PL196579B1 - Sposób wytwarzania liofilizowanego produktu - Google Patents
Sposób wytwarzania liofilizowanego produktuInfo
- Publication number
- PL196579B1 PL196579B1 PL339654A PL33965498A PL196579B1 PL 196579 B1 PL196579 B1 PL 196579B1 PL 339654 A PL339654 A PL 339654A PL 33965498 A PL33965498 A PL 33965498A PL 196579 B1 PL196579 B1 PL 196579B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- lipid
- peptide
- solution
- solvent
- complexes
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 135
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 126
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 30
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 157
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims abstract description 53
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 26
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 10
- 101800002011 Amphipathic peptide Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000003791 organic solvent mixture Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 79
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 51
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 41
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 40
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 claims description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 22
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical group CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 20
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- -1 ether phospholipids Chemical class 0.000 claims description 15
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000008096 xylene Substances 0.000 claims description 12
- 108010059886 Apolipoprotein A-I Proteins 0.000 claims description 10
- 102000005666 Apolipoprotein A-I Human genes 0.000 claims description 10
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 10
- 102000019758 lipid binding proteins Human genes 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 6
- 101710129138 ATP synthase subunit 9, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 5
- 101710168506 ATP synthase subunit C, plastid Proteins 0.000 claims description 5
- 101710114069 ATP synthase subunit c Proteins 0.000 claims description 5
- 101710197943 ATP synthase subunit c, chloroplastic Proteins 0.000 claims description 5
- 101710187091 ATP synthase subunit c, sodium ion specific Proteins 0.000 claims description 5
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 5
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 claims description 4
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 4
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 claims description 4
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 claims description 4
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 claims description 3
- BPIUIOXAFBGMNB-UHFFFAOYSA-N 1-hexoxyhexane Chemical compound CCCCCCOCCCCCC BPIUIOXAFBGMNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108010087614 Apolipoprotein A-II Proteins 0.000 claims description 3
- 102000009081 Apolipoprotein A-II Human genes 0.000 claims description 3
- 102100037320 Apolipoprotein A-IV Human genes 0.000 claims description 3
- 102100036451 Apolipoprotein C-I Human genes 0.000 claims description 3
- 108010076807 Apolipoprotein C-I Proteins 0.000 claims description 3
- 108010024284 Apolipoprotein C-II Proteins 0.000 claims description 3
- 102100039998 Apolipoprotein C-II Human genes 0.000 claims description 3
- 108010056301 Apolipoprotein C-III Proteins 0.000 claims description 3
- 102000030169 Apolipoprotein C-III Human genes 0.000 claims description 3
- 102000013918 Apolipoproteins E Human genes 0.000 claims description 3
- 108010025628 Apolipoproteins E Proteins 0.000 claims description 3
- JLPULHDHAOZNQI-JLOPVYAASA-N [(2r)-3-hexadecanoyloxy-2-[(9e,12e)-octadeca-9,12-dienoyl]oxypropyl] 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC JLPULHDHAOZNQI-JLOPVYAASA-N 0.000 claims description 3
- 108010073614 apolipoprotein A-IV Proteins 0.000 claims description 3
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 claims description 3
- FRKBLBQTSTUKOV-UHFFFAOYSA-N diphosphatidyl glycerol Natural products OP(O)(=O)OCC(OP(O)(O)=O)COP(O)(O)=O FRKBLBQTSTUKOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003586 protic polar solvent Substances 0.000 claims description 3
- CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 1,2-di-O-myristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC CITHEXJVPOWHKC-UUWRZZSWSA-N 0.000 claims description 2
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 claims description 2
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 2
- RFVFQQWKPSOBED-PSXMRANNSA-N 1-myristoyl-2-palmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCC RFVFQQWKPSOBED-PSXMRANNSA-N 0.000 claims description 2
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 150000001841 cholesterols Chemical class 0.000 claims description 2
- 229960003724 dimyristoylphosphatidylcholine Drugs 0.000 claims description 2
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 claims description 2
- 229940067605 phosphatidylethanolamines Drugs 0.000 claims description 2
- 229940067626 phosphatidylinositols Drugs 0.000 claims description 2
- 150000008106 phosphatidylserines Chemical class 0.000 claims description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 39
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 37
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 37
- OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 Chemical compound C1=CC=2C(C[C@@H]3NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](NC(=O)N(CC#CCN(CCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](CC4=CC=CC=C4)NC3=O)C(=O)N)CC=C)NC(=O)[C@@H](N)C)CC3=CNC4=C3C=CC=C4)C)=CNC=2C=C1 OBMZMSLWNNWEJA-XNCRXQDQSA-N 0.000 description 25
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 22
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 21
- 239000000047 product Substances 0.000 description 20
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 19
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 description 14
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 13
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 12
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 10
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 8
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 208000010152 Huntington disease-like 3 Diseases 0.000 description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N furosemide Chemical class C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC(C(O)=O)=C1NCC1=CC=CO1 ZZUFCTLCJUWOSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 5
- 102000007592 Apolipoproteins Human genes 0.000 description 4
- 108010071619 Apolipoproteins Proteins 0.000 description 4
- 102000006410 Apoproteins Human genes 0.000 description 4
- 108010083590 Apoproteins Proteins 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 4
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 4
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 4
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 3
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 3
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 3
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 229940099352 cholate Drugs 0.000 description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 3
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 2
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 2
- 229940123457 Free radical scavenger Drugs 0.000 description 2
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- 108010080283 Pre-beta High-Density Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 150000002433 hydrophilic molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 2
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZSITQMWYBNPMW-GDLZYMKVSA-N 1,2-ditetradecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC OZSITQMWYBNPMW-GDLZYMKVSA-N 0.000 description 1
- BIABMEZBCHDPBV-MPQUPPDSSA-N 1,2-palmitoyl-sn-glycero-3-phospho-(1'-sn-glycerol) Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@@H](O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC BIABMEZBCHDPBV-MPQUPPDSSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXFQFBNBSPQBJW-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-methylpropane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)(C)CO UXFQFBNBSPQBJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCC(O)=O IVLXQGJVBGMLRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NEZDNQCXEZDCBI-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumylethyl 2,3-di(tetradecanoyloxy)propyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC NEZDNQCXEZDCBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZXWQZGROTQMXME-WXUJBLQXSA-N 2-hydroxy-n-[(e,2s,3r)-3-hydroxy-1-[(2r,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoctadec-4-en-2-yl]tetracosanamide Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)N[C@H]([C@H](O)\C=C\CCCCCCCCCCCCC)CO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O ZXWQZGROTQMXME-WXUJBLQXSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 1
- KLFKZIQAIPDJCW-HTIIIDOHSA-N Dipalmitoylphosphatidylserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KLFKZIQAIPDJCW-HTIIIDOHSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- UTGQNNCQYDRXCH-UHFFFAOYSA-N N,N'-diphenyl-1,4-phenylenediamine Chemical compound C=1C=C(NC=2C=CC=CC=2)C=CC=1NC1=CC=CC=C1 UTGQNNCQYDRXCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FVJZSBGHRPJMMA-IOLBBIBUSA-N PG(18:0/18:0) Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@@H](O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC FVJZSBGHRPJMMA-IOLBBIBUSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- DSNRWDQKZIEDDB-GCMPNPAFSA-N [(2r)-3-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-2-[(z)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (z)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC DSNRWDQKZIEDDB-GCMPNPAFSA-N 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000001246 colloidal dispersion Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- OGGXGZAMXPVRFZ-UHFFFAOYSA-M dimethylarsinate Chemical compound C[As](C)([O-])=O OGGXGZAMXPVRFZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960005160 dimyristoylphosphatidylglycerol Drugs 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- BPHQZTVXXXJVHI-AJQTZOPKSA-N ditetradecanoyl phosphatidylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@@H](O)CO)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC BPHQZTVXXXJVHI-AJQTZOPKSA-N 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000007824 enzymatic assay Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 1
- NIDYWHLDTIVRJT-UJPOAAIJSA-N heptyl-β-d-glucopyranoside Chemical compound CCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NIDYWHLDTIVRJT-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 108091016323 lipid binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004576 lipid-binding Effects 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N octyl beta-D-glucopyranoside Chemical compound CCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012798 spherical particle Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 239000002691 unilamellar liposome Substances 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1275—Lipoproteins; Chylomicrons; Artificial HDL, LDL, VLDL, protein-free species thereof; Precursors thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1277—Processes for preparing; Proliposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/775—Apolipopeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
- A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
1. Sposób wytwarzania liofilizowanego produktu kompleks peptyd/lipid, przez liofilizowanie i ponowne uwadnianie, znamienny tym, ze ko-liofilizuje si e roztworzony roztwór zawieraj acy amfipa- tyczny peptyd lub analog tego peptydu oraz lipid, w uk ladzie rozpuszczalnikowym, który wspó lroz- puszcza ka zdy ze sk ladników, przy czym lipid jest rozpuszczony we wspomnianym roztworze z wy- kluczeniem detergentu, przy czym wspomniany uk lad rozpuszczalnikowy stanowi rozpuszczalnik organiczny lub mieszanin e rozpuszczalnikow a wodno/organiczn a. PL PL PL PL
Description
(12) OPIS PATENTOWY (19) PL (11) 196579 (13) B1 (21) Numer zgłoszenia: 339654 (13) (22) Data zgłoszenia: 28.09.1998 (86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego:
28.09.1998, PCT/US98/20330 (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:
15.04.1999, WO99/17740 PCT Gazette nr 15/99 (51) Int.Cl.
A61K 9/127 (2006.01) A61K 9/19 (2006.01)
Opis patentowy przedrukowano ze względu na zauważ one błędy (54)
Sposób wytwarzania liofilizowanego produktu
| (30) Pierwszeństwo: 02.10.1997,US,08/942,597 | (76) Uprawniony i twórca wynalazku: Dasseux Jean-Louis,Bloomington,US |
| (43) Zgłoszenie ogłoszono: 02.01.2001 BUP 01/01 | (74) Pełnomocnik: |
| (45) O udzieleniu patentu ogłoszono: 31.01.2008 WUP 01/08 | Bartnik Urszula, POLSERVICE, Kancelaria Rzeczników Patentowych Sp. z o.o. |
(57) 1. Sposób wytwarzania liofilizowanego produktu kompleks peptyd/lipid, przez liofilizowanie i ponowne uwadnianie, znamienny tym, że ko-liofilizuje się roztworzony roztwór zawierający amfipatyczny peptyd lub analog tego peptydu oraz lipid, w układzie rozpuszczalnikowym, który współrozpuszcza każdy ze składników, przy czym lipid jest rozpuszczony we wspomnianym roztworze z wykluczeniem detergentu, przy czym wspomniany układ rozpuszczalnikowy stanowi rozpuszczalnik organiczny lub mieszaninę rozpuszczalnikową wodno/organiczną.
PL 196 579 B1
Opis wynalazku
Niniejszy wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania liofilizowanego produktu kompleks peptyd/lipid. Można liofilizować pojedynczy roztwór, który rozpuszcza zarówno peptydy jak i lipidy, lub też można stosować dwa odrębne roztwory. Metodę tę stosuje się w celu wytworzenia stabilnych pęcherzyków i kompleksów peptyd/lipid, włączając w to kompleksy micelarne, sferyczne i tarczowate w preparatach masowych lub w mniejszych jednostkach, które mogą być odpowiednie do dozowania.
Liposomy są to pęcherzyki składające się z przynajmniej jednej lipidowej błony bimolekularnej, zawierającej rdzeń wodny. Na ogół fosfolipidy zawierają lipidową warstwę bimolekularną, lecz warstwa bimolekularna może składać się z innych lipidów. Wodny roztwór wewnątrz liposomu określa się objętością chwytania.
Spośród wielu różnych zastosowań, liposomy opracowano jako nośniki do dostarczania leków, kosmetyków i związków aktywnych biologicznie. Stanowi to jedno z wielu innych zastosowań. Lipidowa warstwa bimolekularna zamyka lek, kosmetyk i tym podobne wewnątrz objętości chwytania liposomu i gdy lipidowa warstwa bimolekularna wchodzi w kontakt z powierzchniową błoną komórkową lek jest wydalany z rdzenia liposomu. Liposom wydziela swą zawartość do komórki przez wymianę lipidową, fuzję, endocytozę lub adsorpcję. Ostro i in., 1989, Am. J. Hosp. Pharm. 46:1576. Alternatywnie, lek, kosmetyk, związek aktywny biologicznie itp. można łączyć z lipidową błoną bimolekularną pęcherzyka lub wprowadzić do niej.
Poza pęcherzykami, kompleksy zawierające lipidy stosowano do podawania środków w postaci cząsteczkowej. Na przykład, wielu naukowców uznało za użyteczne wytwarzanie odtworzonych cząsteczek podobnych do lipoprotein lub kompleksów o podobnych wielkościach i gęstości jak cząsteczki lipoproteinowe o dużej gęstości (HDL). Te odtworzone kompleksy składają się zwykle z oczyszczonych apoprotein (zwykle apoproteina A-1) i fosfolipidów, takich jak fosfatydylocholina. Czasami włącza się również nieestryfikowany cholesterol. Najpowszechniej stosowanymi sposobami otrzymywania tych cząsteczek są (1) ko-sonikacja składników, albo sonifikacja w ką pieli albo za pomocą sonikatora sondują cego, (2) samorzutne wzajemne oddział ywanie składnika proteinowego z wytworzonymi pęcherzykami lipidowymi, (3) odtwarzanie za pomocą detergentu, po którym następuje usunięcie detergentu za pomocą dializy. Jones, 1986, Meth. in Enzymol. 128:553-582; Lins i in., 1993, Biochimica et Biophysica Acta, 1151:137-142; Brouillette & Anantharamaiah, 1995, Biochimica et Biophysica Acta, 1256:103-129; Jonas, 1992, Structure & Function of Apoproteines, Rozdział 8:217-250. Podobne kompleksy tworzą się również przez podstawienie związków apoproteinowych przez peptydy amfipatyczne tworzące helisy. Niestety, każdy z tych sposobów stwarza poważne problemy jeśli chodzi o wytwarzanie dużych ilości czystych kompleksów przy akceptowanej opłacalności. Ponadto, żadna z tych publikacji nie ujawnia ko-liofilizacji peptydów lub odpowiedników peptydowych, które są zdolne przyjąć konformację amfipatyczną alfa-spiralną i lipid.
Znanych jest wiele technik wytwarzania lipidowych pęcherzyków i kompleksów. Pęcherzyki lub liposomy wytwarzano stosując wiele protokołów, tworząc różne typy pęcherzyków. Różne typy liposomów obejmują: pęcherzyki wielopłytkowe, małe pęcherzyki jednopłytkowe i duże pęcherzyki jednopłytkowe.
Hydratacja fosfolipidów (lub innych lipidów) za pomocą wodnego roztworu może również dać w rezultacie dyspersję lipidów i samorzutne tworzenie się pęcherzyków wielopłytkowych (MLV). MLV jest liposomem o wielu lipidowych warstwach bimolekularnych otaczających centralny rdzeń wodny. Te typy liposomów są większe niż małe jednopłytkowe pęcherzyki (SUV) i mogą mieć ś rednice 350-400 nm. Począ tkowo MLV otrzymywano przez rozpuszczenie lipidów w chloroformie w kolbie kulistej i odparowanie chloroformu aż do momentu, gdy lipid utworzy cienką warstwę na ściankach kolby. Dodano wodny roztwór i warstwa lipidowa uległa rehydratacji. Pęcherzyki utworzyły się, gdy kolbą kręci się lub wiruje. Deamer i in., 1983, w Liposomes (Ostro, Ed.), Marcel Dekker, Inc. Nowy York (cytując Banghama i in., 1965, J. Mol. Biol. 13:238). Następnie Johnson i in. stwierdzili, że ten sposób również generuje pojedyncze pęcherzyki jednopłytkowe. Johnson i in., 1971, Biochim. Biophys. Acta 233:820.
Mały pęcherzyk jednopłytkowy (SUV) jest liposomem z pojedynczą lipidową warstwą bimolekularną zawierający rdzeń wodny. Zależnie od sposobu zastosowanego do wytworzenia SUV, wielkość ich średnicy może mieścić się w zakresie od 25-110 nm. Pierwsze SUV otrzymano przez suszenie preparatu fosfolipidowego w chloroformie w atmosferze azotu, dodając wodną warstwę w celu wytwoPL 196 579 B1 rzenia stężenia lipidów w zakresie milimolowym i sonikację roztworu w 45°C do uzyskania klarowności. Deamer i in., 1983 w Liposomes (Ostro, Ed.), Marcel Dekker, Inc. Nowy York. SUV otrzymane tym sposobem dają liposomy o średnicy w zakresie 25-50 nm.
Innym sposobem wytwarzania SUV jest szybkie wtryskiwanie roztworu etanol/lipid do wodnego roztworu, który ma być zamknięty. Deamer i in., 1983, w Liposomes (Ostro, Ed.), Marcel Dekker, Inc. Nowy York (cytując Batzri'ego i in., 1973, Biochim. Biophys. Acta 298-1015). SUV otrzymane tym sposobem dają wymiary o średnicy w zakresie 30-110 nm.
SUV można również wytworzyć przez czterokrotne przejście wielopłytkowych pęcherzyków przez Prasę Francuską przy 20 000 psi. Wymiary wytworzonych SUV będą mieścić się w zakresie średnicy od 30-50 nm. Deamer i in., 1983, w Liposomes (Ostro, Ed.), Marcel Dekker, Inc. Nowy York (cytując Barenholz i in., 1979, FEBS Lettres 99:210).
Wielopłytkowe i jednopłytkowe pęcherzyki fosfolipidowe można również wytwarzać przez wytłaczanie wodnych preparatów fosfolipidów przy wysokich ciśnieniach przez błony o małych porach (Hope i in., 1996, Chemistry and Physics od Lipids, 40:89-107).
Duży pęcherzyk jednopłytkowy (LUV) jest podobny do SUV(ów) tym, że są one pojedynczymi lipidowymi warstwami bimolekularnymi otaczającymi centralny rdzeń wodny, lecz LUV(y) są dużo większe niż SUV. Zależnie od ich części składowych i sposobu zastosowanego do ich wytworzenia wielkość LUV może mieścić się w zakresie średnicy od 50-1000 nm. Deamer i in., 1983, w Liposomes (Ostro, Ed.), Marcel Dekker, Inc. Nowy York. LUV(y) są zwykle wytwarzane przy pomocy jednej z trzech metod: rozcieńczanie detergentowe, odparowanie z odwróconymi fazami i infuzja.
W metodzie rozcień czania detergentowego, w celu wytworzenia miceli z preparatu lipidowego, stosuje się roztwory detergentowe, takie jak cholan, dezoksycholan, glukozyd oktylowy, glukozyd heptylowy i Triton X-100. Następnie roztwór ten dializuje się w celu usunięcia detergentu i w rezultacie tworzą się liposomy. Deamer i in., 1983, w Liposomes (Ostro, Ed.), Marcel Dekker, Inc. Nowy York. Sposób ten jest czasochłonny, a usunięcie detergentu zwykle jest niecałkowite. Obecność detergentu w końcowym preparacie może w rezultacie powodować toksyczność preparatu liposomowego i/lub zmiany fizykochemicznych własności preparatu liposomowego.
W metodzie odparowania z odwróconymi fazami rozpuszcza się lipid w wodnych-niepolarnych roztworach, tworząc odwrócone micele. Niepolarny rozpuszczalnik odparowuje się i micele skupiają się tworząc LUV. Zazwyczaj sposób ten wymaga dużej ilości lipidu.
W sposobie infuzji, rozpuszczony w niepolarnym roztworze lipid który ma być zamknięty wtryskuje się do wodnego roztworu. Gdy niepolarny roztwór odparowuje, lipidy zbierają się na granicy faz gazowej/wodnej. W procesie barbotażu gazu poprzez roztwór wodny warstwy lipidowe tworzą LUV i oligopł ytkowe liposomy. Liposomy sortuje się przez filtrowanie. Deamer i in., 1983, w Liposomes (Ostro, Ed.), Marcel Dekker, Inc. Nowy York (cytując Deamera i in., 1976, Biochim. Biophys. Acta 443:629 i Schierena i in., 1978, Biochim. Biophys. Acta 542:137). Procedury infuzji wymagają dość wysokich temperatur do infuzji i dają stosunkowo niską wydajność zamykania. Deamer i in., 1983, w Liposomes (Ostro, Ed.), Marcel Dekker, Inc. Nowy York.
Celem badań liposomów było opracowanie preparatów liposomowych, które można przechowywać w ciągu długich okresów czasu przed użyciem. Na przykład, Patent Stan. Zjedn. Nr 4,229,360, Schneider i in., ujawnia sposób dehydratacji liposomów przez dodanie hydrofilowego związku do koloidalnej dyspersji liposomów w wodnej cieczy i dehydratację roztworu, korzystnie przez liofilizację. Przykładami związków hydrofilowych są wielkocząsteczkowe polimery hydrofilowe lub małocząsteczkowe związki, takie jak sacharoza.
Patent Stan. Zjedn. Nr 4,411,894, Shrank i in., ujawnia zastosowanie dużych stężeń sacharozy w sonikowanych preparatach liposomów. Liposomy te zawierają produkty rozpuszczalne w tł uszczach w objętości chwytania, chociaż preparaty można by liofilizować , sposób ten nie mógłby zapobiec utracie znacznej ilości uchwyconej zawartości mimo wysokiego stężenia sacharozy.
Crowe i in., Patent Stan. Zjedn. Nr 4,857,319, ujawnili zastosowanie dwusacharydów, takich jak sacharoza, maltoza, laktoza i trehaloza w celu stabilizacji liposomów przy liofilizacji liposomów. Ilość dwusacharydu w odniesieniu do zawartości lipidu w związku (w/w) mieści się w zakresie 0,1:1 do 4:1. Stosując taki sposób, Crowe osiągnął lepsze rezultaty w zapewnieniu integralności liposomowej, niż miało to miejsce przy zastosowaniu sposobu ujawnionego przez Shrank w Patencie Stan. Zjedn. Nr 4,441,894.
Janoff i inn., Patent Stan. Zjedn. Nr 4,880,653, ujawniają sposób dehydratacji liposomów, w którym liposomy liofilizowano w obecności cukrów ochronnych, takich jak trehaloza i sacharoza, korzyst4
PL 196 579 B1 nie na zarówno wewnętrznym, jak i zewnętrznym listkach lipidowej warstwy bimolekularnej. W sposobie Janoffa i in. zachowuje się dostateczną ilość wody, tak aby rehydratacja suchych liposomów dawała liposomy o znacznej strukturalnej integralności.
W publikacji Nedelec, J-F i in. Biochimie, 1989, tom 71, strony 145-151, ujawniono sposób wytwarzania liofilizowanego produktu peptyd/lipid, w którym występuje etap ko-liofilizcji peptydu z fosfolipidami. W publikacji tej opisana jest technika konwencjonalna wytwarzania liposomów w trakcie której lipid jest otrzymywany w postaci wielowarstwowego filmu lub pęcherzyków. W metodzie tej nie stosowano roztworu proteina/lipid do wytwarzania liofilizowanego produktu. Autorzy tego opracowania, tak jak wielu innych, stosowali ponadto detergent cholanowy.
Problem techniczny jakim jest opracowanie prostego i opłacalnego sposobu tworzenia liofilizowanego kompleksu peptyd/lipid dającego się rehydratyzować podjęty został także przez twórców opisu patentowego nr US 5,652,339. Ujawniony tam sposób dotyczy wytwarzania na dużą skalę odtworzonych lipoprotein o dużej gęstości rHDL (reconstituted high density liplipoproteins) zawierających małe ilości wolnych lipidów i wolnej apoA-I; a także sposobu który mógłby być przeprowadzony bez dodawania organicznych rozpuszczalników. Celem tego wynalazku było znalezienie sposobu przemysłowego wytwarzania stabilnego liofilizatu zawierającego odtworzone lipoproteinowe cząsteczki z apolipoprotein i lipidów gdzie wodny roztwór apolipoproteiny jest mieszany z wodnym roztworem lipidowo-detergentowym bez konieczności dodawania rozpuszczalnika organicznego. Pokazano w tym opisie sposoby wytwarzania takiego preparatu, przy czym, podsumowując opisaną metodykę, we wszystkich przypadkach roztwór apoA-I sporządzano w NaCl, roztwór lipidu np. fosfatydylocholiny w buforze TRIS/HCL i soli sodowej kwasu cholowego. Wspomina się też o obecności alkoholu, lecz tylko w celu strącenia apoA-I. Natomiast w opisie patentowym nr US 5,089,602 wskazuje się otrzymywanie przez izolacje z preparatu krwi apolipoprotein. Apolipoproteiny są otrzymywane w tym wynalazku z precypitacyjnych frakcji etanolowych surowicy lub osocza krwi przez ponowne zawieszenie wspomnianej frakcji w wodnym roztworze buforowym, a nie pożądane zanieczyszczenia usuwane są poprzez dodanie krótkołańcuchowych alkoholi alifatycznych.
W związku z tym w technice istnieje wciąż potrzeba stworzenia prostego i op ł acalnego sposobu tworzenia liofilizowanych kompleksów peptyd/lipid, które następnie można rehydratyzować. Stosując sposób według niniejszego wynalazku można otrzymać mieszaniny peptyd/lipid w postaci stabilnego liofilizowanego proszku, który można przechowywać, stosować jako proszek lub stosować po rehydratacji w celu utworzenia kompleksów peptyd/lipid.
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania liofilizowanego produktu kompleks peptyd/lipid, przez liofilizowanie i ponowne uwadnianie, charakteryzujący się tym, że ko-liofilizuje się roztworzony roztwór zawierający amfipatyczny peptyd lub analog tego peptydu oraz lipid, w układzie rozpuszczalnikowym, który współrozpuszcza każdy ze składników, przy czym lipid jest rozpuszczony we wspomnianym roztworze z wykluczeniem detergentu i przy czym wspomniany układ rozpuszczalnikowy stanowi rozpuszczalnik organiczny lub mieszaninę rozpuszczalnikową wodno/organiczną. Korzystnie jako rozpuszczalnik stosuje się rozpuszczalnik niepolarny, polarny, aprotonowy lub protonowy, bardziej korzystnie jako rozpuszczalnik stosuje się etanol, metanol, cykloheksan, 1-butanol, alkohol izopropylowy, ksylen, tetrahydrofuran, eter, chlorek metylenu, benzen lub chloroform. Można także korzystnie stosować jako rozpuszczalnik mieszaninę etanolu, metanolu, cykloheksanu, 1-butanolu, alkoholu izopropylowego, ksylenu, THF-u, eteru, chlorku metylenu, benzenu lub chloroformu i wody.
W sposobie według wynalazku peptydem korzystnie jest proteina, ewentualnie, bardziej korzystnie peptydem jest proteina wiążąca lipid.
W sposobie wedł ug wynalazku w korzystnym rozwią zaniu analogiem peptydu jest analog ApoA-I, ApoA-II, ApoA-IV, ApoC-I, ApoC-II, ApoC-III lub ApoE. Peptydem może być też analog ApoA-I.
Jako lipid w sposobie według wynalazku stosuje się lipid naturalny, lipid syntetyczny, lub ich mieszanina. Lipidem tym może być lipid nasycony, lipid nienasycony, lub ich mieszanina.
Bardziej korzystnie, lipid wybiera się z grupy składającej się z fosfolipidów eterowych, fosfolipidów o małych łańcuchach, cholesterolu, pochodnych cholesterolu, fosfatydylocholin, fosfatydyloetanolamin, fosfatydyloseryn, fosfatydylo-inozytoli, sfingolipidów, fosfatydylogliceroli, gangliozydów i cerebrozydów.
Najkorzystniej lipid wybiera się z grupy składającej się z: fosfatydylocholiny jaj, fosfatydylocholiny sojowej, dipalmitoilofosfatydylocholiny,
PL 196 579 B1 dimirystoilofosfatydylocholiny, distearoilofosfatydylocholiny,
1-mirystoilo-2-palmitoilofosfatydylocholiny,
1-palmitoilo-2-mirystoilofosfatydylocholiny,
1-palmitoilo-2-stearoilofosfatydylocholiny,
1-stearoilo-2-palmitoilofosfatydylocholiny, dioleoilofosfatydylocholiny, dioleoilofosfatydyloetanolaminy, dilauroilofosfatydyloglicerolu, difosfatydyloglicerolu dimirystoilofosfatydyloglicerolu, dipalmitoilofosfatydyloglicerolu, distearoilofosfatydyloglicerolu, dioleoilofosfatydyloglicerolu, kwasu dimirystoilofosfatydowego, kwasu dipalmitoilofosfatydowego, dimirystoilofosfatydyloetanolaminy, dipalmitoilofosfatydyloetanolaminy, dimirystoilofosfatydyloseryny, dipalmitoilofosfatydyloseryny, sfingomieliny, dipalmitoilosfingomieliny, distearoilosfingomieliny, kwasu fosfatydowego, galaktocerebrozydu, dilaurylofosfatydylocholiny, (1,3)-D-mannozylo-(1,3)diglicerydu, aminofenyloglikozydu, i glikolipidów 3-cholesterylo-6'-(glikozylotio)heksylowych oraz ich mieszanin.
Korzystnie lipidem jest glikolipid 3-cholesterylo-6'-(glikozylotio)heksylo eter. Stosunek molarny lipidu do peptydu lub lipidu do analogu peptydu powinien wynosić od około 2:1 do około 200:1. Korzystnie stosunek ten może wynosić od około 2:1 do około 50:1, lub nawet, bardziej korzystnie, od około 5:1 do około 50:1. Roztwór w sposobie według wynalazku sporządza się stosując rozpuszczalnik organiczny, a produkt liofilizowany korzystnie może stanowić kompozycję farmaceutyczną.
Rozcieńczenia wspomnianego roztworzonego roztworu rozdziela się przed liofilizacją do poszczególnych pojemników tworząc kompozycję farmaceutyczną w postaci pojedynczej jednostki dawkowej. Wyżej wymieniony produkt ponadto sterylizuje się przed, w czasie lub po liofilizacji.
W korzystnym wykonaniu sposobu wedł ug wynalazku, (a) rozpuszcza się co najmniej jeden amfipatyczny peptyd lub odpowiednik peptydu w pierwszym rozpuszczalniku dla utworzenia pierwszego roztworu, (b) rozpuszcza się bez pomocy detergentu przynajmniej co najmniej jeden lipid w drugim rozpuszczalniku dla utworzenia drugiego roztworu, przy czym wyżej wymieniony drugi roztwór jest mieszalny z wyżej wymienionym pierwszym roztworem, (c) łączy się pierwszy roztwór z drugim roztworem, w celu utworzenia roztworzonego roztworu peptyd/lipid, przy czym wspomniany pierwszy rozpuszczalnik i drugi rozpuszczalnik są rozpuszczalnikami organicznymi lub rozpuszczalnikową mieszaniną wodno/organiczną.
Zgodnie z tym wykonaniem sposobu według wynalazku, pierwszy i drugi rozpuszczalnik są takie same, korzystnie ponadto poddaje się ponownemu uwodnieniu liofilizowany produkt peptyd/lipid dla utworzenia rozpuszczonego kompleksu peptyd/lipid.
Liofilizowany produkt peptyd/lipid w powyższym wykonaniu sposobu według wynalazku jest odwodnionym kompleksem peptyd/lipid. Można także korzystnie ponadto prowadzić ponowne uwodnienie odwodnionego kompleksu peptyd/lipid dla utworzenia rozpuszczonego kompleksu peptyd/lipid. W opisanym sposobie wedł ug wynalazku, pierwszy rozpuszczalnik korzystnie wybrany jest z grupy obejmującej wodę, metanol, 1-butanol i ich mieszaniny a drugi rozpuszczalnik jest wybrany z grupy obejmującej ksylen, metanol, chloroform i ich mieszaniny.
Sposobem według wynalazku wytwarza się kompleksy peptydowe lub proteino-(fosfo)lipidowe lub pęcherzyki, które mogą mieć własności podobne do własności lipoprotein o dużej gęstości (HDL).
PL 196 579 B1
W sposobie tym stosuje się układ rozpuszczalnikowy, w którym przynajmniej jeden peptyd rozpuszcza się w jednym roztworze i przynajmniej jeden lipid rozpuszcza się w innym roztworze. Dwa roztwory wybiera się tak, by były one mieszalne. Następnie łączy się roztwory i liofilizuje się powstały roztwór.
Jak już wspomniano powyżej sposób ten można również zrealizować stosując drugi typ układu rozpuszczalnikowego zawierającego roztwór, w którym zarówno proteinę lub peptyd, jak i lipid można rozpuszczać. Roztworem tym może być pojedynczy roztwór lub mieszany roztwór sporządzony przez połączenie dwóch lub więcej niż dwóch roztworów przed dodaniem peptydów i lipidów. Peptydy i lipidy rozpuszcza się w roztworze lub w mieszanym roztworze, a następnie liofilizuje się roztwór peptydowy/lipidowy.
Korzystnie peptydy niniejszego wynalazku są to peptydy, które są zdolne przyjąć konformację amfipatyczną spiralną. W szczególnym przykładzie wykonania wynalazku peptyd jest proteiną wiążącą lipid. W innym przykładzie wykonania stosuje się odpowiedniki peptydowe ApoA-I, ApoA-II, ApoA-IV, ApoC-I, ApoC-II, ApoC-III, ApoE, inne odpowiedniki apoliproteinowe zamiast peptydów lub w połączeniu z nimi. W innym szczególnym przykładzie wykonania sposób stosuje się do wytwarzania kompleksów odpowiednika ApoA1/(fosfo)lipidowych, podobnych do HDL. Kompleksy ApoA1/lipid są użyteczne w leczeniu zaburzeń zwią zanych z dyslipoproteinemiami, w łączają c, w to hipercholesterolemię , nadmiar trójglicerydów we krwi, małą zawartość HDL i niedobór apoliproteiny A-1, wstrząs septyczny, w diagnostycznych oznaczeniach in vitro jako znaczniki dla populacji HDL oraz w technice obrazowania.
Sposób według wynalazku umożliwia wytwarzanie kompleksów peptyd/lipid do stosowania pozajelitowego, włączając stosowanie dożylne, wewnątrzotrzewne, podskórne, domięśniowe i wstrzykiwanie dużych dawek zwierzętom lub ludziom. Ponadto, kompleksy peptyd/lipid można również opracować do stosowania doustnego, odbytniczego, śluzówkowego (np. jama ustna) lub miejscowego u zwierząt lub ludzi lub do doświadczeń in vitro.
Sposób można stosować w produkcji na dużą skalę amfipatycznych kompleksów peptyd/fosfolipid, kompleksów proteina wiążąca lipid/fosfolipid i/lub kompleksów odpowiednik peptydu ApoA1/fosfolipid. Liofilizowany materiał można wytworzyć dla preparatów masowych albo też roztwór mieszany peptyd/lipid można rozdzielić do małych pojemników (na przykład, pojedyncze jednostki dawkowania) przed liofilizacją i takie mniejsze jednostki można wytworzyć jako sterylne dawki jednostkowe.
Liofilizowany proszek wytworzony z zastosowaniem sposobu według wynalazku można rehydratyzować w sterylnym roztworze pozbawionym cząstek stałych bezpośrednio przed wstrzyknięciem albo też liofilizowany proszek można opracować w postaci stosownych dawek stałych i podawać bezpośrednio.
Niniejszy sposób może również być odpowiedni do stosowania w przechowywaniu związków, które w innych warunkach mogą być niestabilne lub nierozpuszczalne przy braku lipidów.
Sposób ten można również stosować do tworzenia produktów do leczenia chorób człowieka lub zapobiegania im, włączając takie zastosowania jak, wspólna obecność antygenów w szczepionkach, leczenie dyslipoproteinemii, włączając hipercholesterolemię, nadmiar trójglicerydów we krwi, małą zawartość HDL i niedobór apoliproteiny A-1, chorobę sercowo-naczyniową, taką jak miażdżyca tętnic, wstrząs septyczny lub choroby infekcyjne.
Sposób można również stosować do wytwarzania kompleksów, które można by stosować jako nośniki leków, jako wektory (do podawania leków, DNA, genów), na przykład, do wątroby lub do komórek pozawątrobowych lub jako akceptory wolnych rodników do zatrzymywania toksyn (np. pestycydów, LPS itp.)
Definicje
Użyty w niniejszym tekście termin układ rozpuszczalnikowy oznacza jeden lub więcej niż jeden rozpuszczalnik, który jest zdolny do rozpuszczania peptydów i/lub lipidów oraz, w przypadku gdy jest ich więcej niż jeden, który jest mieszalny jeden z drugim.
Użyty w niniejszym tekście termin kompleksy peptyd/lipid oznacza agregację reszt lipidowych i peptydów tworząc ą czą steczki mieszczą ce się w zakresie wielkoś ci lipoprotein o duż ej gę stoś ci (HDL).
Użyty w niniejszym tekście termin koliofilizowany dotyczy liofilizacji, suszenia sublimacyjnego lub suszenia próżniowego więcej niż jednego związku (np. peptydu, proteiny, lipidu, fosfolipidu) w roztworze w tym samym naczyniu. Na przykł ad, roztwór lipidowy moż na połączyć z roztworem pepPL 196 579 B1 tydowym w tym samym naczyniu, a powstałą kombinację roztworów liofilizuje się razem, tym sposobem jednocześnie liofilizując peptydy i lipidy.
Użyty w niniejszym tekście termin amfipatyczne alfa-spiralne peptydy oznacza peptydy, które są zdolne do przyjęcia konformacji odpowiednio amfipatycznej lub amfipatycznej spiralnej. Amfipatyczna alfa helisa jest często spotykanym drugorzędowym strukturalnym motywem w peptydach i proteinach aktywnych biologicznie. Patrz Amfipatyczny motyw spiralny: klasy i własności. Fere P. Segersta, Hansa de Loofa, Jana G. Dohlmana, Christie G. Brouillette'a i G.M. Anantharamaiaha. Proteiny: Funkcje Strukturalne i Genetyka, 8:103-117 (1990). Amfipatyczna alfa helisa jest alfa helisą z przeciwstawnymi powierzchniami polarną i niepolarną ukierunkowanymi wzdłuż długiej osi helisy. Charakterystyczny rozkład naładowanych reszt jest widoczny wzdłuż powierzchni polarnej. Amfipatyczne helisy, jak określono, są dopełniające dla powierzchni międzyfazowej polarnej-niepolarnej hydratowanego masowego fosfolipidu; zakłada się, że te obszary przyłączające lipidy oddziaływują wzajemnie z fosfolipidem przez częściowe zanurzenie ich na powierzchni międzyfazowej między acylowymi łańcuchami tłuszczowymi i polarnymi grupami czołowymi. Jere P. Segrest. Febs letters 1976, 69 (1): 111-114.
W niniejszym tekście termin peptyd i proteina można stosować zamiennie. Ponadto, odpowiednikami peptydów w niniejszym wynalazku mogą być peptydy, proteiny lub nieproteiny, tj. peptydy mimetyczne. Jednakże wszystkie te odpowiedniki są korzystnie cząsteczkami aktywnymi biologicznie.
Termin lipid zastosowany w niniejszym tekście obejmuje, fosfolipidy naturalne i syntetyczne. Ponadto, w niniejszym tekście terminy lipid i fosfolipid można stosować zamiennie.
Krótki opis rysunków na Fig. 1 - Fig. 8
Rysunek Fig. 1: Chromatografia na kolumnie Superose 6 HDL wytworzonego przez ultrawirowanie gęstościowe z 200 μ^ ludzkiej surowicy.
Rysunek Fig. 2 (dolny): Chromatografia na kolumnie Superose 6 kompleksów (DPPC:peptyd 1) (PVLDLFRELLNELLEALKQKLK; SEQ ID NO:1) wytworzonych przy stosunku 1:1 (w:w).
Rysunek Fig. 2 (górny): Chromatografia na kolumnie Superose 6 kompleksów (DPPC:peptyd 1) wytworzonych przy stosunku 2:1 (w:w).
Rysunek Fig. 3 (dolny): Chromatografia na kolumnie Superose 6 kompleksów (DPPC:peptyd 1) wytworzonych przy stosunku 3:1 (w:w).
Rysunek Fig. 3 (górny): Chromatografia na kolumnie Superose 6 kompleksów (DPPC:peptyd 1) wytworzonych przy stosunku 4:1 (w:w).
Rysunek Fig. 4 (dolny): Chromatografia na kolumnie Superose 6 kompleksów (DPPC:peptyd 1) wytworzonych przy stosunku 5:1 (w:w).
Rysunek Fig. 4 (górny): Chromatografia na kolumnie Superose 6 kompleksów (DPPC:peptyd 1) wytworzonych przy stosunku 7,5:1 (w:w).
Rysunek Fig. 5: Chromatografia na kolumnie Superose 6 kompleksów (DPPC:peptyd 1) wytworzonych przy stosunku 10:1 (w:w).
Rysunek Fig. 6: Chromatografia na kolumnie Superose 6 kompleksów peptydu 1 znakowanych C14 wytworzonych przy Ri = 3:1.).
Rysunek Fig. 7: Chromatografia na kolumnie Superose 6 kompleksów peptydu 1 znakowanego C14 wytworzonych przy Ri = 4:1.
Rysunek Fig. 8: Chromatografia na kolumnie Superose 6 kompleksów peptydu 1 znakowanego C14 wytworzonych przy Ri= 5:1.
Amfipatyczne alfa-spiralne peptydy lub proteiny, proteiny wiążące lipidy, peptydy agonistyczne ApoA-I, odpowiedniki apoprotein itp., które są użyteczne w niniejszym wynalazku, można syntezować lub produkować stosując metody znane w technice. Stabilne preparaty peptydów o długim dopuszczalnym okresie przechowywania można wytworzyć stosując liofilizację peptydów - albo w celu wytworzenia masowych materiałów do dalszej obróbki albo w celu wytworzenia indywidualnych dawek dzielonych lub jednostek dozowanych, które można odtwarzać przez rehydratację za pomocą sterylnej wody lub odpowiedniego sterylnego roztworu buforowego przed podaniem pacjentowi.
O ile twórcy wiadomo, niniejszy wynalazek jest pierwszym przykładem sposobu ko-liofilizowania amfipatycznego alfa spiralnego peptydu lub odpowiednika peptydu z lipidem w celu utworzenia mieszaniny, którą można odtwarzać w sterylny kompleks peptyd/lipid.
W niektórych przykładach wykonania może być korzystne opracowanie i podawanie odpowiednika(ów) ApoA-I, włączając, agonistów ApoA-I, w kompleksie peptyd/lipid. Podejście to zapewnia wiele korzyści, ponieważ kompleks powinien mieć zwiększony półokres trwania w krążeniu, szczególnie gdy kompleks ma wielkość i gęstość podobne do klasy protein HDL, zwłaszcza
PL 196 579 B1 populacji HDL pre-beta. Klasę lipoprotein HDL można podzielić na wiele podklas w oparciu o takie cechy charakterystyczne jak wielkość, gęstość i ruchliwość elektroforetyczna. Przykładami, w kolejności odzwierciedlającej rosnącą wielkość, są micelarne pre-beta HDL o średnicy 50 do 60 Angstremów, tarczowaty HDL o średniej wielkości, tj. o masie 65 kDa (około 70 Angstremów), sferyczny HDL3 lub HDL2 o średnicy 90 do 120 Angstremów. (J. Kane, 1996 w V. Fuster, R. Ross i E. Topol (eds.) Atherosclerosis and Coronary Artery Disease, str. 99; A. Tall i J. Breslow, ibid., str. 106; Barrans i in., Biochimica et Biophysica Acta 1300, str. 73-85; i Fielding i in., 1995, J. Lipid Res 36, str. 211-228). Jednakże według wynalazku można również utworzyć kompleksy peptyd/lipid o wielkości mniejszej lub większej niż HDL.
Kompleksy peptyd/lipid według niniejszego wynalazku można praktycznie wytworzyć jako stabilne preparaty o długim dopuszczalnym okresie przechowywania stosując procedurę koliofilizacji przedstawioną poniżej. Liofilizowane kompleksy peptyd/lipid można stosować do wytwarzania masowych materiałów do leków przeznaczonych do farmaceutycznego formułowania lub wytwarzania dawek dzielonych lub jednostek dozowanych, które przed podaniem pacjentowi można odtwarzać przez rehydratację za pomocą sterylnej wody lub odpowiedniego roztworu buforowego.
Zgłaszający opracowali prosty sposób wytwarzania kompleksów peptydowych lub proteinowo-(fosfo)lipidowych o charakterystykach podobnych do HDL. Sposób ten można stosować do wytwarzania kompleksów peptyd ApoA-I-lipid. Zastosowanie sposobu przynosi następujące korzyści. (1) Większość zawartych składników lub wszystkie one stosuje się w postaci utworzonych kompleksów, unikając tym sposobem strat materiału wyjściowego, które zwykle mają miejsce w przypadku innych sposobów. (2) Powstają liofilizowane związki, które są bardzo stabilne podczas przechowywania. Powstałe kompleksy można odtwarzać bezpośrednio przed użyciem. (3) Zwykle powstałe kompleksy nie wymagają dodatkowego oczyszczania po ich utworzeniu ani przed ich użyciem. (4) Unika się toksycznych związków, włączając detergenty, takie jak cholan. Ponadto, sposoby produkcji można łatwo przeprowadzić w większej skali i sposób jest odpowiedni do produkcji zgodnie z dobrą praktyką produkcyjną (to jest w środowisku nie zawierającym endotoksyny).
Zgodnie z korzystnym sposobem według wynalazku peptyd i lipid łączy się w układzie rozpuszczalnikowym, który współ-rozpuszcza każdy składnik. W tym celu pary rozpuszczalników muszą być starannie wybrane, tak aby zapewnić współ-rozpuszczalność zarówno peptydu amfipatycznego, jak i lipidu hydrofobowego. W jednym przykładzie wykonania proteinę(-y) lub peptyd(-y), które mają być wprowadzone do cząsteczek, można rozpuszczać w rozpuszczalniku wodnym lub organicznym lub w mieszaninie rozpuszczalników (rozpuszczalnik 1). Składnik (fosfo)lipidowy rozpuszcza się w rozpuszczalniku wodnym lub organicznym lub w mieszaninie rozpuszczalników (rozpuszczalnik 2), które są mieszalne z rozpuszczalnikiem i dwa roztwory łączy się. Alternatywnie, składnik (fosfo)lipidowy rozpuszcza się bezpośrednio w roztworze peptydowym (proteinowym). Alternatywnie, peptyd i lipid można wprowadzić do układu współ-rozpuszczalnikowego, to jest, mieszaniny mieszalnych rozpuszczalników. Fachowcy w tej dziedzinie będą wiedzieli, że przed liofilizacją może być konieczne, zależnie od własności wiązania lipidów peptydu lub proteiny, zwiększone lub nawet całkowite rozpuszczenie (i/lub zwiększone mieszanie), tak więc można odpowiednio wybrać rozpuszczalniki.
Odpowiednią proporcję peptydu (proteiny) do lipidów określa się najpierw empirycznie, tak aby otrzymane kompleksy miały odpowiednie własności fizyczne i chemiczne, zwykle, lecz nie zawsze w znaczeniu odpowiadania wielkością podobną do HDL2 lub HDL3. Stosunek molowy proteina/peptyd powinien mieścić się w zakresie około 2 do około 200, a korzystnie 5 do 50, zależnie od pożądanego typu kompleksów. Przykłady takich klas wielkości kompleksów peptyd/lipid lub proteina/lipid obejmują, lecz nie w sensie ograniczającym, cząsteczki micelarne lub tarczowate (zwykle mniejsze niż HDL3 lub HDL2), sferyczne cząsteczki o wielkości podobnej do HDL2 lub
HDL3 i większe kompleksy, które są większe niż HDL2. HDL stosowane przez nas jako standard w chromatografii (Rysunek 1) są głównie sferycznymi w pełni rozwiniętymi HDL2. HDL pre-βΐ s'H micelarnymi kompleksami apoliproteiny i kilku cząsteczek fosfolipidów. HDL pre-e2 s'H tarczowatymi kompleksami apoliprotein i cząsteczek fosfolipidów. Im więcej lipidów (trójglicerydy, cholesterol, fosfolipidy) wprowadza się, tym większa staje się HDL, a kształt jej ulega zmianie. (HDL pre-e1 (kompleks micelarny) HDL pre-e2 (kompleks tarczowaty) HDL3 (kompleks sferyczny)
HDL2 (kompleks sferyczny).
PL 196 579 B1
Po wybraniu rozpuszczalnika i wprowadzeniu peptydu i lipidu, powstałą mieszaninę zamraża się i liofilizuje do stanu suchego. Czasami w celu ułatwienia liofilizacji dodaje się do mieszaniny dodatkowy rozpuszczalnik. Ten liofilizowany produkt można przechowywać w ciągu długich okresów czasu i pozostaje on stabilny.
W realizowanych przykł adach opisanych poniż ej peptyd 1 PVLDLFRELLNELLEALKQKLK (SEQ ID NO:1) i (fosfo)lipid rozpuszczono oddzielnie w metanolu, połączono, a następnie zmieszano z ksylenem przed liofilizacją . Zarówno peptyd, jak i lipid, można dodać do mieszaniny dwóch rozpuszczalników. Alternatywnie, roztwór peptydu rozpuszczony w metanolu można mieszać z roztworem lipidu rozpuszczonym w ksylenie. Powinno się uważać, by unikać wysalania peptydu. Powstały roztwór zawierający peptyd i lipid współ-rozpuszczone w metanolu/ksylenie liofilizuje się w celu utworzenia proszku.
Liofilizowany produkt można odtwarzać w celu otrzymania roztworu lub zawiesiny kompleksu peptyd/lipid. W tym celu liofilizowany proszek rehydratyzuje się za pomocą wodnego roztworu w celu uzyskania odpowiedniej objętości (często około 5 mg peptydu/ml, co jest dogodne we wstrzykiwaniu dożylnym). W korzystnym przykładzie wykonania liofilizowany proszek rehydratyzuje się za pomocą roztworu soli w wodzie buforowanego fosforanem lub za pomocą roztworu fizjologicznego. Możliwe jest, że roztwór trzeba będzie mieszać lub poddać wirowaniu w celu ułatwienia rehydratacji oraz w wię kszoś ci przypadków etap odtwarzania powinno prowadzić się w temperaturze równej temperaturze przejścia fazowego (Tm) lub większej od niej, składnika lipidowego kompleksów. W ciągu kilku minut powstaje roztwór odtworzonych kompleksów lipid-proteina (przezroczysty roztwór gdy kompleksy są małe).
Dawkę dzieloną powstałego odtworzonego preparatu można oznaczyć w celu potwierdzenia tego, że kompleksy w preparacie mają pożądany rozkład, np. rozkład HDL. Do tego celu można zastosować chromatografię żelową. W realizowanych przykładach opisanych poniżej zastosowano układ chromatografii żelowej Pharmacia Superose 6 FPLC. Zastosowany eluent zawiera 150 mM NaCl w wodzie dejonizowanej. Typowa obję tość próbki wynosi 20 do 200 mikrolitrów kompleksów zawierających 5 mg peptydu/ml. Natężenie przepływu w kolumnie wynosi 0,5 ml/min. W celu wzorcowania kolumny zastosowano jako standardy grupy protein o znanej masie cząsteczkowej i średnicy Stokesa, jak również ludzki HDL. Kompleksy protein i lipoproteiny monitoruje się przez absorbancję lub rozpraszanie światła o długości fali 254 lub 280 nm.
Rozpuszczalniki, które można stosować zgodnie ze sposobem wynalazku obejmują rozpuszczalniki niepolarne, polarne, aprotonowe i protonowe, takie jak etanol, metanol, cyklohaksan, 1-butanol, alkohol izopropylowy, ksylen, THF, eter, chlorek metylenu, benzen i chloroform. Wynalazek obejmuje również stosowanie mieszanin rozpuszczalników, jak również pojedynczych rozpuszczalników. Ponadto, przed zastosowaniem w ramach niniejszych sposobów rozpuszczalniki organiczne można suszyć w celu usunięcia wody; jednakże w przypadku niektórych lipidów, peptydów lub protein można zastosować rozpuszczalniki hydratowane lub wodę. Innymi słowy, woda może być odpowiednim rozpuszczalnikiem lub można stosować hydratowane rozpuszczalniki lub mieszaniny rozpuszczalnik organiczny/woda. Jednakże, jeśli stosuje się wodę nie może ona zawierać detergentu. Jak była o tym mowa powyżej, korzystnie rozpuszczalniki mają najwyższą czystość (tak aby unikać koncentracji zanieczyszczeń po liofilizacji) oraz rozpuszczalniki powinny nie zawierać soli oraz cząstek stałych. Jednakże rozpuszczalniki nie muszą być sterylne, ponieważ powstały produkt można sterylizować przed, w czasie lub po liofilizacji, zgodnie z metodami znanymi w technice farmaceutycznej, takimi jak te przedstawione w Remington's Pharmaceutical Sciences, wydania 16 i 18, Mack Publishing Co., Easto, Pennsylvania (1980 i 1990), i w United States Pharmacopeia/National Formulary (USP/NF) XVII.
Lipidy, które można stosować zgodnie ze sposobem według wynalazku obejmują lipidy naturalne i syntetyzowane (syntetyczne) i fosfolipidy, w tym fosfolipidy o małych łańcuchach alkilowych, fosfatydylocholinę jaj, fosfatydylocholinę sojową, dipalmitoilofosfatydylocholinę, dimirystoilofosfatydylocholinę, distearoilofosfatydylocholinę, 1-mirystoilo-2-palmitoilofosfatydylocholinę, 1-palmitoilo-2-mirystoilofosfatydylocholinę, 1-palmitoilo-2-stearoilofosfatydylocholinę, 1-stearoilo-2-palmitoilofosfatydylocholinę, dioleoilofosfatydylocholinę, dioleoilofosfatydyloetanolaminę, dilauroilofosfatydyloglicerol, fosfatydylocholinę, fosfatydyloserynę, fosfatydyloetanolaminę, fosfatydyloinozytol, sfingomielinę, sfingolipidy, fosfatydyloglicerol, difosfatydyloglicerol, dimirystoilofosfatydyloglicerol, dipalmitoilofosfatydyloglicerol, distearoilofosfatydyloglicerol, dioleoilofosfatydyloglicerol, kwas dimirystoilofosfatydowy, kwas dipalmitoilofosfatydowy, dimirystoilofosfatydyloetanolaminę, dipalmitoilofosfatydyloetanolaminę, dimirystoilofosfatydylo10
PL 196 579 B1 serynę, dipalmitoilofosfatydyloserynę, fosfatydyloserynę mózgową, sfingomielinę mózgową, dipalmitoilosfingomielinę, distearoilosfingomielinę, kwas fosfatydowy, galaktocerebrozydy, gangliozydy, cerebrozydy, dilaurylofosfatydylocholinę, (1,3)-D-mannozylo-(1,3)digliceryd, aminofenyloglikozyd, glikolipidy 3-cholesterylo-6'-(glikozylotio)heksylo eterowe i cholesterol oraz jego pochodne.
Peptydy odpowiednie do stosowania w niniejszym wynalazku obejmują w sensie nie ograniczającym peptydy przedstawione w trzech zgłoszeniach będących równocześnie przedmiotem postępowania patentowego (numery porządkowe w rejestrze rzeczników 9196-0004-999, 9196-0005-999 i 9196-0006-999, wszystkie wniesione 29 wrze śnia 1997r.) o numerach odpowiednio: 6,004,925; 6,046,166 i 6,037,323.
Korzystne jest, chociaż niekonieczne w każdym przypadku, aby przed połączeniem lub mieszaniem roztworów peptydowych i lipidu lub przed liofilizacją rozpuścić albo usunąć osady.
Sposób można stosować przy produkcji na dużą skalę kompleksów peptyd/lipid, amfipatycznych kompleksów peptyd/(fosfo)lipid, kompleksów proteina wiążąca lipid/(fosfo)lipid i/lub kompleksów odpowiednik peptydu ApoA1/(fosfo)lipid. Liofilizowany materiał można wytworzyć dla preparatów masowych albo alternatywnie, roztwór mieszany peptyd/lipid można rozdzielić do małych pojemników (na przykład, pojedyncze jednostki dawkowania) przed liofilizacją i takie mniejsze jednostki można wytwarzać jako sterylne dawki jednostkowe.
Kompozycje suszone próżniowo wytworzone sposobem według niniejszego wynalazku można dostarczać w postaci pojemników zawierających pojedynczą dawkę lub wielokrotną dawkę przez aseptyczne napełnianie odpowiednich pojemników sterylnym roztworem wstępnie poddanym suszeniu próżniowemu do wymaganej objętości, wytworzenie pożądanych kompozycji suszonych próżniowo, a następnie hermetyczne zamknięcie pojemników zawierających pojedynczą dawkę lub wielokrotną dawkę. Chodzi o to, by te napełnione pojemniki umożliwiały szybkie rozpuszczenie suszonej kompozycji po odtworzeniu za pomocą odpowiednich sterylnych rozcieńczalników in situ, co w rezultacie daje odpowiedni sterylny roztwór do stosowania o pożądanym stężeniu. Stosowany w niniejszym tekście termin odpowiednie pojemniki oznacza pojemnik, który może utrzymać sterylne środowisko, taki jak fiolka, mogąca zawierać suszony próżniowo produkt, hermetycznie zamknięta przez środki zatyczkowe. Ponadto, odpowiednie pojemniki mają odpowiednie wielkości, przy uwzględnieniu objętości roztworu będącego w nich po odtworzeniu kompozycji suszonej próżniowo. Wykonuje się je z odpowiedniego materiału, zwykle szkła Typu I. Zastosowany środek zatyczkowy, np. sterylne zamknięcia gumowe lub ich odpowiednik, należy rozumieć jako środek, który zapewnia uszczelnienie, o którym była mowa powyżej, ale również w celu odtworzenia pożądanego roztworu umożliwia wprowadzenia rozcień czalnika np., wody do wstrzykiwania, USP, roztworu izotonicznego soli kuchennej, USP lub 5% dekstrozy w wodzie, USP. Te i inne aspekty dotyczące stosowalności pojemników do produktów farmaceutycznych, takich jak produkty otrzymane sposobem według niniejszego wynalazku, są dobrze znane fachowców posiadającym praktykę w technice farmaceutycznej. W szczególnych przykładach wykonania, wielkości dawek jednostkowych produktu mogą mieścić się w zakresie około 10 mg do 2 g peptydu, korzystnie w zakresie około 100 mg do 1 g przy stężeniu po odtworzeniu około 1 do 50 mg/ml, korzystnie około 2 do 20 mg/ml.
Sposób według wynalazku umożliwia wytwarzanie kompleksów peptyd/lipid do stosowania pozajelitowego, włączając, stosowanie dożylne, wewnątrzotrzewne, podskórne, domięśniowe i wstrzykiwanie dużych dawek zwierzętom lub ludziom, doustne, odbytnicze, śluzówkowe (np. jama ustna) lub miejscowe u zwierząt lub ludzi lub do doświadczeń in vitro.
Liofilizowany proszek wytworzony z zastosowaniem sposobu według wynalazku można rehydratyzować bezpośrednio przed wstrzyknięciem albo też liofilizowany proszek można podawać bezpośrednio.
Liofilizowany proszek zawiera, nie w sensie ograniczającym, lipid i peptydy, które mogą tworzyć kompleksy w postaci pęcherzyków, liposomów, cząsteczek, w tym cząsteczek sferycznych lub tarczowatych, miceli itp. W celu odtworzenia lub rehydratacji liofilizowanego proszku wybiera się roztwór zależnie od wskazanego stosowania końcowego. Dla celów farmaceutycznych można stosować każdy sterylny roztwór. Ponadto w przypadku pewnych zastosowań korzystne są roztwory buforowe. Obejmują one, fosforan, tris, baribital, octan, glicynę-HCl, bursztynian, kakodylan, kwas borny-boraks, ammediol i węglan.
PL 196 579 B1
Liofilizowany proszek według niniejszego wynalazku można utworzyć stosując sposób liofilizacji znany w technice, włączając suszenie sublimacyjne, w którym roztwór zawierający peptyd/lipid poddaje się zamrażaniu, po którym następuje odparowanie pod zmniejszonym ciśnieniem.
Sposób ten jest również odpowiedni do przechowywania związków, które mogą w innych warunkach być niestabilne lub nierozpuszczalne przy braku lipidów.
Sposób można stosować do sporządzania produktów do leczenia chorób człowieka lub zapobiegania im, włączając takie zastosowania jak wspólna obecność antygenów w szczepionkach, leczenie dyslipoproteinemii, włączając hipercholesterolemię, nadmiar trójglicerydów we krwi, małą zawartość HDL i niedobór apoliproteiny A-1, chorobę sercowo-naczyniową, taką jak miażdżyca tętnic, wstrząs septyczny lub choroby infekcyjne.
Sposób można stosować do wytwarzania kompleksów, które można by wykorzystywać jako nośniki leków, jako wektory (do podawania leków, DNA, genów), na przykład, do wątroby lub do komórek pozawątrobowych lub jako akceptory wolnych rodników do zatrzymywania toksyn (np. pestycydów, LPS itp.). Alternatywnie sposób można stosować do wytwarzania kompleksów do układów oznaczania in vitro lub w technice obrazowania.
W szczególnych przykładach wykonania moż na wytwarzać kompleksy odpowiednika ApoA-I (włączając w sensie nieograniczającym agonistów), które można stosować w diagnostycznych oznaczeniach in vitro oraz jako znaczniki dla populacji i subpopulacji HDL. W innych szczególnych przykładach wykonania, kompleksy agonistów ApoA-I można stosować do testów immunologicznych lub w technice obrazowania (np. analizy tomografii komputerowej, analizy MRI).
Poniższe przykłady ilustrują niniejszy wynalazek.
P r z y k ł a d: Wytwarzanie kompleksu peptyd-lipid przez liofilizację.
Do wytworzenia kompleksu peptyd-lipid zastosowano następującą procedurę.
Peptyd 1 (PVLDLFRELLNELLEALKQKLK; SEQ ID NO:1) (22,4 mg) i rozpuszczono oddzielnie w metanolu przy stężeniu 3,5 mg/ml przez inkubację trwającą kilku minut oraz mieszanie przez okresowe wirowanie. Do tego roztworu dodano dipalmitoilofosfatydylocholinę w metanolu (100 mg/ml roztworu podstawowego), tak, że końcowy stosunek DPPC/peptyd wyniósł 2,5:1 (masa/masa). Roztwór ten mieszano przez wirowanie. Do roztworu dodano ksylen do uzyskania końcowego stężenia 36%. Dzielone porcje powstałego roztworu usunięto dla dalszej analizy za pomocą chromatografii żelowej. Roztwory zamrożono w ciekłym azocie i liofilizowano do stanu suchego stosując próżnię. Dzieloną porcję 20 mg peptydu 1 (SEQ ID NO:1) i 50 mg DPPC rehydratyzowano w sterylnym roztworze soli (0,9% NaCl), mieszano i podgrzewano do 41°C w ciągu kilku minut, aż otrzymano przezroczysty roztwór odtworzonych kompleksów peptyd/fosfolipid.
P r z y k ł a d: Filtracja żelowa i wykorzystanie fosfolipidu
Materiały i metody
Dla celów warunków doświadczalnych do wytwarzania kompleksów często dogodne jest wytworzenie małych ilości kompleksów do oznaczania. Preparaty te zawierały jeden mg peptydu i wytworzono je w sposób następujący. Jeden mg peptydu 1 (SEQ ID NO:1) rozpuszczono w 250 μΐ metanolu klasy HPLC (Perkin Elmer) w 1,0 ml przezroczystej szklanej fiolce z nakrywką (Waters nr WAT025054). Rozpuszczanie peptydu można było wspomóc okresowym wirowaniem w ciągu 10 minut w temperaturze pokojowej. Po tym okresie czasu mogła być jeszcze widoczna mała ilość nierozpuszczalnych cząstek stałych, lecz nie wpływało to niekorzystnie na wyniki. Do tej mieszaniny dodaje się dzieloną dawkę zawierającą 1, 2, 3, 4, 5, 7,5, 10 lub 15 mg DPPC (Avanti Polar Lipids, Czystość 99%, produkt nr 850355) z 100 mg/ml roztworu podstawowego w metanolu. Objętość mieszaniny doprowadzono do 400 μΐ dodając metanol, a następnie mieszaninę wirowano okresowo w ciągu 10 minut w temperaturze pokojowej. Po tym czasie w probówkach można było zobaczyć bardzo mało nierozpuszczonego materiału. Do każdej probówki dodano 200 μΐ ksylenu (Sigma-Aldrich o czystości 99%, klasy HPLC) i każdą probówkę wirowano w ciągu 10 sekund. Na górze każdej probówki przebito dwa małe otwory za pomocą igły strzykawki pomiarowej 20. Każdą probówkę zamrażano w ciągu 15 sekund w ciekłym azocie oraz liofilizowano w ciągu nocy pod próżnią. Dodano do każdej probówki 200 ml roztworu 0,9% NaCl. Każdą probówkę wirowano w ciągu 20 sekund. W tym momencie roztwory w probówkach miały mleczny wygląd. Następnie probówki inkubowano w łaźni wodnej w ciągu 30 minut w 41°C. Roztwory we wszystkich probówkach stały się przezroczyste (i.e. podobne w wyglądzie do wody), oprócz probówki zawierającej 15 mg DPPC, która pozostała mleczna.
W celu określenia czy wszystkie fosfolipidy, które zastosowano w preparatach kompleksowych rzeczywiście pojawiły się we frakcjach kolumnowych odpowiadających pikom absorbancji chromato12
PL 196 579 B1 gramu, eluaty kolumnowe z odtworzonych kompleksów peptyd/lipid zebrano w jedno lub dwu ml frakcje i oznaczono enzymatycznie zawartość fosfolipidu we frakcjach za pomocą zestawu BioMerieux Phospholipides Enzymatique PAP 150 (nr 61491), zgodnie z instrukcjami dostarczonymi przez producenta.
Preparaty kompleksów można otrzymać również w większej skali. O przykładzie takiego preparatu była mowa powyżej. Kompleksy te stosowano w badaniach in vivo.
Wyniki oznaczania kompleksów.
Rysunek Fig. 1: Chromatografia na kolumnie Superose 6 w pełni rozwiniętego HDL2, wytworzonego przez ultrawirowanie gęstościowe z 200 μΐ ludzkiej surowicy. Chromatogram wykazuje absorbancję przy 254 nm. Objętość elucyjna = 14,8 ml, odpowiadająca średnicy Stokesa 108 Angstremów (Patrz Tabela 1).
Rysunek Fig. 2 (dolny): Chromatografia na kolumnie Superose 6 kompleksów DPPC:peptide 1 wytworzonych przy stosunku inkubacji (Ri, określonym jako stosunek całkowitego fosfolipidu do całkowitego peptydu w mieszaninie wyjściowej) 1:1 (w:w) jak opisano powyżej (wytwarzanie w małej skali). Objętości elucyjne pików absorbancji = 16,2 ml i 18,1 ml odpowiadające cząsteczkom o średnicy Stokesa 74 i 82 Angstremy, które są mniejsze niż HDL. 87% fosfolipidu nałożonego na kolumnie odzyskano we frakcjach mających piki absorbancji (Patrz Tabela 1).
Rysunek Fig. 2 (górny): Chromatografia na kolumnie Superose 6 kompleksów DPPC:peptide 1 wytworzonych przy Ri 2:1 (w:w) jak opisano powyżej. Objętość elucyjna piku absorbancji = 16,4 ml (77 Angstremy) odpowiadająca cząsteczkom mniejszym niż HDL. 70% fosfolipidu nałożonego na kolumnie odzyskano we frakcjach mających piki absorbancji (Patrz Tabela 1).
Rysunek Fig. 3 (dolny): Chromatografia na kolumnie Superose 6 kompleksów DPPC:peptide 1 wytworzonych przy Ri 3:1 (w:w) jak opisano powyżej. Objętość elucyjna piku absorbancji = 16,0 ml (80 Angstromy) odpowiadająca cząsteczkom mniejszym niż HDL. 79% fosfolipidu nałożonego na kolumnie odzyskano we frakcjach mających piki absorbancji (Patrz Tabela 1).
Rysunek Fig. 3 (górny): Chromatografia na kolumnie Superose 6 kompleksów DPPC:peptide 1 wytworzonych przy Ri 4:1 (w:w) jak opisano powyżej. Objętość elucyjna piku absorbancji = 15,7 ml (90 Angstremy) odpowiadająca cząsteczkom mniejszym niż HDL. 106% fosfolipidu nałożonego na kolumnie odzyskano we frakcjach mających piki absorbancji (Patrz Tabela 1).
Rysunek Fig. 4 (dolny): Chromatografia na kolumnie Superose 6 kompleksów DPPC:peptide 1 wytworzonych przy Ri 5:1 (w:w) jak opisano powyżej. Objętość elucyjna piku absorbancji = 15,1 ml (104 Angstremy) odpowiadająca cząsteczkom mniejszym niż HDL. 103% fosfolipidu nałożonego na kolumnie odzyskano we frakcjach mających piki absorbancji (Patrz Tabela 1).
Rysunek Fig. 4 (górny): Chromatografia na kolumnie Superose 6 kompleksów DPPC:peptide 1 wytworzonych przy Ri 7,5:1 (w:w) jak opisano powyżej. Objętość elucyjna piku absorbancji = 13,6 ml (134 Angstremy) odpowiadająca cząsteczkom większym niż HDL. 92% fosfolipidu nałożonego na kolumnie odzyskano we frakcjach mających piki absorbancji (Patrz Tabela 1).
Rysunek Fig. 5: Chromatografia Superose 6 kompleksów DPPC:peptide 1 wytworzonych przy Ri 10:1 (w:w) jak opisano powyżej. Objętość elucyjna piku absorbancji = 13,4 ml (138 Angstremy) ponownie odpowiadająca cząsteczkom większym niż HDL. 103% fosfolipidu nałożonego na kolumnie odzyskano we frakcjach mających piki absorbancji (Patrz Tabela 1).
Próbki zawierającej kompleksy z DPPD:peptyd 1 w stosunku 15:1 (w:w) nie poddano chromatografii na kolumnie Superpose 6, ponieważ były mętne, co sugerowało obecność dużych cząsteczek.
W przypadku każdego z powyższych badań nie zaobserwowano żadnego znaczącego fosfolipidu we frakcji innej niż frakcje zawierające materiał eulujący z pikami absorbancji (Patrz Rys. 2-8). Oznacza to, że faktycznie wszystkie fosfolipidy (w granicach błędu doświadczalnego oznaczania) były przeprowadzone w kompleksy. Badanie wykazuje, że przez zmianę początkowego stosunku fosfolipidów do peptydów, można utworzyć homogeniczne kompleksy o różnych wielkościach (mniejsze lub większe od HLM).
Charakterystyka kompleksów z zastosowaniem peptydu 1 znakowanego C14
Kompleksy peptyd/fosfolipid zawierające peptyd 1 znakowany C14 (aktywność właściwa 159 000 DPM/mg peptydu wagowo, zakładając 50% zawartość peptydu) wytworzono stosując liofilizację przedstawioną powyżej. Każdy preparat zawierał 1 mg peptydu i 3, 4 lub 5 mg DPPC wagowo. Po odtworzeniu kompleksów w 200 μΐ 0,9% NaCl, 20 μΐ (100 μg) kompleksów naniesiono na kolumnę Pharmacia Superose 6, z 0,9% NaCl jako fazą ciekłą przy szybkości przepływu 0,5 ml/min. Po 5 ml opóźnienia (pusta objętość kolumny = 7,7 ml) zebrano 1 ml frakcji. W dzieloPL 196 579 B1 nych porcjach zawierających 20 μg frakcji oznaczono zawartość fosfolipidów, stosując oznaczanie enzymatyczne BioMerieux. Pozostałość każdej frakcji liczono w ciągu 3 minut w ciekłym liczniku scyntylacyjnym Wallach 1410 (Pharmacia), stosując program Easy Count. Wyniki tych analiz przedstawiają Rysunki Fig. 6-8. Widać, że w przeważającej większości zostały odzyskane razem zarówno fosfolipid jak i peptyd, w kilku frakcjach o pikach w przybliżeniu 16, 16 i 15 ml dla kompleksów wytworzonych przy stosunkach DPPC:peptyd równych odpowiednio 3:1, 4:1 i 5:1. Profile absorbancji UV dla tych próbek wskazują na to, że kompleksy eluują z kolumny przy objętościach 15,1, 14,7 i 14,4 ml dla kompleksów wytworzonych przy stosunkach DPPC:peptyd odpowiednio 3:1, 4:1 i 5:1 (martwa objętość rury między kolektorem frakcji i kuwetą przepływową UV wynosi
1,3 ml, co wyjaśnia nieznaczną rozbieżność między objętościami elucyjnymi mierzonymi z zastosowaniem radioaktywnego oznaczenia fosfolipidów i absorbancji UV). Objętości elucyjne odpowiadają średnicom Stokesa 106, 114 i 120 Anstremów dla Ri kompleksów odpowiednio 3:1, 4:1 i 5:1.
T a b e l a 1
| Stosunek DPPC: peptyd 1 | Objętość elucyjna | Względna wielkość cząsteczek* | % stosowanego fosfolipidu w piku absorbancji |
| HDL | 14,8 | - | - - |
| 1:1 | 16,2 i 18,1 | mniejsza | 87% |
| 2:1 | 16,4 | mniejsza | 70% |
| 3:1 | 16,0 | mniejsza | 79% |
| 4:1 | 15,7 | mniejsza | 106% |
| 5:1 | 15,1 | mniejsza | 103% |
| 7,5:1 | 13,6 | większa | 92% |
| 10:1 | 13,4 | większa | 103% |
| 15:1 | ND** | ND | ND |
* W stosunku do wielkości cząsteczek HDL ** ND, niewykonane
Claims (27)
- Zastrzeżenia patentowe1. Sposób wytwarzania liofilizowanego produktu kompleks peptyd/lipid, przez liofilizowanie i ponowne uwadnianie, znamienny tym, że ko-liofilizuje się roztworzony roztwór zawierający amfipatyczny peptyd lub analog tego peptydu oraz lipid, w układzie rozpuszczalnikowym, który współrozpuszcza każdy ze składników, przy czym lipid jest rozpuszczony we wspomnianym roztworze z wykluczeniem detergentu, przy czym wspomniany układ rozpuszczalnikowy stanowi rozpuszczalnik organiczny lub mieszaninę rozpuszczalnikową wodno/organiczną.
- 2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako rozpuszczalnik stosuje się rozpuszczalnik niepolarny, polarny, aprotonowy lub protonowy.
- 3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako rozpuszczalnik stosuje się etanol, metanol, cykloheksan, 1-butanol, alkohol izopropylowy, ksylen, tetrahydrofuran, eter, chlorek metylenu, benzen lub chloroform.
- 4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że jako rozpuszczalnik stosuje się mieszaninę etanolu, metanolu, cykloheksanu, 1-butanolu, alkoholu izopropylowego, ksylenu, THF-u, eteru, chlorku metylenu, benzenu lub chloroformu i wody.
- 5. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że peptydem jest proteina.
- 6. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że peptydem jest proteina wiążąca lipid.
- 7. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że analogiem peptydu jest analog ApoA-I, ApoA-II, ApoA-IV, ApoC-I, ApoC-II, ApoC-III lub ApoE.
- 8. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że peptydem jest analog ApoA-I.PL 196 579 B1
- 9. Sposób wedł ug zastrz. 1, znamienny tym, ż e lipidem jest lipid naturalny, lipid syntetyczny, lub ich mieszanina.
- 10. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że lipidem jest lipid nasycony, lipid nienasycony, lub ich mieszanina.
- 11. Sposób według zastrz. 10, znamienny tym, że lipid wybiera się z grupy składającej się z fosfolipidów eterowych, fosfolipidów o mał ych ł a ń cuchach, cholesterolu, pochodnych cholesterolu, fosfatydylocholin, fosfatydyloetanolamin, fosfatydyloseryn, fosfatydylo-inozytoli, sfingolipidów, fosfatydylogliceroli, gangliozydów i cerebrozydów.
- 12. Sposób według zastrz. 11, znamienny tym, że wyżej wymieniony lipid wybiera się z grupy składającej się z:fosfatydylocholiny jaj, fosfatydylocholiny sojowej, dipalmitoilofosfatydylocholiny, dimirystoilofosfatydylocholiny, distearoilofosfatydylocholiny,1-mirystoilo-2-palmitoilofosfatydylocholiny,1-palmitoilo-2-mirystoilofosfatydylocholiny,1-palmitoilo-2-stearoilofosfatydylocholiny,1-stearoilo-2-palmitoilofosfatydylocholiny, dioleoilofosfatydylocholiny, dioleoilofosfatydyloetanolaminy, dilauroilofosfatydyloglicerolu, difosfatydyloglicerolu dimirysoilofosfatydyloglicerolu, dipalmitoilofosfatydyloglicerolu, distearoilofosfatydyloglicerolu, dioleoilofosfatydyloglicerolu, kwasu dimirystoilofosfatydowego, kwasu dipalmitoilofosfatydowego, dimirystoilofosfatydyloetanolaminy, dipalmitoilofosfatydyloetanolaminy, dimirystoilofosfatydyloseryny, dipalmitoilofosfatydyloseryny, sfingomieliny, dipalmitoilosfingomieliny, distearoilosfingomieliny, kwasu fosfatydowego, galaktocerebrozydu, dilaurylofosfatydylocholiny, (1,3)-D-mannozylo-(1,3)diglicerydu, aminofenyloglikozydu, i glikolipidów 3-cholesterylo-6'-(glikozylotio)heksylowych oraz ich mieszanin.
- 13. Sposób według zastrz. 12, znamienny tym, że lipidem jest glikolipid 3-cholesterylo-6'-(glikozylotio)heksylo eter.
- 14. Sposób według zastrz. 12, znamienny tym, że stosunek molarny lipidu do peptydu lub lipidu do analogu peptydu jest od około 2:1 do około 200:1.
- 15. Sposób według zastrz. 14, znamienny tym, że stosunek molarny lipidu do peptydu lub lipidu do analogu peptydu jest od około 2:1 do około 50:1.
- 16. Sposób według zastrz. 14, znamienny tym, że stosunek molarny lipidu do peptydu lub lipidu do analogu peptydu jest od około 5:1 do około 50:1.
- 17. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że roztwór sporządza się z stosując rozpuszczalnik organiczny.
- 18. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że produkt liofilizowany stanowi kompozycję farmaceutyczną.PL 196 579 B1
- 19. Sposób według zastrz. 18, znamienny tym, że ponadto rozcieńczenia wspomnianego roztworzonego roztworu rozdziela się przed liofilizacją do poszczególnych pojemników tworząc kompozycję farmaceutyczną w postaci pojedynczej jednostki dawkowej.
- 20. Sposób według zastrz. 19, znamienny tym, że ponadto sterylizuje się wyżej wymieniony produktu przed, w czasie lub po liofilizacji.
- 21. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że (a) rozpuszcza się co najmniej jeden amfipatyczny peptyd lub odpowiednik peptydu w pierwszym rozpuszczalniku dla utworzenia pierwszego roztworu, (b) rozpuszcza się bez pomocy detergentu przynajmniej co najmniej jeden lipid w drugim rozpuszczalniku dla utworzenia drugiego roztworu, przy czym wyżej wymieniony drugi roztwór jest mieszalny z wyżej wymienionym pierwszym roztworem, (c) łączy się pierwszy roztwór z drugim roztworem, w celu utworzenia roztworzonego roztworu peptyd/lipid, przy czym wspomniany pierwszy rozpuszczalnik i drugi rozpuszczalnik są rozpuszczalnikami organicznymi lub rozpuszczalnikową mieszaniną wodno/organiczna.
- 22. Sposób według zastrz. 21, znamienny tym, że pierwszy i drugi rozpuszczalnik są takie same.
- 23. Sposób według zastrz. 21, znamienny tym, że ponadto poddaje się ponownemu uwodnieniu liofilizowany produkt peptyd/lipid dla utworzenia rozpuszczonego kompleksu peptyd/lipid.
- 24. Sposób według zastrz. 21, znamienny tym, że liofilizowany produkt peptyd/lipid jest odwodnionym kompleksem peptyd/lipid.
- 25. Sposób według zastrz. 21, znamienny tym, że ponadto prowadzi się ponowne uwodnienie odwodnionego kompleksu peptyd/lipid dla utworzenia rozpuszczonego kompleksu peptyd/lipid.
- 26. Sposób według zastrz. 21, znamienny tym, że pierwszy rozpuszczalnik jest wybrany z grupy obejmującej wodę, metanol, 1-butanol i ich mieszaniny.
- 27. Sposób według zastrz. 21, znamienny tym, że drugi rozpuszczalnik jest wybrany z grupy obejmującej ksylen, metanol, chloroform i ich mieszaniny.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/942,597 US6287590B1 (en) | 1997-10-02 | 1997-10-02 | Peptide/lipid complex formation by co-lyophilization |
| PCT/US1998/020330 WO1999017740A1 (en) | 1997-10-02 | 1998-09-28 | Peptide/lipid complex formation by co-lyophilization |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL339654A1 PL339654A1 (en) | 2001-01-02 |
| PL196579B1 true PL196579B1 (pl) | 2008-01-31 |
Family
ID=25478329
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL339654A PL196579B1 (pl) | 1997-10-02 | 1998-09-28 | Sposób wytwarzania liofilizowanego produktu |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US6287590B1 (pl) |
| EP (2) | EP1019025B1 (pl) |
| JP (1) | JP2001522781A (pl) |
| KR (1) | KR100588241B1 (pl) |
| CN (1) | CN100415210C (pl) |
| AT (1) | ATE260644T1 (pl) |
| AU (2) | AU749344B2 (pl) |
| CA (1) | CA2305704C (pl) |
| DE (1) | DE69822176T2 (pl) |
| DK (1) | DK1019025T3 (pl) |
| ES (1) | ES2217591T3 (pl) |
| HU (1) | HUP0003930A3 (pl) |
| IL (1) | IL135322A (pl) |
| NO (1) | NO329155B1 (pl) |
| NZ (1) | NZ503721A (pl) |
| PL (1) | PL196579B1 (pl) |
| PT (1) | PT1019025E (pl) |
| RU (1) | RU2224506C2 (pl) |
| UA (1) | UA71551C2 (pl) |
| WO (1) | WO1999017740A1 (pl) |
Families Citing this family (71)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5746223A (en) * | 1996-10-11 | 1998-05-05 | Williams; Kevin Jon | Method of forcing the reverse transport of cholesterol from a body part to the liver while avoiding harmful disruptions of hepatic cholesterol homeostasis |
| US6004925A (en) * | 1997-09-29 | 1999-12-21 | J. L. Dasseux | Apolipoprotein A-I agonists and their use to treat dyslipidemic disorders |
| US6287590B1 (en) | 1997-10-02 | 2001-09-11 | Esperion Therapeutics, Inc. | Peptide/lipid complex formation by co-lyophilization |
| DE19954843C2 (de) * | 1999-11-09 | 2003-11-20 | Novosom Ag | Verfahren zur Verkapselung von Proteinen oder Peptiden in Liposomen, mit dem Verfahren hergestellte Liposomen und deren Verwendung |
| US6514523B1 (en) | 2000-02-14 | 2003-02-04 | Ottawa Heart Institute Research Corporation | Carrier particles for drug delivery and process for preparation |
| GB0121171D0 (en) * | 2001-08-31 | 2001-10-24 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| US7148197B2 (en) * | 2000-08-24 | 2006-12-12 | The Regents Of The University Of California | Orally administered small peptides synergize statin activity |
| US7166578B2 (en) | 2000-08-24 | 2007-01-23 | The Regents Of The University Of California | Orally administered peptides synergize statin activity |
| US7723303B2 (en) * | 2000-08-24 | 2010-05-25 | The Regents Of The University Of California | Peptides and peptide mimetics to treat pathologies characterized by an inflammatory response |
| US6664230B1 (en) * | 2000-08-24 | 2003-12-16 | The Regents Of The University Of California | Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis |
| US7199102B2 (en) * | 2000-08-24 | 2007-04-03 | The Regents Of The University Of California | Orally administered peptides synergize statin activity |
| US8568766B2 (en) | 2000-08-24 | 2013-10-29 | Gattadahalli M. Anantharamaiah | Peptides and peptide mimetics to treat pathologies associated with eye disease |
| US7144862B2 (en) * | 2000-08-24 | 2006-12-05 | The Regents Of The University Of California | Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis |
| RU2305547C2 (ru) * | 2001-08-23 | 2007-09-10 | Вестгейт Байолоджикал Лимитед | Применение апопротеинов сыворотки молока в профилактике или лечении микробной или вирусной инфекции |
| US20030229062A1 (en) * | 2001-12-07 | 2003-12-11 | The Regents Of The University Of California | Treatments for age-related macular degeneration (AMD) |
| JP2005511713A (ja) * | 2001-12-07 | 2005-04-28 | ザ・リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティー・オブ・カリフォルニア | 加齢性黄斑変性についての処置 |
| US7470659B2 (en) * | 2001-12-07 | 2008-12-30 | The Regents Of The University Of California | Methods to increase reverse cholesterol transport in the retinal pigment epithelium (RPE) and Bruch's membrane (BM) |
| US20040009216A1 (en) * | 2002-04-05 | 2004-01-15 | Rodrigueza Wendi V. | Compositions and methods for dosing liposomes of certain sizes to treat or prevent disease |
| US6930085B2 (en) * | 2002-04-05 | 2005-08-16 | The Regents Of The University Of California | G-type peptides to ameliorate atherosclerosis |
| NL1020962C2 (nl) * | 2002-06-28 | 2003-12-30 | Tno | Therapie en prognose/monitoring bij sepsis en septische shock. |
| US20060051407A1 (en) * | 2003-06-27 | 2006-03-09 | Yoram Richter | Method of treating ischemia-reperfusion injury |
| US10517883B2 (en) | 2003-06-27 | 2019-12-31 | Zuli Holdings Ltd. | Method of treating acute myocardial infarction |
| PE20050438A1 (es) * | 2003-10-20 | 2005-06-14 | Esperion Therapeutics Inc | Formulas farmaceuticas, metodos y regimenes de dosificacion para el tratamiento y la prevencion de sindromes coronarios agudos |
| US20060019870A1 (en) * | 2004-01-28 | 2006-01-26 | O'donnell Francis E Jr | Apoprotein cochleate compositions |
| JP4617458B2 (ja) * | 2004-02-10 | 2011-01-26 | 財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 | 中空糸透析カラムを利用したリポソームの製造方法 |
| SE0401942D0 (sv) * | 2004-07-28 | 2004-07-28 | Lipopeptide Ab | New antimicrobial peptide complexes |
| WO2006034056A2 (en) * | 2004-09-16 | 2006-03-30 | The Regents Of The University Of California | G-type peptides and other agents to ameliorate atherosclerosis and other pathologies |
| US7464012B2 (en) * | 2004-12-10 | 2008-12-09 | L'air Liquide, Societe Anonyme A Directoire Et Conseil De Surveillance Pour L'etude Et L'exploitation Des Procedes Georges Claude | Simplified process simulator |
| US7582312B2 (en) * | 2004-11-15 | 2009-09-01 | Discovery Laboratories, Inc. | Methods to produce lung surfactant formulations via lyophilization and formulations and uses thereof |
| BRPI0517148A (pt) | 2004-12-06 | 2008-09-30 | Univ California | método de aperfeiçoamento da estrutura e/ou função arterìola; agente ativo e kit para tratamento |
| US7384916B2 (en) * | 2005-03-16 | 2008-06-10 | Procyte Corporation | Methods and compositions for preventing and treating aging or photodamaged skin |
| US8206750B2 (en) * | 2005-03-24 | 2012-06-26 | Cerenis Therapeutics Holding S.A. | Charged lipoprotein complexes and their uses |
| EP1890715A4 (en) * | 2005-04-29 | 2009-10-28 | Univ California | PEPTIDES AND PEPTIDE MIMETICS FOR TREATMENT BY INFLAMMATORY REACTION OF CHARACTERIZED PATHOLOGIES |
| US20080293639A1 (en) * | 2005-04-29 | 2008-11-27 | The Regents Of The University Of California | Peptides and peptide mimetics to treat pathologies characterized by an inflammatory response |
| US20070254832A1 (en) * | 2006-02-17 | 2007-11-01 | Pressler Milton L | Methods for the treatment of macular degeneration and related eye conditions |
| WO2007137400A1 (en) * | 2006-06-01 | 2007-12-06 | Institut De Cardiologie De Montreal | Method and compound for the treatment of valvular stenosis |
| WO2007149355A2 (en) * | 2006-06-16 | 2007-12-27 | Lipid Sciences, Inc. | Novel peptides that promote lipid efflux |
| US20080227686A1 (en) * | 2006-06-16 | 2008-09-18 | Lipid Sciences, Inc. | Novel Peptides that Promote Lipid Efflux |
| US20080206142A1 (en) * | 2006-06-16 | 2008-08-28 | Lipid Sciences, Inc. | Novel Peptides That Promote Lipid Efflux |
| CA2659655A1 (en) | 2006-08-08 | 2008-02-21 | Alan M. Fogelman | Salicylanilides enhance oral delivery of therapeutic peptides |
| US20080138284A1 (en) * | 2006-09-26 | 2008-06-12 | Lipid Sciences, Inc. | Novel Peptides That Promote Lipid Efflux |
| ES2708851T3 (es) * | 2006-10-06 | 2019-04-11 | Bionet Pharma Gmbh | Un implante del núcleo pulposo espinal |
| KR100817024B1 (ko) | 2006-11-09 | 2008-03-26 | 재단법인 목암생명공학연구소 | 핵산 또는 약물을 간에 특이적으로 전달하는 복합체 및이를 포함하는 약학적 조성물 |
| CN104083752B (zh) * | 2007-06-27 | 2018-04-10 | 里兰斯坦福初级大学理事会 | 寡肽酪氨酸酶抑制剂及其应用 |
| CA2728140C (en) | 2007-06-27 | 2019-09-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Peptide tyrosinase inhibitors and uses thereof |
| WO2009032693A2 (en) | 2007-08-28 | 2009-03-12 | Uab Research Foundation | Synthetic apolipoprotein e mimicking polypeptides and methods of use |
| US8557767B2 (en) | 2007-08-28 | 2013-10-15 | Uab Research Foundation | Synthetic apolipoprotein E mimicking polypeptides and methods of use |
| CA2788223A1 (en) | 2009-01-23 | 2010-07-29 | Institut De Cardiologie De Montreal | Method for the prevention and treatment of diastolic dysfunction employing an apolipoproteina1 (apoa1) mimetic peptide/phospholipid complex |
| SI2396017T1 (sl) | 2009-02-16 | 2015-12-31 | Cerenis Therapeutics Holding Sa | Mimika apolipoproteina A-1 |
| KR101131202B1 (ko) * | 2009-02-23 | 2012-04-05 | (주)에이피테크놀로지 | 난용성 약물 나노복합체의 제조방법 |
| WO2011002258A2 (ko) * | 2009-07-02 | 2011-01-06 | 한양대학교 산학협력단 | 아르기닌 기제 양친성 펩티드 마이셀 |
| US10894098B2 (en) | 2012-04-09 | 2021-01-19 | Signablok, Inc. | Methods and compositions for targeted imaging |
| WO2011143362A1 (en) | 2010-05-11 | 2011-11-17 | Esperion Therapeutics, Inc. | Dimeric oxidation-resistant apolipoprotein a1 variants |
| EP2611419A2 (en) | 2010-08-30 | 2013-07-10 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Method for producing a tetranectin-apolipoprotein a-1 lipid particle, the lipid particle itself and its use |
| RU2017126088A (ru) | 2011-02-07 | 2019-01-31 | Серени Терапеутикс Холдинг С.А. | Липопротеиновые комплексы и их получение и применения |
| RU2457864C1 (ru) * | 2011-07-28 | 2012-08-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственная компания "ФАРМАСОФТ" (ООО "НПК "ФАРМАСОФТ") | Гель, обладающий противовоспалительным, иммунотропным, противоаллергическим и ранозаживляющим действием |
| US9993427B2 (en) | 2013-03-14 | 2018-06-12 | Biorest Ltd. | Liposome formulation and manufacture |
| CA2902209A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | The Regents Of The University Of California | Peptides having reduced toxicity that stimulate cholesterol efflux |
| CN103860470A (zh) * | 2014-03-05 | 2014-06-18 | 贵州中泰生物科技有限公司 | 一种口服高密度脂蛋白脂质体的制备方法 |
| EP3137899A2 (en) | 2014-05-02 | 2017-03-08 | Cerenis Therapeutics Holding SA | Hdl therapy markers |
| EP3189069B1 (en) | 2014-07-31 | 2024-10-23 | UAB Research Foundation | Apoe mimetic peptides and higher potency to clear plasma cholesterol |
| ES2809460T3 (es) * | 2014-10-30 | 2021-03-04 | Delta Fly Pharma Inc | Nuevo método de producción de lipoplejo para administración local y fármaco antitumoral que utiliza lipoplejo |
| US11642419B2 (en) | 2015-03-25 | 2023-05-09 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for treating cardiovascular related disorders |
| US9763892B2 (en) | 2015-06-01 | 2017-09-19 | Autotelic Llc | Immediate release phospholipid-coated therapeutic agent nanoparticles and related methods |
| CA2991655A1 (en) | 2015-07-10 | 2017-01-19 | Peptinovo Biopharma, Llc | Formulations for improving the efficacy of hydrophobic drugs |
| CA3032229A1 (en) | 2016-07-27 | 2018-02-01 | Hartis-Pharma Sa | Therapeutic combinations to treat red blood cell disorders |
| EP3508268B1 (en) * | 2016-08-31 | 2023-10-25 | Kewpie Corporation | Egg yolk phospholipid composition and fat emulsion and lipolysis formulation using egg yolk phospholipid composition |
| KR102039661B1 (ko) | 2017-07-28 | 2019-11-01 | 경북대학교 산학협력단 | HDL-ApoM-S1P를 유효성분으로 포함하는 퇴행성뇌질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
| US20190048049A1 (en) * | 2017-08-10 | 2019-02-14 | Cerenis Therapeutics Holding Sa | Cargomers |
| CN111249451B (zh) * | 2020-01-20 | 2022-11-04 | 成都医学院 | 一种糖脂类抗原注射液及其制备方法 |
| CN112034175A (zh) * | 2020-04-03 | 2020-12-04 | 苏州艾可瑞斯生物科技有限公司 | 一种ApoA-II、ApoC-II检测混合质控品及其制备方法 |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH621479A5 (pl) | 1977-08-05 | 1981-02-13 | Battelle Memorial Institute | |
| CA1173360A (en) | 1979-06-22 | 1984-08-28 | Jurg Schrank | Pharmaceutical preparations |
| FR2521565B1 (fr) * | 1982-02-17 | 1985-07-05 | Dior Sa Parfums Christian | Melange pulverulent de constituants lipidiques et de constituants hydrophobes, procede pour le preparer, phases lamellaires lipidiques hydratees et procede de fabrication, compositions pharmaceutiques ou cosmetiques comportant des phases lamellaires lipidiques hydratees |
| US4880635B1 (en) | 1984-08-08 | 1996-07-02 | Liposome Company | Dehydrated liposomes |
| US4857319A (en) | 1985-01-11 | 1989-08-15 | The Regents Of The University Of California | Method for preserving liposomes |
| US5178875A (en) * | 1991-01-14 | 1993-01-12 | The Board Of Regents, The University Of Texas System | Liposomal-polyene preliposomal powder and method for its preparation |
| CA1335077C (en) * | 1988-02-08 | 1995-04-04 | Henri Isliker | Process for the manufacture of apolipoproteins from human blood plasma or serum |
| US5077057A (en) * | 1989-04-05 | 1991-12-31 | The Regents Of The University Of California | Preparation of liposome and lipid complex compositions |
| US5753258A (en) * | 1990-10-19 | 1998-05-19 | University Of Florida | Artificial viral envelopes |
| CA2137814A1 (en) * | 1992-06-12 | 1993-12-23 | Maryvonne Rosseneu | New peptides and proteins, process for their preparation and their use as cholesterol acceptors |
| US5785984A (en) * | 1993-02-05 | 1998-07-28 | Kao Corporation | Taste-modifying method and bitterness-decreasing method |
| US5534241A (en) * | 1993-07-23 | 1996-07-09 | Torchilin; Vladimir P. | Amphipathic polychelating compounds and methods of use |
| US5652339A (en) * | 1993-12-31 | 1997-07-29 | Rotkreuzstiftung Zentrallaboratorium | Method of producing reconstituted lipoproteins |
| DE4416166C2 (de) * | 1994-05-06 | 1997-11-20 | Immuno Ag | Stabiles Präparat zur Behandlung von Blutgerinnungsstörungen |
| US5948756A (en) * | 1995-08-31 | 1999-09-07 | Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem | Therapeutic lipoprotein compositions |
| US6004925A (en) * | 1997-09-29 | 1999-12-21 | J. L. Dasseux | Apolipoprotein A-I agonists and their use to treat dyslipidemic disorders |
| US6287590B1 (en) | 1997-10-02 | 2001-09-11 | Esperion Therapeutics, Inc. | Peptide/lipid complex formation by co-lyophilization |
-
1997
- 1997-10-02 US US08/942,597 patent/US6287590B1/en not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-09-28 DK DK98950743T patent/DK1019025T3/da active
- 1998-09-28 JP JP2000514617A patent/JP2001522781A/ja not_active Withdrawn
- 1998-09-28 EP EP98950743A patent/EP1019025B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-28 ES ES98950743T patent/ES2217591T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-28 CN CNB988118181A patent/CN100415210C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-28 CA CA002305704A patent/CA2305704C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-28 RU RU2000111523/15A patent/RU2224506C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-09-28 WO PCT/US1998/020330 patent/WO1999017740A1/en active IP Right Grant
- 1998-09-28 HU HU0003930A patent/HUP0003930A3/hu unknown
- 1998-09-28 AU AU96715/98A patent/AU749344B2/en not_active Ceased
- 1998-09-28 PT PT98950743T patent/PT1019025E/pt unknown
- 1998-09-28 NZ NZ503721A patent/NZ503721A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-09-28 IL IL13532298A patent/IL135322A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-09-28 DE DE69822176T patent/DE69822176T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-28 PL PL339654A patent/PL196579B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-09-28 KR KR1020007003586A patent/KR100588241B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-09-28 AT AT98950743T patent/ATE260644T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-09-28 UA UA2000042492A patent/UA71551C2/uk unknown
- 1998-09-28 EP EP03015963A patent/EP1358874A1/en not_active Withdrawn
-
2000
- 2000-03-31 NO NO20001683A patent/NO329155B1/no not_active IP Right Cessation
- 2000-08-21 US US09/642,363 patent/US6455088B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-08-12 AU AU2002300504A patent/AU2002300504B2/en not_active Ceased
- 2002-09-23 US US10/252,940 patent/US7189411B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-03-08 US US11/683,784 patent/US20070167351A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL196579B1 (pl) | Sposób wytwarzania liofilizowanego produktu | |
| Vemuri et al. | Preparation and characterization of liposomes as therapeutic delivery systems: a review | |
| US5049392A (en) | Osmotically dependent vesicles | |
| JP2792702B2 (ja) | 乾燥時に改善された安定性を示すリポソームの調製方法 | |
| CA2442539C (en) | Method and composition for solubilising a biologically active compound with low water solubility | |
| KR101132626B1 (ko) | 난용성 약물의 전달을 위한 고밀도지단백 나노입자의 제조방법 | |
| AU2002312777A1 (en) | Method and composition for solubilising a biologically active compound with low water solubility | |
| Sankar et al. | Nanocochleate—a new approach in lipid drug delivery | |
| JPH11507628A (ja) | 改良されたリポソーム製剤 | |
| JP2001510786A (ja) | 脂質剤及びタンパク質を含む脂質粒子の医薬組成物の製造方法 | |
| JPH02502719A (ja) | 薬理学的剤‐脂質溶液製剤 | |
| Aher et al. | Niosomes as a potential drug delivery system | |
| WO1997048398A1 (fr) | Preparations liposomes de derives indolocarbazole | |
| JP2817883B2 (ja) | 高度に完全なリポソームおよびその製剤法と用途 | |
| MXPA00003132A (en) | Peptide/lipid complex formation by co-lyophilization | |
| Gregory | Preparation of Liposomes and Oily Formulations by Freeze-Drying of Monophase Solutions | |
| Li et al. | Preparation of liposomes and oily formulations by freeze-drying of monophase solutions | |
| Gregoriadis | Preparation of Liposomes and Oily Formulations by Freeze-Drying of Monophase Solutions.............. ChunLei Li, YingJie Deng, and JingXia Cui | |
| CN118215469A (zh) | 新的脂肽制剂 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20090928 |