JPH06277047A - 腸内細菌が産生するビフィズス菌増殖 促進物質及びその利用 - Google Patents
腸内細菌が産生するビフィズス菌増殖 促進物質及びその利用Info
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- JPH06277047A JPH06277047A JP5095145A JP9514593A JPH06277047A JP H06277047 A JPH06277047 A JP H06277047A JP 5095145 A JP5095145 A JP 5095145A JP 9514593 A JP9514593 A JP 9514593A JP H06277047 A JPH06277047 A JP H06277047A
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- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 腸内細菌の培養物、及び／又はその処理物を
有効成分とするビフィズス菌増殖促進物質。 【効果】 本物質は、ビフィズス菌増殖能にすぐれてい
るだけでなくその作用は特異的であるので、飲食品や医
薬品として利用できるほか、ビフィズス菌数計測用等ビ
フィズス菌分析用選択培地にも利用できる。
有効成分とするビフィズス菌増殖促進物質。 【効果】 本物質は、ビフィズス菌増殖能にすぐれてい
るだけでなくその作用は特異的であるので、飲食品や医
薬品として利用できるほか、ビフィズス菌数計測用等ビ
フィズス菌分析用選択培地にも利用できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、腸内細菌が菌体内外に
産生するビフィズス菌増殖促進物質、その製法及び利用
に関するものである。
産生するビフィズス菌増殖促進物質、その製法及び利用
に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】有用なビフィズス菌を増殖促進せしめる
物質、いわゆるビフィズス因子については、従来よりい
くつかの物質が研究され、報告されている。例えば、母
乳中に含まれるＮ−アセチルグルコサミン（Ｐｒｏｃ．
Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，９０，２１９
（１９５５））、ペプチド関連物質（Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉ
ｎ．Ｎｕｔｒ．，３２，１４２８（１９７４）；Ａｇｒ
ｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４８，２１５９（１９８
４））、人参抽出物（日農化誌、５５，４９９（１９８
１）；Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，（Ｔｏｋｙ
ｏ）１４，１１９１（１９６６））、糖関連物質（東北
福祉大紀要、１０，３１３（１９８６））等がある。し
かしながらこれらビフィズス菌の増殖促進物質の調製
は、いずれも煩雑であり、ビフィズス菌のみを選択的に
増殖させるという作用においても必ずしも十分とは言え
ない点があった。
物質、いわゆるビフィズス因子については、従来よりい
くつかの物質が研究され、報告されている。例えば、母
乳中に含まれるＮ−アセチルグルコサミン（Ｐｒｏｃ．
Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，９０，２１９
（１９５５））、ペプチド関連物質（Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉ
ｎ．Ｎｕｔｒ．，３２，１４２８（１９７４）；Ａｇｒ
ｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４８，２１５９（１９８
４））、人参抽出物（日農化誌、５５，４９９（１９８
１）；Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，（Ｔｏｋｙ
ｏ）１４，１１９１（１９６６））、糖関連物質（東北
福祉大紀要、１０，３１３（１９８６））等がある。し
かしながらこれらビフィズス菌の増殖促進物質の調製
は、いずれも煩雑であり、ビフィズス菌のみを選択的に
増殖させるという作用においても必ずしも十分とは言え
ない点があった。
【０００３】一方、従来より、発酵乳中もしくは腸内フ
ローラのビフィズス菌数の検索において、生菌数計測用
選択培地の選択剤として抗生物質を利用する方法（食衛
誌、１８，５３７（１９７７）；日細菌誌、３３，７５
３（１９７３））が知られているが、使用する抗生物質
量が多いとビフィズス菌数が著しく低下すること、また
使用する抗生物質量が少ないとビフィズス菌以外の微生
物が数多く増殖し、ビフィズス菌との判別が不能となる
こと等の問題があった。また、血液を非選択培地に添加
し、培養後ビフィズス菌に特有なコロニーを選別計測す
る方法（乳技協資料、３２，１５（１９８３））は共存
するビフィズス菌以外の細菌数が低い場合には有効であ
るが、ビフィズス菌数が夾雑する細菌数よりも著しく低
い場合は、計測が困難となる問題があった。
ローラのビフィズス菌数の検索において、生菌数計測用
選択培地の選択剤として抗生物質を利用する方法（食衛
誌、１８，５３７（１９７７）；日細菌誌、３３，７５
３（１９７３））が知られているが、使用する抗生物質
量が多いとビフィズス菌数が著しく低下すること、また
使用する抗生物質量が少ないとビフィズス菌以外の微生
物が数多く増殖し、ビフィズス菌との判別が不能となる
こと等の問題があった。また、血液を非選択培地に添加
し、培養後ビフィズス菌に特有なコロニーを選別計測す
る方法（乳技協資料、３２，１５（１９８３））は共存
するビフィズス菌以外の細菌数が低い場合には有効であ
るが、ビフィズス菌数が夾雑する細菌数よりも著しく低
い場合は、計測が困難となる問題があった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、ビフィズス
菌のみを選択的に且つ迅速に増殖せしめる新規物質の調
製及び当該物質を利用した、ビフィズス菌数計測用等分
析用の選択培地を得ることを、その目的とするものであ
る。
菌のみを選択的に且つ迅速に増殖せしめる新規物質の調
製及び当該物質を利用した、ビフィズス菌数計測用等分
析用の選択培地を得ることを、その目的とするものであ
る。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、上記した目的
を達成するためになされたものであって、本発明者らは
ビフィズス菌の増殖を促進する微生物の代謝産物につき
鋭意研究を重ねた結果、腸内細菌（特にＢａｃｔｅｒｏ
ｉｄａｃｅａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａ
ｅ等）が菌体内外に各種のビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ、Ｂ．ｂｒｅｖｅ、
Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ、Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ、
Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｂ．ａｎｉｍａｌｉｓ、Ｂ．ｐ
ｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ等）に対する高活性の増殖促進
物質を産生することを見いだした。本発明は、この新知
見を基礎としてなされたものである。
を達成するためになされたものであって、本発明者らは
ビフィズス菌の増殖を促進する微生物の代謝産物につき
鋭意研究を重ねた結果、腸内細菌（特にＢａｃｔｅｒｏ
ｉｄａｃｅａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａ
ｅ等）が菌体内外に各種のビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ、Ｂ．ｂｒｅｖｅ、
Ｂ．ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ、Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ、
Ｂ．ｉｎｆａｎｔｉｓ、Ｂ．ａｎｉｍａｌｉｓ、Ｂ．ｐ
ｓｅｕｄｏｌｏｎｇｕｍ等）に対する高活性の増殖促進
物質を産生することを見いだした。本発明は、この新知
見を基礎としてなされたものである。
【０００６】すなわち本発明は、腸内細菌に由来するビ
フィズス菌増殖促進物質（以下、ビフィズス因子という
こともある）を、その基本的技術思想とするものであ
る。
フィズス菌増殖促進物質（以下、ビフィズス因子という
こともある）を、その基本的技術思想とするものであ
る。
【０００７】本発明に係わるビフィズス菌増殖促進物質
は、腸内細菌（特にＢａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ、Ｅ
ｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ等）の培養物中
（菌体内外）に含有されるので、培養物それ自体及び／
又はその処理物を本発明に係わる該物質として利用す
る。該処理物としては、菌体を含む培養物、培養物の上
清、培養物の濾液、培養物の除菌液、これらの濃縮物、
乾燥物、必要ある場合には希釈液、希釈物等、培養物を
処理して得られたすべてのタイプの処理物がすべて包含
される。
は、腸内細菌（特にＢａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ、Ｅ
ｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ等）の培養物中
（菌体内外）に含有されるので、培養物それ自体及び／
又はその処理物を本発明に係わる該物質として利用す
る。該処理物としては、菌体を含む培養物、培養物の上
清、培養物の濾液、培養物の除菌液、これらの濃縮物、
乾燥物、必要ある場合には希釈液、希釈物等、培養物を
処理して得られたすべてのタイプの処理物がすべて包含
される。
【０００８】腸内細菌としては、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａ
ｃｅａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ、Ｐ
ｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅの各科に属す
る細菌のほか、その他ヒトもしくは動物の消化管中に認
められる細菌が適宜使用され、その非限定例としては次
のものが挙げられる：
ｃｅａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ、Ｐ
ｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅの各科に属す
る細菌のほか、その他ヒトもしくは動物の消化管中に認
められる細菌が適宜使用され、その非限定例としては次
のものが挙げられる：
【０００９】Ｂａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａｅ科細菌とし
ては、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａｔｕｓ、
Ｂ．ｆｒａｇｉｌｉｓ ＡＴＣＣ ２３７４５等バクテ
ロイデス属菌その他が例示される。Ｅｎｔｅｒｏｂａｃ
ｔｅｒｉａｃｅａｅ科細菌としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃ
ｈｉａ ｃｏｌｉ ＡＴＣＣ ９６３７等エシェリヒア
属菌；Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ等エ
ンテロバクター属菌；Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅ
ｕｎｄｉｉ ＡＴＣＣ ８０９０等シトロバクター属
菌；Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ａ
ＴＣＣ １２６５８等クレブシエラ属菌その他が例示さ
れる。また、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉａｃｅａ
ｅ科細菌としては、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＩＦＯ １２４２
４等プロピオニバクテリウム属菌その他が例示される。
ては、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａｔｕｓ、
Ｂ．ｆｒａｇｉｌｉｓ ＡＴＣＣ ２３７４５等バクテ
ロイデス属菌その他が例示される。Ｅｎｔｅｒｏｂａｃ
ｔｅｒｉａｃｅａｅ科細菌としては、Ｅｓｃｈｅｒｉｃ
ｈｉａ ｃｏｌｉ ＡＴＣＣ ９６３７等エシェリヒア
属菌；Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ等エ
ンテロバクター属菌；Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｆｒｅ
ｕｎｄｉｉ ＡＴＣＣ ８０９０等シトロバクター属
菌；Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ Ａ
ＴＣＣ １２６５８等クレブシエラ属菌その他が例示さ
れる。また、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉａｃｅａ
ｅ科細菌としては、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＩＦＯ １２４２
４等プロピオニバクテリウム属菌その他が例示される。
【００１０】これらの腸内細菌の増殖培地としては増殖
可能なものであればいずれも使用することができる。ま
た、腸内細菌の培養には嫌気条件を必要とするが、一部
の細菌は必ずしも嫌気培養をする必要はなく好気下でも
十分に増殖し、ビフィズス菌に対する増殖促進物質を産
生する。
可能なものであればいずれも使用することができる。ま
た、腸内細菌の培養には嫌気条件を必要とするが、一部
の細菌は必ずしも嫌気培養をする必要はなく好気下でも
十分に増殖し、ビフィズス菌に対する増殖促進物質を産
生する。
【００１１】一方、これらの腸内細菌が産生するビフィ
ズス菌の増殖促進物質は、１２１℃で５分間の加熱処理
後でもビフィズス菌に対して増殖促進活性を有してお
り、耐熱性が高いことを認めた。また、該物質はビフィ
ズス菌のみに増殖促進活性を有しており、その他の腸内
細菌に対する作用は低いかないしは作用せず、選択性及
び特異性が極めて高いという顕著な性質も併有する（実
施例１）。
ズス菌の増殖促進物質は、１２１℃で５分間の加熱処理
後でもビフィズス菌に対して増殖促進活性を有してお
り、耐熱性が高いことを認めた。また、該物質はビフィ
ズス菌のみに増殖促進活性を有しており、その他の腸内
細菌に対する作用は低いかないしは作用せず、選択性及
び特異性が極めて高いという顕著な性質も併有する（実
施例１）。
【００１２】さらに本発明によれば、抗生物質等の存在
により増殖が抑制されたビフィズス菌でも腸内細菌が産
生する該増殖促進物質（菌体を含む培養物）を添加する
ことにより、その増殖能を回復する（実施例２〜４）。
従って、腸内細菌が産生する該増殖促進物質を培養物そ
れ自体及び／又はその処理物としてヒトもしくは動物に
直接投与し消化管中のビフィズス菌数を増大せしめる利
用法の他に、食品、大腸内容物ならびに糞便試料等にお
けるビフィズス菌分析用の選択培地として利用すること
が可能である。
により増殖が抑制されたビフィズス菌でも腸内細菌が産
生する該増殖促進物質（菌体を含む培養物）を添加する
ことにより、その増殖能を回復する（実施例２〜４）。
従って、腸内細菌が産生する該増殖促進物質を培養物そ
れ自体及び／又はその処理物としてヒトもしくは動物に
直接投与し消化管中のビフィズス菌数を増大せしめる利
用法の他に、食品、大腸内容物ならびに糞便試料等にお
けるビフィズス菌分析用の選択培地として利用すること
が可能である。
【００１３】すなわち、これまでにビフィズス菌含有試
料中のビフィズス菌数を計測するシステムのひとつとし
て、ビフィズス菌以外の夾雑菌の増殖を抑制する選択剤
を含有する寒天培地を用い、該培地に試料を接種してイ
ンキュベートすることにより、ビフィズス菌のみを特異
的ないし選択的に増殖せしめて、ビフィズス菌の存否や
生菌数を計測する方法が知られている。しかしながら、
選択剤を添加した選択培地では特に高濃度の選択剤を使
用した場合、ビフィズス菌以外の夾雑菌の増殖が抑制さ
れることはもちろんのこと、ビフィズス菌自体の増殖も
抑制されることがあり、正確なビフィズス菌数の把握が
困難であった。
料中のビフィズス菌数を計測するシステムのひとつとし
て、ビフィズス菌以外の夾雑菌の増殖を抑制する選択剤
を含有する寒天培地を用い、該培地に試料を接種してイ
ンキュベートすることにより、ビフィズス菌のみを特異
的ないし選択的に増殖せしめて、ビフィズス菌の存否や
生菌数を計測する方法が知られている。しかしながら、
選択剤を添加した選択培地では特に高濃度の選択剤を使
用した場合、ビフィズス菌以外の夾雑菌の増殖が抑制さ
れることはもちろんのこと、ビフィズス菌自体の増殖も
抑制されることがあり、正確なビフィズス菌数の把握が
困難であった。
【００１４】これに対し、選択培地に本発明に係る腸内
細菌が産生するビフィズス菌増殖促進物質（菌体を含む
培養物及び／又はその処理物）を添加すると、ビフィズ
ス菌の増殖を特異的に促進しコロニーを形成させること
ができ、ビフィズス菌数の正確な計測ができるのであ
る。しかもこの効果は、選択剤として、硫酸パロモマイ
シン、硫酸ネオマイシン等の抗生物質のほか、プロピオ
ン酸塩、塩化リチウムその他既知のどのような選択剤を
使用しても奏されるので、ビフィズス因子を添加してな
る本発明に係るビフィズス菌アッセイ用選択培地は広範
なアッセイ用途に有効に利用することができる。
細菌が産生するビフィズス菌増殖促進物質（菌体を含む
培養物及び／又はその処理物）を添加すると、ビフィズ
ス菌の増殖を特異的に促進しコロニーを形成させること
ができ、ビフィズス菌数の正確な計測ができるのであ
る。しかもこの効果は、選択剤として、硫酸パロモマイ
シン、硫酸ネオマイシン等の抗生物質のほか、プロピオ
ン酸塩、塩化リチウムその他既知のどのような選択剤を
使用しても奏されるので、ビフィズス因子を添加してな
る本発明に係るビフィズス菌アッセイ用選択培地は広範
なアッセイ用途に有効に利用することができる。
【００１５】以下、本発明の実施例につき述べる。
【００１６】
【実施例１】ＴＰＹＧ培地（トリプチケース（ＢＢＬ）
８ｇ、フィトンペプトン（ＢＢＬ）３ｇ、酵母エキス５
ｇ、Ｌ−システイン塩酸塩０．５ｇ、グルコース２０
ｇ、Ｋ2ＨＰＯ4 ２ｇ、ＫＨ2ＰＯ4 ３ｇ、ＭｇＣｌ2
・６Ｈ2Ｏ ０．５ｇ、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １０ｍ
ｇ、Ｈ2Ｏ １０００ｍｌ、ｐＨ６．５）にＢａｃｔｅ
ｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａｔｕｓ ＪＣＭ ５８２６、
Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａｅ ＡＴＣＣ
９６１をそれぞれ接種し、３７℃で４８時間ガスパック
法にて嫌気培養した。得られた培養液を５０００ｒ．
ｐ．ｍ．で１５分間遠心分離し、さらに、その上清をポ
アサイズ０．４５μｍのミリポアフィルターで濾過し
た。これらの濾液１％をＴＰＹＧ培地に添加し、ビフィ
ズス菌をはじめとする各種の腸内細菌を接種し、３７℃
で２０時間ガスパック法にて嫌気培養し、それぞれの培
養液のＯＤ580（波長５８０ｎｍにおける吸光度）を測
定した。対照にはＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａ
ｔｕｓ ＪＣＭ ５８２６、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ
ｃｌｏａｃａｅ ＡＴＣＣ ９６１の培養上清液を接
種していないＴＰＹＧ培地で、それぞれの腸内細菌を接
種したものを用いた。結果を下記の表１に示す。
８ｇ、フィトンペプトン（ＢＢＬ）３ｇ、酵母エキス５
ｇ、Ｌ−システイン塩酸塩０．５ｇ、グルコース２０
ｇ、Ｋ2ＨＰＯ4 ２ｇ、ＫＨ2ＰＯ4 ３ｇ、ＭｇＣｌ2
・６Ｈ2Ｏ ０．５ｇ、ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １０ｍ
ｇ、Ｈ2Ｏ １０００ｍｌ、ｐＨ６．５）にＢａｃｔｅ
ｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａｔｕｓ ＪＣＭ ５８２６、
Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａｅ ＡＴＣＣ
９６１をそれぞれ接種し、３７℃で４８時間ガスパック
法にて嫌気培養した。得られた培養液を５０００ｒ．
ｐ．ｍ．で１５分間遠心分離し、さらに、その上清をポ
アサイズ０．４５μｍのミリポアフィルターで濾過し
た。これらの濾液１％をＴＰＹＧ培地に添加し、ビフィ
ズス菌をはじめとする各種の腸内細菌を接種し、３７℃
で２０時間ガスパック法にて嫌気培養し、それぞれの培
養液のＯＤ580（波長５８０ｎｍにおける吸光度）を測
定した。対照にはＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａ
ｔｕｓ ＪＣＭ ５８２６、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ
ｃｌｏａｃａｅ ＡＴＣＣ ９６１の培養上清液を接
種していないＴＰＹＧ培地で、それぞれの腸内細菌を接
種したものを用いた。結果を下記の表１に示す。
【００１７】
【表１】
【００１８】上記した、腸内細菌の培養上清液の添加が
ビフィズス菌の増殖に及ぼす影響に関する試験結果から
明らかなように、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａ
ｔｕｓ ＪＣＭ ５８２６又はＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅ
ｒ ｃｌｏａｃａｅ ＡＴＣＣ ９６１の培養上清液の
添加は、ビフィズス菌の増殖を促進するが、その他の腸
内細菌に対しては増殖促進効果が低いか全く作用しない
ことが認められた。
ビフィズス菌の増殖に及ぼす影響に関する試験結果から
明らかなように、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａ
ｔｕｓ ＪＣＭ ５８２６又はＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅ
ｒ ｃｌｏａｃａｅ ＡＴＣＣ ９６１の培養上清液の
添加は、ビフィズス菌の増殖を促進するが、その他の腸
内細菌に対しては増殖促進効果が低いか全く作用しない
ことが認められた。
【００１９】
【実施例２】１２１℃で１５分間加熱滅菌処理したＢＬ
寒天培地（栄研化学（株））に選択剤（硫酸パロモマイ
シン０．１ｇ、硫酸ネオマイシン０．４ｇ、塩化リチウ
ム６ｇ、プロピオン酸ナトリウム３０ｇを１００ｍｌの
蒸留水に溶解し、ポアサイズ０．４５μｍのミリポアフ
ィルターで濾過したもの）を１％および３％添加し、そ
れぞれの寒天平板培地を調製した。一方、ＴＰＹＧ培地
にＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅ
ｎｒｅｉｃｈｉｉ ＩＦＯ １２４２４を接種し３７℃
で５日間好気培養し、菌体を含む培養液をロータリーエ
バポレーターにて１０倍に濃縮し、本濃縮液５％をＢＬ
寒天培地に添加後、ｐＨを７．２に調製し１２１℃で１
５分間加熱滅菌処理した。これに前記した選択剤を１％
および３％添加し、同様にそれぞれの寒天平板培地を調
製した。対照は選択剤及びＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＩＦＯ １
２４２４の培養濃縮液のいずれも添加していないＢＬ寒
天平板培地を用いた。
寒天培地（栄研化学（株））に選択剤（硫酸パロモマイ
シン０．１ｇ、硫酸ネオマイシン０．４ｇ、塩化リチウ
ム６ｇ、プロピオン酸ナトリウム３０ｇを１００ｍｌの
蒸留水に溶解し、ポアサイズ０．４５μｍのミリポアフ
ィルターで濾過したもの）を１％および３％添加し、そ
れぞれの寒天平板培地を調製した。一方、ＴＰＹＧ培地
にＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅ
ｎｒｅｉｃｈｉｉ ＩＦＯ １２４２４を接種し３７℃
で５日間好気培養し、菌体を含む培養液をロータリーエ
バポレーターにて１０倍に濃縮し、本濃縮液５％をＢＬ
寒天培地に添加後、ｐＨを７．２に調製し１２１℃で１
５分間加熱滅菌処理した。これに前記した選択剤を１％
および３％添加し、同様にそれぞれの寒天平板培地を調
製した。対照は選択剤及びＰｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＩＦＯ １
２４２４の培養濃縮液のいずれも添加していないＢＬ寒
天平板培地を用いた。
【００２０】これらの寒天平板培地にＢｉｆ．ｌｏｎｇ
ｕｍ ＡＴＣＣ １５７０７及びＢｉｆ．ａｄｏｌｅｓ
ｃｅｎｔｉｓ ＡＴＣＣ １５７０３菌液を０．１ｍｌ
宛て塗布し、３７℃で２日間ガスパック法にて嫌気培養
後それぞれのビフィズス菌数を計測した。結果を下記の
表２に示す。
ｕｍ ＡＴＣＣ １５７０７及びＢｉｆ．ａｄｏｌｅｓ
ｃｅｎｔｉｓ ＡＴＣＣ １５７０３菌液を０．１ｍｌ
宛て塗布し、３７℃で２日間ガスパック法にて嫌気培養
後それぞれのビフィズス菌数を計測した。結果を下記の
表２に示す。
【００２１】
【表２】
【００２２】上記した、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＩＦＯ １２
４２４培養物濃縮液のビフィズス菌数の計測値に及ぼす
影響に関する試験結果から明らかなように、Ｐｒｏｐｉ
ｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉ
ｉ ＩＦＯ １２４２４培養濃縮液５％を選択剤１〜３
％を含むＢＬ寒天培地に添加することにより、選択剤に
よるビフィズス菌の増殖阻害が解除されることが認めら
れた。なお、ＴＰＹＧ培地の１０倍濃縮液５％を選択剤
１〜３％を含むＢＬ寒天培地に添加した際は、ビフィズ
ス菌数の増大は認められなかった。
ｉｕｍ ｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉｉ ＩＦＯ １２
４２４培養物濃縮液のビフィズス菌数の計測値に及ぼす
影響に関する試験結果から明らかなように、Ｐｒｏｐｉ
ｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｒｅｕｄｅｎｒｅｉｃｈｉ
ｉ ＩＦＯ １２４２４培養濃縮液５％を選択剤１〜３
％を含むＢＬ寒天培地に添加することにより、選択剤に
よるビフィズス菌の増殖阻害が解除されることが認めら
れた。なお、ＴＰＹＧ培地の１０倍濃縮液５％を選択剤
１〜３％を含むＢＬ寒天培地に添加した際は、ビフィズ
ス菌数の増大は認められなかった。
【００２３】
【実施例３】１２１℃で１５分間加熱滅菌処理したＢＬ
寒天培地（栄研化学（株））に選択剤（硫酸パロモマイ
シン０．１ｇ、硫酸ネオマイシン０．４ｇ、塩化リチウ
ム６ｇ、プロピオン酸ナトリウム３０ｇを１００ｍｌの
蒸留水に溶解し、ポアサイズ０．４５μｍのミリポアフ
ィルターで濾過したもの）を１％および３％添加し、そ
れぞれの寒天平板培地を調製した。一方、ＴＰＹＧ培地
にＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａｔｕｓ ＪＣＭ
５８２６を接種し３７℃で２日間嫌気培養し、菌体を
含む培養液をロータリーエバポレーターにて１０倍に濃
縮し、本濃縮液５％をＢＬ寒天培地に添加後、ｐＨを
７．２に調製し１２１℃で１５分間加熱滅菌処理した。
これに前記した選択剤を１％および３％添加し、同様に
それぞれの寒天平板培地を調製した。対照は選択剤及び
Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａｔｕｓ ＪＣＭ
５８２６の培養濃縮液のいずれも添加していないＢＬ寒
天平板培地を用いた。
寒天培地（栄研化学（株））に選択剤（硫酸パロモマイ
シン０．１ｇ、硫酸ネオマイシン０．４ｇ、塩化リチウ
ム６ｇ、プロピオン酸ナトリウム３０ｇを１００ｍｌの
蒸留水に溶解し、ポアサイズ０．４５μｍのミリポアフ
ィルターで濾過したもの）を１％および３％添加し、そ
れぞれの寒天平板培地を調製した。一方、ＴＰＹＧ培地
にＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａｔｕｓ ＪＣＭ
５８２６を接種し３７℃で２日間嫌気培養し、菌体を
含む培養液をロータリーエバポレーターにて１０倍に濃
縮し、本濃縮液５％をＢＬ寒天培地に添加後、ｐＨを
７．２に調製し１２１℃で１５分間加熱滅菌処理した。
これに前記した選択剤を１％および３％添加し、同様に
それぞれの寒天平板培地を調製した。対照は選択剤及び
Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａｔｕｓ ＪＣＭ
５８２６の培養濃縮液のいずれも添加していないＢＬ寒
天平板培地を用いた。
【００２４】これらの寒天平板培地にＢｉｆ．ｌｏｎｇ
ｕｍ ＡＴＣＣ １５７０７及びＢｉｆ．ａｄｏｌｅｓ
ｃｅｎｔｉｓ ＡＴＣＣ １５７０３菌液を０．１ｍｌ
宛て塗布し、３７℃で２日間ガスパック法にて嫌気培養
後それぞれのビフィズス菌数を計測した。結果を下記の
表３に示す。
ｕｍ ＡＴＣＣ １５７０７及びＢｉｆ．ａｄｏｌｅｓ
ｃｅｎｔｉｓ ＡＴＣＣ １５７０３菌液を０．１ｍｌ
宛て塗布し、３７℃で２日間ガスパック法にて嫌気培養
後それぞれのビフィズス菌数を計測した。結果を下記の
表３に示す。
【００２５】
【表３】
【００２６】上記したＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌ
ｇａｔｕｓ ＪＣＭ ５８２６培養濃縮液のビフィズス
菌数の計測値に及ぼす影響に関する試験結果から明らか
なように、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａｔｕｓ
ＪＣＭ ５８２６培養濃縮液５％を選択剤１〜３％を
含むＢＬ寒天培地に添加することにより、選択剤による
ビフィズス菌の増殖阻害が解除されることが認められ
た。
ｇａｔｕｓ ＪＣＭ ５８２６培養濃縮液のビフィズス
菌数の計測値に及ぼす影響に関する試験結果から明らか
なように、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｖｕｌｇａｔｕｓ
ＪＣＭ ５８２６培養濃縮液５％を選択剤１〜３％を
含むＢＬ寒天培地に添加することにより、選択剤による
ビフィズス菌の増殖阻害が解除されることが認められ
た。
【００２７】
【実施例４】１２１℃で１５分間加熱滅菌処理したＢＬ
寒天培地（栄研化学（株））に選択剤（硫酸パロモマイ
シン０．１ｇ、硫酸ネオマイシン０．４ｇ、塩化リチウ
ム６ｇ、プロピオン酸ナトリウム３０ｇを１００ｍｌの
蒸留水に溶解し、ポアサイズ０．４５μｍのミリポアフ
ィルターで濾過したもの）を１％および３％添加し、そ
れぞれの寒天平板培地を調製した。一方、ＴＰＹＧ培地
にＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ ＡＴＣ
Ｃ ９６１を接種し３７℃で２日間好気培養し、菌体を
含む培養液をロータリーエバポレーターにて１０倍に濃
縮し、本濃縮液５％をＢＬ寒天培地に添加後、ｐＨを
７．２に調製し１２１℃で１５分間加熱滅菌処理した。
これに前記した選択剤を１％および３％添加し、同様に
それぞれの寒天平板培地を調製した。対照は選択剤及び
Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ ＡＴＣＣ
９６１の培養濃縮液のいずれも添加していないＢＬ寒
天平板培地を用いた。
寒天培地（栄研化学（株））に選択剤（硫酸パロモマイ
シン０．１ｇ、硫酸ネオマイシン０．４ｇ、塩化リチウ
ム６ｇ、プロピオン酸ナトリウム３０ｇを１００ｍｌの
蒸留水に溶解し、ポアサイズ０．４５μｍのミリポアフ
ィルターで濾過したもの）を１％および３％添加し、そ
れぞれの寒天平板培地を調製した。一方、ＴＰＹＧ培地
にＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ ＡＴＣ
Ｃ ９６１を接種し３７℃で２日間好気培養し、菌体を
含む培養液をロータリーエバポレーターにて１０倍に濃
縮し、本濃縮液５％をＢＬ寒天培地に添加後、ｐＨを
７．２に調製し１２１℃で１５分間加熱滅菌処理した。
これに前記した選択剤を１％および３％添加し、同様に
それぞれの寒天平板培地を調製した。対照は選択剤及び
Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ ＡＴＣＣ
９６１の培養濃縮液のいずれも添加していないＢＬ寒
天平板培地を用いた。
【００２８】これらの寒天平板培地にＢｉｆ．ｌｏｎｇ
ｕｍ ＡＴＣＣ １５７０７及びＢｉｆ．ａｄｏｌｅｓ
ｃｅｎｔｉｓ ＡＴＣＣ １５７０３菌液を０．１ｍｌ
宛て塗布し、３７℃で２日間ガスパック法にて嫌気培養
後それぞれのビフィズス菌数を計測した。結果を下記の
表４に示す。
ｕｍ ＡＴＣＣ １５７０７及びＢｉｆ．ａｄｏｌｅｓ
ｃｅｎｔｉｓ ＡＴＣＣ １５７０３菌液を０．１ｍｌ
宛て塗布し、３７℃で２日間ガスパック法にて嫌気培養
後それぞれのビフィズス菌数を計測した。結果を下記の
表４に示す。
【００２９】
【表４】
【００３０】上記した、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃ
ｌｏａｃａｅ ＡＴＣＣ ９６１培養物濃縮液のビフィ
ズス菌数の計測値に及ぼす影響に関する試験結果から明
らかなように、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃ
ａｅ ＡＴＣＣ ９６１培養濃縮液５％を選択剤１〜３
％を含むＢＬ寒天培地に添加することにより、選択剤に
よるビフィズス菌の増殖阻害が解除されることが認めら
れた。
ｌｏａｃａｅ ＡＴＣＣ ９６１培養物濃縮液のビフィ
ズス菌数の計測値に及ぼす影響に関する試験結果から明
らかなように、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃ
ａｅ ＡＴＣＣ ９６１培養濃縮液５％を選択剤１〜３
％を含むＢＬ寒天培地に添加することにより、選択剤に
よるビフィズス菌の増殖阻害が解除されることが認めら
れた。
【００３１】
【発明の効果】本発明に係るビフィズス因子は、ビフィ
ズス菌の増殖促進効果にすぐれているので、飲食品や経
口投与薬剤としてヒトや動物に直接投与ないし摂取せし
めて、消化管中のビフィズス菌を増大させるのにきわめ
て有効である。
ズス菌の増殖促進効果にすぐれているので、飲食品や経
口投与薬剤としてヒトや動物に直接投与ないし摂取せし
めて、消化管中のビフィズス菌を増大させるのにきわめ
て有効である。
【００３２】更にまた本発明に係るビフィズス因子は、
ビフィズス菌の増殖促進効果にすぐれているだけでな
く、選択性ないし特異性が強く、他の夾雑菌には増殖効
果が認められないため、ビフィズス菌選択用培地に本ビ
フィズス因子を添加すると、ビフィズス菌のみのコロニ
ーが速やかに形成され、ビフィズス菌の生菌数の計測そ
の他各種アッセイに有利に利用できる。
ビフィズス菌の増殖促進効果にすぐれているだけでな
く、選択性ないし特異性が強く、他の夾雑菌には増殖効
果が認められないため、ビフィズス菌選択用培地に本ビ
フィズス因子を添加すると、ビフィズス菌のみのコロニ
ーが速やかに形成され、ビフィズス菌の生菌数の計測そ
の他各種アッセイに有利に利用できる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 目 黒 幸 子 東京都東村山市栄町１−21−３ 明治乳業 株式会社中央研究所内 (72)発明者 矢 島 昌 子 東京都東村山市栄町１−21−３ 明治乳業 株式会社中央研究所内 (72)発明者 鈴 木 英 毅 東京都東村山市栄町１−21−３ 明治乳業 株式会社中央研究所内
Claims (4)
- 【請求項１】 腸内細菌の培養物及び／又はその処理物
を有効成分としてなることを特徴とするビフィズス菌増
殖促進物質。 - 【請求項２】 腸内細菌を培養して培養物を得ることを
特徴とする請求項１に記載のビフィズス菌増殖促進物質
の製造方法。 - 【請求項３】 選択剤含有培地に請求項１に記載したビ
フィズス菌増殖促進物質を添加してなることを特徴とす
るビフィズス菌の分析用選択培地。 - 【請求項４】 腸内細菌がＢａｃｔｅｒｏｉｄａｃｅａ
ｅ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ及びＰｒｏ
ｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅからなる群から選
ばれるものであることを特徴とする請求項１〜請求項３
のいずれか１項に記載のビフィズス菌増殖促進物質、そ
の製造方法又はそれを含有してなる選択培地。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP09514593A JP3532226B2 (ja) | 1993-03-31 | 1993-03-31 | 腸内細菌が産生するビフィズス菌増殖促進物質及びその利用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP09514593A JP3532226B2 (ja) | 1993-03-31 | 1993-03-31 | 腸内細菌が産生するビフィズス菌増殖促進物質及びその利用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06277047A true JPH06277047A (ja) | 1994-10-04 |
| JP3532226B2 JP3532226B2 (ja) | 2004-05-31 |
Family
ID=14129639
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP09514593A Expired - Lifetime JP3532226B2 (ja) | 1993-03-31 | 1993-03-31 | 腸内細菌が産生するビフィズス菌増殖促進物質及びその利用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3532226B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001507015A (ja) * | 1996-12-24 | 2001-05-29 | ラボラトワレ スタンダ ソシエテ アノニム | 人あるいは動物の消化器官に酸化窒素を放出可能なプロピオン酸バクテリアを含む被吸収性組生物 |
| JP2016164144A (ja) * | 2010-05-21 | 2016-09-08 | 株式会社明治 | 皮膚状態の改善用組成物 |
-
1993
- 1993-03-31 JP JP09514593A patent/JP3532226B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001507015A (ja) * | 1996-12-24 | 2001-05-29 | ラボラトワレ スタンダ ソシエテ アノニム | 人あるいは動物の消化器官に酸化窒素を放出可能なプロピオン酸バクテリアを含む被吸収性組生物 |
| JP2016164144A (ja) * | 2010-05-21 | 2016-09-08 | 株式会社明治 | 皮膚状態の改善用組成物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3532226B2 (ja) | 2004-05-31 |
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