RU2177999C2 - Экспрессирующий вектор (варианты) - Google Patents
Экспрессирующий вектор (варианты) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2177999C2 RU2177999C2 RU97106340/13A RU97106340A RU2177999C2 RU 2177999 C2 RU2177999 C2 RU 2177999C2 RU 97106340/13 A RU97106340/13 A RU 97106340/13A RU 97106340 A RU97106340 A RU 97106340A RU 2177999 C2 RU2177999 C2 RU 2177999C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hpv6a
- dna
- protein
- hpv
- cells
- Prior art date
Links
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 58
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 46
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 claims abstract description 38
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 21
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 206010059313 Anogenital warts Diseases 0.000 abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 abstract description 4
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 abstract description 4
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 92
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 47
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 40
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 description 25
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 20
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 18
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 17
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 17
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 14
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 13
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 13
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 12
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 208000000907 Condylomata Acuminata Diseases 0.000 description 8
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 8
- 208000025009 anogenital human papillomavirus infection Diseases 0.000 description 8
- 201000004201 anogenital venereal wart Diseases 0.000 description 8
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 8
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 8
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 8
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 7
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 6
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 6
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 description 5
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- -1 elixirs Substances 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241001502561 Human papillomavirus type 6a Species 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 3
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 3
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 241000701646 Kappapapillomavirus 2 Species 0.000 description 2
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 2
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N allantoin Chemical compound NC(=O)NC1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013602 bacteriophage vector Substances 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000000025 natural resin Substances 0.000 description 2
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 210000001533 respiratory mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 2
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 2
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 2
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- CRYXXTXWUCPIMU-WNQIDUERSA-N (2s)-2-aminobutanediamide;phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1.NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O CRYXXTXWUCPIMU-WNQIDUERSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N Allantoin Natural products NC(=O)N[C@@H]1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001203868 Autographa californica Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N Beta-Lactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N 0.000 description 1
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 101100007328 Cocos nucifera COS-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 101001065501 Escherichia phage MS2 Lysis protein Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 208000007842 Fibroepithelial Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101710125507 Integrase/recombinase Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 101150075239 L1 gene Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910013470 LiC1 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710157639 Minor capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- 101710136297 Protein VP2 Proteins 0.000 description 1
- 101710185720 Putative ethidium bromide resistance protein Proteins 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BCKXLBQYZLBQEK-KVVVOXFISA-M Sodium oleate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC([O-])=O BCKXLBQYZLBQEK-KVVVOXFISA-M 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700029229 Transcriptional Regulatory Elements Proteins 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000000260 Warts Diseases 0.000 description 1
- FHHZHGZBHYYWTG-INFSMZHSSA-N [(2r,3s,4r,5r)-5-(2-amino-7-methyl-6-oxo-3h-purin-9-ium-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl [[[(2r,3s,4r,5r)-5-(2-amino-6-oxo-3h-purin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl] phosphate Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1[N+]([C@H]1[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=C(C(N=C(N)N4)=O)N=C3)O)O1)O)=CN2C FHHZHGZBHYYWTG-INFSMZHSSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229960000458 allantoin Drugs 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 208000012999 benign epithelial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940105329 carboxymethylcellulose Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 230000001010 compromised effect Effects 0.000 description 1
- 238000013267 controlled drug release Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 201000004933 in situ carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 208000020082 intraepithelial neoplasia Diseases 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 208000024312 invasive carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical class [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- ADKOXSOCTOWDOP-UHFFFAOYSA-L magnesium;aluminum;dihydroxide;trihydrate Chemical compound O.O.O.[OH-].[OH-].[Mg+2].[Al] ADKOXSOCTOWDOP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical class CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229940078555 myristyl propionate Drugs 0.000 description 1
- 210000003739 neck Anatomy 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 239000008024 pharmaceutical diluent Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 description 1
- 229920002721 polycyanoacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920006324 polyoxymethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 238000009666 routine test Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002453 shampoo Substances 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 201000010153 skin papilloma Diseases 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M sodium octadecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- YRZGMTHQPGNLEK-UHFFFAOYSA-N tetradecyl propionate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCOC(=O)CC YRZGMTHQPGNLEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 210000003905 vulva Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 1
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 1
- 229930195724 β-lactose Natural products 0.000 description 1
- PAPBSGBWRJIAAV-UHFFFAOYSA-N ε-Caprolactone Chemical compound O=C1CCCCCO1 PAPBSGBWRJIAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к генной инженерии. Предложены экспрессирующие векторы, включающие гетерологичный промотор Т7, Т3, СМV, HIV LTR или РН и нуклеиновую кислоту (НК). НК кодирует белок 6а вируса папилломавируса человека (HPV). Это может быть L2, Е1, Е2, Е4, Е5а, Е5b, Е6 и Е7. Вектор трансформирует дрожжевую клетку-хозяин. Изобретение позволяет разработать профилактическую или терапевтическую вакцину против остроконечной кондиломы. 4 с. и 4 з. п. ф-лы, 1 табл.
Description
Данная заявка является продолжением находящейся на рассмотрении заявки США сер. номер 08/310468, поданной 22 сентября 1994.
Область техники
Данное изобретение относится к ДНК молекулам, кодирующим очищенный папилломавирус типа 6а человека, и ее производным.
Данное изобретение относится к ДНК молекулам, кодирующим очищенный папилломавирус типа 6а человека, и ее производным.
ЧПВ6а (НРV6а) нуклеотидная последовательность N2.
Предшествующий уровень техники
Инфекции папилломавируса (PV) встречаются у ряда животных, включая людей, овец, собак, кошек, кроликов, обезьян, змей и коров. Папилломавирусы инфицируют эпителиальные клетки, обычно вызывая доброкачественные эпителиальные или фиброэпителиальные опухоли в месте инфекции. ПВ являются разновидностями специфических инфекционных агентов (возбудителей инфекций); папилломавирус человека не инфицирует животное, не относящееся к человеку.
Инфекции папилломавируса (PV) встречаются у ряда животных, включая людей, овец, собак, кошек, кроликов, обезьян, змей и коров. Папилломавирусы инфицируют эпителиальные клетки, обычно вызывая доброкачественные эпителиальные или фиброэпителиальные опухоли в месте инфекции. ПВ являются разновидностями специфических инфекционных агентов (возбудителей инфекций); папилломавирус человека не инфицирует животное, не относящееся к человеку.
Папилломавирусы могут быть классифицированы на различные группы, исходя из хозяина, которого они инфицируют. Человеческие папилломавирусы (HPV), кроме того, классифицируются на более чем 70 типов с учетом гомологии ДНК последовательности. По-видимому, PV типы являются тип-специфическими иммуногенами в том смысле, что приобретенный иммунитет к инфекции одним типом папилломавируса не придает иммунитет против другого типа папилломавируса.
У людей различные типы HPV вызывают различные заболевания. HPV типы 1, 2, 3, 4, 7, 10 и 26-29 вызывают доброкачественные бородавки как у нормальных индивидуумов, так и у индивидуумов с ослабленным иммунитетом (иммунологически "скомпрометированных"). HPV типы 5, 8, 9, 12, 14, 15, 17, 19-25, 36 и 46-50 вызывают плоские поражения у индивидуумов с ослабленным иммунитетом. HPV типы 6, 11, 34, 39, 41-44 и 51-55 вызывают доброкачественные кондиломы слизистой оболочки половых органов или дыхательных путей. HPV типы 16 и 18 вызывают эпителиальную дисплазию слизистой оболочки половых органов и ассоциируются с большинством in situ и инвазийными карциномами шейки, влагалища, вульвы и анальной части прямой кишки.
Папилломавирусы представляют собой небольшие (50-60 нм), безоболочные, икосаэдрические ДНК вирусы, которые кодируют вплоть до восьми "ранних" и два "поздних" гена. Открытые рамки считывания ORFs вирусных геномов обозначают Е1-Е7 и L1 и L2, где "Е" обозначает ранний и "L" обозначает поздний. L1 и L2 кодируют вирусные капсидные белки. Ранние (Е) гены ассоциируют с функциями, такими как вирусная репликация и клеточная трансформация.
L1 белок представляет основной капсидный белок и имеет молекулярную массу 55-60 кДа. L2 белок представляет минорный капсидный белок, который имеет предсказанную молекулярную массу 55-60 кДа и наблюдаемую молекулярную массу 75-100 кДа, определенную электрофорезом в полиакриламидном геле. Данные иммунологического обследования подтверждают, что большая часть L2 белка является внутренней по отношению к L белку. L1 ORF высоко консервативна среди различных папилломавирусов. L2 белки менее консервативны среди различных папилломавирусов.
L1 и L2 гены были идентифицированы как хорошие мишени для иммунопрофилактики. Кроме того, как было показано, некоторые из ранних генов являются потенциальными мишенями для разработки вакцины. Исследования на системах папилломавируса одичавшего американского кролика (CRPV) и бычьего папилломавируса (ВРV) показали, что иммунизации этими белками, экспрессированными в бактериях, или путем использования вакцинных векторов защищают животных от вирусной инфекции. Экспрессия L1 генов папилломавируса в бакуловирусных экспрессирующих системах или использование вакцинных векторов приводит к ансамблю вирусоподобных частиц (VLP), которые используют для того, чтобы вызвать ответы вирус-нейтрализующих антител с высоким титром, которые коррелируют с защитой от вирусного контрольного заражения.
HPV6 и HPV11, которые лишь редко связывают с злокачественностями, являются этиологическими (причинными) факторами ~ 90% остроконечных кондилом, доброкачественных патологических изменений дыхательной слизистой оболочки и слизистой оболочки половых органов. HPV6 определяется в этих поражениях в три раза чаще, чем HPV11.
Полная нуклеотидная последовательность HPV6b, первоначальный HPV6 изолят, была определена (Schwarz, E. , et al 1983. EMBO J. 2: 2341-8). Другие НРV6 субтипы были идентифицированы, исходя из рестрикционных картин ферментативного переваривания (Gissmann. L. , et al. 1983. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80: 560-3; Mounts, et al. 1982. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79: 5425-9).
Несколькими группами показано, что НРV6а представляет предоминантный субтип, обнаруженный при биопсии кондиломы остроконечной у пациентов в США и Европе. Последнее сообщение подтверждает, что HPV6a является НРV6 прототипом (Kitasato, H. , et al. 1994. J. Gen. Virol. 75: 1157-1162). Установлено, что в США только приблизительно один процент из всех мужчин и женщин в возрастной группе от 15 до 49 лет обращаются к врачу с кондиломой остроконечной. К сожалению, не существует эффективного лечения для HPV-родственного заболевания. Поэтому, вакцина была бы крайне желательна. Для разработки профилактической или терапевтической вакцины, однако, определение последовательности поздних и ранних генов наиболее общих НРV субтипов крайне важна.
Ограниченная информация о последовательности, относительно НРV6а, касается длинной контрольной области (LCR) и Е6 и Е7. Текущая заявка раскрывает клонирование HP 6a из биоптата кандиломы остроконечной, определение полной последовательности вирусной ДНК и соответствующих аминокислотных последовательностей основных открытых рамок считывания (ORFs) НРV6а.
Данное изобретение относится к ДНК молекулам, кодирующим очищенный папилломавирус типа 6a человека (HPV тип 6a; НРV6а), и использованию ДНК молекул.
Сущность изобретения
Данное изобретение относится к ДНК молекулам, кодирующим очищенный папилломавирус типа 6a человека (HPV тип 6a; НРV6а), и их производным.
Данное изобретение относится к ДНК молекулам, кодирующим очищенный папилломавирус типа 6a человека (HPV тип 6a; НРV6а), и их производным.
Детальное описание изобретения
Данное изобретение относится к ДНК молекулам, кодирующим очищенный человеческий папилломавирус типа 6a (HPV тип 6a; HPV6a), и их производным. Такие производные включают, но ими не ограничиваются, пептиды и белки, кодированные ДНК, антитела к ДНК или антитела к белкам, кодированным ДНК, вакцины, включающие ДНК, или вакцины, включающие белки, кодированные ДНК, иммунологические композиции, включающие ДНК или белки, кодированные ДНК, наборы, содержащие ДНК или РНК, полученные из ДНК или белков, кодированных ДНК.
Данное изобретение относится к ДНК молекулам, кодирующим очищенный человеческий папилломавирус типа 6a (HPV тип 6a; HPV6a), и их производным. Такие производные включают, но ими не ограничиваются, пептиды и белки, кодированные ДНК, антитела к ДНК или антитела к белкам, кодированным ДНК, вакцины, включающие ДНК, или вакцины, включающие белки, кодированные ДНК, иммунологические композиции, включающие ДНК или белки, кодированные ДНК, наборы, содержащие ДНК или РНК, полученные из ДНК или белков, кодированных ДНК.
HPV6 является основным причинным фактором остроконечной кондиломы (доброкачественные патологические изменения дыхательной слизистой оболочки и слизистой оболочки половых органов). Полная нуклеотидная последовательность НРV6b, первоначальный HPV6 изолят, была определена. Другие НРV6 субтипы были идентифицированы, исходя из рестрикционных картин ферментативного переваривания.
Несколько групп показали, что НРV6а представляет предоминантный субтип, обнаруженный в биоптатах кондиломы остроконечной у пациентов в США и Европе. Установлено, что в США только приблизительно один процент из всех мужчин и женщин в возрастной группе от 15 до 49 лет обращаются к врачам с кондиломой остроконечной. К сожалению, не существует эффективного лечения для HPV-родственного заболевания. Поэтому, вакцина была бы крайне желательна. Для разработки профилактической или терапевтической вакцины, однако, определение последовательности поздних и ранних генов наиболее общих HPV субтипов крайне важно. К сожалению, не существует эффективного лечения для HPV-родственного заболевания. Поэтому, вакцина была бы крайне желательна. Для разработки профилактической или терапевтической вакцины, однако, определение последовательности поздних и ранних генов наиболее общих HPV субтипов крайне важно.
Ограниченная информация о последовательности, относительно HP 6а, касается длинной контрольной области (LCR) и Е6 и Е7 (ORFs). Текущая заявка раскрывает клонирование НРV6а из биоптата кондиломы остроконечной, определение полной последовательности вирусной ДНК и соответствующих аминокислотных последовательностей основных открытых рамок считывания (ORFs) HPV6a. Данное изобретение относится к ДНК молекулам, кодирующим очищенный папилломавирус типа 6а человека (НРV тип 6а; HPV6а), и производным ДНК молекул.
Фармацевтически полезные композиции, включающие ДНК или белки, кодированные ДНК, могут быть приготовлены согласно известным способам, таким как смешение с фармацевтически приемлемым носителем. Примеры таких носителей и способов приготовления можно найти в Remington's Pharmaceutical Sciences. Для получения фармацевтически приемлемой композиции, пригодной для эффективного применения, такие композиции должны содержать эффективное количество белка или VLР. Такие композиции могут содержать белки или VLР, полученные из более чем одного типа HPV.
Терапевтические или диагностические композиции данного изобретения вводят индивидууму в количествах, достаточных для лечения или диагностирования PV инфекций. Эффективное количество можно варьировать исходя из ряда факторов, таких как состояние индивидуума, вес, пол и возраст. К другим факторам относится способ введения лекарственного препарата. Обычно композиции вводят в дозах в пределах от около 1 мкг до 1 мг.
Фармацевтические композиции могут вводиться индивидууму целым рядом маршрутов, такими как подкожный, местный, оральный, через слизистую оболочку, внутривенный и внутримышечный.
Вакцины данного изобретения включают ДНК, РНК или белки, кодированные ДНК, которые содержат антигенные детерминанты, необходимые для того, чтобы вызвать образование нейтрализующих антител у хозяина. Такие вакцины также достаточно безопасны для того, чтобы их можно было ввести, не опасаясь клинического заражения; не имеют токсических побочных действий; могут вводиться эффективным путем; стабильны и совместимы с носителями вакцины.
Вакцины можно вводить различными путями, такими как орально, парентерально, подкожно, через слизистую оболочку, внутривенно или внутримышечно. Вводимая доза может варьироваться в соответствии с состоянием, полом, весом и возрастом индивидуума; путем введения; и типом ПВ (PV) вакцины. Вакцина может применяться в различных лекарственных формах, таких как капсулы, суспензии, эликсиры или жидкие растворы. Вакцина может быть приготовлена с иммунологически приемлемым носителем.
Вакцины вводят в терапевтически эффективных количествах, т. е. в количествах, достаточных для генерирования иммунологически защитного ответа. Терапевтически эффективное количество может варьироваться, исходя из типа ПВ (PV). Вакцину можно вводить однократными дозами или многократно. Для приготовления иммуногенных композиций могут быть использованы ДНК и ДНК производные данного изобретения. Такие композиции при введении соответствующему хозяину способны вызвать иммунный ответ у хозяина.
ДНК и их производные можно использовать для генерирования антител. Используемый здесь термин "антитело" включает как поликлональные, так и моноклональные антитела, а также их фрагменты, такие как Fv, Fab и F(ab)2 фрагменты, которые способны связывать антиген или гаптен.
ДНК и ДНК производные данного изобретения могут использоваться для инфекции серотипа HPV и HPV скрининга. ДНК, рекомбинантные белки, VLP и антитела пригодны сами по себе для приготовления наборов, пригодных для определения и серотипирования HPV. Такой набор должен включать подходящий компарт-ментализованный носитель, который содержится в строгой изоляции, по крайней мере, в одном контейнере. Носитель, кроме того, должен включать реагенты, такие как НРV6а ДНК, рекомбинантный HPV белок или VLР или анти-НРV антитела, пригодные для определения целого ряда HPV типов. Носитель может также содержать средство для определения, такое как меченый антиген или субстраты фермента или т. п.
ДНК и полученные с ее помощью белки также используют в качестве маркеров молекулярных масс и молекулярных размеров.
Поскольку генетический код вырожден, более чем один кодон может быть использован для кодирования конкретной аминокислоты, и поэтому аминокислотная последовательность может кодироваться любым набором сходных ДНК олигонуклеотидов. Только один представитель набора будет идентичным НРV6а последовательности, но будет способен к гибридизации с НРV6а ДНК даже в присутствии ДНК олигонуклеотидов с ошибочным спариванием в соответствующих условиях. В альтернативных условиях, ошибочно спаренные ДНК олигонуклеотиды могут все же гибридизировать с НРV6а ДНК, допуская идентификацию и изоляцию ДНК, кодирующую HPV6a.
Очищенная HPV6a ДНК данного изобретения или ее фрагменты могут быть использованы для изоляции и очистки гомологов и фрагментов HPV6a от других источников. Чтобы выполнить это, сначала HPV6a ДНК можно смешать с образцом, содержащим ДНК, кодирующей гомологи HPV6a, в соответствующих условиях гибридизации. Гибридизированный ДНК комплекс можно изолировать и ДНК, кодирующую гомологичную ДНК, можно очистить из него.
Известно, что существует значительная избыточность в различных кодонах, которые кодируют специфические аминокислоты. Поэтому данное изобретение также относится к тем ДНК последовательностям, которые содержат альтернативные кодоны, которые кодируют возможную трансляцию идентичной аминокислоты. Для целей этого описания, последовательность, несущая один или более замещенных кодонов, будет определяться как вырожденная вариация. В объем данного изобретения включены также мутации либо в ДНК последовательности, либо в транслированном белке, которые существенно не меняют конечные физические свойства экспрессированного белка. Например, замещение лейцина на валин, лизина на аргинин или глутамина на аспарагин не может вызывать изменение в функциональности полипептида.
Известно, что ДНК последовательности, кодирующие пептид, могут быть изменены так, чтобы кодировать пептид, имеющий свойства, которые отличаются от свойств встречающегося в природе пептида. Способы изменения ДНК последовательности включают, но ими не ограничиваются, сайт-направленный мутагенез.
Используемый здесь термин "функциональное производное" HPV6a представляет соединение, которое обладает биологической активностью (либо функциональной, либо структурной), которая, в основном, сходна с биологической активностью HPV6a. Термин "функциональные производные", как полагают, включает "фрагменты", "варианты", "дегенеративные варианты", "аналоги" и "гомологи" или "химические производные" HPV6a. Термин "фрагмент", как полагают, относится к любой полипептидной субпопуляции HPV6a. Термин "вариант", как полагают, относится к молекуле, в основном, сходной по структуре и функции либо ко всей HPV6a молекуле, либо к ее фрагменту. Молекула является "по существу подобной" HPV6a, если обе молекулы имеют, в основном, подобные структуры или если обе молекулы обладают сходной биологической активностью. Поэтому, если две молекулы обладают, в основном, сходной активностью, то, как полагают, они являются вариантами, даже если структура одной из этих молекул не обнаружена в другой, или даже если две аминокислотные последовательности не идентичны. Термин "функциональное производное" не включает HPV6a.
Термин "аналог" относится к молекуле, в основном, сходной по функции либо ко всей HPV6a молекуле, либо к ее фрагменту.
Целый ряд способов может быть использован для молекулярного клонирования HPV6a ДНК. Эти способы включают, но ими не ограничиваются, прямую функциональную экспрессию HPV6a генов с последующим конструированием НРV6а-содержащей кДНК или геномной ДНК библиотеки в соответствующей системе вектора экспрессии. Другой способ заключается в скрининге НРV6а-содержащей кДНК или геномной ДНК библиотеки, встроенной в бактериофаг или шатл-вектор плазмиды с меченым олигонуклеотидным зондом, сконструированным из аминокислотной последовательности НРV6а. Дополнительный способ состоит из скрининга НРV6а-содержащей кДНК или геномной ДНК библиотеки, встроенной в бактериофаг или шатл-вектор плазмиды с неполной ДНК, кодирующей НРV6а. Эту неполную ДНК получают путем амплификации полимеразно-цепьевой реакции (ПЦР, PCR) НРV6а ДНК фрагментов через дизайн вырожденных олигонуклеотидных праймеров из аминокислотной последовательности очищенного НРV6а. Другой способ состоит в изоляции РНК из НРV6а-продуцирующих клеток и трансляции РНК в белок посредством in vitro или in vivo системы трансляции. Трансляция РНК в пептид или белок приведет к получению, по крайней мере, части НРV6а белка, который может быть идентифицирован, например, по активности HPV6a белка, или по иммунологической реакционной способности с анти-НРV6а антителом. В этом способе пулы РНК, изолированные из НРV6а-продуцирующих клеток, могут быть анализированы на присутствие РНК, которая кодирует, по крайней мере, часть НРV6а. Кроме того, можно осуществить фракционирование ДНК пула для того, чтобы очистить НРV6а РНК от не-НРV6а РНК. Пептид или белок, полученный этим способом, можно проанализировать на обеспечение аминокислотных последовательностей, которые, в свою очередь, используют для получения праймеров для получения НРV6а кДНК, или РНК, используемую для трансляции, можно проанализировать на получение нуклеотидных последовательностей, кодирующих НРV6а, и получение зондов для скрининга НРV6а кДНК библиотеки. Эти способы известны в данной области техники и их можно найти, например, Sambrook, J. , Fritsch, E. F. , Maniatis, T. in Molecular Cloning; A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989.
Очевидно, что другие типы библиотек, а также библиотеки, сконструированные из других клеток или типов клеток, могут быть использованы для изоляции НРV6а-кодирующей ДНК. Другие типы библиотек включают, но не ограничиваются ими, кДНК библиотеки, полученные от других клеток или линий клеток, содержащих HPV тип 6а, и геномные ДНК библиотеки. Получение кДНК библиотек может быть осуществлено целым рядом техник. Техники конструирования кДНК библиотек можно найти, например, в вышеупомянутой ссылке Sambrook, J. , et аl. . Очевидно, что ДНК, кодирующая НРV6а, может быть также изолирована из подходящей геномной ДНК библиотеки. Конструирование геномных ДНК библиотек может быть выполнено с помощью целого ряда техник. Техники конструирования геномных ДНК библиотек можно найти в Sambrook, J. et al. выше.
Клонированная НРV6а ДНК или ее фрагменты, полученные с помощью описанных здесь способов, могут быть рекомбинантно экспрессированы путем молекулярного клонирования в вектор экспрессии, содержащий промотор и другие соответствующие регуляторные элементы транскрипции, и перенесены в прокариотические или эукариотические клетки-хозяева с получением рекомбинантного НРV6а. Техники для такого манипулирования детально описаны Sambrook, J. , et al. выше и известны в данной области.
Векторы экспрессии определены здесь как ДНК последовательности, которые требуются для транскрипции клонированных копий генов и трансляции их мРНК в соответствующем хозяине. Такие векторы могут быть использованы для того, чтобы экспрессировать эукариотические гены в целом ряде хозяев, таких как бактерии, сине-зеленые водоросли, клетки растений, клетки насекомых, клетки грибов и клетки животных. Специфически сконструированные векторы допускают челночный перенос ДНК между хозяевами, такими как бактерии - дрожжевые грибки, или бактерии - клетки животных, или бактерии - грибковые клетки, или бактерии - клетки беспозвоночных. Соответствующим образом сконструированный вектор экспрессии должен содержать: источник репликации для автономной репликации в клетках-хозяевах, способные к селекции маркеры, ограниченное число сайтов, используемых для рестрикции ферментами, потенциал для высокого числа копий, и активные промоторы. Промотор определяют как ДНК последовательность, которая направляет РНК полимеразу для связывания с ДНК и инициирования РНК синтеза. Сильный промотор представляет промотор, который заставляет мРНК инициироваться с высокой частотой. Векторы экспрессии включают, но не ограничиваются, клонирующие векторы, модифицированные клонирующие векторы, специально сконструированные плазмиды или вирусы.
Целый ряд векторов экспрессии млекопитающих может быть использован для экспрессии НРV6а ДНК или ее фрагментов в клетках млекопитающего. Коммерчески доступные векторы экспрессии млекопитающих, которые могут быть пригодными для экспрессии рекомбинантного НРV6а, включают, но ими не ограничиваются, pcDNA3 (Invitrogen), pMClneo (Stratagen), pXTl (Stratagen), pSG5 (Stratagen), EVO-pSV2-neo (ATCC 37593), pBPV-1 (8-2) (ATCC 37110), pdBPV-MMTneo (343-12) (ATCC 37224), pRSVgpt (ATCC 37199), pRSVneo (ATCC 37198), pSV2-dhfr (ATCC 37146), pUCTag (ATCC 37460) и λZD35 (ATCC 37565).
Целый ряд бактериальных векторов экспрессии может быть использован для экспрессии НРV6а ДНК или ее фрагментов в бактериальных клетках. Коммерчески доступные бактериальные векторы экспрессии, которые могут быть пригодными, включают, но ими не ограничиваются, pETlla (Novagen), лямбда gtll (Invitrogen), pcDNAII (Invitrogen), pKK223-3 (Pharmacia).
Целый ряд векторов экспрессии грибковых клеток может быть использован для экспрессии НРV6а ДНК или ее фрагментов в грибковых клетках. Коммерчески доступные векторы экспрессии грибковых клеток, которые могут быть пригодными, включают, но ими не ограничиваются, pYES 2 (Invitrogen) и Pichia вектор экспрессии (Invitrogen).
Целый ряд векторов экспрессии клеток насекомых может быть использован для экспрессии НРV6а ДНК или ее фрагментов в клетках насекомых. Коммерчески доступные векторы экспрессии клеток насекомых, которые могут быть пригодными, включают, но не ограничиваются, pBlue Вас Ш (Invitrogen).
Вектор экспрессии, содержащий ДНК, кодирующую HPV6a или его фрагменты, может быть использован для экспрессии HPV6a белков или фрагментов НPV6а белков в клетке, тканях, органах или животных (включая людей). Клетки-хозяева могут быть прокариотическими или эукариотическими, включая, но не ограничиваясь, бактерии, такие как E. coli, грибковые клетки, такие как дрожжевые грибки, клетки млекопитающих, включая, но не ограничиваясь, клеточные линии человека, быка, свиньи, обезьяны и грызунов, и клетки насекомых, включая, но не ограничиваясь, клеточные линии, полученные от дрозофилы (Drosophila) и тутового шелкопряда. Клеточные линии, полученные от видов млекопитающего, которые могут быть пригодны и которые коммерчески доступны, включают, но не ограничиваются, L клетки L-M(TK-) (ATCC CCL 1.3), L клетки L-M (ATCC CCL 1.2), 293 (ATCC CRL 1573), Raji (ATCC CCL 86), CV-1 (ATCC CCL 70), COS-1 (ATCC CRL 1650), COS-7 (ATCC CRL 1651), CHO-Kl (ATCC CCL 61), 3T3 (ATCC CCL 92), NIH/3T3 (ATCC CRL 1658), HeLa (ATCC CCL 2), C1271 (ATCC CRL 1616), BS-C-1 (ATCC CCL 26) и MRC-5 (ATCC CCL 171).
Вектор экспрессии может быть введен в клетки-хозяева при помощи одной из ряда техник, включая, но не ограничиваясь, трансформацию, трансфекцию, липофекцию, слияние протопластов, и электропорацию. Клетки, содержащие вектор экспрессии, клонально размножают и индивидуально анализируют для того, чтобы определить, образуют ли они HPV6a белок. Идентификацию клонов клеток-хозяев, экспрессирующих HPV6a, можно осуществить несколькими способами, включая, но не ограничиваясь, иммунологическую реактивность с анти-НРV6а антителами, и присутствие активности клетка-хозяин-связанный HPV6a, такой как связывание НРV6а-специфический лиганд или сигнальная трансдукция, определяемая как ответ, опосредованный взаимодействием НРV6а-специфических лигандов при HPV6a.
Экспрессию HPV ДНК фрагментов можно также осуществить, используя in vitro полученную синтетическую мРНК или нативную мРНК. Синтетическая мРНК или мРНК, изолированная из HPV6a продуцирующих клеток, может быть эффективно транслирована в различные бесклеточные системы, включая, но не ограничиваясь, экстракты пшеничных зародышей и экстракты ретикулоцитов, а также может быть эффективно транслирована в системы на основе клеток, включая, но не ограничиваясь, микроинъекцию в ооциты лягушек, причем микроинъекция в ооциты лягушек предпочтительна.
После экспрессии HPV6a белка(ов) в клетке-хозяйке, НРV6а белок может быть выделен, чтобы получить HPV6a в очищенной форме. Несколько методик очистки НРV6а доступны и пригодны для использования. Как описано здесь, рекомбинантный НРV6а белок может быть очищен от клеточных лизатов и экстрактов путем различных комбинаций, или индивидуального применения фракционирования солями, ионообменной хроматографии, эксклюзивной хроматографии по размерам, адсорбционной хроматографии на гидроксилапатите и гидрофобной хроматографии.
Кроме того, рекомбинантный НРV6а может быть отделен от других клеток белков с помощью использования иммуноаффинной колонки, изготовленной с моноклональными или поликлональными антителами, специфичными для насцентного НРV6а полной длины, или полипептидных фрагментов НРV6а. Моноклональные и поликлональные антитела можно получить рядом известных в данной области способов. Моноклональное или моноспецифическое антитело, используемое здесь, определяют как вид простого антитела или тип антитела со сложной структурой с характеристиками связывания с НРV6а. Однородное связывание, используемое здесь, относится к способности вида антитела связываться с специфическим антигеном или эпитопом. Очевидно, что способы получения моноспецифических антител могут быть использованы для получения антител, специфичных для НРV6а полипептидных фрагментов, или полноразмерного полипептида насцентного НРV6а. В частности, очевидно, что могут быть генерированы моноспецифические антитела, которые специфичны для полностью функционального HPV6a или его фрагментов.
Кроме того, данное изобретение относится к способам скрининга соединений, которые модулируют экспрессию ДНК или РНК, кодирующих НРV6а, а также функцию(и) НРV6а белка(ов) in vivo. Соединения, которые модулируют эти активности, могут быть ДНК, РНК, пептидами, белками, или небелковыми органическими молекулами. Соединения могут моделировать, увеличивая или уменьшая экспрессию ДНК или РНК, кодирующей HPV6а, или функцию НРV6а белка. Соединения, которые модулируют экспрессию ДНК или РНК, кодирующих НРV6а или функцию HPV6a белка, можно определить с помощью ряда анализов. Анализ может быть простым "да/нет" анализом для того, чтобы определить, имеется ли изменение в экспрессии или функции. Анализ может быть проведен качественно путем сравнения экспрессии или функции испытываемого образца с уровнем экспрессии или функции стандартного образца.
Можно получить наборы, содержащие НРV6а ДНК, фрагменты НРV6а ДНК, антитела к НРV6а ДНК или НРV6а белку, НРV6а РНК или НРV6а белок. Такие наборы используют для определения ДНК, которая гибридизирует с НРV6а ДНК, или для определения присутствия НРV6а белка(ов) или пептидных фрагментов в образце. Такую характеристику используют для ряда целей, включая, но не ограничиваясь, судебную экспертизу и эпидемиологические исследования.
Нуклеотидные последовательности, которые комплементарны ДНК последовательности, кодирующей НРV6а, можно синтезировать для антисмысловой терапии. Эти антисмысловые молекулы могут быть ДНК, стабильными производными ДНК, такими как фосфоротиоаты или метилфосфонаты, РНК, стабильными производными РНК, такими как 2-О-алкилРНК, или другими НРV6а антисмысловыми олигонуклеотидными миметиками. НРV6а антисмысловые молекулы могут быть введены в клетки с помощью микроинъекции, липосомной инкапсуляции или путем экспрессии из векторов, содержащих антисмысловую последовательность. НРV6а антисмысловую терапию можно, в частности, использовать для лечения болезней в том случае, когда полезно понизить НРV6а активность.
Термин "химическое производное" описывает молекулу, которая содержит дополнительные химические части, которые обычно не являются частью основной молекулы. Такие части могут улучшить растворимость, период полураспада, абсорбцию и т. д. основной молекулы. Альтернативно, части могут ослабить нежелательные побочные действия основной молекулы или уменьшить токсичность основной молекулы. Примеры таких частей описаны в ряде изданий, таких как Remington's Pharmaceutical Science.
Соединения, идентифицированные согласно описанным здесь способам, могут быть использованы как таковые в соответствующих дозах, определенных рутинным испытанием для того, чтобы получить оптимальное ингибирование НРV6а или его активности при сведении к минимуму какой-либо потенциальной токсичности. Кроме того, может быть желательно совместное введение или последовательное введение других агентов.
Преимущественно, соединения данного изобретения могут применяться в виде разовой суточной дозы, или общая суточная доза может быть введена несколькими небольшими дозами, повторяемыми через определенные интервалы времени. Кроме того, соединения данного изобретения можно вводить рядом маршрутов, включая, но не ограничиваясь, интраназальный, трансдермальный, с помощью суппозиториев, оральный, и т. п.
Для комбинированного лечения более чем одним активным агентом, когда активные агенты находятся в раздельных лекарственных формах, активные агенты могут применяться конкурентно, или каждый может вводиться в отдельно определенное для него время.
Схему приема лекарственного средства, использующую соединения данного изобретения, подбирают в соответствии с рядом факторов, включая тип, вид, возраст, вес, пол и состояние здоровья пациента; тяжесть состояния, подлежащего лечению; маршрут введения; функцию почек и печени пациента и конкретное применяемое соединение. Врач средней квалификации может легко определить и прописать эффективное количество лекарственного средства, требуемого для предотвращения, противодействия или подавления развития состояния. Оптимальная точность в достижении концентраций лекарственного средства внутри интервала, который дает эффективность без проявления токсичности, требует режима с учетом кинетики доступности лекарственного средства в места-мишени. Это включает рассмотрение распределения, равновесия и удаление лекарственного средства.
В способах данного изобретения, подробно описанные здесь соединения составляют активный ингредиент, и их обычно применяют в смеси с подходящими фармацевтическими разбавителями, наполнителями или носителями (вместе называемые здесь как вещества-"носители"), выбранными в соответствии с предполагаемой формой введения, т. е. , таблетки для перорального применения, капсулы, эликсиры, сироп, суппозитории, гели и т. п. , и в соответствии с обычной фармацевтической практикой.
Например, для орального применения в форме таблетки или капсулы, активный лекарственный компонент можно комбинировать с пероральным, нетоксичным, фармацевтически приемлемым инертным носителем, таким как этанол, глицерин, вода и т. п. Кроме того, когда требуется или при необходимости, в эту смесь также могут быть включены подходящие связующие, смазки, дезинтегрирующие агенты и окрашивающие агенты. К подходящим связующим относятся, без ограничения, крахмал, желатин, природные сахара, такие как глюкоза или бета-лактоза, зерновые подсластители, природные и синтетические смолы, такие как акация, трагакант или альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлоза, полиэтиленгликоль, воски и т. п. К смазкам, используемым в этих лекарственных формах, относятся, без ограничения, олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и т. п. К дезинтеграторам относятся, без ограничения, крахмал, метилцеллюлоза, агар, бентонит, ксантановая смола и т. п.
Для жидких форм, активный лекарственный компонент можно комбинировать с подходящими, придающими запах, суспендирующими или диспергирующими агентами, такими как синтетические или природные смолы, например, трагакант, акация, метилцеллюлоза и т. п. К другим диспергирующим агентам, которые можно использовать, относятся глицерин и т. п. Для парентерального применения, желательны суспензии и растворы. Когда требуется внутривенное применение, используют изотонические препараты, которые обычно содержат подходящие консерванты.
Препараты местного применения, содержащие активный лекарственный компонент, можно смешивать с рядом веществ-носителей, хорошо известных в данной области, такими как, например, спирты, аллантоин, глицерин, масла витаминов А и Е, минеральное масло, РРG2 миристил пропионат, и т. п. , с получением, например, спиртовых растворов, очищающих средств для местного применения, очищающих гелей, гелей для кожи, лосьонов для кожи и шампуней в формуляциях в виде крема или геля.
Кроме того, соединения данного изобретения можно применять в форме липосомных систем доставки, таких как небольшие однородные ламелярные везикулы, большие однородные ламелярные везикулы и мультиламелярные везикулы. Липосомы можно получать из целого ряда фосфолипидов, таких как холестерин, стериламин или фосфатидилхолины.
Соединения данного изобретения могут быть также доставлены путем использования моноклональных антител в качестве индивидуальных носителей, с которыми связывают молекулы соединения. Соединения данного изобретения можно также соединить с растворимыми полимерами в качестве носителей, способных доставить лекарственное средство к мишени. К таким полимерам могут относиться поливинилпирролидон, сополимер пирана, полигидроксипропилметакрилат-амидфенол, полигидроксиэтиласпартамидфенол или полиэтиленоксидполилизин, замещенный пальмитоильными остатками. Кроме того, соединения данного изобретения можно связать с классом биодеградируемых полимеров, используемых для достижения контролируемого выделения лекарственного средства, например, полиакриловая кислота, полиэпсилон капролактон, полигидрокси бутировая кислота, полиортоэфиры, полиацетали, полидигидропираны, полицианоакрилаты и сшитые или амфипатик (amphipathic) блоксополимеры гидрогелей.
Нижеследующие примеры иллюстрируют данное изобретение, не ограничивая его.
Пример 1
Экстракция нуклеиновой кислоты из биоптата
У женщины, 25 лет, послеродового периода, извлекают патологическое изменение в виде большой остроконечной кондиломы в наружных половых органах. Фрагмент поражения замораживают в жидком азоте, затем обрабатывают в Braun микродисмембраторе П (В. Braun Instruments, Melsungen, Germany). Полученное вещество солюбилизируют в 0,6% (об. /вес) додецилсульфате натрия (SDS), обрабатывают протеиназой К (50 мкг/мл) и экстрагируют смесью фенол/хлороформ/изоамиловый спирт. ДНК осаждают этанолом и количественно определяют с помощью УФ-спектрофотометрии. Присутствие высокомолекулярной ДНК определяют электрофорезом на агарозном геле с последующим прокрашиванием этидиум бромидом.
Экстракция нуклеиновой кислоты из биоптата
У женщины, 25 лет, послеродового периода, извлекают патологическое изменение в виде большой остроконечной кондиломы в наружных половых органах. Фрагмент поражения замораживают в жидком азоте, затем обрабатывают в Braun микродисмембраторе П (В. Braun Instruments, Melsungen, Germany). Полученное вещество солюбилизируют в 0,6% (об. /вес) додецилсульфате натрия (SDS), обрабатывают протеиназой К (50 мкг/мл) и экстрагируют смесью фенол/хлороформ/изоамиловый спирт. ДНК осаждают этанолом и количественно определяют с помощью УФ-спектрофотометрии. Присутствие высокомолекулярной ДНК определяют электрофорезом на агарозном геле с последующим прокрашиванием этидиум бромидом.
Пример 2
Типирование НРV ДНК
НРV ДНК тип определяют, используя анализ гибридного захвата (hydrid capture assay), маркированный как Vira Type Plus (Digene Diagnostic, Beltsville, MD). Используемые HPV пробы делят на два пула, состав которых основан на связи каждого типа с злокачественностями половых путей. Проба-группа А содержала типы HP 6, 11, 42, 43 и 44, "низкого риска", в то время как проба В содержала типы 16, 18, 31, 33, 35, 45, 51, 52 и 56 "высокого риска". Всю ДНК переваривают Р stI, BamHI и HindIII и Саузерн-блоттинк проводят в строгих условиях (Тm-15oС), чтобы определить HPV субтип.
Типирование НРV ДНК
НРV ДНК тип определяют, используя анализ гибридного захвата (hydrid capture assay), маркированный как Vira Type Plus (Digene Diagnostic, Beltsville, MD). Используемые HPV пробы делят на два пула, состав которых основан на связи каждого типа с злокачественностями половых путей. Проба-группа А содержала типы HP 6, 11, 42, 43 и 44, "низкого риска", в то время как проба В содержала типы 16, 18, 31, 33, 35, 45, 51, 52 и 56 "высокого риска". Всю ДНК переваривают Р stI, BamHI и HindIII и Саузерн-блоттинк проводят в строгих условиях (Тm-15oС), чтобы определить HPV субтип.
Пример 3
Клонирование НРV6а генома
Всю ДНК, экстрагированную из образца HPV6а-положительного биоптата, переваривают HindIII эндонуклеазой. После фракционирования по размерам через 0,8% препаративный агарозный гель с низкой температурой плавления, область, соответствующую ДНК ~ 8 тысяч пар оснований (ТПО), вырезают из геля и агарозу переваривают GelaseTM ферментом (Epicentre Technologies, Inc. , Madison, WI). Образец лигируют с puC18 (Pharmacia, Inc, Piscataway, NJ), и переваривают HindIII и дефосфорилируют. После трансформации компетентных Е. coli DH5 клеток (Gibco, BRL, Gaithersburg, MD), библиотеку плазмид скринируют на HPV6а-положительные клоны при помощи колоний-гибридизаций, используя антисмысловой 32Р-меченый олигонуклеотид, который комплементарен 3'-концу HPV6b L1 гена (5'-GAGAGA ТСТ ТАС СТТ ТТА GTT TTG GCG CGC ТТА С-3'; SEQ ID NO: 1). pUC 18 плазмиду, содержащую 8,1 ТПО НРV6а геном, изолируют и характеризуют с помощью фермента рестрикции и Саузерн блот анализов. Эту плазмиду обозначают puC18-HPV6a. Плазмиду ДНК получают, используя набор-QiagenTM Plasmid Maxi kit (Qiagen Inc. , Chasworth, CA).
Клонирование НРV6а генома
Всю ДНК, экстрагированную из образца HPV6а-положительного биоптата, переваривают HindIII эндонуклеазой. После фракционирования по размерам через 0,8% препаративный агарозный гель с низкой температурой плавления, область, соответствующую ДНК ~ 8 тысяч пар оснований (ТПО), вырезают из геля и агарозу переваривают GelaseTM ферментом (Epicentre Technologies, Inc. , Madison, WI). Образец лигируют с puC18 (Pharmacia, Inc, Piscataway, NJ), и переваривают HindIII и дефосфорилируют. После трансформации компетентных Е. coli DH5 клеток (Gibco, BRL, Gaithersburg, MD), библиотеку плазмид скринируют на HPV6а-положительные клоны при помощи колоний-гибридизаций, используя антисмысловой 32Р-меченый олигонуклеотид, который комплементарен 3'-концу HPV6b L1 гена (5'-GAGAGA ТСТ ТАС СТТ ТТА GTT TTG GCG CGC ТТА С-3'; SEQ ID NO: 1). pUC 18 плазмиду, содержащую 8,1 ТПО НРV6а геном, изолируют и характеризуют с помощью фермента рестрикции и Саузерн блот анализов. Эту плазмиду обозначают puC18-HPV6a. Плазмиду ДНК получают, используя набор-QiagenTM Plasmid Maxi kit (Qiagen Inc. , Chasworth, CA).
Пример 4
Анализ последовательности рUС18-НРV6а
Для определения полной НРV6а последовательности, синтезируют секвенирующие праймеры на основе опубликованной НРV6b последовательности. Обе цепи полного 8,1 ТПО HPV6а генома секвенируют методом ограничения дидеокси цепи, используя PRISMTM набор и Applied Biosystems (ABI) автоматизированный секвенатор (# 373А) согласно инструкции производителя (ABI, Inc. , Foster City, CA). В случаях, когда смысловая и антисмысловая последовательность не соответствуют (match), синтезируют дополнительные НРV6а специфические праймеры, чтобы повторно секвенировать в обоих направлениях сверх рассматриваемой области для получения согласованности. В данном случае представлена полная НРV6а последовательность в сравнении с опубликованной НРV6а последовательностью. Основания показанной ниже HPV6a последовательности соответствуют HPV6b последовательности. ДНК последовательности НРV6а и HPV6b демонстрируют свыше 97% идентичность с всего 229 по изменениями, идентифицированными из 8010 по. Наиболее значительные различия по сравнению с HPV6b последовательностью обнаружены в LCR 7205-106. Помимо нескольких изменений простого нуклеотида в НРV6а LCR, обнаружены 94-по вставка при нд 7350 и другая 19-по вставка при 7804. При нд 7615, шесть пар оснований удалены из НРV6а генома.
Анализ последовательности рUС18-НРV6а
Для определения полной НРV6а последовательности, синтезируют секвенирующие праймеры на основе опубликованной НРV6b последовательности. Обе цепи полного 8,1 ТПО HPV6а генома секвенируют методом ограничения дидеокси цепи, используя PRISMTM набор и Applied Biosystems (ABI) автоматизированный секвенатор (# 373А) согласно инструкции производителя (ABI, Inc. , Foster City, CA). В случаях, когда смысловая и антисмысловая последовательность не соответствуют (match), синтезируют дополнительные НРV6а специфические праймеры, чтобы повторно секвенировать в обоих направлениях сверх рассматриваемой области для получения согласованности. В данном случае представлена полная НРV6а последовательность в сравнении с опубликованной НРV6а последовательностью. Основания показанной ниже HPV6a последовательности соответствуют HPV6b последовательности. ДНК последовательности НРV6а и HPV6b демонстрируют свыше 97% идентичность с всего 229 по изменениями, идентифицированными из 8010 по. Наиболее значительные различия по сравнению с HPV6b последовательностью обнаружены в LCR 7205-106. Помимо нескольких изменений простого нуклеотида в НРV6а LCR, обнаружены 94-по вставка при нд 7350 и другая 19-по вставка при 7804. При нд 7615, шесть пар оснований удалены из НРV6а генома.
Пример 5
Вариация НРV6а последовательности (ORFs) по сравнению с HPV6b
Открытые рамки считывания определяют в НРV6а последовательности и основные ORFs транслируют в аминокислотные последовательности и сравнивают с соответствующими НРV6b последовательностями. Основной капсидный белок L1 был единственной ORF, идентичной НРV6b последовательности. Все другие ORFs показывают аминокислотные изменения, которые суммированы в Таблице 1. Минорный капсидный белок L2 показывает пять аминокислотных изменений; Е6 и Е7 ОРГ, каждая, показывают одно аминокислотное изменение. В Е1 белке шесть аминокислот и в Е2 белке 11 аминокислот отличаются. В Е4 белке определено четыре аминокислотных изменения. Е5а ORF имеет изменения в четырех положениях, ORF T5b - в семи положениях.
Вариация НРV6а последовательности (ORFs) по сравнению с HPV6b
Открытые рамки считывания определяют в НРV6а последовательности и основные ORFs транслируют в аминокислотные последовательности и сравнивают с соответствующими НРV6b последовательностями. Основной капсидный белок L1 был единственной ORF, идентичной НРV6b последовательности. Все другие ORFs показывают аминокислотные изменения, которые суммированы в Таблице 1. Минорный капсидный белок L2 показывает пять аминокислотных изменений; Е6 и Е7 ОРГ, каждая, показывают одно аминокислотное изменение. В Е1 белке шесть аминокислот и в Е2 белке 11 аминокислот отличаются. В Е4 белке определено четыре аминокислотных изменения. Е5а ORF имеет изменения в четырех положениях, ORF T5b - в семи положениях.
Пример 6
Суб-клонирование HPV6a кДНК в векторах экспрессии
кДНК, клонирующую HPV6a, суб-клонируют в нескольких векторах для экспрессии HPV6a белка в трансфицированных клетках-хозяевах и для in vitro транскрипции/трансляции. Эти векторы включают pBluescript IISK+ (когда экспрессию проводят при помощи T7 или T3 промоторов), pcDNAI/Amp (когда экспрессию проводят при помощи цитомегаловирусного (CMV) промотора), pSZ 9016-1 (когда экспрессию проводят при помощи промотора с HIV длинным концевым повтором, (LTR)) и вектор переноса бакуловируса pVL193 (когда экспрессию проводят при помощи полиэдринового (PH) промотора) для получения рекомбинантного бакуловируса, содержащего ДНК последовательность, кодирующую HPV6a.
Суб-клонирование HPV6a кДНК в векторах экспрессии
кДНК, клонирующую HPV6a, суб-клонируют в нескольких векторах для экспрессии HPV6a белка в трансфицированных клетках-хозяевах и для in vitro транскрипции/трансляции. Эти векторы включают pBluescript IISK+ (когда экспрессию проводят при помощи T7 или T3 промоторов), pcDNAI/Amp (когда экспрессию проводят при помощи цитомегаловирусного (CMV) промотора), pSZ 9016-1 (когда экспрессию проводят при помощи промотора с HIV длинным концевым повтором, (LTR)) и вектор переноса бакуловируса pVL193 (когда экспрессию проводят при помощи полиэдринового (PH) промотора) для получения рекомбинантного бакуловируса, содержащего ДНК последовательность, кодирующую HPV6a.
a) pBluescript IISK+: HPV6a. Клон полноразмерной HPV6a кДНК исправляют из лямбда бактериофага путем ограниченного Eco RI переваривания и лигируют в Eco RI-отрезок, CIP-обработанный pBluescript IISK+. Выделяют отдельные субклоны, в которых смысловая ориентация HPV6a следует либо за T7, либо за T3 промоторами.
b) pcDNA I/Amp : HPV6a. Для облегчения направленного клонирования, HPV6a вырезают из очищенного препарата плазмиды pBluescript II SK+: HPV6a, в котором HPV6a ДНК последовательность расположена по ходу (транскрипции) T7 промотора, используя Eco RV и Xba I. Полученный Eco RV, Xba I HPV6a фрагмент очищают и лигируют с фрагментами, полученными перевариванием Eco RV, Xba I, CIP-обработанного pkDNA I/Amp, так, что ДНК, кодирующая HPV6a, расположена по ходу (транскрипции) CMV промотора.
c) pSZ9016-1: HPV6a. HPV6a вырезают из pBluescript II SK+: HPV6a при помощи ограниченного Eco RI переваривания и последующей очистки 1,3 то фрагмента от агарозного геля. Полученный Eco RI HPV6a фрагмент лигируют с фрагментами, полученными перевариванием Eco RI, CIP-обработанного pSZ9016-1. Выделяют субклоны, в которых смысловая ориентация HP 6a расположена по ходу (транскрипции) HIV LTR промотора.
d) pVL1393: HPV6a и pVL1393: HPV6a HA
Направленное клонирование ДНК, кодирующей HPV6a, в бакуловирусный вектор переноса pVL1393, медиируют путем вырезания HPV6a из pcDNA I/Amp: HPV6a с помощью Bam HI и Xba I, затем лигирования полученного 1,3 то фрагмента с фрагментами, полученными перевариванием Bam HI и Xba I, CIP-обработанного pVL1393, получая pVL1393: HPV6a. Аналогично, HPV6a представляет эпитоп, меченый с помощью инженерии T7 метки на 5', амино конце HPV6a открытой рамки считывания и FluHA эпитопа на 3' карбокси конце. HPV6a ДНК, модифицированную таким способом, лигируют в Bam HI/Xba I сайты pVL1393, получая pVL1393: T7 HPV6a HA.
Направленное клонирование ДНК, кодирующей HPV6a, в бакуловирусный вектор переноса pVL1393, медиируют путем вырезания HPV6a из pcDNA I/Amp: HPV6a с помощью Bam HI и Xba I, затем лигирования полученного 1,3 то фрагмента с фрагментами, полученными перевариванием Bam HI и Xba I, CIP-обработанного pVL1393, получая pVL1393: HPV6a. Аналогично, HPV6a представляет эпитоп, меченый с помощью инженерии T7 метки на 5', амино конце HPV6a открытой рамки считывания и FluHA эпитопа на 3' карбокси конце. HPV6a ДНК, модифицированную таким способом, лигируют в Bam HI/Xba I сайты pVL1393, получая pVL1393: T7 HPV6a HA.
Пример 7
Экспрессия HPV6a полимептида путем in vitro транскрипции/трансляции и путем трансфекции в клетках-хозяевах
Векторы, содержащие HPV ДНК последовательности, используют для проведения трансляции HPV6a полипептида в лизатах ретикулоцитов кролика, клетках-хозяевах млекопитающего, и в клетках насекомого, инфицированного бакуловирусом. Экспериментальные методики, в основном, такие же, как описаны в общих чертах в инструкциях производителей.
Экспрессия HPV6a полимептида путем in vitro транскрипции/трансляции и путем трансфекции в клетках-хозяевах
Векторы, содержащие HPV ДНК последовательности, используют для проведения трансляции HPV6a полипептида в лизатах ретикулоцитов кролика, клетках-хозяевах млекопитающего, и в клетках насекомого, инфицированного бакуловирусом. Экспериментальные методики, в основном, такие же, как описаны в общих чертах в инструкциях производителей.
a) In vitro транскрипция/трансляция pluescript II SK+: HPV6a плазмидная ДНК (с HPV6a в T7 ориентации) линеаризируют Bam HI перевариванием по ходу HPV6a вставки. Линеаризированную плазмиду очищают и используют в качестве матрицы для управляемой (run-off) транскрипции, используя T7 РНК полимеразу в присутствии m7G(5')ppp(5')G. Полученные кэппированные HPV6a транскрипты очищают LiC1 преципитацией и используют для проведения трансляции HPV6a в предварительно обработанном нуклеазой лизате ретикулоцитов кролика в присутствии L-/35S/метионина.
b) Экспрессия в клетках млекопитающего. HPV6a белок экспрессируют в клетках-хозяевах млекопитающего после трансфекции либо pcDNA I/Amp: HPV6a (под контролем CMV промотора), либо pSZ9016-1: HPV6a (под контролем HIV LTR промотора). В последнем случае (pSZ9016-1: HPV6a), клетки подвергают совместной трансфекции с TAT, экспрессируя плазмиду pSZ90161: TAT. Для обеих HPV6a экспрессирующих плазмид, COS-7 клетки подвергают трансфекции, используя либо DEAE-декстран, либо липофекцию с липофектамином (BRL).
c) Экспрессия в клетках насекомого. HPV6a-содержащий бакуловирусный вектор переноса pVL1393: T7 HPV6a HA используют для получения рекомбинантного бакуловируса (Autographa californica) путем in vivo гомологической рекомбинации. Эпитоп, меченый HPV6, затем экспрессируют в Sf9 клетках (Spodoptera frugiperda) насекомого, выращенных в суспендированной культуре после заражения HPV6a-содержащим рекомбинантным бакуловирусом.
Пример 8
Соединения, которые оказывают воздействие на HPV6a активность, могут быть определены рядом способов. Способ идентификации соединений, которые воздействуют на HPV6a, включает:
a) смешение испытываемого соединения с раствором, содержащим HPV6a, с образованием смеси;
b) измерение HPV6a активности в смеси и
c) сравнение HPV6a в смеси со стандартом.
Соединения, которые оказывают воздействие на HPV6a активность, могут быть определены рядом способов. Способ идентификации соединений, которые воздействуют на HPV6a, включает:
a) смешение испытываемого соединения с раствором, содержащим HPV6a, с образованием смеси;
b) измерение HPV6a активности в смеси и
c) сравнение HPV6a в смеси со стандартом.
Соединения, которые воздействуют на HPV6a активность, могут быть формулированы в фармацевтические композиции. Такие фармацевтические композиции могут быть использованы для лечения болезней или состояний, которые характеризуются HP 6a инфекцией.
Пример 9
ДНК, которая по структуре родственна ДНК, кодирующей HPV6a, определяют пробой. Подходящую пробу можно получить из ДНК, имеющей всю или часть нуклеотидной последовательности 2, РНК, кодированной ДНК, имеющей всю или часть нуклеотидной последовательности 2, или вырожденных нуклеотидов, полученных из части последовательности 2.
ДНК, которая по структуре родственна ДНК, кодирующей HPV6a, определяют пробой. Подходящую пробу можно получить из ДНК, имеющей всю или часть нуклеотидной последовательности 2, РНК, кодированной ДНК, имеющей всю или часть нуклеотидной последовательности 2, или вырожденных нуклеотидов, полученных из части последовательности 2.
Claims (8)
1. Экспрессирующий вектор pBluescript II SK+, включающий гетерологичный промотор Т7 или Т3 и нуклеиновую кислоту, кодирующую белок 6а вируса папилломавируса человека (НРV), такой, как L2, Е1, Е2, Е4, Е5а, Е5b, Е6 и Е7.
2. Вектор по п. 1, трансформирующий клетку-хозяин, такую, как дрожжевую клетку-хозяин.
3. Экспрессирующий вектор pcDNA I/Amp, включающий гетерологичный промотор CMV и нуклеиновую кислоту, кодирующую белок 6а вируса папилломавируса человека (НРV), такой, как L2, Е1, Е2, Е4, Е5а, Е5b, Е6 и Е7.
4. Вектор по п. 3, трансформирующий клетку-хозяина, такую, как дрожжевую клетку-хозяин.
5. Экспрессирующий вектор pSZ9016-1, включающий гетерологичный промотор HIV LTR и нуклеиновую кислоту, кодирующую белок 6а вируса папилломавируса человека (HPV), такой, как L2, Е1, Е2, Е4, Е5а, Е5b, Е6 и Е7.
6. Вектор по п. 5, трансформирующий клетку-хозяин, такую, как дрожжевую клетку-хозяин.
7. Экспрессирующий вектор pVL1393, включающий гетерологичный промотор РН и нуклеиновую кислоту, кодирующую белок 6а вируса папилломавируса человека (НРV), такой, как L2, Е1, Е2, Е4, Е5а, Е5b, Е6 и Е7.
8. Вектор по п. 7, трансформирующий клетку-хозяин, такую, как дрожжевую клетку-хозяин.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US31046894A | 1994-09-22 | 1994-09-22 | |
US310,468 | 1994-09-22 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU97106340A RU97106340A (ru) | 1999-05-10 |
RU2177999C2 true RU2177999C2 (ru) | 2002-01-10 |
Family
ID=23202654
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU97106340/13A RU2177999C2 (ru) | 1994-09-22 | 1995-09-18 | Экспрессирующий вектор (варианты) |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6290965B1 (ru) |
EP (1) | EP0782615A4 (ru) |
JP (1) | JPH10506014A (ru) |
AU (1) | AU694269B2 (ru) |
BG (1) | BG101338A (ru) |
BR (1) | BR9509076A (ru) |
CA (1) | CA2200582C (ru) |
CZ (1) | CZ87597A3 (ru) |
FI (1) | FI121507B (ru) |
HU (1) | HUT77337A (ru) |
NO (1) | NO971347L (ru) |
NZ (1) | NZ293461A (ru) |
PL (1) | PL319294A1 (ru) |
RU (1) | RU2177999C2 (ru) |
SK (1) | SK35897A3 (ru) |
WO (1) | WO1996009375A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2494147C2 (ru) * | 2007-12-21 | 2013-09-27 | Новартис Аг | Вектор экспрессии млекопитающих |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6962981B1 (en) * | 1996-03-25 | 2005-11-08 | Medarex, Inc. | Monoclonal antibodies specific for the extracellular domain of prostate-specific membrane antigen |
GB9621091D0 (en) | 1996-10-09 | 1996-11-27 | Fondation Pour Le Perfectionem | Attenuated microorganisms strains and their uses |
PT1105466E (pt) * | 1998-08-14 | 2006-07-31 | Merck & Co Inc | Processo para a purificacao de particulas tipo virus do papilomavirus humano |
CN1100835C (zh) * | 1998-10-30 | 2003-02-05 | 中国科学院感光化学研究所 | 加入纳米无机化合物粒子的钛溶胶-凝胶涂料及其制法和用途 |
GB0017990D0 (en) * | 2000-07-21 | 2000-09-13 | Glaxo Group Ltd | Papilloma virus sequences |
WO2004081178A2 (en) * | 2003-03-06 | 2004-09-23 | Indiana University Research And Technology Corporation | Methods and composition for producing infectious hpv stocks |
IL156670A0 (en) * | 2003-06-26 | 2004-01-04 | Zvi Zolotariov | Aloe suppositories |
US20090053261A1 (en) * | 2005-09-08 | 2009-02-26 | Lindbo John A | Modified tobacco mosaic virus particles as scaffolds for display of protein antigens for vaccine applications |
US20080160040A1 (en) * | 2004-04-15 | 2008-07-03 | Ghim Shin-Je | Plant-produced compositions for treating papillomavirus infection and related methods |
CA2588581C (en) | 2004-12-08 | 2011-05-31 | Gen-Probe Incorporated | Detection of nucleic acids from multiple types of human papillomaviruses |
US8084207B2 (en) * | 2005-03-03 | 2011-12-27 | Ibis Bioscience, Inc. | Compositions for use in identification of papillomavirus |
US20070031826A1 (en) * | 2005-08-05 | 2007-02-08 | My Gene | Diagnostic kit for determining the genotype of a human papilloma virus and method of using thereof |
KR100904844B1 (ko) * | 2006-08-28 | 2009-06-25 | 성균관대학교산학협력단 | 인유두종 바이러스(hpv)유전자를 포함하는자궁경부암의 치료 또는 예방용 dna 백신 |
WO2011149897A1 (en) | 2010-05-25 | 2011-12-01 | Qiagen Gaithersburg, Inc. | Fast results hybrid capture assay and associated strategically-truncated probes |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP1835029A1 (en) * | 1992-06-25 | 2007-09-19 | Georgetown University | Papillomavirus vaccines |
JP3863559B2 (ja) * | 1994-05-16 | 2006-12-27 | メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド | 乳頭腫ウィルスワクチン |
AR004464A1 (es) * | 1994-11-14 | 1998-12-16 | Merck Sharp & Dohme | Un metodo para producir una proteina de capside de papilomavirus |
IL117591A0 (en) * | 1995-03-30 | 1996-07-23 | Merck & Co Inc | Synthetic DNA encoding human papillomavirus type 11 L1 protein |
-
1995
- 1995-09-18 BR BR9509076A patent/BR9509076A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-09-18 CA CA002200582A patent/CA2200582C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-18 HU HU9702290A patent/HUT77337A/hu unknown
- 1995-09-18 SK SK358-97A patent/SK35897A3/sk unknown
- 1995-09-18 PL PL95319294A patent/PL319294A1/xx unknown
- 1995-09-18 EP EP95933148A patent/EP0782615A4/en not_active Ceased
- 1995-09-18 RU RU97106340/13A patent/RU2177999C2/ru active
- 1995-09-18 CZ CZ97875A patent/CZ87597A3/cs unknown
- 1995-09-18 WO PCT/US1995/011859 patent/WO1996009375A1/en not_active Application Discontinuation
- 1995-09-18 NZ NZ293461A patent/NZ293461A/en unknown
- 1995-09-18 JP JP8511012A patent/JPH10506014A/ja active Pending
- 1995-09-18 AU AU35918/95A patent/AU694269B2/en not_active Expired
-
1997
- 1997-03-18 BG BG101338A patent/BG101338A/xx unknown
- 1997-03-21 FI FI971203A patent/FI121507B/fi not_active IP Right Cessation
- 1997-03-21 NO NO971347A patent/NO971347L/no not_active Application Discontinuation
-
2000
- 2000-03-08 US US09/521,526 patent/US6290965B1/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2494147C2 (ru) * | 2007-12-21 | 2013-09-27 | Новартис Аг | Вектор экспрессии млекопитающих |
USRE49347E1 (en) | 2007-12-21 | 2022-12-27 | Novartis Ag | Mammalian expression vector |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
MX9702209A (es) | 1997-07-31 |
NO971347D0 (no) | 1997-03-21 |
AU3591895A (en) | 1996-04-09 |
BR9509076A (pt) | 1998-07-14 |
BG101338A (en) | 1997-10-31 |
PL319294A1 (en) | 1997-08-04 |
AU694269B2 (en) | 1998-07-16 |
CA2200582C (en) | 2007-03-27 |
FI971203A0 (fi) | 1997-03-21 |
FI971203A (fi) | 1997-03-21 |
EP0782615A1 (en) | 1997-07-09 |
SK35897A3 (en) | 1998-02-04 |
NO971347L (no) | 1997-05-21 |
NZ293461A (en) | 1998-04-27 |
HUT77337A (hu) | 1998-03-30 |
US6290965B1 (en) | 2001-09-18 |
CZ87597A3 (cs) | 1998-01-14 |
FI121507B (fi) | 2010-12-15 |
WO1996009375A1 (en) | 1996-03-28 |
JPH10506014A (ja) | 1998-06-16 |
CA2200582A1 (en) | 1996-03-28 |
EP0782615A4 (en) | 2001-08-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5840306A (en) | DNA encoding human papillomavirus type 18 | |
US5820870A (en) | Recombinant human papillomavirus type 18 vaccine | |
RU2177999C2 (ru) | Экспрессирующий вектор (варианты) | |
US6306397B1 (en) | Variants of human papilloma virus antigens | |
JP3918877B2 (ja) | ヒトパピローマウイルス11型l1タンパク質をコードする合成hpv6/11ハイブリッドl1 dna | |
CA2215834C (en) | Dna encoding human papillomavirus type 18 | |
RU2161651C2 (ru) | Очищенные белки вируса папилломы | |
WO1996015247A9 (en) | Purified papillomavirus proteins | |
US6395512B1 (en) | DNA coding for a peptide of a papilloma virus main capside protein and use thereof | |
US6908615B1 (en) | DNA encoding human papilloma virus type 18 | |
MXPA97002209A (en) | Dna that codifies for type human papilloma viruses | |
CA2204266C (en) | Purified papillomavirus proteins | |
MXPA97007208A (en) | Desoxirribonucleico acid that codifies for human papilloma virus type 18 and use of my |