HUT77337A - Humán papillomavírus 6A-típusát kódoló DNS - Google Patents
Humán papillomavírus 6A-típusát kódoló DNS Download PDFInfo
- Publication number
- HUT77337A HUT77337A HU9702290A HU9702290A HUT77337A HU T77337 A HUT77337 A HU T77337A HU 9702290 A HU9702290 A HU 9702290A HU 9702290 A HU9702290 A HU 9702290A HU T77337 A HUT77337 A HU T77337A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- hpv6a
- dna molecule
- dna
- rna
- protein
- Prior art date
Links
- 241001502561 Human papillomavirus type 6a Species 0.000 title claims description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 104
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 68
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 32
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 28
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 25
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 21
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 claims description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 15
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 15
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 12
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 11
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 4
- 208000009608 Papillomavirus Infections Diseases 0.000 claims description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- 208000021145 human papilloma virus infection Diseases 0.000 claims 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 58
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 40
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 25
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 22
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 18
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 18
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 17
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 16
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 15
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 13
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 12
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 11
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 10
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 10
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 10
- 206010059313 Anogenital warts Diseases 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 9
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 9
- 230000006870 function Effects 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 8
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 8
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 8
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 8
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 4
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- -1 elixirs Substances 0.000 description 4
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 4
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 210000001995 reticulocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 241000701646 Kappapapillomavirus 2 Species 0.000 description 2
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 2
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 2
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N allantoin Chemical compound NC(=O)NC1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 2
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 2
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 239000000025 natural resin Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000000057 synthetic resin Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 2
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 2
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- CRYXXTXWUCPIMU-WNQIDUERSA-N (2s)-2-aminobutanediamide;phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1.NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O CRYXXTXWUCPIMU-WNQIDUERSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OPJKGTJXHVPYIM-UHFFFAOYSA-N 2-methylprop-2-enamide;phenol Chemical compound CC(=C)C(N)=O.OC1=CC=CC=C1 OPJKGTJXHVPYIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-FOEKBKJKSA-N 3654-96-4 Chemical compound C[35S]CC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-FOEKBKJKSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N Allantoin Natural products NC(=O)N[C@@H]1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N 0.000 description 1
- 244000144927 Aloe barbadensis Species 0.000 description 1
- 235000002961 Aloe barbadensis Nutrition 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001203868 Autographa californica Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N Beta-Lactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N 0.000 description 1
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 101100007328 Cocos nucifera COS-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000192700 Cyanobacteria Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 101710204837 Envelope small membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 208000007842 Fibroepithelial Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101710121996 Hexon protein p72 Proteins 0.000 description 1
- 241000341655 Human papillomavirus type 16 Species 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 101710135729 Major capsid protein L1 Proteins 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- 101710132593 Protein E2 Proteins 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101710088839 Replication initiation protein Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 241000270295 Serpentes Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- BCKXLBQYZLBQEK-KVVVOXFISA-M Sodium oleate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC([O-])=O BCKXLBQYZLBQEK-KVVVOXFISA-M 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700029229 Transcriptional Regulatory Elements Proteins 0.000 description 1
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 201000003761 Vaginal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- FHHZHGZBHYYWTG-INFSMZHSSA-N [(2r,3s,4r,5r)-5-(2-amino-7-methyl-6-oxo-3h-purin-9-ium-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl [[[(2r,3s,4r,5r)-5-(2-amino-6-oxo-3h-purin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl] phosphate Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1[N+]([C@H]1[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=C(C(N=C(N)N4)=O)N=C3)O)O1)O)=CN2C FHHZHGZBHYYWTG-INFSMZHSSA-N 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 229930185472 acuminatum Natural products 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 229960000458 allantoin Drugs 0.000 description 1
- 235000011399 aloe vera Nutrition 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 201000007538 anal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 210000000436 anus Anatomy 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 208000012999 benign epithelial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003679 cervix uteri Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011841 epidemiological investigation Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 238000011842 forensic investigation Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000001759 immunoprophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 201000004933 in situ carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 208000020082 intraepithelial neoplasia Diseases 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 208000024312 invasive carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- ADKOXSOCTOWDOP-UHFFFAOYSA-L magnesium;aluminum;dihydroxide;trihydrate Chemical compound O.O.O.[OH-].[OH-].[Mg+2].[Al] ADKOXSOCTOWDOP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical class CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000000051 modifying effect Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229940078555 myristyl propionate Drugs 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 150000008105 phosphatidylcholines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920006324 polyoxymethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 210000001533 respiratory mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000002453 shampoo Substances 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M sodium octadecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 229920003002 synthetic resin Polymers 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- YRZGMTHQPGNLEK-UHFFFAOYSA-N tetradecyl propionate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCOC(=O)CC YRZGMTHQPGNLEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012049 topical pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 125000002987 valine group Chemical class [H]N([H])C([H])(C(*)=O)C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 210000003905 vulva Anatomy 0.000 description 1
- 208000013013 vulvar carcinoma Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 229930195724 β-lactose Natural products 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Oncology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
A találmány tisztított, humán 6a típusú papillomavírust kódoló DNS molekulákra és azok szármzékaira vonatkozik.
Papillomavírus (PV) által okozott fertőzések különböző élőlényekben fordulhatnak elő, például emberben, birkákban, kutyákban, macskákban, nyulakban, majmokban, kígyókban és szarvasmarhákban. A papillomavírusok epitheliális sejteket fertőznek, és a fertőzés helyén általában jóindulatú epitheliális vagy fibroepitheliális tumorok keletkezését váltják ki. A papillomavírusok fajspecifikus fertőző ágensek; egy humán papillomavírus nem képes nem-humán élőlények fertőzésére .
A papillomavírusok az általuk fertőzött szervezetek alapján különböző csoportokra oszthatók. A humán papillomavírusokat (HPV) DNS-szekvencia homológiájuk alapján további 70 típusra osztjuk. Úgy tűnik, hogy a PV típusok típusspecifikus immunogének, amennyiben egy adott papillomavírus típussal történő fertőzéssel szemben létrejött neutralizáló immunitás nem hoz létre immunitást más papillomavírus típusokkal szemben.
Emberben a különböző HPV típusok különböző betegségeket okoznak. Az 1., 2., 3., 4., 7., 10. és 26-29. típusok mind normális, mind immunszupresszált egyénekben benignus (jóindulatú) szemölcsöket hoznak létre. Az 5., 8., 9., 12., 14.,
15., 17., 19-25., 36., valamint a 46-50. típusok immunszupresszált egyénekben lapos elváltozások létrejöttét váltják ki. A 6., 11., 34., 39., 41-44., valamint az 51-55. típusok a genitális vagy légúti nyálkahártyák benignus condylomatózus elváltozását eredményezik. A 16. és 18. típusok a genitális » ·· · nyálkahártyák epitheliális diszpláziáját hozzák létre, és a méhnyak, a hüvely, a vulva, és a végbélnyílás in situ és invazív karcinómás elváltozásainak nagy részével kapcsolatba hozhatók.
A papillomavírusok kis méretű (50-60 nm), burok nélküli, ikozahedriális DNS-vírusok, amelyek legfeljebb nyolc korai és két késői gént kódolnak. A vírusgenomok nyitott olvasási keretei (ORF-ei) az E1-E7, valamint Ll és L2 elnevezéseket kapták, 'ahol E korai, L késői géntermékeket jelölnek. Az Ll és L2 gének vírus kapszidproteineket kódolnak. A korai (E) gének olyan funkciókkal kapcsolatosak, mint a vírusreplikáció és sejttranszformáció.
Az Ll protein a fő kapszidprotein, és 55-60 kDa molekulatömeggel rendelkezik. Az L2 protein egy kisebb arányban előforduló kapszidprotein, amely 55-60 kDa elméletileg számított molekulatömeggel, poliakrilamid-gélelektroforézis szerinti meghatározás alapján pedig 75-100 kDa molekulatömeggel rendelkezik. Immunológiai adatok szerint, a legtöbb L2 protein az Ll proteinekhez képest beljebb található. Az Ll-ORF a különböző papillomavírusok között nagy mértékben konzervált. Az L2 proteinek a különböző papillomavírusok között kevésbé konzerváltak.
Az Ll és L2 génekről megállapították, hogy azok célzottan alkalmasak immunprofilaktikus készítmények előállítására. Néhány korai génről szintén kimutatták, hogy alkalmasak vakcinák kifejlesztésére. Gyapjasfarkú nyúl papillomavírus (CRPV) és szarvasmarha papillomavírus (BPV) rendszerekben végzett vizsgálatok szerint a fenti, baktériumokban expresz• · szált proteinekkel történő immunizálás vagy vaccinia-vektorokkal végzett immunizálás védettséget hozott létre az állatokban a vírusfertőzéssel szemben. Papillomavírus L1 gének expresszálása baculovírus expressziós rendszerekben vagy vaccinia-vektorok alkalmazásával vírusszerű részecskék (VLP) összeépüléséhez vezetett, melyek alkalmazásával a vírusfertőzéssel szembeni védettséggel arányos, magas titerű vírusneutralizáló ellenanyag választ lehetett kiváltani.
A HPV6 és HPV11, amelyek malignus elváltozásokkal csak ritkán kapcsolatosak, a condyloma acuminatum, a légúti és genitális nyálkahártya benignus léziói körülbelül 90 %-ának létrejöttéért felelősek. Az ilyen elváltozásokban a HPV6a típust háromszor gyakrabban sikerült kimutatni, mint a HPV11 típust.
Az eredeti HPV6-izolátum, a HPV6b teljes nukleotid-szekvenciáját meghatározták [Schwarz E. és munkatársai: EMBO J., 2, 2341. (1983)]. További HPV6 altípusokat restrikciós enzim emésztési mintájuk alapján azonosítottak [Gissmann L. és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80, 560. (1983);
Mounts P. és munkatársai: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79,
5425., (1982)].
Több kutatócsoport kimutatta, hogy az Amerikai Egyesült Államokban és Európában a condyloma acuminatum elváltozásban szenvedő betegekben elsősorban a HPV6a típus mutatható ki. Egy nemrégiben megjelent közlemény szerint a HPVőa a HPV6 prototípusa [Kitasato H. és munkatársai: J. Gén. Virol., 75, 1157. (1994)]. Becslések szerint, csak az Amerikai Egyesült Államokban a 15-49 év közötti férfiak és nők 1 %-a condyloma • · acuminatum elváltozással jelentkezik az orvosnál. A HPV-vírussal kapcsolatos betegség kezelésére sajnos nem áll rendelkezésre hatékony kezelés. Egy vakcina kifejlesztése tehát igen kívánatos lenne. Egy profilaktikus vagy terápiás hatású vakcina kifejlesztéséhez azonban alapvető fontosságú a leggyakoribb HPV altípusok késői és korai génjei szekvenciájának meghatározása.
A HPV6a altípusról rendelkezésre álló korlátozott szekvencia információk a hosszú szabályozó régióra (LCR) és az E6-, valamint E7-0RF-ekre vonatkoznak. A találmány tárgyát képezi a HPV6a klónozása condyloma acuminatum biopsziás anyagból, annak teljes vírus DNS-szekvenciája, valamint a fő HPV6a nyitott olvasási kereteknek (ORF-eknek) megfelelő aminosav-szekvenciák meghatározása.
Ezenfelül a találmány tárgyához tartoznak tisztított, humán HPV6a típusú (6a típusú HPV; HPV6a) papillomavírust kódoló DNS molekulák, azok származékai, valamint a fenti DNS molekulák alkalmazása.
Az említett származékok - anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk - lehetnek a DNS által kódolt peptidek és proteinek, a DNS-sel szemben vagy a DNS által kódolt proteinekkel szemben termelődött ellenanyagok, a DNS-t tartalmazó vakcinák vagy a DNS által kódolt proteineket tartalmazó vakcinák, a DNS-eket vagy a DNS-ek által kódolt proteineket tartalmazó immunológiai készítmények, valamint a DNS-ből levezetett DNS-t vagy RNS-t vagy a DNS által kódolt proteineket tartalmazó reagenskészletek.
A HPV6a a condyloma acuminatum elváltozások (hegyes • ··· ·· ·· · · • ·· ······ · ······ · · · ·· függöly, a légúti és genitális nyálkahártya benignus elváltozása) fő okozója. Az eredeti HPV6-izolátum - a HPV6b - teljes nukleotid-szekvenciáját meghatározták. További HPV6 altípusokat restrikciós -enzim emésztési mintájuk alapján azonosítottak.
Több kutatócsoport kimutatta, hogy az Amerikai Egyesült Államokban és Európában a condyloma acuminatum elváltozásban szenvedő betegekben elsősorban a HPV6a típus mutatható ki. Becslések szerint, csak az Amerikai Egyesült Államokban a
15-49 év közötti férfiak és nők 1 %-a condyloma acuminatum elváltozással jelentkezik az orvosnál. A HPV-vírussal kapcsolatos betegség kezelésére sajnos nem áll rendelkezésre hatékony kezelés. Egy vakcina kifejlesztése tehát igen kívánatos lenne. Egy profilaktikus vagy terápiás hatású vakcina kifejlesztéséhez azonban alapvető fontosságú a leggyakoribb HPV altípusok késői és korai génjei szekvenciájának meghatározása .
A HPV6a altípusról rendelkezésre álló korlátozott szekvencia információk a hosszú szabályozó régióra (LCR) és az E6-, valamint E7-0RF-ekre vonatkoznak. A találmány tárgyát képezi a HPV6a klónozása condyloma acuminatum biopsziából, az előbbi vírus teljes DNS-szekvenciájának meghatározása, valamint a fő HPV6a nyitott olvasási kereteknek (ORF-eknek) megfelelő aminosav-szekvenciák meghatározása. A találmány tárgyához tartozik ezen felül tisztított humán HPV6a típusú (6a típusú HPV; HPV6a) papillomavírust kódoló DNS molekulák, valamint a fenti DNS molekulák származékai.
A DNS-t vagy a DNS által kódolt proteineket tartalmazó • · · · • ·
Ί gyógyászati készítmények ismert eljárások szerint állíthatók elő, például egy gyógyászatilag elfogadható hordozó segédanyaggal elegyítve.
Ilyen hordozó segédanyagok és az előállításra alkalmazható eljárások példái megtalálhatók az alábbi szakirodalmi helyen: Remington's Pharmaceutical Sciences. Hatékonyan adagolható gyógyászatilag elfogadható készítmények a proteinek vagy VLP-k hatékony mennyiségét tartalmazzák. Az ilyen készítmények tartalmazhatnak több HPV típusból származó proteint vagy VLP-t.
A találmány szerinti terápiás vagy diagnosztikus készítményeket PV-fertőzések kezelésére vagy diagnosztizálására elegendő mennyiségben adagoljuk. A hatékony mennyiség számos faktortól függ, például az egyén általános állapotától, testtömegétől, nemétől és korától. További faktor az adagolás módja. Általánosságban, a készítményt körülbelül 1 pg - 1 mg dózisokban adjuk be.
A gyógyászati készítményt az adott egyénnek különböző módokon adhatjuk be, például bőr alá, lokálisan, szájon át, nyálkahártyán át, intravénásán és izomba.
A találmány szerinti vakcinák olyan DNS-t vagy RNS-t vagy a DNS által kódolt proteineket tartalmaznak, amelyek hordozzák neutralizáló ellenanyagoknak a gazdaszervezetben történő képződéséhez szükséges antigén-determinánsokat. Az ilyen vakcináknak elég biztonságosak ahhoz, hogy klinikai fertőzés előidézésének veszélye nélkül beadhatók legyenek; nem rendelkezhetnek toxikus mellékhatásokkal; hatékony eljárással adagolhatok, stabilak; és egyéb vakcina hordozó• · · · • · • ·· ··· ··· ·· • · · · ·· ·· · · • · · ··*··« · ······ · · · ·· anyagokkal kompatibilisek.
A vakcinák különböző módokon adhatók be, például szájon át, parenterálisan, bőr alá, nyálkahártyán át, intravénásán vagy izomba. Az adagolandó dózis függ például az egyén általános állapotától, nemétől, testtömegétől és korától; az adagolás módjától valamint a vakcina PV típusától. A vakcina adagolható kapszula, szuszpenzió, elixír vagy folyékony oldatok formájában. A vakcina formulázható egy immunológiailag elfogadható hordozóanyaggal együtt.
A vakcinát terápiásán hatékony mennyiségben adagoljuk, azaz, védettséget előidéző immunválasz kiváltásához elegendő mennyiségben. A terápiásán hatékony mennyiség a PV típusa szerint változhat. A vakcinát adagolhatjuk egyetlen dózisban vagy több dózisban.
A találmány szerinti DNS-ek és DNS-származékok immunogén készítmények formájában alkalmazhatók. Az ilyen készítmények megfelelő szervezetnek adagolva, abban immunálasz kiváltására képesek.
A találmány szerinti DNS-ek és DNS-származékok ellenanyagok termelésére alkalmazhatók. A leírásban ellenanyagon poliklonális és monoklonális ellenanyagokat, valamint azok fragmentumait, például Fv, Fab és F(ab)2 fragmentumokat értünk, amelyek képesek antigénhez vagy hapténhez kötődni.
A találmány szerinti DNS-ek és DNS-származékok alkalmazhatók HPV-fertőzés szerotipizálására és HPV-szűrésre. A DNS-ekből, rekombináns proteinekből, VLP-kből, valamint ellenanyagokból HPV kimutatására és szerotipizálására alkalmas reagenskészletek formulázhatók. Ilyen reagenskészletek • ·· · • · • ··· ·· ·· · · • ·· ······ · ****** ·· · ·· tartalmaznak egy rekeszekre osztott hordozót, amely alkalmas legalább egy tartály szilárd tárolására. A hordozó tartalmaz továbbá reagenseket, például HPV6a DNS-eket, rekombináns HPV proteineket vagy VLP-ket vagy anti-HPV-ellenanyagokat, amelyek különböző HPV típusok kimutatására alkalmazhatók. A hordozó tartalmazhat továbbá a kimutatást szolgáló anyagokat, például jelölt antigént vagy enzim-szubsztrátot vagy hasonlókat .
A találmány szerinti DNS-ek és abból származó proteinek molekulatömeg- és molekulaméret-markerekként is felhasználhatók.
Mivel a genetikai kodon degenerált, egy adott aminosavat több kodon kódolhat, tehát az aminosav-szekvenciát több hasonló DNS olígonukleotid bármelyike kódolhatja. A sorozatnak csak egy tagja lesz olyan, amely megegyezik a HPV6a-szekvenciával, de megfelelő körülmények mellett, még nemkompatibilis bázisokat tartalmazó DNS-oligonukleotidok jelenlétében is képes hibridizálódni a HPV6a-DNS-sel. Módosított feltételek mellett a nem-kompatibilis bázisokat tartalmazó DNS-oligonukleotidok is hibridizálódhatnak a HPV6a-DNS-sel, lehetővé téve a HPVőa-kódoló DNS azonosítását és izolálását.
A találmány szerinti HPV6a-DNS és azok fragmensei alkalmazhatók egyéb forrásokból HPV6a-homológok és -fragmensek izolálására és tisztítására. Ebből a célból, az első HPV6a-DNS-t megfelelő hibridizációs körülmények mellett HPV6a-homológokat kódoló DNS-t tartalmazó mintával elegyítjük. A hibridizálódott DNS-komplexet izolálhatjuk, és abból a • · · · • · · ······ · *····· ·· * · · homológ DNS-t kódoló DNS-t tisztíthatjuk.
Ismeretes, hogy adott aminosavat kódoló különböző kodonok lényeges feleslegben fordulnak elő. A találmány tárgyát képezik tehát olyan, eltérő kodont tartalmazó DNS-szekvenciák is, amelyek transzlációja végsősoron az eredetivel megegyező aminosavat eredeményez. A leírásban egy vagy több helyettesített kodont hordozó szekvenciát degenerált variánsnak nevezünk. A találmány tárgyához tartoznak ezen felül a DNS-szekvenciában vagy a transzlálódott proteinben előforduló mutációk, amelyek nem változtatják meg lényegesen az expreszszálódott protein alapvető fizikai sajátságait. Például valin helyettesítése leucinnal, arginin helyettesítése lizinnel vagy aszparagin helyettesítése glutaminnal nem feltétlenül eredményezi a polipeptid funkcióképességének megváltozását.
Ismert, hogy egy peptidet kódoló DNS-szekvencia módosítható úgy, hogy az a természetben előfordulótól eltérő tulajdonságokkal rendelkező peptidet kódoljon. A DNS-szekvencia módosítására alkalmazható eljárás például - anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk - a helyspecifikus mutagenezis.
A HPV6a funkcionális származékainak olyan vegyületeket nevezünk, amelyek a HPV6a biológiai aktivitásával lényegében megegyező biológiai aktivitással (funkcionális vagy struktúrális aktivitással) rendelkeznek. A funkcionális származék kifejezés vonatkozik a HPV6a fragmenseire, variánsaira, degenerált variánsaira, analógjaira és homológjaira vagy kémiai származékaira. Fragmens alatt a HPV6a bármely polipeptid alcsoportját értjük. Variánsnak • · · • · struktúráját és funkcióját tekintve a teljes HPV6a molekulához vagy annak fragmenséhez lényegében hasonló molekulát nevezünk. Egy molekuláról akkor mondjuk, hogy az lényegében hasonló a HPV6a molekulához, ha mindkét molekula lényegében hasonló struktúrával rendelkezik vagy mindkét molekula hasonló biológiai aktivitással rendelkezik. Amennyiben tehát mindkét molekula lényegében hasonló aktivitással rendelkezik, azokat variánsoknak tekintjük, még abban az esetben is, ha az egyik molekula struktúrája nem található meg a másikban, vagy a két aminosav-szekvencia nem egyezik meg. A funkcionális származék kifejezés nem vonatkozik a HPV6b-re.
Analógnak funkcióját tekintve a teljes HPV6a molekulához vagy annak fragmenséhez lényegében hasonló molekulát nevezünk.
A HPV6a-DNS molekuláris klónozására különböző eljárások alkalmazhatók. Ilyen eljárás például - anélkül, hogy igényünket az alábbira korlátoznánk - a HPV6a gének funkcionális expressziójának irányítása, megfelelő expressziós vektor rendszerben HPV6a-tartalmú cDNS vagy genomi génkönyvtár létrehozását követően. További eljárás szerint, bakteriofágban vagy plazmid ingázó vektorban létrehozott HPV6a-tartalmú cDNS vagy genomi DNS génkönyvtárat szűrünk a HPV6a aminosav-szekvenciája alapján tervezett jelölt oligonukleotid próbával. Más eljárás szerint, bakteriofágban vagy plazmid ingázó vektorban létrehozott HPV6a-tartalmú cDNS vagy genomi DNS génkönyvtárat szűrünk a HPV6a-t kódoló részleges DNS-sel. Ezt a részleges DNS-t HPV6a DNS-fragmensek specifikus polimeráz láncreakciós (PCR) amplifikációjával kaphatjuk meg, tisz-
• · · tított HPV6a aminosav-szekvenciája alapján tervezett degenerált láncindító oligonukleotidok (primerek) tervezésével. További eljárás szerint HPV6a-termelő sejtből RNS-t izolálunk, és az RNS-t in vitro vagy in vivő transzlációs rendszerben proteinné transzláljuk. Az RNS transzlációja peptiddé vagy proteinné a HPV6a-protein legalább egy részének keletkezéshez vezet, amely például a HPV6a-protein aktivitása alapján vagy anti-HPV6a-ellenanyaggal adott immunológiai reakció alapján azonosítható. A fenti eljárásban HPV6a-termelő sejtekből izolált RNS-keveréket analizálunk a HPV6a legalább egy részét kódoló RNS jelenlétére nézve. Az RNS-elegy tovább frakcionálható, hogy a HPV6a-RNS-t a nem-HPV6a-RNS-től megtisztítsuk. Az ilyen eljárással előállított peptid vagy protein olyan aminosav-szekvenciák azonosítása céljából analizálható, amelyek alapján HPV6a-cDNS előállítására felhasználható láncindító oligonukleotidok tervezhetők, vagy a transzlációra felhasznált RNS HPV6a-kódoló nukleotid-szekvenciák azonosítása céljából analizálható, és azok alapján HPV6a cDNS génkönyvtár szűrésére alkalmazható próbák állíthatók elő. Ezek az eljárások a gyakorlatban ismertek, és leírásuk megtalálható például az alábbi szakirodalmi helyen: Sambrook J., Fritsch E. F., Maniatis T.: Molecular Cloning: A Laboratory Manual, második kiadás, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor,
New York, (1989).
Nyilvánvaló, hogy más típusú génkönyvtárak, valamint más sejtekből vagy sejttípusokból előállított génkönyvtárak is alkalmazhatók HPV6a-kódoló DNS izolálására. Egyéb típusú
génkönyvtárak például - anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk - HPV6a-t tartalmazó egyéb sejtekből vagy sejtvonalakból származó cDNS génkönyvtárak és genomi DNS génkönyvtárak.
cDNS génkönyvtárakat különböző technikákkal állíthatunk elő. cDNS génkönyvtárak előállítására szolgáló technikákat ismertetnek például Sambrook J. és mtsai. (lásd fent). Világos, hogy HPV6a-t kódoló DNS-t megfelelő genomi DNS génkönyvtárból is izolálhatunk. Genomi DNS génkönyvtárakat különböző technikák alkalmazásával állíthatunk elő. Genomi
DNS génkönyvtárak előállítására szolgáló technikákat ismertetnek például Sambrook J. és mtsai. (lásd fent).
A fent ismertetett eljárásokkal kapott klónozott HPV6a-DNS vagy fragmensei rekombináns úton expresszálhatók úgy, hogy azokat molekuláris klónozással megfelelő promótert és egyéb alkalmas transzkripciós szabályozó elemeket tartalmazó expressziós vektorba klónozzuk, és rekombináns HPV6a előállítása céljából prokarióta vagy eukarióta gazdasejtbe juttatjuk. Ilyen technikák részletes leírása megtalálható Sambrook J. és mtsai. kézikönyvében (lásd fent), és azok a gyakorlatban jól ismertek.
Expressziós vektornak a leírásban olyan DNS-szekvenciákat nevezünk, amelyek megfelelő gazdasejtben a klónozott gének kópiáinak átíródásához és a megfelelő mRNS-ek transzlációjához szükségesek. Ilyen vektorok alkalmazhatók eukarióta gének expresszálására különböző gazdasejtekben, például baktériumokban, kék-zöld algákban, növényi sejtekben, rovarsejtekben, gombasejtekben, és állati sejtekben. Speciális • · · · · · ··«··· · ·· · «· célra tervezett vektorok lehetővé teszik a DNS ingázását különböző gazdasejtek között, például baktérium- és élesztősejtek vagy baktérium- és állati sejtek vagy baktérium- és gombasejtek vagy baktérium- és gerinctelen eredetű sejtek között. Megfelelően tervezett expressziós vektornak tartalmaznia kell a következőket: a gazdasejtekben való önálló replikációt lehetővé tevő replikációs origót, szelekciót lehetővé tevő markereket, korlátozott számú alkalmas restrikciós enzim hasítási helyet, továbbá képesnek kell lennie magas kópiaszámot elérni, és tartalmaznia kell aktív promótereket. Promóternek olyan DNS-szekvenciát nevezünk, amely az RNS-polimeráz DNS-hez történő kötődését irányítja, és RNSszintézist indít meg. Erős promóternek olyan promótert nevezünk, amely az mRNS-képződés nagy frekvenciával történő megindulását eredményezi. Expressziós vektorok például - anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk - klónozó vektorok, módosított klónozó vektorok, specifikusan tervezett plazmidok vagy vírusok.
Különböző emlős expressziós vektorok alkalmazhatók emlős sejtekben HPV6a-DNS vagy fragmensei expresszálására. Rekombináns HPV6a expresszálására felhasználható, kereskedelemben hozzáférhető expressziós vektorok - anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk - például a következők: pcDNA3 (Invitrogen), pMClneo (Stratagene), pXTl (Stratagene), pSG5 (Stratagene), EB0-pSV2-neo (ATCC 37593), pBPV-l(8-2) (ATCC 37110), pdBPV-MMTneo(342-12) (ATCC 37224), pRSVgpt (ATCC 37199), pRSVneo (ATCC 37198), pSV2-dhfr (ATCC 37146), pUCTag (ATCC 37460) és XZD35 (ATCC 37565).
« · · · · ·
A HPV6a-DNS vagy fragmenseinek baktérium sejtekben történő expresszálására különböző bakteriális expressziós vektorok alkalmazhatók. Alkalmazhatók a kereskedelemben hozzáférhető bakteriális expressziós vektorok, például - anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk - a pETlla (Novagen), a lambda-gtll (Invitrogen), a pcDNAII (Invitrogen) és a pKK223-3 (Pharmacia) vektorok.
Különböző gomba expressziós vektorok is alkalmazhatók a HPV6a-DNS vagy fragmenseinek gombáséjtekben történő expreszszálására. A kereskedelemben hozzáférhető alkalmas gomba expressziós vektorok például - anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk - a pYES2 vektor (Invitrogen) és a Pichia expressziós vektor (Invitrogen).
Különböző rovar expressziós vektorok alkalmazhatók a HPV6a-DNS vagy fragmenseinek rovarsejtekben történő expreszszálására. Alkalmazhatók a kereskedelemben hozzáférhető rovar expressziós vektorok, például - anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk - a pBlueBac III vektor (Invitrogen).
HPV6a-t vagy fragmenseit tartalmazó DNS-t tartalmazó expressziós vektorok alkalmazható HPV6a proteinek vagy fragmenseik sejtekben, szövetekben, szervekben vagy állatokban (ezen belül emberben) történő expresszálására. A gazdasejtek lehetnek prokarióta vagy eukarióta sejtek, például - anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk - baktériumok, így E. coli, gombasejtek, így élesztősejtek, emlőssejtek, így - a korlátozás szándéka nélkül - humán sejtvonalak, szarvasmarha, sertés, majom és rágcsáló eredetű sejtvonalak, valamint rovarsejtek, például - anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk - Drosophila és selyemhernyó eredetű sejtvonalak. A kereskedelemben hozzáférhető, alkalmazható emlős eredetű sejtvonalak például - anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk - a következők: L-M(TK”) L-sejtek (ATCC CCL 1.3), L-M L-sejtek (ATCC CCL 1.2), 293-sejtek (ATCC CRL 1573), Raji-sejtek (ATCC CCL 86), CV-l-sejtek (ATCC CCL 70), COS-l-sejtek (ATCC CRL 1650), COS-7-sejtek (ATCC CRL 1651), CHO-Kl-sejtek (ATCC CCL 61), 3T3-sejtek (ATCC CCL 92), NIH/3T3-sejtek (ATCC CRL 1658), HeLa-sejtek (ATCC CCL 2), C1271-sejtek (ATCC CRL 1616), BS-C-l-sejtek (ATCC CCL 26) és MRC-5-sejtek (ATCC CCL 171).
Az expressziós vektort számos rendelkezésre álló technika bármelyikének alkalmazásával bejuttathatjuk a gazdasejtbe, például - anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk - transzformációval, transzfekcióval, lipofektinnel, protoplaszt-fúzióval és elektroporációval. Az expreszsziós vektort tartalmazó sejteket önálló kiónokként felszaporítjuk, és HPV6a-proteint termelő képességre nézve egyenként analizáljuk. A HPV6a-t expresszáló kiónokat tartalmazó gazdasejteket több módszerrel azonosíthatjuk, például - a korlátozás szándéka nélkül - anti-HPV6a-ellenanyagokkal mutatott immunreaktivitás alapján és a gazdasejttel kapcsolatos HPV6a-aktivitás jelenléte alapján, például HPV6a-specifikus ligandumkötés vagy szignál-transzdukció alapján, amelyet HPV6a-specifikus ligandumok és HPV6a közti kölcsönhatás által közvetített válaszként határozhatunk meg.
A HPV-DNS-fragmensek expresszálását in vitro előállított szintetikus mRNS vagy natív mRNS alkalmazásával is vé-
···· «· · • * · · • · · ·' · gezhetjük. Szintetikus mRNS-ek vagy HPV6a-t expresszáló sejtekből izolált mRNS-ek hatékonyan transzlálhatók különböző sejtmentes rendszerekben, például - anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk - búzacsíra extraktumok és retikulocita extraktumok alkalmazásával; vagy hatékonyan transzlálhatók különböző sejteken alapuló rendszerekben, például - anélkül, hogy igényünket az alábbira korlátoznánk - béka oocitákba történő mikroinjektálással; amelyek közül az utóbbi az előnyös.
Miután a HPV6a proteint (proteineket) gazdasejtekben expresszáltuk, a HPV6a-proteineket kinyerhetjük, hogy tisztított formát kapjunk. Több, HPV6a protein tisztítására alkalmas eljárás áll rendelkezésre, és azok bármelyike alkalmazható. A leírtak szerint, rekombináns HPV6a protein sejtlizátumokból és extraktumokból tisztítható a következő eljárások bármilyen kombinációjának vagy azok egyikének alkalmazásával: sóval történő frakcionálás, ioncserélő kromatográfia, méretkizárásos kromatográfia, hidroxilapatit adszorbciós kromatográfia és hidrofób kölcsönhatáson alapuló kromatográfia.
A rekombináns HPV6a elválasztható továbbá a többi sejtproteintől olyan immunaffinitásos oszlop alkalmazásával, amelyet monoklonális vagy poliklonális ellenanyaggal specifikussá tettünk a teljes hosszúságú naszcens HPV6a-ra vagy a HPV6a protein polipeptid-fragmenseire. Monoklonális vagy poliklonális ellenanyagokat előállíthatunk a gyakorlatban ismert számos eljárással. A leírásban monoklonális vagy monospecifikus ellenanyagnak olyan egyetlen ellenanyag-féleséget • •y · vagy több ellenanyag-féleséget nevezünk, amelyek HPV6a-val szemben homogén kötődési sajátsággal rendelkeznek. Homogén kötődési sajátság alatt az ellenanyagnak azt a képességét értjük, hogy meghatározott antigénhez vagy epitóphoz kötődik.
Nyilvánvaló, hogy monospecifikus ellenanyagok előállítására szolgáló eljárások alkalmazhatók a HPV6a polipeptid fragmenseire vagy a teljes hosszúságú naszcens HPV6a polipeptidre specifikus ellenanyagok előállítására. Közelebbről világos, hogy előállíthatok a teljes funkcionális HPV6a-ra vagy annak fragmenseire specifikus monospecifkus ellenanyagok.
A találmány tárgyát képezik eljárások olyan vegyületek szűrésére, amelyek HPV6-t kódoló DNS vagy RNS expresszálódását, valamint a HPV6a protein (proteinek) funkcióját (funkcióit) in vivő módosítani képesek. A fenti aktivitásokat módosító vegyületek lehetnek a következők: DNS, RNS, peptidek, proteinek vagy nem-protein természetű szerves molekulák. A vegyületek módosító hatásukat kifejthetik úgy, hogy a HPV6a-t kódoló DNS vagy RNS expresszióját vagy a HPV6a protein funkcióját fokozzák vagy csökkentik. A HPV6a-t kódoló DNS vagy RNS expresszióját vagy a HPV6a-protein funkcióját módosító vegyületek különböző vizsgáló eljárásokkal mutathatók ki. A vizsgálati eljárás lehet egyszerű igen/nem vizsgálati eljárás, amely arra ad választ, hogy az expresszió vagy funkció megváltozott-e. A vizsgálati eljárás kvantitatív eljárássá is alakítható, melynek során egy vizsgálati minta expresszióját vagy funkcióját standard minta expressziójának vagy funkciójának szintjével hasonlítjuk össze.
• Μ •·· «· · . · φ ...· ·..· ··:·
Előállíthatunk HPV6a-DNS-t, a HPV6a-DNS fragmenseit, vagy HPV6a-DNS-sel, HPV6a proteinnel, HPV6a-RNS-sel vagy HPV6a proteinnel szembeni ellenanyagokat tartalmazó reagenskészleteket. Az ilyen reagenskészletek alkalmazhatók mintában HPV6a-DNS-sel hibridizálódni képes DNS kimutatására vagy HPV6a protein (proteinek) vagy peptidfragmensek jelenlétének kimutatására. Az ilyen jellemzés különböző célokra használható, például - anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk - törvényszéki és epidemiológiai vizsgálatokra.
Antiszensz terápia céljára előállíthatunk HPV6a-t kódoló DNS-szekvenciával komplementer nukleotid-szekvenciákat. Ezek az antiszensz molekulák lehetnek DNS-ek, a DNS stabil származékai, például foszfor-tioátok vagy metil-foszfonátok, lehetnek RNS-ek, az RNS stabil származékai, például 2'-O-alkil-RNS vagy más HPV6a antiszensz oligonukleotid mimetikumok. A HPV6a antiszensz molekulákat mikroinjekálással, liposzómába történő kapszulázással vagy az antiszensz szekvenciát hordozó vektorok expresszálásával juttathatjuk a sejtekbe. A HPV6a antiszensz terápia különösen alkalmazható olyan betegségek kezelésére, amelyekben előnyös a HPV6a-aktivitás csökkentése.
Vegyi származéknak olyan molekulákat nevezünk, amelyek az eredeti molekula részét rendesen nem képező, további kémiai csoportokat tartalmaznak. Az ilyen csoportok javíthatják az alap molekula oldhatóságát, felezési idejét, felszívódását stb. Más esetben, az ilyen csoportok gyengíthetik az alapmolekula nem-kívánt mellékhatásait vagy csökkenthetik az alapmolekula toxicitását. Ilyen csoportok példáit különböző • · · · · ·
...... ’··' ·*:· ’ szakirodalmi helyek ismertetik, például a Remington' s Pharmaceutical Sciences cimű műben.
A leirásban említett eljárásokkal azonosított vegyületek alkalmazhatók egyedül, rutin vizsgálattal meghatározott megfelelő dózisban, hogy a HPV6a vagy annak aktivitása optimális gátlását elérjük, ezzel egyidőben bármely lehetséges toxicitást csökkentsünk. Kívánatos lehet továbbá más hatóanyagok egyidejű adagolása vagy egymást követő adagolása.
A találmány szerinti vegyületeket előnyösen naponta egyetlen dózisban adjuk be, vagy a teljes napi dózist több dózisra osztjuk szét és úgy adagoljuk. A találmány szerinti vegyületek beadhatók továbbá több különböző úton, például
- anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk - orron át, bőrön át, kúppal, szájon át és hasonló módokon. Egynél több aktív hatóanyagot tartalmazó kombinációs terápia esetén
- amennyiben a hatóanyagok külön adagolható készítmények formájában vannak - az aktív hatóanyagokat beadhatjuk egyszerre, vagy azok adagolhatók külön, lépcsőzetesen eltolt időpontokban .
A találmány szerinti vegyület adagolási rendjét különböző faktorok alapján választjuk meg, melyek a következők: a beteg típusa, faja, kora, testtömege, neme és egészségi állapota; a kezelendő állapot súlyossága; a beadás módja; a beteg vese- és májműködése; és az adott alkalmazandó vegyület. Az orvos szakember képes a hatóanyag azon hatékony mennyiségének meghatározására és előírására, amely elegendő az állapot súlyosbodásának megelőzésére, kivédésére vagy feltartóztatására. A hatóanyag azon optimális koncentrációjának pontos • · · · • · meghatározásához, amely a hatékony, de még nem toxikus, olyan adagolási rendre van szükség, amely a célzott helyeken a hatóanyagok jelenlétének kinetikáján alapul. Ehhez figyelembe kell venni a hatóanyag megoszlását, egyensúlyi állapotát és kiürülését.
A találmány szerinti eljárásokban a részletesen ismertetett vegyületek képezhetik a hatóanyagot, és azokat tipikusan megfelelő gyógyászatilag elfogadható hígítóanyagokkal, kötőanyagokkal vagy hordozóanyagokkal (a továbbiakban összefoglalva hordozóanyagokkal) elegyítve adagoljuk, amelyeket a beadás formájának megfelelően választunk, ezek lehetnek például a következők: szájon át adagolandó tabletták, kapszulák, elixírek, szirupok, kúpok, gélek és hasonlók; és amelyek a szokásos gyógyszerészeti gyakorlattal összeegyeztethetők.
Például tabletták vagy kapszulák formájában, szájon át történő adagolásnál a hatóanyagot szájon át adagolható, nemtoxikus, gyógyszertanilag elfogadható semleges hordozóanyaggal kombinálhatjuk, például etanollal, glicerinnel, vízzel és hasonlókkal. Kívánt esetben vagy ha szükséges, megfelelő kötőanyagok, síkosító anyagok, szétesést elősegítő anyagok, és színező anyagok adhatók az elegyhez. Alkalmas kötőanyagok például - anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk - a keményítő, zselatin, természetes cukrok, például glükóz vagy béta-laktóz, kukorica édesítőszerek, természetes és szintetikus gyanták, például akác-, tragakant-gyanta vagy nátrium-alginát, karboxi-metil-cellulóz, polietilén-glikol, viaszok és hasonlók. A fenti adagolási formákban alkalmazható síkosító anyagok például - a korlátozás szándéka nélkül - a nátrium-oleát, nátrium-sztearát, magnézium-sztearát, nátrium-benzoát, nátrium-acetát, nátrium-klorid és hasonlók. Szétesést elősegítő anyagok például - a korlátozás szándéka nélkül - a keményítő, metil-cellulóz, agar, bentonit, xantumgyanta és hasonlók.
Folyékony kiszerelési formák esetében a hatóanyagot megfelelően ízesített szuszpendáló- vagy diszpergálószerrel kombinálhatjuk, például szintetikus vagy természetes gyantákkal, például tragakant-, akác-gyantával, metil-cellulózzal és hasonlókkal. További alkalmazható diszpergálószerek a glicerin és hasonlók. Parenterális adagolás céljára steril szuszpenziók és oldatok alkalmazása előnyös. Intravénás beadás céljára általában megfelelő konzerválószereket tartalmazó izotóniás készítményeket alkalmazhatunk.
A hatóanyagot tartalmazó, lokálisan alkalmazható készítmények különböző, a gyakorlatban jól ismert hordozóanyagokkal elegyíthetők, például alkoholokkal, aloe vera géllel, allantoinnal, glicerinnel, A- és E-vitamin olajokkal, ásványi olajokkal, PPG2 mirisztil-propionáttal és hasonlókkal, hogy például alkoholos oldatokat, lokálisan alkalmazható tisztító anyagokat, tisztító krémeket, bőrre alkalmazható géleket, bőrre alkalmazható lemosószereket, és krém vagy gél kiszerelésű készítmények formájában samponokat kapjunk.
A találmány szerinti vegyületek beadhatók liposzóma szállítórendszerek formájában is, kis méretű, egy rétegű vezikulumokként, nagy méretű, egy rétegű vezikulumokként és több rétegű vezikulumokként. Liposzómákat különböző foszfolipidekből állíthatunk elő, például koleszterinből, sztearil23 • · • · · • · · · · • ··
-aminból vagy foszfatidil-kolinokból.
A találmány szerinti vegyületeket bejuttathatjuk egyedüli szállítóanyagokként monoklonális ellenanyagok alkalmazásával is, amelyekhez a vegyület molekuláit hozzákapcsoljuk. A találmány szerinti vegyületeket oldható polimerekhez is hozzákapcsolhatjuk, mint célbajuttatható hatóanyag-hordozóanyagokhoz. Ilyen polimerek például a polivinil-pirrolidon, pirán-kopolimer, polihidroxi-propil-metakril-amid-fenol, polihidroxi-etil-aszpartamid-fenol vagy palmitoilcsoportokkal szubsztituált polietilén-oxid-polilizin. A találmány szerinti vegyületeket ezen felül összekapcsolhatjuk biológiailag lebontható olyan polimerekkel is, amelyek segítségével a hatóanyag szabályozott felszabadulását érjük el, például politejsavval, poli(epszilon-kaprolakton)-nal, polihidroxi-vajsavval, poliortoészterekkel, poliacetálokkal, polidihidropiránokkal, policiano-akrilátokkal és hidrogélekből álló, keresztkötéseket tartalmazó vagy amfipátiás blokkoló polimerekkel .
A mellékelt ábra a HPV6a nukleotidszekvenciáját mutatja.
A találmány szerinti megoldást a pontosabb értelmezhetőség céljából a továbbiakban konkrét megvalósítási példákon keresztül kívánjuk szemléltetni, anélkül azonban, hogy igényünket az ismertetettekre korlátoznánk.
1. példa
Nukleinsav extrahálása biopsziás anyagból
Egy 25 éves, szült női betegből nagy méretű condyloma acuminatum elváltozást távolítottunk el. Az elváltozás egy • ·· · részét folyékony nitrogénben lefagyasztottuk majd Braunmikrodismembrator-II készülékkel feldolgoztuk (B. Braun Instruments, Melsungen, Németország). A kapott anyagot 0,6 (tömeg/térfogat) %-os nátrium-dodecil-szulfáttal (SDS) szolubilizáltuk, proteináz-K-val (50 pg/ml) kezeltük, és fenol/kloroform/izoamil-alkohol eleggyel extraháltuk. A DNS-t etanollal precipitáltuk, és ultraibolya spektrofotometriával annak mennyiségét meghatároztuk. A nagy molekulatömegű DNS jelenlétét agaróz gélelektroforézist követően etidium-bromiddal végzett festéssel mutattuk ki.
2. példa
HPV-DNS tipizálása
A HPV-DNS típusát a ViraType Plus néven forgalomba hozott hibrid befogó vizsgáló készlettel határoztuk meg (Digene Diagnostics, Beltsville, MD) . Az alkalmazott HPV-próbákat két csoportra osztottuk, melyek összetétele az egyes típusoknak a genitális traktus malignus elváltozásaival kimutatható kapcsolatán alapult. Az A-csoportba sorolt próbák az alacsony kockázatú HPV6, -11, -42, -43 és -44 típusokat tartalmazták, a B-csoportba sorolt próbák a magas kockázatú HPV16, -18, -31, -33, -35, -45, -51, -52, és -56 típusokat tartalmazták. össz-DNS-t Pstl, BamBl és Hindin enzimekkel emésztettünk, és nagy mértékben sztringens (a specifikus hibridizálódásnak kedvező) feltételek mellett (Tm-15 °C) Southern-blot analízist végeztünk a HPV altípus meghatározására .
3. példa
A HPV6a genom klónozása
A HPV6a-pozitív biopsziás mintából extrahált össz-DNS-t Hindui endonukleázzal emésztettük. Alacsony olvadáspontú 0,8 %-os preparatív agarózgélen végzett, méret alapján történő frakcionálást követően a körülbelül 8 kilobázispár (kbp) nagyságnak megfelelő régiót a gélből kivágtuk, és az agarózt Gélase™-enzimmel emésztettük (Epicentre Technologies, Inc., Madison WI). A mintát előzőleg HindlII enzimmel emésztett és defoszforilezett pUCl8 plazmiddal ligáltuk (Pharmacia, Inc., Piscataway, NJ) . Kompetens E. coli DH5 sejtek (Gibco, BRL, Gaithersburg, MD) transzformációját követően a plazmid génkönyvtárat HPV6a-pozitív kiónokra szűrtük telep-hibridizációs eljárással, a HPV6b-Ll gén 3'-végével komplementer, antiszensz, 32P-jelölt oligonukleotid alkalmazásával (5'-GAG AGA TCT TAC CTT TTA GTT TTG GCG CGC TTA C-3' ; 1. azonosítószámú szekvencia). A 8,1 kbp HPV6a genomot tartalmazó pUC18 plazmidot izoláltuk·, és restrikciós enzimekkel, valamint Southern-blot analízissel jellemeztük. Ezt a plazmidot pUC18-HPV6a plazmidnak neveztük. Plazmid-DNS-t izoláltunk a Qiagen™Plasmid Maxi reagenskészlet alkalmazásával (Qiagen Inc., Chatsworth, CA).
4. példa
A pUC18-HPV6a plazmid szekvencia-analízise
A teljes HPV6a-szekvencia meghatározása céljából a HPV6b közölt szekvenciája alapján szekvenáló láncindító oligonukleotidokat szintetizáltunk. A teljes, 8,1 kbp HPV6a26
-genom mindkét szálát szekvenáltuk a didezoxi-láncterminációs eljárással, a PRISM™ reagenskészlet és egy Applied Biosystems (ABI) automatizált szekvenáló készülék (#373A) alkalmazásával. Azokban az esetekben, ahol a szensz és antiszensz szekvenciák nem feleltek meg egymásnak, további HPV6a specifikus láncindító oligonukleotidokat állítottunk elő, hogy a kérdéses régióban mindkét irányban megismételjük a szekvenálást, és egyértelmű eredményt kapjunk.
Az 1. ábra a HPV6a teljes szekvenciáját mutatja, összehasonlítva a HPV6b közölt szekvenciájával. A HPV6a szekvenciája alatt bemutatott bázisok a HPV6b szekvenciájának felelnek meg. A HPVőa és HPV6b DNS-szekvenciái több, mint 97 % azonosságot mutattak; 8010 bázispárból összesen 229 bázispár eltérést találtunk. A HPV6b szekvenciával összehasonlítva a legjelentősebb eltéréseket az LCR régióban találtuk (7205-106. nukleotidok). A HPV6a LCR régióban, eltekintve néhány egyedi nukleotid (nt) eltéréstől, a 7350. nukleotidnál egy 94 bázispárból álló inszertált szakaszt, a 7804. nukleotidnál pedig egy 19 bázispárból álló inszertált szakaszt találtunk. A 7615. nukleotidnál hat bázispárból álló régió deletálódott a HPV6a-genomból.
5. példa
Az ORF-ekben (nyitott olvasási keretekben) kimutatható szekvencia-variációk, összehasonlítva a HPV6b-szekvenciával
A HPV6a-szekvencián belül meghatároztuk a nyitott olvasási kereteket, a fő ORF-eket aminosav-szekvenciákká transzláltuk, és azokat összehasonlítottuk a megfelelő HPV6b-szek-
venciákkal.
Az L1 jelű fő kapszidproteiné volt az egyetlen ORF, amely megegyezett a HPV6b szekvenciával. A többi ORF aminosav eltéréseket mutatott, amelyeket az 1. táblázatban foglaltunk össze. Az L2jelű, kisebb arányban előforduló kapszidprotein vonatkozásában öt aminosav eltérést találtunk; az E6- és E7-ORF-ek egy-egy aminosav eltérést tartalmaztak. Az El proteinben hat aminosav, az E2 proteinben 11 aminosav különbség volt kimutatható. Az E4-proteinben négy aminosav eltérést találtunk. Az E5a-ORF négy pozícióban, az E5b-ORF hét pozícióban tartalmazott eltéréseket.
1. táblázat
Szekvencia variációk az E6, E7, El, E2, E4, E5 és L2 jelű
HPV6a-ORF-ekben, a HPV6b-vel összehasonlítva
| Nyitott olvasási keret | Pozíció (nukleotid) | Pozíció (aminosav) | Aminosav eltérés |
| E6 | 252 | 50 | His —>G 1 n |
| E7 | 792 | 88 | Asp—>Asn |
| El | 1535, 1536 | 235 | Leu—>Ala |
| 1670 | 280 | Leu—>Val | |
| 1741 | 303 | Glu-»Asp | |
| 2208 | 459 | Thr-»Ser | |
| 2557 | 575 | Asp—>Glu | |
| 2654 | 608 | Thr-»Ala | |
| E2 | 2802 | 27 | His—>Asp |
| 2974 | 94 | Arg—>Lys | |
| 3148 | 142 | Asn—>Thr |
Ε4
E5a
E5b
L2
| 3153 | 144 | Thr->Ser |
| 3272 | 193 | His-»Gln |
| 3388 | 222 | Leu-»Pro |
| 3405 | 227 | Lys—>Gln |
| 3643 | 307 | Arg—>Lys |
| 3693 | 324 | Ser-»Pro |
| 3735 | 338 | Asp—>His |
| 3765 | 348 | Asp-»Asn |
| 3794 | 357 | Ser-»Arg |
| 3272 | 6 | Ile—>Asn |
| 3388 | 60 | Gly—>Glu |
| 3461 | 69 | Pro—>His |
| 3552 | 99 | Asp->Glu |
| 3935 | 16 | Phe—>Leu |
| 4004 | 40 | Glu—>Asp |
| 4137 | 84 | Tyr-»His |
| 4150 | 88 | Thr—»Asn |
| 4235 | 25 | Met—>Val |
| 4297 | 45 | Lys—>Asn |
| 4314 | 51 | Asn-»Thr |
| 4323 | 54 | Asp—>Ala |
| 4343 | 61 | Tyr—>His |
| 4346, 4347 | 62 | Thr-»Asp |
| 4353 | 64 | Asp-»Ala |
| 4646, 4647 | 75 | Gin—>Gly |
| 4976 | 185 | Val->Ile |
| 5021 | 200 | Val-»Ile |
| 5490 | 356 | Gly—>Asp |
| 5597 | 392 | Leu—>Ile |
* ···» « · • · Ί « ·
6. példa
A HPV6a-cDNS szubklónozása expressziós vektorokba
A HPV6a-t kódoló cDNS-t több vektorba szubklónoztuk, a HPV6a proteinek transzfektált gazdasejtekben történő expreszszálása és in vitro transzkripciója/transzlációja céljából. A következő vektorokat alkalmaztuk: pBluescriptII SK+ (amelyben az expresszió a T7- vagy T3-promóterek irányítása alatt áll), pcDNAI/Amp [amelyben az expresszió a citomegalovírus (CMVj promóter irányítása alatt áll], pSZ9016-l [amelyben az expresszió a HÍV hosszú terminális ismétlődő egységének (LTR) promótere irányítása alatt áll], valamint a HPV6a-t kódoló
DNS-szekvenciát tartalmazó rekombináns baculovírusok előállítására alkalmazható pVL1393 baculovírus transzfer vektor [amelyben az expresszió a polihedrin (PH) promóter irányítása alatt áll].
a) pBluescriptII-SK+:HPV6a
A teljes hosszúságú HPV6a cDNS-klónt lambda bakteriofágból nyertük részleges KcoRI-emésztéssel, és azt EcoRl enzimmel hasított, CIP-kezelt (borjú intesztinális foszfatázzal kezelt) pBluescriptII SK+ vektorba klónoztuk. Különálló szubklónokat nyertünk, amelyekben a HPV6a szensz orientációja a T7- vagy a T3-promótert követte.
b) pcDNSI/Amp:HPV6a
A megfelelő orientációban történő klónozás elősegítésére a HPV6a-t EcoRl és Xbal enzimekkel olyan tisztított pBluescriptII SK+:HPV6a plazmid készítményből kivágtuk, amelyben a HPV6a-DNS-szekvencia a T7-promóterhez képest 3'-irányban található. Az így kapott, EcoRl és Xbal enzimekkel *··« hasított HPV6a-fragmenst tisztítottuk, és EcoRV, valamint Xbal enzimekkel hasított, CIP-kezelt pcDNAI/Amp vektorral ligáltuk úgy, hogy a HPV6a-t kódoló DNS a CMV-promótertől 3'irányban helyezkedjen el.
c) pSZ9016-l:HPV6a
A HPV6a-t részleges EcoRI emésztéssel pBluescriptII SK+:HPV6a plazmidból kivágtuk, majd az 1,3 kb fragmenst agarózgélből tisztítottuk. Az így kapott EcoRI HPV6a-fragmenst EcoRI enzimmel hasított, CIP-kezelt pSZ9016-l vektorral ligáltuk. Olyan szubklónokat szelektáltunk, amelyben a HPV6a szensz orientációja a HÍV LTR-promótertől 3'-irányban található.
d) pVL1393:HPV6a és pVL1393:T7-HPV6a-HA
A HPV6a-kód.oló DNS-nek pVL1393 jelű baculovírus transzfer vektorba, megfelelő orientációban történő klónozását úgy végeztük, hogy a HPV6a-t pcDNAI/Amp:HPV6a plazmidból BamHI és Xbal enzimekkel kivágtuk, majd a kapott 1,3 kb fragmenst BamHI és Xbal enzimekkel hasított, CIP-kezelt pVL1393 vektorba ligáltuk, így nyertük a pVL1393:HPV6a plazmidot. Hasonlóképp, a HPV6a végeihez géntechnikai eljárással epitóp toldalékokat kapcsoltunk úgy, hogy a HPV6a nyitott olvasási keretének amino-terminális 5'-végéhez T7-toldalékot, a karboxi-terminális 3'-végéhez pedig FluHA-epitópot adtunk. Az így módosított HPV6a-DNS-t pVL1393 vektor BairiH.1/Xbalhelyeihez ligáltuk, így nyertük a pVL1393:T7-HPV6a-HA plazmidot .
• · • · · · • · · · · · ······ « • · · · ·
7. példa
A HPV6a polipeptid expresszálása in vitro transzkripciós/transzlációs eljárással, valamint gazdasejtekbe történő transzfekcióval
A HPV-DNS-szekvenciákat tartalmazó vektorokat alkalmaztuk a HPV6a polipeptid nyúl retikulocita lizátumokban, emlős gazdasejtekben és baculovírussal fertőzött rovarsejtekben történő transzlációjának irányítására. Lényegében a gyártó utasításai szerinti kísérleti módszereket alkalmaztuk.
a) In vitro transzkripció/transzláció pBluescriptIII SK+:HPV6a plazmid-DNS-t (amely a HPV6a-t a T7-orientációjában tartalmazta) a HPV6a-inszerttől 3'-irányban, BamHI-emésztéssel linearizáltunk. A linearizált plazmidot tisztítottuk, és (run-off) gyors transzkripciós eljárásban templátként használtuk, T7 RNS-polimeráz alkalmazásával, m7G(5')ppp(5')G jelenlétében. Az így kapott, védősapkával ellátott (capped) transzkripteket LiCl-os precipitációval tisztítottuk, és nukleázzal előkezelt nyúl retikulocita lizátumban, L-[35S]metionin jelenlétében HPV6a transzlációjának irányítására használtuk.
b) Expresszió emlős sejtekben
A HPV6a proteint emlős gazdasejtekben expresszáltuk pcDNAI/Amp:HPV6a vektorral (a CMV-promóter szabályozása alatt) vagy pSZ9016-l:HPV6a vektorral (a HÍV LTR-promóter szabályozása alatt) történő transzfekciót követően. Az utóbbi esetben (pSZ9016-l-HPV6a), a sejteket egyidejűleg a TAT-expresszáló pSZ9016:TAT plazmiddal transzfektáltuk. Mindkét HPV6a expressziós plazmid esetében, COS-7-sejteket transzfek• · • · · · · · ··* ·· ·· · · • · ······ · ··· ·· · · · táltunk DEAE-dextrán felhasználásával vagy lipofekciós eljárással, Lipofectamine (BRL) alkalmazásával.
c) Expresszió rovarsejtekben
A HPV6a-tartalmú pVL1393:T7-HPV6a HA baculovírus transzfer vektort használtuk in vivő homológ rekombinációs eljárással rekombináns baculovírusok (Autographa californica) előállítására. Az epitóp-toldalékokkal ellátott HPV6a-t ezt követően a HPV6a-DNS-t tartalmazó rekombináns baculovírusokkal fertőzött, szuszpenziós tenyészetben tenyésztett Sf9-jelű (Spodoptera frugiperda) rovarsejtekben expresszáltuk.
8. példa
A HPV6a aktivitására hatást kifejtő vegyületeket különböző eljárásokkal mutathatunk ki. A HPV6a aktivitására hatást kifejtő vegyületek azonosítására szolgáló eljárás a következő lépésekből áll:
a) a vizsgálati vegyületet HPV6a-tartalmú oldattal keverjük;
b) a kapott elegyben meghatározzuk a HPV6a-aktivitást; és
c) az elegyben található HPV6a-t standarddal hasonlítjuk össze.
A HPV6a aktivitására hatást kifejtő vegyületeket gyógyászati készítményekké alakíthatjuk. Ilyen gyógyászati készítmények HPV6a-fertőzéssel jellemzett betegségek és állapotok kezelésére alkalmazhatók.
• · · ·
9. példa
A HPV6a-kódoló DNS-sel struktúrális rokonságban álló DNS-eket hibridizációs próbák alkalmazásával mutathatunk ki. Alkalmas hibridizációs próbát előállíthatunk az 1. ábra szerinti nukleotidszekvencia egészét vagy annak egy részét tartalmazó DNS-ből, az 1. ábra szerinti nukleotidszekvencia egészét vagy annak egy részét tartalmazó DNS által kódolt RNS-ből, valamint az 1. ábra szerinti szekvencia egy részéből származó degenerált oligonukleotidokból.
• · · • ·
SZEKVENCIALISTA (1) ÁLTALÁNOS INFORMÁCIÓ:
(i) BEJELENTŐ: Merck & Co., Inc.
(ii) A TALÁLMÁNY CÍME: HUMÁN PAPILLOMAVÍRUS 6A TÍPUST
KÓDOLÓ DNS (iii) A SZEKVENCIÁK SZÁMA: 2 (iv) LEVELEZÉSI CÍM:
(v) KOMPUTERREL OLVASHATÓ FORMA:
(vi) AKTUÁLIS BEJELENTÉSI ADATOK:
(vili) KÉPVISELŐ:
(ix) TELEKOMMUNIKÁCIÓS ADATOK:
(2) INFORMÁCIÓK AZ 1. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 34 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: cDNS (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 1. szekvencia GAGAGATCTT ACCTTTTAGT TTTGGCGCGC TTAC 34 (2) INFORMÁCIÓK A 2. SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:
(A) HOSSZ: 8010 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁLSZÁM: egyszeres (D) TOPOLÓGIA: lineáris (ii) A MOLEKULA TÍPUSA: cDNS (xi) A SZEKVENCIA LEÍRÁSA: 2. szekvencia
| GTTAATAACA | ATCTTGGTTT | TAAAAAATAG | GAGGGACCGA | AAACGGTTCA | ACCGAAAACG | 60 |
| GTTGTATATA | AACCAGCCCT | AAAATTTAGC | AAACGAGGCA | TTATGGAAAG | TGCAAATGCC | 120 |
| TCCACGTCTG | CAACGACCAT | AGACCAGTTG | TGCAAGACGT | TTAATCTATC | TATGCATACG | 180 |
| TTGCAAATTA | ATTGTGTGTT | TTGCAAGAAT | GCACTGACCA | CTGCAGAGAT | TTATTCATAT | 240 |
| GCATATAAAC | AGCTAAAGGT | CCTGTTTCGA | GGCGGCTATC | CATATGCAGC | CTGCGCGTGC | 300 |
| TGCCTAGAAT | TTCATGGAAA | AATCAACCAA | TATAGACACT | TTGATTATGC | TGGATATGCA | 360 |
| ACAACTGTTG | AAGAAGAAAC | TAAACAAGAC | ATTTTAGACG | TGCTAATTCG | GTGCTACCTG | 420 |
| TGTCACAAAC | CGCTGTGTGA | AGTAGAAAAG | GTAAAACATA | TACTAACCAA | GGCGCGGTTT | 430 |
| ATAAAGCTAA | ATTGTACGTG | GAAGGGTCGC | TGCCTACACT | GCTGGACAAC | ATGCATGGAA | 540 |
| GACATGTTAC | CCTAAAGGAT | ATTGTATTAG | ACCTGCAACC | TCCAGACCCT | GTAGGGTTAC | 600 |
| ATTGCTATGA | GCAATTAGTA | GACAGCTCAG | AAGATGAGGT | GGACGAAGTG | GACGGACAAG | 660 |
| ATTCACAACC | TTTAAAACAA | CATTTCCAAA | TAGTGACCTG | TTGCTGTGGA | TGTGACAGCA | 720 |
| ACGTTCGACT | GGTTGTGCAG | TGTACAGAAA | CAGACATCAG | AGAAGTGCAA | CAGCTTCTGT | 730 |
| TGGGAACACT | AGACATAGTG | TGTCCCATCT | GCGCACCGAA | GACATAACAA | CGATGGCGGA | 840 |
| CGATTCAGGT | ACAGAAAATG | AGGGGTCTGG | GTGTACAGGA | TGGTTTATGG | TAGAAGCTAT | 900 |
| AGTGCAACAC | CCAACAGGTA | CACAAATATC | AGACGATGAG | GATGAGGAGG | TGGAGGACAG | 960 |
| TGGGTATGAC | ATGGTGGACT | TTATTGATGA | CAGCAATATT | ACACACAATT | CCTTGGAAGC | 1020 |
| ACAGGCATTG | TTTAACAGGC | AGGAGGCGGA | CACCCATTAT | GCGACTGTGC | AGGACCTAAA | 1030 |
| ACGAAAGTAT | TTAGGTAGTC | CATATGTTAG | TCCTATAAAC | ACTATAGCCG | AGGCAGTGGA | 1140 |
| AAGTGAAATA | AGTCCACGAT | TGGACGCCAT | TAAACTTACA | AGACAGCCAA | AAAAGGTAAA | 1200 |
| GCGACGGCTG | TTTCAAACCA | GGGAACTAAC | GGACAGTGGA | TATGGCTATT | CTGAAGTGGA | 1260 |
| AGCTGGAACG | GGAACGCAGG | TAGAGAAACA | TGGCGTCCCG | GAAAATGGGG | GAGATGGTCA | 1320 |
| GGAAAAGGAC | ACAGGAAGGG | ACATAGAGGG | GGAGGAACAT | ACAGAGGCGG | AAGCGCCCAC | 1330 |
| AAACAGTGTA | CGGGAGCATG | CAGGCACAGC | AGGAATATTG | GAATTGCTAA | AATGTAAAGA | 1440 |
| TTTACGGGCA | GCATTACTTG | GTAAGTTTAA | AGAATGCTTT | GGGCTGTCTT | TTATTGATTT | 1500 |
| AATTAGGCCA | TTTAAAAGTG | ATAAAACAAC | ATGTGCAGAC | TGGGTGGTAG | CAGGATTTGG | 1560 |
| TATACATCAT | AGCATATCAG | AGGCATTTCA | AAAATTAATT | GAGCCATTAA | gtttatatgc | 1620 |
| ACATATACAA | TGGCTAACAA | ATGCATGGGG | AATGGTATTG | TTAGTÁTTAG | TAAGATTTAA | 1630 |
| AGTAAATAAA | AGTAGAAGTA | CCGTTGCACG | TACACTTGCA | ACGCTATTAA | ATATACCTGA | 1740 |
| CAATCAAATG | TTAATAGAGC | CACCAAAAAT | ACAAAGTGGT | GTTGCAGCCC | TGTATTGGTT | 1300 |
| TCGTACAGGT | ATATCAAATG | CCAGTACAGT | TATAGGGGAA | GCACCAGAAT | GGATAACACG | 1360 |
| CCAAACTGTT | ATTGAACATG | GGTTGGCAGA | CAGTCAGTTT | AAATTAACAG | AAATGGTGCA | 1920 |
| GTGGGCATAT | GATAATGACA | TATGCGAGGA | GAGTGAAATT | GCATTTGAAT | ATGCACAAAG | 1930 |
• 4 • · · · · · • · · · 4 · ·· ·····« * •••444 ·« » β «
| GGGAGATTTT | GATTCTAATG | CACGAGCATT | TTTAAATAGC | AATATGCAGG | CAAAATATGT | 2040 |
| GAAAGATTGT | GCAACTATGT | GTAGACATTA | TAAACATGCA | GAAATGAGGA | AGATGTCTAT | 2100 |
| AAAACAATGG | ATAAAACATA | GGGGTTCTAA | AATAGAAGGC | ACAGGAAATT | GGAAACCAAT | 2160 |
| TGTACAATTC | CTACGACATC | AAAATATAGA | ATTTATTCCA | TTTTTAAGTA | AATTTAAATT | 2220 |
| ATGGCTGCAC | GGTACGCCAA | AAAAAAACTG | CATAGCCATA | GTAGGCCCTC | CAGATACTGG | 2280 |
| GAAATCGTAC | TTTTGTATGA | GTTTAATAAG | CTTTTTAGGA | GGTACAGTTA | TTAGTCATGT | 2340 |
| AAATTCCAGC | AGCCATTTTT | GGTTGCAACC | GTTAGTAGAT | GCTAAGGTAG | CATTGTTAGA | 2400 |
| TGATGCAACA | CAGCCATGTT | GGATATATAT | GGATACATAT | ATGAGAAATT | TGTTAGATGG | 2460 |
| TAATCCTATG | AGTATTGACA | GAAAGCATAA | AGCATTGACA TTAATTAAAT | GTCCACCTCT | 2520 | |
| GCTAGTAACG | TCCAACATAG | ATATTACTAA | AGAAGAGAAA | TATAAGTATT | TACATACTAG | 2530 |
| AGTAACAACA | TTTACATTTC | CAAATCCATT | CCCTTTTGAC | AGAAATGGGA | ATGCAGTGTA | 2640 |
| TGAACTGTCA | AATGCAAACT | GGAAATGTTT | TTTTGAAAGA | CTGTCGTCAA | GCCTAGACAT | 2700 |
| TCAGGATTCA | GAGGACGAGG | AAGATGGAAG | CAATAGCCAA | GCGTTTAGAT | GCGTGCCAGG | 2760 |
| AACAGTTGTT | AGAACTTTAT | GAAGAAAACA | GTACTGACCT | AAACAAACAT | GTATTGCATT | 2320 |
| GGAAATGCAT | GAGACATGAA | AGTGTATTAT | TATATAAAGC | AAAACAAATG | GGCCTAAGCC | 2330 |
| ACATAGGAAT | GCAAGTAGTG | CCACCATTAA | AGGTGTCCGA | AGCAAAAGGA | CATAATGCCA | 2940 |
| TTGAAATGCA | AATGCATTTA | GAATCATTAT | TAAAGACTGA | GTATAGTATG | GAACCGTGGA | 3000 |
| CATTACAAGA | AACAAGTTAT | GAAATGTGGC | AAACACCACC | TAAACGCTGT | TTTAAAAAAC | 3060 |
| GGGGCAAAAC | TGTAGAAGTT | AAATTTGATG | GCTGTGCAAA | CAATACAATG | GATTATGTGG | 3120 |
| TATGGACAGA | TGTGTATGTG | CAGGACACTG | ACTCCTGGGT | AAAGGTGCAT | AGTATGGTAG | 3180 |
| ATGCTAAGGG | TATATATTAC | ACATGTGGAC | AATTTAAAAC | ATATTATGTA | AACTTTGTAA | 3240 |
| AAGAGGCAGA | AAAGTATGGG | AGCACCAAAC | AATGGGAAGT | ATGTTATGGC | AGCACAGTTA | 3300 |
| TATGTTCTCC | TGCATCTGTA | TCTAGCACTA | CACAAGAAGT | ATCCATTCCT | GAATCTACTA | 3360 |
| CATACACCCC | CGCACAGACC | TCCACCCCTG | TGTCCTCAAG | CACCCAGGAA | GACGCAGTGC | 3420 |
| AAACGCCGCC | TAGAAAACGA | GCACGAGGAG | TCCAACAGTC | ACCTTGCAAC | GCCTTGTGTG | 3430 |
| TGGCCCACAT | TGGACCCGTG | GACAGTGGAA | ACCACAACCT | CATCACTAAC | AATCACGACC | 3540 |
| AGCACCAAAG | AAGGAACAAC | AGTAACAGTT | CAGCTACGCC | TATAGTGCAA | TTTCAAGGTG | 3600 |
| AATCTAATTG | TTTAAAGTGT | TTTAGATATA | GGCTAAATGA | CAAACACAGA | CATTTATTTG | 3660 |
| ATTTAATATC | ATCAACGTGG | CACTGGGCCT | CCCCAAAGGC | ACCACATAAA | CATGCCATTG | 3720 |
| TAACTGTAAC | ATATCATAGT | GAGGAACAAA | GGCAACAGTT | TTTAAATGTT | GTAAAAATAC | 3780 |
| CACCTACTAT | TAGGCACAAA | CTGGGGTTTA | TGTCACTGCA | CCTATTGTAA | TTTGTATATA | 3340 |
| TGTAAATGTG | TAAATATATG | GTATTGGTGT | AATACAACTG | TACATGTATG | GAAGTGGTAC | 3900 |
| CTGTACAAAT | AGCTGCAGGA | ACAACCAGCA | CATTAATACT | GCCTGTTATA | ATTGCATTTG | 3960 |
| TTGTATGTTT | TGTTAGCATC | ATACTTATTG | TATGGATATC | TGACTTTATT | GTGTACACAT | 4020 |
| CTGTGCTAGT | ACTAACACTG | CTTTTATACT | TACTATTGTG | GCTGCTATTA | ACAACCCCCT | 4080 |
| TGCAATTTTT | CCTACTAACT | CTACTTGTGT | GTTACTGTCC | CGCATTGTAT | ATACACCACT | 4140 |
| ACATTGTTAA | CACACAGCAA | TGATGCTAAC | ATGTCAATTT | AATGATGGAG | ATACATGGCT | 4200 |
| GGGTTTGTGG | TTGTTATGTG | CCTTTATTGT | AGGGGTGTTG | GGGTTATTAT | TAATGCACTA | 4260 |
| TAGAGCTGTA | CAAGGCGATA | AACACACCAA | ATGTAACAAG | TGTAACAAAC | ACACCTGTAA | 4320 |
| TGCTGATTAT | GTAACTATGC | ATCATGATAC | TGCTGGTGAT | TATATATATA | TGAATTAGAG | 4330 |
| TAAAACTTTT | TTTATATTTG | TAACAGTGTA | TGTTTTGTAT | ACCATGGCAC | ATAGTAGGGC | 4440 |
| CCGACGACGC | AAGCGTGCGT | CAGCTACACA | GCTATATCAA | ACATGTAAAC | TTACTGGAAC | 4500 |
| ATGCCCCCCA | GATGTAATTC | CTAAGGTGGA | GCACAACACC | ATTGCAGATC | AAATATTAAA | 4560 |
| ATGGGGAAGT | TTGGGGGTTT | TTTTTGGAGG | GTTGGGTATA | GGCACCGGTT | CCGGCACTGG | 4620 |
| GGGTCGTACT | GGCTATGTTC | CCTTAGGAAC | TTCTGCAAAA | CCTTCTATTA | CTAGTGGGCC | 4680 |
| TATGGCTCGT | CCTCCTGTGG | TGGTGGAGCC | TGTGGCCCCT | TCGGATCCAT | CCATTGTGTC | 4740 |
| TTTAATTGAA | GAATCAGCAA | TCATTAACGC | AGGGGCGCCT | GAAATTGTGC | CCCCTGCACA | 4800 |
| CGGTGGGTTT | ACAATTACAT | CCTCTGAAAC | AACTACCCCT | GCAATATTGG | ATGTATCAGT | 4860 |
| TACTAGTCAT | ACTACTACTA | GTATATTTAG | AAATCCTGTC | TTTACAGAAC | CTTCTGTAAC | 4920 |
| ACAACCCCAA | CCACCCGTGG | AGGCTAATGG | ACATATATTA | ATTTCTGCAC | CCACTATAAC | 4980 |
| GTCACACCCT | ATAGAGGAAA | TTCCTTTAGA | TACTTTTGTG | ATATCCTCTA | GTGATAGCGG | 5040 |
| TCCTACATCC | AGTACCCCTG | TTCCTGGTAC | TGCACCTAGG | CCTCGTGTGG ' | GCCTATATAG | 5100 |
| TCGTGCATTG | CACCAGGTGC | AGGTTACAGA | CCCTGCATTT | CTTTCCACTC ' | CTCAACGCTT | 5160 |
| AATTACATAT | GATAACCCTG | TATATGAAGG | GGAGGATGTT | AGTGTACAAT ' | TTAGTCATGA | 5220 |
| TTCTATACAC | AATGCACCTG | ATGAGGCTTT | TATGGACATA | ATTCGTTTGC ACAGACCTGC | 5280 | |
| TATTGCGTCC | CGACGTGGCC | TTGTGCGGTA | CAGTCGCATT ι | GGACAACGGG GGTCTATGCA- | 5340 | |
| CACTCGCAGC | GGAAAGCACA | TAGGGGCCCG | CATTCATTAT ' | TTTTATGATA TTTCACCTAT | 5400 |
| TGCACAAGCT | GCAGAAGAAA | TAGAAATGCA | CCCTCTTGTG | GCTGCACAGG | ATGATACATT | 5460 |
| TGATATTTAT | GCTGAATCTT | TTGAACCTGA | CATTAACCCT | ACCCAACACC | CTGTTACAAA | 5520 |
| TATATCAGAT | ACATATTTAA | CTTCCACACC | TAATACAGTT | ACACAACCGT | GGGGTAACAC | 5530 |
| CACAGTTCCA | TTGTCAATTC | CTAATGACCT | GTTTTTACAG | TCTGGCCCTG | ATATAACTTT | 5640 |
| TCCTACTGCA | CCTATGGGAA | CACCCTTTAG | TCCTGTAACT | CCTGCTTTAC | CTACAGGCCC | 5700 |
| TGTTTTCATT | ACAGGTTCTG | GATTTTATTT | GCATCCTGCA | TGGTATTTTG | CACGTAAACG | 5760 |
| CCGTAAACGT | ATTCCCTTAT | TTTTTTCAGA | TGTGGCGGCC | TAGCGACAGC | ACAGTATATG | 5320 |
| TGCCTCCTCC | TAACCCTGTA | TCCAAAGTTG | TTGCCACGGA | TGCTTATGTT | ACTCGCACCA | 5830 |
| ACATATTTTA | TCATGCCAGC | AGTTCTAGAC | TTCTTGCAGT | GGGTCATCCT | TATTTTTCCA | 5940 |
| TAAAACGGGC | TAACAAAACT | GTTGTGCCAA | AGGTGTCAGG | ATATCAATAC | AGAGTATTTA | 6000 |
| AGGTGGTGTT | ACCAGATCCT | AACAAATTTG | CATTGCCTGA | CTCGTCTCTT | TTTGATCCCA | 6060 |
| CAACACAACG | TTTGGTATGG | GCATGCACAG | GCCTAGAGGT | GGGCCGGGGA | CAGCCATTAG | 6120 |
| GTGTGGGTGT | AAGTGGACAT | CCTTTCCTAA | ATAAATATGA | TGATGTTGAA | AATTCAGGGA | 6130 |
| GTGGTGGTAA | CCCTGGACAG | GATAACAGGG | TTAATGTAGG | TATGGATTAT | AAACAAACAC | 6240 |
| AATTATGCAT | GGTTGGATGT | GCCCCCCCTT | TGGGCGAGCA | TTGGGGTAAA | GGTAAACAGT | 6300 |
| GTACTAATAC | ACCTGTACAG | GCTGGTGACT | GCCCGCCCTT | AGAACTTATT | ACCAGTGTTA | 6360 |
| TACAGGATGG | CGATATGGTT | GACACAGGCT | TTGGTGCTAT | GAATTTTGCT | GATTTGCAGA | 6420 |
| CCAATAAATC | AGATGTTCCT | ATTGACATAT | GTGGCACTAC | ATGTAAATAT | CCAGATTATT | 6480 |
| TACAAATGGC | TGCAGACCCA | TATGGTGATA | GATTATTTTT | TTTTCTACGG | AAGGAACAAA | 6540 |
| TGTTTGCCAG | ACATTTTTTT | AACAGGGCTG | GCGAGGTGGG | GGAACCTGTG | CCTGATACTC | 6600 |
| TTATAATTAA | GGGTAGTGGA | AATCGCACGT | CTGTAGGGAG | TAGTATATAT | GTTAACACCC | 6660 |
| CAAGCGGCTC | TTTGGTGTCC | TCTGAGGCAC | AATTGTTTAA | TAAGCCATAT | TGGCTACAAA | 6720 |
| AAGCCCAGGG | ACATAACAAT | GGTATTTGTT | GGGGTAATCA | ACTGTTTGTT | ACTGTGGTAG | 6730 |
| ATACCACACG | CAGTACCAAC | ATGACATTAT | GTGCATCCGT | AACTACATCT | TCCACATACA | 6840 |
| CCAATTCTGA | TTATAAAGAG | TACATGCGTC | ATGTGGAAGA | GTATGATTTA | CAATTTATTT | 6900 |
| TTCAATTATG | TAGCATTACA | TTGTCTGCTG | AAGTAATGGC | CTATATTCAC | ACAATGAATC | 6960 |
| CCTCTGTTTT | GGAAGACTGG | AACTTTGGGT | TATCGCCTCC | CCCAAATGGT | ACATTAGAAG | 7020 |
| ATACCTATAG | GTATGTGCAG | TCACAGGCCA | TTACCTGTCA | AAAGCCCACT | CCTGAAAAGG | 7080 |
• ·
| AAAAGCCAGA | TCCCTATAAG | AACCTTAGTT | TTTGGGAGGT | TAATTTAAAA | GAAAAGTTTT | 7140 |
| CTAGTGAATT | GGATCAGTAT | CCTTTGGGAC | GCAAGTTTTT | GTTACAAAGT | GGATATAGGG | 7200 |
| GACGGTCCTC | TATTCGTACC | GGTGTTAAGC | GCCCTGCTGT | TTCCAAAGCC | TCTGCTGCCC | 7260 |
| CTAAACGTAA | GCGCGCCAAA | ACTAAAAGGT | AATATATGTG | TATATGTACT | GTTATATATA | 7320 |
| TGTGTGTATG | TACTGTTATG | TATATGTGTG | TATGTACTGT | TATATGTATG | TGTGTTGTAT | 7330 |
| ATATGTGTGT | ATATATGTGT | ATGTGTGTAT | ATGTATATGT | ATGTGTTGTG | TATATATATG | 7440 |
| TGTGTGTGTG | TTATGTGTGT | AATGTAATTT | ATTTGTGTAA | TGTGTATGTG | TGTTTATGTG | 7500 |
| CAATAAACAA | TTAACTACAC | CCTGTGACTC | AGTGGCTGTT | GCACGCGTTT | TGGTTTGCAC | 7560 |
| GCGCCTTACA | CACATAAGTA | ATATACATGC | ACAATATATA | TATTTTTGTT | ACAATAATAT | 7620 |
| ATTTTTATAT | TTGCAACCGT | TTTCGGTTGC | CCTTGGCATA | CACTTTCCAC | CAATTTGTTA | 7630 |
| CAACGTGTTG | CCTGTTAATC | CTATATATTT | TGTGCCAGGT | ACACATTGCC | CTGCCAAGTT | 7740 |
| CATTGCCAAG | TGCATCATAT | CCTGCCAACC | ACACACCTGG | CGCCAGGGTG | CGGTATTGCC | 7300 |
| TTACTCATAT | GTTTATTGCC | ACTGCAATAA | ACCTGTCTTT | GTGTTATACT | TTTCTGCACT | 7860 |
| GTAGCCAACT | CTTAAAAGCA | TTTTTGGCTT | GTAGCAGAAC | ATTTTTTTGC | TCTTACTGTT | 7920 |
| TGGTATACAA | TAACATAAAA | ATGAGTAACC | TAAGGTCACA | CACCTGCAAC | CGGTTTCGGT | 7980 |
| TATCCACACC | CTACATATTT | CCTTCTTATA | 8010 |
Claims (14)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Izolált és tisztított DNS molekula, amely 6a típusú humán papillomavírust vagy annak funkcionális származékát kódolja.
- 2. Az 1. igénypont szerinti izolált és tisztított DNS molekula, amely az 1. ábra szerinti nukleotid-szekvenciával rendelkezik, vagy annak funkcionális származéka.
- 3. Expressziós vektor az 1. igénypont szerinti DNS molekula gazdasejtben történő expresszálására.
- 4. Az 1. igénypont szerinti DNS molekula által kódolt, lényegében tisztított protein.
- 5. A 4. igénypont szerinti protein, amely a következők valamelyike: HPV6aL2, HPV6aEl, HPV6aE2, HPV6aE4, HPV6aE5a, HPV6aE5b, HPV6aE6, HPV6aE7, vagy azok funkcionális származéka .
- 6. Monospecifikus ellenanyag, amely az 1. igénypont szerinti DNS molekulával, az 1. igénypont szerinti DNS molekulával komplementer RNS-sel vagy az 1. igénypont szerinti DNS molekula által kódolt proteinnel mutat immunreaktivitást.
- 7. Eljárás gazdasejtben humán papillomavírus 6a típusú protein expresszálására, azzal jellemezve, hogy (a) egy a 4. igénypont szerinti expressziós vektort megfelelő gazdasejtbe juttatunk; és (b) a kapott gazdasejtet olyan feltételek mellett tenyésztjük, amelyek elősegítik az expressziós vektorról a humán papillomavírus 6a típusú protein expresszálódását.
- 8. Eljárás humán 6a típusú papillomavírus aktivitását • « - .« « ,, * · *· » 9 · • - · ·«·.·· ·· ······ · ··· ·· · ·· módosító vegyületek azonosítására, azzal jellemezve, hogy (a) egy a humán 6a típusú papillomavírus aktivitását feltételezetten módosító anyagot egy az 1. igénypont szerinti DNS molekulával, egy az 1. igénypont szerinti DNS molekulával komplementer RNS molekulával vagy az 1. igénypont szerinti DNS molekula által kódolt proteinnel érintkeztetjük, és (b) meghatározzuk a módosító anyagnak az 1. igénypont szerinti DNS molekulára, az 1. igénypont szerinti DNS molekulával komplementer RNS molekulára vagy az 1. igénypont szerinti DNS molekula által kódolt proteinre kifejtett hatását.
- 9. A 8.igénypont szerinti eljárásban aktív vegyület.
- 10. Gyógyászati készítmény, amely egy a 8. igénypont szerinti eljárásban aktív vegyületet tartalmaz.
- 11. Eljárás humán 6a típusú papillomavírus által közvetített állapotokban szenvedő betegek kezelésére, azzal jellemezve, hogy a betegnek a 9. igénypont szerinti vegyületet adjuk be.
- 12. Immunválasz kiváltására szolgáló készítmény, amely egy az 1. igénypont szerinti DNS molekulát, az 1. igénypont szerinti DNS molekula által kódolt peptideket, egy az 1. igénypont szerinti DNS molekulával komplementer RNS molekulát vagy azok kombinációját tartalmazza.
- 13. Vakcina humán papillomavírus fertőzés megelőzésére vagy kezelésére, amely egy az 1. igénypont szerinti DNS molekulát, az 1. igénypont szerinti DNS molekula által kódolt peptideket, egy az 1. igénypont szerinti DNS molekulával komplementer RNS molekulát vagy azok kombinációját tártál42 mázzá.
- 14. Eljárás humán papillomavírus által okozott fertőzéssel vagy betegséggel szembeni immunválasz kiváltására, azzal jellemezve, hogy a kezelendő egyednek egy az 1. igénypont szerinti DNS molekulát, egy az 1. igénypont szerinti DNS molekulával komplementer RNS molekulát, az 1. igénypont szerinti DNS molekula által kódolt proteineket vagy azok kombinációját adagoljuk.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US31046894A | 1994-09-22 | 1994-09-22 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT77337A true HUT77337A (hu) | 1998-03-30 |
Family
ID=23202654
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9702290A HUT77337A (hu) | 1994-09-22 | 1995-09-18 | Humán papillomavírus 6A-típusát kódoló DNS |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6290965B1 (hu) |
| EP (1) | EP0782615A4 (hu) |
| JP (1) | JPH10506014A (hu) |
| AU (1) | AU694269B2 (hu) |
| BG (1) | BG101338A (hu) |
| BR (1) | BR9509076A (hu) |
| CA (1) | CA2200582C (hu) |
| CZ (1) | CZ87597A3 (hu) |
| FI (1) | FI121507B (hu) |
| HU (1) | HUT77337A (hu) |
| NO (1) | NO971347L (hu) |
| NZ (1) | NZ293461A (hu) |
| PL (1) | PL319294A1 (hu) |
| RU (1) | RU2177999C2 (hu) |
| SK (1) | SK35897A3 (hu) |
| WO (1) | WO1996009375A1 (hu) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6962981B1 (en) * | 1996-03-25 | 2005-11-08 | Medarex, Inc. | Monoclonal antibodies specific for the extracellular domain of prostate-specific membrane antigen |
| GB9621091D0 (en) | 1996-10-09 | 1996-11-27 | Fondation Pour Le Perfectionem | Attenuated microorganisms strains and their uses |
| ES2262333T3 (es) * | 1998-08-14 | 2006-11-16 | MERCK & CO., INC. | Procedimiento para purificar particulas similares a virus de papilomavirus humano. |
| CN1100835C (zh) * | 1998-10-30 | 2003-02-05 | 中国科学院感光化学研究所 | 加入纳米无机化合物粒子的钛溶胶－凝胶涂料及其制法和用途 |
| GB0017990D0 (en) * | 2000-07-21 | 2000-09-13 | Glaxo Group Ltd | Papilloma virus sequences |
| WO2004081178A2 (en) * | 2003-03-06 | 2004-09-23 | Indiana University Research And Technology Corporation | Methods and composition for producing infectious hpv stocks |
| IL156670A0 (en) * | 2003-06-26 | 2004-01-04 | Zvi Zolotariov | Aloe suppositories |
| US20080160040A1 (en) * | 2004-04-15 | 2008-07-03 | Ghim Shin-Je | Plant-produced compositions for treating papillomavirus infection and related methods |
| AU2005314061B2 (en) | 2004-12-08 | 2010-01-28 | Gen-Probe Incorporated | Detection of nucleic acids from multiple types of human papillomaviruses |
| US8084207B2 (en) * | 2005-03-03 | 2011-12-27 | Ibis Bioscience, Inc. | Compositions for use in identification of papillomavirus |
| US20070031826A1 (en) * | 2005-08-05 | 2007-02-08 | My Gene | Diagnostic kit for determining the genotype of a human papilloma virus and method of using thereof |
| AU2006295040A1 (en) * | 2005-09-08 | 2007-04-05 | Kentucky Bioprocessing, Llc | Modified tobacco mosaic virus particles as scaffolds for display of protein antigens for vaccine applications |
| US8101342B2 (en) * | 2006-08-28 | 2012-01-24 | Sungkyunkwan University Foundation For Corporate Collaboration | DNA vaccine for treating or preventing cervical cancer comprising a gene encoding HPV protein |
| ES2585502T3 (es) * | 2007-12-21 | 2016-10-06 | Novartis Ag | Vector de expresión en mamíferos |
| EP2576840B1 (en) | 2010-05-25 | 2018-10-17 | QIAGEN Gaithersburg, Inc. | Fast results hybrid capture assay and associated strategically-truncated probes |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2294778T3 (es) * | 1992-06-25 | 2008-04-01 | Georgetown University | Vacunas para el virus del papiloma. |
| PL183781B1 (pl) * | 1994-05-16 | 2002-07-31 | Merck & Co Inc | Sposób wytwarzania szczepionki przeciwko ludzkiemu wirusowi brodawczaków |
| AR004464A1 (es) * | 1994-11-14 | 1998-12-16 | Merck Sharp & Dohme | Un metodo para producir una proteina de capside de papilomavirus |
| IL117591A0 (en) * | 1995-03-30 | 1996-07-23 | Merck & Co Inc | Synthetic DNA encoding human papillomavirus type 11 L1 protein |
-
1995
- 1995-09-18 EP EP95933148A patent/EP0782615A4/en not_active Ceased
- 1995-09-18 PL PL95319294A patent/PL319294A1/xx unknown
- 1995-09-18 JP JP8511012A patent/JPH10506014A/ja active Pending
- 1995-09-18 HU HU9702290A patent/HUT77337A/hu unknown
- 1995-09-18 SK SK358-97A patent/SK35897A3/sk unknown
- 1995-09-18 CZ CZ97875A patent/CZ87597A3/cs unknown
- 1995-09-18 NZ NZ293461A patent/NZ293461A/en unknown
- 1995-09-18 CA CA002200582A patent/CA2200582C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-18 RU RU97106340/13A patent/RU2177999C2/ru active
- 1995-09-18 AU AU35918/95A patent/AU694269B2/en not_active Expired
- 1995-09-18 BR BR9509076A patent/BR9509076A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-09-18 WO PCT/US1995/011859 patent/WO1996009375A1/en not_active Application Discontinuation
-
1997
- 1997-03-18 BG BG101338A patent/BG101338A/xx unknown
- 1997-03-21 NO NO971347A patent/NO971347L/no not_active Application Discontinuation
- 1997-03-21 FI FI971203A patent/FI121507B/fi not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-03-08 US US09/521,526 patent/US6290965B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO971347D0 (no) | 1997-03-21 |
| FI971203A (fi) | 1997-03-21 |
| EP0782615A4 (en) | 2001-08-22 |
| US6290965B1 (en) | 2001-09-18 |
| JPH10506014A (ja) | 1998-06-16 |
| BG101338A (en) | 1997-10-31 |
| RU2177999C2 (ru) | 2002-01-10 |
| PL319294A1 (en) | 1997-08-04 |
| NZ293461A (en) | 1998-04-27 |
| EP0782615A1 (en) | 1997-07-09 |
| BR9509076A (pt) | 1998-07-14 |
| FI971203A0 (fi) | 1997-03-21 |
| AU694269B2 (en) | 1998-07-16 |
| SK35897A3 (en) | 1998-02-04 |
| WO1996009375A1 (en) | 1996-03-28 |
| FI121507B (fi) | 2010-12-15 |
| NO971347L (no) | 1997-05-21 |
| MX9702209A (es) | 1997-07-31 |
| CA2200582C (en) | 2007-03-27 |
| CZ87597A3 (cs) | 1998-01-14 |
| AU3591895A (en) | 1996-04-09 |
| CA2200582A1 (en) | 1996-03-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU615159B2 (en) | Determined dna sequences derived from a papillomavirus genome, their uses for in vitro diagnostic purposes and the production of antigenic compositions | |
| US5840306A (en) | DNA encoding human papillomavirus type 18 | |
| US5820870A (en) | Recombinant human papillomavirus type 18 vaccine | |
| JP3859696B2 (ja) | 乳頭腫ウイルスｈｐｖ３９のゲノムから誘導されるｄｎａ配列、ｉｎ ｖｉｔｒｏ診断及び免疫原組成物の生成への前記配列の応用 | |
| HUT77337A (hu) | Humán papillomavírus 6A-típusát kódoló DNS | |
| JPH08322580A (ja) | 乳頭腫ウイルス型特異的抗体 | |
| PT1021547E (pt) | Formulações da vacinas com capsomeros do vírus papiloma e métodos de utilização | |
| BRPI0414845B1 (pt) | mólecula de ácido nucleico, vetor, célula de levedura, partícula semelhante a vírus, bem como método para produzir a dita partícula semelhante a vírus | |
| EP0817851B1 (en) | Dna encoding human papilloma virus type 18 | |
| RU2161651C2 (ru) | Очищенные белки вируса папилломы | |
| US6395512B1 (en) | DNA coding for a peptide of a papilloma virus main capside protein and use thereof | |
| US6555345B2 (en) | Papilloma viruses, agents for detecting them and for treating diseases caused by such viruses | |
| US6488935B1 (en) | Papilloma viruses, products for the detection thereof as well as for treating diseases caused by them | |
| JP2001505767A (ja) | パピローマウイルス、該ウイルスの検出用試薬および該ウイルスにより引き起こされる疾患の治療用試薬 | |
| US6908615B1 (en) | DNA encoding human papilloma virus type 18 | |
| US6589532B1 (en) | Papilloma viruses, means for the detection thereof and therapy for diseases caused thereby | |
| MXPA97002209A (en) | Dna that codifies for type human papilloma viruses | |
| MXPA97007208A (en) | Desoxirribonucleico acid that codifies for human papilloma virus type 18 and use of my | |
| JPH1042875A (ja) | ハムスター口腔パピローマウイルス蛋白の遺伝子 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFC4 | Cancellation of temporary protection due to refusal |