JP2001507015A - 人あるいは動物の消化器官に酸化窒素を放出可能なプロピオン酸バクテリアを含む被吸収性組生物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、人あるいは動物の消化管に生理学的に有意な量の酸化窒素を放出可能な普通の食品組成物、あるいは被吸収性の食用ないし薬用組生物を得るためにプロピオン酸バクテリアを使用することに関係している。

Description

【発明の詳細な説明】 人あるいは動物の消化器官に酸化窒素を放出可能なプロピオン酸バクテリアを含 む被吸収性組生物 本発明は、人あるいは動物の消化器官に生理学的に有意な量の酸化窒素を放出 可能なプロピオン酸バクテリアを含む被吸収性の通常の食品組成物、あるいは被 吸収性の食用ないし薬用組生物に関するものである。 何十年もの間、酸化窒素は生命及び生命の維持に必要な要素の一つであること が全く無視されてきた。その結果、４、５年前まで、薬学、栄養学、あるいは生 理学のいずれの研究者も、この酸化物の存在に伴う利益に注意を払うことはほと んどなかった。 驚くほど多くの生理機能が酸化窒素の属性によるものであることが判ったのは ほんの最近のことであり、次のような仮説が提唱された。すなわち、このガスは 、動脈圧、マクロファージの特殊でない細胞障害作用、血小板凝縮および神経伝 達を制御したり、消化器官の運動性を制御したりさまざまな機能に広く関与する ものである。 この仮説を出発点として、酸化窒素に関する研究が急激に広がり、このガスの 重要性が確認されるようになった。 酸化窒素は非常に不安定（生体半減期は５秒に満たない）で、人および動物中 で、Ｌ−アルギニンからＮＯ−シンセターゼ（ＮＯＳ）として知られている一団 の酵素による生合成によつて作られることが知られている。ＮＯ−シンセターゼ には、主に２つのタイプが有り、その一つは、成分としてのＮＯＳであり、これ は、特に、内皮細胞、血小板および神経細胞中に発現するものであり、他の一つ は、誘導性のＮＯＳであり、これは、免疫系のある種の細胞（特にマクロファー ジおよび多形核球）、あるいは血管平滑筋および内皮細胞によって発現されるも のである。 注目すべきは、誘導性のＮＯＳによるＮＯ（酸化窒素）の生成は、成分として のＮＯＳによるそれよりも、量において数等大きいが、如何なる場合にも、その 生成量は比較的小さい。 前記した酸化窒素の有用な働きを考慮すると、その生成量を、特に、自然の食 物代謝を利用して増加させ得ることが望ましい。 しかしながら、そのような結果を達成する手段は、これ迄のところ、何も提案 されていない。 本発明によれば、驚くことに、特定のタイプのバクテリア即ちプロピオン酸バ クテリアが酸化窒素を生成できること、およびそのようなバクテリアのうちある 種のもの及びその種のもののうちある株（菌種）がそれを大量に生成することを 観測したことにより、所望の目的を達成することが可能となった。 プロピオン酸バクテリアは、通常ミルクベースのデザートやその他の発酵酪農 製品を介して人体に摂取される乳酸菌やビフィドバクテリアのグループには属さ ないが、それにもかかわらず、数世紀の間人間の食物の中に存在していたもので ある。実際、「エーメンタル」として知られるチーズの製造中に穴を空けるのは 、これらのバクテリアである。そのチーズは、熟成後には、約１０⁹細胞／ｇの プロピオン酸バクテリアを含んでいる。 これらのバクテリアの発酵によって、とりわけ、プロピオン酸、酢酸および二 酸化炭素が生成されることは注目すべきである。 前記の発見は全て非常な驚きである。何故なら、農業食品の分野で普通に用い られる乳酸菌、ビフィドバクテリアおよび／またはイースト菌は一酸化炭素を生 成しないことを確認出来ていたからである。 従って、本発明は、人あるいは動物の消化器官に生理学的に有意な量の酸化窒 素を放出可能な被吸収性の通常の食品組成物、あるいは被吸収性の食用ないし薬 用組生物を製造するために、プロピオン酸バクテリアを使用することに関するも のである。 本発明によれば、この組生物は、精巧な調整品からなり、液体の形（特に発酵 液体の形）で、乾燥した形で、あるいは、中程度に水分を含んだ形で提供され得 る。 より具体的には、その組生物は、本発明の範囲から外れることなく： − 唯一生理学的目的、すなわち、有意な量の酸化窒素を放出できるプロピオン 酸バクテリアを摂取するとの目的にかなった特別な調整品の形で、 − あるいは、それと共に、他のより厳格に効果的なあるいは機能的な目的を有 する精巧な食品調整品の形でありうる。後者の場合、プロピオン酸バクテリアは 、食品そのものに、特にチーズに、あるいはセリアルフレークのようなダイエッ ト繊維に、あるいはまた、発酵乳、デザートクリーム、ケーキや強壮ドリンク剤 などに、添加あるいは伴なわせることができる。 本発明によれば、プロピオン酸バクテリアは、微生物団塊（biomass）の形で 、あるいは、本来増殖するパン種の形で導入できる。 その組生物は、乾燥されると、好ましいことに、規則正しく吸収されるに必要 な服用量のバクテリアを含む個々の断片の形となる。 これらの断片は、直接、あるいは、液体にあらかじめ溶かして摂取することが でき、吸収しやすい形で、例えば、タブレット、顆粒の袋、液体等での形で、パ ッケージされる。 このようなプロピオン酸バクテリアの濃縮した乾燥調整品を４℃で１年間保存 したところ、濃度の低下は、１Log単位（one Log unit）以下であることが確 認された。 耐胃生のものでもなくても、ゼラチンカプセルが特に好ましい包装であること が経験的に判った。 本発明の他の特徴によれば、個々の断片の各々は多数のバクテリア、好ましく 、１０⁹個より多いバクテリアを含んでいる。 培養中にＮＯを生成するというプロピオン酸バクテリアのさまざまな株の非常 に特殊な能力が、種々の実験で、すなわち、まず、亜硝酸塩イオンＮＯ₂を測定 することによって間接的に、続いて、嫌気性媒体中での質量分析によって直接的 に、確認された。 これらの実験においては、第１段階で、富アルギニンおよび貧硝酸塩（５０μ Ｍ）媒体中での亜硝酸塩濃度が調査され、観測されたＮＯの生成には、アルギニ ンは決定的ファクターではないことが判った。 第２段階では、硝酸塩を追加した媒体が調査された。その結果から、酸化窒素 の生成は硝酸塩に依存することが明らかになった。 １．比較予備テスト 種々のバクテリア株（ヨーグルト接種物、ビフィドバクテリア、乳酸菌）を、 イースト抽出物（１０ｇ/l）を添加して再構成したミルク媒体（１００ｍｌ）中 に培養し、続いて、３７℃で恒温した。 亜硝酸塩の蓄積量をその間に測定した。 これらの予備テストは、下記の条件で行われた： ・０時間、４時間、７時間、および１０時間、３７℃で恒温。 ・３回の繰り返し。 ・ブランールーベ（Ｂｒａｎ−Ｌｕｅｂｂｅ）システムによる亜硝酸塩の定量分 析 分析する抽出物の特性を考慮して、二重遠心分離（２×１０分、４℃、１５， ０００回転／分）によってサンプルの純度を上げ、ミニプレップ（Ｍｉｎｉｐｒ ｅｐ）１０カートリッジ（ＭＷ＞１０ＫＤのプロテインを保持した）上で限外ろ 過し、続いてサンプルをウォーターズＣ１８樹脂（５５〜１０５μｍ）を通過さ せて部分洗浄した。 この方法を、第一段階で、標準亜硝酸塩サンプルに付いてテストし（図１に示 す）、次に、７時間恒温された乳酸菌培養抽出物、それに既知の量の亜硝酸塩を 添加したもの、またはその他のものに付いて、テストした（図２に示す）。 図１は、ブランールーベ自動分析線で得られた比色定量分析の概要を示し： （１）は、１０時間恒温後のビフィドバクテリア培養媒体のものであり、 （２）は、標準亜硝酸塩溶液のものであり、 （３）は、同じものであるが、限外ろ過した溶液のものであり、 （４）は、同じものであるが、限外ろ過した後Ｃ１８樹脂を通過させ溶液のもの である。 図２は、ブランールーベ自動分析線で得られた比色定量分析の概要を示し： （１）は、３７℃で１０時間恒温後の乳酸菌培養媒体のものであり、 （２）および（３）は、４１０μｇ／ｌの亜硝酸塩を含む標準溶液のものであり 、 （４）および（５）は、３７℃で１０時間恒温された乳酸菌培養抽出物に、既知 の量の亜硝酸塩を添加して８２０μｇ／ｌの亜硝酸塩を含む溶液としたものにつ いてである。 これらのサンプルは、前記した条件下で、遠心分離、限外ろ過、およびＣ１８ 樹脂の通過によって、純度を上げた。これらのテストによれば、ヨーグルト接種 物、ビフィドバクテリア属、乳酸菌のいずれを使用しても、その恒温時間（０、 ４、７および１０時間）には関係なく、亜硝酸塩の蓄積は測定されなかった。 ２．プロピオン酸バクテリア培養物による亜硝酸塩の蓄積の例証 準備したＹＥＬ媒体中の存在するかもしれない硝酸塩あるいは亜硝酸塩を比色 定量分析（ベーリンジャー（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ）キットによってあらかじめ 調査した。これにより、この媒体中に、この媒体の作成に使用するイースト抽出 物から北かもしれない硝酸塩が多少量（濃度５０〜１００μＭ）存在することを 実証することができた。他方、ＹＥＬ媒体が亜硝酸塩を全く含んでいないことが 確認された。 プロピオン酸バクテリア培養物（ＹＥＬ媒体１００ｍｌ当たり１ｇの凍結乾燥 物）がテストされた。 これらのテストは、下記の条件下で行われた： ・３０℃にて、２４，４８，あるいは７２時間恒温、 ・２４時間恒温を３回繰り返し、 ・沸騰によって恒温停止、 ・遠心分離および抽出物のＣ１８樹脂の通過によって生成物の純度を上げる、 ・ブランールーベシステムによる分析によって、媒体中の亜硝酸塩の定量分析。 ＹＥＬ媒体上でのバクテリアの恒温時間を関数とする亜硝酸塩の蓄積の動態論 を打ち立てるために、プロピオン酸バクテリアによって蓄積された亜硝酸塩を定 量分析した。 図３は、一方では(□)、恒温時間（時間）の関数とした硝酸生成量（μｇ／培 養物１００ｍｌ）の変化を表し、他方では(○)、恒温時間（時間）の関数とした 混濁度（λ＝６５０ｎｍにおける吸収）の変化を示している。 この図は、亜硝酸塩の量が、恒温時間２４時間で最大となり、４８時間後およ び７２時間後に顕著に減少することを示している。 この減少は、多分、亜硝酸塩がその還元酵素によりＮＯ、ＮＯ₂あるいは他の 化合物へ還元されることの結果であると考えられる。 本発明によれば、ＮＯ₂の蓄積は使用するプロピオン酸バクテリアの種あるい は株によることを確認できた。 ３．プロピオン酸バクテリアの４つの異なる種の９株に付いて培養媒体中の亜硝 酸塩蓄積の比較例証 このテストでは、調査は、種Ｐ．フロイデンライチイ（ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉ ｃｈｉｉ）の株Ｐ２０、Ｐ２３、２４０８、２４１０、２５００、および２５０ １、更に、種Ｐ．トエニイ（ｔｈｏｅｎｉｉ）、Ｐ．アシディプロピオニチ（ａ ｃｉｄｉｐｒｏｐｉｏｎｉｃｉ）、およびＰ．ジエンセニイ（ｊｅｎｓｅｎｉｉ ）のそれぞれの株ＴＬ２２１、ＴＬ２２３およびＴＬ２０７について行われた。 ここで、ＴＬ（ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ Ｉａｉｔｉｅｒｅ(酪農技術)）株は ＩＮＲＡ−ＬＲＴＬに属し、他方、Ｐ２３株（即ちＩＴＧ２３）は、Ｉｎｓｔｉ ｔｕｔｅ Ｐａｓｔｅｕｒ（パスツール協会）のＮａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅ ｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏ−ｏａｒｇａｎｉｓｍ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＣＮ ＣＭ）(国立微生物培養コレクション)に、Ｎｏ．Ｉ−１８０４で１９９６年１２ 月１８日付けにて登録されている。 種々のプロピオン酸バクテリア株（１ｇの凍結乾燥物あるいは５ｍｌの新鮮な 培養物）が、約５０μＭの亜硝酸塩を含む１００ｍｌのＹＥＬ媒体上で、下記の 条件で、培養された： ・３０℃にて、１２、２４、３６あるいは４８時間恒温、 ・３回繰り返し、 ・沸騰により恒温停止、 ・遠心分離および抽出物のＣ１８樹脂の通過によって生成物の純度を上げる ・ブランールーベシステムによる分析によって、媒体中の亜硝酸塩の蓄積量の測 定、 ・６５０ｎｍの吸収を読んで測定される各培養物の発酵の推定。 各株に対して得られた結果を、図４に対照して示した。 この図は、各々に付いて、恒温時間を関数とした、亜硝酸塩の蓄積量（□）お よび培養媒体物の混濁度（○）の変化を示している。これらの値は、ｎ＝３に対 する平均値±平均の標準誤差に対応している。 ここで、亜硝酸塩蓄積量のスケールは、株Ｐ２３およびＴＬ２２３の場合、２ ５倍になっていることに注意すべきである。 これらの結果から、培養物の混濁度の変化から推定すると、バクテリアの成長 は調査される株の全てに付いて同様であり、４８時間恒温後において、約２〜２ ．５ＯＤに達することが判る。ただし、ＴＬ２２１株だけは、混濁度は２日後に わずかに０．６ＯＤに達するだけである。 他方、恒温時間を関数とする亜硝酸塩の蓄積量に付いては、非常に大きな差が 存在する。 特に、株２５００、２４０８、Ｐ２０、２５０１、２４１０、ＴＬ２０７およ びＴＬ２２１は、比較的少量の亜硝酸塩を蓄積する。それらの最大値（ＮＯ₂ ^-／ ｍｌが０．１μｇ）は、それぞれ、恒温時間３６時間、１２時間、３６時間、１ ２時間、１２時間、２４時間および２４時間後に到達する。 対照的に、株Ｐ２３およびＴＬ２２３では、非常に大きな亜硝酸塩の蓄積が得 られ、それぞれ３６時間後および１２時間後に、ＮＯ₂ ^-／ｍｌが１．８μｇの最 大蓄積量に達する。 前記の第２のテストで分析された（図３）プロピオン酸バクテリア株は、０． ５μｇ／ｍｌのＮＯ₂ ^-最大蓄積量を持つ中間位置に有ることに注目すべきである 。 これらのテストから、４つの異なる種の中の異なるプロピオン酸バクテリア株 によって生成される亜硝酸塩の量には、有意な差が有り、それらの差は株の成長 とは無関係であるということができる。 これらの結果は、培養媒体中の亜硝酸塩濃度の変化を、各株に付いて、その混 濁度の関数として、したがってバクテリア成長の関数として調査することによっ て確認することが出来た。 最後のテストの結果を図５に示す。そこでは、各値は、ｎ＝３に対する平均値 ±平均の標準誤差に対応している。 前記のテストは、調査した株の中で、ＴＬ２２３株が亜硝酸塩を最も多く蓄積 し、その亜硝酸塩は１２時間後に消滅することを確証するために計画された。こ の株は、したがって、嫌気性媒体中での質量分析による酸化窒素の生成の直接測 定に関する補充的テストにおいて選択された。 ４．ヘリウム雰囲気のもとでＴＬ２２３株によるＮＯの生成の予備測定 このテストにしたがって、５０μＭの硝酸塩とＴＬ２２３株の０．２５ｍｌの 新鮮な培養物を含んだＹＥＬ媒体を入れた１０ｍｌチューブの中に培養物を準備 した。 チューブの大気は、ヘリウムの流れ（１００ｍｌ／分）によって、１００秒で 即座に排除された。 チューブ中の雰囲気内のＮＯの蓄積を、下記の条件で、その間に測定した： ・３０℃において、２４時間、４８時間あるいは７２時間恒温、 ・４回繰り返し、 ・質量分析によるＮＯの蓄積量の測定、 ・６５０ｎｍの吸収を読んで測定される各培養物の発酵の推定。 この予備テストの間、ガス純化装置（Ｒｏｂｏｐｒｅｐ Ｇ＋）−質量分析計 （Ｔｗｅｎｔｙ−Ｔｗｅｎｔｙ）は、酸化窒素の量の増加と伴に目盛校正された 。 このガスは、ＫＩおよびＨ₂ＳＯ₄の溶液の存在下でＮａＮＯ₂から発生される 。 酸化窒素の同定と定量は、その質量、即ち、¹⁴Ｎ¹⁶○では３０、¹⁵Ｎ¹⁶Ｏおよ び¹⁴Ｎ¹⁷Ｏでは３１、に基づいて行われる。続いて、この同定は、アイソトープ 比：３１／３０＝［¹⁵Ｎ¹⁶Ｏ＋¹⁴Ｎ¹⁷Ｏ］／¹⁴Ｎ¹⁶Ｏを測定することによって確 認された。ここで、ＮＯの理論的アイソトープ比３１／３０は、¹⁷Ｏによる汚染 がなければ、０．００３６７である。 この予備テストの結果を図６に示す。そこでは、左半分Ａは、酸化窒素の量を 定めるために用いた質量分析計の目盛校正曲線に対応し、右半分Ｂは、アイソト ープ比３１／３０の測定に対応する。 このテストの実際の結果を図７に示す。 詳細には、図７Ａは、媒体の混濁度を関数としたチューブの雰囲気中のＮＯの 蓄積量の変化を示す。図７Ｂは、恒温時間を関数とした蓄積量の変化を表す。 垂直バーおよび水平バーがそれぞれのプロットマークより大きな幅のときは、 ｎ＝４に対する平均の標準誤差を表している。 図７Ｂ（それは、ヘリウム下における培養媒体のその間における混濁度の変化 をあらわしている）と図４（それは、空気中での同じ変化を表している）とを比 較すると、ＴＬ２２３株の成長は基本的にヘリウムから成る雰囲気によってほと んど影響されないことが判る。 また、雰囲気中への酸化窒素の蓄積速度は、恒温の最初の４５時間に亘って一 定であり、その後、混濁度が１．５ＯＤに接近する（図７Ａ）ことに対応して湾 曲する（図７Ｂ）。 ６５時間の恒温後（混濁度１．７ＯＤ以上）、ヘリウム雰囲気中に、培養媒体 １ｍｌ当たり約１．５μｇのＮＯが蓄積されている。 得られた大きさの程度は、空気に接触した培養媒体で測定された亜硝酸塩含有 量に匹敵する。 後者の場合、実際、ＴＬ２２３株は混濁度１．５ＯＤで、最大１．８μｇのＮ Ｏ₂ ^-／ｍｌを蓄積したことが明らかである（図５）。これは、約１．２μｇのＮ Ｏ／ｍｌに対応する。 ＴＬ２２３株によるＮＯの生成についてのこの予備直接測定から、本発明にし たがって、この酸化窒素の合成ルートを確認する企てがなされ、この目的のため に、この合成が亜硝酸塩あるいは硝酸塩の供給によって活発化されるか否かとい う考えが提案された。 以下に概括的に述べるテストによって、そのような活発化を確認することがで きた。 ５．亜硝酸塩あるいは硝酸塩の供給によるＮＯの生成の活発化の研究 プロピオン酸バクテリアによるＮＯの生成がＮＯ₂ ^-あるいはＮＯ₃ ^-から可能で あるか否かを調査するために、ＴＬ２２３株が１ｍＭのＫＮＯ₂あるいはＫＮＯ₃ （¹⁵Ｎで表される同位体を持つか持たないかに関わらず）の存在下にあるときＮ Ｏの生成の増加が観測されるか否かを明らかにする調査が行われた。 この実験は、次の条件で行われた： ・ＴＬ２２３株を、ＹＥＬ媒体中だけ（制御）に、また、¹⁵Ｎで表される同位体 を持つ１ｍＭのＫＮＯ₂あるいはＫＮＯ₃を添加（濃度５０％）したものに、１％ の濃度で接種した、 ・３０℃において、２４時間、４８時間または７２時間恒温、 ・ポイント当たりまた処理当たり３回繰り返し、 ・ＮＯの蓄積と、質量分析によるアイソトープ比の決定、 ・６５０ｎｍにおける吸収を読むことによって測定される各培養体の発酵（混濁 度）の推定、 ・バクテリア媒体の回収、遠心分離、ベーリンジャーキットによる測定後の硝酸 塩および亜硝酸塩の定量分析。 ＮＯ₃ ^-濃度（１００、１５０、３５０、６５０および１０５０μＭ）あるいは ＮＯ₂ ^-濃度（５０、１００、４００、８００、および１０００μＭ）の関数とし て、３０℃において（ＴＬ２２３株はＹＥＬ媒体中に１％の濃度で接種された） ７２時間の恒温後、ＮＯの蓄積量が、分析された。 分析するサンプルは、ＮＯ分析チューブにそれぞれ分配され、厳密な嫌気性条 件を得るために、１５０秒間ヘリウムを噴射供給することによって、その大気は 、即座に、排除された。 質量分析計によるＮＯの可能な検出に対するこのヘリウムの噴射の影響を、無 菌のＹＥＬ媒体でテストした。このＹＥＬ媒体は、あらかじめヘリウムの噴射を うけ、３０℃において７２時間恒温された。０時間、２４時間、４８時間および ７２時間（３回の繰り返し）の恒温後、ＮＯの生成は検出されず、混濁度は０の ままであった。 このようにして、ヘリウム噴出の品質、いかなるバクテリアによる汚染もない こと、ヘリウム噴出と質量分析によるＮＯの測定との間に相互作用のないことを チエックすることができた。 前記のテストから、亜硝酸塩あるいは硝酸塩の存在におけるＮＯの蓄積の動態 についての結果を、図８に示す。 より詳細には： − 図８Ａは、時間の関数としてＮＯの蓄積の変化を示している、 − 図８Ｂは、時間の関数として混濁度の変化を表している。 − 図８Ｃは、時間を関数としてのアイソトープ比（質量３１）／（質量３０＋ 質量３１）の変化を示している。 − 図８Ｄは、混濁度を関数としたＮＯ生成量の変化を表している。 これらの図の各々は、ＹＥＬ単独、１ｍｌの硝酸塩（５０％の割合の¹⁵ＮＯ₃ −と¹⁴ＮＯ₃ ^-）を含んだもの、１ｍＭの亜硝酸塩を含んだもので培養したＴＬ２ ２３株に付いて示している。 垂直のバーは、それらがプロットマークより大きいときは、ｎ＝３に対する平 均の±標準誤差を表している。 この図から、１ｍＭのＫＮＯ₃（窒素１５と付記されたものあるいは付記のな いもの）で、あるいは１ｍＭのＫＮＯ₂で培養されたＴＬ２２３によるＮＯの蓄 積量は、３０℃において４８時間恒温後、１μｇ／ｍｌのＮＯに接近することが わかる。この値は、硝酸塩および亜硝酸塩の添加のないＹＥＬ媒体の場合の３． ５倍である(図８Ａ参照)。これらの差は媒体の組成によって生ずる成長変動によ るものではない。何故なら、成長終了時の混濁度は、ＹＥＬ単独の場合（７２時 間後で４．５ＯＤ単位である）と、同じ媒体に硝酸塩あるいは亜硝酸塩を添加し た場合（７２時間後で５ＯＤ単位である−図８Ｂおよび８Ｄ参照）とで同じオー ダーの大きさである。 図８Ｃから、Ｋ¹⁵ＮＯ₃を５０％の割合で添加すると約４８時間の恒温後に、 ４０％の割合でその同位体を含むＮＯを得ることができることが判った。このよ うに、硝酸塩の形で添加した質量１５の窒素がＴＬ２２３株によって合成された ＮＯ中に発見された。 また、ＴＬ２２３株がＫ¹⁵ＮＯ₃で培養されるとき、質量３１（¹⁵Ｎ¹⁶Ｏ）の ピークの概要は付記のない硝酸塩を含むＹＥＬ媒体に付いて分析されたＮＯと比 較して大幅に増加することが観測された。 さらに、付記のないＫＮＯ₃あるいは、ＫＮＯ₂を１ｍＭ添加することによって 、ＮＯがアイソトープ比０．７５％（４８時間の恒温後−図８Ｃ参照）を持って 生成される。この値は、天然のＮＯのアイソトープ比（約０．４％）についての 値に非常に近似している。 この最後の観測から、質量分析されたガスは正にＮＯで有ったことが明らかで ある。 このように、これらのテストから、ＴＬ２２３株は、亜硝酸塩から直接、ある いは硝酸塩の存在下でこの硝酸塩が亜硝酸塩に還元された後、ＮＯを合成するこ とが可能であるということができる。 １ｍＭのＫ¹⁵ＮＯ₃を５０％の割合で添加したＹＥＬ媒体で得られたアイソト ープ比を根拠として、硝酸塩が亜硝酸塩へ添加する程度を推定することは可能で ある。即ち、添加されたＫ¹⁵ＮＯ₃の２０％がＴＬ２２３株で酸化窒素に転換さ れる。 無菌のＹＥＬ媒体に元々有る硝酸塩が、ＴＬ２２３による観測されたＮＯの生 成（７２時間の恒温後におけるＮＯは２μｇ／ｍｌである。−図７参照）を説明 する。 硝酸塩あるいは亜硝酸塩の関数としてＮＯの生成量の変化を図９に示す。詳細 には： − 図９Ａは、ＴＬ２２３株をＹＥＬ媒体上で培養し７２時間後におけるＮＯ生 成量と混濁度の変化を、初期の硝酸塩濃度を関数として示している。 − 図９Ｂは、ＴＬ２２３株をＹＥＬ媒体上で培養し７２時間後におけるＮＯ生 成量と混濁度の変化を、初期の亜硝酸塩濃度を関数として示している。 − 図９Ｃは、初期の硝酸塩濃度を関数として、硝酸塩がＮＯに転換する程度の 変化を示している。 − 図９Ｄは、初期の亜硝酸塩濃度を関数として、硝酸塩がＮＯに転換する割合 の変化を示している。 これらの図において、ＹＥＬ媒体単独のなかに約５０μＭの硝酸塩が存在する ことを考慮して、硝酸塩濃度は、修正され、１００、１５０、３５０、５５０、 ６５０、および１０５０μＭとされる。 亜硝酸塩濃度は、５０、１００、４００、８００、および１０００μＭとされ る。 これらの図から、選択されたレンジにおいて、ＴＬ２２３株による酸化窒素の 生成は、ＹＥＬ媒体における硝酸塩（図９Ａ）または亜硝酸塩（図９Ｂ）の初期 濃度に比例することが明らかである。この関係は直線的である。 両方の場合、高原状態は観測されなかった。このことから、使用された硝酸塩 および亜硝酸塩濃度では、プロピオン酸バクテリアＴＬ２２３株によるＮＯの最 大蓄積レベルを達成できないことが仮定される。 ここで注意すべきは、硝酸塩および亜硝酸塩の存在は、テストされた全ての濃 度において７２時間後の混濁度が酷似していることからして、バクテリアの成長 には影響を与えない。 さらに、図９Ａおよび９Ｂの曲線は重ね合わせることができることを指摘して おく。このことは、生成されるＮＯが、亜硝酸塩から直接あるいは、硝酸塩から 亜硝酸塩への還元を通して、得られることを意味している。 さらに、これらの結果から、ＴＬ２２３株の使用について、硝酸塩の亜硝酸塩 への還元工程が、この実験で選択された硝酸塩濃度に限定されるものではないこ とが判る。 また、ＮＯ₃ ^-の転換の程度（図９Ｃ）およびＮＯ₂ ^-の転換の程度（図９Ｄ）は 、有効な基質の量の関数として変化する。即ち、ＮＯ₃ ^-あるいはＮＯ₂ ^-濃度が１ ０００から１００μＭに変化するとき、２０から６０％に変化することを指摘す ることも重要である。 このことは、ＮＯの生成量は大きく規制されること、また、窒素合成のための ５価の窒素（ｎｉｔｒｉｃ ｎｉｔｒｏｇｅｎ）の使用に大いに関わっているこ とを示唆している。 前記の結論から、ＮＯの生成量を、２つの異なる種のプロピオン酸バクテリア の１２の株について調査した。これらのテストの結果を下に示す。 ６．プロピオン酸バクテリアの異なる株によるＮＯの生成ｎついての研究 このテストのために選択されたプロピオン酸バクテリアの株は次の通りである 。 Ｐ．フロイデンライチイ：ＬＳ４１０、ＬＳ２５０１、ＬＳ２５０２、 ＩＴＧ２３、ＣＮＲＺ８９、ＣＮＲＺ２７７、ＣＮＲＺ８１ Ｐ．アシディプロピオニチ：ＴＬ２２３、ＮＣＤＯ１０７２、ＰＲ７５、 ＣＮＲＺ８０、ＣＮＲＺ８６、ＣＮＲＺ２８７ ＣＮＲＺ８０、ＣＮＲＺ８１、ＣＮＲＺ８６、ＣＮＲＺ８９、ＣＮＲＺ２７７ 、 ＣＮＲＺ２８７は、ＩＮＲＡ−ＣＮＲＺパブリックコレクションに属しており、 ＮＣＤＯ１０７２は英国コレクション「国立酪農微生物コレクション(Ｎａｔｉ ｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｄａｉｒｙ Ｏｒｇａｎｉｓｍｓ)」 に属し、他のものは私的コレクションに属する。 ５５０μＭの硝酸塩の存在するＹＥＬ媒体への接種後、バクテリア培養物は、 即座に、閉じたチューブ中に５ｍｌ単位で分配され、ヘリウムを噴出供給された (嫌気性条件)。次に、このプロピオン酸バクテリア株は、下記の実験条件で処理 された： ・３０℃において、２４時間、４８時間または７２時間恒温、 ・３回繰り返し、 ・雰囲気中のＮＯの蓄積と、質量分析によるアイソトープ比の決定、 ・６５０ｎｍにおける吸収を読むことによって測定される各培養体の発酵（混濁 度）の推定、 ・バクテリアの媒体を回収し、遠心分離、およびベーリンジャーキットによる測 定後硝酸塩と亜硝酸塩との質量分析。 図１０は、５５０μＭの硝酸塩を含むＹＥＬ媒体中で培養したＴＬ２２３およ び他の１２のプロピオン酸バクテリア株によるＮＯの生成量の時間を関数とした 変化を示している。このＴＬ２２３株は、比較のためにいずれの場合にも表した 。 垂直バーは、プロットマークより大きいときは、ｎ＝３の場合の平均の±標準 誤差を表している。 この図は、プロピオン酸バクテリアの異なる株の間に大きな発散が有ることを 示している。 全体的には、７２時間の恒温後におけるＮＯの生成量のレベルを比較すること によって、これらの株は、次の３つのカテゴリーに分類できる： ・４〜４．５μｇＮＯ／ｍｌを生成可能な株：ＴＬ２２３、ＣＮＲＺ８０、ＮＣ ＤＯ１０７２、ＰＲ７５。これらの株によって生成されるＮＯのアイソトープ比 は２〜２．５％（Ｔ＝７２時間）である。 ・約２μｇＮＯ／ｍｌを生成可能な株：ＣＮＲＺ８１、ＣＮＲＺ８６、ＣＮＲＺ ８９、ＣＮＲＺ２７７、ＬＳ２５０２、ＩＴＧ２３。これらの株によって生成さ れるＮＯのアイソトープ比は４〜５．５％（Ｔ＝７２時間）である。 ・１μｇ未満ＮＯ／ｍｌを生成可能な株：ＬＳ４１０、ＬＳ２５０１、ＣＮＲＺ ２８７。培養媒体中に５５０μＭの硝酸塩が存在するが、これら３種の株は非 常に少量のＮＯを生成したにすぎない。そのアイソトープ比は約１０〜１３％（ Ｔ＝７２時間)であった。これらの値は、これらのバクテリア中に検出される質 量３０および３１のピークは酸化窒素に対応しないことを示唆している。 ここで注意すべきは、最初の２つのカテゴリーに属する株では、生成されるＮ Ｏは成長の終了によって減少しないこと、従ってプロピオン酸バクテリアによっ て再使用されないことである。かくして、ＮＯが蓄積される。 図１１は、５５０μＭの硝酸塩を含むＹＥＬ媒体中で培養し前記１３種のプロ ピオン酸バクテリア株によるＮＯの生成量の混濁度を関数とした変化を示してい る。ＴＬ２２３株を、比較のためにいずれの場合にも表した。 垂直バーは、プロットマークより大きいときは、ｎ＝３の場合の平均の±標準 誤差を表している。 図１２は、５５０μＭの硝酸塩を含むＹＥＬ媒体中で培養し分析された前記１ ３種のプロピオン酸バクテリア株による時間を関数とした混濁度（６５０ｎｍに けるＯＤ）の変化を示している。 ＴＬ２２３株を、比較のためにいずれの場合にも表した。 垂直バーは、プロットマークより大きいときは、ｎ＝３の場合の平均の±標準 誤差を表している。 最大のＮＯを生成する株（ＴＬ２２３、ＣＮＲＺ８０、ＮＣＤＯ１０７２、お よびＰＲ７５）は全て高い混濁度（７２時間恒温後４〜５ＯＤ単位）に達する。 これらの株の中で、注意すべきことは、バクテリアＮＣＤＯ１０７２およびＰ Ｒ７５は、ＴＬ２２３に比してそれほど急速には成長しないが、大量のＮＯを急 速に蓄積できることである。 すなわち、ＰＲ７５は、混濁度０．５ＯＤ単位においてＮＯ２．８ｇ／ｍｌを 生成する。ＮＣＤＯ１０７２およびＰＲ７５において最大のＮＯ生成量は１．５ ＯＤの混濁度において記録され、これは、ＴＬ２２３における３．４ＯＤと対比 される。 これらの結果を整理するために、調査された１３種類のプロピオン酸バクテリ ア株に付いて、恒温時間を関数とした培養体のＮＯの変化、硝酸塩および亜硝酸 塩濃度の変化を分析した。 それにより得られた結果を下記の表中に対照して示した。そこでは、濃度は、 μＭで表してある。各株に付いて、測定は、バクテリアを遠心力で除去後チュー ブ上で行なった。 この表から以下の観察が可能である： −４μｇのＮＯ／ｍｌを生成する株は、２４時間恒温後、使用可能な硝酸塩(即 ち５５０μＭ)を完全に還元できる。さらに、恒温の最初の４８時間の間に得ら れた亜硝酸塩を全て還元することができる。 − ＬＳ４１０およびＣＮＲＺ２８７の株は、非常に低レベルのＮＯを生成する が、媒体中に有る硝酸塩を十分に吸収することができない。 − ＮＯの中程度の蓄積を呈する株に付いては、硝酸塩および亜硝酸塩の濃度に ついての非常に異なる変化が、ＮＯ₃ ^-の吸収速度の大きな差および／またはＮＯ₃ ^- およびＮＯ₂ ^-の還元速度の大きな差を反映して、観測され得る。すなわち、Ｃ ＮＲＺ８１株は、２４時間恒温後に硝酸塩の全てを還元することができる。また 、４８時間後には、ＮＯ₃ ^-の還元によって得られたＮＯ₂ ^-の全てを還元する。対 照的に、ＣＮＲＺ２７７は、７２時間の恒温後にも、なお、２４６μＭのＮＯ₃ ^- および８５μＭのＮＯ₂ ^-を含んでいる。 前記したテストから、ある種のプロピオン酸バクテリア株は、培養媒体中の硝 酸塩を還元し、ＮＯを合成するに必要な亜硝酸塩を生成することが明らかになっ た。 ここで注意すべきは、最も多くのＮＯを生成するプロピオン酸バクテリア株（ ＴＬ２２３、ＣＮＲＺ８０、ＮＣＤ０１０２７、ＰＲ７５）は、全て、Ｐ．アシ ジプロピオニチに属し、更に、全て硝酸塩還元酵素能を有している。 対照的に、ＮＯをほとんどあるいは全く何も（質量分析計の検出限界）生じな い菌株は、公知の硝酸塩還元酵素能を持たないバクテリア（ＬＳ４１０、ＬＳ２ ５０１、ＣＮＲＺ２８７）である。 あるプロピオン酸バクテリア株については、ＮＯ生成動態論は硝酸塩還元酵素 能に直接関連しないように見える。 これらの結果から、本発明は、また、被吸収性の食用あるいは薬用組生物に関 し、５５０μＭの硝酸塩を含むＹＥＬ媒体に対して少なくとも１μｇ／ｍｌの割 合で酸化窒素を放出および／または蓄積する能力の関数として選択された大量の 、好ましくは１０⁹セル／ｇより多いプロピオン酸バクテリア株を含む調整品か らなることを特徴とするものである。 本発明の他の特徴によれば、この組生物は、Ｐ．アシジプロピオニチ種のＴＬ ２２３、ＣＮＲＺ８０、ＣＮＲＺ８６、およびＮＣＤＯ１０７２の少なくとも１ つに属するプロピオン酸バクテリア株を含んでいる。 これらの株の中で、ＴＬ２２３が特に有利であることが証明された。 ここで注意すべきは、ＣＮＲＺ８０は、高濃度のＮＯを蓄積でき、しかもそれ を迅速に（比較的低い混濁度において）行うことができることから、生産性の観 点から非常に特殊な価値が有るものである。 更に本発明の他の特徴によれば、この組生物は、Ｐ．フロイデンライチイ種の ＩＴＧ２３、ＣＮＲＺ８１、ＣＮＲＺ８９、ＣＮＲＺ２７７およびＬＳ２５０２ の少なくとも１つに属するプロピオン酸バクテリア株を含んでいる。 更に、本発明の他の特徴によれば、その組生物は、ビフィドバクテリアおよび ／または乳酸菌のような他のバクテリアを含有することができる。 前記の結果を完成させるために、２種類の非プロピオン酸バクテリア：亜硝酸 塩を還元する能力を持つとして知られているＥ．コリ（ｃｏｌｉ）およびラクト バシラスファーシミニス（Ｌａｃｔｂａｓｉｌｌｕｓ ｆａｒｃｉｍｉｎｉｓ） について、実験を行った。 ７．Ｅ．コリ株およびラクトバシラスファーシミニス（Ｌ．ファーシミニス）株 によるＮＯ生成の研究 これらのテストは、主に、「インターナショナル・ジャーナル・オブ・フッド ・マイクロバイオロジー」１０、(１９９０)、３２３〜３３０頁における、グッ ドラン・ウォルフ(Ｇｕｄｒｕｎ Ｗｏｌｆ)、エルケ・ケー・アレント(Ｅｌｋ ｅ Ｋ．Ａｒｅｎｄｔ)、ウテ・フェーラー(Ｕｔｅ Ｐｆａｈｌｅｒ)、および ウォルター・ピー・ハメス（Ｗａｌｔｅｒ Ｐ．Ｈａｍｍｅｓ）による論文「乳 酸菌によるヘム依存性およびヘム独立性亜硝酸塩還元が異なるＮ含有製品に結果 する」の存在に基づいて行われた。その論文には、ある種の乳酸菌（Ｌ．ファー シミニス）は亜硝酸塩から酸化窒素を生成できることが開示されている。 予備実験によれば、１ｍＭの硝酸塩を添加されたＭＲＳ中で５時間３０分Ｌ． ファーシミニス株を成長させた後では、硝酸塩および亜硝酸塩は、最早、培養体 中には検出されなかった。 Ｅ．コリ株ついて１ｍｌ硝酸塩を添加されたＢＨＩ媒体で７時間３０分成長後 、同じ観測をした。 その成長の間、Ｌ．ファーシミニス株は、ＭＲＳ媒体を酸性化する（５〜６時 間培養後約ｐＨ５）ことが知られている。 ＹＥＬ媒体で行われたテストから、亜硝酸塩が酸性媒体中でＮＯに転換される ことを観測することができた。 これらのテストは、下記の実験条件の下で行われた： − ＹＥＬ媒体をＨＣｌで酸性化、 − ４００μＭの濃度で亜硝酸塩を添加した、 − 媒体を圧力釜に入れる、 − ３回の繰り返し。 得られた結果を図１３に対照して示す。同図は、亜硝酸塩を添加したＹＥＬ媒 体中での、３７℃にて２４時間恒温後における、ＮＯの生成量のｐＨによる変化 を示している。 この図から、媒体が酸性であるときその媒体中であ硝酸塩からＮＯを生成でき ること、その生成量はｐＨの減少と共に増加することが明らかである。 この結果、ＮＯを生成しないとされていた（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ. ，２０９，７９３〜８０２頁のＢｒｉｔｔａｉｎ Ｔ，Ｂｌａｃｋｍｏｒｅ Ｒ ，Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ Ｃ ＆ Ｔｈｏｍｓｐｎ ＡＪ による論文「微生物の 亜硝酸塩還元酵素」参照）Ｌ．ファーシミニス株およびＥ．コリ株によるＮＯ生 成の比較テストを行なった。 これらのテストは、次の条件の下に行われた： − ＢＨＩ媒体（Ｅ．コリ）あるいはＭＲＳ媒体（Ｌ．ファーシミニス）上で３ ７℃にて恒温、 − この媒体に硝酸塩を濃度１ｍＭで添加、 − 各チューブの雰囲気にヘリウムを１００秒間噴出、 − ３回繰り返し、 − 恒温終了時に混濁度を測定。 これらのテストにより図１４に示される結果を得た。 詳細には： − 図１４Ａは恒温時間を関数としたＮＯ生成量の変化を示す。 − 図１４Ｂは媒体の混濁度を関数としたＮＯ生成量の変化を示す。 得られたＮＯ生成量の値は、有意と認められる閾値１μｇ／ｍｌよりはるかに 低い値であることに注目すべきである。この結果から、培養チューブ内にＮＯの 蓄積がないことが判る。 これらの結果から、予備実験において、それぞれ、５時間３０分後（Ｌ．ファ ーシミニス）および７時間３０分後（Ｅ．コリ）に硝酸塩および亜硝酸塩が観測 されなかったことを、化学的にも（媒体の酸性化に伴う）また微生物学的にも、 ＮＯの蓄積によって補うことができないことを示している。 Ｌ．ファーシミニス株の場合、これらの結果を、乳酸塩を含有するバッファー 燐酸塩で調整したｐＨ＝６．５における休止セルの形のバクテリアについて行っ たテストによって確認した。このテストは、下記の条件によって行われた： − ３７℃にて恒温、 − 硝酸塩を濃度４００μＭで添加、 − 各チューブの雰囲気にヘリウムを１００秒間噴出、 − ３回繰り返し、 − 恒温終了時に混濁度を測定。 この分析の結果を図１５に示す。そこでは： − 図１５Ａは、恒温時間を関数としたＮＯ生成量の変化を示す。 − 図１５Ｂは、媒体の混濁度を関数としたＮＯ生成量の変化を示す。 これらの結果から前記のことが確認された。すなわち、得られたＮＯ生成量の 値はあまりに小さく、有意とは認められず、しかも、Ｌ．ファーシミニス株は酸 化窒素を蓄積することができない。しかしながら、多分、この菌株は、成長の開 始時において酸化窒素を生成することができるが、その酸化窒素の幾分かはこの バクテリアによって再利用される。 それぞれ３０℃および３７℃にて恒温後休止セルの形のＴＬ２２３株およびＣ ＮＲＺ８０株について、補助テストを行った。 ８．休止セルの形のプロピオン酸バクテリアによるＮＯ生成量の変化 この実験は下記の条件で行われた： − 乳酸塩を含むｐＨ＝６．５のバッファード燐酸塩中に休止セルを縣濁、 − ３０℃または３７℃にて恒温 − 亜硝酸塩を濃度４００μＭで添加、 − 各チューブの雰囲気にヘリウムを１００秒間噴出、 − ３回繰り返し、 − 恒温終了時に混濁度を測定。 ここで、３０℃での恒温に関わるテストの間、ＴＬ２２３およびＣＮＲＺ８０ 株に加えて、ＣＮＲＺ８１株が二重バクテリア濃度で検査された。 この実験の結果を図１６および１７に示す。詳細には： − 図１６Ａは、恒温時間を関数とした、３０℃での休止セルによるＮＯ生成量 の変化を示す。 − 図１６Ｂは、媒体の混濁度を関数とした、３０℃での休止セルによるＮＯ生 成量の変化を示す。 − 図１７Ａは、恒温時間を関数とした、３７℃での休止セルによるＮＯ生成量 の変化を示す。 − 図１７Ｂは、媒体の混濁度を関数とした、３７℃での休止セルによるＮＯ生 成量の変化を示す。 この結果から、Ｐ．アシディプロピオニチ種の２つの株（ＴＬ２２３およびＣ ＮＲＺ８０）ばかりでなく、Ｐ．フロイデンライチイ種の株（ＣＮＲＺ８１）の 場合にも、休止セルによるＮＯの生成が当然あることが証明された。 全体的には、同じバクテリア濃度においては、休止セルによるＮＯの生成量は 、ＹＥＬ媒体で培養されたバクテリアの場合に観察されたと同じオーダーである 。 休止セルによるＮＯの生成は、基本的には、恒温の最初の５時間に生じ、これ を過ぎると、生成量は低くなる。 また、３７℃におけるＮＯの生成量は、３０℃における生成量と同じか(ＴＬ ２２３)、あるいはわずかに高い(ＣＮＲＺ８０)。 加えて、プロピオン酸バクテリアの接種に伴う利点を、健康な人間について調 査して確認した。 ９．プロピオン酸バクテリアの摂取による健康な人間の腸の通過への影響の研究 この研究は、カーンの大学病院において、１９人の健康な男性ボランティアを 対象に病院看護の下に行われた。 このテストの開始時に、各ボランティアには、連続８日間、１０個の放射線遮 断マーカー（ｒａｄｉｏ−ｏｐａｑｕｅ ｍａｒｋｅｒ）を吸収させた。この処 置は、文献、アーハン・ピー(Ａｒｈａｎ Ｐ)、デブロード・ジー(Ｄｅｖｒｏ ｅｄｅ Ｇ)、ジェハニン・ビー（Ｊｅｈａｎｎｉｎ Ｂ）等による「デイス・ コロン・レクタム(Ｄｉｓ Ｃｏｌｏｎ Ｒｅｃｔｕｍ)」１９８１；２４：６２ ５−９、およびブーチョーチャー・エム(Ｂｏｕｃｈａｏｕｃｈａ Ｍ)、デブロ ード・ジー(Ｄｅｖｒｏｅｄｅ Ｇ)、アーハン・ピー（Ａｒｈａｎ Ｐ）等によ る「デイス・コロン・レクタム(Ｄｉs Ｃｏｌｏｎ Ｒｅｃｔｕｍ）」１９９２ ；３５：７７３−８２の開示にしたがってなされた。 この処置にしたがって、通過調査は、腹部前方映像中に分布する腹腔の異なる 領域に摂取された放射線遮断マーカーを数えることによって行われる。これらの 領域（右結腸、左結腸、全部Ｓ字曲部）は、５番目の腰部脊椎と骨盤の輪郭と結 ぶ仮想線によって規定される。通過時間は、式Ｔ＝１／Ｎ−ｎ・Δｔにしたがっ て計算される。ここで、Ｎは１０マーカー、ｎはある領域で数えられたマーカー の数、Δｔは２４時間を表す。 この摂取の次の日、すなわち９日目に、ボランティア達に、何らの事前準備を せずに、腹部の前方レントゲン写真を撮ってもらった。 その次の日、すなわち１０日目から毎日、２週間にわたり、各ボランティアに ゼラチンカプセルを摂取してもらった。このカプセルには、チーズ生産業で使用 され人間に全く無害の菌株のバンクから入手したプロピオン酸バクテリアが５× １０¹⁰個入っている。 通過時間に関するこの最初の研究と類似の第２の研究を、プロピオン酸バクテ リアの摂取の第２週目の間、すなわち、１７日目から２６日目まで行った。 この研究から、左結腸の通過時間については、はっきりした減速が現れること が明らかになった(ウィルコクスン・マッチド−ペアード・サインド−ランクス ・スタティスティカル・テスト（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ Ｍａｔｃｈｅｄ−Ｐａｉｒ ｅ ｄ Ｓｉｇｎｅｄ−Ｒａｎｋｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｔｅｓｔ）によるｐ ＜０．０５)；右結腸および前部Ｓ字曲部の通過時間は、プロピオン酸バクテリ アの摂取によってはほとんど影響されなかった。 かくして、この研究から、プロピオン酸バクテリアの摂取は腸の運動性へ影響 を与えることが証明される。これらの結果は、プロピオン酸バクテリアによる酸 化窒素の合成に伴われるものであると思われる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ２３Ｌ 1/308 Ａ２３Ｌ 1/308 Ａ６１Ｐ 1/14 Ａ６１Ｐ 1/14 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，Ｍ Ｗ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，Ｅ Ｓ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ， ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，Ｍ Ｗ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ， ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ルグラン，マルク アンリ フランス共和国，エフ―14000 カーン, ル ヴァンドーム，アレ ボーセジュール ６ (72)発明者 ローラン，ナタリー フランス共和国，エフ―35000 ランヌ, ルー パプ 62，バティモン アー

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 人あるいは動物の消化器官に生理学的に有意な量の酸化窒素を放出可能な 被吸収性の通常の食品組成物、あるいは被吸収性の食用ないし薬用組生物 を製造するためにプロピオン酸バクテリアを使用する使用方法。 ２． 前記組成物が乾燥された調整品であることを特徴とする請求項１の使用方 法 ３． 前記組成物が、規則正しく吸収されるに必要な服用量のバクテリアを含む 個々の断片の形であることを特徴とする請求項２の使用方法 ４． 前記個々の断片の各々は、１０⁹個のバクテリアを含んでいることを特徴 とする請求項３の使用方法 ５． 前記組成物が、発酵したあるいは発酵されていない液体調整品であること を特徴とする請求項１の使用方法 ６． 前記組成物が、プロピオン酸バクテリアをチーズやダイエット繊維のよう な食品に添加した精巧な調整品であることを特徴とする請求項１の使用方 法 ７． ５５０μＭの硝酸塩を含むＹＥＬ媒体に対して少なくとも１μｇ／ｍｌの 割合で酸化窒素を放出および／または蓄積する能力の関数として選択され た大量の、好ましくは１０⁹セル／gより多いプロピオン酸バクテリア株を 含む調整品からなることを特徴とする被吸収性の食用あるいは薬用組生物 。 ８． 前記組生物が、Ｐ．アシジプロピオニチ種のＴＬ２２３、ＣＮＲＺ８０、 ＣＮＲＺ８６、およびＮＣＤＯ１０７２の少なくとも１つに属するプロピ オン酸バクテリア株を含んでいることを特徴とする請求項７の組成物。 ９． 前記組生物が、Ｐ．アシジプロピオニチ種のＴＬ２２３に属するプロピオ ン酸バクテリア株を含んでいることを特徴とする請求項８の組成物。 １０．前記組生物が、ＣＮＲＺ８０に属するプロピオン酸バクテリア株を含んで いることを特徴とする請求項８の組成物。 １１．前記組生物が、Ｐ．フロイデンライチイ種のＩＴＧ２３、ＣＮＲＺ８１、 ＣＮＲＺ８９、ＣＮＲＺ２７７およびＬＳ２５０２の少なくとも１つに属 するプロピオン酸バクテリア株を含んでいることを特徴とする請求項７の 組成物。 １２．前記組生物が、ビフィドバクテリアおよび／または乳酸菌のような他のバ クテリアを含有することを特徴とする請求項７から１１のいずれか１つの 組成物。