CN118215469A - 新的脂肽制剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供了脂肽的新型药物脂质体制剂及其用途和制备方法。

Description

新的脂肽制剂

背景技术

布尔韦肽(Buleviride)是一种新的候选药物，用于治疗慢性乙型肝炎和慢性德尔塔型肝炎(也称为丁型肝炎)，以及潜在的一系列炎症和代谢疾病。其公开于WO 2009/092612中。布尔韦肽是47个氨基酸的线性化学合成肽，其来源于大HBV表面蛋白的N端结构域(HBV＝乙型肝炎病毒)。可以购买到该活性物质的醋酸盐。其抗病毒作用模式依赖于特异性结合与阻断肝细胞表面蛋白NTCP。布尔韦肽介导的NTCP阻断，抑制HBV和HDV(丁型肝炎病毒)进入细胞。

最近发现乙肝炎病毒和丁肝病毒通过NTCP与HBV preS1表面蛋白结构域的结合进入肝细胞。作为preS1结构域的模拟物，Myrcludex B特异性阻断NTCP的相应结合位点，从而抑制病毒进入肝细胞。

NTCP的阻断不仅与抗病毒药物的开发有关。这一机制对脂质代谢的影响，特别是对胆汁酸水平升高的影响，可能对多种其它疾病的治疗具有积极意义。

丁型肝炎是最严重的一种病毒性肝炎。它是由HDV，一种小RNA病毒引起的，HDV需要HBV提供辅助功能进行病毒颗粒装配和增殖，并利用HBV包膜释放病毒和感染新细胞。约5％的慢性HBV感染者重叠感染HDV。

与单独感染HBV相比，重叠感染HDV的患者肝病进展更严重更快。在HBV/HDV共感染过程中肝硬化和代偿失调比在HBV单独感染中发生得更早，发生率更高。

HDV共感染患者的治疗选择非常有限，因为对HBV有活性的抗病毒药物对HDV无效。

2020年7月，作为第一个特异性抗HDV药物之一，布尔韦肽，也称为被有条件地批准用于治疗HDV感染。布尔韦肽为白色或灰白色吸湿粉末。它几乎不溶于水，在50％醋酸中的溶解度为1mg/ml，在pH 8.8的碳酸盐缓冲液中的溶解度约为7mg/ml。根据MYR Pharmaceuticals公司的/>2mg说明书，/>为粉末形式，其在-20℃储存或在2℃至8℃之间的温度下可储存3个月。使用时，/>用注射用水复溶，然后进行皮下注射，在治疗过程中需每天一次。

有多种方法来溶解用于肠胃外给药的难溶性化合物。最常用的方法是优化pH或使用共溶剂15(例如PEG300、PEG400、丙二醇或乙醇)。不管什么原因，如果这些方法不可行，则可考虑使用表面活性剂(例如80或/>)。但是，这些类型的表面活性剂常带来副作用。

环糊精被认为是安全的增溶剂，但由于它们不是所有化合物的有效增溶剂，其应用受到限制。此外，在20种天然油中具有高溶解度的化合物(例如丙泊酚)可以溶解在肠胃外给药脂肪乳剂中。

另一种溶解难溶性化合物的尝试是使用磷脂(van Hoogevest P.,Xiangli L.,和Alfred F."Drug delivery strategies for poorly water-solubledrugs:theindustrial perspective"Expert Opinion an Drug Delivery 2011,8(11),1481-1500)。然而，磷脂对某些难溶性化合物的助溶作用无法预料，并且通常必须对脂质体的尺寸加以选择以使脂质体适于用作药物。

US 8,591,942和US 9,655,846公开了制备含有多西他赛的脂质体的方法。在US8,591,942中，该方法包括将大豆磷脂酰胆碱和油酸钠分散在水性介质中以产生分散的脂质体。

US2008/0166403公开了长循环脂质体，其包含磷脂双层和亲水性核，其中磷脂双层含有维生素E衍生物(D-α生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯，TPGS)。

通常，脂质体是通过将脂质溶解在有机溶剂中，将其冻干，然后水合而制备得到(这导致多层脂质体，由于它们的大尺寸和低包封量，通常不适合大多数应用。必须通过采用额外的步骤，例如挤出或复杂的均化，大脂质体的尺寸才能减小。然而，这些工艺的包封率通常低于70％。包封率50％就被认为是高的，而通常为20％至30％(Dan Lasic,TibTechJuly 1998,Vol.16,pages 307to 321)。

在某些情况下，观察到包封率约为90％，然而，这些观察结果涉及MLV(多层囊泡)包封，MLV通常直径5至50μm，且导致过高和不必要的脂质与药物比例(Liposome-BasedDepot Injection Technologies Nandini V.Katre Am J Drug Deliv 2004；2(4):213-227 1175-9038/04/0004-0213/$31.00/0)。

WO 2014/167435公开了一种表面官能化的脂质体制剂，其包含作为活性成分的抗癌剂和被D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)的功能性包衣包被的脂质体，其中所述抗癌剂被包封在所述脂质体内，并且所述制剂包封率＞70％。

Muthu等；Biomaterials.2012Apr；33(12):3494-501公开了一种通过溶剂注射法制备的用于多西他赛脑递送的TPGS包被的脂质体。所报道的制剂包封率约64.10±0.57％，显著低于本发明(包封率～95％)。

WO 2010/078045A2公开了一种制备粒径受控的脂质体的方法，该方法通过基本上连续混合基本上连续流动的水流和含有能够形成脂质体的脂质的有机溶剂，并冷却该混合物以形成脂质体，控制水流的流速与有机溶剂流的流速之比和所述混合物的冷却速率，以获得脂质体制剂，使得至少约90％的脂质体的粒径小于约200nm。

CN 110339166A涉及一种利拉鲁肽多囊脂质体及其制备方法和应用。更具体地，所述利拉鲁肽多囊脂质体包含利拉鲁肽、膜材料、渗透压调节剂和稳定剂。

Zhang等(Drug Delivery 23(9):3358-3363,2016)报道了通过使用两步水包油包水双重乳化工艺制备的用于治疗糖尿病的皮下注射的负载利拉鲁肽的多囊脂质体。

CN 102688192A公开了一种治疗糖尿病的多肽药物制剂及其生产方法，该制剂主要由磷脂、芝麻油、甘油、利拉鲁肽、盐和乙醇组成。

Uhl等(European Journal of Pharmaceutics and biopharmaceutics,103:159-166,2016)报道了一种含有特定四醚脂质的脂质体制剂，用于乙型肝炎肽类新药Myrculadex B的口服给药。

令人惊奇的是，通过采用本发明的简单制备方法，可以制备高包封率的脂肽(如布尔韦肽或利拉鲁肽)制剂。本发明的制备方法不仅带来脂肽(如布尔韦肽)的惊人高负载，而且得到可冷冻干燥的单相纳米分散体系。这种冷冻干燥的单相纳米分散系统的再水合产生了一种脂质体制剂，该制剂具有适于皮下注射的脂质体尺寸和有利的脂质体/药物比例。

特别地，令人惊讶地发现，采用本发明的方法，通过将有机相和水相混合可以容易地制备单相纳米分散体系，其中所述有机相包含一种或多种磷脂和一种或多种有机溶剂，并且其中所述一种或多种有机溶剂与所述水相形成可冻结和可升华的单相混合物。所述单相纳米分散混合物通过简单地将有机相和水相混合而(自发地)形成，不需要借助机械装置如高剪切混合器、高压均质器或超声装置来减小囊泡的尺寸。所述单相纳米分散体系包含可以无菌过滤且冻干的胶束，无需任何减小尺寸的机械步骤，而在如前所述的现有方法中通常都需要这些步骤。因为这种冻干的单相纳米分散体系是稳定的，因此可以在没有特殊温度要求和/或时间限制的情况下储存和/或运输，这是特别有优势的。

此外，脂肽如布尔韦肽可以在本发明制备的这种单相纳米分散体系中储存，尤其在冻干形式中稳定储存，而所述脂肽如布尔韦肽在溶液中可能不稳定。当需要给药时，所述单相纳米分散体系的冻干制剂可以通过加入水溶液(例如通常用于冻干药物复溶的水溶液)而容易地复溶。通过将本发明的单相纳米分散体系复溶，优选用含盐的水溶液如盐水或缓冲液复溶，可以原位制备脂质体。特别地，与现有方法相比，可以使用本发明的方法制备更大的多层脂质体，而现有方法是先直接制备脂质体再机械减小脂质体尺寸，然后在冷冻干燥之前进行无菌过滤，例如使用具有0.22μm标称孔径的药学上认可的过滤器。由于本发明可以原位产生D90为1μm-4.5μm的多层脂质体，所述脂质体可以有利地用于皮下注射而形成能够延长封装药物释放的贮库，并且与采用现有方法制备的脂质体相比，所述脂质体还可以负载更多的脂肽如布尔韦肽。值得注意的是，关于这一段，同样适用于本发明的其它不同制剂。

本发明的药物脂质体制剂在脂肽如布尔韦肽的给药方面特别有优势。与脂肽如布尔韦肽的皮下注射溶液相比，使用本发明的药物多层脂质体制剂给药具有从脂肽的皮下贮库释放更缓慢的特点，因此提供了更长的生物利用度。故而，本发明的药物脂质体制剂可能仅需例如每周给药一次，而不是每天一次。因此，本发明的药物脂质体制剂，优选包含布尔韦肽的脂质体制剂，具有显著提高患者生活质量的潜力。

因此，本发明涉及一种制备包载脂肽的制剂的简单高效的方法，该方法通过将有机相和水相混合并加入脂肽来制备纳米级体系。所述纳米级体系是热力学稳定的，并且可以容易地制备、无菌过滤和分装，并依照制药的标准程序冻干。该冻干制剂的特征在于高稳定性和保质期长，并且可以容易地原位复溶(例如通过添加注射用水或盐水)，以产生可以用于肠胃外给，尤其是用于皮下注射的包载脂肽的脂质体。

本发明的实际范围由所附权利要求限定。本发明的实施例是从属权利要求的主题，并且在本说明书和附图中公开。

发明内容

第一方面(方面1)涉及制剂，其中所述制剂是单相纳米分散体系，包含

a)一种或多种磷脂，选自磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG)或任何前述物质的衍生物或其混合物，基于a)至e)的总重量，所述磷脂的含量在40％至99.7％范围内，优选在40％至97％范围内，更优选在40％至75％范围内；

b)脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，基于a)至e)的总重量，所述脂肽的含量在0.3％至20％范围内；

c)胆固醇或其衍生物，基于a)至e)的总重量，含量优选在0％至14％范围内，优选在4％至14％范围内；

d)填充剂,优选甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，或选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、木糖醇、木糖、右旋糖苷、或其混合物的糖类组分，基于a)至e)的总重量，所述填充剂的含量在0％至35％

范围内，优选在15％至35％范围内；

e)不是d)的张力调节剂，基于a)至e)的总重量，含量在0％至35％范围内，优选在0.1％至10％范围内；

其中a)、b)、c)、d)和e)的总和总是为100％，并且a)至e)的总量为基于所述制剂的总重量的10％至100％。因此，根据方面1的制剂是指包含负载有脂肽的胶束的单相纳米分散系统。所述脂肽优选为布尔韦肽或利拉鲁肽，其中优选地，以a)至e)的总重量为基准，布尔韦维肽的含量在3％至13％范围内，或以a)至e)的总重量为基准，利拉鲁肽的含量在0.3％至2％范围内。

优选实施方案1涉及方面1的所述制剂，其中所述制剂是冻干制剂。该优选实施方案的优势在于，根据优选实施方案1的冻干制剂是稳定的，可以在没有特定温度要求和/或时间限制的情况下储存和/或运输。

进一步优选的实施方案2涉及根据优选的实施方案1的所述冻干制剂，其中布尔韦肽的含量为12mg至24mg。

进一步优选的实施方案2涉及根据优选的实施方案1的所述冻干制剂，其中利拉鲁肽的含量为0.6mg至1.8mg。

另一方面涉及制剂，其中所述制剂是通过混合/复溶上述方面1的制剂，优选实施方案1和/或两个进一步优选的实施方案2中的任一个，而获得的药物脂质体制剂，其包含

a)一种或多种磷脂，选自磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG)或任何前述物质的衍生物或其混合物，基于a)至e)的总重量，所述磷脂的含量在40％至99.7％范围内，优选40％至97％，更优选40％至75％；

b)脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，基于a)至e)的总重量，所述脂肽的含量在0.3％至20％范围内；

c)胆固醇或其衍生物，基于a)至e)的总重量，所述胆固醇或其衍生物的含量在0％至14％范围内，优选在4％至14％范围内；

d)糖类组分，选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、蔗糖、木糖醇、木糖、右旋糖苷、或其混合物，基于a)至e)的总重量，所述糖类组分的含量在0％至35％范围内，优选15％至35％；

e)不是d)的张力调节剂，基于a)至e)的总重量，所述张力调节剂的含量在0％至35％范围内，优选为0.1％至10％；

其中a)、b)、c)、d)和e)的总和总为100％，并且a)至e)的总量为基于还包含溶剂(优选水)的制剂总重量的10％至50％。优选地，通过将上述方面1的制剂，优选上述优选实施方案1和/或两个进一步优选的实施方案2中的任一个，与水溶液，优选与含有盐的水溶液(如(生理学可接受的)盐水或缓冲液溶液)混合/复溶而得到根据所述另一方面的药物脂质体制剂。关于脂肽，所述脂肽优选是布尔韦肽或利拉鲁肽，其中优选地，以a)至e)的总重量为基准，布尔韦维肽的含量在3％至13％范围内，或以a)至e)的总重量为基准，利拉鲁肽的含量在0.3％至2％范围内。

进一步优选的实施方案4涉及根据所述另一方面的所述脂质体药物组合物，其中所述张力调节剂是NaCl。

进一步优选的实施方案5涉及根据所述另一方面和/或优选的实施方案4的所述脂质体药物制剂，进一步包含缓冲系统。

进一步优选的实施方案6涉及根据所述另一方面和/或优选的实施方案4至5所述脂质体药物制剂中的任一项，其中所述脂质体药物制剂的pH为5至8；优选5至7.6，在一个更优选的实施方案中为6至7.6(例如，或者为弱酸性至中性(如6.5至7)，或者7.2至7.6(如7.3至7.5))。

进一步优选的实施方案7涉及根据方面1、所述另一方面和/或优选的实施方案1和6中的任一项所述的制剂，其中a)是PC(磷脂酰胆碱)或PC与一种或多种磷脂的混合物，所述磷脂选自磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酸(PA)，优选PC(磷脂酰胆碱)。

进一步优选的实施方案8涉及根据方面1、所述另一方面和/或优选的实施方案1至7中任一项所述的制剂，其中e)是海藻糖。

进一步优选的实施方案9涉及根据方面1、所述另一方面和/或优选的实施方案1至8中任一项所述的制剂，其中a)是PC(磷脂酰胆碱)，并且a)占所述制剂中a)、b)、c)、d)和e)的总和的50％至70％；b)占所述制剂中a)、b)、c)、d)和e)的总和的5％至11％；d)占所述制剂中a)、b)、c)、d)和e)的总和的6％至12％；以及e)是海藻糖，并且e)占所述制剂中a)、b)、c)、d)和e)的总和的20％至30％，其中a)、b)、c)、d)和e)的总和为100％。

进一步优选的实施方案10涉及根据所述另一方面和/或优选的实施方案4至9的药物组合物中的任一项作为药物的应用。

进一步优选的实施方案11涉及所述药物组合物根据优选实施方案10的应用，其中所述应用是指治疗慢性乙型肝炎和/或慢性丁型肝炎。与施用相应脂肽的溶液制剂相比，本发明的优势在于可以减少脂肽(如布尔韦肽)的给药频率，因此患者的生活质量得到提高。

进一步优选的实施方案11涉及所述药物组合物根据优选实施方案10的应用，其中所述应用是指治疗炎症，优选炎性疾病。

进一步优选的实施方案涉及根据方面1、所述另一方面和/或优选的实施方案1至10中任一项的制剂，包含

a)一种或多种磷脂，选自磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG)

或任何前述物质的衍生物或其混合物，基于a)至e)的总重量，所述磷脂的含量为40％至70％；

b)脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，基于a)至e)的总重量，所述脂肽的含量为0.3％至20％；

c)胆固醇或其衍生物，基于a)至e)的总重量，所述胆固醇或其衍生物的含量为4％至14％；

d)填充剂,优选甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，或选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、木糖醇、木糖、右旋糖苷、或其混合物的糖类组分，基于a)至e)的总重量，所述填充剂的含量为15％至35％；

e)不是d)的张力调节剂，基于a)至e)的总重量，所述张力调节剂的含量为0％至35％；

其中a)、b)、c)、d)和e)的总和为100％。

在一个优选的实施方案中，根据方面1或其优选的实施方案1或2中的任一项的制剂，其中所述制剂还包含基于所述制剂的总重量的0.01％至2％的叔丁醇。

在又一个优选实施方式中，根据方面1或其优选的实施方案1或2中的任一项的制剂，其中，所述制剂还包含基于所述制剂的总重量的0.01％至2％的叔丁醇，并且a)至e)的总量占所述制剂总重量的98％至99.99％。

另一方面2涉及根据方面1或优选的实施方案1或2中任一项所述的制剂用于制备治疗慢性乙型肝炎和/或慢性丁型肝炎或炎症的药物、优选用于制备治疗慢性乙型肝炎和/或慢性丁型肝炎或炎性疾病的药物的用途。

另一方面3涉及一种试剂盒，其包含根据方面1或优选的实施方案1或2中任一项所述的制剂和分隔开的药物水溶液。例如，一种试剂盒，其包含在一个容器中的根据方面1或优选的实施方案1或2中任一项的制剂和在第二容器中的药物水溶液。可选地，还包括用于指导混合两个容器的两种组分以得到药物脂质体制剂(优选即用型)的说明书。因此，方面3优选涉及一种试剂盒，其包含负载有脂肽的冻干的单相纳米分散体系和可用于复溶所述冻干的单相纳米分散体系的药物水溶液，从而制备用于后续使用，优选用于后续皮下注射的负载有所述脂肽的脂质体。

另一方面4涉及制备制剂的方法，包括以下步骤

i)提供有机相，所述有机相包括

一种或多种磷脂，所述磷脂选自磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG)、或任何前述物质的衍生物或任何前述物质的组合；

可选地，胆固醇或胆固醇衍生物；以及

至少一种有机溶剂；

ii)提供包含水性介质的水相；以及

可选地，填充剂，所述填充剂选自甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露糖醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨糖醇、木糖醇、木糖、右旋糖苷或任何前述物质的混合物的糖类组分，

可选地，药学上可接受的缓冲液，和

可选地，药学上可接受的张力调节剂，其不是填充剂，所述填充剂选自甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、蔗糖、木糖醇、木糖、右旋糖苷或任何前述物质的混合物的糖类组分，

其中水相的pH为3至9，例如5.5至7，例如5.8至6.7(例如，通过使用醋酸钠缓冲液)；

iii)将所述有机相和所述水相混合均匀，得到混合均匀的有机相和水相，其中所述有机相和所述水相的混合比为10:1(v/v)至1:10(v/v)，优选2:1(v/v)至1:4(v/v)，更优选1.5:1(v/v)至1:4(v/v)，例如1:1(v/v)至1:3(v/v)，约1±0.5:1±0.5(v/v)，约1±0.5:2±0.5(v/v)或约1±0.5:3±0.5(v/v)，比如1:1(v/v)，1:2(v/v)或1:3(v/v)；其中所述至少一种有机溶剂和所述水相形成单相混合物，优选可冻结且可升华的单相混合物；

iv)将脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，更优选布尔韦肽，或者加入到步骤i)的所述有机相中，然后将所述含脂肽的有机相与所述水相如步骤iii)中所述混合，或者加入到步骤ii)的所述水相中，然后将所述含脂肽的水相和所述有机相如步骤iii)中所述混合，或者加入到步骤iii)的混合相中，优选加入到步骤iii)的混合相中，得到脂肽制剂，其中所得到的所述脂肽制剂是单相纳米分散体系。

因此，可以想到单相混合物是通过将所述水相和包含在所述有机相中的至少一种有机溶剂混合而形成的，其中所述单相混合物优选是可冻结的和可升华的。这样的优势在于，通过冻干可以从制剂中除去绝大部分的有机相。在本文中，术语“可冻结的”是指混合物在低于0℃至-60℃范围内的某个温度时形成固态的一种理化性质。特别地，优选在0℃至-60℃范围内的一个温度点，步骤iii)中制备所述单相混合物基本上形成固态。此外，术语“可升华的”应理解为混合物在1Pa至100Pa的压力和0℃至-60℃的温度范围内从固态转化为气态而无任何中间液态的一种理化性质。

因此，优选的单相混合物可以通过将水相，优选水，与包含至少一种有机溶剂的有机相混合均匀而获得，其中优选地，所述至少一种有机溶剂选自苯甲醚、乙酸乙酯、1,4-二噁烷、碳酸二甲酯、二甲亚砜、四氢呋喃聚乙二醇醚、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、异亚丙基甘油、醇(优选地，选自1-丁醇、2-丁醇和叔丁醇)、乙酸、乳酸乙酯(2-羟基丙酸乙酯)、乙腈，以及任何前述溶剂的组合。

可替换地或可选地，所述至少一种有机溶剂可以选自苯甲醚、乙酸乙酯、1,4-二噁烷、碳酸二甲酯、二甲亚砜、四氢呋喃聚乙二醇醚、N，N-二甲基乙酰胺、N，N-二甲基甲酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、异亚丙基甘油、1-丁醇、2-丁醇和叔丁醇，以及任何前述溶剂的组合。

可替换地或可选地，所述至少一种有机溶剂特别优选自醇(优选叔丁醇)、苯甲醚(苯氧基甲烷)、二甲亚砜、1,4-二噁烷和碳酸二甲酯及其组合。优选地，所述至少一种有机溶剂包括叔丁醇或者是叔丁醇。

可替换地或可选地，所述至少一种有机溶剂可以选自乙酸、乳酸乙酯(2-羟基丙酸乙酯)和乙腈。

应当理解，给出所列有机溶剂实例的目的是为了说明而不是限制。特别地，技术人员知道如何确定合适的有机溶剂，该有机溶剂能够与水溶液(如水)形成(优选可冻结和可升华的)单相混合物。

令人惊讶地发现，根据本发明的方法制备单相混合物具有这样的有益效果：包含在有机相中的一种或多种磷脂构建了可被无菌过滤的单相纳米分散体系。

在一个优选实施方案中，所述根据第4方面的方法包括以下步骤

i)提供有机相，所述有机相包括

一种或多种磷脂，所述磷脂选自磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG)、或任何前述物质的衍生物或任何前述物质的组合；

可选地，胆固醇或胆固醇衍生物；

和至少一种有机溶剂，所述有机溶剂选自苯甲醚、乙酸乙酯、1,4-二噁烷、碳酸二甲酯、二甲亚砜、四氢呋喃聚乙二醇醚、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、异亚丙基甘油、醇(优选地，选自1-丁醇、2-丁醇和叔丁醇)、乙酸、乳酸乙酯(2-羟基丙酸乙酯)、乙腈或任何前述溶剂的组合，优选地，所述至少一种有机溶剂选自醇(优选叔丁醇)、苯甲醚(苯氧基甲)、二甲亚砜、1,4-二噁烷和碳酸二甲酯及其组合；

ii)提供包含水性介质的水相；和

可选地，药学上可接受的缓冲液，和

可选地，填充剂，所述填充剂选自甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露糖醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨糖醇、木糖醇、木糖、右旋糖苷或任何前述物质的混合物的糖类组分，

可选地，药学上可接受的张力调节剂，其不是填充剂，所述填充剂选自甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，糖组分，其选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、蔗糖、木糖醇、木糖、右旋糖苷或任何前述物质的混合物，

其中水相的pH为3至9，例如5.5至7，例如5.8至6.7(例如，通过使用醋酸钠缓冲液)；

iii)将所述有机相和所述水相混合均匀，得到混合均匀的有机相和水相，其中所述有机相和所述水相的混合比为10:1(v/v)至1:10(v/v)，优选2:1(v/v)至1:4(v/v)，更优选1.5:1(v/v)至1:4(v/v)，例如1:1(v/v)至1:3(v/v)，约1±0.5:1±0.5(v/v)，约1±0.5:2±0.5(v/v)或约1±0.5:3±0.5(v/v)，比如1:1(v/v)，1:2(v/v)或1:3(v/v)；其中所述至少一种有机溶剂和所述水相形成单相混合物，优选可冻结且可升华的单相混合物；

iv)将脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，更优选布尔韦肽，或者加入到步骤i)的所述有机相中，然后将所述含脂肽的有机相与所述水相如步骤iii)中所述混合，或者加入到步骤ii)的所述水相中，然后将所述含脂肽的水相和所述有机相如步骤iii)中所述混合，或者加入到步骤iii)的混合相中，优选加入到步骤iii)的混合相中，得到脂肽制剂，其中所得到的所述脂肽制剂是单相纳米分散体系。

方面4和上述优选实施方案的一个优选实施方案1涉及所述方法，其中所述有机溶剂是叔丁醇。

方面4及其优选实施方案的一个优选实施方案2涉及所述方法，其中所述脂肽是布尔韦肽或利拉鲁肽。

方面4及其优选实施方案的一个优选实施方案3涉及所述方法，其中磷脂包括PC(磷脂酰胆碱)。

方面4及其优选实施方案的一个优选实施方案4涉及所述方法，其中水相的pH为5至6。

方面4及其优选实施方案的一个优选实施方案5涉及所述方法，还包括步骤v)，即，将由步骤iv)得到的所述制剂(单相纳米分散体系)冻干，得到冻干物。应当理解，所述步骤v)虽完全是任选的，但却是优选的步骤，仅出于便于说明的目的，称其为“步骤v)”。

方面4和优选实施方案5的一个优选实施方案6涉及所述方法，还包括用水溶液再水化步骤v)中得到的所述冻干物而得到脂质体制剂的步骤。特别地，所述优选实施方案6因此涉及将步骤v)中得到的所述冻干物与水溶液混合而得到脂质体制剂的再水化步骤。所述脂质体制剂是复溶的脂质体制剂。在本文中，术语“复溶”是指通过将冻干物与水溶液，优选与盐水或水，更优选与盐水混合而使所述冻干制剂(单相纳米分散系统)再水化。

方面4和优选实施方案6的一个优选实施方案7涉及所述方法，其中由再水化(复溶)步骤得到的所述脂质体制剂的脂质体的D90为1μm至4.5μm，优选小于2.5μm，更优选0.025μm至2.5μm，甚至更优选0.1μm至2μm。因此，可以通过将冻干的单相纳米分散体系与水溶液，优选与盐水或水，更优选与盐水混合/复溶来制备脂质体制剂。

方面4及其优选实施方案6和7的一个优选实施方案8，其中所述水溶液包含至少95％的水。

方面4及其优选实施方案6至8的一个优选实施方案9涉及所述方法，其中所述用于混合/复溶的水溶液是NaCl水溶液，其中NaCl的含量为8g/l至10g/l，优选8.8g/l至9.2g/l，更优选9g/l。

方面4的一个优选实施方案10涉及根据方面4及其优选实施方案2至4或优选实施方案6至9的方法，其中所述脂肽制剂或所述脂质体制剂是药物制剂。

方面4的一个优选实施方案11涉及根据方面4及其优选实施方案2至4或10的方法，其中所述D90小于60nm，优选小于25nm，更优选小于20nm或更小，甚至更优选3nm至20nm。在一个更优选的实施方案中，D90为10nm至20nm，在另一个更优选的实施方案中，D90为3nm至5nm。

另一个方面5涉及根据本文公开的方面4及其优选实施方案的方法制备的制剂。

在方面5的一个优选实施方案中，所述制剂是药物制剂。

定义

如无另外说明，以％(百分比)计的量是指重量百分比，％(重量/重量)((w/w))。

如无另外明确地提及(例如，使用诸如“某一特定”的术语意指“一个”这样的说法)，则术语“a”是不定冠词，其后的名词的数量包括“一个”和“一个或多个”/“多于一个”。

本文所用的“缓冲液”或“缓冲系统”用于防止溶液pH的变化，合适的实例为本领域技术人员所熟知。

本文所用的“填充剂”，顾名思义，形成冻干产品的主体，并为冻干块提供足够的结构体。填充剂的非限制性实例是甘露醇、甘氨酸、精氨酸、脯氨酸、葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖和右旋糖苷。

术语“胆固醇”是指3β-羟基-5-胆甾烯(CAS No.：57-88-5)。胆固醇衍生物的实例是胆固醇硫酸酯及其盐(例如钠盐)、胆固醇琥珀酸单酯、胆固醇琥珀酸酯、胆固醇油酸酯、胆固醇的聚乙二醇衍生物(胆固醇-PEG)、粪醇、胆甾烷醇、胆甾烷、胆酸、皮质醇、皮质酮、氢化可的松和钙化醇。因此，优选地，胆固醇衍生物选自胆甾醇硫酸酯、胆甾醇硫酸酯盐、胆固醇琥珀酸单酯、胆固醇琥珀酸酯、胆固醇油酸酯、胆甾醇-PEG、粪醇、胆甾烷醇、胆甾烷、胆酸、皮质醇、皮质酮、氢化可的松和钙化醇。

本文所用的术语“容器”是指由聚合材料或玻璃制成地具有橡胶塞和盖子的安瓿或小瓶、单室或双室注射器、输液袋或瓶，其适于容纳用于肠胃外给药的组合物。它还包括任何用于容纳液体的容器。

术语“D90”是技术人员熟知的，并且在尺寸分布方面是指重量为占形成制剂中这种颗粒组分重量的90％的泡囊的直径等于或小于的一个特定数值。D90可通过多角度光散射仪(MALS)测定。

术语“X％至Y％”(其中X和Y代表0和100之间的任何数，且X％小于Y％)是指在X％和Y％之间范围内，包括X％和Y％的任何数。

如本文所用的“纳米分散系统”是指包含D90为60nm或更小的囊泡的水性制剂，其中所述囊泡不是脂质体。更具体而言，所述囊泡可以被视为脂质体的前体，因为脂质体可以通过复溶/混合所述包含囊泡的水性制剂的冻干物来产生，优选使用盐水或水复溶，更优选使用盐水复溶。本文中，所述囊泡在单相纳米分散体系的语境下也称为胶束。值得注意的是，本发明人发现，根据本发明的单相纳米分散体系具有液晶性质，(自发地)形成纳米级自组装结构，该结构类似于溶致液晶情况下的胶束(在本文中也参见关于溶致液晶的英语维基百科条目，最后编辑日2022年9月12日)。在本文中，术语“纳米分散体系(nano-diserpsesystem)”和“纳米分散的体系(nano-dispersed system)”在文中可互换使用。此外，在本文中，纳米分散体系是单相纳米分散体系。

“脂肽”作为一种肽，其中脂质链共价结合到肽上。已经发现，肽的这种修饰，尤其是如果肽少于50个氨基酸，经研究发现由于脂质链与例如血清白蛋白非共价相互作用而增大分子量，从而抑制蛋白水解攻击，因此当施用给患者时减少例如肾过滤。通常，有三种类型的脂质化方法，并且它们的不同之处在于脂质和肽之间的键形成方法：酰胺化、酯化(S-或O-)和形成S-键(硫醚或二硫化物)。酰胺化和O-酯化形成不可逆的强共价键，而其它两种方法形成弱的和可逆的共价键。所用的脂质化方法以及脂质链、脂质化位置和所用的间隔基都对脂肽的理化性质和生物活性具有显著影响(Zhang和Bulaj"Converting Peptidesinto Drug Leads by Lipidation".Current Medicinal Chemistry,Vol 19,Issue 11,2012)。

“治疗性脂肽”是用于治疗疾病的肽或多肽(寡聚体)。天然存在的肽可以作为激素、生长因子、神经递质、离子通道配体和抗感染药；脂肽治疗剂模拟这种功能。脂肽治疗剂通常相对安全且耐受良好，因为肽可被身体代谢。

利拉鲁肽(CAS No：204656-20-2)(γ-L-谷氨酰基(N-α-十六酰基)-Lys²⁶，Arg³⁴-GLP-1(7–37)，也称为N²⁶-(十六酰基-γ-谷氨酰基)-[34-精氨酸]GLP-1-(7-37)-肽(WHO)或NN 2211)是31个氨基酸的脂肽。利拉鲁肽是一种抗糖尿病药物，用于治疗2型糖尿病、肥胖症和长期体重控制。因此，它也是一种治疗性脂肽。

布尔韦肽(CAS No：2012558-47-1)是一种有47个氨基酸的脂肽，N端有脂肪酸(肉豆蔻酰基残基)，C端酰胺化。活性物质以醋酸盐形式销售。反荷离子乙酸根以离子形式与肽分子的碱性基团结合，并且以非化学计量比存在。布尔韦肽的化学名称是(N-肉豆蔻酰-甘氨酰-L-苏氨酰-L-天冬酰胺酰-L-亮氨酰-L-丝氨酰-L-缬氨酰-L-脯氨酰-L-天冬酰胺酰-L-脯氨酰-L-亮氨酰-甘氨酰-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-脯氨酰-L-天冬氨酰-L-组氨酰-L-谷氨酰胺酰-L-亮氨酰-L-天冬氨酰-L-脯氨酰-L-丙氨酰-L-苯丙氨酰-甘氨酰-L-丙氨酰-L-天冬酰胺酰-L-丝氨酰-L天冬酰胺酰-L-天冬酰胺酰-L脯氨酰-L-天冬氨酰-L-色氨酰-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酰-L-天冬酰胺酰-L-脯氨酰L-天冬酰胺酰-L-赖氨酰-L-天冬氨酰-L-组氨酰-L-色氨酰-L-脯氨酰-L-谷氨酰-L-丙氨酰-L-天冬酰胺酰-L-赖氨酰-L-缬氨酰-甘氨酰胺,醋酸盐。布尔韦肽是一种用于治疗慢性丁型肝炎的抗病毒药物。它通过皮下注射给药。因此，它也是一种治疗性脂肽。它通常以其醋酸盐形式销售。

“脂质体”是具有至少一个脂质双层的球形囊泡。脂质体可以用作药物给药的载体。脂质体最通常由磷脂，尤其是磷脂酰胆碱组成，但只要与脂质双层结构相容，也可包括其它脂质，例如卵磷脂酰乙醇胺。

本文所用的“脂质体制剂”是指包含脂质体的液体，所述脂质体包含磷脂。所述脂质体制剂适用于在含水环境中溶解脂肽，如布尔韦肽或利拉鲁肽。

如本文所公开的脂质体尺寸或囊泡尺寸(例如胶束尺寸)分别是指通过多角度光散射仪(MALS)或可选地通过动态光散射仪(DLS)测定的尺寸。通常，脂质体的尺寸在0.025μm至2.5μm的范围内(Akbarzadehet等.Nanoscale Research Letters 2013,8:102)。

“负载”是指将布尔韦肽掺入或转移到脂质体中/用脂质体包封布尔韦肽。

“药学上可接受的”是指由监管机构在一个国家批准或认可的，或在欧洲或美国药典或其它公认的药典中列出的，用于动物，更特别地用于人的。

PEG是指聚乙二醇。

聚乙二醇化(PEG化)是PEG聚合物链共价和非共价连接或融合到分子和宏观结构(如磷脂)的过程，磷脂聚乙二醇化产生又被称为聚乙二醇化的(PEG化的)囊泡。聚乙二醇化磷脂是公知的，并可商购。

本文所述的“药物组合物”特别是指药物脂质体组合物。“药物脂质体组合物”是指包含适于药学施用的脂质体的组合物。

用于本发明制剂的磷脂可以选自天然磷脂、合成磷脂及其组合。卵磷脂是磷脂的天然来源之一。卵磷脂是在蛋黄和大豆中发现的一种混合物。它含有多种磷脂，包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰肌醇(PI)或上述物质的(药学上可接受的)盐。

通常，本文所用磷脂的结构是结构(I)的磷脂

其中

R₁代表C₁₀-C₂₄的酰基：

R₂代表C₁₀-C₂₄的酰基或氢；

R₃代表2-三甲基氨基-1-乙基(即PC)、2-氨基-2-羧基-1-乙基(即PS)、肌醇基(C₆H₁₁O₅)(即PI)、2-氨基-1-乙基(即PE)或氢(即PA)。

术语“磷脂酸”和“PA“在本文中可互换使用。PA或其(药学上可接受的)盐可以源自天然和/或合成。PA的非限制性实例是DLPA(二月桂酰基磷脂酸)、DMPA(二肉豆蔻酰基磷脂酸)、DPPA(二棕榈酰基磷脂酸)、DSPA(二硬脂酰基磷脂酸)、POPA(1-棕榈酰-2-油酰基磷脂酸)、DEPA(二芥酰基磷脂酸)、HSPA(氢化大豆磷脂酸)、HEPA(氢化卵磷脂酸)或任何前述物质的(药学上可接受的)盐。

术语“磷脂酰胆碱”和“PC”在本文中可互换使用。PC或其(药学上可接受的)盐可以源自天然和/或合成。PC可以是聚乙二醇化的。PC的非限制性实例是二月桂基磷脂酰胆碱(DLPC)、二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(DMPC)、二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)、1-棕榈酰2-油酰基磷脂酰胆碱(POPC)、二芥酰基磷脂酰胆碱(DEPC)、氢化大豆磷脂酰胆碱(HSPC)、氢化卵磷脂酰胆碱(HEPC)或任何前述物质的(药学上可接受的)盐。

术语“磷脂酰乙醇胺”和“PE”在本文中可互换使用。PE可以是聚乙二醇化的。PE或其(药学上可接受的)盐可以源自天然和/或合成。PE的非限制性实例是DLPE(二月桂酰基磷脂酰乙醇胺)、DMPE(二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺)、DPPE(二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺)、DSPE(二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺)、POPE(1-棕榈酰-2-油酰基磷脂酰乙醇胺)、DEPE(二芥酰基磷脂酰乙醇胺)、HSPE(氢化大豆磷脂酰乙醇胺)、HEPE(氢化卵磷脂酰乙醇胺)或任何前述物质的(药学上可接受的)盐。

术语“磷脂酰甘油”和“PG”在本文中可互换使用。PG或其(药学上可接受的)盐可以衍生自天然来源和/或合成来源。PG的非限制性实例为DLPG(二月桂酰基磷脂酰甘油)、DMPG(二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油)、DPPG(二棕榈酰基磷脂酰甘油)、DSPG(二硬脂酰基磷脂酰甘油)、POPG(1-棕榈酰-2-油酰基磷脂酰甘油)、DEPG(二芥酰基磷脂酰甘油)、HSPG(氢化大豆磷脂酰甘油)、HEPG(氢化卵磷脂酰甘油)或任何前述物质的(医药学上可接受的)盐。

术语“磷脂酰肌醇”和“PI”在本文中可互换使用。PI可以是聚乙二醇化的。PI或其(药学上可接受的)盐可以源自天然和/或合成。PI的非限制性实例为DLPI(二月桂酰基磷脂酰肌醇)、DMPI(二肉豆蔻酰基磷脂酰肌醇)、DPPI(二棕榈酰基磷脂酰肌醇)、DSPI(二硬脂酰基磷脂酰肌醇)、POPI(1-棕榈酰-2-油酰基磷脂酰肌醇)、DEPI(二芥酰基磷脂酰肌醇)、HSPI(氢化大豆磷脂酰肌醇)、HEPI(氢化卵磷脂酰肌醇)或任何前述物质的(药学上可接受)盐。

术语“磷脂酰丝氨酸”和“PS”在本文中可互换使用。PS可以是聚乙二醇化的。PS或其(药学上可接受的)盐可以源自天然和/或合成。PS的非限制性实例是DLPS(二月桂酰基磷脂酰丝氨酸)、DMPS(二肉豆蔻酰基磷脂酰丝氨酸)、DPPS(二棕榈酰基磷脂酰丝氨酸)、DSPS(二硬脂酰基磷脂酰丝氨酸)、POPS(1-棕榈酰-2-油酰基磷脂酰丝氨酸)、DEPS(二芥酰基磷脂酰丝氨酸)、HSPS(氢化大豆磷脂酰丝氨酸)、HEPS(氢化卵磷脂酰丝氨酸)或任何前述物质的(药学上可接受的)盐。

任何磷脂的药学上可接受的盐的非限制性实例是钠盐或铵盐，例如PG-Na、PG-NH₄、DSPG-Na或DSPG-NH₄。

因此，选自磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)和磷脂酰甘油(PG)中的任何磷脂的衍生物选自DLPA、DMPA、DPPA、DSPA、POPA、DEPA、HSPA、HEPA、DLPC、DMPC、DPPC、DSPC、DOPC、POPC、DEPC、HSPC、HEPC、DLPE、DMPE、DPPE、DSPE、POPE、DEPE、HSPE、HEPE、DLPG、DMPG、DPPG、DSPG、POPG、DEPG、HSPG、HEPG、DLPI、DMPI、DPPI、DSPI、POPI、DEPI、HSPI、HEPI、DLPS、DMPS、DPPS、DSPS、POPS、DEPS、HSPS、HEPS、任何前述物质的聚乙二醇化物和任何前述物质的盐。

“在施用给患者之前不久“混合是指在施用给患者之前至多三天，特别是在施用给患者之前至多24小时，例如在施用给患者之前至多6小时。

“张力调节剂”是指可加入制剂中使其与人血浆等渗的药学上可接受的化合物。张力调节剂包括，例如右旋糖苷、葡萄糖、甘露醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、甘油和NaCl，特别是蔗糖或甘油或NaCl，更特别是蔗糖或NaCl。张力是“有效渗透压”，等于能够施加跨膜渗透力的溶质的浓度之和。肠胃外制剂应与血浆等渗。张力调节剂是本领域技术人员公知的。

如本文所用，术语任何疾病或病症的“治疗”(“treat”,“treating”或“treatment”)指在一个实施方案中改善疾病或病症(即，减缓或阻止或减少疾病或其至少一种临床症状的发展)。在另一个实施方案中，“治疗”(“treat”,“treating”或“treatment”)是指减轻或改善至少一种身体参数，包括患者自己可能无法感知的那些参数。还在另一个实施方案中，“治疗”(“treat”,“treating”或“treatment”)是指在身体上(例如，可感知症状的稳定)、在生理上(例如，身体参数的稳定)、或在两方面同时调整疾病或病症。

术语“其中a)、b)、c)、d)和e)的总和为100％”是指组分a)至e)的百分比数值必须总是满足a)至e)的百分比数值的总和为100。因此，这些值表示组分a)至e)之间的比例。然而，技术人员理解，制剂可以包含另外的组分，例如溶剂。但是，当计算a)至e)之间的比例时，不考虑这种附加组分的量(以百分比计的a)至e)的总和必须为100％)。

应当理解，本发明的所有实施例都可以相互结合，不管实施例是普通实施例、优选实施例、更优选实施例、特别优选实施例，还是最优选实施例，只要这种结合不违反任何自然法则；并且即使没有明确地提及本发明的两个或更多实施例的结合，这种两个或更多实施例的结合在本文中也可以因为所述两个或更多实施例的公开而公开。

发明详述

本发明涉及一种制备含有脂肽的制剂的简单方法。本发明的方法能够容易地制备液体制剂(脂肽制剂)，其中囊泡，优选胶束的D90为60nm或更小，更优选25nm或更小，优选20nm或更小。在根据本发明的方法中形成的这种单相纳米分散体系可以直接制备脂质体制剂，不需要为最终的脂质体制剂而采用机械手段来减小脂质体的尺寸。

或者，本发明的方法进一步能够容易地制备脂质体制剂，其中脂质体的D90为1μm至4.5μm。本发明进一步提供了一种适于肠道外施用于患者的根据本发明的方法制备的包含脂肽的制剂，更具体地说，是一种脂肽制剂，优选治疗性脂肽制剂，更优选布尔韦肽或利拉鲁肽的制剂。特别地，这种施用是通过静脉内注射或输注实现的。本发明进一步提供了两种分开来的制剂，其可以在施用给患者之前不久混合在一起，以提供适于给药的脂质体组合物。一种制剂可以是包含脂肽的冻干物，第二种制剂可以是水性制剂。当两种的制剂混合在一起时，布尔韦肽被装载到形成的脂质体中，从而实现布尔韦肽的溶解，并得到适合用于临床的药物脂质体组合物。

包含脂肽，优选包含治疗性脂肽的制剂应该能够在给予患者之前将所述治疗性脂肽有效和最佳地装载到脂质体中。

优选地，本发明提供了一种药物脂质体制剂，其能够在给药(注射)后使布尔韦肽从脂质体中快速释放。

总之，尽管药物的化学特性具有挑战性，本文所述的发明能够有效地将脂肽，优选治疗性脂肽(例如，布尔韦肽或利拉鲁肽)施用于患者。

特别地，本文所述的制剂是指药物制剂，例如药物脂质体组合物。

优选地，脂质体制剂的脂质体的D90为1μm至4.5μm。

特别地，本文所述的磷脂选自卵磷脂、大豆卵磷脂或合成磷脂。

下面所述的是本发明的多个方面和实施例。

制剂

第一方面涉及制剂，其中所述制剂是单相纳米分散体系，包含

a)一种或多种磷脂，选自磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG)或任何前述物质的衍生物或其混合物，基于a)至e)的总重量，所述磷脂的含量在40％至99.7％范围内，优选在40％至97％范围内，例如约60％；

b)脂肽，优选治疗性脂肽，更优选布尔韦肽或利拉鲁肽，基于a)至e)的总重量，所述脂肽的含量在0.3％至20％范围内，所述脂肽是布尔韦肽时，优选含量在3％至18％范围内，更优选在3％至13％范围内，例如约8％，或者所述脂肽是利拉鲁肽时，优选含量在0.3％至2％范围内，例如0.37±0.05％(即0.365％至0.375％)，0.6±0.05％，0.7±0.05％，1.1±0.06％，1.2±0.06％，1.8±0.06％；

c)胆固醇或其衍生物，基于a)至e)的总重量，含量在0％至14％范围内，优选在4％至14％范围内，例如约9％；

d)填充剂,优选甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，或选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、蔗糖、木糖醇、木糖、右旋糖苷、或其混合物的糖类组分，更优选甘氨酸、精氨酸、脯氨酸，或选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、蔗糖、木糖醇、木糖、右旋糖苷、或其混合物的糖类组分，更优选甘氨酸、精氨酸、脯氨酸、甘露醇、葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖或右旋糖苷，更优选甘露醇、甘氨酸或海藻糖，基于a)至e)的总重量，所述填充剂的含量在0％至35％范围内，优选在15％至35％，例如约25％；

e)不是d)的张力调节剂，基于a)至e)的总重量，含量在0％至35％范围内；

其中a)、b)、c)、d)和e)的总和为100％，并且a)至e)的总量为基于所述制剂的总重量的10％至100％。

关于c)和e)，这些组分在一些制剂中可选地以0％为含量范围的最低限。

技术人员应理解，当制剂由a)、b)、d)、可选地c)和可选地e)组成时，所述制备方法中，优选下文进一步描述的本发明的制备方法中，所用的溶剂和添加剂(例如叔丁醇、或水、或缓冲体系)的残留量仍可以至多达到2％。

一个优选的实施方案涉及根据本发明的制剂，其中所述制剂由a)、b)、c)、d)和e)以及残余溶剂(优选叔丁醇)组成，其中，基于所述制剂的总重量(例如在冻干物的情况下，制剂总重量例如记为a)至e)和叔丁醇的总量)，叔丁醇的含量在0.01％至2％。更优选地，叔丁醇的量为1％或更少，例如在0.001％至0.8％。

另一个优选的实施方案涉及本发明的制剂，其中所述制剂由a)、b)、c)、d)和e)，叔丁醇和缓冲系统，优选乙酸盐缓冲系统组成，其中，基于所述制剂的总重量(例如在冻干物的情况下，制剂总重量例如记为a)至e)和叔丁醇的总量)，叔丁醇和缓冲系统的合计量为0.01％至2％。

在另一个优选的实施方案中，本发明的制剂包含脂质体、前体脂质体、脂质包合物、脂质胶态分散体、胶束、反向胶束、盘状结构或其组合。

一个进一步优选的实施方案涉及一种单相纳米分散体系，优选药物单相纳米分散体系，其中囊泡的D90为60nm或更小，优选小于25nm，更优选20nm或更小，例如10nm至20nm(如约15nm)或3nm至10nm(如约5nm)。

另一个优选的实施方案涉及冻干制剂。

另一个优选的实施方案涉及冻干制剂(冻干物)，其中脂肽(b))，优选治疗性脂肽，更优选布尔韦肽或利拉鲁肽的量为12mg至24mg，更优选10mg至20mg。

还有另一个优选的实施方案涉及冻干制剂(冻干物)，其中脂肽(b))，优选治疗性脂肽，更优选利拉鲁肽的量为0.5mg至1.8mg，例如分别为0.6mg、1.2mg或1.8mg。

在冻干制剂中，a)、b)、c)、d)和e)的总和为100％，并且基于制剂的总重量，a)至e)的总量为98％至100％。优选地，a)至e)的总量为99％至100％，甚至更优选为99.9％至100％，最优选为100％。

一个优选的实施方案涉及根据本发明的药物脂质体制剂，其包含a)、b)、c)、d)和e)以及水和可选地缓冲液。

优选地，尤其是在后两个优选的实施方案中，基于所述制剂的总重量，a)至e)的总量为10％至15％。

在进一步优选的实施方案中，本发明所述制剂中的药物活性物质被脂质包合物、前体脂质体、胶束或脂质体包封，更优选被脂质体或胶束包封。换句话说，所述组合物分别包含例如至少一种脂质体或至少一种胶束，并且布尔韦肽被装载到所述脂质体或胶束中。

在一个优选的实施方案中，本发明所述制剂中的药物活性物质被胶束(纳米分散制剂/单相纳米分散体系)包封。最优选地，所述胶束的D90为60nm或更小，例如小于25nm，更优选20nm或更小，例如10nm至20nm，或3nm至10nm。

在另一个优选的实施方案中，本发明所述制剂中的药物活性物质被脂质体包封(脂质体制剂)。

另一个优选的实施方案涉及制剂，其中所述制剂，优选脂质体制剂或纳米分散制剂，是药物制剂。

脂质体制剂

一个优选的实施方案涉及通过将冻干制剂(单相纳米分散系统)混合/复溶而得到的药物脂质体制剂，优选地与水溶液，更优选地与盐水或水，甚至更优选地与盐水混合/复溶。

这样的药物脂质体制剂优选适于注射。在一个具体实施方案中，脂质体制剂静脉内或优选皮下注射施用于患者。

另一个优选的实施方案涉及药物脂质体制剂，其中所述脂肽是布尔韦肽，并且脂质体制剂中布尔韦肽的量在12mg/1.5ml至24mg/1.5ml，更优选在15mg/1.5ml至20mg/1.5ml。

另一个优选的实施方案涉及药物脂质体制剂，其中所述脂肽是利拉鲁肽，并且脂质体制剂中利拉鲁肽的量在0.5mg/ml至18mg/ml，如0.5mg/ml至12mg/ml，更优选在4mg/ml至8mg/ml，甚至更优选在5.8mg/ml至6.2mg/ml，如6mg/ml。

根据另一个优选的实施方案，所述药物脂质体制剂的pH为5至7.5，例如5至6，或6至7.5，或7.3至7.4。

a)磷脂

另一个优选的实施方案涉及制剂，其中所述一种或多种磷脂包含PC或PC与选自磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)和磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG)或任何前述物质的药学上可接受的盐中的一种或多种磷脂的混合物。

另一个优选的实施方案涉及制剂，其中所述一种或多种磷脂是PC或PC与选自磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)和磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG)或任何前述物质的药学上可接受的盐中的一种或多种磷脂的混合物。

在一个优选的实施方案中，至少一种磷脂是聚乙二醇化磷脂。

另一个更优选的实施方案涉及制剂，其中所述一种或多种磷脂包含PC或其盐，优选药学上可接受的盐，优选地包含选自DLPC、DMPC、DPPC、DSPC、POPC、DEPC、HSPC、HEPC或任何前述物质的盐，优选药学上可接受的盐。

另一个更优选的实施方案涉及制剂，其中所述一种或多种磷脂包含聚乙二醇化PC或其盐，优选药学上可接受的盐，优选地包含选自聚乙二醇化DLPC、聚乙二醇化DMPC、聚乙二醇化DPPC、聚乙二醇化DSPC、聚乙二醇化POPC、聚乙二醇化DEPC、聚乙二醇化HSPC、聚乙二醇化HEPC或任何前述物质的盐，优选药学上可接受的盐。

另一个更优选的实施方案涉及制剂，其中所述一种或多种磷脂包括PC或其盐，优选药学上可接受的盐。在一个甚至更优选的实施方案中，PC或其盐，优选药学上可接受的盐，来源于大豆(例如类脂S100)、蛋或合成的，在最优选的实施方案中，PC或其盐，优选药学上可接受的盐，来源于大豆。

另一个优选的实施方案涉及制剂，其中a)的量占制剂中a)、b)、c)、d)和e)的总和的50％至65％。例如约57％。

另一个优选的实施方案涉及制剂，其中PG或其盐，优选药学上可接受的盐，是聚乙二醇化的PG或其聚乙二醇化的盐，优选其聚乙二醇化的药学上可接受的盐。

另一个更优选的实施方案涉及制剂，其中所述PG或其盐，优选药学上可接受的盐，选自DLPG、DMPG、DPPG、DSPG、POPG、DEPG、HSPG、HEPG。

另一更优选的实施方案涉及制剂，其中PG或其盐，优选药学上可接受的盐，是聚乙二醇化的，并且选自聚乙二醇化的DLPG、聚乙二醇化的DMPG、聚乙二醇化的DPPG、聚乙二醇化的DSPG、聚乙二醇化的POPG、聚乙二醇化的DEPG、聚乙二醇化的HSPG、聚乙二醇化的HEPG或任何前述物质的盐，优选药学上可接受的盐。

b)脂肽

在一个优选地实施方案中，脂肽是具有不超过50个氨基酸的脂肽

在进一步优选的实施方案中，脂肽具有5至50个氨基酸。优选地，所述5至50个氨基酸独立地选自丙氨酸(ala)、精氨酸(arg)、天冬酰胺(asn)、天冬氨酸(asp)、半胱氨酸(cys)、谷氨酰胺(gln)、谷氨酸(glu)、甘氨酸(gly)、组氨酸(his)、异亮氨酸(ile)、亮氨酸(leu)、赖氨酸(lys)、甲硫氨酸(met)、苯丙氨酸(phe)、脯氨酸(pro)、丝氨酸(ser)、苏氨酸(thr)、色氨酸(trp)、酪氨酸(tyr)和缬氨酸(val)。

在另一个优选的实施方案中，亲脂残基通过形成酰胺、酯(S-或O-)或S-键(硫醚或二硫化物)而与氨基酸连接。

在另一个优选的实施方案中，所述脂肽具有至少一个选自糖基磷脂酰肌醇-锚、棕榈酰基(C16:0)或肉豆蔻酰基(C14:0)残基的亲脂残基，所述亲脂残基与所述5至50个氨基酸中的一个共价结合。例如棕榈酰基或肉豆蔻酰基残基与cys残基连接。

在一个优选的实施方案中，脂肽具有一个选自糖基磷脂酰肌醇-锚、棕榈酰基(C16:0)或肉豆蔻酰基(C14:0)残基的亲脂残基，所述亲脂残基与所述5至50个氨基酸中的一个共价结合。

还在另一优选的实施方案中，只有一种脂肽(例如，仅存在布尔韦肽或仅存在利拉鲁肽)。

在另一个优选的实施方案中，用于本发明制剂(或方法)中的脂肽是布尔韦肽。

还在另一优选实的施方案中，用于本发明制剂(或方法)中的脂肽是利拉鲁肽。

还在另一优选的实施方案中，所述脂肽是布尔韦肽。

还在另一优选的实施方案中，所述脂肽是利拉鲁肽。

另一个优选的实施方案涉及根据本发明的制剂，其中使用的是布尔韦肽的醋酸盐。在一个实施方案中，根据本发明的制剂包含醋酸根，优选与布尔韦肽等摩尔的醋酸根。

另一个优选的实施方案涉及制剂，其中脂肽(b))的量占制剂中a)、b)、c)、d)和e)的总和的5％至11％。例如约8％。

在另一个优选的实施方案中，脂肽优选布尔韦肽或利拉鲁肽的量占制剂中a)、b)、c)、d)和e)的总和的5％至11％，例如，如果所述制剂是液体制剂，如包含布尔韦肽的单相纳米分散体系；或包含脂肽优选药物脂质体制剂的脂质体制剂，脂肽(c))在所述制剂中的浓度为15mg/1.5ml至20mg/1.5ml。

在另一个优选的实施方案中，c)的量占制剂中a)、b)、c)、d)和e)的总和的5％至11％，并且例如，如果制剂是冻干制剂，a)至e)总和为176.6mg，制剂中c)的含量为8mg至19.4mg。

c)胆固醇

已知胆固醇对脂质体的稳定性和药物释放有影响。

因此，在一个优选的实施方案中，本发明的制剂优选包含胆固醇或其衍生物(组分c))。

另一个优选的实施方案涉及制剂，其中c)选自胆固醇或胆固醇硫酸钠。更优选地，组分c)是胆固醇。

另一个优选的实施方案涉及制剂，其中c)的量占制剂中a)、b)、c)、d)和e)的总和的6％至12％。例如约9％，例如在8％至10％。

d)填充剂

尤其当本发明的制剂应该是可冻干的，或者通过本发明的方法制备本发明的制剂需要冻干步骤时，填充剂的存在是有利的。优选的填充剂的实例是甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，或糖类组分(本发明的制剂中的组分e))。优选的糖组分选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、木糖醇、木糖、右旋糖苷或其混合物。

一个更优选的实施方案涉及制剂，其中e)是海藻糖。

另一个优选的实施方案涉及制剂，其中e)的量占制剂中a)、b)、c)、d)和e)的总和的20％至30％。例如约25％。

在一个优选的实施方案中，本发明的制剂除了组分a)至e)之外还包含相较于制剂(例如冻干物)的总重量在0.01％至2％范围内的叔丁醇。

e)张力调节剂

另一个优选的实施方案涉及药物脂质体制剂，其包含a)、b)、c)、d)和一种或多种不是d)的张力调节剂(本发明的制剂中的组分e))。

这样的张力调节剂，优选药学上可接受的张力调节剂，存在于药物脂质体制剂中是必要的。它可以在通过将本发明的冻干物与含有所述张力调节剂的水相混合制备脂质体制剂的过程中加入，或者它可以在冻干物的再水化步骤中加入。

或者，它可以已经存在于冻干物中，因为张力调节剂是制备本发明脂肽的本发明方法所用的水相的一部分。技术人员知道张力调节剂也可以部分地是这样的水相的一部分并且部分地是水相的一部分。技术人员可以容易地计算张力调节剂的总量，所述张力调节剂需要在最终药物脂质体制剂中具有合适的浓度以使施用给患者的药物具有等渗效果。

技术人员应认识到，张力调节剂在一些情况下也可以是填充剂，例如在张力剂是糖类组分如葡萄糖或海藻糖的情况下。

其它张力调节剂如NaCl没有膨胀功能。因此，如果使用这种“单一功能组分”，例如NaCl，制剂可以包含填充剂e)和张力调节剂e)。它甚至可以包含一种填充剂(例如海藻糖)以及“两种”张力调节剂(海藻糖和例如NaCl)。

张力调节剂是本领域技术人员公知的。在一个优选的实施方案中，张力调节剂选自右旋糖苷、葡萄糖、甘露醇、蔗糖、乳糖、海藻糖、甘氨酸、精氨酸、脯氨酸和NaCl，特别是甘氨酸、甘露醇、海藻糖、葡萄糖和NaCl，甚至更特别是甘氨酸和NaCl，最优选NaCl。

技术人员知道如何选择制剂中特定张力调节剂的正确浓度，所述制剂优选用于皮下注射。

在一个优选的实施方案中，所述张力调节剂是NaCl，且基于药物脂质体制剂总重量，NaCl在所述药物脂质体制剂中的浓度为0.8％至1％，更优选约0.9％，例如0.9％±0.1％，更优选0.9％。

在一个优选的实施方案中，组分e)以0.1％至10％，更优选0.4％至1.5％的量存在于本发明的制剂中，例如，当张力剂是NaCl时，制剂(如药学上可接受的制剂)中NaCl的优选量为0.8％至1.0％(0.9％±0.1％，更优选0.9％±0.05％)，即就血浆而言，为生理浓度或接近生理浓度。

根据张力调节剂和制剂的种类(例如，药学上可接受的脂质体制剂或冻干物)，本领域技术人员熟知如何计算以生理浓度施用于患者的(最终)制剂中存在的一种或多种张力剂的量。

水溶液用溶剂

另一个优选的实施方案涉及药物脂质体制剂，包含如本文所定义的a)、b)、c)、d)和e)以及一种或多种溶剂。

另一个优选的实施方案涉及药物脂质体制剂，其中基于最终制剂总重量，所述一种或多种溶剂的量为10％至90％，例如80％至90％或甚至85％至90％。

熟练的制剂人员可以选择合适的溶剂。在一个优选的实施方案中，所述一种或多种溶剂选自水和其中存在例如盐的水溶液。其中存在盐的水溶液优选为包含生理浓度的至少一种盐，优选等渗浓度的至少一种盐的溶液，优选水溶液，例如盐水、乳酸林格液和/或勃脉力(Plasma Lyte)。在本文中，盐水也可以称为盐水溶液，涉及氯化钠和水的混合物，优选氯化钠浓度为每升溶液9g盐(0.9％)(也参见实施例4，其中这样的0.9％(w/v)盐水用于脂质体的复溶和形成)。乳酸林格液是指乳酸钠溶液，其为氯化钠、乳酸钠、氯化钾和氯化钙在水中的混合物。勃脉力(Plasma Lyte)也可以被称为Plasma-lyte148(pH 7.4)。因此，所述水溶液优选具有反映人体生理血浆电解质浓度、渗透压和pH的盐浓度、渗透压和pH。然而，在更优选的实施方案中，所述溶剂是水或水与(优选为等渗浓度的)至少一种盐的组合物，其中水的量占溶剂总量的至少80％，优选至少90％，更优选至少95％。优选地，溶剂是水、盐水、乳酸林格液和/或勃脉力(Plasma Lyte)。

更优选地，所述一种或多种溶剂是水或盐水。最优选地，所述一种或多种溶剂是水。

缓冲液

另一个优选的实施方案涉及制剂，其中所述制剂是药物脂质体制剂，包含如本文所定义的a)、b)、c)、d)和e)和缓冲液。

另一个优选的实施方案涉及制剂，其中所述制剂是药物脂质体制剂，由如本文所定义的a)、b)、c)、d)和e)和溶剂组成。

另一个优选的实施方案涉及制剂，其中所述制剂是药物脂质体制剂，包含如本文所定义的a)、b)、c)、d)和e)、溶剂和一种或多种张力调节剂和缓冲液。

本发明的药物脂质体制剂中除了组分a)至e)之外的任何药学上可接受的组分，例如一种或多种溶剂、缓冲液、盐、其它添加剂，被统称为药物水溶液。因此，本发明的药物脂质体制剂由组分a)至e)和所述药物水溶液组成。技术人员应理解，组成所述药物水溶液的组分可以与包含如本文定义的a)至e)的制剂顺序混合，或者这些组分可以先混合，然后加入到包含如本文定义的a)至e)的制剂中(即该制剂可以仅包含a)至e)和例如缓冲液，或者该制剂在/与药物水溶液一起被制备，或者顺序提供f)和所述水溶液)，从而得到由组分a)至e)和本发明的药物水溶液组成的药物脂质体制剂。

单相纳米分散体系的囊泡尺寸

在另一实施方案中，本发明方法(参见下文)步骤iv)的脂肽制剂是单相纳米分散体系，其中囊泡的D90为60nm或更小，更优选小于25nm，甚至更优选20nm或更小，如10nm至20nm，或3nm至10nm。

脂质体尺寸

在另一个实施方案中，本发明脂质体制剂的脂质体具有1μm至4.5μm的D90尺寸分布。

治疗/应用的方法

一个方面涉及其中脂肽是布尔韦肽的本发明制剂在制备治疗慢性乙型肝炎和/或慢性丁型肝炎的药物中的用途。

另一方面涉及其中脂肽是布尔韦肽的本发明的制剂在制备治疗炎症，优选炎性疾病的药物中的用途。

另一方面涉及治疗慢性乙型肝炎和/或慢性丁型肝炎的方法，包括向患者施用其中脂肽是布尔韦肽的本发明的药物脂质体制剂的步骤。优选地，本发明的药物脂质体制剂是注射剂。

一个方面涉及其中脂肽是利拉鲁肽的本发明制剂用于制备治疗2型糖尿病的药物的用途。

另一方面涉及一种治疗2型糖尿病的方法，包括向患者施用其中脂肽是利拉鲁肽的本发明的药物脂质体制剂的步骤。优选地，本发明的药物脂质体制剂是注射剂。

制备方法

另一方面涉及制备本发明制剂的方法，包括以下步骤：

i)提供有机相，所述有机相包含一种或多种磷脂(本发明的制剂中的组分a))，可选地胆固醇或其衍生物(本发明的制剂中的组分c))，和至少一种有机溶剂，所述有机溶剂优选选自苯甲醚、乙酸乙酯、1,4-二噁烷、碳酸二甲酯、二甲亚砜、四氢呋喃聚乙二醇醚、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、异亚丙基甘油、醇、乙酸、乳酸乙酯(2-羟基丙酸乙酯)、乙腈，以及任何前述物质的组合，所述醇优选选自1-丁醇、2-丁醇和叔丁醇，更优选叔丁醇；

ii)提供水相，所述水相包含水性介质；以及

可选地，填充剂，所述填充剂选自甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，糖类组分，所述糖类组分选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、蔗糖、木糖醇、木糖、右旋糖苷或任何前述物质的混合物，

可选地，药学上可接受的缓冲液，和

可选地，药学上可接受的张力调节剂，

其中水相的pH为3至9，例如5.5至7，例如5.8至6.7(例如通过使用乙酸钠缓冲液)；

iii)将所述有机相和所述水相混合均匀，其中所述有机相和所述水相的混合比为10:1(v/v)至1:10(v/v)，得到混合均匀的有机相和水相，其中所述至少一种有机溶剂和所述水相形成单相混合物，优选可冻结和可升华的单相混合物；

iv)向所述混合均匀的相中加入脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，更优选布尔韦肽，得到本发明的脂肽制剂；或

在步骤iii)将有机相和水相混合之前，将脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，更优选布尔韦肽，加入到所述有机相中；或

在步骤iii)将水相和有机相混合之前，将脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，更优选布尔韦肽，加入到所述水相中

得到脂肽制剂，其中如此获得的所述脂肽制剂是单相纳米分散系统。优选地，所述水相包含缓冲液。

一个优选的实施方案涉及制备本发明的制剂的方法，包括以下步骤：

i)提供有机相，所述有机相包含一种或多种磷脂(本发明的制剂中的组分a))，可选地胆固醇或其衍生物(本发明的制剂中的组分c))，和至少一种有机溶剂，所述有机溶剂优选选自苯甲醚、乙酸乙酯、1,4-二噁烷、碳酸二甲酯、二甲亚砜、四氢呋喃聚乙二醇醚、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、异亚丙基甘油、醇、乙酸、乳酸乙酯(2-羟基丙酸乙酯)、乙腈，以及任何前述物质的组合，所述醇优选选自1-丁醇、2-丁醇和叔丁醇，更优选叔丁醇；

ii)提供水相，所述水相包含水性介质；以及

可选地填充剂，所述填充剂选自甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，糖类组分，所述糖类组分选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、蔗糖、木糖醇、木糖、右旋糖苷或任何前述物质的混合物，

药学上可接受的缓冲液，和

可选地药学上可接受的张力调节剂，

其中水相的pH为3至9，例如5.5至7，例如5.8至6.7(例如通过使用乙酸钠缓冲液)；

iii)将所述有机相和所述水相混合均匀，其中所述有机相和所述水相的混合比为10:1(v/v)至1:10(v/v)，得到混合均匀的有机相和水相，其中所述至少一种有机溶剂和所述水相形成单相混合物，优选可冻结和可升华的单相混合物；

iv)向所述混合均匀的相中加入脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，更优选布尔韦肽，得到本发明的脂肽制剂；或

在步骤iii)将有机相和水相混合之前，将脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，更优选布尔韦肽，加入到所述有机相中；或

在步骤iii)将水相和有机相混合之前，将脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，更优选布尔韦肽，加入到所述水相中

得到脂肽制剂，其中如此获得的所述脂肽制剂是单相纳米分散系统。

因此，另一个优选的实施方案涉及制备本发明的制剂的方法，包括以下步骤：

i)提供有机相，所述有机相包含一种或多种磷脂(本发明的制剂中的组分a))，可选地胆固醇或其衍生物(本发明的制剂中的组分c))，和至少一种有机溶剂，所述有机溶剂优选选自苯甲醚、乙酸乙酯、1,4-二噁烷、碳酸二甲酯、二甲亚砜、四氢呋喃聚乙二醇醚、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、异亚丙基甘油、醇、乙酸、乳酸乙酯(2-羟基丙酸乙酯)、乙腈，以及任何前述物质的组合，所述醇优选选自1-丁醇、2-丁醇和叔丁醇，更优选叔丁醇；

ii)提供水相，所述水相包含水性介质；以及

可选地填充剂，所述填充剂选自甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，糖类组分，所述糖类组分选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、蔗糖、木糖醇、木糖、右旋糖苷或任何前述物质的混合物，

可选地药学上可接受的缓冲液，和

可选地药学上可接受的张力调节剂，

其中水相的pH为3至9，例如5.5至7，例如5.8至6.7(例如通过使用乙酸钠缓冲液)；

iii)将所述有机相和所述水相混合均匀，其中所述有机相和所述水相的混合比为10:1(v/v)至1:10(v/v)，得到混合均匀的有机相和水相，其中所述至少一种有机溶剂和所述水相形成单相混合物，优选可冻结和可升华的单相混合物；

iv)向所述混合均匀的相中加入脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，更优选布尔韦肽，得到本发明的脂肽制剂，其中如此获得的所述脂肽制剂是单相纳米分散系统。

优选地，所述水相包含缓冲液。

另一个实施方案涉及制备本发明制剂的方法，包括以下步骤：

i)提供有机相，所述有机相包含一种或多种磷脂(本发明制剂中的组分a))，一种脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，更优选布尔韦肽(本发明制剂中的组分b))，可选地胆固醇或其衍生物(本发明制剂中的组分c))，和至少一种有机溶剂，所述有机溶剂优选选自苯甲醚、乙酸乙酯、1,4-二噁烷、碳酸二甲酯、二甲亚砜、四氢呋喃聚乙二醇醚、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、异亚丙基甘油、醇、乙酸、乳酸乙酯(2-羟基丙酸乙酯)、乙腈，以及任何前述物质的组合，所述醇优选选自1-丁醇、2-丁醇和叔丁醇，更优选叔丁醇；

ii)提供水相，所述水相包含水性介质；以及

可选地填充剂，所述填充剂选自甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，糖类组分，所述糖类组分选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、蔗糖、木糖醇、木糖、右旋糖苷或任何前述物质的混合物，

可选地药学上可接受的缓冲液，和

可选地药学上可接受的张力调节剂，

其中水相的pH为3至9，例如5.5至7，例如5.8至6.7(例如通过使用乙酸钠缓冲液)；

iii)将所述有机相和所述水相混合均匀，其中所述有机相和所述水相的混合比为10:1(v/v)至1:10(v/v)，得到混合均匀的有机相和水相，其中所述至少一种有机溶剂和所述水相形成单相混合物，优选可冻结和可升华的单相混合物。

优选地，所述水相包含缓冲液。

另一个实施方案涉及制备本发明制剂的方法，包括以下步骤：

i)提供有机相，所述有机相包含一种或多种磷脂(本发明制剂中的组分a))，可选地胆固醇或其衍生物(本发明制剂中的组分c))，和至少一种有机溶剂，所述有机溶剂优选选自苯甲醚、乙酸乙酯、1,4-二噁烷、碳酸二甲酯、二甲亚砜、四氢呋喃聚乙二醇醚、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、异亚丙基甘油、醇、乙酸、乳酸乙酯(2-羟基丙酸乙酯)、乙腈，以及任何前述物质的组合，所述醇优选选自1-丁醇、2-丁醇和叔丁醇，更优选叔丁醇；

ii)提供水相，所述水相包含水性介质；以及

脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，更优选布尔韦肽(本发明制剂中的组分b))，

可选地填充剂，所述填充剂选自甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，糖类组分，所述糖类组分选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、蔗糖、木糖醇、木糖、右旋糖苷或任何前述物质的混合物，

可选地药学上可接受的缓冲液，和

可选地药学上可接受的张力调节剂，

其中水相的pH为3至9，例如5.5至7，例如5.8至6.7(例如通过使用乙酸钠缓冲液)；和

iii)将所述有机相和所述水相混合均匀，其中所述有机相和所述水相的混合比为10:1(v/v)至1:10(v/v)，得到混合均匀的有机相和水相，其中所述至少一种有机溶剂和所述水相形成单相混合物，优选可冻结和可升华的单相混合物。

优选地，所述水相包含缓冲液。

解释如下，10:1(v/v)的混合比是指将10体积份的有机相和1体积份的水相混合(例如10ml和1ml)。优选地，本发明的方法中的混合比在5:1(v/v)至1:5(v/v)，例如1:1或约1，例如2:1至1:2。

水性介质

所述水性介质优选是水或其中存在例如盐的水溶液。其中存在盐的水溶液优选为包含生理浓度的至少一种盐，优选等渗浓度的至少一种盐的溶液，优选水溶液，例如生理盐水、乳酸林格液和/或勃脉力(Plasma Lyte)。因此，所述水性介质优选具有反映人体生理血浆电解质浓度、渗透压和pH的盐浓度、渗透压和pH。所述水介质优选是水或水与(优选为等渗浓度的)至少一种盐的组合物，所述优选生理盐水、乳酸林格液和/或勃脉力(PlasmaLyte)。水的量占所述水性介质的溶剂总量的至少80％，优选至少90％，更优选至少95％。更优选地，所述水性介质是水或生理盐水。最优选地，所述水性介质是水。

用于本发明方法的优选的缓冲液、填充剂和张力调节剂与本发明制剂中所述的相应的缓冲液、填充剂和张力调节剂相同。

水相

步骤ii)中的所述水相包含水性介质，优选地，所述水性介质由水构成，即水是水相中的唯一溶剂。

在一个优选的实施方案中，选择水相的pH以使脂肽基本上不溶于所述水相。在此所述的基本上不溶意味着(与ii)中与水相混合的脂肽总量相比)至多20％(w/w)，更优选至多10％(w/w)，甚至更优选至多5％(w/w)，甚至更优选至多1％(w/w)，最优选至多0.1％(w/w)的脂肽溶于所述水相。

用于本发明方法的优选的缓冲液、填充剂和张力调节剂与本发明制剂中所述的相应的缓冲液、填充剂和张力调节剂相同。

水相用缓冲液(步骤i))

在一个优选的实施方案中，水相包含缓冲液。

技术人员知道如何为调特定pH值选择缓冲液。优选的缓冲液是乙酸盐缓冲液(例如乙酸盐/乙酸)(优选地，为调pH3.7至6.5))、磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液(例如Na₂HPO₄/柠檬酸、Na₂HPO₄/NaH₂PO₄或Na₂HPO₄/NaOH)(优选地，为调pH5.4至8.0)、柠檬酸钠/柠檬酸(优选地，为调pH为3.0至6.2))。

在一个优选的实施方案中，所述水相包含至少70％(w/w)，更优选至少90％(w/w)的水性介质(优选水)，可选地填充剂(本发明制剂中的组分d))，其中所述填充剂在所述水相中的量优选在1％(w/w)至25％(w/w)，和缓冲液，其中缓冲液的量优选在0.001％(w/w)至5％(w/w)，更优选在0.001％(w/w)至1％(w/w)，例如在0.01％(w/w)至0.1％(w/w)。

在填充剂存在于水相中的情况下，技术人员知道如何确定水相的总体积和填充剂的量(以及其它可选的组分如缓冲液或不同于填充剂的张力调节剂的量)以得到本发明的制剂。

在另一个优选的实施方案中，水是水性介质中的唯一溶剂，因此也是水相的唯一溶剂。

最优选的是乙酸盐缓冲液，特别是当布尔韦肽是脂肽b)时。优选地，此时水相的pH为5至6.8，例如为5至6。

在进一步优选的实施方案中，所述水相由水性介质、填充剂、缓冲液组成，可选地，还包括脂肽。如果脂肽存在于水相中，所述水相的pH应在脂肽可溶于水相中的范围内。如果脂肽不溶于水相，将脂肽加入有机相或加入混合的有机相和水相中更有利。

在另一个优选的实施方案中，所述水相由水、填充剂、缓冲液组成；可选地，还包括脂肽。

在另一个还优选的实施方案中，所述水相由水性介质(优选水)和缓冲液组成，可选地，还包括脂肽。

在一个非常优选的实施方案中，所有组分例如水性介质、缓冲液和张力调节剂都是药学上可接受的组分。

通常，缓冲液的浓度为0.05mM至100mM，例如1mM至50mM。

有机相

除了关于本文给出的至少一种有机溶剂的定义和说明性实例之外，对于有机相，熟练的制剂人员能够选择至少一种合适的水混溶的可冻干有机溶剂。

所述有机溶剂在标准条件下(25℃和1.013bar)应与水混溶。此外，有机溶剂应该是可冻干的，这样有机溶剂可以通过升华(物质不通过液态直接从固态到气态的转变)除去。技术人员知道如何选择合适的有机溶剂以及合适的温度和压力来冻干有机溶剂，例如使用本领域已知的有机溶剂的压力温度(PT)对照表。

优选的有机溶剂选自苯甲醚、乙酸乙酯、1,4-二噁烷、碳酸二甲酯、二甲亚砜、四氢呋喃聚乙二醇醚、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、异亚丙基甘油和醇(如丁醇，优选选自1-丁醇、2-丁醇和叔丁醇)、乙酸、乳酸乙酯(2-羟基丙酸乙酯)、乙腈或任何前述物质的组合，优选地，所述至少一种有机溶剂选自醇(优选叔丁醇)、苯甲醚、二甲亚砜、1,4-二噁烷和碳酸二甲酯及其组合。

在一个优选的实施方案中，所述有机溶剂是苯甲醚(CAS100-66-3)。

在一个优选的实施方案中，所述有机溶剂是乙酸乙酯(CAS141-78-6)。

在一个优选的实施方案中，所述有机溶剂是1,4-二噁烷(CAS123-91-1)。

在一个优选的实施方案中，所述有机溶剂是碳酸二甲酯(CAS 616-38-6)。

在一个优选的实施方案中，所述有机溶剂是二甲亚砜(CAS 67-68-5)。

在一个优选的实施方案中，所述有机溶剂是四氢呋喃聚乙二醇醚(CAS 31692-85-0)。

在一个优选的实施方案中，所述有机溶剂是N,N-二甲基乙酰胺(CAS 127-19-5)。

在一个优选的实施方案中，所述有机溶剂是N,N-二甲基甲酰胺(CAS 68-12-2)。

在一个优选的实施方案中，所述有机溶剂是N-甲基-2-吡咯烷酮(CAS 872-50-4)。

在一个优选的实施方案中，所述有机溶剂是异亚丙基甘油(CAS 100-79-8)。

在一个优选的实施方案中，所述有机溶剂是1-丁醇(CAS 71-36-3)。

在一个优选的实施方案中，所述有机溶剂是2-丁醇(CAS 78-92-2)。

在一个优选的实施方案中，所述有机溶剂是叔丁醇(CAS 75-65-0)。

在一个优选的实施方案中，所述有机溶剂是乙酸。

在一个优选的实施方案中，所述有机溶剂是乳酸乙酯(2-羟基丙酸乙酯)。

在一个优选的实施方案中，所述有机溶剂是乙腈。

令人惊奇地发现，使用丁醇，优选叔丁醇(TBA)，在将来自步骤i)的所述有机相与来自步骤ii)的所述水相混合时，产生了优选的单相纳米分散体系。

因此，在一个更优选的实施方案中，所述有机溶剂是叔丁醇(CAS 75-65-0)。

尽管适用于本发明方法的有机相中脂肽组分的浓度可以更高，也可以更低，但基于有机相的总重量，有机相中一种或多种脂肽的总量优选为3％至30％，例如5％至25％，如10％至20％。

技术人员能够毫不费力地计算出步骤iii)中混合的有机相和水相的各种组分的浓度和量，以使得到的本发明的制剂的各种组分a)至e)之间的比例符合要求。

令人惊奇地发现，步骤iv)的脂肽制剂是单相纳米分散体系，其中囊泡的D90为60nm或更小，优选小于25nm，更优选20nm或更小，如10nm至20nm，例如约15nm，或3nm至10nm，例如约5nm。

换而言之，结合解释，通过混合来自i)的所述有机相和来自ii)的所述水相，没有得到脂质体，而是得到胶束(微粒)D90尺寸为60nm或更小，优选小于25nm的单相纳米分散体系。该纳米分散体可以进行无菌过滤。

在一个优选的实施方案中，有机相与水相之间的比例为2:1(v/v)至1:4.5(v/v)，甚至更优选1.5:1(v/v)至1:4(v/v)，比如1:1(v/v)至1:4(v/v)，例如1:1(v/v)至1:3.5(v/v)，如约1:1(v/v)、约1:2(v/v)或约1:3(v/v)。在此做如下解释，“(v/v)”是指两相的体积比，例如，1:1的比例是指1ml有机相和1ml水相。

在一个优选的实施方案中，当两相之间的比例为1:1时，所得单相纳米分散体系中囊泡的D90为15nm或更小，更优选10nm或更小，例如3nm至10nm。不受解释的束缚，高比例有机溶剂可导致组分在溶剂混合物内主要形成分子溶液。

在另一个优选实施方案中，当两相之间的比例为1:3时，单相纳米分散体系中囊泡的D90为60nm或更小，更优选小于25nm，甚至更优选20nm或更小，例如5nm至20nm。不受解释的束缚，在这种较高比例的水的情形下，形成显示出胶束的典型尺寸和胶束均匀性的胶束溶液。该混合物呈现几乎透明的外观，具有轻微的丁达尔效应，并且可自由地通过具有0.22μm标称孔径的无菌过滤器过滤。

在溶剂混合比为1:5时，所得的制剂是浑浊的。通过DLS测量的尺寸分布揭示了平均尺寸为约1,000μm(1000nm)的宽不均匀分布的囊泡。该分散体只有靠施加高压才可以通过具有0.22μm标称孔径的无菌过滤膜过滤。

在一个优选的实施方案中，有机相之间的比例为1:1至1:4，单相纳米分散体系中囊泡(优选胶束)的尺寸为5nm至60nm。

本发明的方法可以使脂肽高负载地进入囊泡。在冻干后，小部分有机溶剂，优选丁醇，更优选叔丁醇，仍可存留于冻干物中。因此，当根据本发明的方法制备时，本发明的制剂仍可包含少量的有机溶剂，优选丁醇，更优选叔丁醇。

技术人员应理解，步骤i)和步骤ii)的顺序是可交换的。同样，技术人员应理解，PG和磷脂a)可以各自分别溶解在一定量的有机溶剂中，然后可以将两个有机相混合以得到步骤i)的所述有机相，或者可以将两种化合物同时或顺序溶解在同一有机溶剂中以得到步骤i)的所述有机相。

本发明方法的优选脂肽见上文中本发明制剂中所述的脂肽。

通常，步骤i)至iv)可以在室温(25℃)左右和在标准压力(101.325kPa)左右下进行。一般地，步骤i)、ii)、iii)和iv)可以分别在优选0℃至40℃，更优选15℃至35℃，例如18℃至28℃的温度下进行。尽管四个步骤中的任何一个也可以分别在更高和更低的压力下进行，优选地任何一个步骤分别在90kPa至112kPa，更优选95kPa至116kPa的压力下进行，最优选在标准压力左右，例如101.325kPa±2％的压力下进行。

可选地，所述方法包括一个或多个另外的步骤。

优选地，一个另外的步骤是“无菌过滤”步骤：

-所得的包含a)、b)、d)的制剂无菌过滤，所述制剂可选地还包括e)，

可选地还包括d)。

优选地，通过使用膜滤器，例如PVDF膜滤器进行无菌过滤。优选地，膜滤器的标称孔径为200nm或更小。

与步骤i)至iv)相同的优选温度和压力也适用于无菌过滤步骤。

可选地，所述方法还包括将包含脂肽的纳米分散制剂“冻干”的可选步骤：

-冻干由步骤iv)(或在步骤iv)之后的无菌过滤步骤)得到的制剂，所述制剂包括如本文定义的a)、b)、c)、d)和e)，得到包含如本文定义的a)、b)、c)、d)和e)的冻干物。

技术人员熟知冷冻干燥(冻干)技术。通常，本发明制剂的冷冻干燥在+40℃至-40℃，优选在+30℃至-10℃的温度下进行。冷冻干燥步骤可以重复一次或多次。通常，压力为1000hPa至0.001hPa(1hPa＝1mbar)。优选地，冷冻干燥步骤在1hPa至0.01hPa之间的压力下进行，例如约0.1hPa。

可选地，所述方法包括冻干步骤，并且所述方法还包括用水溶液，优选药物水溶液再水化包含a)、b)、d)和可选的c)和可选的e)的冻干物的步骤。

i)将磷脂(a))(组分a))和可选的胆固醇(组分c))溶解在丁醇(优选叔丁醇)中制备得到有机相，所述磷脂(a))优选包含PC和PG；

ii)将糖类组分d)，优选海藻糖，和可选的不是组分d)的张力调节剂(组分e))溶解在水性介质中制备得到水相，所述水性介质优选pH3至9，例如约5.5(例如通过使用乙酸钠缓冲液)；

iii)将所述有机相和所述水相混合均匀；

iv)将脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，更优选布尔韦肽，或者加入步骤i)的有机相中，然后如步骤iii)所述将包含脂肽的所述有机相和所述水相混合，或者加入步骤ii)的水相中，然后如步骤iii)所述将包含脂肽的所述水相和所述有机相混合，或者加入步骤iii)的所述混合相，优选加入步骤iii)的所述混合相中，得到脂肽制剂，其中如此得到的所述脂肽制剂是单相纳米分散体系；

v)将步骤iv)的制剂冻干，得到包含a)、b)、d)和可选的c)和可选的e)的冻干物。

可选地，所述方法包括另外的步骤，例如“无菌过滤”步骤，优选在步骤iv)之前或在步骤v)之前。

另一个优选的实施方案涉及制备本发明的脂质体制剂，优选药物脂质体制剂的方法，包括以下步骤

i)将磷脂(a))(组分a))和可选的胆固醇(组分c))溶解在丁醇，优选叔丁醇中，制备得到有机相，所述磷脂优选包含PC和PG；

ii)将糖类组分e)，优选海藻糖溶解在水性介质中制备得到水相，所述水性介质优选pH3至9，例如约5.5(例如通过使用乙酸钠缓冲液)；

iii)将所述有机相和所述水相混合均匀；

iv)将脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，更优选布尔韦肽，加入所述混合相中，得到本发明的脂肽制剂；或

在步骤iii)将有机相和水相混合之前，将脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，更优选布尔韦肽，加入到所述有机相中；或

在步骤iii)将水相与有机相混合之前，将脂肽，优选布尔韦肽或利拉鲁肽，更优选布尔韦肽，加入到水相中。

v)将步骤iv)的脂肽制剂冻干，得到包含a)、b)、d)和可选的c)和可选的e)的冻干物。

vi)将步骤v)的冻干物用水溶液(优选药物水溶液)再水化，得到脂质体制剂，优选药物脂质体制剂。

另一个优选的实施方案涉及包括冻干物“再水化”步骤的制备本发明的药物脂质体制剂的方法，包括：

将优选根据上述步骤i)至iv)和至少上述可选的“冻干”步骤制备的包含a)、b)、c)、可选的d)、e)和可选的f)的冻干物用药物水溶液再水化。

通常，这一步骤可以在与步骤i)至iv)所述相同的温度和压力下进行。

轻轻地旋动或涡旋得到的脂质体分散体就足够达到均质化的目的。当脂质体制剂应适于注射到需要脂肽制剂的患者中时，无需通过进一步的复杂步骤来减小脂质体的尺寸。

在一个优选实施方案中，分别以所述有机相、混合的有机相和水相、脂肽制剂、冻干物或脂质体制剂中的脂肽和一种或多种磷脂的总量为基准，脂肽和磷脂的比例分别为1:333至1:2，例如1:333至1:49(如果脂肽是，例如，利拉鲁肽)或1:33至1:6.7(如果脂肽是，例如，布尔韦肽)。

水溶液

本发明所用的水溶液，优选药物水溶液，包括药物水性介质，优选水或其中存在例如盐的(优选药物的)水性介质。所述的其中存在盐的水性介质优选是包含生理浓度，优选等渗浓度的至少一种盐的水性介质(优选水)，例如生理盐水、乳酸林格液和/或勃脉力(Plasma Lyte)。因此，所述(优选药物)水性介质，优选具有反映人体生理血浆电解质浓度、渗透压和pH的盐浓度、渗透压和pH。优选地，所述水溶液，优选药物水溶液是水或水与优选等渗浓度的至少一种盐的组合，其中优选地，其中水的量占溶剂总量的至少80％。更优选地，(优选药物)水溶液是水或生理盐水。

在一个实施方案中，药物水溶液由水或水与盐的组合(例如生理盐水、乳酸林格液和/或勃脉力(Plasma Lyte))组成，其中水的量占溶剂总量的至少80％。更优选地，所述(优选药物的)水溶液是水或生理盐水。在一个更优选的实施方案中，药物水溶液由水组成。

进一步优选的实施方案涉及包含本发明所述溶剂和张力调节剂的药物水溶液。用于水溶液的优选的张力调节剂在本发明的制剂中已经加以描述。

进一步优选的实施方案涉及包含本发明所述溶剂和张力调节剂及缓冲液的药物水溶液。用于水溶液的优选的张力调节剂和缓冲体系在本发明的制剂中已经加以描述。

优选地，药物水溶液的pH值应使得到的脂质体制剂的pH为5至8，优选5至7.6；更优选6至7.6(例如，或者是弱酸性到中性，比如pH6.5至7，或者pH为7.2至7.6，比如7.3至7.5)。本领域技术人员知晓，根据本发明的制备方法，冻干物可以已经包含缓冲体系或这种缓冲体系随药物水溶液一起被提供。技术人员可以容易地计算出为制备最终的脂质体制剂所需的药物水溶液的各项指标。

可用于本发明方法的优选的张力调节剂、缓冲液、溶剂、磷脂、磷脂酰甘油、脂肽、胆固醇(及其衍生物)、糖类组分、前述任何物质的比例和量在上文针对本发明的制剂中已经进行了描述。

优选地，为制备符合如本文所述要求的制剂，技术人员选择确定在本发明的方法中使用的各种组分的比例。技术人员可以容易地计算出制备包含如下成分的制剂所需的各物质的量和浓度，

a)磷脂，选自磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG))，或任何前述物质的衍生物或其混合物，基于a)至e)的总重量，所述磷脂的含量在40％至93％范围内；

b)布尔韦肽，基于a)至e)的总重量，含量在3％至13％范围内，或利拉鲁肽，基于a)至e)的总重量，含量在0.3％至2％范围内；

c)胆固醇或其衍生物，基于a)至e)的总重量，含量在0％至14％范围内；

d)甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸或糖类组分，所述糖类组分选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、蔗糖、木糖醇、木糖、右旋糖苷或前述任何物质的混合物，基于a)至e)的总重量，所述填充剂的含量在0％至35％范围内；

e)张力调节剂，基于a)至e)的总重量，含量在0％至35％范围内；

其中a)、b)、c)、d)和e)的总和为100％，并且基于所述制剂和任何优选制剂的总重量，a)至e)的总量为10％至100％。

在一个优选的实施方案中，在本发明的方法中，缓冲液必须或者存在于水相中，或者存在于水溶液中。

在另一个优选的实施方案中，在本发明的方法中，相同或不同的缓冲液，优选相同的缓冲液，存在于水相中并且存在于水溶液中。

在另一个优选的实施方案中，在本发明的方法中，填充剂存在于水相中。

在另一个优选的实施方案中，在本发明的方法中，填充剂和缓冲液存在于水相中。

在另一个优选的实施方案中，在本发明的方法中，张力调节剂存在于水相中。

在另一个优选的实施方案中，在本发明的方法中，张力调节剂和缓冲液存在于水相中。

在另一个优选的实施方案中，在本发明的方法中，张力调节剂、填充剂和缓冲液存在于水相中。

在另一个优选的实施方案中，在本发明的方法中，张力调节剂存在于水溶液中。

在另一个优选的实施方案中，在本发明的方法中，张力调节剂和缓冲液存在于水溶液中。

试剂盒

本发明的另一方面涉及试剂盒，包含本发明的制剂和分开来的药物水溶液。例如，本发明的制剂在一个容器中，而所述药物水溶液在另一个容器中。

在一个优选的实施方案中，本发明所述制剂是冻干制剂。

在另一个优选的实施方案中，本发明所述制剂是冻干制剂，并且容器中的所述制剂的一部分含有浓度在8mg/176.6mg(组分a)至e)的总量)到19.4mg/176.6mg(组分a)至e)的总量)的布尔韦肽(化合物c))，并且布尔韦肽的量占制剂中a)、b)、c)、d)和e)的总量的5％至11％。在一个优选的实施方案中，容器中的本发明制剂的一部分的重量为100mg至250mg。

在一个优选的实施方案中，将所述药物水溶液分配在另一个容器中，计算出的药物水溶液部分的重量要使得在将所述药物水溶液部分加入到本发明的冻干制剂中(或反之亦然)后，a)、b)、c)、d)和e)的总量在得到的本发明的药物脂质体制剂中含量为20％至2％，更优选15％至7％，例如约12％。

药物水溶液和冻干制剂两部分的混合可以在给患者施用前不久制备出药物脂质体制剂。

虽然已经参照本发明的具体实施例描述了所述的发明，但是本领域技术人员应当理解，在不脱离本发明的真实范围的情况下，可以进行各种变形，并且可以进行等同替换。此外，可以采用特定的情况、材料、物质的组成、工艺步骤或多个步骤进行多种改造，以达到本发明的目的。所有这些改造都在所附权利要求的范围内。

附图说明

图1显示了冻干工艺的冻干曲线。

图2显示了不同有机相和水相的比率(v/v)下观察到的囊泡的尺寸分布。

图3显示了在0.9％NaCl溶液中复溶后1.9μm的脂质体的平均尺寸(D90＝3.6μm)。

图4显示了在纯水中复溶后0.2μm的脂质体的平均尺寸(D90＝2μm)。

图5示出了脂质体以外部分(未包封的布尔韦肽)的RP-HPLC色谱图。

图6显示了来自连接有27G×1"套管的一次性3mL注射器的醋酸布尔韦肽脂质体制剂(1.5mL)的力-位移曲线。

本发明的其它方面和优点将在以下实施例中描述，给出这些实施例的目的是为了说明而非限制。

本文引用的每篇出版物、专利、专利申请或其它文献都通过整体引用并入本文。

具体实施方式

物资和材料

使用了下列物资和材料(表1)。

表1：物资和材料

使用了以下设备和装置：

HPLC设备：

识别号#：Sys 1

制造商：安捷伦科技(美国加州圣克拉拉)

型号：1260系列

中试冻干机(GT1)：

制造商：Hof SonderanlaIngenbau(德国洛拉)

搁板面积0.5m²

粒度仪

制造商：马尔文(英国马尔文)

型号：Mastersizer 2000

DLS平板读取器：

制造商：怀雅特(Wyatt)技术公司(美国加州圣芭芭拉)

型号：Dynapro plate readerⅡ

其它的实验设备

·磁力搅拌器(IKA Werke)

·容量移液管(Gilson)

·摄像装置(佳能，EOS 600D，带DGMacro 105mm 1:2.8镜头)

·pH计(Mettler Toledo，Sevenmulti多功能酸度计带InLab Micro微量电极)

·天平(Kern，EW6200-2NM，ABJ-NM ABS3204N

·净化水供给系统(西门子，Ultra Clean UV UF TM)

·涡旋混合机(Scientific Industries Inc.，Vortex Genie II)

·离心机：ThermoScientific,Heraeus Pico 17

·回旋振动器：Wisd Laboratory Instruments,WiseShake SHO-1D

RP-HPLC分析采用了以下方案(见表2)：

表2：RP-HPLC色谱条件

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其它的实验设备

·磁力搅拌器(IKA Werke)

·容量移液管(Gilson)

·摄像装置(佳能，EOS 600D，带DGMacro 105mm 1:2.8镜头)

·pH计(Mettler Toledo，Sevenmulti多功能酸度计带InLab Micro微量电极)

·天平(Kern，EW6200-2NM，ABJ-NM ABS3204N

·净化水供给系统(西门子，Ultra Clean UV UF TM)

·涡旋混合机(Scientific Industries Inc.，Vortex Genie II)

·离心机：ThermoScientific,Heraeus Pico 17

·回旋振动器：Wisd Laboratory Instruments,WiseShake SHO-1D

通过单相纳米分散系统制备脂质体制剂

实施例1：纳米分散体系的制备

通过利用叔丁醇(TBA)制备分散体，包括以下步骤：

称取有机相，所述有机相包含磷脂酰甘油(PG)、S100(高度纯化的大豆卵磷脂)和叔丁醇(TBA)，随后通过加热(70℃)和搅拌约40–80分钟使PG和S100溶解在TBA中。

成分溶解完全后，冷却有机相至环境温度。

水相：用乙酸将10mM乙酸钠缓冲液调节至pH 5.5。加入海藻糖(5％)并搅拌溶解。

在连续搅拌下将水溶液少量多次加入到有机相中。第一份加入的水溶液溶解成澄清的胶束体系。在水相完全加入后，得到低粘度的乳白色单相纳米分散体系。

在温和搅拌下，加入醋酸布尔韦肽，并被装载到胶束体系中。

最后，填充剂溶液通过200nm标称孔径的PVDF膜过滤器无菌过滤。

制剂:
			有机相总量:	50	[g]
水相总量:	50	[g]
			填充剂总量	100	[g]

实施例2：冷冻干燥

将实施例1得到的制剂分装入无菌玻璃小瓶(每个2R小瓶1.5g)。

将填充的小瓶在冻干位置具塞，装入冷冻干燥机中。

执行如下的冻干循环(表3)。

表3：冻干工艺方案

使用了以下设备：

中试冷冻干燥机(GT3)(Hof Sonderanlagenbau(洛拉，德国))，搁板面积0.25m²，冷阱容量5kg。

通过在线数据采集监测冻干过程。冻干曲线(参见图1)显示冻干过程成功完成。

实施例3：脂质体制剂的制备

用1.5ml纯化水或1.5ml 0.9％氯化钠溶液复溶冻干物。冻干物的复溶在10秒内快速自发地完成。经轻旋不超过5分钟或涡旋混合，使所得分散体均质化。

对于上述两种情况，获得外观不同的脂质体分散液。用纯水复溶的冻干物显示更高的透明度和乳光，表明颗粒为亚微米大小，而用纯水复溶的冻干物显示更高的浊度和更像牛奶的外观。更具体地说，用纯水复溶的冻干物显示更高的透明度和乳光，表明颗粒为亚微米大小，而用盐水复溶的冻干物显示更高的浊度和更像牛奶的外观，表明多层脂质体具有更大直径。因此，使用生理盐水复溶冻干物更有优势，尤其对于皮下贮库制剂而言。

两种复溶物都使用MALS粒度仪分析。

实施例4：囊泡/脂质体的尺寸分布

MALS(多角度光散射)：使用带Hydro 2000μP进样仪(装备有液体样品池)的Malvern Mastersizer 2000(MALS)测定脂质体/囊泡的大小。向样品池中加入所述分散物(～18mL，0.9％氯化钠或纯净水)，通过提高循环泵转速除去气泡。该仪器是空白的。加入样品直至信号吸收足够强。开始测量，连续进行三次测量。根据所有数据计算结果。

DLS(动态光散射)：脂质体/囊泡尺寸分布还用Dynapro Plate Reader(怀雅特技术公司)测定。将样品(30μL)装入底部透明的96孔板中，并将该板转移到DLS读板器中，每个样品装三个孔。开始测量。温度设定为25℃。采集时间：5秒，每孔采集五次。计算观测到的颗粒的质量加权平均半径。

4.1单相纳米分散体系中的囊泡(胶束)尺寸

通过动态光散射测定不同比例有机相和水相得到的囊泡的尺寸。

测试的比例是有机相：水相＝1:1、1:3和1:5。

1:1的比例得到没有任何混浊的澄清溶液。可以检测到少量的极小颗粒。平均尺寸为约5nm(3nm至10nm，参见图2)。不受该解释的约束，高比例有机溶剂似乎导致组分在溶剂混合物内主要形成分子溶液。

溶剂混合比为1:3时，观察到的颗粒的数目和尺寸大大增加，平均尺寸约15nm(10nm至20nm，参见图2)。形成了显示出胶束的典型尺寸和均匀性的胶束溶液。混合物呈现几乎透明的外观，具有轻微的丁达尔效应，并且可自由地通过具有0.22μm标称孔径的无菌过滤器过滤。

溶剂混合比为1:5时，所得的制剂是浑浊的。通过DLS测定的尺寸分布显示了囊泡的不均匀宽谱，平均尺寸约1μm，符合多层脂质体的典型特点。只有通过施加高压，该脂质体分散体才可以通过具有0.22μm标称孔径的无菌膜过滤器过滤，但导致囊泡变形。图2显示了不同有机相和水相比例(v/v)下观察到的囊泡的尺寸分布。

4.2脂质体制剂中的脂质体大小(复溶的冻干物)

观察到的尺寸分布如下：

在0.9％NaCl溶液中复溶，脂质体平均尺寸1.9μm(D90＝3.6μm，参见图3)

在纯化水中复溶，脂质体平均尺寸0.2μm(D90＝2μm，参见图4)。

测量值支持分散体的视觉印象：在氯化钠溶液中复溶时形成较大的脂质体(主体分布在1.9μm左右，D90为3.6μm)，而在纯化水中复溶时则观察到较小尺寸的脂质体(主体分布在0.2μm左右，D90为2μm)。如上所述，因为载药量更高，优选那些较大的(多层)脂质体。

实施例5：布尔韦肽的脂质体包封

布尔韦肽及药品的含量和纯度测定。

通过测定游离(未包封)的布尔韦肽的量考察布尔韦肽的脂质体包封情况。

用1.5ml 0.9％(w/w)NaCl溶液或水复溶实施例2的冻干样品。将用于测定布尔韦肽脂质体包封的样品混合并静置20分钟，以使肼化和脂质体形成完全。随后，用0.9％氯化钠溶液1:1稀释复溶样品并充分混合。以21460×g离心样品，使脂质相从溶剂中分离。收集上清液并进行RP-HPLC测定：

采用药品制造商，Chengdu Shengnuo Biopharm Co.Ltd.，提供的RP-HPLC测定方法。用于分析的色谱条件，如表2中所示。

用1.5mL 0.9％(w/w)氯化钠溶液复溶样品。将样品充分混合并放置在实验台上20分钟，以使肼化和脂质体形成完全。随后，用0.9％氯化钠溶液1:1稀释复溶样品并充分混合。以21460×g离心样品，使脂质相从溶剂中分离。收集上清液并测定。

使用DS校准标准品，根据样品制剂的色谱图的布尔韦肽峰面积，报告每毫升中布尔韦肽的量(mg/mL)。图5显示脂质体以外部分(未包封的布尔韦肽)的RP-HPLC色谱图。

在上清液中可以检测到少量的布尔韦肽。通过与校准标准品比较，经计算游离的醋酸布尔韦肽的量为847μg(每瓶)，相当于包封率为94％。同一制剂的第二个小瓶，测定的包封率为96％(584μg/小瓶)。

实施例6：推力

分别用水或0.9％NaCl复溶冻干物后，将脂质体分散液吸入标准一次性3mL PP注射器中，连接27G×1“套管，从注射器中排出多余空气。使用力/位移测量装置(Thümler，Z3)，以确定的横移速度推射出注射器的内容物。

结果如图6所示，该图显示了来自连接有27G×1“套管的一次性3mL注射器的醋酸布尔韦肽脂质体制剂(1.5mL)的力-位移曲线。图1的应变1：速度200mm/min；图5的应变2和3：速度500mm/min。

推力的考察结果显示30-50N的中等力足以推射出脂质体布尔韦肽制剂。

Claims (19)

1.一种制备制剂的方法，包括以下步骤

i)提供有机相，所述有机相包括

一种或多种磷脂，所述磷脂选自磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG)、或任何前述物质的衍生物或任何前述物质的组合；和

可选地，胆固醇或胆固醇衍生物；和

至少一种有机溶剂；

ii)提供包含水性介质的水相；和

可选地，药学上可接受的缓冲液，和

可选地，填充剂，所述填充剂选自甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露糖醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨糖醇、木糖醇、木糖、右旋糖苷或任何前述物质的混合物的糖类组分，和

可选地，药学上可接受的张力调节剂，其不是填充剂，所述填充剂选自甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，糖组分，其选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、蔗糖、木糖醇、木糖、右旋糖苷或任何前述物质的混合物，

其中水相的pH为3至9；

iii)将所述有机相和所述水相混合均匀，得到混合均匀的有机相和水相，其中所述有机相和所述水相的混合比为10:1(v/v)至1:10(v/v)；其中

所述至少一种有机溶剂和所述水相形成单相混合物，优选可冻结且可升华的单相混合物；

iv)将脂肽，或者加入到步骤i)的所述有机相中，然后将所述含脂肽的有机相与所述水相如步骤iii)中所述混合，或者加入到步骤ii)的所述水相中，然后将所述含脂肽的水相和所述有机相如步骤iii)中所述混合，或者加入到步骤iii)的混合相中，得到脂肽制剂，其中所得到的所述脂肽制剂是单相纳米分散体系。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种有机溶剂选自苯甲醚、乙酸乙酯、1,4-二噁烷、碳酸二甲酯、二甲亚砜、四氢呋喃聚乙二醇醚、N,N-二甲基乙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、异亚丙基甘油、醇、乙酸、乳酸乙酯(2-羟基丙酸乙酯)、乙腈或任何前述溶剂的组合，所述醇优选自1-丁醇、2-丁醇和叔丁醇；优选地，所述至少一种有机溶剂选自醇优选叔丁醇、苯甲醚(苯氧基甲)、二甲亚砜、1,4-二噁烷和碳酸二甲酯及其组合。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述任何前述物质的衍生物选自：DLPA、DMPA、DPPA、DSPA、POPA、POPA、DEPA、HSPA、HEPA、DLPC、DMPC、DPPC、DSPC、DOPC、POPC、DEPC、HSPC、HEPC、DLPE、DMPE、DPPE、DSPE、POPE、POPE、DEPE、HSPE、HEPE、DLPG、DMPG、DPPG、DSPG、POPG、POPG、DEPG、HSPG、HEPG、DLPI、DMPI、DPPI、DSPI、POPI、POPI、DEPI、HSPI、HEPI、DLPS、DMPS、DPPS、DSPS、POPS、POPS、DEPS、HSPS、HEPS、任何前述物质的聚乙二醇化物和任何前述物质的盐。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述有机溶剂是叔丁醇。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述脂肽是布尔韦肽或利拉鲁肽。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述磷脂包含PC。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述水相的pH为5至7.5。

8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括所述单相纳米分散体系的无菌过滤。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括冻干由步骤iv)得到的所述制剂(单相纳米分散体系)得到冻干物的步骤v)。

10.根据权利要求9的方法，还包括将步骤v)中得到的冻干物与水溶液混合得到脂质体制剂的再水化步骤。

11.根据权利要求10的方法，其中由再水化步骤(复溶)得到的脂质体制剂的脂质体的D90为1μm至4.5μm。

12.根据权利要求10或11所述的方法，其中所述用于混合/复溶的水溶液是NaCl水溶液，其中NaCl的含量为8g/l至10g/l，优选8.8g/l至9.2g/l，更优选9g/l。

13.根据权利要求1-8或10-12中任一项的方法，其中根据权利要求1-8的脂肽制剂，单相纳米分散系统的胶束的D90为60nm或更小，或其中根据权利要求10-12的脂质体制剂，所述脂肽制剂为药物制剂。

14.根据前述权利要求中任一项的方法制备的药物制剂。

15.一种制剂，其中所述制剂是单相纳米分散体系，包含

a)磷脂，选自磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG)或任何前述物质的衍生物或其混合物，基于a)至e)的总重量，所述磷脂的含量在40％至97％范围内；

b)布尔韦肽，基于a)至e)的总重量，含量在3％至13％范围内，或利拉鲁肽，基于a)至e)的总重量，含量在0.3％至2％范围内；

c)胆固醇或其衍生物，基于a)至e)的总重量，含量在0％至14％范围内；

d)甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，或选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、木糖醇、木糖、右旋糖苷、或其混合物的糖类组分，基于a)至e)的总重量，含量在0％至35％范围内，优选在15％至35％范围内；

e)不是d)的张力调节剂，基于a)至e)的总重量，含量在0％至35％范围内；

其中a)、b)、c)、d)和e)的总和总是为100％，并且a)至e)的总量为基于所述制剂的总重量的10％至100％。

16.根据权利要求15所述的制剂，其中所述制剂是冻干制剂。

17.一种制剂，其中所述制剂是通过混合/复溶权利要求16所述的制剂而获得的药物脂质体制剂，优选地用水溶液，更优选地用盐水或水混合/复溶，所述制剂包含

a)磷脂，选自磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG)或任何前述物质的衍生物或其混合物，基于a)至e)的总重量，所述磷脂的含量在40％至75％范围内；

b)布尔韦肽，基于a)至e)的总重量，含量在3％至13％范围内，或利拉鲁肽，基于a)至e)的总重量，含量在0.3％至2％范围内；

c)胆固醇或其衍生物，基于a)至e)的总重量，所述胆固醇或其衍生物的含量在0％至14％范围内；

d)甘氨酸、精氨酸、脯氨酸或已知适合作为填充剂的任何其它氨基酸，

或选自蔗糖、海藻糖、阿拉伯糖、赤藓糖醇、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖醇、麦芽糖、麦芽三糖、甘露醇、甘露二糖、甘露糖、核糖、山梨醇、木糖醇、木糖、右旋糖苷、或其混合物的糖类组分，基于a)至e)的总重量，含量在15％至35％范围内；

e)不是d)的张力调节剂，基于a)至e)的总重量，含量在0.1％至10％范围内；

其中a)、b)、c)、d)和e)的总和为100％，并且a)至e)的总量为基于所述制剂的总重量的10％至50％，所述制剂还包括溶剂和张力调节剂。

18.一种试剂盒，包含在一个容器中的权利要求15或16所述的制剂和在第二容器中的药物水溶液。

19.根据权利要求1至14中任一项所述的方法、根据权利要求15或16所述的制剂或根据权利要求17所述的制剂，其中所述胆固醇衍生物选自胆固醇硫酸酯、胆固醇硫酸酯的盐、胆固醇琥珀酸单酯、胆固醇琥珀酸酯、胆固醇油酸酯、胆固醇-PEG、粪醇、胆甾烷醇、胆甾烷、胆酸、皮质醇、皮质酮、氢化可的松和钙化醇。