法により測定した。結果は阻
害率％で表示した。尚、表中の菌体名欄の括弧内の記載
は、使用した菌を示す。また、ＡＣＥ阻害活性は、測定
キットとして富士レビオ株式会社製、商品名「ＡＣＥカ
ラー」（体外診断用医薬品、承認番号（６１ＡＭ）４０
６８）を用いて測定した（機器試薬Ｖｏｌ．１０，Ｎ
ｏ．１，ｐｐ７１−７６．１９８７参照）。この測定結
果を以下の表２に示す。尚、表中の菌体名欄の括弧内の
記載は使用した菌を示す。

【００２９】

【表２】

【００３０】（４）納豆の官能検査 上記分離菌１〜８と市販納豆菌１〜３を用いて、以下の
ように納豆（実施例９〜１６及び比較例４〜６）を製造
した。中国産丸大豆をバットに１５０ｇ計り取り、３倍
量程度の水道水４５０ｍｌを加える。そして、これを室
温で２時間放置し、バットごと１２１℃で２０分間オー
トクレーブする。その後、蒸煮した大豆は、無菌的に滅
菌シャーレに２０ｇずつ計量分取した。更に、上記分離
菌１〜８と市販納豆菌１〜３の各菌株を１．５％ペプト
ン水５ｍｌで３５℃にて１０時間振とう培養した後、当
該菌培養液を蒸煮大豆に対し１×１０^４個／ｇとなるよ
う接種した。そして、３７〜４１℃で１８〜２４時間培
養後、４℃にて１晩発酵熟成させた。その後、室温に１
時間放置し官能検査を行った。尚、官能検査は、納豆試
験法（光琳）の官能検査法に従い行った。その評価を以
下の表３に示す。尚、表中の菌体名欄の括弧内の記載は
使用した菌を示す。

【００３１】

【表３】

【００３２】（５）機能性素材の調製 水洗した脱皮大豆１００ｋｇを煮釜煮に入れ、同量の水
を加えて９０℃で約３０分間煮た後に排出される大豆煮
汁（惣菜製造工場における煮豆加工食品の製造工程で排
出される大豆の煮汁。）を納豆菌の培養液として用い
て、機能性素材を調製した。この工程を図１に示す。通
常、煮釜の水は再度使用するので溶出されてくる大豆の
成分は２倍量となる。今回は３回煮出し汁を大豆煮汁と
して使用した。まず、大豆煮汁をろ過し異物を除去す
る。次に１０リットル容積のジャーファーメンターに大
豆煮汁を６リットル入れ１２１℃で１５分殺菌する。次
いで、別途培養した菌株ＴＯＹＯ−１１を接種し、４０
℃で４８時間通気攪拌培養を行う。培養終了後、培養液
を１２０００回転で高速遠心分離して上澄液と菌体固形
物に分離する。そして、上澄液を約１／１０容量まで減
圧濃縮した後、凍結乾燥することにより、実施例１７の
機能性素材（８０ｇ）を得た。また、上記大豆煮汁の代
わりに、エンドウ及びソラマメの混合煮汁を用いて、上
記と同じ方法により、実施例１８の機能性素材を調製し
た。

【００３３】この実施例１７及び１８の各機能性素材に
ついて、上記（３）と同様の方法により、ＳＯＤ活性及
びＡＣＥ阻害活性を測定した。また、比較のために、発
酵前の大豆煮汁並びにエンドウ及びソラマメの混合煮汁
についても同様にＳＯＤ活性及びＡＣＥ阻害活性を測定
した。その結果を以下の表４に示す。

【００３４】

【表４】

【００３５】更に、菌株ＴＯＹＯ−１１を接種し、４０
℃で５日間通気攪拌培養を行うこと以外は上記実施例１
７と同じ方法により、実施例１９の機能性素材（８０
ｇ）を得た。また、上記菌株ＴＯＹＯ−１１の代わりに
菌株ＴＯＹＯ−１２、ＴＯＹＯ−１３を用いて、上記実
施例１９と同じ方法により、実施例２０及び実施例２１
の機能性素材を調製した。そして、上記実施例１９〜２
１の各機能性素材を希釈液（ＣａＳＯ_４・２Ｈ_２Ｏ：
０．３４４ｇ、ＮａＣｌ：０．５８５ｇ、１Ｍ酢酸ナト
リウム［ｐＨ６．０］：２．０ｍｌ、及び１０％Ｔｒｉ
ｔｏｎＸ−１００：０．５ｍｌを混合し、蒸留水にて全
量が１リットルとなるように調製したもの）に溶解し、
適宜希釈することにより、実施例１９〜２１の機能性素
材を含む試料溶液を調製した。

【００３６】上記方法により調製した実施例１９〜２１
の各機能性素材について、以下に示す方法により血栓溶
解活性を測定した。即ち、０．０５Ｍホウ酸緩衝液１．
４ｍｌ及び０．７２％フィブリノーゲン溶液０．４ｍｌ
を量り取り、３７℃の恒温水槽にて５分間加温した後、
２０Ｕ／ｍｌトロンビン溶液０．１ｍｌを加えて攪拌し
た。この液を３７℃にて正確に１０分間放置した後、上
記で調製した実施例１９の試料溶液０．１ｍｌを加え、
５秒間攪拌して３７℃で放置した。そして、試料溶液を
添加してから２０分及び４０分後の５秒間攪拌し、正確
に６０分後、０．２Ｍトリクロロ酢酸溶液２ｍｌを加え
て攪拌し、更に３７℃で２０分間放置した。この液を１
５０００ｇで５分間遠心し、遠心上清を回収し、２７５
ｎｍにおける吸光度（Ａ_Ｔ）を測定した。また、ブラン
クとして、０．０５Ｍホウ酸緩衝液１．４ｍｌ及び０．
７２％フィブリノーゲン溶液０．４ｍｌを量り取り、３
７℃の恒温水槽にて５分間加温した後、２０Ｕ／ｍｌト
ロンビン溶液０．１ｍｌを加えて攪拌した。この液を３
７℃にて正確に１０分間放置した後、０．２Ｍトリクロ
ロ酢酸溶液２ｍｌを加えて攪拌し、更に上記実施例１９
の試料溶液０．１ｍｌを加え、５秒間攪拌し、３７℃で
２０分間放置した。以下は上記と同様に操作し、吸光度
（Ａ_Ｂ）を測定した。また、同様の方法により、実施例
２０及び２１についても吸光度Ａ_Ｔ及びＡ_Ｂの測定を行
った。

【００３７】そして、実施例１９〜２１の機能性素材の
血栓溶解活性は、以下の計算式に準じ、フィブリンユニ
ット（ＦＵ：本操作法において酸不溶性物質を除いた反
応液の２７５ｎｍにおける吸光度を１分間に０．０１増
加させる酵素量を１単位とする。）で表した。その結果
を以下の表５に示す。 Ｎ＝（Ａ_Ｔ−Ａ_Ｂ）×（１／０．０１）×（１／６０）
×（１／０．１）×Ｄ Ｎ：血栓溶解活性（ＦＵ） Ｄ：試料の希釈倍率
（＝２０）

【００３８】

【表５】

【００３９】（６）実施例の効果 表１より、市販納豆菌１及び２ではｐＨ５〜９．５、市
販納豆菌３ではｐＨ４．５〜９．５の範囲で生育可能で
あるのに対し、分離菌１〜３ではｐＨ４．５〜９．５
と、市販納豆菌３と同程度のｐＨで生育可能であり、分
離菌５〜８では、ｐＨ４．５〜１０．５と、市販納豆菌
と比較して若干酸性及びアルカリ性領域において広い範
囲で生育できるという特徴を有することが判る。

【００４０】表２によれば、市販納豆菌１〜３を使用し
た比較例１〜３のＳＯＤ活性は２９．２〜３１．１％、
ＡＣＥ阻害活性は８９．４〜９１．３％であるのに対
し、分離菌１〜８を使用した実施例１〜８のＳＯＤ活性
は３２．０〜３７．２％、ＡＣＥ阻害活性は９１．９〜
９７．２％であり、ＳＯＤ作用とＡＣＥ阻害作用の両者
とも優れていることが判る。特に、菌株ＴＯＹＯ−１１
を用いた実施例５、菌株ＴＯＹＯ−１２を用いた実施例
６及び菌株ＴＯＹＯ−１３を用いた実施例７のＳＯＤ活
性は３２．７〜３７．２％、ＡＣＥ阻害活性は９２．０
〜９７．２％であり、さらにＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻害
作用に優れていることが分かる。

【００４１】表３によれば、市販納豆菌１〜３を使用し
た納豆（比較例４〜６）の官能評価の総合は２〜４であ
るのに対し、分離菌１〜８を使用した納豆（実施例９〜
１６）の官能評価の総合は２〜５と、市販納豆菌に劣ら
ない良好な風味と性状を持つことが分かる。特に、菌株
ＴＯＹＯ−１１を用いた実施例１３、菌株ＴＯＹＯ−１
２を用いた実施例１４及び菌株ＴＯＹＯ−１３を用いた
実施例１５の官能評価の総合は４〜５であり、極めて良
好な風味と性状（特に糸引き性）を持つことが判る。

【００４２】表４によれば、大豆煮汁を使用した機能性
素材である実施例１７のＳＯＤ活性は未発酵時が３５．
４％であるのに対し、発酵後は５７．３％となり、ＡＣ
Ｅ阻害活性も未発酵時が８５．０％であるのに対し、発
酵後は９８．０％となることが判る。また、エンドウ及
びソラマメ混合煮汁を使用した機能性素材である実施例
１８のＳＯＤ活性は未発酵時が２７．７％であるのに対
し、発酵後は３４．４％となり、ＡＣＥ阻害活性も未発
酵時が７１．５％であるのに対し、発酵後は８８．０％
となることが判る。以上の結果より、原料である豆類煮
汁の種類によらず、豆類煮汁で発酵することにより、単
なる豆類煮汁よりも優れたＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻害作
用を併有する機能性素材が得られることが判る。

【００４３】表５より、実施例１９〜２１では、いずれ
も血栓溶解活性が２５．０ＦＵ／ｇ以上の優れた値を示
しており、血栓溶解作用を有することが判る。特に、菌
株ＴＯＹＯ−１１を用いた実施例１９及び菌株ＴＯＹＯ
−１３を用いた実施例２１の血栓溶解活性は、４９．７
及び４７．６ＦＵ／ｇと高く、より血栓溶解作用に優れ
ている機能性素材であることが判る。

【００４４】尚、本発明においては、前記具体的実施例
に示すものに限られず、目的、用途に応じて本発明の範
囲内で種々変更した実施例とすることができる。例え
ば、本発明によって得られた機能性素材は、健康訴求の
機能性食品素材、栄養食品素材、機能性付与化粧品素
材、天然食品添加物、ペット健康飼料素材、家畜飼料添
加物、養殖飼料添加物、園芸用有機質肥料など、その他
様々な機能性素材として利用が可能である。

【００４５】

【発明の効果】本発明の機能性素材によれば、優れたＳ
ＯＤ作用及びＡＣＥ阻害作用を併有すると共に、嗜好性
にも優れていることから、機能性食品素材や栄養食品素
材として摂取することにより、ＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻
害作用の両方の作用により、優れた生活習慣病の改善効
果を奏することができる。また、本発明の機能性素材に
よれば、血栓溶解作用を有することから、日常の血栓予
防用の機能性素材として好適に用いることができ、これ
により、血栓症が引き起こす高血圧等の他の疾患の改善
予防効果を奏することができる。また、本発明の機能性
素材の製造方法によれば、穀物抽出物を原料として、上
記のような優れた作用を有する機能性素材を得ることが
できる。特に、従来は廃棄処分されていた豆類煮汁廃液
を有効に利用することができるので、経済的であると共
に、環境対策面で大きなプラス効果が期待できる。更
に、本発明の菌株を用いると、得られる機能性素材の血
栓溶解作用、ＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻害作用をさらに増
強することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例の（５）機能性素材の調製の行程図であ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 9/12 Ａ６１Ｐ 9/12 39/06 39/06 Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ //(Ｃ１２Ｎ 1/20 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ Ｃ１２Ｒ 1:125） Ｃ１２Ｒ 1:125） (72)発明者 ▲高▼田 敦士 愛知県大府市追分町３丁目89番地 株式会 社東洋発酵内 (72)発明者 塩田 朝夫 愛知県大府市追分町３丁目89番地 株式会 社東洋発酵内 (72)発明者 井澤 俊夫 愛知県大府市追分町３丁目89番地 株式会 社東洋発酵内 (72)発明者 岡田 利孝 愛知県大府市追分町３丁目89番地 株式会 社東洋発酵内 (72)発明者 山下 郁 愛知県大府市追分町３丁目89番地 株式会 社東洋発酵内 Ｆターム(参考） 4B018 MD85 MD88 MD91 ME04 ME06 4B065 AA19X BB26 BB27 CA27 CA41 CA44 4C087 AA01 AA02 AA03 BC65 CA10 NA14 ZA42 ZA54 ZC21 4C088 AB61 AC04 AD21 BA04 CA25 MA02 NA14 ZA42 ZA54 ZC21

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 穀物抽出物を含む培地に納豆菌又は枯草
   菌を接種して発酵培養することにより得られ、且つＳＯ
   Ｄ作用及びＡＣＥ阻害作用を有することを特徴とする機
   能性素材。
2. 【請求項２】 上記穀物抽出物が豆類抽出液である請求
   項１記載の機能性素材。
3. 【請求項３】 血栓溶解作用を有する請求項１又は２記
   載の機能性素材。
4. 【請求項４】 上記納豆菌が納豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
   ＳｕｂｔｉｌｉｓＮａｔｔｏ）ＴＯＹＯ−１１（受託
   番号；ＦＥＲＭ Ｐ−１７９１１号）、納豆菌（Ｂａｃ
   ｉｌｌｕｓ Ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｎａｔｔｏ）ＴＯＹＯ
   −１２（受託番号；ＦＥＲＭ Ｐ−１７９１２号）、又
   は納豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｎａ
   ｔｔｏ）ＴＯＹＯ−１３（受託番号；ＦＥＲＭ Ｐ−１
   ７９１３号）である請求項１乃至３のいずれかに記載の
   機能性素材。
5. 【請求項５】 穀物抽出物を含む培地に納豆菌（Ｂａｃ
   ｉｌｌｕｓ Ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｎａｔｔｏ）ＴＯＹＯ
   −１１（受託番号；ＦＥＲＭ Ｐ−１７９１１号）、納
   豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｎａｔｔ
   ｏ）ＴＯＹＯ−１２（受託番号；ＦＥＲＭ Ｐ−１７９
   １２号）、又は納豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｓｕｂｔｉ
   ｌｉｓ Ｎａｔｔｏ）ＴＯＹＯ−１３（受託番号；ＦＥ
   ＲＭＰ−１７９１３号）を接種して発酵培養することに
   より得られ、且つ血栓溶解作用を有することを特徴とす
   る機能性素材。
6. 【請求項６】 上記穀物抽出物が豆類抽出液である請求
   項５記載の機能性素材。
7. 【請求項７】 請求項１乃至４のいずれかに記載の機能
   性素材を含有することを特徴とするＳＯＤ作用剤。
8. 【請求項８】 請求項１乃至６のいずれかに記載の機能
   性素材を含有することを特徴とする血圧降下剤。
9. 【請求項９】 請求項３乃至６のいずれかに記載の機能
   性素材を含有することを特徴とする血栓溶解剤。
10. 【請求項１０】 穀物抽出物を含む培地に納豆菌又は枯
    草菌を接種して発酵培養することにより得られることを
    特徴とするＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻害作用を有する機能
    性素材の製造方法。
11. 【請求項１１】 上記穀物抽出物が豆類抽出液である請
    求項１０記載のＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻害作用を有する
    機能性素材の製造方法。
12. 【請求項１２】 得られた上記機能性素材が血栓溶解作
    用を有する請求項１０又は１１記載のＳＯＤ作用及びＡ
    ＣＥ阻害作用を有する機能性素材の製造方法。
13. 【請求項１３】 上記納豆菌が納豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕ
    ｓ Ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｎａｔｔｏ）ＴＯＹＯ−１１
    （受託番号；ＦＥＲＭ Ｐ−１７９１１号）、納豆菌
    （Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｎａｔｔｏ）
    ＴＯＹＯ−１２（受託番号；ＦＥＲＭ Ｐ−１７９１２
    号）、又は納豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｓｕｂｔｉｌｉ
    ｓ Ｎａｔｔｏ）ＴＯＹＯ−１３（受託番号；ＦＥＲＭ
    Ｐ−１７９１３号）である請求項１０乃至１２のいず
    れかに記載のＳＯＤ作用及びＡＣＥ阻害作用を有する機
    能性素材の製造方法。
14. 【請求項１４】 穀物抽出物を含む培地に納豆菌（Ｂａ
    ｃｉｌｌｕｓ Ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｎａｔｔｏ）ＴＯＹ
    Ｏ−１１（受託番号；ＦＥＲＭ Ｐ−１７９１１号）、
    納豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｓｕｂｔｉｌｉｓ Ｎａｔ
    ｔｏ）ＴＯＹＯ−１２（受託番号；ＦＥＲＭ Ｐ−１７
    ９１２号）、又は納豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｓｕｂｔ
    ｉｌｉｓ Ｎａｔｔｏ）ＴＯＹＯ−１３（受託番号；Ｆ
    ＥＲＭＰ−１７９１３号）を接種して発酵培養すること
    により得られることを特徴とする血栓溶解作用を有する
    機能性素材の製造方法。
15. 【請求項１５】 上記穀物抽出物が豆類抽出液である請
    求項１４記載の血栓溶解作用を有する機能性素材の製造
    方法。
16. 【請求項１６】 納豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｓｕｂｔ
    ｉｌｉｓ Ｎａｔｔｏ）ＴＯＹＯ−１１（受託番号；Ｆ
    ＥＲＭ Ｐ−１７９１１号）。
17. 【請求項１７】 納豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｓｕｂｔ
    ｉｌｉｓ Ｎａｔｔｏ）ＴＯＹＯ−１２（受託番号；Ｆ
    ＥＲＭ Ｐ−１７９１２号）。
18. 【請求項１８】 納豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｓｕｂｔ
    ｉｌｉｓ Ｎａｔｔｏ）ＴＯＹＯ−１３（受託番号；Ｆ
    ＥＲＭ Ｐ−１７９１３号）。