FI121507B - Tyyppiä 6A olevaa ihmisen papillomavirusta koodaava DNA - Google Patents
Tyyppiä 6A olevaa ihmisen papillomavirusta koodaava DNA Download PDFInfo
- Publication number
- FI121507B FI121507B FI971203A FI971203A FI121507B FI 121507 B FI121507 B FI 121507B FI 971203 A FI971203 A FI 971203A FI 971203 A FI971203 A FI 971203A FI 121507 B FI121507 B FI 121507B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- hpv6a
- dna
- nucleotides
- seq
- protein
- Prior art date
Links
- 241001502561 Human papillomavirus type 6a Species 0.000 title claims description 34
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 57
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 48
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 45
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 29
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 26
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 26
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 21
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 17
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 9
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 3
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 claims 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 88
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 38
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 21
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 20
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 19
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 19
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 18
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 18
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 18
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 14
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 13
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 13
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- 208000000260 Warts Diseases 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 201000010153 skin papilloma Diseases 0.000 description 8
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 8
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 206010059313 Anogenital warts Diseases 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 3
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 3
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 2
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 2
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N allantoin Chemical compound NC(=O)NC1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 2
- -1 elixirs Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 229920006324 polyoxymethylene Polymers 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 2
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 2
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 2
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- 239000002691 unilamellar liposome Substances 0.000 description 2
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NJNWCIAPVGRBHO-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyethyl-dimethyl-[(oxo-$l^{5}-phosphanylidyne)methyl]azanium Chemical class OCC[N+](C)(C)C#P=O NJNWCIAPVGRBHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N Allantoin Natural products NC(=O)N[C@@H]1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N 0.000 description 1
- 244000144927 Aloe barbadensis Species 0.000 description 1
- 235000002961 Aloe barbadensis Nutrition 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N Beta-Lactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N 0.000 description 1
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 description 1
- 101100129088 Caenorhabditis elegans lys-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000195628 Chlorophyta Species 0.000 description 1
- 101100007328 Cocos nucifera COS-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 208000007842 Fibroepithelial Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101100114742 Homo sapiens CPVL gene Proteins 0.000 description 1
- 101100484716 Homo sapiens VHLL gene Proteins 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 241000701646 Kappapapillomavirus 2 Species 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 101800001509 Large capsid protein Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000785747 Mavirus Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N Octadecylamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN REYJJPSVUYRZGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 208000009608 Papillomavirus Infections Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 description 1
- 101800000874 Small capsid protein Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BCKXLBQYZLBQEK-KVVVOXFISA-M Sodium oleate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC([O-])=O BCKXLBQYZLBQEK-KVVVOXFISA-M 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- FHHZHGZBHYYWTG-INFSMZHSSA-N [(2r,3s,4r,5r)-5-(2-amino-7-methyl-6-oxo-3h-purin-9-ium-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl [[[(2r,3s,4r,5r)-5-(2-amino-6-oxo-3h-purin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl] phosphate Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1[N+]([C@H]1[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=C(C(N=C(N)N4)=O)N=C3)O)O1)O)=CN2C FHHZHGZBHYYWTG-INFSMZHSSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 229930185472 acuminatum Natural products 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 229960000458 allantoin Drugs 0.000 description 1
- 235000011399 aloe vera Nutrition 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical class N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 208000012999 benign epithelial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012216 bentonite Nutrition 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940105329 carboxymethylcellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008472 epithelial growth Effects 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000004374 forensic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000000887 hydrating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical class [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- ADKOXSOCTOWDOP-UHFFFAOYSA-L magnesium;aluminum;dihydroxide;trihydrate Chemical compound O.O.O.[OH-].[OH-].[Mg+2].[Al] ADKOXSOCTOWDOP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229940078555 myristyl propionate Drugs 0.000 description 1
- 229920001206 natural gum Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000007935 oral tablet Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 238000013492 plasmid preparation Methods 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920002721 polycyanoacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M sodium octadecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- YRZGMTHQPGNLEK-UHFFFAOYSA-N tetradecyl propionate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCOC(=O)CC YRZGMTHQPGNLEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012049 topical pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 1
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 1
- 229930195724 β-lactose Natural products 0.000 description 1
- PAPBSGBWRJIAAV-UHFFFAOYSA-N ε-Caprolactone Chemical compound O=C1CCCCCO1 PAPBSGBWRJIAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Oncology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Tyyppiä 6A olevaa ihmisen papillomavirusta koodaava DNA Viittaus muihin hakemuksiin Tämä on tällä hetkellä vireillä olevan, 22. syys-5 kuuta 1994 jätetyn US-patenttihakemuksen, jonka sarjanumero on 08/310 468, jatkohakemus.
Keksinnön ala
Esillä olevan keksinnön kohteena ovat tyyppiä 6A olevaa puhdasta ihmisen papillomavirusta koodaavat DNA-10 molekyylit ja niiden johdannaiset.
Piirustusten lyhyt kuvaus
Kuvio 1 esittää HPV6a-nukleotidisekvenssiä. Keksinnön tausta
Papillomaviruksen (PV) aiheuttamia infektioita 15 esiintyy lukuisissa eläimissä, kuten ihmisissä, lampaissa, koirissa, kissoissa, kaneissa, apinoissa, käärmeissä ja lehmissä. Papillomavirukset infektoivat epiteelisoluja, ja ne aiheuttavat yleensä hyvänlaatuisia epiteeli- tai fibro-epiteelikasvaimia infektiokohdassa. PV-virukset ovat laji- ·· · • V 20 spesifisiä infektoivia aineita; ihmisen papillomavirus ei • · · ί : infektoi muita eläimiä.
··· :*·.· Papillomavirukset voidaan luokitella selviksi ryh- • · ••••j miksi sen perusteella, minkä isännän ne infektoivat. Ihmi- ί*. sen papillomavirukset (HPV) on luokiteltu edelleen useam- • ·· « ,···. 25 maksi kuin 70 erilaiseksi tyypiksi DNA-sekvenssin homolo- • · · gian perusteella. PV-tyypit näyttävät olevan tyyppispesi- ... f isiä immunogeenejä siinä suhteessa, että yhtä tyyppiä • · ··· olevan papillomaviruksen aiheuttamaa infektiota neutraloi - * va immuniteetti ei aiheuta immuniteettia toista tyyppiä 3O olevaa papillomavirusta vastaan.
• · .***. Eri HPV-tyypit aiheuttavat ihmisissä erilaisia sai- ·· · .* . rauksia. HPV-tyypit 1, 2, 3, 4, 7, 10 sekä 26 - 29 aiheut- • · i *· *| tavat hyvänlaatuisia syyliä sekä normaaleissa yksilöissä että yksilöissä, joiden immuunijärjestelmä on tukahtunut. 35 HPV-tyypit 5, 8, 9, 12, 14, 15, 17, 19 - 25, 36 sekä 46 - 2 50 aiheuttavat laakeita vioittumia yksilöissä, joiden immuunijärjestelmä on tukahtunut. HPV-tyypit 6, 11, 34, 39, 41 - 44 sekä 51 - 55 aiheuttavat hyvänlaatuisia visvasyyliä (kondulooma) sukupuolielinten ja hengityselinten lima-5 kalvolle. HPV-tyypit 16 ja 18 aiheuttavat sukupuolielinten limakalvolla epiteelin kasvuhäiriöitä, ja ne ovat osallisina suurimmassa osassa kohdunkaulan, emättimen, häpyseu-dun ja peräkanavan paikallisista ja kudoksiin tunkeutuvista syöpäsairauksista.
10 Papillomavirukset ovat pieniä (50 - 60 nm) , kote loi tumattomia, kaksikymmentahokkaan muotoisia DNA-viruk-sia, joihin on koodautunut korkeintaan kahdeksan varhaista ja kaksi myöhäistä geeniä. Virusperimän avoimista lukukehyksistä (open reading frame; ORF) käytetään merkintöjä 15 El - E7 sekä LI ja L2, missä "E" tarkoittaa varhaista (early) ja "L" tarkoittaa myöhäistä (late). LI ja L2 koo-daavat viruksen kapsidiproteiinia. Varhaisiin geeneihin (E) liittyyy sellaisia toimintoja kuin viruksen replikaa-tio ja solun transformaatio.
M · ; V 2 0 LI-proteiini on huomattavin kapsidiproteiini ja sen ··· molekyylipaino on 55 - 60 kDa. L2-proteiini on vähäinen kapsidiproteiini, jonka ennustettu molekyylipaino on 55 - • · •j··· 60 kDa ja jonka ilmeinen molekyylipaino on 75 - 100 kDa elektroforeettisesti polyakryyliamidigeelillä määritetty- • 25 nä. Immunologisten tietojen perusteella voidaan päätellä, • · · että suurin osa L2-proteiinista sijaitsee Ll-proteiinin ... sisällä. LI ORF on säilynyt hyvin samanlaisena eri papil- • · lomavirusten keskuudessa. L2-proteiinit ovat säilyneet vähemmän samanlaisina eri papillomavirusten keskuudessa.
•Y: 30 LI- ja L2-geenit on tunnistettu immunologisen en- • · naltaehkäisyn hyviksi kohteiksi. Samoin ollaan osoitettu, ··· .* . että eräät näistä varhaisista geeneistä ovat mahdollisia • · · *· kohteita rokotteita kehitettäessä. Erään kanilajin (cot- * * tontail rabbit) papillomavirukseen (CRPV) ja naudan papil- 35 lomavirukseen (BPV) perustuvilla järjestelmillä toteutetut 3 tutkimukset ovat osoittaneet, että immunointi näillä proteiineilla, jotka on ilmennetty bakteereissa, tai vacci-nia-vektoreita käyttäen suojasi eläimet virusinfektiolta. Papillomaviruksen LI-geenien ilmentäminen bakulovirukseen 5 perustuvissa ilmentämisjärjestelmissä tai vaccinia-vekto-reita käyttäen johti viruksen kaltaisten hiukkasten (vi-rus-like particles; VLP) kerääntymiseen, joiden hiukkasten avulla on aiheutettu virusta neutraloivia suuritiitterisiä vasta-ainevasteita, jotka korreloivat virusaltistusta vas-10 taan saadun suojan kanssa.
HPV6 ja HPV11, jotka osallistuvat vain harvoin pahanlaatuisiin tiloihin, aiheuttavat noin 90 % suipon visvasyylän (condyloma acuminata) tapauksista, joka suippo visvasyylä on hengityselinten ja sukupuolielinten hyvän-15 laatuinen vaurio. HPV6-virus todetaan kolme kertaa useammin näissä vaurioissa kuin HPV11.
HPV6b:n, joka on ensimmäinen HPV6-eriste, täydellinen nukleotidisekvenssi on määritetty (Schwarz, E., et ai., 1983, EMBO J 2:2341-8). Muita HPV6-alatyyppejä on • · · : .· 20 tunnistettu restriktioentsyymeillä tuotettujen pilkkoutu- • · · miskuvioiden perusteella. (Gissmann, L., et ai., 1983, :/.: Proc. Natl. Acad. Sei. USA 80:560-3; Mounts, P., et ai., ·:··: 1982, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 79: 5425-9).
♦\# Useat tutkimusryhmät ovat osoittaneet, että HPV6a • .·;·. 25 on se pääasiallinen alatyyppi, joka todetaan yhdysvalta- • · · « laisten ja eurooppalaisten potilaiden visvasyylästä (con- ... dyloma acuminatum) otetuissa kudosnäytteissä. Jokin aika • · ***. sitten julkaistussa tutkimuksessa esitetään, että HPV6a on HPV-prototyyppi (Kitasato, H., et ai., 1994, J. Gen. 30 Virol. 75:1157 - 1162) . Alalla arvioidaan, että pelkästään Yhdysvalloissa noin 1 % kaikista 15 - 49-vuotiaista mie- • · · .* . histä ja naisista käyvät lääkärissä visvasyylän takia.
• · · • ♦· * * Tälle sairaudelle, johon HPV osallistuu, ei ole valitetta vasti olemassa mitään tehokasta hoitoa. Näin ollen rokote 35 olisi hyvin toivottava. Ennalta ehkäisevän tai hoitavan 4 rokotteen kehittämisen kannalta kaikkein yleisimpien HPV-alatyyppien myöhäisten ja varhaisten geenien sekvenssin määrittäminen on kuitenkin ratkaisevan tärkeää.
HPV6a:n rajallinen sekvenssi-informaatio liittyy 5 pitkään säätelyalueeseen (long control region: LCR) sekä lukukehyksiin E6 ja E7 ORF. Esillä olevassa hakemuksessa kuvataan HPV6a:n kloonaaminen visvasyylänäytteestä, sen täydellisen virus-DNA-sekvenssin määritys ja HPV6a:n suurten avoimien lukukehysten (ORF) vastaavat aminohapposek-10 venssit.
Esillä olevan keksinnön kohteena ovat tyyppiä 6a (HPV-tyyppi 6a; HPV6a) olevaa puhdasta ihmisen papilloma-virusta koodaavat DNA-molekyylit ja näiden DNA-molekyylien käyttö.
15 Keksinnön yhteenveto
Esillä olevan keksinnön kohteena ovat tyyppiä 6a (HPV-tyyppi 6a; HPV6a) olevaa puhdasta ihmisen papilloma-virusta koodaavat DNA-molekyylit ja niiden johdannaiset. Keksinnön yksityiskohtainen kuvaus ·· · • V 20 Esillä olevan keksinnön kohteena ovat tyyppiä 6a (HPV-tyyppi 6a; HPV6a) olevaa puhdasta ihmisen papillo- :*·.· mavirusta koodaavat DNA-molekyylit ja niiden johdannai- • · ····’· set. Näistä johdannaisista voidaan mainita tämän DNA:n :·. koodaamat peptidit ja proteiinit, tämän DNA:n vasta-aineet • · · .·;·. 25 tai tämän DNA:n koodaamien proteiinien vasta-aineet, tätä • · · DNA:ta käsittävät rokotteet tai tämän DNA:n koodaamia pro- ... teiineja käsittävät rokotteet, tätä DNA:ta tai tämän DNA:n • · *···| koodaamia proteiineja käsittävät immunologiset koostumuk set, tätä DNA:ta, tästä DNA:sta saatua RNA:ta tai tämän 3 0 DNA:n koodaamia proteiineja käsittävät reagenssipakkauk- • · .***. set, näihin kuitenkaan rajoittumatta.
• · · .· . HPV6 on visvasyylän (condyloma acuminata; hengitys- • · · *· *j elinten ja sukupuolielinten hyvänlaatuinen vaurio) pää- ’ * asiallinen aiheuttaja. HPV6b:n, joka on ensimmäinen HPV6- 35 eriste, täydellinen nukleotidisekvenssi on määritetty.
5
Muita HPV6-alatyyppejä on tunnistettu restriktioentsyy-meillä tuotettujen pilkkoutumiskuvioiden perusteella.
Useat tutkimusryhmät ovat osoittaneet, että HPV6a on se pääasiallinen alatyyppi, joka todetaan yhdysvalta-5 laisten ja eurooppalaisten potilaiden visvasyylästä (condyloma acuminatum) otetuissa kudosnäytteissä. Alalla on arvioitu, että pelkästään Yhdysvalloissa noin 1 % kaikista 15 - 49-vuotiaista miehistä ja naisista käyvät lääkärissä visvasyylän takia. Tälle sairaudelle, johon HPV osallis-10 tuu, ei ole valitettavasti olemassa mitään tehokasta hoitoa. Näin ollen rokote olisi hyvin toivottava. Ennalta ehkäisevän tai hoitavan rokotteen kehittämisen kannalta kaikkein yleisimpien HPV-alatyyppien myöhäisten ja varhaisten geenien sekvenssin määrittäminen on kuitenkin rat-15 kaisevan tärkeää.
HPV6a:n rajallinen sekvenssi-informaatio liittyy pitkään säätelyalueeseen (long control region: LCR) sekä lukukehyksiin E6 ja E7 ORF. Esillä olevassa hakemuksessa kuvataan HPV6a:n kloonaaminen visvasyylänäytteestä, sen ·· · • V 20 täydellisen virus-DNA-sekvenssin määritys ja HPV6a:n suur- • · · ten avoimien lukukehysten (ORF) vastaavat aminohapposek- :*·.· venssit. Esillä olevan keksinnön kohteena ovat tyyppiä 6a • · ·:··· olevaa puhdasta ihmisen papillomavirusta koodaavat DNA- molekyylit ja näiden DNA-molekyylien johdannaiset.
• ,···. 25 Tätä DNArta tai tämän DNA:n koodaamia proteiineja • · · käsittävät, farmaseuttisesti käyttökelpoiset koostumukset ... voidaan valmistaa tunnettujen menetelmien mukaisesti, esi- • » ***. merkiksi sekoittamalla niihin farmaseuttisesti hyväksyttä- . vää kantajaa. Esimerkkejä tällaisista kantajista ja vai- • · 3 0 mistusmenetelmistä on löydettävissä teoksesta Remington's • · ·
Pharmaceutical Sciences. Tehokkaaseen antamiseen sopivan, .·. : farmaseuttisesti hyväksyttävän koostumuksen muodostamisek-
• M
,,.tj si tällaiset koostumukset sisältävät tehokkaan määrän pro- • · teiinia tai VLP-hiukkasia. Nämä koostumukset voivat sisäl- 6 tää proteiineja tai VLP-hiukkasia, jotka ovat peräisin useammasta kuin yhdestä HPV-tyypistä.
Keksinnön mukaisia hoitavia tai diagnostisia koostumuksia annetaan yksilölle määrinä, jotka riittävät PV-5 infektioiden hoitamiseksi tai diagnostoimiseksi. Tämä tehokas määrä voi vaihdella monista eri tekijöistä riippuen, joista tekijöistä voidaan mainita yksilön kunto, paino, sukupuoli ja ikä. Muista tekijöistä voidaan mainita antamistapa. Yleensä näitä koostumuksia annetaan noin alueella 10 1 /ig - 1 mg olevina annoksina.
Näitä farmaseuttisia koostumuksia voidaan antaa yksilölle monella eri tavalla, kuten ihonalaisesti, paikallisesti, suun kautta, limakalvon kautta, laskimonsisäisesti ja lihaksensisäisesti.
15 Keksinnön mukaiset rokotteet käsittävät DNA:ta, RNA:ta tai tämän DNA:n koodaamia proteiineja, jotka sisältävät isännässä neutraloivien vasta-aineiden muodostumiselle välttämättömiä antigeenisiä determinantteja. Tällaiset rokotteet ovat myös niin turvallisia, että niitä voi- ·· · • · i ί .* 20 daan antaa ilman kliinisen infektion vaaraa; niillä ei ole • · · ·...· myrkyllisiä sivuvaikutuksia; niitä voidaan antaa tehokasta • · ϊ/·ϊ reittiä pitkin; ne ovat pysyviä; ja ne sopivat yhteen ro- ·;··: kotekantajien kanssa.
·*·.. Näitä rokotteita voidaan antaa monella eri tavalla, 25 kuten suun kautta, ruuansulatuskanavan ulkopuolisesta, ihonalaisesti, limakalvon kautta, laskimonsisäisesti tai lihaksensisäisesti. Annettava annos voi vaihdella riippuen • · ***. yksilön kunnosta, sukupuolesta, painosta ja iästä; anta- mistavasta; sekä rokotteen PV-tyypistä. Rokotetta voidaan • · ϊ 30 käyttää sellaisina annostelumuotoina kuin kapseleina, sus- :***: pensioina, eliksiireinä tai nestemäisinä liuoksina. Rokot- ··· .*. teeseen voidaan sisällyttää immunologisesti hyväksyttävää • ·· * I kantaj aa.
Rokotteita annetaan terapeuttisesti tehokkaina mää-35 rinä, eli sellaisina määrinä, jotka riittävät tuottamaan 7 immuunologisesti suojaavan vasteen. Tämä terapeuttisesti tehokas määrä voi vaihdella PV-tyypistä riippuen. Rokote voidaan antaa vain yhtenä annoksena tai useina annoksina.
Esillä olevan keksinnön mukaista DNA:ta ja DNA-joh-5 dannaisia voidaan käyttää immunogeenisten koostumusten valmistuksessa. Kun tällaisia koostumuksia annetaan sopivalle isännälle, nämä koostumukset kykenevät saamaan aikaan isännässä immuunivasteen.
Tätä DNA:ta tai sen johdannaisia voidaan käyttää 10 vasta-aineiden tuottamiseksi. Ohessa käytetyllä käsitteellä "vasta-aine" tarkoitetaan sekä polyklonaalisia että monoklonaalisia vasta-aineita että niiden kappaleita, kuten Fv-, Fab-, sekä F(ab)2-kappaleita, jotka kykenevät sitomaan antigeenin tai hapteenin.
15 Esillä olevan keksinnön mukaista DNA:ta ja DNA-joh dannaisia voidaan käyttää HPV-infektion serotyypin selvittämiseksi ja HVP-seulonnassa. Tästä DNA:sta, yhdistelmä-DNA-teknisistä proteiineista, VLP-hiukkasista ja vasta-aineista voidaan muodostaa reagenssipakkauksia, joiden • · · ϊ ·* 20 avulla kyetään ilmaisemaan HPV ja määrittämään sen sero- • · · *...· tyyppi. Tällainen reagenssipakkaus käsittää lokerikon, • · :.*·· jossa vähintään yksi säiliö saadaan pidetyksi paikoillaan.
·:··: Tämä pakkaus voi käsittää lisäksi sellaisia reagensseja, ·*·.. kuten HPV6a DNA: ta, yhdistelmä-DNA-teknistä HPV-proteiinia • ·*ί*. 25 tai VLP-hiukkasia tai anti-HPV-vasta-aineita, joiden avul-
• · · ' J
la kyetään ilmaisemaan erilaisia HPV-tyyppejä. Tämä pak- .···. kaus voi myös sisältää ilmaisuvälineen, kuten leimattuja • · antigeenejä tai entsyymisubstraatteja tai vastaavia.
• · . Tätä DNA:ta ja siitä saatuja proteiineja käytetään • · V.· 30 myös molekyylipainon ja molekyylikoon merkkeinä.
• · · : : Geneettisen koodin deqeneroitumisen seurauksena .·) ; useampi kuin yksi kodoni voi koodata erityistä aminohap- • · · poa, ja näin ollen aminohapposekvenssi voi olla koodautu- • ♦ nut minkä tahansa samankaltaisten DNA-oligonukleotidien 35 joukkoon. Vain yksi tämän joukon jäsen on samanlainen kuin 8 HPV6a-sekvenssi, mutta se kykenee hydridisoitumaan HPV6a DNA:hän silloinkin, kun läsnä on asianmukaisissa olosuhteissa yhteensopimattomia DNA-oligonukleotidejä. Nämä yhteensopimattomat DNA-oligonukleotidit voivat edelleen hyb-5 ridisoitua muutetuissa olosuhteissa HPV6a DNA:han, mikä tekee mahdolliseksi HPV6A:ta koodaavan DNA:n tunnistamisen ja eristämisen.
Keksinnön mukaista puhdistettua HPV6a DNA:ta tai sen kappaleita voidaan käyttää muista lähteistä peräisin 10 olevien HPV6a-homologien ja -kappaleiden eristämiseksi ja puhdistamiseksi. Tätä varten ensimmäinen HPV6a DNA voidaan sekoittaa sopivissa hybridisaation olosuhteissa näytteeseen, joka sisältää HPV6a-homologeja koodaavaa DNA:ta. Hybridisoitunut DNA-kompleksi voidaan eristää ja homolo-15 gista DNA:ta koodaava DNA voidaan puhdistaa siitä.
Tunnettua on, että erityistä aminohappoa koodaavat eri kodonit vaihtelevat olennaisesti. Näin ollen keksinnön kohteena ovat myös ne DNA-sekvenssit, jotka sisältävät vaihtoehtoisia, lopulta luentaa samaksi aminohapoksi koo- • · t ί ·' 20 daavia kodoneja. Tässä kuvauksessa yhden tai useamman kor- ··· vautuneen kodonin käsittävä sekvenssi määritellään dege- • · *.*·· neroituneeksi muunnokseksi. Keksinnön piiriin kuuluvat *:*·: samoin joko DNA-sekvenssissä tai luetussa proteiinissa f*·., esiintyvät mutaatiot, jotka eivät muuta olennaisesti il- • 25 mentyneen proteiinin lopullisia fysikaalisia ominaisuuk- siä. Esimerkiksi leusiinin korvautuminen valiinilla, ly- .···. siinin korvautuminen arginiinilla, tai glutamiinin korvau- * · ***. tuminen asparagiinilla ei aiheuta välttämättä muutoksia • · . polypeptidin toiminnallisuudessa.
• · V.* 30 Tunnettua on, että peptidiä koodaavia DNA-sekvens- »·· i : sejä voidaan muuttaa siten, että ne koodaavat sellaista .·[ ; peptidiä, jonka ominaisuudet eroavat luonnossa esiintyvän • ·· I peptidin ominaisuuksista. Menetelmistä DNA-sekvenssien • · muuttamiseksi voidaan mainita kohdennettu mutageneesi tä-35 hän kuitenkaan rajoittumatta.
9
Ohessa HPV6a:n "toiminnallisella johdannaisella" tarkoitetaan sellaista yhdistettä, jonka biologinen aktiivisuus (joka on joko toiminnallista tai rakenteellista) on olennaisesti samankaltaista kuin HPV6a:n biologinen aktii-5 visuus. Käsitteellä "toiminnalliset johdannaiset" on tarkoitus ymmärtää HPV6a:n "kappaleita", "muunnoksia", "degeneroituneita muunnoksia", "analogeja" sekä "homologeja" tai "kemiallisia johdannaisia". Käsitteellä "kappale" tarkoitetaan mitä tahansa HPV6a:n polypeptidialajoukkoa. Kä-10 sitteellä "muunnos" tarkoitetaan molekyyliä, joka muistuttaa rakenteeltaan ja toiminnaltaan olennaisesti joko koko HPV6a-molekyyliä tai sen kappaletta. Molekyyli "muistuttaa olennaisesti" HPV6a:ta, mikäli näillä kummallakin molekyylillä on olennaisesti samankaltaiset rakenteet tai mikäli 15 kummallakin molekyylillä on samankaltainen biologinen aktiivisuus. Näin ollen, mikäli näillä kahdella molekyylillä on olennaisesti samankaltainen aktiivisuus, niin tällöin ne katsotaan muunnoksiksi silloinkin, kun yhden molekyylin rakennetta ei löydetä toisesta molekyylistä tai kun nämä • · · • ·’ 20 kaksi aminohapposekvenssiä eivät ole samanlaisia. Käsite ··· *...· "toiminnallinen johdannainen" ei sisällä HPVöb-sekvenssiä.
• · *.*·· Käsitteellä "analogi" viitataan molekyyliin, joka *:·*: muistuttaa toiminnaltaan olennaisesti joko koko HPV6a-mo- ·*·.. lekyyliä tai sen kappaletta.
• 25 Monia erilaisia menettelytapoja voidaan käyttää HPV6a DNA:n kloonaamiseksi molekyylitasolla. Näistä mene-telmistä voidaan mainita, näihin kuitenkaan rajoittumatta, • · ***. HPV6a-geenien suora toiminnallinen ilmentäminen sen jäi- • · , keen, kun on muodostettu HPV6a:n sisältävä cDNA-kirjasto • · 5.^1 30 tai perimä-DNA-kirjasto sopivaan ilmentämisvektorijärjes- telmään. Toinen menetelmä on seuloa bakteriofaagista tai ··· . plasmidista saatuun sukkulavektoriin muodostettu, HPV6a:n • ** ' * sisältävä cDNA-kirjasto tai perimä-DNA-kirjasto leimatulla oligonukleotidikoettimella, joka on toteutettu HPV6a:n 35 aminohapposekvenssin perusteella. Eräässä muussa menetel- 10 mässä seulotaan bakteriofagista tai plasmidista saatuun sukkulavektoriin muodostettu, HPV6a:n sisältävä cDNA-kir-jasto tai perimä-DNA-kirjasto HPV6a:ta koodaavalla osittaisella DNA:11a. Tämä osittainen DNA saadaan spesifi-5 seen polymeraasiketjureaktioon (PCR) perustuvalla HPV6a DNA-kappaleiden monistuksella toteuttamalla puhdistetun HPV6a:n aminohapposekvenssin perusteella degeneroituneita oligonukleotidialukkeita. Eräässä muussa menetelmässä RNA eristetään HPV6a:ta tuottavista soluista ja tämä RNA lue-10 taan proteiiniksi in vitro- tai in vivo -luentajärjestel-män avulla. RNA:n luenta peptidiksi tai proteiiniksi johtaa siihen, että muodostuu vähintään osa HPV6a-proteiinis-ta, joka voidaan tunnistaa esimerkiksi HPV6a-proteiinin aktiivisuuden perusteella tai sen ja anti-HPV6a-vasta-ai-15 neen välisen immunologisen reaktiivisuuden perusteella. Tässä menetelmässä HPV6a:ta tuottavista soluista eristetystä ja yhdistetystä RNA:sta voidaan analysoida sellaisen RNA:n läsnäolo, johon RNA:han on koodautunut vähintään osa HPV6a:sta. Tätä yhdistettyä RNA:ta voidaan jakaa edelleen • · · i *.· 20 fraktioiksi HPV6a-RNA:n puhdistamiseksi muusta kuin HPV6a ♦ *· ·...· RNA:sta. Tällä menetelmällä tuotettu peptidi tai proteiini voidaan analysoida sellaisten aminohapposekvenssien ai- *:··· kaansaamiseksi, joita aminohapposekvenssejä käytetään puo- "· lestaan alukkeiden saamiseksi HPV6a cDNA:n tuotantoa var- • · · 25 ten, tai luentaan käytetty RNA voidaan analysoida HPV6a:ta • · · koodaavien nukleotidisekvenssien aikaansaamiseksi sekä ... koettimien tuottamiseksi HPV6a cDNA-kirj aston seulomista • · • · ***. varten. Nämä menetelmät ovat tunnettuja alalla, ja ne ovat löydettävissä esimerkiksi teoksesta Sambrook, J. , Fritsch, ::: 30 E.F., Maniatis, T., Molecular Cloning: A Laboratory Ma- nual, toinen painos, Cold Spring Harbor Laboratory Press, • · · .* . Cold Spring Harbor, NY, 1989.
• · · • · · * \ On selvää, että myös muuntyyppiset kirjastot sekä muista soluista tai solutyypeistä muodostetut kirjastot 35 saattavat olla käyttökelpoisia HPV6a:ta koodaavan DNA:n 11 eristämiseksi. Näistä muuntyyppisistä kirjastoista voidaan mainita, näihin kuitenkaan rajoittumatta, muista, HPV-tyypin 6a sisältävistä soluista tai solulinjoista peräisin olevat cDNA-kirjastot sekä perimä-DNA-kirjasto.
5 cDNA-kirjastojen valmistus voidaan toteuttaa monel la eri tekniikalla. Tekniikoita cDNA-kirjaston muodostamiseksi on löydettävissä esimerkiksi edellä mainitusta J. Sambrookrin et ai. teoksesta. On ilmeistä, että HPV6a:ta koodaava DNA voidaan eristää myös sopivasta perimä-DNA-10 kirjastosta. Perimä-DNA-kirjaston muodostaminen voi tapahtua erilaisilla tekniikoilla. Tekniikoita perimä-DNA-kir-jaston muodostamiseksi on löydettävissä esimerkiksi edellä mainitusta J. Sambrook:in et ai. teoksesta.
Ohessa kuvatuilla menetelmillä saatu kloonattu 15 HPV6a DNA tai sen kappaleita voidaan ilmaista yhdistelmä-DNA-tekniikalla, molekyylikloonaamalla sopivan promoottorin ja muita asianmukaisia kopioitumista sääteleviä elementtejä sisältävään ilmentämisvektoriin ja siirtämällä prokarioottisiin tai eukarioottisiin isäntäsoluihin yhdis- : ·*: 2 0 telmä-DNA-teknisen HPV6a:n tuottamiseksi. Tekniikoita täi- • · laisten manipulointien toteuttamiseksi on kuvattu yksi- • · · • tyiskohtaisesti edellä mainitussa teoksesa Sambrook, J. et • · ai., ja ne ovat alalla tunnettuja.
• · ·· Ilmentämisvektorit kuvataan ohessa DNA-sekvensseik- • · • · · *... 25 si, joita tarvitaan kloonattujen geenikopioiden kopioimi- • · · * seksi ja niiden mRNA-sekvenssien lukemiseksi sopivassa isännässä. Tällaisia vektoreita voidaan käyttää eukarioot- • · *···* tisten geenien ilmentämiseksi erilaisissa isännissä, kuten ·’*· bakteereissa, viherlevässä, kasvisoluissa, hyönteissoluis- 30 sa, sienisoluissa ja eläinsoluissa. Erityisesti toteutet- • · .···. tujen vektoreiden avulla voidaan toteuttaa DNA:n sukku- • · • lointi isäntien välillä, kuten bakteeri- ja hiivasolujen • · · *. *ϊ tai bakteeri- ja eläinsolujen tai bakteeri- ja sienisolu- *·*’· jen tai bakteeri- ja selkärangattomista saatujen solujen 35 välillä. Sopivalla tavalla muodostetun ilmentämisvektorin 12 tulisi sisältää: replikaation lähtökohdan isäntäsolussa tapahtuvaa autonomista replikaatiota varten, valikoitavia merkkejä, rajallisen lukumäärän käyttökelpoisia restrik-tioentsyymien kohtia, kopioiden suuren lukumäärän mahdol-5 liseksi tekevän ominaisuuden sekä aktiivisia promoottoreita. Promoottori määritellään DNA-sekvenssiksi, joka ohjaa RNA-polymeraasia siten, että se sitoutuu DNA:hän ja että RNA-synteesi käynnistyy. Voimakas promoottori on sellainen, jonka vaikutuksesta mRNA:t aktivoituvat suurella 10 esiintymistiheydellä. Ilmentämisvektoreista voidaan mainita, näihin kuitenkaan rajoittumatta, kloonausvektorit, muokatut kloonausvektorit, erityisellä tavalla toteutetut plasmidit tai virukset.
Erilaisia nisäkkään ilmentämisvektoreita voidaan 15 käyttää HPV6a DNA:n tai sen kappaleiden ilmentämiseksi nisäkässoluissa. Kaupallisesti saatavista nisäkkään ilmentämisvektoreista, jotka soveltuvat HPV6a:n yhdistelmä-DNA-tekniseen ilmentämiseen, voidaan mainita, näihin kuitenkaan rajoittumatta, pcDNA3 (Invitrogen), pMClneo (Strata- • *.ϊ 20 gene) , pXTl (Stratagene) , pSG5 (Stratagene) , EBO-pSV2-neo ·/”: (ATCC 37593), pBPV-l(8-2) (ATCC 37110), pdBPV-MMTneo(342-
12) (ATCC 37224) , pRSVgpt (ATCC 37199) , pRSVneo (ATCC
• · 37198), pSV2-dhfr (ATCC 37146), pUCTag (ATCC 37460) sekä ;·. lambdaZD35 (ATCC 37565) .
• · · .·· 25 Monia erilaisia bakteereiden ilmentämisvektoreita • · · • · · voidaan käyttää HPV6a DNA:n tai sen kappaleiden ilmentämi- ... seksi bakteerisoluissa. Kaupallisesti saatavista, sopivis- • · ’···] ta bakteereiden ilmentämisvektoreista voidaan mainita, näihin kuitenkaan rajoittumatta, pETlla (Novagen), lambda 30 gtll (Invitrogen) , pcDNAII (Invitrogen) , pKK223-3 (Pharma- • · : : cia).
• · · .* . Monia erilaisia sienisolujen ilmentämisvektoreita • · · • · · • ; voidaan käyttää HPV6a:n tai sen kappaleiden ilmentämiseksi sienisoluissa. Kaupallisesti saatavista, sopivista sienien 35 ilmentämisvektoreista voidaan mainita, näihin kuitenkaan 13 rajoittumatta, pYES2 (Invitrogen) sekä Pichia-ilmentämis-vektori (Invitrogen).
Monia erilaisia hyönteissolujen ilmentämisvektorei-ta voidaan käyttää HPV6a DNA:n tai sen kappaleiden ilmen-5 tämiseksi hyönteissoluissa. Kaupallisesti saatavista, sopivista hyönteissolujen ilmentämisvektoreista voidaan mainita, näihin kuitenkaan rajoittumatta, pBlue Bac III (Invitrogen) .
HPV6a:ta tai sen kappaleita koodaavaa DNA:ta sisäl-10 tävää ilmentämisvektoria voidaan käyttää HPV6a-proteiinien tai HPV6a-proteiinikappaleiden ilmentämiseksi solussa, kudoksissa, elimissä tai eläimissä (ihminen mukaan lukien). Isäntäsolut voivat olla prokarioottisia tai eukariootti-sia, ja niistä voidaan mainita, näihin kuitenkaan rajoit-15 tumatta, bakteerit, kuten E. coli, sienisolut, kuten hiiva, nisäkässolut, joista voidaan mainita, näihin kuitenkaan rajoittumatta, ihmisestä, naudasta, siasta, apinas-ta ja jyrsijöistä saadut soluiinjat, sekä hyönteissolut, joista voidaan mainita, näihin kuitenkaan rajoittumatta, • · · j *.ϊ 20 Drosphilasta ja silkkimadosta saadut solulinjat. Sopivis- ta, nisäkäslajeista saaduista, kaupallisesti saatavista • · · :*·.· solulinjöistä voidaan mainita, näihin kuitenkaan rajoittu- • ·
....{ matta, L-Solut L-M (TK’) (ATCC CCL 1.3), L-solut L-M (ATCC
:·. CCL 1.2), 293 (ATCC CRL 1573), Raj i (ATCC CCL 86), CV-1 • · · 25 (ATCC CCL 70) , COS-1 (ATCC CRL 1650) , COS-7 (ATCC CRL 1651) , CHO-K1 (ATCC CCL 61) , 3T3 (ATCC CCL 92) , NIH/3T3 ... (ATCC CRL 1658) , HeLa (ATCC CCL 2) , C1271 (ATCC CRL 1616) , *···* BS-C-1 (ATCC CCL 26) sekä MCR-5 (ATCC CCL 171) .
* * Ilmentämisvektori voidaan viedä isäntäsoluihin yh- 30 dellä monista mahdollisista tekniikoista, joista voidaan • · .·**. mainita, näihin kuitenkaan rajoittumatta, transfektio, • · • · · .·. lipofektio, protoplastifuusio sekä sähköporaatio. Näiden • · · *· *! ilmentämisvektorin sisältävien solujen annetaan lisääntyä ** * kloonisesti, ja niistä analysoidaan yksitellen tuottavatko 35 ne HPV6a-proteiinia vai ei. HPV6a:ta ilmentävien isäntäso- 14 lukloonien tunnistaminen voi tapahtua eri tavoilla, joista voidaan mainita, näihin kuitenkaan rajoittumatta, immunologinen reaktiivisuus anti-HPV6a-vasta-aineiden kanssa sekä isäntäsoluun liittyvän HPV6a-aktiivisuuden läsnäolo, 5 kuten HPV6a-spesifiseen ligandiin sitoutuminen tai HPV6a-spesifisten ligandien ja HPV6a:n välisen vuorovaikutuksen välittämäksi vasteeksi määritelty signaalin siirto.
HPV DNA -kappaleiden ilmentäminen voidaan toteuttaa myös käyttäen in vitro -valmistettua synteettistä mRNA:ta 10 tai luonnollista mRNA:ta. Synteettinen mRNA tai HPV6a:ta tuottavista soluista eristetty mRNA voidaan lukea tehokkaasti erilaisissa soluttomissa järjestelmissä, joista voidaan mainita, näihin kuitenkaan rajoittumatta, vehnän-alkiouutteet sekä retikulosyyttiuutteet, ja se voidaan 15 lukea myös tehokkaasti soluihin perustuvissa järjestelmissä, joista voidaan mainita, näihin kuitenkaan rajoittumatta, mikroinjektio sammakon munasoluihin, jolloin mikroin-jektiota sammakon munasoluihin pidetään edullisena.
Sen jälkeen kun HPV6a-proteiinia (-proteiineja) on ·· · • \· 20 ilmentynyt isäntäsolussa, tämä HPV6a-proteiini voidaan ot- taa talteen siten, että saadaan HVP6a:ta puhtaassa muodos- ·*·.; sa. Erilaisia käyttökelpoisia menettelytapoja HPV6a:n puh- • · distamiseksi on saatavilla. Kuten ohessa kuvataan, yhdis-telmä-DNA-tekninen HPV6a-proteiini voidaan puhdistaa solu- • ·· [···' 25 hajotteista ja -uutteista käyttämällä yhdistelminä tai • · · yksitellen seuraavia menetelmiä: fraktiointi suolan avul- ... la, ioninvaihtokromatografia, koon perusteella erottava • · *···[ kromatograf ia, hydroksyyliapatiittiabsorptioon perustuva * * kromatografia ja hydrofobiseen vuorovaikutukseen perustuva 3 O kromatograf ia.
• · .**·. Lisäksi yhdistelmä-DNA-tekninen HPV6a voidaan erot- *·· .· . taa muista soluproteiineista käyttämällä immuuniaffini- • · · *· *| teettipylvästä, joka on tehty käyttäen juuri muodostuneen * * täysipituisen HPV6a:n tai HPV6a:n polypeptidikappaleiden 35 suhteen spesifistä monoklonaalista tai polyklonaalista 15 vasta-ainetta. Monoklonaalisia ja polyklonaalisia vasta-aineita voidaan valmistaa alalla tunnetuilla erilaisilla menetelmillä. Ohessa käytetty monoklonaalinen tai monospe-sifinen vasta-aine määritellään vain yhdeksi vasta-ainela-5 jiksi tai useaksi vasta-ainelajiksi, jolla on homogeenisia sitoutumisominaisuuksia HPV6a:n suhteen. Ohessa käytetyllä käsitteellä homogeeninen sitoutuminen viitataan antibioot-tilajin kykyyn sitoutua erityiseen antigeeniin tai epi-tooppiin.
10 Ilmeistä on, että menetelmiä monospesifisten vas ta-aineiden tuottamiseksi voidaan käyttää myös HPV6a-poly-peptidikappaleiden tai juuri muodostuneen täysipituisen HPV6a-polypeptidin suhteen spesifisten vasta-aineiden tuottamiseksi. Erityisesti on ilmeistä, että täysin toi-15 minnallisen HPV6a:n tai sen kappaleiden suhteen spesifisiä monospesifisiä vasta-aineita voidaan tuottaa.
Esillä olevan keksinnön kohteena ovat myös menetelmät sellaisten yhdisteiden seulomiseksi, jotka yhdisteet muuttavat HPV6a:ta koodaavan DNA:n tai RNA:n ilmentymistä ·· · •’.! 20 sekä HPV6a-proteiini(e)n toimintaa (toimintoja) in vivo.
:***: Nämä aktiivisuuksia muuttavat yhdisteet voivat olla DNA, ·♦· :*·.· RNA, peptidit, proteiinit tai muunlaiset kuin proteiini- • · maiset orgaaniset molekyylit. Yhdisteet voivat muuttaa voimistamalla tai vaimentamalla HVP6a:ta koodaavan DNA:n • ·· 25 tai RNA:n ilmentymistä tai HPV6a-proteiinin toimintaa.
• · ·
Yhdisteet, jotka muuttavat HPV6a:ta koodaavan DNA:n tai ... RNA:n ilmentymistä sekä HPV6a-proteiinin toimintaa, voi- • · *···* daan ilmaista erilaisilla määrityksillä. Tämä määritys voi * * olla yksinkertainen "kyllä/ei"-määritys, jolla määritetään 30 se, muuttuuko ilmentyminen tai toiminta vai ei. Tämä mää- • · .***. ritys voidaan tehdä kvantitatiiviseksi vertaamalla koe- ··· .· . näytteen ilmentymistä tai toimintaa standardinäytteellä • · · *· '1 saavutettuun ilmentymiseen tai toimintaan.
HVP6a DNA: ta, HVP6a DNA:n kappaleita, HVP6a DNA: ta 35 tai HPV6a-proteiinia vastaan vaikuttavia vasta-aineita, 16 HVP6a RNArta tai HPV6a-proteiinia sisältäviä reagenssi-pakkauksia voidaan valmistaa. Näiden reagenssipakkausten avulla voidaan ilmaista DNA, joka hybridisoituu HPV6a DNA:hän, tai niiden avulla voidaan ilmaista HPV6a-proteii-5 ni(e)n tai peptidikappaleiden läsnäolo näytteessä. Tällainen määritys on käyttökelpoinen erilaisissa sovellutuksissa, joista voidaan mainita oikeusanalyysit ja epidemiologiset tutkimukset, näihin kuitenkaan rajoittumatta.
HPV6a:ta koodaavan DNA-sekvenssin täydentävät vas-10 tinnukleotidisekvenssit voidaan syntetisoida "antisense"-hoitoa varten. Nämä vastasuuntaiset molekyylit voivat olla DNA:ta, DNA:n pysyviä johdannaisia, kuten fosforotioaatte-ja tai metyylitosfonaatteja, RNA:ta, RNA:n pysyviä johdannaisia, kuten 2'-O-alkyyliRNA:ta, tai jokin muu HPV6a:n 15 vastasuuntainen oligonukleotidijäljitelmä. Vastasuuntaiset HPV6a-molekyylit voidaan siirtää soluihin mikroinjektiol-la, liposomikapseloinnilla tai ilmentämällä vektoreista, jotka käsittävät tällaisen vastasuuntaisen sekvenssin. HPV6a-"antisense"-hoito voi olla erityisen käyttökelpoinen • · · • V 20 hoidettaessa sairauksia, joissa on edullista heikentää : : HPV6a:n aktiivisuutta.
··· :*·.· Käsitteellä "kemiallinen johdannainen" kuvataan • ♦ ·..·· molekyyliä, joka sisältää sellaisia ylimääräisiä kemialli- siä ryhmiä, joita ei ole normaalisti läsnä perusmolekyy- .···. 25 Iissä. Tällaiset ryhmät voivat parantaa perusmolekyylin ♦ ♦ · liukoisuutta, puoliintumisaikaa, imeytymistä ja muita vas- ... taavia. Vaihtoehtoisesti nämä ryhmät voivat vaimentaa pe- • · ’···[ rusmolekyylin epätoivottuja sivuvaikutuksia tai pienentää perusmolekyylin myrkyllisyyttä. Esimerkkejä tällaisista 30 ryhmistä on kuvattu lukuisissa julkaisuissa, esimerkiksi • · .***. teoksessa Remington's Pharmaceutical Sciences.
.· . Ohessa kuvatuilla menetelmillä tunnistettuja yhdis- • · · *· teitä voidaan käyttää yksinään sopivina, rutiinikokeilla * * määritettävinä annoksina HPV6a:n tai sen aktiivisuuden op- 35 timaaliseksi estämiseksi, samalla kun mahdollinen myrkyl- 17 lisyys saadaan pidetyksi mahdollisimman pienenä. Lisäksi samanaikainen tai peräkkäinen antaminen muiden aineiden kanssa voi olla toivottavaa.
Edullisessa tapauksessa esillä olevan keksinnön 5 mukaisia yhdisteitä voidaan antaa vain yhtenä vuorokausiannoksena tai vuorokaudessa annettava kokonaisannos voidaan antaa moneen osaan jaettuina annoksina. Edelleen esillä olevan keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan antaa eri reittejä, kuten nenänsisäisesti, ihon läpi, suppona, 10 suun kautta ja muilla vastaavilla tavoilla, näihin kuitenkaan rajoittumatta.
Useammalla kuin yhdellä aktiivisella aineella toteutettavassa yhdistelmähoidossa, jossa nämä aktiiviset aineet ovat erillisinä annosteluvalmisteina, näitä aktii-15 visia aineita voidaan antaa samanaikaisesti tai niitä voidaan antaa erikseen eri ajanhetkillä.
Esillä olevan keksinnön mukaisten yhdisteiden annostus valitaan riippuen eri tekijöistä, kuten potilaan tyypistä, lajista, iästä, painosta, sukupuolesta ja lääke- ·· · • *.· 20 tieteellisestä tilasta; hoidettavan tilan vakavuudesta; • · · S i antamisreitistä; potilaan munuaisten ja maksan toiminnas- :*·.· ta; sekä kulloinkin erityisesti käytettävästä yhdisteestä.
• *
Tavanomaisella tavalla pätevä lääkäri voi määrittää hel-posti ja määrätä lääkkeen sen tehokkaan määrän, joka tar- • · · 25 vitaan kyseessä olevan tilan estämiseksi, sitä vastaan • · · vaikuttamiseksi tai sen etenemisen pysäyttämiseksi. Opti- ... maalinen tarkkuus lääkeaineen pitoisuuksien saamiseksi • · *···| alueelle, jossa saavutetaan vaikutusteho ilman myrkylli syyttä, edellyttää annostusta, joka perustuu tavoitelluis-3 0 sa kohteissa lääkeaineen saatavuuden kinetiikkaan. Tähän • · liittyen huomioon otettavia seikkoja ovat lääkeaineen kul- ··· ,· , jetus, tasapaino ja poistuminen.
• · · *· ’· Esillä olevan keksinnön mukaisissa menetelmissä ohessa yksityiskohtaisesti kuvatut yhdisteet voivat toimia 35 aktiivisena aineosana, ja niitä annetaan tyypillisesti 18 seoksena sopivien farmaseuttisten laimentimien, täyteaineiden tai kantajien (joihin viitataan ohessa yhteisellä käsitteellä "kantaja-aineet") kanssa, jotka aineet on valittu sopivalla tavalla tavoitteena olevaa antamismuotoa 5 ajatellen, eli sen mukaan, ovatko kysymyksessä suun kautta annettavat tabletit, kapselit, eliksiirit, siirappi, su-pot, geelit ja vastaavat, ja tavanomaisen farmaseuttisen käytännön mukaisesti.
Esimerkiksi tablettina tai kapselina olevan, suun 10 kautta annettavan muodon tapauksessa aktiivinen lääkeaine-komponentti voidaan yhdistää suun kautta annettavaan, ei-myrkylliseen, farmaseuttisesti aktiiviseen inerttiin kantajaan, kuten etanoliin, glyseroliin, veteen ja vastaavaan. Lisäksi toivottaessa tai tarvittaessa myös sopivia 15 sideaineita, liukastusaineita, hajottavia aineita ja väriaineita voidaan sisällyttää tähän seokseen. Sopivista sideaineista voidaan mainita, näihin kuitenkaan rajoittumatta, tärkkelys, gelatiini, luonnolliset sokerit, kuten glukoosi tai beeta-laktoosi, maissipohjaiset makeutusaineet, • · · i *.· 2 0 luonnolliset ja synteettiset kumit, kuten akaasia, traga- ··· kantti tai natriumalginaatti, karboksimetyyliselluloosa, polyetyleeniglykoli, vahat ja muut vastaavat. Näissä an-·:··· nostusmuodoissa käytetyistä liukastavista aineista voidaan mainita, näihin kuitenkaan rajoittumatta, natriumoleaatti, • 25 natriumstearaatti, magnesiumstearaatti, natriumbentsoaat- » · » ti, natriumasetaatti, natriumkloridi ja muut vastaavat.
... Hajottavista aineista voidaan mainita, näihin kuitenkaan • · ***, rajoittumatta, tärkkelys, metyyli selluloosa, agar, bento- niitti, ksantaanikumi ja muut vastaavat.
I*S 2 30 Nestemäisiä muotoja varten aktiivinen lääkeaine- :***; komponentti voidaan yhdistää sopivaa flavoria käsittävään ··» .* . suspendoivaan tai dispergoivaan aineeseen, kuten synteet- • · · * * tisiin tai luonnonkumeihin, esimerkkeinä tragakantti, akaasia, metyyliselluloosa ja muut vastaavat. Muista käyt-35 tökelpoisista dispergoivista aineista voidaan mainita gly- 19 seriini ja muut vastaavat. Ruuansulatuskanavan ulkopuolista antamista ajatellen toivottavia ovat steriilit suspensiot ja liuokset. Yleensä sopivia säilöntäaineita sisältäviä isotonisia valmisteita käytetään, kun laskimonsisäinen 5 antaminen on toivottavaa.
Aktiivisen lääkeainekomponentin sisältäviin, paikallisesti käytettäviin valmisteisiin voidaan sekoittaa erilaisia, alalla hyvin tunnettuja kantajamateriaaleja, esimerkkeinä alkoholit, aloe vera -geeli, allantoiini, 10 glyseriini, A- ja E-vitamiiniöljyt, mineraaliöljy, PPG2-myristyylipropionaatti ja muut vastaavat, jolloin voidaan muodostaa esimerkiksi alkoholipohjaisia liuoksia, paikallisesti käytettäviä puhdistusaineita, puhdistusvoiteita, ihogeelejä, ihovoiteita sekä hiustenpesuaineita voide- tai 15 geelivalmisteina.
Esillä olevan keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan antaa myös käyttämällä liposomeihin perustuvia kuljetusjärjestelmiä, kuten pieniä yksilamellisia vesikkeleitä, suuria yksilamellisia vesikkeleitä ja monilamellisia ve- # · · j20 sikkeleitä. Liposomeja voidaan muodostaa erilaisista fos- folipideistä, kuten kolesterolista, stearyyliamiinista tai ;*·.· fosf atidyylikoliineista.
• ·
Esillä olevan keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan :·. antaa myös käyttämällä monoklonaalisia vasta-aineita yk~ • · · 25 sittäisinä kantajina, joihin yhdisteen molekyylejä on kyt- • · · ketty. Esillä olevan keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan ... kytkeä myös liukoisiin polymeereihin, jotka toimivat lää- • · '···] keaineen kohdennettavina kantajina. Tällaisista polymee- * * reistä voidaan mainita polyvinyyli-pyrrolidoni, pyraanise- 30 kapolymeeri, polyhydroksipropyylimetakryyli-amidif enoli, • · .*·*. polyhydroksi-etyyliaspartamidifenoli tai polyetyyli-eneok- ··« ,· . sidipolylysiini, jossa on substituentteina palmitoyyli- • · · ’•*| jäännöksiä. Edelleen esillä olevan keksinnön mukaisia yh- ’ ‘ disteitä voidaan kytkeä biologisesti hajoavien polymeerien 35 sellaiseen luokkaan, johon kuuluvien polymeerien avulla 20 päästään lääkeaineen hallittuun vapautumiseen, esimerkkeinä polymaitohappo, polyepsilon-kaprolaktoni, polyhyd-roksi-voihappo, polyortoesterit, polyasetaalit, polydihyd-ropyraanit, polysyanoakrylaatit sekä hydrogeelien silloit-5 tuneet tai amfipaattiset lohkosekapolymeerit.
Seuraavat esimerkit havainnollistavat esillä olevaa keksintöä sitä kuitenkaan rajoittamatta.
Esimerkki 1
Nukleiinihapon eristäminen kudosnäytteestä 10 Häpyseudun suuri visvasyylä saatiin 25-vuotiaasta naispotilaasta synnytyksen jälkeen. Osa tästä syylästä pakastettiin nestemäiseen typpeen, sitten sitä käsiteltiin kalvot poistavalla Braun-merkkisellä laitteella (Braun mikrodismembrator II; B. Braun Instruments, Melsungen, 15 Saksa). Saatu materiaali saatettiin liukoiseen muotoon 0,6 % (p/t) natriumdodekyylisulfaatilla (SDS), käsiteltiin K-proteinaasilla (50 ^g/ml) sekä uutettiin fenolin, kloroformin ja isoamyylialkoholin seoksella. DNA saostettiin etanolilla ja sen määrä määritettiin UV-spektrofotometri-:*·]: 20 sesti. DNA:n, jonka molekyylipaino oli suuri, läsnäolo varmistettiin elektroforeettisesti agaroosigeelillä, mitä • · · : seurasi värjääminen etidiumbromidilla.
• ♦
Esimerkki 2 • · HPV DNA s n tyyppimääritys • ♦ · *... 25 HPV DNA -tyyppi määritettiin käyttämällä nimellä • · · * ViraType Plus (Digene Diagnostics, Beltsville, MD) markkinoitua hybridisieppausmääritystä. Käytetyt HPV-koettimet • · ’···* jaettiin kahdeksi joukoksi, joiden koostumus perustuu kun- *·**’ kin tyypin kykyyn liittyä sukupuolikanavassa esiintyviin 30 pahanlaatuisiin kasvaimiin. Koetinryhmä A sisälsi "pientä • · .···. vaaraa" vastaavia tyyppejä HPV6, 11, 42, 43 ja 44, kun • · · / # taas koetin B sisälsi "suurta vaaraa" vastaavia tyyppejä :·**| 16, 18, 31, 33, 35, 45, 51, 52 ja 56. Koko DNA pilkottiin * * entsyymeillä PstI, BamHI ja Hindlll ja Southern blot -mää- 21 ritys toteutettiin tarkoin rajatuissa olosuhteissa (T -15 °C) HPV-alatyypin määrittämiseksi.
Esimerkki 3 HPV6a-perimän kloonaus 5 HPV6a-positiivisesta kudosnäytteestä uutettu koko- nais-DNA pilkottiin Hindlll-endonukleaasilla. Sen jälkeen kun oli toteutettu fraktiointi koon perusteella käyttäen alhaisessa lämpötilassa sulavaa 0,8-%:ista preparatiivista agaroosigeeliä, noin 8 kiloemäsparin (kbp) kokoista DNA:ta 10 vastaava alue leikattiin irti geelistä ja agaroosi pilkottiin Gelase™-entsyymillä (Epicentre Technologies, Inc., Madison, WI). Näyte ligatoitiin plasmidiin pUC18 (Pharmacia, Inc., Piscataway, NJ), joka oli pilkottu entsyymillä HindiII ja defosforyloitu. Kykeneviksi tehtyihin E. coli 15 DH5 -soluihin (Gibco, BRL, Gaithersburg, MD) siirtämisen jälkeen tämä plasmidikirjasto seulottiin HPV6a-positiivis-ten kloonien suhteen pesäkkeiden hybridisäätiöila käyttäen vastasuuntaista ("antisense") 1 2 3 4 5 6P-leimattua oligonukleoti-diä, joka oli HPV6a Ll-geenin (5'-GAG AGA TCT TAC CTT TTA j’v 20 GTT TTG GCG CGC TTA C-3» ; SEQ ID NO. 1) 3'-pään komple-mentti. 8,1 kbp:n suuruisen HPV6a-perimän sisältävä pUC18- :*·.· plasmidi eristettiin ja sen tunnusomaiset piirteet selvi- • · tettiin restriktioentsyymi- ja Southern blot -analyyseil- ;·. lä. Tälle plasmidille annettiin nimeksi pUC18-HPV6a. Plas- • · · 25 midi-DNA valmistettiin käyttäen Qiagen™ Plasmide Maxi • · · -reagenssipakkausta (Qiagen Inc., Chatsworth, CA). Esimerkki 4 • · · • · *···* pUC18-HPV6a:n sekvenssianalyysi • · · · · * * Täydellisen HPV6a-sekvenssin määrittämiseksi sek- venssin määritykseen sopivat alukkeet syntetisoitiin jul- 2 • · .·**. kaistun HPV6b-sekvenssin perusteella. Täydellisen 8,1 3 • · · 4 #* kbp:n kokoisen HPV6a-perimän kummankin juosteen sekvenssi • · · *· ” määritettiin ketjun päättävällä dideoksimenetelmällä käyt- 5 * * täen PRISM™-reagenssipakkausta sekä yhtiön Applied Biosys- 6 tems (ABI) automaatista instrumenttia (nro 373A) sekvens- 22 sin määrittämiseksi valmistajan ohjeiden mukaan (ABI, Inc., Foster City, CA) . Niissä tapauksissa, joissa myötä- ja vastasuuntainen (sense and antisense) sekvenssi eivät vastanneet toisiaan, ylimääräisiä HPV6a-spesifisiä alukkeita 5 syntetisoitiin sekvenssin määrittämiseksi uudestaan kumpaankin suuntaan kyseessä olevassa alueessa yleispätevän sekvenssin saamiseksi.
Kuviossa 1 on esitetty täydellinen HPV6a-sekvenssi verrattuna julkaistuun HPV6b-sekvenssiin. HPV6a-sekvenssin 10 alapuolella esitetyt emäkset vastaavat HPV6b-sekvenssiä. Todettiin, että HPV6a:n ja HPV6b:n DNA-sekvenssit olivat yli 97-prosenttisesti samanlaisia siten, että yhteensä 229 bp-muutosta todettiin 8 010 emäsparissa. HPV6b-sekvenssiin nähden merkittävimmät erot todettiin LCRrssa (nt 7 205 - nt 15 106). Sen lisäksi, että löydettiin useita yksittäisten nukleotidien (nt) muutoksia HPV6a LCRrssa, 94 emäsparin istute kohdassa nt 7 350 ja toinen 19 emäsparin istute kohdassa nt 7 804 todettiin. Nukleotidin 7 615 kohdalla HPV6a:n perimästä oli hävinnyt kuusi emäsparia.
• · · L
: *.* 20 Esimerkki 5 • · · HFV6a-sekvenssin erilaisuus ORF-kehyksissä HPV6b-sek- : venssiin verrattuna • · *:··; Avoimet lukukehykset määritettiin HPV6a-sekvens- • *.e# sissa ja suuret ORF-kehykset luettiin aminohapposekvens- • 25 seiksi ja niitä verrattiin vastaaviin HPV6b-sekvensseihin.
• · ·
Suuri kapsidiproteiini LI oli ainoa ORF, joka oli ... samanlainen HPV6b-sekvenssissä. Kaikissa muissa ORF-kehyk- *·*. sissä todettiin aminohappomuutoksia, jotka on koottu tau lukkoon 1. Pienessä kapsidiproteiinissa L2 todettiin viisi :V: 30 aminohappomuutosta; E6- ja E7-ORF-kehyksissä todettiin kul- ·***: loinkin yksi aminohappomuutos. Ei-proteiinissa kuusi amino- • · · .* . happoa ja E2-proteiinissa 11 aminohappoa olivat erilaisia.
• · ·
* * E4-proteiinissa todettiin neljä aminohappomuutosta. E5a ORF
käsitti muutoksia neljässä asemassa, ORF E5b seitsemässä 35 asemassa.
23
Taulukko 1
Sekvenssin erilaisuus HPV6a ORF-kehyksissä E6, E7, El, E2, E4, E5 ja L2 HPV6b-sekvenssiin verrattuna Avoin lu- Asema (nuk- Asema Aminohappo- 5 kukehys leotidi) (aminohappo) muutos E6 252 50 His-»GIn E7 792 88 Asp-»Asn 10
El 1535, 1536 235 Leu-^Ala 1670 280 Leu—»Val 1741 303 Glu—»Asp 2208 459 Thr—»Ser 15 2557 575 Asp-»Glu 2654 608 Thr—»Ala E2 2802 27 His-»Asp 2974 94 Arg—»Lys 2 0 3148 142 Asn-»Thr !···. 3153 144 Thr—»Ser ':*·! 3272 193 His-»Gln • · · 3388 222 Leu->Pro ’i": 3405 227 Lys—»Gin 25 3643 307 Arg—»Ly.s 3693 324 Ser-»Pro 3735 338 Asp-»His O 3765 348 Asp-^Asn ·:··: 3794 357 Ser^Arg 30 • · · ':!f E4 3272 6 Ile-»Asn V 3388 60 Gly—>Glu O! 3461 69 Pro—>His ·:·*: 3552 99 Asp-»Glu 35 24 E5a 3935 16 Phe-»Leu 4004 40 Glu-»Asp 4137 84 Tyr—>His 4150 88 Thr—>Asn 5 E5b 4235 25 Met->Val 4297 45 Lys—>Asn 4314 51 Asn->Thr 4323 54 Asp—>Ala io 4343 61 Tyr—>His 4346,4347 62 Thr^Asp 4353 64 Asp-»A la L2 4646,4647 75 GliwGly is 4976 185 Valolle 5021 200 Vai—>Ile 5490 356 Gly—»Asp 5597 392 Leualle ;.φ·. 2 0 Esimerkki 6 • · *..! HPV6a cDNAjix alikloonaus ilmentämisvektoreihin • · • · ***. HPV6a:ta koodaava cDNA alikloonataan useaan vekto- • · · *· riin HPV6a-proteiinin ilmentämiseksi transfektoiduissa isäntäsoluissa sekä kopioimiseksi/lukemiseksi in vitro.
·· : 25 Näistä vektoreista voidaan mainita pBluescript II SK+ ··· · (jossa ilmentymistä ohjaavat T7- tai T3-promoottorit) , pcDNA Ι/Amp [jossa ilmentymistä ohjaa sytomegaloviruksen (CMV) promoottori] , pSZ9016-l [jossa ilmentymistä ohjaa ·;··· HIV:n pitkä päättävä toistuva (long terminal repeat; LTR) .*. 30 -promoottori] sekä bakuloviruksen siirtovektori pVL1393 • · · • · · *.* [jossa ilmentymistä ohjaa polyhedriini (PH) -promoottori] • · ’·;·* HPV6a:ta koodaavan DNA-sekvenssin sisältävän yhdistelmä- • · : DNA-teknisen bakuloviruksen tuottamiseksi.
• · ·;··· a) pBluescript II SK+:HPV6a: täysipituinen HPV6a 35 cDNA-klooni irrotetaan lambda-bakteriofagista rajoitetulla 25
EcoRI-pilkkomisella ja se ligatoidaan EcoRI-leikattuun ClP-käsiteltyyn plasmidiin pBluescript II SK+. Talteen otetaan sellaisia erillisiä aliklooneja, joissa "sense"-suuntautunut HPV6a seurasi joko T7- tai T3-promoottoria.
5 b) pcDNA I/Amp:HPV6a: Suunnatun kloonaamisen helpottamiseksi HPV6a leikataan pBluescript II SK+: HPV6a:sta, jossa HPV6a DNA-sekvenssi sijaitsee T7-promoot-torin jälkeen, saadusta puhdistetusta plasmidipreparaa-tista käyttäen entsyymejä EcoRV ja Xbal. Tuloksena oleva 10 EcoRV, Xbal HPV6a -kappale puhdistetaan ja ligatoidaan EcoRV-leikattuun, Xbal-leikattuun, ClP-käsiteltyyn pcDNA i/Amp-muodosteeseen siten, että HPV6a:ta koodaava DNA sijaitsee CMV-promoottorin jälkeen.
c) PSZ9016-1:HPV6a: HPV6a leikataan pBluescript II
15 SK+:HPV6a -muodosteesta rajoitetulla EcoRI-pilkkomisella, minkä jälkeen 1,5 kb:n kappale puhdistetaan agaroosigee-leiltä. Tuloksena saatu EcoRI HPV6a -kappale ligatoidaan EcoRI - leikattuun, ClP-käsiteltyyn pSZ9016-l-muodosteeseen. Sitten valikoidaan sellaisia aliklooneja, joissa "sense"-:1·1: 2 0 suuntautunut HPV6a seuraa HIV LTR -promoottorin jälkeen.
d) PVL1393 :HPV6a sekä PVL1393 HPV6a HA HPV6a:ta • · · : koodaavan DNA:n suunnattu kloonaaminen bakuloviruksen • · · • · siirtovektoriin pVL1393 toteutetaan leikkaamalla HPV6a • · ..t muodosteesta pcDNA I/Amp:HPV6a entsyymeillä BamHI ja Xbal, • · · 25 minkä jälkeen tuloksena saatu 1,3 kb:n kappale ligatoi- • · · * daan BamHI-leikattuun, Xbal-leikattuun, ClP-käsiteltyyn pVL1393-muodosteeseen, jolloin saadaan pVL1393:HPV6a. Sa- • · *··.1 moin HPV6a:n epitooppi merkittiin muodostamalla T7-merkki *** : HPV6a:n avoimen lukukehyksen 51-aminopäätteeseen sekä 30 FluHA-epitooppi 3 1-karboksipäätteeseen. Tällä tavalla muo- • · .···. kattu HPV6a DNA ligatoidaan pVL13 93-muodosteessa BamHI/ y Xbal-kohtiin, jolloin saadaan pVL1393:T7 HPV6a HA.
• 1 · • · · • · · 26
Esimerkki 7 HPV6a-polypeptidin ilmentäminen in vitro-kopioin-nilla/luennalla sekä transfektiolla isäntäsoluihin HPV DNA -sekvenssejä sisältävien vektoreiden avulla 5 toteutetaan HPV6a-polypeptidin luenta kanin retikulosyyt-tihajotteissa, nisäkkään isäntäsoluissa sekä bakuloviruk-sen infektoimissa hyönteissoluissa. Kokeelliset menettelytavat ovat olennaisesti valmistajien ohjeiden mukaisia.
a) In vitro -kopiointi/luenta: pBluescript III SK+: 10 HPV6a -plasmidin DNA (jossa HPV6a on T7-suuntautunut) tehdään lineaariseksi pilkkomalla entsyymillä BamHI HPV6a -istutteen jälkeen. Tämä lineaariseksi tehty plasmidi puhdistetaan ja sitä käytetään mallineena askeleittain tapahtuvassa kopioinnissa käyttäen T7 RNA-polymeraasia 15 m7G(5')ppp(5')G:n läsnä ollessa. Tuloksena saadut päättävän ryhmän käsittävät HPV6a-kopiot puhdistetaan LiCl-saos-tuksella ja niiden avulla toteutetaan HPV6a:n luenta nuk-leaasilla esikäsitellyssä kanin retikulosyyttihajotteessa
7C
L-[ S]-metioniinin läsnä ollessa.
;*·*: 20 b) Ilmentäminen nisäkässoluissa: HPV6a-proteiini • · ;***; ilmennetään isäntänä toimivissa nisäkässoluissa, sen jäi- ···
.·. : keen kun ne on transfektoitu joko muodosteella pCDNA
• · l/Amp:HPV6a (CMV-promoottorin säätelyn alainen) tai • · pSZ9016-l :HPV6a (HIV LTR-promoottorin säätelyn alainen).
• · · *... 25 Viimeksi mainitussa tapauksessa (pSZ9016-l :HPV6a) solut • · · *** * transfektoidaan lisäksi TAT-ilmentävällä plasmidilla pSZ90161:TAT. Näiden kummankin HPV6a:ta ilmentävän plas- • · · midin tapauksessa transfektoidaan C0S-7-soluja käyttäen ’·**· joko DEAE-dekstraania tai lipofektiota lipofektamiinilla .·*.·. 3 0 (BRL) .
• · · .···. c) Ilmentäminen hyönteissoluissa: HPV6a:n sisältä- • · *·’ vää bakuloviruksen siirtovektoria pVL1393:T7 HPV6a HA on • · • · · *. ” käytetty yhdistelmä-DNA-teknisen bakuloviruksen (Autoqrap- ’·**· ha californica) tuottamiseksi muodostamalla in vivo uusia 35 homologisia yhdistelmiä. Sitten epitooppimerkitty HPV6a 27 ilmennetään Sf9-hyönteissoluissa (Spodoptera frugiperda), joita kasvatetaan suspensioviljelmänä, sen jälkeen kun ne on infektoitu HPV6a:n sisältävällä yhdistelmä-DNA-tekni-sellä bakuloviruksella.
5 Esimerkki 8
Yhdisteitä, joilla on vaikutusta HPV6a-aktiivisuu- teen, voidaan ilmaista erilaisilla menetelmillä. Menetelmä HPV6a:n vaikuttavien yhdisteiden tunnistamiseksi käsittää vaiheet, joissa: 10 (a) testattavaa yhdistettä sekoitetaan HPV6a:ta sisältävään liuokseen seoksen muodostamiseksi; (b) HPV6a-aktiivisuus seoksessa määritetään; ja (c) seoksessa läsnä olevaa HPV6a:ta verrataan standardiin.
15 Yhdisteitä, joilla on vaikutusta HPV6a-aktiivisuu- teen, voidaan sisällyttää farmaseuttisiin koostumuksiin. Tällaisia farmaseuttisia koostumuksia voidaan käyttää sellaisten sairauksien tai tilojen, joiden tunnusomaisena piirteenä on HPV6a-infektio, hoitamiseksi.
: 1 : 2 0 Esimerkki 9 • · ;***: DNA, joka on rakenteellisesti HPV6a:ta koodaavan • · · •\! DNA:n kaltaista, ilmaistaan koettimella. Sopiva koetin • · voidaan saada sellaisesta DNA:sta, joka käsittää kuvion 1 • · ;·. mukaisen nukleotidisekvenssin kokonaisuudessaan tai osan • · · *... 25 siitä, sellaisen DNA:n, joka käsittää kuvion 1 mukaisen • · · • · · * nukleotidisekvenssin kokonaisuudessaan tai osan siitä, koodaamasta RNA:sta tai degeneroituneista oligonukleoti- • · *···1 deistä, jotka ovat peräisin kuvion 1 mukaisen sekvenssin *·**· osasta.
• 1 • · · • · · • · ··· • · • · • · · • · • · · • · · • · · · · · 28
Sekvenssilletaus (1) YLEISET TIEDOT: (i) HAKIJA: Jansen, Kathrin U.
Hofmann, Kathryn J.
(ii) KEKSINNÖN NIMITYS: Tyyppiä 6A olevaa ihmisen
papillomavirusta koodaava DNA
(iii) SEKVENSSIEN LUKUMÄÄRÄ: 2 (iv) KIRJEENVAIHTO-OSOITE: (A) VASTAANOTTAJA: Christine E. Carty (B) KATU: 126 E. Lincoln Avenue, P.O. Box 2000 (C) KAUPUNKI: Rahway
(D) OSAVALTIO TAI LÄÄNI: NJ
(E) MAA: USA
(F) POSTINUMERO: 07065-0907 (v) KONEKOODIMUOTO: (A) VÄLINETYYPPI: Levyke (B) TIETOKONE: IBM PC -yhteensopiva
(C) KÄYTTÖJÄRJESTELMÄ: PC-DOS/MS-DOS
(D) OHJELMISTO: Patentin Release #1.0 Versio "1.25 (vi) NYKYISEN HAKEMUKSEN TIEDOT: (A) HAKEMUSNUMERO: US 08/310 468 (B) JÄTTÖPÄIVÄMÄÄRÄ: 22.9.1994 (C) LUOKITUS: (viii) ASIAMIEHEN TIEDOT: (A) NIMI: Carty, Christine E.
(B) REKISTERINUMERO: 36 099
(C) VIITE/LUETTELONUMERO: 19307 PCT
(ix) TIETOLIIKENNEYHTEYSTIEDOT: (A) PUHELIN: (908) 594-6734 (B) TELEFAX: (908) 594-4720 (2) SEKVENSSIN NRO 1 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 34 emäsparia (B) TYYPPI: nukleiinihappo (C) JUOSTEISUUS: yksisäikeinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen
(ii) MOLEKYYLITYYPPI: cDNA
(xi) SEKVENSSIN KUVAUS: SEKVENSSI NRO 1: GAGAGATCTT ACCTTTTAGT TTTGGCGCGC TTAC 34 29 (2) SEKVENSSIN NRO 2 TIEDOT: (i) SEKVENSSIN OMINAISPIIRTEET: (A) PITUUS: 8 010 emäsparia (B) TYYPPI: nukleiinihappo (C) JUOSTEISUUS: yksisäikeinen (D) TOPOLOGIA: lineaarinen
(ii) MOLEKYYLITYYPPI: cDNA
GTTAATAACA ATCTTGGTTT TAAAAAATAG GAGGGACCGA AAACGGTTCA ACCGAAAACG 60 GTTGTATATA AACCAGCCCT AAAATTTAGC AAACGAGGCA TTATGGAAAG TGCAAATGCC 12 0 TCCACGTCTG CAACGACCAT AGACCAGTTG TGCAAGACGT TTAATCTATC TATGCATACG 180 TTGCAAATTA ATTGTGTGTT TTGCAAGAAT GCACTGACCA CTGCAGAGAT TTATTCATAT 240 GCATATAAAC AGCTAAAGGT CCTGTTTCGA GGCGGCTATC CATATGCAGC CTGCGCGTGC 300 TGCCTAGAAT TTCATGGAAA AATCAACCAA TATAGACACT TTGATTATGC TGGATATGCA 360 ACAACTGTTG AAGAAGAAAC TAAACAAGAC ATTTTAGACG TGCTAATTCG GTGCTACCTG 420 TGTCACAAAC CGCTGTGTGA AGTAGAAAAG GTAAAACATA TACTAACCAA GGCGCGGTTT 480 ATAAAGCTAA ATTGTACGTG GAAGGGTCGC TGCCTACACT GCTGGACAAC ATGCATGGAA 540 GACATGTTAC CCTAAAGGAT ATTGTATTAG ACCTGCAACC TCCAGACCCT GTAGGGTTAC 600 ATTGCTATGA GCAATTAGTA GACAGCTCAG AAGATGAGGT GGACGAAGTG GACGGACAAG 660 ATTCACAACC TTTAAAACAA CATTTCCAAA TAGTGACCTG TTGCTGTGGA TGTGACAGCA 720 ACGTTCGACT GGTTGTGCAG TGTACAGAAA CAGACATCAG AGAAGTGCAA CAGCTTCTGT 730 TGGGAACACT AGACATAGTG TGTCCCATCT GCGCACCGAA GAC ATAAC AA CGATGGCGGA 840 CGATTCAGGT ACAGAAAATG AGGGGTCTGG GTGTACAGGA TGGTTTATGG TAGAAGCTAT 900 AGTGCAACAC CCAACAGGTA CACAAATATC AGACGATGAG GATGAGGAGG TGGAGGACAG 960 TGGGTATGAC ATGGTGGACT TTATTGATGA CAGCAATATT ACACACAATT CCTTGGAAGC 1020 ACAGGCATTG TTTAACAGGC AGGAGGCGGA CACCCATTAT GCGACTGTGC AGGACCTAAA 1030 ACGAAAGTAT TTAGGTAGTC CATATGTTAG TCCTATAAAC ACTATAGCCG AGGCAGTGGA 1140 AAGTGAAATA AGTCCACGAT TGGACGCCAT TAAACTTACA AGACAGCCAA AAAAGGTAAA 1200 30 GCGACGGCTG TTTCAAACCA GGGAACTAAC GGACAGTGGA TATGGCTATT CTGAAGTGGA 1260 AGCTGGAACG GGAACGCAGG TAGAGAAACA TGGCGTCCCG GAAAATGGGG GAGATGGTCA 132 0 GGAAAAGGAC ACAGGAAGGG ACATAGAGGG GGAGGAACAT ACAGAGGCGG AAGCGCCCAC 1330 AAACAGTGTA CGGGAGCATG CAGGCACAGC AGGAATATTG GAATTGCTAA AATGTAAAGA 1440 TTTACGGGCA GCATTACTTG GTAAGTTTAA AGAATGCTTT GGGCTGTCTT TTATTGATTT 1500 AATTAGGCCA TTTAAAAGTG ATAAAACAAC ATGTGCAGAC TGGGTGGTAG CAGGATTTGG 1560 TATACATCAT AGCATATCAG AGGCATTTCA AAAATTAATT GAGCCATTAA GTTTATATGC 1620 ACATATACAA TGGCTAACAA ATGCATGGGG AATGGTATTG TTAGTATTAG TAAGATTTAA 1680 AGTAAATAAA AGTAGAAGTA CCGTTGCACG TACACTTGCA ACGCTATTAA ATATACCTGA 1740 CAATCAAATG TTAATAGAGC CACCAAAAAT ACAAAGTGGT GTTGCAGCCC TGTATTGGTT 1300 TCGTACAGGT ATATCAAATG CCAGTACAGT TATAGGGGAA GCACCAGAAT GGATAACACG 1860 CCAAACTGTT ATTGAACATG GGTTGGCAGA CAGTCAGTTT AAATTAACAG AAATGGTGCA 1920 GTGGGCATAT GATAATGACA TATGCGAGGA GAGTGAAATT GCATTTGAAT ATGCACAAAG 1980 GGGAGATTTT GATTCTAATG CACGAGCATT TTTAAATAGC AATATGCAGG CAAAATATGT 2040 GAAAGATTGT GCAACTATGT GTAGACATTA TAAACATGCA GAAATGAGGA AGATGTCTAT 2100 AAAACAATGG ATAAAACATA GGGGTTCTAA AATAGAAGGC ACAGGAAATT GGAAACCAAT 2160 TGTACAATTC CTACGACATC AAAATATAGA ATTTATTCCA TTTTTAAGTA AATTTAAATT 2220 ATGGCTGCAC GGTACGCCAA AAAAAAACTG CATAGCCATA GTAGGCCCTC CAGATACTGG 2280 GAAATCGTAC TTTTGTATGA GTTTAATAAG CTTTTTAGGA GGTACAGTTA TTAGTCATGT 2340 AAATTCCAGC AGCCATTTTT GGTTGCAACC GTTAGTAGAT GCTAAGGTAG CATTGTTAGA 2400 TGATGCAACA CAGCCATGTT GGATATATAT GGATACATAT ATGAGAAATT TGTTAGATGG 2460 TAATCCTATG AGTATTGACA GAAAGCATAA AGC ATTGAC A TTAATTAAAT GTCCACCTCT 2520 GCTAGTAACG TCCAACATAG ATATTACTAA AGAAGAGAAA TATAAGTATT TACATACTAG 2530 AGTAACAACA TTTACATTTC CAAATCCATT CCCTTTTGAC AGAAATGGGA ATGCAGTGTA 2640 TGAACTGTCA AATGCAAACT GGAAATGTTT TTTTGAAAGA CTGTCGTCAA GCCTAGACAT 2700 TCAGGATTCA GAGGACGAGG AAGATGGAAG CAATAGCCAA GCGTTTAGAT GCGTGCCAGG 2760 AACAGTTGTT AGAACTTTAT GAAGAAAACA GTACTGACCT AAACAAACAT GTATTGCATT 2820 GGAAATGCAT GAGACATGAA AGTGTATTAT TATATAAAGC AAAACAAATG GGCCTAAGCC 2880 31 ACATAGGAAT GCAAGTAGTG CCACCATTAA AGGTGTCCGA AGCAAAAGGA CATAATGCCA 2940 TTGAAATGCA AATGCATTTA GAATCATTAT TAAAGACTGA GTATAGTATG GAACCGTGGA 3000 CATTACAAGA AACAAGTTAT GAAATGTGGC AAACACCACC TAAACGCTGT TTTAAAAAAC 3060 GGGGCAAAAC TGTAGAAGTT AAATTTGATG GCTGTGCAAA CAATACAATG GATTATGTGG 3120 TATGGACAGA TGTGTATGTG CAGGACACTG ACTCCTGGGT AAAGGTGCAT AGTATGGTAG 3180 ATGCTAAGGG TATATATTAC ACATGTGGAC AATTTAAAAC ATATTATGTA AACTTTGTAA 3240 AAGAGGCAGA AAAGTATGGG AGCACCAAAC AATGGGAAGT ATGTTATGGC AGCACAGTTA 3300 TATGTTCTCC TGCATCTGTA TCTAGCACTA CACAAGAAGT ATCCATTCCT GAATCTACTA 3360 CATACACCCC CGCACAGACC TCCACCCCTG TGTCCTCAAG CACCCAGGAA GACGCAGTGC 3420 AAACGCCGCC TAGAAAACGA GCACGAGGAG TCCAACAGTC ACCTTGCAAC GCCTTGTGTG 3430 TGGCCCACAT TGGACCCGTG GACAGTGGAA ACCACAACCT CATCACTAAC AATCACGACC 3540 AGCACCAAAG AAGGAACAAC AGTAACAGTT CAGCTACGCC TATAGTGCAA TTTCAAGGTG 3600 AATCTAATTG TTTAAAGTGT TTTAGATATA GGCTAAATGA CAAACACAGA CATTTATTTG 3660 ATTTAATATC ATCAACGTGG CACTGGGCCT CCCCAAAGGC ACCACATAAA CATGCCATTG 3720 TAACTGTAAC ATATCATAGT GAGGAACAAA GGCAACAGTT TTTAAATGTT GTAAAAATAC 3780 CACCTACTAT TAGGCACAAA CTGGGGTTTA TGTCACTGCA CCTATTGTAA TTTGTATATA 3840 TGTAAATGTG TAAATATATG GTATTGGTGT AATACAACTG TACATGTATG GAAGTGGTAC 3900 CTGTACAAAT AGCTGCAGGA ACAACCAGCA CATTAATACT GCCTGTTATA ATTGCATTTG 3960 TTGTATGTTT TGTTAGCATC ATACTTATTG TATGGATATC TGACTTTATT GTGTACACAT 4020 CTGTGCTAGT ACTAACACTG CTTTTATACT TACTATTGTG GCTGCTATTA ACAACCCCCT 4080 TGCAATTTTT CCTACTAACT CTACTTGTGT GTTACTGTCC CGCATTGTAT ATACACCACT 4140 ACATTGTTAA CACACAGCAA TGATGCTAAC ATGTCAATTT .AATGATGGAG ATACATGGCT 4200 GGGTTTGTGG TTGTTATGTG CCTTTATTGT AGGGGTGTTG GGGTTATTAT TAATGCACTA 4260 TAGAGCTGTA CAAGGCGATA AACACACCAA ATGTAACAAG TGTAACAAAC ACACCTGTAA 4320 TGCTGATTAT GTAACTATGC ATCATGATAC TGCTGGTGAT TATATATATA TGAATTAGAG 4380 TAAAACTTTT TTTATATTTG TAACAGTGTA TGTTTTGTAT ACCATGGCAC ATAGTAGGGC 4440 CCGACGACGC AAGCGTGCGT CAGCTACACA GCTATATCAA ACATGTAAAC TTACTGGAAC 4500 ATGCCCCCCA GATGTAATTC CTAAGGTGGA GCACAACACC ATTGCAGATC AAATATTAAA 4560 32 ATGGGGAAGT TTGGGGGTTT TTTTTGGAGG GTTGGGTATA GGCACCGGTT CCGGCACTGG 4620 GGGTCGTACT GGCTATGTTC CCTTAGGAAC TTCTGCAAAA CCTTCTATTA CTAGTGGGCC 4680 TATGGCTCGT CCTCCTGTGG TGGTGGAGCC TGTGGCCCCT TCGGATCCAT CCATTGTGTC 4740 TTTAATTGAA GAATCAGCAA TCATTAACGC AGGGGCGCCT GAAATTGTGC CCCCTGCACA 4800 CGGTGGGTTT ACAATTACAT CCTCTGAAAC AACTACCCCT GCAATATTGG ATGTATCAGT 4860 TACTAGTCAT ACTACTACTA GTATATTTAG AAATCCTGTC TTTACAGAAC CTTCTGTAAC 4920 ACAACCCCAA CCACCCGTGG AGGCTAATGG ACATATATTA ATTTCTGCAC CCACTATAAC 4980 GTCACACCCT ATAGAGGAAA TTCCTTTAGA TACTTTTGTG ATATCCTCTA GTGATAGCGG 5040 TCCTACATCC AGTACCCCTG TTCCTGGTAC TGCACCTAGG CCTCGTGTGG GCCTATATAG 5100 TCGTGCATTG CACCAGGTGC AGGTTACAGA CCCTGCATTT CTTTCCACTC CTCAACGCTT 5160 AATTACATAT GATAACCCTG TATATGAAGG GGAGGATGTT AGTGTACAAT TTAGTCATGA 5220 TTCTATACAC AATGCACCTG ATGAGGCTTT TATGGACATA ATTCGTTTGC ACAGACCTGC 5280 TATTGCGTCC CGACGTGGCC TTGTGCGGTA CAGTCGCATT GGACAACGGG GGTCTATGCA 5340 CACTCGCAGC GGAAAGCACA TAGGGGCCCG CATTCATTAT TTTTATGATA TTTCACCTAT 5400 TGCACAAGCT GCAGAAGAAA TAGAAATGCA CCCTCTTGTG GCTGCACAGG ATGATACATT 5460 TGATATTTAT GCTGAATCTT TTGAACCTGA CATTAACCCT ACCCAACACC CTGTTACAAA 5520 TATATCAGAT ACATATTTAA CTTCCACACC TAATACAGTT ACACAACCGT GGGGTAACAC 5530 CACAGTTCCA TTGTCAATTC CTAATGACCT GTTTTTACAG TCTGGCCCTG ATATAACTTT 5640 TCCTACTGCA CCTATGGGAA CACCCTTTAG TCCTGTAACT CCTGCTTTAC CTACAGGCCC 5700 TGTTTTCATT ACAGGTTCTG GATTTTATTT GCATCCTGCA TGGTATTTTG CACGTAAACG 5760 CCGTAAACGT ATTCCCTTAT TTTTTTCAGA TGTGGCGGCC TAGCGACAGC ACAGTATATG 5320 TGCCTCCTCC TAACCCTGTA TCCAAAGTTG TTGCCACGGA TGCTTATGTT ACTCGCACCA 5330 ACATATTTTA TCATGCCAGC AGTTCTAGAC TTCTTGCAGT GGGTCATCCT TATTTTTCCA 5940 TAAAACGGGC TAACAAAACT GTTGTGCCAA AGGTGTCAGG ATATCAATAC AGAGTATTTA 6000 AGGTGGTGTT ACCAGATCCT AACAAATTTG CATTGCCTGA CTCGTCTCTT TTTGATCCCA 6060 CAACACAACG TTTGGTATGG GCATGCACAG GCCTAGAGGT GGGCCGGGGA CAGCCATTAG 6120 GTGTGGGTGT AAGTGGACAT CCTTTCCTAA ATAAATATGA TGATGTTGAA AATTCAGGGA 6180 GTGGTGGTAA CCCTGGACAG GATAACAGGG TTAATGTAGG TATGGATTAT AAACAAACAC 6240 33 AATTATGCAT GGTTGGATGT GCCCCCCCTT TGGGCGAGCA TTGGGGTAAA GGTAAACAGT 6300 GTACTAATAC ACCTGTACAG GCTGGTGACT GCCCGCCCTT AGAACTTATT ACCAGTGTTA 6360 TACAGGATGG CGATATGGTT GACACAGGCT TTGGTGCTAT GAATTTTGCT GATTTGCAGA 6420 CCAATAAATC AGATGTTCCT ATTGACATAT GTGGCACTAC ATGTAAATAT CCAGATTATT 6480 TACAAATGGC TGCAGACCCA TATGGTGATA GATTATTTTT TTTTCTACGG AAGGAACAAA 6540 TGTTTGCCAG ACATTTTTTT AACAGGGCTG GCGAGGTGGG GGAACCTGTG CCTGATACTC 6600 TTATAATTAA GGGTAGTGGA AATCGCACGT CTGTAGGGAG TAGTATATAT GTTAACACCC 6660 CAAGCGGCTC TTTGGTGTCC TCTGAGGCAC AATTGTTTAA TAAGCCATAT TGGCTACAAA 6720 AAGCCCAGGG ACATAACAAT GGTATTTGTT GGGGTAATCA ACTGTTTGTT ACTGTGGTAG 6730 ATACCACACG CAGTACCAAC ATGACATTAT GTGCATCCGT AACTACATCT TCCACATACA 6840 CCAATTCTGA TTATAAAGAG TACATGCGTC ATGTGGAAGA GTATGATTTA CAATTTATTT 6900 TTCAATTATG TAGCATTACA TTGTCTGCTG AAGTAATGGC CTATATTCAC ACAATGAATC 6960 CCTCTGTTTT GGAAGACTGG AACTTTGGGT TATCGCCTCC CCCAAATGGT ACATTAGAAG 7020 ATACCTATAG GTATGTGCAG TCACAGGCCA TTACCTGTCA AAAGCCCACT CCTGAAAAGG 7080 AAAAGCCAGA TCCCTATAAG AACCTTAGTT TTTGGGAGGT TAATTTAAAA G'AAAAGTTTT 7140 CTAGTGAATT GGATCAGTAT CCTTTGGGAC GCAAGTTTTT GTTACAAAGT GGATATAGGG 7200 GACGGTCCTC TATTCGTACC GGTGTTAAGC GCCCTGCTGT TTCCAAAGCC TCTGCTGCCC 7260 CTAAACGTAA GCGCGCCAAA ACTAAAAGGT AATATATGTG TATATGTACT GTTATATATA 7320 TGTGTGTATG TACTGTTATG TATATGTGTG TATGTACTGT TATATGTATG TGTGTTGTAT 7380 ATATGTGTGT ATATATGTGT ATGTGTGTAT ATGTATATGT ATGTGTTGTG TATATATATG 7440 TGTGTGTGTG TTATGTGTGT AATGTAATTT ATTTGTGTAA TGTGTATGTG TGTTTATGTG 7500 CAATAAACAA TTAACTACAC CCTGTGACTC AGTGGCTGTT GCACGCGTTT TGGTTTGCAC 7560 GCGCCTTACA CACATAAGTA ATATACATGC ACAATATATA TATTTTTGTT ACAATAATAT 7620 ATTTTTATAT TTGCAACCGT TTTCGGTTGC CCTTGGCATA CACTTTCCAC CAATTTGTTA 7630 CAACGTGTTG CCTGTTAATC CTATATATTT TGTGCCAGGT ACACATTGCC CTGCCAAGTT 7740 CATTGCCAAG TGCATCATAT CCTGCCAACC ACACACCTGG CGCCAGGGTG CGGTATTGCC 7300 TTACTCATAT GTTTATTGCC ACTGCAATAA ACCTGTCTTT GTGTTATACT TTTCTGCACT 7860 GTAGCCAACT CTTAAAAGCA TTTTTGGCTT GTAGCAGAAC ATTTTTTTGC TCTTACTGTT 7920 34 TGGTATACAA TAACATAAAA ATGAGTAACC TAAGGTCACA CACCTGCAAC CGGTTTCGGT 7980 TATCCACACC CTACATATTT CCTTCTTATA 8010
Claims (7)
1. Yhtä HPV6a-proteiinia koodaava eristetty DNA, jolloin HPV6a-proteiini valitaan ryhmästä, joka koostuu seu- 5 raavista: HPV6a L2 (jota koodaavat sekvenssin nro 2 nukleotidit 4380-5804), HPV6a El (jota koodaavat sekvenssin nro 2 nukleotidit 717-2781),
10 HPV6a E2 (jota koodaavat sekvenssin nro 2 nukleoti dit 2697-3829), HPV6a E4 (jota koodaavat sekvenssin nro 2 nukleotidit 3242-3584), HPV6a E5 (jota koodaavat sekvenssin nro 2 nukleoti-15 dit 3888-4163), HPV6a E6 (jota koodaavat sekvenssin nro 2 nukleotidit 32-554) ja HPV6a E7 (jota koodaavat sekvenssin nro 2 nukeloti-dit 442-826), 20 jolloin DNA on heterologisen promoottorin transkriptionaali- sen kontrollin alaisuudessa.
2. Vektori, joka käsittää DNA:n, joka koodaa yhtä ihmisen papillomavirus 6a (HPV6a) proteiinia, jolloin DNA koostuu sekvenssistä, joka valitaan ryhmästä, joka koostuu 25 seuraavista: HPV6a L2 (sekvenssin nro 2 nukleotidit 4380-5804), HPV6a El (sekvenssin nro 2 nukleotidit 717-2781), HPV6a E2 (sekvenssin nro 2 nukleotidit 2697-3829), HPV6a E4 (sekvenssin nro 2 nukleotidit 3242-3584),
30 HPV6a E5 (sekvenssin nro 2 nukleotidit 3888-4163), HPV6a Εβ (sekvenssin nro 2 nukleotidit 32-554) ja HPV6a E7 (sekvenssin nro 2 nukleotidit 442-82 6) .
3. Isäntäsolu, joka käsittää patenttivaatimuksen 2 mukaisen vektorin.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen isäntäsolu, joka valitaan ryhmästä, joka koostuu seuraavista: hiiva-, hyön- 5 teis- ja nisäkässolut.
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen isäntäsolu, joka on hiivasolu.
6. Menetelmä tyyppiä 6a olevan ihmisen papillomavi-ruksen proteiinin ilmentämiseksi isännässä, joka menetelmä 10 käsittää sen, että a) viedään vektori, joka käsittää yhtä HPV6a-prote-iinia koodaavan DNA:n, joka valitaan ryhmästä, joka koostuu seuraavista: HPV6a L2 (sekvenssin nro 2 nukleotidit 4380-5804), 15 HPV6a El (sekvenssin nro 2 nukleotidit 717-2781), HPV6a E2 (sekvenssin nro 2 nukleotidit 2697-3829), HPV6a E4 (sekvenssin nro 2 nukleotidit 3242-3584), HPV6a E5 (sekvenssin nro 2 nukleotidit 3888-4163), HPV6a E6 (sekvenssin nro 2 nukleotidit 32-554) ja
20 HPV6a E7 (sekvenssin nro 2 nukleotidit 442-826) isäntäsoluun ja b) viljellään isäntäsolua olosuhteissa, jotka sallivat HPV6a-proteiinin ekspression vektorista.
7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, jol-25 loin isäntäsolu valitaan ryhmästä, joka koostuu seuraavista: hiiva-, hyönteis- ja nisäkässolut.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US31046894A | 1994-09-22 | 1994-09-22 | |
| US31046894 | 1994-09-22 | ||
| PCT/US1995/011859 WO1996009375A1 (en) | 1994-09-22 | 1995-09-18 | Dna encoding human papillomavirus type 6a |
| US9511859 | 1995-09-18 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI971203A0 FI971203A0 (fi) | 1997-03-21 |
| FI971203A FI971203A (fi) | 1997-03-21 |
| FI121507B true FI121507B (fi) | 2010-12-15 |
Family
ID=23202654
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI971203A FI121507B (fi) | 1994-09-22 | 1997-03-21 | Tyyppiä 6A olevaa ihmisen papillomavirusta koodaava DNA |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6290965B1 (fi) |
| EP (1) | EP0782615A4 (fi) |
| JP (1) | JPH10506014A (fi) |
| AU (1) | AU694269B2 (fi) |
| BG (1) | BG101338A (fi) |
| BR (1) | BR9509076A (fi) |
| CA (1) | CA2200582C (fi) |
| CZ (1) | CZ87597A3 (fi) |
| FI (1) | FI121507B (fi) |
| HU (1) | HUT77337A (fi) |
| NO (1) | NO971347L (fi) |
| NZ (1) | NZ293461A (fi) |
| PL (1) | PL319294A1 (fi) |
| RU (1) | RU2177999C2 (fi) |
| SK (1) | SK35897A3 (fi) |
| WO (1) | WO1996009375A1 (fi) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6962981B1 (en) * | 1996-03-25 | 2005-11-08 | Medarex, Inc. | Monoclonal antibodies specific for the extracellular domain of prostate-specific membrane antigen |
| GB9621091D0 (en) | 1996-10-09 | 1996-11-27 | Fondation Pour Le Perfectionem | Attenuated microorganisms strains and their uses |
| EA200100236A1 (ru) * | 1998-08-14 | 2001-08-27 | Мерк Энд Ко., Инк. | Способ очистки вирусных частиц, подобных вирусу папилломы человека |
| CN1100835C (zh) * | 1998-10-30 | 2003-02-05 | 中国科学院感光化学研究所 | 加入纳米无机化合物粒子的钛溶胶－凝胶涂料及其制法和用途 |
| GB0017990D0 (en) * | 2000-07-21 | 2000-09-13 | Glaxo Group Ltd | Papilloma virus sequences |
| WO2004081178A2 (en) * | 2003-03-06 | 2004-09-23 | Indiana University Research And Technology Corporation | Methods and composition for producing infectious hpv stocks |
| IL156670A0 (en) * | 2003-06-26 | 2004-01-04 | Zvi Zolotariov | Aloe suppositories |
| US20080160040A1 (en) * | 2004-04-15 | 2008-07-03 | Ghim Shin-Je | Plant-produced compositions for treating papillomavirus infection and related methods |
| EP1819835B1 (en) | 2004-12-08 | 2010-08-04 | Gen-Probe Incorporated | Detection of nucleic acids from multiple types of human papillomaviruses |
| US8084207B2 (en) * | 2005-03-03 | 2011-12-27 | Ibis Bioscience, Inc. | Compositions for use in identification of papillomavirus |
| US20070031826A1 (en) * | 2005-08-05 | 2007-02-08 | My Gene | Diagnostic kit for determining the genotype of a human papilloma virus and method of using thereof |
| WO2007038145A2 (en) * | 2005-09-08 | 2007-04-05 | Large Scale Biology Corporation | Modified tobacco mosaic virus particles as scaffolds for display of protein antigens for vaccine applications |
| KR100904844B1 (ko) * | 2006-08-28 | 2009-06-25 | 성균관대학교산학협력단 | 인유두종 바이러스（ｈｐｖ）유전자를 포함하는자궁경부암의 치료 또는 예방용 ｄｎａ 백신 |
| LT3075858T (lt) * | 2007-12-21 | 2020-04-27 | Novartis Ag | Žinduolių raiškos vektorius |
| US9376727B2 (en) | 2010-05-25 | 2016-06-28 | Qiagen Gaithersburg, Inc. | Fast results hybrid capture assay and associated strategically truncated probes |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE122007000096I1 (de) * | 1992-06-25 | 2008-03-27 | Papillomavirus vakzine | |
| CZ336696A3 (en) * | 1994-05-16 | 1997-07-16 | Merck & Co Inc | Isolated and purified proteins of papillomavirus and process for preparing thereof |
| AR004464A1 (es) * | 1994-11-14 | 1998-12-16 | Merck Sharp & Dohme | Un metodo para producir una proteina de capside de papilomavirus |
| IL117591A0 (en) * | 1995-03-30 | 1996-07-23 | Merck & Co Inc | Synthetic DNA encoding human papillomavirus type 11 L1 protein |
-
1995
- 1995-09-18 SK SK358-97A patent/SK35897A3/sk unknown
- 1995-09-18 HU HU9702290A patent/HUT77337A/hu unknown
- 1995-09-18 WO PCT/US1995/011859 patent/WO1996009375A1/en not_active Application Discontinuation
- 1995-09-18 JP JP8511012A patent/JPH10506014A/ja active Pending
- 1995-09-18 CZ CZ97875A patent/CZ87597A3/cs unknown
- 1995-09-18 PL PL95319294A patent/PL319294A1/xx unknown
- 1995-09-18 BR BR9509076A patent/BR9509076A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-09-18 RU RU97106340/13A patent/RU2177999C2/ru active
- 1995-09-18 CA CA002200582A patent/CA2200582C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-18 NZ NZ293461A patent/NZ293461A/en unknown
- 1995-09-18 AU AU35918/95A patent/AU694269B2/en not_active Expired
- 1995-09-18 EP EP95933148A patent/EP0782615A4/en not_active Ceased
-
1997
- 1997-03-18 BG BG101338A patent/BG101338A/xx unknown
- 1997-03-21 FI FI971203A patent/FI121507B/fi not_active IP Right Cessation
- 1997-03-21 NO NO971347A patent/NO971347L/no not_active Application Discontinuation
-
2000
- 2000-03-08 US US09/521,526 patent/US6290965B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU694269B2 (en) | 1998-07-16 |
| JPH10506014A (ja) | 1998-06-16 |
| NO971347D0 (no) | 1997-03-21 |
| EP0782615A1 (en) | 1997-07-09 |
| CA2200582A1 (en) | 1996-03-28 |
| PL319294A1 (en) | 1997-08-04 |
| CZ87597A3 (cs) | 1998-01-14 |
| FI971203A0 (fi) | 1997-03-21 |
| HUT77337A (hu) | 1998-03-30 |
| WO1996009375A1 (en) | 1996-03-28 |
| NO971347L (no) | 1997-05-21 |
| EP0782615A4 (en) | 2001-08-22 |
| BG101338A (en) | 1997-10-31 |
| FI971203A (fi) | 1997-03-21 |
| AU3591895A (en) | 1996-04-09 |
| NZ293461A (en) | 1998-04-27 |
| BR9509076A (pt) | 1998-07-14 |
| US6290965B1 (en) | 2001-09-18 |
| CA2200582C (en) | 2007-03-27 |
| MX9702209A (es) | 1997-07-31 |
| RU2177999C2 (ru) | 2002-01-10 |
| SK35897A3 (en) | 1998-02-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5840306A (en) | DNA encoding human papillomavirus type 18 | |
| US6159729A (en) | Synthetic HPV6/11 hybrid L1 DNA encoding human papillomavirus type 11 L1 protein | |
| FI121507B (fi) | Tyyppiä 6A olevaa ihmisen papillomavirusta koodaava DNA | |
| US5820870A (en) | Recombinant human papillomavirus type 18 vaccine | |
| PT1021547E (pt) | Formulações da vacinas com capsomeros do vírus papiloma e métodos de utilização | |
| RU2161651C2 (ru) | Очищенные белки вируса папилломы | |
| CA2215834C (en) | Dna encoding human papillomavirus type 18 | |
| WO1996015247A9 (en) | Purified papillomavirus proteins | |
| US6908615B1 (en) | DNA encoding human papilloma virus type 18 | |
| CA2204266C (en) | Purified papillomavirus proteins | |
| MXPA97002209A (en) | Dna that codifies for type human papilloma viruses |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: MERCK SHARP & DOHME CORP. Free format text: MERCK SHARP & DOHME CORP. |
|
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: MERCK SHARP & DOHME CORP. |
|
| MA | Patent expired |