JP2001522781A - 共凍結乾燥によるペプチド／脂質複合体の形成 - Google Patents

共凍結乾燥によるペプチド／脂質複合体の形成

Info

Publication number
JP2001522781A
JP2001522781A JP2000514617A JP2000514617A JP2001522781A JP 2001522781 A JP2001522781 A JP 2001522781A JP 2000514617 A JP2000514617 A JP 2000514617A JP 2000514617 A JP2000514617 A JP 2000514617A JP 2001522781 A JP2001522781 A JP 2001522781A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
lipid
peptide
phosphatidylcholine
complex
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
JP2000514617A
Other languages
English (en)
Inventor
ダシュー、ジーン‐ルイス
Original Assignee
ダシュー、ジーン‐ルイス
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ダシュー、ジーン‐ルイス filed Critical ダシュー、ジーン‐ルイス
Publication of JP2001522781A publication Critical patent/JP2001522781A/ja
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1275—Lipoproteins; Chylomicrons; Artificial HDL, LDL, VLDL, protein-free species thereof; Precursors thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/775—Apolipopeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

(57)【要約】 本発明は、ペプチド（好ましくは両親媒性αヘリックスコンホメーションをとりうるペプチド）と1種以上の脂質との共凍結乾燥によるペプチド／脂質小胞および複合体の形成に関する。ペプチドと脂質の両方を可溶化する単一の溶液を凍結乾燥させいもよいし、２つの別々の溶液を凍結乾燥させてもよい。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】１．発明の分野 本発明は、ペプチド（好ましくは両親媒性αヘリックスコンホメーションをと
りうるペプチド）と1種以上の脂質との共凍結乾燥によるペプチド／脂質小胞お よび複合体の形成に関する。ペプチドと脂質の両方を可溶化する単一の溶液を凍
結乾燥させいもよいし、２つの別々の溶液を凍結乾燥させてもよい。本発明の方
法は、安定なペプチド／脂質小胞および複合体の形成に使用される。こうした小
胞および複合体としては、バルク調製物およびより小さなユニットの形態のミセ
ル状、球状、および円盤状複合体が挙げられるが、これらに限定されるものでは
ない。
【０００２】２．発明の背景 リポソームは、水性コアを内包する少なくとも１つの脂質二重層膜で構成され
ている小胞である。一般的には、リン脂質が脂質二重層を構成するが、二重層は
他の脂質で構成されていてもよい。リポソーム内の水溶液は、「捕獲容量」と呼
ばれる。
【０００３】 リポソームは、薬物、化粧品、そのほかの用途の生物活性化合物を送達するた
めのビヒクルとして開発されてきた。脂質二重層は、リポソームの捕獲容量内に
、薬物、化粧品、生物活性化合物などを被包し、薬物は、脂質二重層が細胞表面
膜と接触したときに、リポソームコアから放出される。リポソームは、脂質交換
、融合、エンドサイトーシス、または吸着により、その内容物を細胞に放出する
。Ostro et al., 1989, Am. J. Hosp. Pharm. 46:1576。このほか、薬物、化粧 品、生物活性化合物などを、小胞の脂質二重層膜と会合させるか、またはその膜
中に挿入することも可能であった。
【０００４】 小胞以外に、脂質含有複合体が、粒子形態で薬剤を送達するために使用されて
きた。例えば、多くの研究者は、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）粒子と同じよ
うなサイズおよび密度を有する再構成リポタンパク質様粒子または複合体を調製
することが有用であることを見出した。通常、これらの再構成複合体は、精製ア
ポタンパク質（通常、アポタンパク質Ａ‐１）とホスファチジルコリンなどのリ
ン脂質とからなる。また、非エステル化コレステロールが含まれることもある。
これらの粒子を調製する最も一般的な方法は、（１）浴音波処理によるかまたは
プローブソニケーターを用いて、成分を同時に音波処理する方法、（２）タンパ
ク質成分とプレフォーム型脂質小胞とを自発的に相互作用させる方法、（３）界
面活性剤を媒介させて再構成し、続いて透析により界面活性剤を除去する方法で
ある。Jonas, 1986, Meth. in Enzymol. 128:553-582; Lins et al., 1993, Bio
chimica et Biophysica Acta, 1151:137-142; Brouillette & Anantharamaiah,
1995, Biochimica et Biophysica Acta, 1256:103-129; Jonas, 1992, Structur
e & Function of Apoproteins, Chapter 8:217-250。また、アポタンパク質成分
の代わりに両親媒性ヘリックス形成ペプチドを用いることによって、類似の複合
体の形成が行われた。残念ながら、これらの方法はいずれも、適切な費用対効果
で大量の純粋な複合体を形成するうえで大きな問題を抱えている。更に、これら
の刊行物のいずれにも、両親媒性αヘリックスコンホメーションをとりうるペプ
チドまたはペプチド類似体と脂質との共凍結乾燥について開示されていない。
【０００５】 脂質小胞および複合体を作製するための様々な技術が知られている。種々のプ
ロトコルを用いて小胞またはリポソームが作製され、結果として様々なタイプの
小胞が得られた。リポソームの種々のタイプとしては、多重ラメラ小胞、小さな
単ラメラ小胞、および大きな単ラメラ小胞が挙げられる。
【０００６】 また、水溶液によるリン脂質（または他の脂質）の水和を行うと、脂質が分散
されると同時に多重ラメラ小胞（「ＭＬＶ」）が得られる。ＭＬＶは、中心の水
性コアを取り囲む多数の脂質二重層を含んでなるリポソームである。これらのタ
イプのリポソームは、小さな単ラメラ小胞（ＳＵＶ）よりも大きく、直径３５０
〜４００ｎｍであると思われる。当初、ＭＬＶの調製は、丸底フラスコ中におい
てクロロホルムに脂質を可溶化させ、脂質がフラスコの壁上に薄層を形成するま
でクロロホルムをエバポレートすることによって行われた。水溶液を添加して脂
質層を再水和させた。フラスコを旋回または回転させるにつれて小胞が生成した
。Deamer et al., 1983, Liposomes (Ostro, Ed.), Marcel Dekker, Inc. New Y
ork (Bangham et al., 1965, J. Mol. Biol.13:238が引用されている）。続いて
、ジョンソンらは、この方法で単ラメラ小胞も得られることを報告した。Johnso
n et al., 1971, Biochim. Biophys. Acta 233:820。
【０００７】 小さな単ラメラ小胞（ＳＵＶ）は、水性コアを内包する単一の脂質二重層を含
んでなるリポソームである。ＳＵＶを形成するために利用される方法にもよるが
、それらのサイズは、直径２５〜１１０ｎｍの範囲であると思われる。最初のＳ
ＵＶは、クロロホルム中にリン脂質を含んでなる調製物を窒素下で乾燥させ、水
性層を添加してミリモル領域の脂質濃度にし、４５℃において清澄化するまで溶
液を音波処理することによって、調製された。Deamer et al., 1983, Liposorne
s (Ostro, Ed.), Marcel Dekker, Inc. New York。このようにＳＵＶを調製する
ことにより、直径２５〜５０ｎｍの範囲のリポソームが得られた。
【０００８】 ＳＵＶを作製するもう１つの方法は、被包すべき水溶液中にエタノール／脂質
溶液を急速に注入する方法である。Deamer et al., 1983, Liposomes (Ostro, E
d.), Marcel Dekker, Inc. New York (Batzri et al., 1973, Biochim. Biophys
. Acta 298:1015が引用されている）。
【０００９】 この方法により作製されるＳＵＶのサイズは、直径３０〜１１０ｎｍの範囲で
ある。ＳＵＶは、２０，０００ｐｓｉにおいて多重ラメラ小胞をフレンチプレス
に４回通すことによっても作製可能である。作製されるＳＵＶのサイズは、直径
３０〜５０ｎｍの範囲であろう。Deamer et al., 1983, Liposomes (Ostro, Ed.
), Marcel Dekker, Inc. New York (Barenholz et al., 1979, FEBS Letters 99
:210が引用されている）。
【００１０】 また、リン脂質の水性調製物を高圧で小細孔膜に通して押し出すことにより、
多重ラメラリン脂質小胞および単ラメラリン脂質小胞を形成することもできる（
Hope et al., 1996, Chemistry and Physics of Lipids, 40:89107）。
【００１１】 大きな単ラメラ小胞（ＬＵＶ）は、中心の水性コアを取り囲む単一脂質二重層
であるという点でＳＵＶに類似しているが、ＬＵＶは、ＳＵＶよりもはるかに大
きい。ＬＵＶのサイズは、それらを構成している部分およびそれらを調製するの
に使用される方法にもよるが、直径５０〜１０００ｎｍの範囲であると思われる
。Deamer et al., 1983, Liposomes (Ostro, Ed.), Marcel Dekker, Inc. New Y
ork。ＬＵＶは、通常、３つの方法、すなわち、界面活性剤希釈法、逆相蒸発法 、および注入法のうちの１つを使用して調製される。
【００１２】 界面活性剤希釈法では、コレート、デオキシコレート、オクチルグルコシド、
ヘプチルグルコシド、およびＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００などの界面活性剤溶液を
使用して、脂質調製物からミセルを形成する。次に、溶液を透析して界面活性剤
を除去し、その結果としてリポソームを生成させる。Deamer et al., 1983, Lip
osomes (Ostro, Ed.), Marcel Dekker, Inc. New York。この方法は時間がかか るうえに、界面活性剤の除去は一般に不完全である。最終調製物中に界面活性剤
が存在すると、リポソーム調製物のいくらかの毒性、および／またはリポソーム
調製物の物理化学的性質の変化、を生じる可能性がある。
【００１３】 逆相蒸発法では、水性非極性溶液中に脂質を可溶化させることにより逆ミセル
を形成する。非極性溶剤を蒸発させると、ミセルが凝集してＬＵＶを生じる。こ
の方法は、一般に、多くの脂質を必要とする。
【００１４】 注入法では、非極性溶液中に可溶化された脂質が、被包すべき水溶液中に注入
される。非極性溶液が蒸発すると、気体／水界面に脂質が集積する。気体が泡に
なって水溶液を通過すると、脂質シートは、ＬＵＶおよびオリゴラメラリポソー
ムを形成する。リポソームは、濾過によりサイズ分けされる。Deamer et al., 1
983, Liposomes (Ostro, Ed.), Marcel Dekker, Inc. New York (Deamer et al.
, 1976, Biochim. Biophys. Acta 443:629およびSchieren et al., 1978, Bioch
im. Biophys. Acta 542:137が引用されている）。注入法は、注入のためにかな り高い温度を必要とし、被包効率が比較的低くなる可能性がある。Deamer et al
., 1983, Liposomes (Ostro, Ed.), Marcel Dekker, Inc. New York。
【００１５】 使用するまで長期間にわたり貯蔵可能なリポソーム調製物を開発することが、
リポソーム研究の目標であった。例えば、Schneiderらに付与された米国特許第4
,229,360号には、リポソームを脱水する方法が開示されている。この方法では、
水溶液中にリポソームを含んでなるコロイド分散系に親水性化合物を添加して、
溶液を脱水する（好ましくは、凍結乾燥を行う）。親水性化合物としては、例え
ば、高分子量親水性ポリマーまたはスクロースのような低分子量化合物が挙げら
れる。
【００１６】 Shrankらに付与された米国特許第4,411,894号には、リポソームの超音波処理 された調製物に高濃度のスクロースを使用することが開示されている。リポソー
ムは、捕獲容量中に脂溶性産物を含んでおり、調製物を凍結乾燥させることは可
能であったが、スクロースが高濃度であるにもかかわらず、捕獲された内容物の
多量の損失を防止することができなかった。
【００１７】 Croweらの米国特許第4,857,319号には、リポソームを凍結乾燥させる際、スク
ロース、マルトース、ラクトース、およびトレハロースなどの二糖を用いてリポ
ソームを安定化させることが開示された。成分中の脂質含有量に対する二糖の量
（ｗ／ｗ）は、０．１：１〜４：１の範囲内である。Ｃｒｏｗｅは、この方法を
用いてリポソームの一体性を保持するのに成功したが、その成果は、米国特許第
4,441,894号でShrankが開示した方法によって得られた成果よりも大きかった。
【００１８】 Janoffらの米国特許第4,880,635号には、リポソームを脱水するための方法が 開示されており、この場合には、トレハロースおよびスクロースのような保護糖
を、好ましくは脂質二重層の内側リーフレット上および外側リーフレット上の両
方にの存在させた状態で、リポソームを凍結乾燥させた。Janoffらの方法では、
乾燥させたリポソームの再水和により実質的に構造の一体性が保たれたリポソー
ムを生じるように十分な水が保持される。
【００１９】 しかしながら、後で再水和しうる形で凍結乾燥されたペプチド／脂質複合体の
簡単で費用効率のよい形成方法が当技術分野で必要とされている。本発明の方法
では、貯蔵が可能で、粉末としての使用またはペプチド／脂質複合体を形成すべ
く再水和させた後での使用が可能である安定な凍結乾燥粉末の形態で、ペプチド
／脂質混合物が得られる。
【００２０】３．発明の概要 本発明は、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）と類似した特性をもちうる、ペプ
チドもしくはタンパク質‐（リン）脂質複合体または小胞を調製するための方法
である。この方法では、一方の溶液中に少なくとも1種のペプチドが可溶化され 、他方の溶液中に少なくとも1種の脂質が可溶化された溶剤系を使用する。２つ の溶液は、互いに混和性をもつように選択される。次に、溶液を合わせ、得られ
た溶液を凍結乾燥する。
【００２１】 また、本発明の方法は、タンパク質またはペプチドと、脂質との両方を可溶化
しうる溶液を含んでなる第２のタイプの溶剤系により実施することも可能である
。この溶液は、単一の溶液であってもよいし、ペプチドおよび脂質を添加する前
に２種以上の溶液を組み合わせることにより作製された複合溶液であってもよい
。溶液または複合溶液中にペプチドおよび脂質を可溶化させ、次に、ペプチド／
脂質溶液を凍結乾燥する。
【００２２】 好ましくは、本発明のペプチドは、両親媒性ヘリックスコンホメーションをと
ることのできるペプチドである。本発明の特定の１実施形態では、ペプチドは、
脂質結合タンパク質である。他の実施形態では、ペプチドの代わりにまたはペプ
チドと組み合わせて、ＡｐｏＡ−Ｉ、ＡｐｏＡ−ＩＩ、ＡｐｏＡ−ＩＶ、Ａｐｏ
Ｃ−Ｉ、ＡｐｏＣ−ＩＩ、ＡｐｏＣ−ＩＩＩ、ＡｐｏＥのペプチド類似体、他の
アポリポタンパク質の類似体などを利用する。もう１つの特定の実施形態では、
本発明の方法を用いて、ＨＤＬに類似したＡｐｏＡ１類似体／（リン）脂質複合
体を調製する。ＡｐｏＡ１／脂質複合体は、異常リポタンパク血症に関連した疾
患、例えば、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低ＨＤＬ血症、お
よびアポリポタンパク質Ａ‐１欠損症（ただし、これらに限定されるものではな
い）、敗血症性ショックの治療において、ＨＤＬ集団に対するマーカーとしてｉ
ｎ ｖｉｔｒｏ診断アッセイに使用するためにおよびイメージング法で使用する
ために有用である。
【００２３】 本発明の方法により、動物またはヒトへの非経口投与、例えば、静脈内注射、
腹腔内注射、皮下注射、筋肉内注射、およびボーラス注射のためのペプチド／脂
質複合体の調製が可能である。ただし、これらの投与法に限定されるものではな
い。更に、ペプチド／脂質複合体は、動物またはヒトへの経口投与、直腸投与、
粘膜（例えば、口腔）投与、もしくは局所投与のために、またはｉｎ ｖｉｔｒ
ｏ実験のために製剤化することもできる。
【００２４】 本発明の方法は、両親媒性ペプチド／リン脂質複合体、脂質結合タンパク質／
リン脂質複合体、および／またはＡｐｏＡ１ペプチド類似体／リン脂質複合体の
大量生産に使用することができる。バルク製剤用に凍結乾燥材料を調製してもよ
いし、そのほかに、凍結乾燥前に、より小さな容器中にペプチド／脂質混合物溶
液を配分してもよく（例えば、１回用量単位で）、このようなより少量の単位は
、滅菌された単位用量製剤として調製してもよい。
【００２５】 本発明の方法により調製される凍結乾燥粉末は、注射直前に再水和させて粒子
を含まない滅菌溶液にすることができる。またはその代わりに、凍結乾燥粉末を
適切な固体剤形にして直接投与することができる。
【００２６】 本発明の方法はまた、脂質の不在下で不安定または不溶性となる可能性のある
化合物の保存に好適な場合もある。
【００２７】 本発明の方法は、ワクチン中の複数の抗原を同時提示するような投与を行う場
合を含む、ヒトの疾患の治療または予防をおこなうための製品、異常リポタンパ
ク血症、例えば、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低ＨＤＬ血症
、およびアポリポタンパク質Ａ‐１欠損症（ただし、これらに限定されるもので
はない）、アテローム性動脈硬化症のような心臓血管疾患、敗血症性ショック、
または感染症の治療または予防をおこなうための製品、を製剤化するために使用
することが可能である。
【００２８】 本発明の方法は、薬物用の担体として、例えば肝臓や肝外細胞などへ（薬物、
ＤＮＡ、遺伝子を送達するための）ベクターとして、または毒素（例えば、農薬
、ＬＰＳなど）をトラップするためのスカベンジャーとして使用しうる複合体の
調製に使用することが可能である。
【００２９】３．１．定義 本明細書中で使用する場合、「溶剤系」とは、ペプチドおよび／または脂質を
可溶化しうる１種以上の溶剤を意味し、溶剤が２種以上の場合には互いに混和性
がある。
【００３０】 本明細書中で使用する場合、「ペプチド／脂質複合体」とは、高密度リポタン
パク質（ＨＤＬ）のサイズ範囲内の粒子を形成する、脂質部分とペプチドとの凝
集体を意味する
【００３１】 本明細書中で使用する場合、「共凍結乾燥」とは、同一容器中において２種以
上の化合物（例えば、ペプチド、タンパク質、脂質、リン脂質）を含む溶液の凍
結乾燥、フリーズドライ、または真空乾燥を意味する。例えば、同じ容器中で脂
質溶液をペプチド溶液と合わせてもよく、こうして得られた溶液の混合物を一緒
に凍結乾燥処理にかけることにより、ペプチドと脂質とを同時に凍結乾燥させる
。
【００３２】 本明細書中で使用する場合、「両親媒性ペプチド」または「両親媒性αヘリッ
クスペプチド」とは、それぞれ、両親媒性コンホメーションまたは両親媒性ヘリ
ックスコンホメーションをとりうるペプチドを意味する。両親媒性αヘリックス
は、生物活性なペプチドおよびタンパク質中で見出されることの多い２次構造モ
チーフである。Amphipathic helix motif: classes and properties, Jere P. S
egrest, Hans de Loof, Jan G. Dohlman, Christie G. Brouillette, and G.M.
Anantharamaiah. PROTEINS: Structure Functions and Genetics 8:103-117 (19
90)を参照されたい。両親媒性αヘリックスとは、ヘリックスの長軸に沿って極 性面と非極性面とが反対方向を向いたαヘリックスである。帯電した残基が極性
表面に沿って特異的に分布することは、明らかである。定義によれば、両親媒性
ヘリックスは、水和されたバルクリン脂質の極性‐非極性界面と相補的であり、
これらの脂質会合ドメインは、脂肪アシル鎖と極性ヘッド基との間の界面に部分
的に入り込んでリン脂質と相互作用すると推定された。Jere P. Segrest. Febs
letters 1976, 69 (1): 111-114。
【００３３】 「ペプチド」および「タンパク質」という用語は、本明細書中では、互換的に
使用可能である。更に、本発明のペプチド類似体は、ペプチド、タンパク質、ま
たは非ペプチド、すなわち、ペプチド模擬体であってよい。しかしながら、類似
体はいずれも、好ましくは、生物活性分子である。
【００３４】 「脂質」という用語には、本明細書中で使用する場合、天然および合成のリン
脂質が含まれるが、これらに限定されるものではない。更に、「脂質」および「
リン脂質」という用語は、本明細書中では、互換的に使用可能である。
【００３５】５．好ましい実施形態の詳細な説明 両親媒性αヘリックスペプチドもしくはタンパク質、脂質結合タンパク質、Ａ
ｐｏＡ−Ｉアゴニストペプチド、アポタンパク質類似体などは、本発明に有用で
あり、これらの物質は、当技術分野で周知の方法を用いて合成または製造するこ
とができる。ペプチドを凍結乾燥することによって、長い保存寿命を有するペプ
チドの安定な調製物を作製することが可能であり、この場合、再製剤化用のバル
クを調製してもよいし、被験者に投与する前に滅菌水または適切な滅菌緩衝液で
再水和することにより再構成できる個々のアリコートまたは用量単位に調製して
もよい。
【００３６】 本発明者らの知る限りでは、本発明は、両親媒性αヘリックスペプチドまたは
ペプチド類似体と、脂質とを共凍結乾燥させて、無菌ペプチド／脂質複合体に再
構成できる混合物を形成する方法の最初の例である。
【００３７】 特定の実施形態において、ＡｐｏＡ−Ｉアゴニスト（ただし、これに限定され
るものではない）などのＡｐｏＡ−Ｉ類似体（1種または複数種）をペプチド‐ 脂質複合体の形態で製剤化して投与することが好ましいことがある。この方法に
はいくつかの利点がある。なぜなら、特に、複合体が、ＨＤＬクラスのタンパク
質（とりわけ、プレβＨＤＬ集団）と類似したサイズおよび密度を有する場合、
循環時の複合体の半減期が増大するはずだからである。ＨＤＬクラスのリポタン
パク質は、サイズ、密度、および電気泳動移動度のような特性に基づいて、いく
つかの「サブクラス」に分けることができる。いくつかの例をサイズの増大する
順に列挙すると次のようになる：直径５０〜６０オングストロームのミセル状プ
レβＨＤＬ、中間的なサイズ、すなわち、質量６５ｋＤａ（約７０オングストロ
ーム）を有する円盤状ＨＤＬ、直径９０〜１２０オングストロームの球状ＨＤＬ 3 またはＨＤＬ2。（J. Kane, 1996, V. Fuster, R. Ross and E. Topol編, Athe
rosclerosis and Coronary Artery Disease, p.99; A. Tall and J. Breslow, 前掲, p. 106; Barrans et al., Biochemica et Biophysica Acta 1300, p.73-8
5; および Fielding et al., 1995, J. Lipid Res 36, p.211-228）。しかしな がら、サイズがＨＤＬよりも小さいかまたは大きいペプチド／脂質複合体を本発
明によって形成することも可能である。
【００３８】 本発明のペプチド‐脂質複合体は、以下に記述の共凍結乾燥手順により、長い
保存寿命を有する安定な調製物としてうまい具合に調製することができる。凍結
乾燥されたペプチド‐脂質複合体は、医薬品として再製剤化するためのバルク薬
剤を調製するために、または被験者に投与する前に滅菌水または適切な緩衝液で
再水和することにより再構成できる個々のアリコートまたは用量単位に調製する
ために、使用することができる。
【００３９】 本出願人は、ＨＤＬと類似した特性を有するペプチドまたはタンパク質‐（リ
ン）脂質複合体を調製するための簡単な方法を開発した。この方法は、ＡｐｏＡ
−Ｉペプチド‐脂質複合体を調製するために使用することができ、次のような利
点を有する。（１）含まれる成分のほとんどまたはすべてが、デザインされた複
合体の形成に使用されるため、他の方法に共通に見られる出発物質の無駄な廃棄
は回避される。（２）保存中、非常に安定である凍結乾燥された化合物が形成さ
れる。得られた複合体を、使用の直前に再構成することが可能である。（３）通
常、得られた複合体を、形成後または使用前に更に精製する必要はない。（４）
毒性化合物（例えば、コール酸塩などの界面活性剤）を使用しないですむ。更に
、この製造方法は、容易にスケールアップすることができ、ＧＭＰ製造に好適で
ある（すなわち、内毒素の存在しない環境中）。
【００４０】 好ましい方法では、ペプチドと脂質とを、各成分を一緒に可溶化する溶剤系中
で組み合わせる。このためには、両親媒性ペプチドと疎水性脂質の両方を一緒に
可溶化すべく、溶剤の組合せを注意深く選択しなければならない。１実施形態に
おいて、粒子中に導入されるタンパク質（1種または複数種）またはペプチド（1
種または複数種）は、水性溶剤もしくは有機溶剤または溶剤の混合物（溶剤１）
に溶解することができる。（リン）脂質成分は、溶剤１と混和しうる、水性溶剤
もしくは有機溶剤または溶剤の混合物（溶剤２）に溶解することができ、これら
の２つの溶液は合体される。このほか、（リン）脂質成分は、直接、ペプチド（
タンパク質）溶液中に溶解される。このほか、共溶剤系中、すなわち、混和性溶
剤の混合物中にペプチドおよび脂質を導入することができる。ペプチドまたはタ
ンパク質の脂質結合性にもよるが、凍結乾燥前、可溶化の促進または更に完全な
可溶化（および／または混合の促進）を行うことが必要な場合があり、この場合
、それに応じて溶剤を選択することができることは、当業者には分かるであろう
。
【００４１】 最初に、得られる複合体が適切な物理的および化学的性質をもつように（この
適切な性質とは、通常、サイズがＨＤＬ2またはＨＤＬ3に類似していることを意
味するが、常にそうした意味をもつわけではない）、ペプチド（タンパク質）対
脂質の好適な割合を経験的に決定する。脂質対タンパク質／ペプチドのモル比は
、複合体の所望のタイプにもよるが、約２〜約２００、好ましくは５〜５０の範
囲でなければならない。このようなサイズクラスのペプチド／脂質複合体または
タンパク質／脂質複合体としては、例えば、ミセル状または円盤状の粒子（通常
、ＨＤＬ3またはＨＤＬ2よりも小さい）、ＨＤＬ2またはＨＤＬ3と類似したサイ
ズの球状粒子、および更に大きな複合体（ＨＤＬ2よりも大きい）が挙げられる が、これらに限定されるものではない。本発明らがクロマトグラフィーの際の標
準として使用したＨＤＬ（図１）は、主に、球状の成熟ＨＤＬ2である。プレβ １ＨＤＬは、アポリポタンパク質とわずかな分子数のリン脂質とのミセル状複合
体である。プレβ２ＨＤＬは、アポリポタンパク質といくつかの分子数のリン脂
質との円盤状複合体である。脂質（トリグリセリド、コレステロール、リン脂質
）の導入量が多くなるほど、ＨＤＬは大きくり、その形状が改変される。（プレ
β１ＨＤＬ（ミセル状複合体）→ プレβ２ＨＤＬ（円盤状複合体）） →ＨＤ
Ｌ３（球状複合体）→ＨＤＬ２（球状複合体）。
【００４２】 溶剤を選択し、ペプチドおよび脂質を導入した後、得られた混合物を凍結させ
て乾燥するまで凍結乾燥させる。凍結乾燥を容易にするために、追加の溶剤を混
合物に添加することもある。この凍結乾燥された生成物は、長い期間にわたり保
存することができ、安定な状態を保持するであろう。
【００４３】 以下に記載の実施例では、ペプチド１ PVLDLFRELLNELLEALKQKLK（配列番号１ ）と（リン）脂質とをメタノール中に別々に溶解してから合体させ、次に、キシ
レンと混合した後、凍結乾燥させた。２種の溶剤の混合物にペプチドと脂質の両
方を添加することができる。このほか、メタノール中に溶解したペプチドの溶液
と、キシレン中に溶解した脂質の溶液とを混合することができる。ペプチドの塩
析を回避するように注意しなければならない。メタノール／キシレン中にペプチ
ドおよび脂質を一緒に可溶化させてなる生成溶液を凍結乾燥させて粉末の形態に
する。
【００４４】 ペプチド‐脂質複合体の溶液または懸濁液を得るために、凍結乾燥された産物
を再構成することができる。このためには、凍結乾燥された粉末を、好適な体積
になるまで水溶液で再水和させる（多くの場合、５ｍｇペプチド／ｍｌであり、
これは静脈内注射に好都合である）。好ましい実施形態では、凍結乾燥された粉
末を、リン酸緩衝溶液または生理食塩溶液を用いて再水和する。再水和を容易に
するために、混合物を攪拌またはボルテックス混合しなければならないかもしれ
ない。また、多くの場合、再構成ステップは、複合体の脂質成分の相転移温度（
Ｔｍ）と等しいかまたはそれよりも高い温度で行わなければならない。数分以内
に、再構成された脂質‐タンパク質複合体の溶液（複合体が小さい場合には清澄
な溶液）が得られる。
【００４５】 得られた再構成調製物のアリコートの特性決定を行うことにより、調製物中の
複合体が所望のサイズ分布、例えば、ＨＤＬのサイズ分布を有するかを確認する
ことができる。この目的のために、ゲル濾過クロマトグラフィーを使用すること
ができる。以下に記載の実施例では、Pharmacia Superose6 FPLCゲル濾過クロマ
トグラフィー系を使用した。使用した溶離液には、脱イオン水中に１５０ｍＭ
ＮａＣｌが含まれる。典型的なサンプル体積は、複合体２０〜２００マイクロリ
ットルであり、これには５ｍｇペプチド／ｍｌが含まれる。カラム流量は０．５
ｍｌ／分である。分子量およびストークス径が既知の一連のタンパク質およびヒ
トＨＤＬを、カラムを校正するための標準として使用する。波長２５４〜２８０
ｎｍの光の吸収または散乱によって、タンパク質複合体およびリポタンパク質複
合体をモニターする。
【００４６】 本発明の方法に従って使用しうる溶剤としては、非極性、極性、非プロトン性
、およびプロトン性の有機溶剤など、例えば、エタノール、メタノール、シクロ
ヘキサン、１−ブタノール、イソプロピルアルコール、キシレン、ＴＨＦ、エー
テル、塩化メチレン、ベンゼン、およびクロロホルムが挙げられるが、これらに
限定されるものではない。本発明にはまた、単一溶剤だけではなく溶剤混合物の
使用も含まれる。更に、本発明の方法で使用する前に、有機溶剤を脱水して水を
除去してもよいが、含水溶剤または水を、特定の脂質、ペプチド、またはタンパ
ク質と併用してもよい。言い換えれば、水が好適な溶剤である場合もあるし、含
水溶剤または有機溶剤／水混合物を使用してもよい場合もある。しかしながら、
水を使用する場合、界面活性剤を含まないようにしなければならない。先に述べ
たように、溶剤は、好ましくは、最高純度の品質であり（凍結乾燥後の不純物の
濃縮を回避するため）、更に、溶剤は、塩を含まずかつ粒状物質を含まないもの
でなければならない。しかしながら、医薬品業界で周知の技術により、例えば、
参照により全内容を本明細書に組み入れるRemington’s Pharmaceutical Scienc
es, 16th and 18th Eds., Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania (1980
and 1990）および参照により全内容を本明細書に組み入れる米国薬局方/国民医 薬品集 (USP/NF) XVIIに記載の技術により、凍結乾燥前、凍結乾燥中、または凍
結乾燥後、得られた生成物を滅菌できる場合には、溶剤は滅菌されたものである
必要はない。
【００４７】 本発明の方法に従って使用しうる脂質としては、次のものが挙げられるが、こ
れらに限定されるものではない。天然および合成された（合成の）脂質およびリ
ン脂質、具体的には、小アルキル鎖リン脂質、卵ホスファチジルコリン、大豆ホ
スファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホ
スファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、１‐ミリストイル
‐２‐パルミトイルホスファチジルコリン、１‐パルミトイル‐２‐ミリストイ
ルホスファチジルコリン、１‐パルミトイル‐２‐ステアロイルホスファチジル
コリン、１‐ステアロイル‐２‐パルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオ
イルホスファチジルコリン、ジオレオホスファチジルエタノールアミン、ジラウ
ロイルホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセ
リン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、スフィ
ンゴミエリン、スフィンゴ脂質、ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジ
ルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイル
ホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジ
オレオイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジン酸、ジ
パルミトイルホスファチジン酸、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミ
ン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファ
チジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、脳ホスファチジルセリン
、脳スフィンゴミエリン、ジパルミトイルスフィンゴミエリン、ジステアロイル
スフィンゴミエリン、ホスファチジン酸、ガラクトセレブロシド、ガングリオシ
ド、セレブロシド、ジラウリルホスファチジルコリン、（１，３）‐Ｄ‐マンノ
シル（１，３）ヘキシルエーテル糖脂質、ならびにコレステロールおよびその誘
導体。
【００４８】 本発明に使用するのに好適なペプチドとしては、いずれも参照により全内容を
本明細書に組み入れる３つの同時係属出願［代理人整理番号9196-0004-999、919
6-0005-999、および9196-0006-999で識別される出願番号＿＿；いずれも1997年9
月29日出願］に記載のペプチドが挙げられるが、これらに限定されるものではな
い。
【００４９】 すべての場合に必要であるというわけではないが、脂質およびペプチド溶液を
混合もしくは攪拌する前にまたは凍結乾燥する前に沈殿物を可溶化または除去す
ることが好ましい。
【００５０】 本発明の方法は、ペプチド／脂質複合体、両親媒性ペプチド／（リン）脂質複
合体、脂質結合タンパク質／（リン）脂質複合体、および／またはＡｐｏＡ１ペ
プチド類似体／（リン）脂質複合体を大量生産するために使用することが可能で
ある。バルク調製物用に凍結乾燥物質を調製してもよいし、そのほか、より小さ
な容器（例えば、１回用量単位）中に混合ペプチド／脂質溶液を配分してから凍
結乾燥してもよく、また、このようなより少量の単位を、滅菌された１回用量剤
形として調製してもよい。
【００５１】 本発明の真空乾燥組成物は、次のような手順で、１回用量または複数回用量の
入った容器形態で提供してもよい。すなわち、予備真空乾燥された滅菌済み溶液
で所定の含有量まで好適な容器に無菌状態で充填し、所望の真空乾燥組成物を調
製し、次に、１回用量または複数回用量の入った容器を密封する。これらの充填
された容器を使用すれば、適切な滅菌希釈液を用いてｉｎ ｓｉｔｕで再構成を
行って乾燥組成物を急速に溶解させることにより、所望の投与濃度を有する適切
な滅菌溶液が得られると考えられる。本明細書中で使用する場合、「好適な容器
」という用語は、バイアルのように滅菌雰囲気を保持することができ、かつスト
ッパー手段により密閉された真空乾燥生成物を配給することができる容器を意味
する。このほか、好適な容器という用語は、真空乾燥組成物を再構成する際に必
要となる溶液の体積を考慮に入れてサイズが適切であること、および容器材料（
通常、タイプＩガラス）が適切であることをも意味する。利用するストッパー手
段、例えば、滅菌ゴムクロージャーまたはその等価物は、先に述べたような密封
を可能にするだけでなく、所望の溶液の再構成を行うために、注射用滅菌水ＵＳ
Ｐ、生理食塩水ＵＳＰ、または５％デキストロース水溶液ＵＳＰなどの希釈剤の
導入を可能にするものであることを理解すべきである。医薬品用の容器としての
適否についてのこれらのおよび他の態様は、医薬品業者には周知である。特定の
実施形態では、生成物の単位用量は、ペプチド約１０ｍｇ〜２ｇの範囲、好まし
くはペプチド約１００ｍｇ〜１ｇの範囲であり、再構成後の濃度は、約１〜５０
ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約２〜２５ｍｇ／ｍｌである。
【００５２】 本発明の方法を用いると、非経口投与、例えば、動物もしくはヒトに対する静
脈内注射、腹腔内注射、皮下注射、筋肉内注射、およびボーラス注射のために、
または動物もしくはヒトに対する経口投与、直腸投与、粘膜投与（例えば、口腔
）、もしくは局所投与のために、あるいはｉｎ ｖｉｔｒｏ実験のために、タン
パク質もしくはペプチド／脂質複合体の調製を行うことができる。
【００５３】 本発明の方法によって調製される凍結乾燥粉末は、注射の直前に再水和するこ
とができるか、そのほかに、凍結乾燥粉末は、直接投与することができる。凍結
乾燥粉末としては、小胞、リポソーム、球状粒子または円盤状粒子などの粒子、
ミセルなどの形態で複合体を形成しうる脂質およびペプチドが挙げられるが、こ
れらに限定されるものではない。凍結乾燥粉末を再構成または再水和するために
、所望の最終用途に合わせて溶液を選択する。医薬品用途に対して、任意の滅菌
溶液を使用してもよい。更に、特定の用途では、緩衝溶液は好ましく、こうした
溶液としては、リン酸塩、クエン酸塩、トリス、バルビタール、酢酸塩、グリシ
ン‐ＨＣｌ、コハク酸塩、カコジル酸、ホウ酸‐ホウ砂、アンメジオール（ａｍ
ｍｅｄｉｏｌ）、および炭酸塩が挙げられるが、これらに限定されるものではな
い。
【００５４】 本発明の凍結乾燥粉末は、当技術分野で周知の任意の凍結乾燥方法により作製
可能である。こうした方法としては、ペプチド／脂質含有溶液を凍結処理にかけ
、続いて減圧下で蒸発させるフリーズドライが挙げられるが、これに限定される
ものではない。
【００５５】 本発明の方法はまた、脂質の不在下で不安定または不溶性となる可能性のある
化合物の保存に好適な場合もある。
【００５６】 本発明の方法は、ワクチン中の複数の抗原を同時提示するような用途を含めて
、ヒトの疾患の治療または予防をおこなうための製品、異常リポタンパク血症、
例えば、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、低ＨＤＬ血症、および
アポリポタンパク質Ａ‐１欠損症（ただし、これらに限定されるものではない）
、アテローム性動脈硬化症のような心臓血管疾患、敗血症性ショック、または感
染症の治療または予防をおこなうための製品、を製剤化するために使用すること
が可能である。
【００５７】 本発明の方法は、薬物用の担体として、肝臓や肝外細胞などへ（薬物、ＤＮＡ
、遺伝子を送達するための）ベクターとして、または毒素（例えば、農薬、ＬＰ
Ｓなど）をトラップするためのスカベンジャーとして使用しうる複合体の調製に
使用することが可能である。このほか、本発明の方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッ
セイ系に使用するための複合体およびイメージング法で使用するための複合体を
調製するのに使用することが可能である。
【００５８】 特定の実施形態において、本発明の方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ診断アッセイで
およびＨＤＬ集団または亜集団に対するマーカーとしてに使用しうるＡｐｏＡ−
Ｉ類似体（例えば、アゴニストが挙げられるが、これに限定されるものではない
）複合体を調製するために使用することが可能である。他の特定の実施形態にお
いて、イムノアッセイのためにまたはイメージング法（例えば、ＣＡＴスキャン
、ＭＲＩスキャン）のためにＡｐｏＡ−Ｉアゴニスト複合体を使用することが可
能である。
【００５９】 以下の実施例は、本発明を例示するためのものであって、本発明をなんら制限
するものではないと解釈しなければならない。
【００６０】６．実施例：共凍結乾燥法によるペプチド‐脂質複合体の調製 以下のプロトコルを利用してペプチド‐脂質複合体を調製した。
【００６１】 数分間のインキュベーションおよび間欠的なボルテックスによる混合を行って
、３．５ｍｇ／ｍｌの濃度でペプチド１（PVLDLFRELLNELLEALKQKLK；配列番号１
）（２２．４ｍｇ）をメタノール中に溶解した。この溶液にジパルミトイルホス
ファチジルコリン（ＤＰＰＣ）のメタノール溶液（１００ｍｇ／ｍｌのストック
溶液）を添加し、ＤＰＰＣ／ペプチドの最終比が２．５：１（重量／重量）とな
るようにした。ボルテックスを行ってこの溶液を混合した。この溶液にキシレン
を添加して最終濃度を３６％にした。後でゲル濾過クロマトグラフィーによる分
析を行うために、得られる溶液のアリコートを採取した。液体窒素中で溶液を凍
結し、減圧により乾燥するまで凍結乾燥した。ペプチド１（配列番号１）２０ｍ
ｇとＤＰＰＣ５０ｍｇとを含有するアリコートを滅菌食塩溶液（０．９％ＮａＣ
ｌ）中で再水和し、混合し、更に、再構成ペプチド／リン脂質複合体の清澄な溶
液が得られるまで数分間にわたり４１℃まで加熱した。
【００６２】６．１．実施例：ゲル濾過およびリン脂質利用 ６．１．１．材料および方法 複合体を調製するための条件を調べるために、少量の複合体を調製して特性決
定を行うのが便利な場合が多い。１ｍｇのペプチドを含んでなるこれらの調製物
を次のように調製した。キャップの付いた１．０ｍｌ透明ガラスバイアル（Ｗａ
ｔｅｒｓ ＃ＷＡＴ０２５０５４）中で、ペプチド１（配列番号１）１ｍｇをＨ
ＰＬＣ等級メタノール（Perkin Elmer）２５０μｌ中に溶解した。室温で１０分
間にわたり時々ボルテックス混合することにより、ペプチドの溶解を助長した。
この後、依然として少量の未溶解粒状物質が観測されたが、このことは結果に影
響しなかった。メタノールを溶剤とする１００ｍｇ／ｍｌのストック溶液から、
１、２、３、４、５、７．５、１０、またはの１５ｍｇのＤＰＰＣ（Avanti Pol
ar Lipid、純度９９％、製品#850355）を含有するアリコートを採取してこの混 合物に添加した。メタノールの添加により混合物の体積を４００μｌとし、室温
で１０分間にわたり間欠的に混合物を更にボルテックス混合した。この時点で、
ごくわずかの未溶解物質が管中に観測された。各管にキシレン（Sigma-Aldrich 、純度９９％、ＨＰＬＣ等級）２００μｌを添加し、これらの管をそれぞれ１０
分間攪拌した。２０ゲージの注射針を用いて各管の上部に２つの小さな穴を開け
、液体窒素中に管をそれぞれ１５秒間入れて凍結し、減圧下で一晩凍結乾燥させ
た。各管に、０．９％ＮａＣｌ溶液２００ｍｌを添加した。それぞれ２０秒間、
管をボルテックス混合した。この時点では、管中の溶液は乳状の外観を呈した。
次に、４１℃において水浴中で管を３０分間インキュベートした。１５ｍｇのＤ
ＰＰＣを含む管については乳状のままであったが、それ以外の管中の溶液はいず
れも、清澄になった（すなわち、水と同じような外観を呈した）。
【００６３】 複合体の調製で使用したリン脂質のすべてが、クロマトグラム吸収ピークに対
応するカラム画分中に実際に現れるかを調べるために、再構成ペプチド／脂質複
合体由来のカラム溶出液１〜２ｍｌを回収し、更に、BioMerieux Phospholipide
s Enzymatique PAP 150キット（#61491）を用い、製造業者から提供された取扱 説明書に従って各画分のリン脂質含有量を酵素的にアッセイした。
【００６４】 また、複合体の調製は、大量スケールで行うことも可能である。このような調
製物の１例が、上述されている。これらの複合体をｉｎ ｖｉｖｏ実験に使用し
た。
【００６５】６．２．複合体の特性決定の結果 図１：密度超遠心分離によってヒト血清２００μｌから調製された成熟ＨＤＬ
のSuperose 6クロマトグラフィー。 クロマトグラフは２５４ｎｍにおける吸収を示す。 溶出量＝１４．８ｍｌ、ストークス径１０８オングストロームに対応する（表１
を参照されたい）。
【００６６】 図２（下）：先に記載したように、１：１（ｗ：ｗ）のインキュベーション比
（Ｒｉ、出発混合物中の全リン脂質対全ペプチドの比として定義される）で調製
したＤＰＰＣ：ペプチド１複合体のSuperose 6クロマトグラフィー（少量スケー
ルの調製）。吸収ピークの溶出量＝１６．２ｍｌおよび１８．１ｍｌ、ストーク
ス径７４および８２オングストロームの粒子に対応する。これらの粒子はＨＤＬ
よりも小さい。カラムにアプライされたリン脂質のうちの８７％が、吸収ピーク
を含む画分中に回収された（表１を参照されたい）。
【００６７】 図２（上）：先に記載したように、２：１（ｗ：ｗ）のＲｉで調製したＤＰＰ
Ｃ：ペプチド１複合体のSuperose 6クロマトグラフィー。吸収ピークの溶出量＝
１６．４ｍｌ、（７７オングストローム）、ＨＤＬよりも小さい粒子に対応する
。カラムにアプライされたリン脂質のうちの７０％が、吸収ピークを含む画分中
に回収された（表１を参照されたい）。
【００６８】 図３（下）：先に記載したように、３：１（ｗ：ｗ）のＲｉで調製したＤＰＰ
Ｃ：ペプチド１複合体のSuperose 6クロマトグラフィー。吸収ピークの溶出量＝
１６．０ｍｌ、（８０オングストローム）、ＨＤＬよりも小さい粒子に対応する
。カラムにアプライされたリン脂質のうちの７９％が、吸収ピークを含む画分中
に回収された（表１を参照されたい）。
【００６９】 図３（上）：先に記載したように、４：１（ｗ：ｗ）のＲｉで調製したＤＰＰ
Ｃ：ペプチド１複合体のSuperose 6クロマトグラフィー。吸収ピークの溶出量＝
１５．７ｍｌ、（９０オングストローム）、ＨＤＬよりも小さい粒子に対応する
。カラムにアプライされたリン脂質のうちの１０６％が、吸収ピークを含む画分
中に回収された（表１を参照されたい）。
【００７０】 図４（下）：先に記載したように、５：１（ｗ：ｗ）のＲｉで調製したＤＰＰ
Ｃ：ペプチド１複合体のSuperose 6クロマトグラフィー。吸収ピークの溶出量＝
１５．１ｍｌ、（１０４オングストローム）、ＨＤＬよりも小さい粒子に対応す
る。カラムにアプライされたリン脂質のうちの１０３％が、吸収ピークを含む画
分中に回収された（表１を参照されたい）。
【００７１】 図４（上）：先に記載したように、７．５：１（ｗ：ｗ）のＲｉで調製したＤ
ＰＰＣ：ペプチド１複合体のSuperose 6クロマトグラフィー。吸収ピークの溶出
量＝１３．６ｍｌ、（１３４オングストローム）、ＨＤＬよりも大きい粒子に対
応する。カラムにアプライされたリン脂質のうちの９２％が、吸収ピークを含む
画分中に回収された（表１を参照されたい）。
【００７２】 図５：先に記載したように、１０：１（ｗ：ｗ）の比で調製したＤＰＰＣ：ペ
プチド１複合体のSuperose 6クロマトグラフィー。吸収ピークの溶出量＝１３．
４ｍｌ、（１３８オングストローム）、この場合もＨＤＬよりも大きい粒子に対
応する。カラムにアプライされたリン脂質のうちの１０３％が、吸収ピークを含
む画分中に回収された（表１を参照されたい）。
【００７３】 １５：１のＤＰＰＣ：ペプチド１（ｗ：ｗ）を有する複合体を含むサンプルは
、Superose 6クロマトグラフィーを行わなかった。なぜなら、このサンプルは濁
りがあり、大きな粒子の存在が示唆されたからである。
【００７４】 上記の実験のいずれにおいても、吸収ピークを有する溶出物質を含む画分以外
の画分中には、有意な量のリン脂質はまったく観測されなかった（図２〜８を参
照されたい）。このことは、実質的にすべてのリン脂質（アッセイの実験誤差範
囲内で）が複合体中に取り込まれたことを示唆する。この実験から分かるように
、リン脂質対ペプチドの初期比を変えることによって、種々のサイズ（ＨＤＬよ
りも小さいサイズまたは大きいサイズ）の均質な複合体を形成することができる
。
【００７５】６．３．14Ｃ標識ペプチド１を使用する複合体の特性決定 先に記載したように、共凍結乾燥により、14Ｃ標識ペプチド１を含むペプチド
‐リン脂質複合体（比活性１５９，０００ＤＰＭ／ｍｇペプチド、重量基準、ペ
プチド含有量を５０％と仮定した）を調製した。調製物にはそれぞれ、重量基準
で、１ｍｇのペプチドと、３、４、または５ｍｇのＤＰＰＣとが含まれていた。
２００μｌの０．９％ＮａＣｌ中で複合体を再構成した後、液相として０．９％
ＮａＣｌを０．５ｍｌ／分の流量で使用し、２０μｌ（１００μｇ）の複合体を
Pharmacia Superose6カラムにアプライした。５ｍｌを溶出させた後（カラム空 隙体積＝７．７ｍｌ）、１ｍｌの画分を回収した。BioMerieux酵素アッセイを用
いて、画分２０μｌを含むアリコート中のリン脂質含有量のアッセイを行った。
Easy Countプログラムを使用し、Wallach 1410液体シンチレーションカウンター
（Pharmacia）中で３分間にわたり、それぞれの画分の残りの部分に対して放射 線計数を行った。これらの分析の結果は、図６〜８に示される。リン脂質および
ペプチドはいずれも、その大部分が、３：１、４：１、および５：１のＤＰＰＣ
：ペプチド比で調製した複合体に対してそれぞれ約１６、１６、および１５ｍｌ
にピークを有する少数の画分中に一緒に回収されることが分かる。これらのサン
プルのＵＶ吸収プロフィールから分かるように、３：１、４：１、および５：１
のＤＰＰＣ：ペプチド比で調製した複合体では、それぞれ１５．１、１４．７お
よび１４．４ｍｌの体積位置で複合体が溶出する（フラクションコレクターとＵ
Ｖフローセルとを連結する管のむだ体積は１．３ｍｌであり、従って、放射能／
リン脂質アッセイにより測定した溶出量とＵＶ吸収により測定した溶出量との間
にはわずかなずれを生じる）。溶出量は、３：１、４：１、および５：１のＲｉ
を有する複合体に対して、それぞれ１０６、１１４、および１２０オングストロ
ームのストークス径に対応する。
【００７６】
【表１】
【００７７】 本発明は、本発明の個々の態様を単に例示するために記載されている実施形態
によって範囲が限定されるものではなく、機能的に等価な方法および組成物は、
本発明の範囲内にある。実際上、図示および説明したもの以外の本発明の種々の
変更態様は、以上の説明および添付の図面から当業者には自明であろう。このよ
うな変更態様は、添付の特許請求の範囲に含まれるものとする。
【図面の簡単な説明】
【図１】 ヒト血清２００μｌから密度超遠心分離により調製されたＨＤＬのＳｕｐｅｒ
ｏｓｅ６クロマトグラフィー。
【図２】 （図２下） 比１：１（ｗ：ｗ）で調製された（ＤＰＰＣ：ペプチド１）（ＰＶＬＤＬＦＲ
ＥＬＬＮＥＬＬＥＡＬＫＱＫＬＫ；配列番号１）複合体のＳｕｐｅｒｏｓｅ６ク
ロマトグラフィー。 （図２上） 比２：１（ｗ：ｗ）で調製された（ＤＰＰＣ：ペプチド１）複合体のＳｕｐｅ
ｒｏｓｅ６クロマトグラフィー。
【図３】 （図３下） 比３：１（ｗ：ｗ）で調製された（ＤＰＰＣ：ペプチド１）複合体のＳｕｐｅ
ｒｏｓｅ６クロマトグラフィー。 （図３上） 比４：１（ｗ：ｗ）で調製された（ＤＰＰＣ：ペプチド１）複合体のＳｕｐｅ
ｒｏｓｅ６クロマトグラフィー。
【図４】 （図４下） 比５：１（ｗ：ｗ）で調製された（ＤＰＰＣ：ペプチド１）複合体のＳｕｐｅ
ｒｏｓｅ６クロマトグラフィー。 （図４上） 比７．５：１（ｗ：ｗ）で調製された（ＤＰＰＣ：ペプチド１）複合体のＳｕ
ｐｅｒｏｓｅ６クロマトグラフィー。
【図５】 比１０：１（ｗ：ｗ）で調製された（ＤＰＰＣ：ペプチド１）複合体のＳｕｐ
ｅｒｏｓｅ６クロマトグラフィー。
【図６】 Ｒｉ＝３：１の１４Ｃ標識ペプチド１複合体のＳｕｐｅｒｏｓｅ６クロマトグ
ラフィー。
【図７】 Ｒｉ＝４：１の１４Ｃ標識ペプチド１複合体のＳｕｐｅｒｏｓｅ６クロマトグ
ラフィー。
【図８】 Ｒｉ＝５：１の１４Ｃ標識ペプチド１複合体のＳｕｐｅｒｏｓｅ６クロマトグ
ラフィー。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，Ｕ Ｚ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C076 AA12 AA19 AA63 AA65 BB11 BB13 BB15 BB16 CC11 CC14 CC21 DD63F FF03 FF07 FF15 FF16 GG06 GG46 4C084 AA06 AA07 AA27 BA03 BA42 BA44 BA46 BA47 BA48 MA17 MA24 MA38 MA41 MA66 MA67 NA02 NA04 NA05 NA10 ZA361 ZA452 ZA511 ZA512 ZB352 ZC332

Claims (37)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 凍結乾燥されたペプチド／脂質生成物を調製する方法であっ
    て、両親媒性コンホメーションをとりうる１種以上のペプチドまたはペプチド類
    似体と１種以上の脂質とを溶剤系中で共凍結乾燥させてペプチド／脂質生成物を
    形成するステップを含み、該生成物を再水和させるとペプチド／脂質複合体を形
    成することができる、上記方法。
  2. 【請求項２】 前記ペプチドが脂質結合タンパク質である、請求項１に記載
    の方法。
  3. 【請求項３】 前記ペプチド類似体が、ＡｐｏＡ−Ｉ、ＡｐｏＡ−ＩＩ、Ａ
    ｐｏＡ−ＩＶ、ＡｐｏＣ−Ｉ、ＡｐｏＣ−ＩＩ、ＡｐｏＣ−ＩＩＩ、ＡｐｏＥ、
    または他のアポタンパク質の類似体である、請求項１に記載の方法。
  4. 【請求項４】 前記ペプチドがタンパク質である、請求項１に記載の方法。
  5. 【請求項５】 前記脂質が、天然脂質、合成脂質、飽和脂質、不飽和脂質、
    またはそれらの混合物である、請求項１に記載の方法。
  6. 【請求項６】 前記脂質が、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジル
    コリン、エーテルリン脂質、小アルキル鎖リン脂質、コレステロール、コレステ
    ロール誘導体、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファ
    チジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、１‐ミリストイル‐２‐
    パルミトイルホスファチジルコリン、１‐パルミトイル‐２‐ミリストイルホス
    ファチジルコリン、１‐パルミトイル‐２‐ステアロイルホスファチジルコリン
    、１‐ステアロイル‐２‐パルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホ
    スファチジルコリン、ジオレオホスファチジルエタノールアミン、ジラウロイル
    ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、
    ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミ
    エリン、スフィンゴ脂質、ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジルグリ
    セロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイルホスフ
    ァチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジオレオ
    イルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジン酸、ジパルミ
    トイルホスファチジン酸、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン、ジ
    パルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファチジル
    セリン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、脳ホスファチジルセリン、脳ス
    フィンゴミエリン、ジパルミトイルスフィンゴミエリン、ジステアロイルスフィ
    ンゴミエリン、ホスファチジン酸、ガラクトセレブロシド、ガングリオシド、セ
    レブロシド、ジラウリルホスファチジルコリン、（１、３）‐Ｄ‐マンノシル（
    １、３）ジグリセリド、アミノフェニルグリコシド、および３‐コレステリル‐
    ６’‐（グリコシルチオ）ヘキシルエーテル糖脂質、ならびにそれらの混合物か
    らなる群より選ばれる、請求項５に記載の方法。
  7. 【請求項７】 凍結乾燥前、凍結乾燥中、または凍結乾燥後、前記生成物を
    滅菌するステップを更に含む、請求項１に記載の方法。
  8. 【請求項８】 前記ペプチド／脂質複合体が滅菌されている、請求項１に記
    載の方法。
  9. 【請求項９】 単位用量剤形を形成すべく、凍結乾燥前に、前記ペプチドと
    前記脂質とを含む溶液を個々の容器中に分注するステップを更に含む、請求項１
    に記載の方法。
  10. 【請求項１０】 請求項１または７に記載の方法に従って調製された滅菌凍
    結乾燥ペプチド／脂質混合物を含んでなる医薬用単位用量剤形。
  11. 【請求項１１】 凍結乾燥されたペプチド／脂質生成物を調製する方法であ
    って、（ａ）少なくとも１種の両親媒性ペプチドまたはペプチド類似体を第１の
    溶液中に可溶化するステップと、（ｂ）該第１の溶液と混和しうる第２の溶液中
    に少なくとも１種の脂質を可溶化するステップと、（ｃ）該第１の溶液と該第２
    の溶液とを一緒にしてペプチド／脂質溶液を形成するステップと、（ｄ）再水和
    によりペプチド／脂質複合体を形成することのできる凍結乾燥されたペプチド／
    脂質生成物が得られるように、該ペプチド／脂質溶液を凍結乾燥するステップと
    、を含む上記方法。
  12. 【請求項１２】 前記ペプチドが脂質結合タンパク質である、請求項１１に
    記載の方法。
  13. 【請求項１３】 前記ペプチドがタンパク質である、請求項１に記載の方法
    。
  14. 【請求項１４】 前記ペプチド類似体が、ＡｐｏＡ−Ｉ、ＡｐｏＡ−ＩＩ、
    ＡｐｏＡ−ＩＶ、ＡｐｏＣ−Ｉ、ＡｐｏＣ−ＩＩ、ＡｐｏＣ−ＩＩＩ、ＡｐｏＥ
    、または他のアポタンパク質の類似体である、請求項９に記載の方法。
  15. 【請求項１５】 前記脂質が、天然脂質、合成脂質、飽和脂質、不飽和脂質
    、またはそれらの混合物である、請求項１１に記載の方法。
  16. 【請求項１６】 前記脂質が、卵ホスファチジルコリン、コレステロール、
    コレステロール誘導体、エーテルリン脂質、大豆ホスファチジルコリン、小さい
    アルキル鎖リン脂質、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホ
    スファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、１‐ミリストイル
    ‐２‐パルミトイルホスファチジルコリン、１‐パルミトイル‐２‐ミリストイ
    ルホスファチジルコリン、１‐パルミトイル‐２‐ステアロイルホスファチジル
    コリン、１‐ステアロイル‐２‐パルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオ
    イルホスファチジルコリン、ジオレオホスファチジルエタノールアミン、ジラウ
    ロイルホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセ
    リン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、スフィ
    ンゴミエリン、スフィンゴ脂質、ホスファチジルグリセロール、ジホスファチジ
    ルグリセロール、ジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイル
    ホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジ
    オレオイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジン酸、ジ
    パルミトイルホスファチジン酸、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミ
    ン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファ
    チジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、脳ホスファチジルセリン
    、脳スフィンゴミエリン、ジパルミトイルスフィンゴミエリン、ジステアロイル
    スフィンゴミエリン、ホスファチジン酸、ガラクトセレブロシド、ガングリオシ
    ド、セレブロシド、ジラウリルホスファチジルコリン、（１，３）‐Ｄ‐マンノ
    シル（１、３）ジグリセリド、アミノフェニルグリコシド、および３‐コレステ
    リル‐６’−（グリコシルチオ）ヘキシルエーテル糖脂質、ならびにそれらの混
    合物からなる群より選ばれる、請求項１５に記載の方法。
  17. 【請求項１７】 前記ペプチド／脂質溶液が滅菌されている、請求項１１に
    記載の方法。
  18. 【請求項１８】 前記ペプチド／脂質複合体が滅菌されている、請求項１１
    に記載の方法。
  19. 【請求項１９】 単位用量剤形を形成すべく、凍結乾燥前に、前記ペプチド
    ／脂質溶液を個々の容器中に分注するステップを更に含む、請求項１１に記載の
    方法。
  20. 【請求項２０】 凍結乾燥前、凍結乾燥中、または凍結乾燥後、滅菌ステッ
    プを更に含む、請求項１１に記載の方法。
  21. 【請求項２１】 請求項１１または１９に記載の方法に従って調製された安
    定な滅菌凍結乾燥ペプチド／脂質混合物を含んでなる医薬用単位用量剤形。
  22. 【請求項２２】 １種以上の両親媒性ペプチドまたはペプチド類似体と少な
    くとも１種の脂質とを溶剤系中で凍結乾燥させ、再水和によりペプチド／脂質複
    合体を形成することのできる脱水されたペプチド／脂質生成物を形成するプロセ
    スによって作製されるペプチド／脂質複合体。
  23. 【請求項２３】 前記ペプチドが脂質結合タンパク質である、請求項２２に
    記載のペプチド／脂質複合体。
  24. 【請求項２４】 前記ペプチドがＡｐｏＡ１類似体である、請求項２２に記
    載のペプチド／脂質複合体。
  25. 【請求項２５】 前記脂質が、天然脂質、合成脂質、飽和脂質、不飽和脂質
    、またはそれらの混合物である、請求項２２に記載のペプチド／脂質複合体。
  26. 【請求項２６】 前記脂質が、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジ
    ルコリン、コレステロール、コレステロール誘導体、小アルキル鎖リン脂質、エ
    ーテルリン脂質、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスフ
    ァチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、１つのｌ−ミリストイ
    ル‐２‐パルミトイルホスファチジルコリン、１‐パルミトイル‐２‐ミリスト
    イルホスファチジルコリン、１‐パルミトイル‐２‐ステアロイルホスファチジ
    ルコリン、１‐ステアロイル‐２‐パルミトイルホスファチジルコリン、ジオレ
    オイルホスファチジルコリン、ジオレオホスファチジルエタノールアミン、ジラ
    ウロイルホスファチジルグリセロール、ホスファチジルコリン、ホスファチジル
    セリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、スフ
    ィンゴミエリン、スフィンゴ脂質、ホスファチジルグリセロール、ジホスファチ
    ジルグリセロールジミリストイルホスファチジルグリセロール、ジパルミトイル
    ホスファチジルグリセロール、ジステアロイルホスファチジルグリセロール、ジ
    オレオイルホスファチジルグリセロール、ジミリストイルホスファチジン酸、ジ
    パルミトイルホスファチジン酸、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミ
    ン、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ジミリストイルホスファ
    チジルセリン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、脳ホスファチジルセリン
    、脳スフィンゴミエリン、ジパルミトイルスフィンゴミエリン、ジステアロイル
    スフィンゴミエリン、ホスファチジン酸、ガラクトセレブロシド、ガングリオシ
    ド、セレブロシド、ジラウリルホスファチジルコリン、（１、３）‐Ｄ‐マンノ
    シル（１、３）ジグリセリド、アミノフェニルグリコシド、および３‐コレステ
    リル‐６’‐（グリコシルチオ）ヘキシルエーテル糖脂質、ならびにそれらの混
    合物からなる群より選ばれる、請求項２５に記載のペプチド／脂質複合体。
  27. 【請求項２７】 前記複合体が滅菌されている、請求項２２に記載のペプチ
    ド／脂質複合体。
  28. 【請求項２８】 前記複合体が滅菌単位用量剤形に製剤化される、請求項２
    ２に記載のペプチド／脂質複合体。
  29. 【請求項２９】 両親媒性αヘリックスコンホメーションをとることのでき
    るペプチドまたはペプチド類似体と脂質とから形成される複合体の滅菌調製物を
    含んでなる滅菌凍結乾燥組成物。
  30. 【請求項３０】 前記調製物が滅菌単位用量剤形で提供される、請求項２８
    に記載の組成物。
  31. 【請求項３１】 ペプチド／脂質複合体を含んでなる凍結乾燥組成物であっ
    て、該ペプチドが、脂質結合タンパク質であるか、またはＡｐｏＡ１、ＡｐｏＡ
    −ＩＩ、ＡｐｏＡ−ＩＶ、ＡｐｏＣ−Ｉ、ＡｐｏＣ−ＩＩ、ＡｐｏＣＩＩＩ、Ａ
    ｐｏＥ、もしくは他のアポタンパク質の類似体である、上記凍結乾燥組成物。
  32. 【請求項３２】 前記ペプチド／脂質複合体が、小胞、ミセル、リポソーム
    、円盤状粒子、球状粒子、またはそれらの混合物である、請求項３１に記載の凍
    結乾燥組成物。
  33. 【請求項３３】 ペプチド／脂質複合体を含んでなる凍結乾燥組成物であっ
    て、該ペプチドが両親媒性αヘリックスコンホメーションをとることができる、
    凍結乾燥組成物。
  34. 【請求項３４】 前記ペプチド／脂質複合体が、小胞、ミセル、リポソーム
    、円盤状粒子、球状粒子、またはそれらの混合物である、請求項３３に記載の凍
    結乾燥組成物。
  35. 【請求項３５】 前記組成物が滅菌されている、請求項３１または３３に記
    載の組成物。
  36. 【請求項３６】 前記類似体がペプチドでもタンパク質でもない、請求項２
    ９または３１に記載の組成物。
  37. 【請求項３７】 凍結乾燥されたペプチド／脂質生成物を調製する方法であ
    って、両親媒性コンホメーションをとりうる1種以上のペプチドまたはペプチド 類似体と、1種以上の脂質とを、ペプチド対脂質比約２〜約２００において、再 水和すると溶液状態でペプチド／脂質複合体を形成することのできるペプチド／
    脂質生成物を形成するのに十分な時間にわたって溶剤系中で共凍結乾燥するステ
    ップを含む、上記方法。
JP2000514617A 1997-10-02 1998-09-28 共凍結乾燥によるペプチド／脂質複合体の形成 Withdrawn JP2001522781A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/942,597 1997-10-02
US08/942,597 US6287590B1 (en) 1997-10-02 1997-10-02 Peptide/lipid complex formation by co-lyophilization
PCT/US1998/020330 WO1999017740A1 (en) 1997-10-02 1998-09-28 Peptide/lipid complex formation by co-lyophilization

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2001522781A true JP2001522781A (ja) 2001-11-20

Family

ID=25478329

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2000514617A Withdrawn JP2001522781A (ja) 1997-10-02 1998-09-28 共凍結乾燥によるペプチド／脂質複合体の形成

Country Status (20)

Country Link
US (4) US6287590B1 (ja)
EP (2) EP1019025B1 (ja)
JP (1) JP2001522781A (ja)
KR (1) KR100588241B1 (ja)
CN (1) CN100415210C (ja)
AT (1) ATE260644T1 (ja)
AU (2) AU749344B2 (ja)
CA (1) CA2305704C (ja)
DE (1) DE69822176T2 (ja)
DK (1) DK1019025T3 (ja)
ES (1) ES2217591T3 (ja)
HU (1) HUP0003930A3 (ja)
IL (1) IL135322A (ja)
NO (1) NO329155B1 (ja)
NZ (1) NZ503721A (ja)
PL (1) PL196579B1 (ja)
PT (1) PT1019025E (ja)
RU (1) RU2224506C2 (ja)
UA (1) UA71551C2 (ja)
WO (1) WO1999017740A1 (ja)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005225770A (ja) * 2004-02-10 2005-08-25 Japan Health Science Foundation 中空糸透析カラムを利用したリポソームの製造方法
JP2008520577A (ja) * 2004-11-15 2008-06-19 ディスカバリー ラボラトリーズ，インコーポレイテッド 肺表面活性物質配合物を凍結乾燥により生成する方法並びにその配合物及び利用

Families Citing this family (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5746223A (en) * 1996-10-11 1998-05-05 Williams; Kevin Jon Method of forcing the reverse transport of cholesterol from a body part to the liver while avoiding harmful disruptions of hepatic cholesterol homeostasis
US6004925A (en) * 1997-09-29 1999-12-21 J. L. Dasseux Apolipoprotein A-I agonists and their use to treat dyslipidemic disorders
US6287590B1 (en) 1997-10-02 2001-09-11 Esperion Therapeutics, Inc. Peptide/lipid complex formation by co-lyophilization
DE19954843C2 (de) * 1999-11-09 2003-11-20 Novosom Ag Verfahren zur Verkapselung von Proteinen oder Peptiden in Liposomen, mit dem Verfahren hergestellte Liposomen und deren Verwendung
US6514523B1 (en) 2000-02-14 2003-02-04 Ottawa Heart Institute Research Corporation Carrier particles for drug delivery and process for preparation
GB0121171D0 (en) * 2001-08-31 2001-10-24 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
US7148197B2 (en) * 2000-08-24 2006-12-12 The Regents Of The University Of California Orally administered small peptides synergize statin activity
US7166578B2 (en) 2000-08-24 2007-01-23 The Regents Of The University Of California Orally administered peptides synergize statin activity
US7723303B2 (en) * 2000-08-24 2010-05-25 The Regents Of The University Of California Peptides and peptide mimetics to treat pathologies characterized by an inflammatory response
US6664230B1 (en) * 2000-08-24 2003-12-16 The Regents Of The University Of California Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis
US7199102B2 (en) * 2000-08-24 2007-04-03 The Regents Of The University Of California Orally administered peptides synergize statin activity
US8568766B2 (en) 2000-08-24 2013-10-29 Gattadahalli M. Anantharamaiah Peptides and peptide mimetics to treat pathologies associated with eye disease
US7144862B2 (en) * 2000-08-24 2006-12-05 The Regents Of The University Of California Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis
RU2305547C2 (ru) * 2001-08-23 2007-09-10 Вестгейт Байолоджикал Лимитед Применение апопротеинов сыворотки молока в профилактике или лечении микробной или вирусной инфекции
US20030229062A1 (en) * 2001-12-07 2003-12-11 The Regents Of The University Of California Treatments for age-related macular degeneration (AMD)
JP2005511713A (ja) * 2001-12-07 2005-04-28 ザ・リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティー・オブ・カリフォルニア 加齢性黄斑変性についての処置
US7470659B2 (en) * 2001-12-07 2008-12-30 The Regents Of The University Of California Methods to increase reverse cholesterol transport in the retinal pigment epithelium (RPE) and Bruch's membrane (BM)
US20040009216A1 (en) * 2002-04-05 2004-01-15 Rodrigueza Wendi V. Compositions and methods for dosing liposomes of certain sizes to treat or prevent disease
US6930085B2 (en) * 2002-04-05 2005-08-16 The Regents Of The University Of California G-type peptides to ameliorate atherosclerosis
NL1020962C2 (nl) * 2002-06-28 2003-12-30 Tno Therapie en prognose/monitoring bij sepsis en septische shock.
US20060051407A1 (en) * 2003-06-27 2006-03-09 Yoram Richter Method of treating ischemia-reperfusion injury
US10517883B2 (en) 2003-06-27 2019-12-31 Zuli Holdings Ltd. Method of treating acute myocardial infarction
PE20050438A1 (es) * 2003-10-20 2005-06-14 Esperion Therapeutics Inc Formulas farmaceuticas, metodos y regimenes de dosificacion para el tratamiento y la prevencion de sindromes coronarios agudos
US20060019870A1 (en) * 2004-01-28 2006-01-26 O'donnell Francis E Jr Apoprotein cochleate compositions
SE0401942D0 (sv) * 2004-07-28 2004-07-28 Lipopeptide Ab New antimicrobial peptide complexes
WO2006034056A2 (en) * 2004-09-16 2006-03-30 The Regents Of The University Of California G-type peptides and other agents to ameliorate atherosclerosis and other pathologies
US7464012B2 (en) * 2004-12-10 2008-12-09 L'air Liquide, Societe Anonyme A Directoire Et Conseil De Surveillance Pour L'etude Et L'exploitation Des Procedes Georges Claude Simplified process simulator
BRPI0517148A (pt) 2004-12-06 2008-09-30 Univ California método de aperfeiçoamento da estrutura e/ou função arterìola; agente ativo e kit para tratamento
US7384916B2 (en) * 2005-03-16 2008-06-10 Procyte Corporation Methods and compositions for preventing and treating aging or photodamaged skin
US8206750B2 (en) * 2005-03-24 2012-06-26 Cerenis Therapeutics Holding S.A. Charged lipoprotein complexes and their uses
EP1890715A4 (en) * 2005-04-29 2009-10-28 Univ California PEPTIDES AND PEPTIDE MIMETICS FOR TREATMENT BY INFLAMMATORY REACTION OF CHARACTERIZED PATHOLOGIES
US20080293639A1 (en) * 2005-04-29 2008-11-27 The Regents Of The University Of California Peptides and peptide mimetics to treat pathologies characterized by an inflammatory response
US20070254832A1 (en) * 2006-02-17 2007-11-01 Pressler Milton L Methods for the treatment of macular degeneration and related eye conditions
WO2007137400A1 (en) * 2006-06-01 2007-12-06 Institut De Cardiologie De Montreal Method and compound for the treatment of valvular stenosis
WO2007149355A2 (en) * 2006-06-16 2007-12-27 Lipid Sciences, Inc. Novel peptides that promote lipid efflux
US20080227686A1 (en) * 2006-06-16 2008-09-18 Lipid Sciences, Inc. Novel Peptides that Promote Lipid Efflux
US20080206142A1 (en) * 2006-06-16 2008-08-28 Lipid Sciences, Inc. Novel Peptides That Promote Lipid Efflux
CA2659655A1 (en) 2006-08-08 2008-02-21 Alan M. Fogelman Salicylanilides enhance oral delivery of therapeutic peptides
US20080138284A1 (en) * 2006-09-26 2008-06-12 Lipid Sciences, Inc. Novel Peptides That Promote Lipid Efflux
ES2708851T3 (es) * 2006-10-06 2019-04-11 Bionet Pharma Gmbh Un implante del núcleo pulposo espinal
KR100817024B1 (ko) 2006-11-09 2008-03-26 재단법인 목암생명공학연구소 핵산 또는 약물을 간에 특이적으로 전달하는 복합체 및이를 포함하는 약학적 조성물
CN104083752B (zh) * 2007-06-27 2018-04-10 里兰斯坦福初级大学理事会 寡肽酪氨酸酶抑制剂及其应用
CA2728140C (en) 2007-06-27 2019-09-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Peptide tyrosinase inhibitors and uses thereof
WO2009032693A2 (en) 2007-08-28 2009-03-12 Uab Research Foundation Synthetic apolipoprotein e mimicking polypeptides and methods of use
US8557767B2 (en) 2007-08-28 2013-10-15 Uab Research Foundation Synthetic apolipoprotein E mimicking polypeptides and methods of use
CA2788223A1 (en) 2009-01-23 2010-07-29 Institut De Cardiologie De Montreal Method for the prevention and treatment of diastolic dysfunction employing an apolipoproteina1 (apoa1) mimetic peptide/phospholipid complex
SI2396017T1 (sl) 2009-02-16 2015-12-31 Cerenis Therapeutics Holding Sa Mimika apolipoproteina A-1
KR101131202B1 (ko) * 2009-02-23 2012-04-05 (주)에이피테크놀로지 난용성 약물 나노복합체의 제조방법
WO2011002258A2 (ko) * 2009-07-02 2011-01-06 한양대학교 산학협력단 아르기닌 기제 양친성 펩티드 마이셀
US10894098B2 (en) 2012-04-09 2021-01-19 Signablok, Inc. Methods and compositions for targeted imaging
WO2011143362A1 (en) 2010-05-11 2011-11-17 Esperion Therapeutics, Inc. Dimeric oxidation-resistant apolipoprotein a1 variants
EP2611419A2 (en) 2010-08-30 2013-07-10 F.Hoffmann-La Roche Ag Method for producing a tetranectin-apolipoprotein a-1 lipid particle, the lipid particle itself and its use
RU2017126088A (ru) 2011-02-07 2019-01-31 Серени Терапеутикс Холдинг С.А. Липопротеиновые комплексы и их получение и применения
RU2457864C1 (ru) * 2011-07-28 2012-08-10 Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная компания "ФАРМАСОФТ" (ООО "НПК "ФАРМАСОФТ") Гель, обладающий противовоспалительным, иммунотропным, противоаллергическим и ранозаживляющим действием
US9993427B2 (en) 2013-03-14 2018-06-12 Biorest Ltd. Liposome formulation and manufacture
CA2902209A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 The Regents Of The University Of California Peptides having reduced toxicity that stimulate cholesterol efflux
CN103860470A (zh) * 2014-03-05 2014-06-18 贵州中泰生物科技有限公司 一种口服高密度脂蛋白脂质体的制备方法
EP3137899A2 (en) 2014-05-02 2017-03-08 Cerenis Therapeutics Holding SA Hdl therapy markers
EP3189069B1 (en) 2014-07-31 2024-10-23 UAB Research Foundation Apoe mimetic peptides and higher potency to clear plasma cholesterol
ES2809460T3 (es) * 2014-10-30 2021-03-04 Delta Fly Pharma Inc Nuevo método de producción de lipoplejo para administración local y fármaco antitumoral que utiliza lipoplejo
US11642419B2 (en) 2015-03-25 2023-05-09 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for treating cardiovascular related disorders
US9763892B2 (en) 2015-06-01 2017-09-19 Autotelic Llc Immediate release phospholipid-coated therapeutic agent nanoparticles and related methods
CA2991655A1 (en) 2015-07-10 2017-01-19 Peptinovo Biopharma, Llc Formulations for improving the efficacy of hydrophobic drugs
CA3032229A1 (en) 2016-07-27 2018-02-01 Hartis-Pharma Sa Therapeutic combinations to treat red blood cell disorders
EP3508268B1 (en) * 2016-08-31 2023-10-25 Kewpie Corporation Egg yolk phospholipid composition and fat emulsion and lipolysis formulation using egg yolk phospholipid composition
KR102039661B1 (ko) 2017-07-28 2019-11-01 경북대학교 산학협력단 HDL-ApoM-S1P를 유효성분으로 포함하는 퇴행성뇌질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
US20190048049A1 (en) * 2017-08-10 2019-02-14 Cerenis Therapeutics Holding Sa Cargomers
CN111249451B (zh) * 2020-01-20 2022-11-04 成都医学院 一种糖脂类抗原注射液及其制备方法
CN112034175A (zh) * 2020-04-03 2020-12-04 苏州艾可瑞斯生物科技有限公司 一种ApoA-II、ApoC-II检测混合质控品及其制备方法

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH621479A5 (ja) 1977-08-05 1981-02-13 Battelle Memorial Institute
CA1173360A (en) 1979-06-22 1984-08-28 Jurg Schrank Pharmaceutical preparations
FR2521565B1 (fr) * 1982-02-17 1985-07-05 Dior Sa Parfums Christian Melange pulverulent de constituants lipidiques et de constituants hydrophobes, procede pour le preparer, phases lamellaires lipidiques hydratees et procede de fabrication, compositions pharmaceutiques ou cosmetiques comportant des phases lamellaires lipidiques hydratees
US4880635B1 (en) 1984-08-08 1996-07-02 Liposome Company Dehydrated liposomes
US4857319A (en) 1985-01-11 1989-08-15 The Regents Of The University Of California Method for preserving liposomes
US5178875A (en) * 1991-01-14 1993-01-12 The Board Of Regents, The University Of Texas System Liposomal-polyene preliposomal powder and method for its preparation
CA1335077C (en) * 1988-02-08 1995-04-04 Henri Isliker Process for the manufacture of apolipoproteins from human blood plasma or serum
US5077057A (en) * 1989-04-05 1991-12-31 The Regents Of The University Of California Preparation of liposome and lipid complex compositions
US5753258A (en) * 1990-10-19 1998-05-19 University Of Florida Artificial viral envelopes
CA2137814A1 (en) * 1992-06-12 1993-12-23 Maryvonne Rosseneu New peptides and proteins, process for their preparation and their use as cholesterol acceptors
US5785984A (en) * 1993-02-05 1998-07-28 Kao Corporation Taste-modifying method and bitterness-decreasing method
US5534241A (en) * 1993-07-23 1996-07-09 Torchilin; Vladimir P. Amphipathic polychelating compounds and methods of use
US5652339A (en) * 1993-12-31 1997-07-29 Rotkreuzstiftung Zentrallaboratorium Method of producing reconstituted lipoproteins
DE4416166C2 (de) * 1994-05-06 1997-11-20 Immuno Ag Stabiles Präparat zur Behandlung von Blutgerinnungsstörungen
US5948756A (en) * 1995-08-31 1999-09-07 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Therapeutic lipoprotein compositions
US6004925A (en) * 1997-09-29 1999-12-21 J. L. Dasseux Apolipoprotein A-I agonists and their use to treat dyslipidemic disorders
US6287590B1 (en) 1997-10-02 2001-09-11 Esperion Therapeutics, Inc. Peptide/lipid complex formation by co-lyophilization

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2005225770A (ja) * 2004-02-10 2005-08-25 Japan Health Science Foundation 中空糸透析カラムを利用したリポソームの製造方法
JP4617458B2 (ja) * 2004-02-10 2011-01-26 財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 中空糸透析カラムを利用したリポソームの製造方法
JP2008520577A (ja) * 2004-11-15 2008-06-19 ディスカバリー ラボラトリーズ，インコーポレイテッド 肺表面活性物質配合物を凍結乾燥により生成する方法並びにその配合物及び利用

Also Published As

Publication number Publication date
PT1019025E (pt) 2004-07-30
NZ503721A (en) 2001-08-31
KR100588241B1 (ko) 2006-06-13
US20070167351A1 (en) 2007-07-19
EP1019025A4 (en) 2001-10-24
AU2002300504B2 (en) 2005-05-12
CA2305704A1 (en) 1999-04-15
WO1999017740A9 (en) 1999-08-05
ES2217591T3 (es) 2004-11-01
NO329155B1 (no) 2010-08-30
US20030099714A1 (en) 2003-05-29
IL135322A0 (en) 2001-05-20
PL196579B1 (pl) 2008-01-31
AU9671598A (en) 1999-04-27
CN100415210C (zh) 2008-09-03
NO20001683D0 (no) 2000-03-31
US6287590B1 (en) 2001-09-11
AU749344B2 (en) 2002-06-27
UA71551C2 (en) 2004-12-15
KR20010030892A (ko) 2001-04-16
DE69822176D1 (de) 2004-04-08
NO20001683L (no) 2000-05-10
CN1280490A (zh) 2001-01-17
DK1019025T3 (da) 2004-05-24
US6455088B1 (en) 2002-09-24
EP1358874A1 (en) 2003-11-05
EP1019025A1 (en) 2000-07-19
IL135322A (en) 2005-11-20
ATE260644T1 (de) 2004-03-15
WO1999017740A1 (en) 1999-04-15
CA2305704C (en) 2008-09-30
RU2224506C2 (ru) 2004-02-27
HUP0003930A3 (en) 2001-06-28
HUP0003930A2 (hu) 2001-05-28
PL339654A1 (en) 2001-01-02
DE69822176T2 (de) 2004-09-16
US7189411B2 (en) 2007-03-13
EP1019025B1 (en) 2004-03-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2001522781A (ja) 共凍結乾燥によるペプチド／脂質複合体の形成
Vemuri et al. Preparation and characterization of liposomes as therapeutic delivery systems: a review
EP0781123B1 (en) Preparation of multivesicular liposomes for controlled release of active agents
US6514523B1 (en) Carrier particles for drug delivery and process for preparation
US5614214A (en) Reduction of liposome-induced adverse physiological reactions
JPH0545568B2 (ja)
RU2000111523A (ru) Образование пептид/липидного комплекса путем совместной лиофилизации
IL97538A (en) Multilayer liposomes containing guanidino aminoglycosides and their preparation
CA2050679C (en) Preparation of liposome and lipid complex compositions
JP2001510786A (ja) 脂質剤及びタンパク質を含む脂質粒子の医薬組成物の製造方法
JPH04234820A (ja) 長期作用持続性リポソームペプチド薬学的生成物およびそれらの調製方法
JPH06345663A (ja) バンコマイシン含有リポソーム製剤
WO1993004672A1 (en) Method for enhancing the immune system in a host employing liposome-encapsulated polypeptides
JP2817883B2 (ja) 高度に完全なリポソームおよびその製剤法と用途
JPH04221316A (ja) 合成脂質を含んで成る非経腸投与用リポゾーム製剤
MXPA00003132A (en) Peptide/lipid complex formation by co-lyophilization
Gregory Preparation of Liposomes and Oily Formulations by Freeze-Drying of Monophase Solutions
Li et al. Preparation of liposomes and oily formulations by freeze-drying of monophase solutions
Gregoriadis Preparation of Liposomes and Oily Formulations by Freeze-Drying of Monophase Solutions.............. ChunLei Li, YingJie Deng, and JingXia Cui
CA2199018A1 (en) Method of producing a lyophilized liposome product

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20050927

RD01 Notification of change of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7421

Effective date: 20060512

RD04 Notification of resignation of power of attorney

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424

Effective date: 20060512

A761 Written withdrawal of application

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761

Effective date: 20071126