JP2001505767A - パピローマウイルス、該ウイルスの検出用試薬および該ウイルスにより引き起こされる疾患の治療用試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 パピローマウイルス主要カプシド蛋白質のペプチドまたはパピローマウイルスゲノムをコードするＤＮＡが開示される。また、該パピローマウイルスゲノムによりコードされる蛋白質および該蛋白質に対する抗体ならびに診断、治療およびワクチン接種のためのそれらの使用も開示される。

Description

【発明の詳細な説明】 パピローマウイルス、該ウイルスの検出用試薬および該ウイルスにより引き起こ される疾患の治療用試薬 本発明は、パピローマウイルス主要カプシド蛋白質のペプチドをコードするＤ ＮＡおよびパピローマウイルスゲノムそれぞれに関する。また、本発明は、該パ ピローマウイルスゲノムによりコードされる蛋白質および該蛋白質に対する抗体 ならびに診断、治療およびワクチン接種のためのそれらの使用に関する。 パピローマウイルスは、ヒトおよび動物の上皮に感染することが知られている 。ヒトパピローマウイルス（以下ＨＰウイルスと称する）は、いぼ、性器部のコ ンジローム等の良性の上皮新生物ならびに皮膚および子宮の癌等の悪性上皮新生 物に見出される（ツアー ハウゼン（zur Hausen，H.）、Biochimica et Biophy sica Acta（BBA）1288，(1996)，55-78頁を参照のこと）。また、ＨＰウイルス は、口腔咽頭部の悪性腫瘍の増殖にも関与していると考えられている（ツアー ハウゼン、Curr．Top．Microbiol．Immunol．78，(1977)，1-30頁を参照のこと ）。 パピローマウイルスは、約７９００ｂｐの環状二本鎖ＤＮＡ分子が中に存在す るエンベロープを持たない二十面体のカプシドを有する。カプシドは、主要カプ シド蛋白質（Ｌ１）および副カプシド蛋白質（Ｌ２）を含有する。共発現した両 蛋白質または単独で発現したＬ１は、イン・ビトロでウイルス様粒子を形成する （キルンバウアー(Kirnbauer，R.)ら、Journal of Virology，(1993)，6929-693 6頁を参照のこと）。 パピローマウイルスは、単層細胞培養物では増殖できない。したがって、それ らのキャラクタライゼーションは非常に困難であり、パピローマウイルスの検出 は考慮されるべき問題をすでにもっている。これは、皮膚癌でのパピローマウイ ルスに特に当てはまる。 したがって、本発明の目的は、特に皮膚癌でのパピローマウイルスを検出可能 な試薬（Ｍｉｔｔｅｌ）を提供することにある。さらに、試薬は、これらのパピ ローマウイルスに対する治療段階をとることができるように提供されなければな らない。 本発明によれば、これは、請求の範囲の主題を提供することにより達成される 。 したがって、本発明の主題は、パピローマウイルス主要カプシド蛋白質（Ｌ１ ）のペプチドをコードするＤＮＡに関し、該ペプチドは、図１、図２、図３、図 ４、図５、図６、図７、図８、図９、図１０もしくは図１１のアミノ酸配列また は１個以上のアミノ酸がそれらとは異なるアミノ酸配列を含有する。 本発明のさらなる主題は、パピローマウイルス主要カプシド蛋白質のペプチド をコードするＤＮＡに関し、該ＤＮＡは、図１、図２、図３、図４、図５、図６ 、図７、図８、図９、図１０もしくは図１１の塩基配列または１個以上の塩基が それらとは異なる塩基配列を含有する。 図１は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生されるアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、プラスミドＤＬ １７として、ＤＳＭ（ドイチェ ザムルンク ホン ミクロオルガニスメン ウ ント ツェルクルツレン）に、１９９６年９月１７日にＤＳＭ１１１８０の下に 寄託された。 図２は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生されるアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、プラスミドＤＬ ２０として、ＤＳＭに、１９９６年９月１７日にＤＳＭ１１１８１の下に寄託さ れた。 図３は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生されるアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、プラスミドＤＬ ２７として、ＤＳＭに、１９９６年９月１７日にＤＳＭ１１１８２の下に寄託さ れた。 図４は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生されるアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、プラスミドＤＬ ３５として、ＤＳＭに、１９９６年９月１７日にＤＳＭ１１１８３の下に寄託さ れた。 図５は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生されるアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、プラスミドＤＬ ４０として、ＤＳＭに、１９９６年９月１７日にＤＳＭ１１１８４の下に寄託さ れた。 図６は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生されるアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、プラスミドＤＬ ７８として、ＤＳＭに、１９９６年９月１７日にＤＳＭ１１１８５の下に寄託さ れた。 図７は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生されるアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、プラスミドＤＬ ８２として、ＤＳＭに、１９９６年９月１７日にＤＳＭ１１１８６の下に寄託さ れた。 図８は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生されるアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、プラスミドＤＬ ８３として、ＤＳＭに、１９９６年９月１７日にＤＳＭ１１１８７の下に寄託さ れた。 図９は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生されるアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、プラスミドＤＬ ８４として、ＤＳＭに、１９９６年９月１７日にＤＳＭ１１１８８の下に寄託さ れた。 図１０は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配 列およびそれから派生されるアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、プラスミドＤ Ｌ１００として、ＤＳＭに、１９９６年９月１７日にＤＳＭ１１１８９の下に寄 託された。 図１１は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配 列およびそれから派生されるアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、プラスミドＨ Ｒ２２として、ＤＳＭに、１９９６年９月１７日にＤＳＭ１１１９０の下に寄託 された。 前記ＤＮＡを公知のパピローマウイルスのＤＮＡと比較した。配列ホモロジー 研究を行なった。９０％未満のホモロジーは、本発明のＤＮＡが新規ＨＰウイル スであることを示す。本発明のＤＮＡは、公知のパピローマウイルスに関して下 記配列ホモロジーを有する： 図１のＤＮＡ： ＨＰウイルス６５に関して６７％ 図２のＤＮＡ： ＨＰウイルス１７に関して６２％ 図３のＤＮＡ： ＨＰウイルス６５に関して７８％ 図４のＤＮＡ： 図５のＤＮＡ： ＨＰウイルス１０に関して８６％ 図６のＤＮＡ： ＨＰウイルス１０に関して８６％ 図７のＤＮＡ： ＨＰウイルス８に関して６２％ 図８のＤＮＡ： ＨＰウイルス６５に関して６６％ 図９のＤＮＡ： ＨＰウイルス６５に関して６４％ 図１０のＤＮＡ：ＨＰウイルス１５に関して７５％ 図１１のＤＮＡ：ＨＰウイルス２２および２３それぞれに関して８１％ 本発明によれば、前記ＤＮＡをベクターおよび発現ベクターそれぞれに存在さ せることができる。当業者であればそれらの例に精通している。大腸菌の発現ベ クターの場合、これらは、ｐＧＥＭＥＸ、ｐＵＣ誘導体、ｐＧＥＭ−Ｔおよびｐ ＧＥＸ−２Ｔ等である。酵母での発現に関しては、例えば、ｐＹ１００およびＹ ｃｐａｄ１が挙げられ、一方、動物細胞での発現に関しては、例えば、ｐＫＣＲ 、ｐＥＦ−ＢＯＳ、ｃＤＭ８およびｐＣＥＶ４が示される。 当業者であれば、発現ベクターに存在する前記ＤＮＡを発現させる好適な細胞 を知っている。かかる細胞の例には、大腸菌株ＨＢ１０１、ＤＨ１、ｘ１７７６ 、ＪＭ１０１、ＪＭ１０９およびＸＬ１−Ｂｌｕｅ、酵母株サッカロミセス・セ レビシエならびに動物細胞Ｌ、ＮＨ−３Ｔ３、ＦＭ３Ａ、ＣＨＯ、ＣＯＳ、Ｖｅ ｒｏおよびＨｅＬａが含まれる。 当業者であれば、前記ＤＮＡを発現ベクターにどのように挿入すべきかを知っ ている。また、当業者は、前記ＤＮＡが融合蛋白質の型で発現できるように、前 記ＤＮＡを別の蛋白質およびペプチドそれぞれをコードするＤＮＡと連結して挿 入できるという事実にも精通している。 本発明のさらなる主題は、前記ＤＮＡを含有するパピローマウイルスゲノムに 関する。「パピローマウイルスゲノム」という用語は、不完全ゲノム、即ち、前 記ＤＮＡを含有するパピローマウイルスゲノムの断片をも含む。これは、例えば 、Ｌ１をコードするＤＮＡまたはその一部であってもよい。 慣用のプロセスを用いて、前記パピローマウイルスゲノムを提供することがで きる。下記プロセス工程： （ａ）上皮新生物の生検材料から全ＤＮＡを単離する工程、 （ｂ）工程（ａ）の全ＤＮＡを前記ＤＮＡとハイブリダイズして、工程（ａ）の 全ＤＮＡに含まれるパピローマウイルスゲノムを検出する工程、および （ｃ）パピローマウイルスゲノムを含む工程（ａ）の全ＤＮＡをベクターにクロ ーニングして、得られたクローン体を任意にサブクローニングする工程で あり、すべてのプロセス工程は、共通のＤＮＡ組換え技術に由来するもの である、 を含むプロセスを用いることが好ましい。 細胞ＤＮＡの単離、ハイブリダイゼーションおよびクローニングに関する限り 、サムブルック(Sambrook)ら、Molecular Cloning，A Laboratory Mannual，第 ２版、Cold Spring Harbor Laboratory（1989）を補遺により参照する。 「上皮新生物」という用語は、ヒトおよび動物におけるいかなる上皮新生物を も含む。かかる新生物の例は、いぼ、性器部のコンジロームおよび皮膚癌である 。後者を用いて、前記パピローマウイルスゲノムを単離することが好ましい。 「ベクター」という用語は、染色体ＤＮＡおよび染色体外ＤＮＡそれぞれをク ローニングするのに適したいかなるベクターをも含有する。かかるベクターの例 は、ｐＷＥ１５およびＳｕｐｅｒ Ｃｏｓ１等のコスミド、λＺＡＰ Ｅｘｐｒ ｅｓｓベクター、λＺＡＰIIベクターおよびλｇｔ１０ベクター等λファージの ようなファージである。本発明の場合、λファージを用いることが好ましい。前 記ベクターは公知であり、Stratagene社から入手可能である。 本発明のパピローマウイルスゲノムは、染色体ＤＮＡに組み込まれた型で存在 してもよく、染色体外様式で存在してもよい。当業者は、その解明に役に立つプ ロセスに精通している。また、当業者は、パピローマウイルスゲノムのクローニ ングに最適の制限酵素の発見に役に立つプロセスにも精通している。当業者は、 公知のパピローマウイルスゲノムにより形勢を見定めるであろう。特に、当業者 は、前記ＨＰウイルスに対して相当の注意を払うであろう。 ＤＬ１７−Ｇと称するパピローマウイルスゲノムの提供を、実施例により説明 する。この目的のために、扁平上皮細胞癌の生検材料から全ＤＮＡを単離し、Ｂ ａｍＨＩで切断して、アガロースゲルで電気泳動により分離する。次いで、該ア ガロースゲルをブロッティング法に供して、ＤＮＡをニトロセルロース膜に転写 する。該膜を、図１のＤＮＡを標識試料として用い、任意にＨＰウイルス６５の ＤＮＡと組み合わせてハイブリダイゼーション法を行なう。全ＤＮＡに存在する パピローマウイルスＤＮＡとのハイブリダイゼーションが得られる。 さらに、ＢａｍＨＩにより切断された前記全ＤＮＡを、λファージにクローニ ングする。対応するクローン、即ち、パピローマウイルスＤＮＡを含むクローン を、図１のＤＮＡとのハイブリダイゼーション、あるいは任意にＨＰウイルス６ ５のＤＮＡとの組み合わせのハイブリダイゼーションにより同定する。次いで、 これらのクローンの挿入物を、プラスミドベクターでのさらなるクローニングに 供して、パピローマウイルスゲノムＤＬ１７−Ｇを含むクローンを得る。該ゲノ ムをシーケンスにより確認する。 同様に、さらなるパピローマウイルスゲノムが提供される。それらを、その提 供のために用いたＤＮＡに従って、それぞれ、ＤＬ２０−Ｇ、ＤＬ２７−Ｇ、Ｄ Ｌ３５−Ｇ、ＤＬ４０−Ｇ、ＤＬ７８−Ｇ、ＤＬ８２−Ｇ、ＤＬ８３−Ｇ、ＤＬ ８４−Ｇ、ＤＬ１００−ＧおよびＨＲ２２−Ｇと称する。 本発明のさらなる主題は、前記パピローマウイルスゲノムによりコードされる 蛋白質に関する。かかる蛋白質は、例えば、主要カプシド蛋白質（Ｌ１）または 副カプシド蛋白質（Ｌ２）である。前記蛋白質は、常法で調製される。パピロー マウイルスゲノムＤＬ１７−ＧのＬ１およびＬ２それぞれの調製を、実施例によ り説明する。この目的のために、図１のＤＮＡに関連するＨＰウイルス６５を用 いる。全配列および蛋白質をコードする個々のＤＮＡ領域の位置は、それに関連 して公知である。これらのＤＮＡを、両ゲノムの並行制限切断ならびにＬ１およ びＬ２それぞれをコードするＤＮＡに関する種々の断片とのその後のハイブリダ イゼーションによりパピローマウイルスゲノムＤＬ１７−Ｇ上に同定する。それ らをシーケンスにより確認する。Ｌ１をコードするＤＮＡをＤＬ１７−Ｇ−Ｌ１ ＤＮＡと称し、Ｌ２をコードするＤＮＡをＤＬ１７−Ｇ−Ｌ２ ＤＮＡと称す る。 さらに、Ｌ１およびＬ２をそれぞれコードするＤＮＡを発現ベクターに挿入す る。その例は、大腸菌、酵母および動物細胞に関して前記したものである。特に 、大腸菌での発現に関してベクターｐＧＥＸ−２Ｔ（キルンバウアーら、前述を 参照のこと）が参照される。ＤＬ１７−Ｇ−Ｌ１ ＤＮＡおよびＤＬ１７−Ｇ− Ｌ２ ＤＮＡを挿入して、ｐＧＥＸ−２Ｔ−ＤＬ１７−Ｇ−Ｌ１およびｐＧＥＸ −２Ｔ−ＤＬ１７−Ｇ−Ｌ２をそれぞれ得る。大腸菌を形質転換した後、これら の発現ベクターは、グルタチオンＳトランスフェラーゼ Ｌ１融合蛋白質および グルタチオンＳトランスフェラーゼ Ｌ２融合蛋白質をそれぞれ発現する。常法 により該蛋白質を精製する。 バキュロウイルス系およびワクシニアウイルス系それぞれは、前記Ｌ１および Ｌ２をそれぞれコードするＤＮＡのさらなる発現に関して言及される。この目的 のために使用可能な発現ベクターは、バキュロウイルス系に対してｐＥＶ ｍｏ ｄ．およびｐＳｙｎｗｔＶＩ^-等である（キルンバウアーら、前述を参照のこと ）。ワクシニアウイルス系について、ワクシニアウイルス「初期」（ｐ７．５ｋ ）プロモーターおよび「後期」（Ｐｓｙｎｔｈ、ｐ１１Ｋ）プロモーターそれぞ れを有するベクターが特に言及される（ハーゲンジー（Hagensee，M.，E.）ら、 Journal of Virology，(1993)，315-322頁を参照のこと）。本発明の場合、バキ ュロウイルス系が好ましい。前記Ｌ１およびＬ２をそれぞれコードするＤＮＡを ｐＥＶ ｍｏｄ．に挿入して、ｐＥＶｍｏｄ．−ＤＬ１７−Ｇ−Ｌ１およびｐＥ Ｖ ｍｏｄ．−ＤＬ１７−Ｇ−Ｌ２を得る。 かかる前者の発現ベクターまたは両発現ベクターは、共にＳＦ−９昆虫細胞へ の感染後にウイルス様粒子を形成するようになる。前者の場合、かかる粒子はＬ １蛋白質を含有し、一方、後者の場合、それは、Ｌ１蛋白質に加えＬ２蛋白質を 含む。 また、後者の場合のウイルス様粒子は、前記ＤＬ１７−Ｇ−Ｌ１およびＤＬ１ ７−Ｇ−Ｌ２をともに発現ベクターｐＳｙｎｗｔＶＩ^-に挿入して、得られたｐ ＳｙｎｗｔＶＩ^-ＤＬ１７−Ｇ−Ｌ１／Ｌ２を用いてＳＦ−９昆虫細胞を感染す ることによっても得られる。前記ウイルス様粒子を常法により精製する。また、 それらも本発明の主題を表す。 本発明のさらなる主題は、前記蛋白質およびウイルス様粒子それぞれに対する 抗体に関する。該抗体の調製は、常法により行なう。ＤＬ１７−ＧのＬ１を含有 するウイルス様粒子に対する抗体の調製に関する実施例により説明する。この目 的のために、ウイルス様粒子をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下注射する。この注射を ３週間毎の間隔で繰り返す。最後の注射の約２週間後に、抗体を含む血清を単離 し、常法により試験する。 好ましい態様において、抗体はモノクローナル抗体である。その調製のために は、前記４回目の注射後にマウスから脾臓細胞を取り出し、常法により骨髄腫細 胞と融合させる。また、公知の方法に従ってさらなるクローニングを行なう。 本発明により、パピローマウイルス、特に皮膚癌におけるパピローマウイルス を検出することが可能である。この目的のために、本発明のＤＮＡをこのように 、またはさらなるＤＮＡを含有した場合に用いることができる。また、後者は、 パピローマウイルスゲノムまたはその一部であってもよい。 また、本発明は、以前は知られていないパピローマウイルスの提供を可能にす る。それらは、特に皮膚癌に見出される。また、本発明は、これらのパピローマ ウイルスに由来する蛋白質およびウイルス様粒子を提供する。さらに、これらの 蛋白質および粒子それぞれに対する抗体が提供される。 また、本発明は、パピローマウイルス疾患の場合に診断および治療段階を行な うことを可能にする。さらに、パピローマウイルス感染に対するワクチンを作製 する可能性を提供する。したがって、本発明は、パピローマウイルス研究の分野 での躍進を表す。 本発明を実施例により説明する。実施例１：パピローマウイルスゲノムＤＬ１７−Ｇの同定 扁平上皮細胞癌の生検材料から全ＤＮＡを単離する。このＤＮＡの１０μｇを 制限酵素ＢａｍＨＩで切断し、０．５％アガロースゲルで電気泳動により分離す る。同時に、切断されていなかった前記ＤＮＡ１０μｇも分離する。該アガロー スゲルをブロッティング法に供して、ＤＮＡをアガロースゲルからニトロセルロ ース膜に転写する。該膜を、図１の前記ＤＮＡをＨＰウイルス６５ＤＮＡと組み 合わせてＰ³²標識試料として用いるハイブリダイゼーション法に使用する。ブロ ットされたＤＮＡとのハイブリダイゼーションが得られる。 ＤＮＡ組換え技術の分野に熟練せる者は、前記方法に精通している。補遺によ り前述のサムブルックらが参照される。実施例２：パピローマウイルスゲノムＤＬ１７−Ｇのクローニング 実施例１で得られた生検材料ＤＮＡを制限酵素ＢａｍＨＩで切断する。得られ た断片を、ＢａｍＨＩで切断され脱リン酸化されたベクターλＺＡＰ Ｅｘｐｒ ｅｓｓも存在するリガーゼ反応に用いる。得られた組換えＤＮＡ分子をバクテリ オファージにパッケージングし、細菌の感染に用いる。これらのプロセス工程に 関して、Stratagene社から提供されるＺＡＰ Ｅｘｐｒｅｓｓベクターキットを 用いる。次いで、得られたファージプラークを、実施例１で用いるＰ³²標識した 図１のＤＮＡをＰ³²標識したＨＰウイルス−６５ＤＮＡと組み合わせて使用する ハイブリダイゼーションプロセスに供する。対応するファージプラークとのハイ ブリダイゼーションが得られる。ＤＬ１７−ＧのＢａｍＨＩ断片をそこから単離 し、ＢａｍＨＩ切断脱リン酸化プラスミドｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔとともにさら なるリガーゼ反応に用いる。得られた組換えＤＮＡ分子を用いて、細菌、大腸菌 ＸＬ１−Ｂｌｕｅを形質転換する。制限切断および前記ＤＮＡ試料とのハイブリ ダイゼーションそれぞれにより、パピローマウイルスゲノムＤＬ１７−Ｇを含む 細菌クローンを同定する。この細菌クローンのプラスミドを、ｐＢｌｕｅ−ＤＬ １７−Ｇと称する。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】平成１０年１０月２９日（１９９８．１０．２９） 【補正内容】 請求の範囲 １． パピローマウイルス主要カプシド蛋白質のペプチドをコードするＤＮＡで あって、該ペプチドは、図１、図２、図３、図４、図５、図６、図７、図８、図 ９、図１０もしくは図１１のアミノ酸配列または１個以上のアミノ酸がそれらと は異なるアミノ酸配列を含有し、下記プロセス工程： （ａ）上皮新生物の生検材料から全ＤＮＡを単離する工程、 （ｂ）工程（ａ）の全ＤＮＡを図１、図２、図３、図４、図５、図６、図７、図 ８、図９、図１０もしくは図１１のＤＮＡとハイブリダイズして、工程（ ａ）の全ＤＮＡに含まれるパピローマウイルスゲノムを検出する工程、な らびに （ｃ）パピローマウイルスゲノムを含む工程（ａ）の全ＤＮＡをベクターにクロ ーニングして、該クローンの配列を決定する工程 により得られうるＤＮＡ。 ２． パピローマウイルス主要カプシド蛋白質のペプチドをコードするＤＮＡが 図１、図２、図３、図４、図５、図６、図７、図８、図９、図１０もしくは図１ １の塩基配列または１個以上の塩基対がそれらとは異なる塩基配列を含有し、下 記プロセス工程： （ａ）上皮新生物の生検材料から全ＤＮＡを単離する工程、 （ｂ）工程（ａ）の全ＤＮＡを図１、図２、図３、図４、図５、図６、図７、図 ８、図９、図１０もしくは図１１のＤＮＡとハイブリダイズして、工程（ ａ）の全ＤＮＡに含まれるパピローマウイルスゲノムを検出する工程、な らびに （ｃ）パピローマウイルスゲノムを含む工程（ａ）の全ＤＮＡをベクターにクロ ーニングして、該クローンの配列を決定する工程 により得られうるＤＮＡ、かつ、公知のＨＰウイルスのＤＮＡに関して９０％未 満のホモロジーを有するＤＮＡであることを特徴とする請求項１記載のＤＮＡ。 ３．ＤＮＡがパピローマウイルスゲノムを含有することを特徴とする請求項１ま たは２記載のＤＮＡ。 ４． 請求項３記載のパピローマウイルスゲノムによりコードされる蛋白質。 ５． パピローマウイルス主要カプシド蛋白質がウイルス様粒子として存在する ことを特徴とする請求項４記載の蛋白質。 ６． ウイルス様粒子がパピローマウイルス副カプシド蛋白質をさらに含むこと を特徴とする請求項５記載の蛋白質。 ７． 請求項４記載の蛋白質をコードするＤＮＡを含有してなる発現ベクター。 ８． 請求項７記載の発現ベクターを含む形質転換体。 ９． 請求項８記載の形質転換体を適当な条件下で培養する工程を含む、請求項 ４記載の蛋白質の調製方法。 １０． 請求項４〜６いずれか記載の蛋白質に対する抗体。 １１． 診断用試薬としての請求項１〜３いずれか記載のＤＮＡの使用。 １２． 診断、治療および／またはワクチン接種用試薬としての請求項４〜６い ずれか記載の蛋白質の使用。 １３． 診断がパピローマウイルス感染およびパピローマウイルス疾患それぞれ に関するものである請求項１１または１２記載の使用。 １４． 治療および／またはワクチン接種がパピローマウイルス感染およびパピ ローマウイルス疾患それぞれに関するものである請求項１２記載の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 48/00 Ａ６１Ｐ 31/20 Ａ６１Ｐ 31/20 Ｃ０７Ｋ 14/025 Ｃ０７Ｋ 14/025 16/08 16/08 Ｃ１２Ｎ 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｚ 5/10 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者 ツアー ハウゼン，ハラルド ドイツ連邦共和国 ヴァルトミヒェルバッ ハ デー―69483 アイヒェンシュトラー セ １ (72)発明者 ラフェルクネ，ドンナ ドイツ連邦共和国 フレルスハイム―ダル スハイム デー―67592 シュルベルク ７ (72)発明者 ベントン，クレール 英国 エジンバラ イーエイチ３ ９ワイ ダブリュ ローリストン ピー１，ザ ロ イヤル インファーマリー（番地なし)

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． パピローマウイルス主要カプシド蛋白質のペプチドをコードするＤＮＡで あって、該ペプチドは、図１、図２、図３、図４、図５、図６、図７、図８、図 ９、図１０もしくは図１１のアミノ酸配列または１個以上のアミノ酸がそれらと は異なるアミノ酸配列を含有し、下記プロセス工程： （ａ）上皮新生物の生検材料から全ＤＮＡを単離する工程、 （ｂ）工程（ａ）の全ＤＮＡを図１、図２、図３、図４、図５、図６、図７、図 ８、図９、図１０もしくは図１１のＤＮＡとハイブリダイズして、工程（ ａ）の全ＤＮＡに含まれるパピローマウイルスゲノムを検出する工程、な らびに （ｃ）パピローマウイルスゲノムを含む工程（ａ）の全ＤＮＡをベクターにクロ ーニングして、該クローンの配列を決定する工程 により得られうるＤＮＡ。 ２． パピローマウイルス主要カプシド蛋白質のペプチドをコードするＤＮＡが 図１、図２、図３、図４、図５、図６、図７、図８、図９、図１０もしくは図１ １の塩基配列または１個以上の塩基対がそれらとは異なる塩基配列を含有し、下 記プロセス工程： （ａ）上皮新生物の生検材料から全ＤＮＡを単離する工程、 （ｂ）工程（ａ）の全ＤＮＡを図１、図２、図３、図４、図５、図６、図７、図 ８、図９、図１０もしくは図１１のＤＮＡとハイブリダイズして、工程（ ａ）の全ＤＮＡに含まれるパピローマウイルスゲノムを検出する工程、な らびに （ｃ）パピローマウイルスゲノムを含む工程（ａ）の全ＤＮＡをベクターにクロ ーニングして、該クローンの配列を決定する工程 により得られうるＤＮＡであることを特徴とする請求項１記載のＤＮＡ。 ３．ＤＮＡがパピローマウイルスゲノムを含有することを特徴とする請求項１ま たは２記載のＤＮＡ。 ４． 請求項３記載のパピローマウイルスゲノムによりコードされる蛋白質。 ５． パピローマウイルス主要カプシド蛋白質がウイルス様粒子として存在する ことを特徴とする請求項４記載の蛋白質。 ６． ウイルス様粒子がパピローマウイルス副カプシド蛋白質をさらに含むこと を特徴とする請求項５記載の蛋白質。 ７． 請求項４記載の蛋白質をコードするＤＮＡを含有してなる発現ベクター。 ８． 請求項７記載の発現ベクターを含む形質転換体。 ９． 請求項８記載の形質転換体を適当な条件下で培養する工程を含む、請求項 ４記載の蛋白質の調製方法。 １０． 請求項４〜６いずれか記載の蛋白質に対する抗体。 １１． 診断用試薬としての請求項１〜３いずれか記載のＤＮＡの使用。 １２． 診断、治療および／またはワクチン接種用試薬としての請求項４〜６い ずれか記載の蛋自質の使用。 １３． 診断がパピローマウイルス感染およびパピローマウイルス疾患それぞれ に関するものである請求項１１または１２記載の使用。 １４． 治療および／またはワクチン接種がパピローマウイルス感染およびパピ ローマウイルス疾患それぞれに関するものである請求項１２記載の使用。