JPH11512925A - パピローマウイルス、その検出用製品及びそれにより生ずる疾病の治療用製品 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 パピローマウイルス主要カプシド蛋白質のペプチドをコードするＤＮＡが開示される。該ＤＮＡを含有するパピローマウイルスゲノム、該パピローマウイルスゲノムによりコードされる蛋白質及びウイルス様粒子、それらに対する抗体並びに診断、治療及びワクチン接種におけるそれらの使用も開示される。

Description

【発明の詳細な説明】パピローマウイルス、その検出用製品及びそれにより生ずる疾病の治療用製品 本発明は、パピローマウイルス主要(Haupt)カプシド蛋白質のペプチドをコー ドするＤＮＡに関する。さらに、本発明は、かかるＤＮＡを含有するパピローマ ウイルスゲノムを扱う。また、本発明は、パピローマウイルスゲノムによりコー ドされる蛋白質及びウイルス様粒子並びにそれらに対する抗体及び診断、治療及 びワクチン接種のためのそれらの使用に関する。 パピローマウイルスがヒト及び動物の上皮に感染することは公知である。ヒト パピローマウイルス（本明細書では以後、ＨＰウイルスと称する）は、性器帯に おけるいぼ、コンジローム等の良性の上皮新生物並びに皮膚及び子宮の癌等の悪 性上皮新生物で見出される（ツアー ハウゼン（zur Hausen，H.）、Cancer Res earch 49，(1989)，4677-4681 頁を参照）。また、ＨＰウイルスは、気道におけ る悪性腫瘍の生育にも関与している（ツアー ハウゼン（zur Hausen，H.）、Ca ncer Research 36，(1976)，530 頁を参照）。ほかにも、ＨＰウイルスは、少な くとも連帯して肺の偏平上皮癌の生育の原因であると思われる（シルジェネン（ Syrjanen，K.J.）、Lung 158，(1980)，131-142頁を参照）。 パピローマウイルスは、環状の約７９００ｂｐの二本鎖ＤＮＡ分子が存在する エンベロープを持たない二十面体のカプシドを有する。該カプシドは、主要カプ シド蛋白質（Ｌ１）及び少量(Neben)カプシド蛋白質（Ｌ２）からなる。共に発 現した両蛋白質又は単独で発現したＬ１は、イン・ビトロでウイルス様粒子形成 を生ずる（キルンバウエル(Kirnbauer，R.)ら、Journal of Virology，(1993)， 6929-6936頁を参照）。 パピローマウイルスは、単層細胞培養では増殖できない。従って、それらの特 徴付けは、極めて困難であり、パピローマウイルスの検出は、すでに重要な問題 を引き起こしている。このことは、特に、皮膚癌におけるパピローマウイルスに 適用される。現在まで、それらの確かな検出および従ってそれに対してとられる 十分計画的な工程は可能ではない。 従って、本発明の目的は、特に、皮膚癌においてパピローマウイルスが検出可 能な製品を提供することにある。さらに、製品は、これらのパピローマウイルス に対して治療上の工程がとられ得るように提供される。 本発明によれば、このことは、請求の範囲における主題を提供することにより 達成される。 従って、本発明の主題は、パピローマウイルス主要カプシド蛋白質（Ｌ１）の ペプチドをコードするＤＮＡに関するものであって、該ペプチドは、図１、図２ 、図３、図４、図５、図６、図７、図８、図９若しくは図１０のアミノ酸配列又 は１個以上のアミノ酸によりそれらとは異なるアミノ酸配列を含むものである。 本発明のさらなる主題は、パピローマウイルス主要カプシド蛋白質のペプチド をコードするＤＮＡに関するものであって、該ＤＮＡは、図１、図２、図３、図 ４、図５、図６、図７、図８、図９若しくは図１０の塩基配列又は１個以上の塩 基対によりそれらとは異なる塩基配列を含むものである。 図１は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生するアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、１９９５年７月１ １日にＤＳＭ１０１０４のもとに、ＤＳＭ（Deutsche Sammlung von Mikroorgan ismen und Zellkulturen）にプラスミドＶＳ１９−６として寄託された。 図２は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生するアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、１９９５年７月１ １日にＤＳＭ１００９６のもとに、ＤＳＭにプラスミドＶＳ２００−１として寄 託された。 図３は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生するアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、１９９５年７月１ １日にＤＳＭ１００９７のもとに、ＤＳＭにプラスミドＶＳ２０１−１として寄 託された。 図４は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 およびそれから派生するアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、１９９５年７月１ １日にＤＳＭ１００９８のもとに、ＤＳＭにプラスミドＶＳ２０２−８として寄 託された。 図５は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 及びそれから派生するアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、１９９５年７月１１ 日にＤＳＭ１００９９のもとに、ＤＳＭにプラスミドＶＳ２０３−２として寄託 された。 図６は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 及びそれから派生するアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、１９９５年７月１１ 日にＤＳＭ１０１００のもとに、ＤＳＭにプラスミドＶＳ２０４−４として寄託 された。 図７は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 及びそれから派生するアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、１９９５年７月１１ 日にＤＳＭ１０１０１のもとに、ＤＳＭにプラスミドＶＳ２０５−１として寄託 された。 図８は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 及びそれから派生するアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、１９９５年７月１３ 日にＤＳＭ１０１０９のもとに、ＤＳＭにプラスミドＶＳ２０６−２として寄託 された。 図９は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配列 及びそれから派生するアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、１９９５年７月１１ 日にＤＳＭ１０１０２のもとに、ＤＳＭにプラスミドＶＳ２０７−２２として寄 託された。 図１０は、パピローマウイルスのＬ１のペプチドをコードするＤＮＡの塩基配 列及びそれから派生するアミノ酸配列を示す。このＤＮＡは、１９９５年７月１ １日にＤＳＭ１０１０３のもとに、ＤＳＭにプラスミドＶＳ２０８−１として寄 託された。 前記ＤＮＡは、公知のパピローマウイルスに関して以下の配列ホモロジーを有 する。 図１のＤＮＡ： ＨＰウイルス６５に関して６９．１％ 図２のＤＮＡ： ＨＰウイルス２４に関して８０．７％ 図３のＤＮＡ： ＨＰウイルス４８に関して６９．４％ 図４のＤＮＡ： ＨＰウイルス４８に関して６６．３％ 図５のＤＮＡ： ＨＰウイルス６５に関して６６．９％ 図６のＤＮＡ： ＨＰウイルス６５に関して６６．４％ 図７のＤＮＡ： ＨＰウイルス４に関して６９．１％ 図８のＤＮＡ： ＨＰウイルス４８に関して６８．７％ 図９のＤＮＡ： ＨＰウイルス４８に関して７６．６％ 図１０のＤＮＡ： ＨＰウイルス６８に関して８１．８％ 本発明によれば、前記ＤＮＡは、ベクター及び発現ベクターそれぞれに存在す ることができる。当業者であれば、その実施例に精通している。大腸菌に対する 発現ベクターの場合、それらは、例えば、ｐＧＥＭＥＸ、ｐＵＣ誘導体、ｐＧＥ Ｍ−Ｔ及びｐＧＥＸ−２Ｔである。酵母における発現に対しては、例えば、ｐＹ １００及びＹｃｐａｄ１が挙げられ、一方、動物細胞における発現に対しては、 例えば、ｐＫＣＲ、ｐＥＦ−ＢＯＳ、ｃＤＭ８及びｐＣＥＶ４が示される。 当業者であれば、発現ベクターに存在する前記ＤＮＡを発現させるために適す る細胞を公知である。かかる細胞の例としては、大腸菌株ＨＢ１０１、ＤＨ１、 χ１７７６、ＪＭ１０１、ＪＭ１０９及びＸＬ１−Ｂｌｕｅ、酵母株サッカロミ セス セレビシエ並びに動物細胞Ｌ、ＮＨ−３Ｔ３、ＦＭ３Ａ、ＣＨＯ、ＣＯＳ 、Ｖｅｒｏ及びＨｅＬａが含まれる。 当業者であれば、前記ＤＮＡを発現ベクターに挿入されるべき方法を公知であ る。また、当業者であれば、前記ＤＮＡが融合蛋白質の形で発現できるように、 前記ＤＮＡを別の蛋白質及びペプチドそれぞれをコードするＤＮＡと連結させて 挿入できるという事実に精通している。 本発明のさらなる主題は、前記ＤＮＡを含有するパピローマウイルスゲノムに 関する。「パピローマウイルスゲノム」という用語は、不完全ゲノム、即ち、前 記ＤＮＡを含有するパピローマウイルスゲノムの断片をも含むものである。これ は、例えば、Ｌ１をコードするＤＮＡ又はその一部であってもよい。 前記パピローマウイルスゲノムの提供のためには、通常の方法を使用すること ができ、該方法は、下記工程： （ａ）上皮新生物の生検材料からの全ＤＮＡの単離工程、 （ｂ）工程（ａ）の全ＤＮＡに含まれるパピローマウイルスゲノムを検出するた めの、工程（ａ）の全ＤＮＡと前記ＤＮＡとのハイブリダイゼーション工程、 （ｃ）工程（ａ）のパピローマウイルスゲノムを含む全ＤＮＡのベクター中のク ローニング及び任意に、得られたクローンのサブクローニング工程、 を含み、すべての工程は、通常のＤＮＡ組み換え技術に由来するものである。 細胞ＤＮＡの単離、ハイブリダイゼーション及びクローニングに関する限り、 補足によりサンブルック(Sambrook)ら、Molecular Cloning，A Laboratory Manu al，第２版、Cold Spring Harbor Laboratory(1989)が参照される。 「上皮新生物」という用語は、ヒト及び動物におけるすべての上皮新生物を含 む。かかる新生物の例は、性器帯におけるいぼ、コンジローム及び皮膚癌である 。前記パピローマウイルスゲノムを単離するためには、後者を用いることが好ま しい。 「ベクター」という用語は、染色体ＤＮＡ及び染色体外ＤＮＡそれぞれをクロ ーニングするために適するいかなるベクターをも含む。かかるベクターの例は、 ｐＷＥ１５及びＳｕｐｅｒ Ｃｏｓ１等のコスミド並びにλＺＡＰ ｅｘｐｒｅ ｓｓベクター、λＺＡＰIIベクター及びλｇｔ１０ベクター等のλファージの如 きファージである。本発明の場合において、λファージを用いることが好ましい 。前記ベクターは公知であり、ストラタジーン(Stratagene)社より入手可能であ る。 本発明のパピローマウイルスゲノムは、染色体ＤＮＡに組み込まれた型で存在 してもよいし、染色体外様式で存在してもよい。当業者であれば、その解明に供 する方法に精通している。また、当業者であれば、パピローマウイルスゲノムの クローニングのために最適の制限酵素の発見に供する方法も公知である。当業者 であれば、公知のパピローマウイルスのゲノムにより正しく判断するであろう。 特に、当業者であれば、前記ＨＰウイルスに対応する注意を払うであろう。 ＶＳ１９−６に関するパピローマウイルスゲノムの提供は、実施例により記載 される。この目的のために、偏平上皮細胞癌の生検材料から全ＤＮＡを単離し、 ＢａｍＨＩで開裂し、アガロースゲル中で電気泳動により分離する。次いで、ニ トロセルロース膜にＤＮＡを転写させるために、該アガロースゲルをブロッティ ング法に供する。図１のＤＮＡを標識試料として使用し、任意にＨＰウイルス６ ５のＤＮＡと組み合わせたハイブリダイゼーション法に該膜を挿入する。全ＤＮ Ａに存在するパピローマウイルスＤＮＡとのハイブリダイゼーションが得られる 。 さらに、ＢａｍＨＩで開裂させた前記全ＤＮＡを、λファージにクローニング する。対応するクローン、即ち、パピローマウイルスＤＮＡを含むクローンを、 図１のＤＮＡ、任意にＨＰウイルス６５のＤＮＡと組み合わせたハイブリダイゼ ーションにより同定する。次いで、パピローマウイルスゲノムＶＳ１９−６−Ｇ を含むクローンを得るために、これらのクローンの挿入物をプラスミドベクター 中のさらなるクローニングに供する。シーケンスにより該ゲノムを確認する。 同様に、さらなるパピローマウイルスゲノムが提供される。それらは、提供の ために使用されるＤＮＡに従って、即ち、それぞれ、ＶＳ２００−１−Ｇ、ＶＳ ２０１−１−Ｇ、ＶＳ２０２−８−Ｇ、ＶＳ２０３−２−Ｇ、ＶＳ２０４−４− Ｇ、ＶＳ２０５−１−Ｇ、ＶＳ２０６−２−Ｇ、ＶＳ２０７−２２−Ｇ及びＶＳ ２０８−１−Ｇと称される。 本発明のさらなる主題は、前記パピローマウイルスゲノムによりコードされる 蛋白質に関する。かかる蛋白質は、例えば、主要カプシド蛋白質（Ｌ１）又は少 量カプシド蛋白質（Ｌ２）である。常法により前記蛋白質を調製する。パピロー マウイルスゲノムＶＳ１９−６−ＧのＬ１及びL２の調製は、それぞれ、実施例 により記載される。この目的のために、図１のＤＮＡに関与するＨＰウイルス６ ５を用いる。全配列及び蛋白質をコードする個々のＤＮＡ領域の位置は、それと の関係において公知である。これらのＤＮＡは、両ゲノムの並行制限開裂及びそ の後の各Ｌ１及びL２をコードするＤＮＡに関する種々の断片とのハイブリダイ ゼーションにより、パピローマウイルスゲノムＶＳ１９−６−Ｇ上で同定される 。それらをシーケンスにより確認する。Ｌ１をコードするＤＮＡをＶＳ１９−６ −Ｇ−ＬＩＤＮＡと称し、Ｌ２をコードするＤＮＡをＶＳ１９−６−Ｇ−Ｌ２Ｄ ＮＡと称する。 さらに、各Ｌ１及びＬ２をコードするＤＮＡを発現ベクターに挿入する。それ らの例としては、前記大腸菌、酵母、動物細胞に対するものが挙げられる。この 関係において、補足により大腸菌での発現に関してベクターｐＧＥＸ−２Ｔに対 して参照がなされる（キルンバウエル(Kirnbauer，R.）ら、前述を参照）。ＶＳ １９−６−Ｇ−ＬＩＤＮＡ及びＶＳ１９−６−Ｇ−Ｌ２ＤＮＡを挿入し、ｐＧＥ Ｘ−２Ｔ−ＶＳ１９−６−Ｇ−Ｌ１及びｐＧＥＸ−２Ｔ−ＶＳ１９−６−Ｇ−Ｌ ２をそれぞれ得る。大腸菌を形質転換後、これらの発現ベクターは、それぞれ、 グルタチオンＳトランスフェラーゼＬ１融合蛋白質及びグルタチオンＳトランス フェラーゼＬ２融合蛋白質を発現する。常法により蛋白質を精製する。 前記各Ｌ１及びＬ２をコードするＤＮＡのさらなる発現のために、バキュロウ イルス系及びワクシニアウイルス系がそれぞれ挙げられる。この目的のために使 用可能な発現ベクターは、バキュロウイルス系に対しては、例えば、ｐＥＶ ｍ ｏｄ．及びＰＳｙｎｗｔＶＩ^-である（キルンバウエル(Kirnbauer，R.)ら、前述 を参照）。ワクシニアウイルス系に対しては、ワクシニアウイルス「初期」プロ モーターを有するベクター（ｐ７．５ｋ）及び「後期」プロモーターを有するベ クター（Ｐｓｙｎｔｈ、ｐｌｌＫ）がそれぞれ具体的に挙げられる（ハーゲンジ ー(Hagensee，M.，E.)ら、Journal of Virology(1993)，315-322頁を参照）。本 願の場合、バキュロウイルス系が好ましい。前記各Ｌ１及びＬ２をコードするＤ ＮＡをｐＥＶ ｍｏｄ．に挿入し、ｐＥＶｍｏｄ．−ＶＳ１９−６−Ｇ−Ｌ１及 びｐＥＶｍｏｄ．−ＶＳ１９−６−Ｇ−Ｌ２をそれぞれ得る。 前記発現ベクターそれ自体又は両発現ベクターを共同で、ＳＦ−９昆虫細胞の 感染後にウイルス様粒子の生成となる。前者の場合、かかる粒子はＬ１蛋白質を 含むが、後者の場合、該粒子はＬ１蛋白質に加え、Ｌ２蛋白質を含む。 後者の場合のウイルス様粒子は、前記ＶＳ１９−６−Ｇ−ＬＩＤＮＡ及びＶＳ １９−６−Ｇ−Ｌ２ＤＮＡをともに発現ベクターｐＳｙｎｗｔＶＩ^-に挿入し、 得られたｐＳｙｎｗｔＶＩ−ＶＳ１９−６−Ｇ−Ｌ１／Ｌ２をＳＦ−９昆虫細胞 の感染に用いることによっても得られる。前記ウイルス様粒子を常法により精製 する。それらもまた、本発明の主題を表す。 本発明のさらなる主題は、前記蛋白質及びウイルス様粒子それぞれに対する抗 体に関する。その調製は、常法によりなされる。それは、ＶＳ１９−６−ＧのＬ １を含むウイルス様粒子に対する抗体の調製に関する実施例により記載される。 この目的のために、ウイルス様粒子をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下注射する。この 注射を３週間隔毎に繰り返す。最終注射の約２週間後、抗体を含む血清を常法に より単離して試験する。 好ましい態様において、該抗体は、モノクローナル抗体である。その調製のた めには、前記４回目の注射後マウスから脾臓細胞を除去し、常法によりミエロー マ細胞と融合させる。公知の方法により、さらなるクローニングも行なう。 本発明により、特に、皮膚癌におけるパピローマウイルスの検出が可能である 。この目的のために、本発明のＤＮＡそれ自体又はさらなるＤＮＡを含む場合に 用いることができる。後者は、パピローマウイルスゲノム又はその一部であって もよい。 本発明は、先の未知のパピローマウイルスの提供も可能にする。それらは、特 に、皮膚癌に見出される。また、本発明は、これらのパピローマウイルスに由来 する蛋白質及びウイルス様粒子を提供する。さらに、これらの蛋白質及び粒子そ れぞれに対する抗体が提供される。 本発明は、パピローマウイルス疾患の場合における診断及び治療工程をとるこ とも可能にする。さらに、本発明は、パピローマウイルス感染に対するワクチン の確立の可能性を提供する。従って、本発明は、パピローマウイルス研究の分野 における成功を意味する。 実施例により本発明を説明する。実施例１：パピローマウイルスゲノムＶＳ１９−６−Ｇの同定 免疫抑制されたヒトの偏平上皮細胞癌の生検材料から、全ＤＮＡを単離する。 このＤＮＡの１０μｇを制限酵素ＢａｍＨＩで開裂し、０．５％アガロースゲル 中で電気泳動により分離する。同時に、開裂させなかった前記ＤＮＡの１０μｇ も分離する。該アガロースゲルをブロッティング法に供し、ＤＮＡをアガロース ゲルからニトロセルロース膜へ転写させる。該膜を、図１の前記ＤＮＡをＰ³²標 識試料としてのＨＰウイルス６５−ＤＮＡと組み合わせて用いるハイブリダイゼ ーション法に使用する。ブロットされたＤＮＡとのハイブリダイゼーションが得 られる。 ＤＮＡ組み換え技術分野における熟練者であれば、前記方法に精通している。 補足により、サンブルックらの前述が参照される。実施例２：パピローマウイルスゲノムＶＳ１９−６−Ｇのクローニング 実施例１から得られた生検ＤＮＡを、制限酵素ＢａｍＨＩで開裂する。得られ た断片を、ＢａｍＨＩで開裂させて脱リン酸化させたベクターλＺＡＰ ｅｘｐ ｒｅｓｓも存在するリガーゼ反応に使用する。得られた組み換えＤＮＡ分子を、 バクテリオファージにパッケージングし、細菌感染に使用する。これらの工程の ために、ストラタジーン社により提供されるＺＡＰ ｅｘｐｒｅｓｓベクターキ ットを使用する。次いで、得られたファージプラークを、実施例１で使用される 図１のＰ³²標識ＤＮＡをＰ³²標識ＨＰウイルス６５−ＤＮＡと組み合わせて用い るハイブリダイゼーション法に供する。対応するファージプラークとのハイブリ ダイゼーションが得られる。そこからＶＳ１９−６−ＧのＢａｍＨＩ断片を単離 し、ＢａｍＨＩで開裂させて脱リン酸化させたプラスミドベクター、ｐＢｌｕｅ ｓｃｒｉｐｔとともにさらなるリガーゼ反応に使用する。得られた組み換えＤＮ Ａ分子を、細菌、大腸菌ＸＬＩ−Ｂｌｕｅの形質転換に使用する。制限開裂及び 前記ＤＮＡ試料とのハイブリダイゼーションそれぞれにより、パピローマウイル スゲノムＶＳ１９−６−Ｇを含む細菌のクローンが同定される。この細菌クロー ンのプラスミドを、ｐＢｌｕｅ−ＶＳ１９−６−Ｇと称する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 7/00 7/00 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｐ 21/02 21/08 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:92） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 デ ヴィリエルス−ツアー ハウゼン，エ テル−ミケレ ドイツ連邦共和国 ヒルシュベルク デー −69493 アム シャイブリンク ６ (72)発明者 ツアー ハウゼン，ハラルド ドイツ連邦共和国 ヒルシュベルク デー −69493 アム シャイブリンク ６

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．パピローマウイルス主要カプシド蛋白質のペプチドをコードするＤＮＡであ って、該ペプチドが、図１、図２、図３、図４、図５、図６、図７、図８、図９ 若しくは図１０のアミノ酸配列又は１個以上のアミノ酸がそれらとは異なるアミ ノ酸配列を含んでなるＤＮＡ。 ２．パピローマウイルス主要カプシド蛋白質のペプチドをコードするＤＮＡが、 図１、図２、図３、図４、図５、図６、図７、図８、図９若しくは図１０の塩基 配列又は１個以上の塩基対がそれらとは異なる塩基配列を含んでなることを特徴 とする請求項１記載のＤＮＡ。 ３．請求項１又は２記載のＤＮＡを含有するパピローマウイルスゲノム。 ４．下記工程： （ａ）上皮新生物の生検材料からの全ＤＮＡの単離工程、 （ｂ）工程（ａ）の全ＤＮＡに含まれるパピローマウイルスゲノムを検出するた めの、工程（ａ）の全ＤＮＡと請求項１又は２記載のＤＮＡとのハイブリダイゼ ーション工程、並びに （ｃ）工程（ａ）のパピローマウイルスゲノムを含む全ＤＮＡのベクター中のク ローニング及び任意に、得られたクローンのサブクローニング工程、 を含み、すべての工程は、通常のＤＮＡ組み換え技術に由来するものである、請 求項３記載のパピローマウイルスゲノムの提供方法。 ５．請求項３記載のパピローマウイルスゲノムによりコードされる蛋白質。 ６．パピローマウイルス主要カプシド蛋白質であることを特徴とする、請求項５ 記載の蛋白質。 ７．パピローマウイルス少量カプシド蛋白質であることを特徴とする、請求項５ 記載の蛋白質。 ８．請求項５〜７記載の蛋白質をコードするＤＮＡを含んでなる発現ベクター。 ９．請求項８記載の発現ベクターを含有する形質転換体。 １０．好適な条件下での請求項９記載の形質転換体の培養工程を含む、請求項５ 〜７いずれか記載の蛋白質の調製方法。 １１．請求項６記載のパピローマウイルス主要カプシド蛋白質を含んでなるウイ ルス様粒子。 １２．請求項７記載の少量カプシド蛋白質をさらに含んでなる、請求項１１記載 のウイルス様粒子。 １３．請求項５〜７いずれか記載の蛋白質に対する抗体。 １４．請求項１１又は１２記載のウイルス様粒子に対する抗体。 １５．診断用試薬としての請求項１又は２記載のＤＮＡの使用。 １６．診断、治療及び／又はワクチン接種用試薬としての請求項５〜７いずれか 記載の蛋白質の使用。 １７．診断、治療及び／又はワクチン接種用試薬としての請求項１１又は１２記 載のウイルス様粒子の使用。 １８．診断及び／又は治療用試薬としての請求項１３又は１４記載の抗体の使用 。