JP2001502292A

JP2001502292A - Ｐｄｇｆアンタゴニストとしての４−〔２−（ｎ−２−カルボキサミドインドール）アミノエチル〕ベンゼンスルホンアミドまたはスルホニル尿素

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Publication number: JP2001502292A
Application number: JP09505130A
Authority: JP
Inventors: イー．ハート，チャールズ; ダブリュオーメ，マーク; エム．モイニハン，クリステン
Original assignee: ザイモジェネティクス，インコーポレイティド
Priority date: 1995-06-30
Filing date: 1996-05-29
Publication date: 2001-02-20
Anticipated expiration: 2016-05-29
Also published as: EP0835115A1; US5731326A; ES2217313T3; DE69632402D1; AU5938696A; JP3195363B2; WO1997002036A1; DK0835115T3; EP0835115B1; ATE265855T1; DE69632402T2

Abstract

(57)【要約】霊長類を含む哺乳類の血管系において内膜過形成を抑制する方法が開示される。該方法は、４−〔２−（Ｎ−２−カルボキサミドインドール）アミノエチル〕ベンゼンスルホンアミドまたはスルホニル尿素のような非ペプチド性PDGFアンタゴニストを哺乳類に投与することを含んで成る。この方法は、例えば、血管形成術、動脈内膜切除術、整腹アテローム切除術または血管移植片の吻合に起因する血管損傷による、内膜過形成を減少させるのに有用である。非ペプチド性PDGFアンタゴニストは、所望によりヘパリンと協同して投与することができ、よって非ペプチド性PDGFアンタゴニストとヘパリンの協同投与は内膜過形成を抑制するのに併用すると有効である。

Description

【発明の詳細な説明】 PDGFアンタゴニストとしての４−〔２−（Ｎ−２−カルボキサミドインドール）アミノエチル〕ベンゼンスルホンアミドまたはスルホニル尿素本出願は、1995年６月30日提出の米国仮出願第60/000,743号の優先権を主張する。発明の背景血管壁中の平滑筋細胞（ＳＭＣ）の増殖は、アテローム硬化症によるか、血管再建後かまたは他の血管損傷に関連した血管病変の形成にかかわる重要な現象である。例えば、アテローム硬化症の治療はしばしば、アテローム硬化斑をカテーテル挿入によって圧迫もしくは除去し（血管形成術）、切開によって動脈壁から取り除き（動脈内膜切除術）、または自然もしくは人工移植片を使ってバイパス形成するという外科的手法である、血管形成術、動脈内膜切除術、整腹アテローム切除術またはバイパス移植術による、閉塞血管の清浄化を含む。これらの手法は、血管内皮を除去し、その下にある内膜層を破壊し、そして内側のＳＭＣを致死せしめる。この損傷の後に、内側のＳＭＣの増殖と内膜への移動が起こり、それに細胞外マトリックスの過剰な沈着が付随する。この病変発生は、特徴的には外傷後最初の数週間以内で且つ６カ月まで起こり、そして上に内皮層が再形成されると止まる。ヒトの場合、それらの病変は細胞約20％と細胞外マトリックス約 80％から成る。血管形成術、動脈内膜切除術またはバイパス移植術により処置した患者の約30 ％またはそれ以上において、血栓症および／または内膜中のＳＭＣ増殖か血管の再閉塞を引き起こし、その結果として再形成術が失敗に終わる。この手術後の血管の閉塞は再狭窄として知られている。同様なＳＭＣ増殖過程が臓器移植片においても観察されており、これは移植片アテローム硬化症および臓器機能不全の一因となり得る。この過程の内膜肥厚は、移植した臓器のみが関係する。血小板分裂促進因子（マイトジェン）、例えは血小板由来増殖因子（PDGF）はアテローム硬化斑の発生に何らかの役割を果たすと推測されている（Ross他，Ce ll 46:155-169，1986；Harker，Am．J ．Cardiol． 60:20B-28B，1987）。硬化斑形成の１つの提唱された機序は、内皮露出部位における、ＳＭＣ増殖を剌激する増殖因子の血小板による放出である（RossおよびGlomset，N ．Eng．J．Med. 2 95 :369-377，420-425，1976；Ross，Arteriosclerosis 1:293-311，1981）。Moo re他（Thrombos ．Haemostas．（Stuttg.）35:70，1976）とFrledman他（J ．Clin ．Invest. 60:1191-1201，1977）は、内在カテーテル損傷モデルを使って、抗血小板血清の投与により誘導された長期血小板減少による、ウサギ動脈における実験的に導入した内膜損傷発生の抑制を報告した。ＳＭＣがオートクリン機構を通して損傷形成を刺激するPDGFを自己生産し得るとも仮定されている（Ross他，前掲；Walker他，Proc ．Natl．Acad．Sci．USA 83:7311-7315，1986）。Fingerle 他（Proc ．Natl．Acad．Sci．USA 86:8412-8416，1989）は血小板減少症ラットにおいて内膜損傷形成を研究し、そして血小板がバルーン損傷後の内膜ＳＭＣ増殖に役割を果たすのではなくて内膜中へのＳＭＣの移動を調節することかできると結論づけた。血小板は現在、PDGF、表皮増殖因子（ＥＧＦ）、形質転換増殖因子αおよひβ（ＴＧＦαおよびＴＧＦβ）、インスリン様増殖因子Ｉ（ＩＧＦ− Ｉ）および血小板由来表皮増殖因子をはじめとする多数の増殖因子、並びに幾つかの化学誘引分子を放出することか知られている。ある実験はPDGFを病変発生に伴う過程に関係づけたけれども、霊長類での内膜過形成の病因は不明のままである。血管形成術または動脈内膜切除術によるアテローム硬化斑の除去は限定された効果を有し、処置した血管の再狭窄またはバイパス移植片の狭窄の効果的な治療法はまだ開発されていない。従って、血管壁における高ＳＭＣ病変（バルーンカテーテル挿入、動脈内膜切除、血管内ステント据付、整腹アテローム切除術、並びに血管移植、臓器移植およびカテーテル挿入による損傷のような血管損傷後の血管の狭窄を含む）の発生を削減または防止する方法が当業界で要望されている。本発明はそういった方法を提供し、且つ別の関連した要望を満たす。発明の要約本発明は、哺乳類の血管系における内膜過形成を抑制する方法、および血小板由来増殖因子（PDGF）活性を抑制する方法に向けられる。本明細書中で使用する時、アルキルは飽和非環式炭化水素基を意味する。アルコキシは少なくとも１つの酸素原子を含む飽和非環式炭化水素基を意味する。モノまたはポリシクロアルキルは、１つ（モノ）または複数（ポリ）の環を有する飽和炭化水素基を意味する。橋架モノまたはポリシクロアルキルは、分子の２つの異なる部分を連結する、化学結合、単一原子または複数原子の鎖から成る１個もしくは複数個の橋を有するモノまたはポリシクロアルキルを意味する。複素環は、少なくとも１つの環原子か炭素原子でない環状化合物の基を意味する。本発明は、式Ｉの４−〔２−（Ｎ−２−カルボキサミドインドール）アミノエチル〕ベンゼンスルホンアミドまたはスルホニル尿素の抗過形成性有効量を投与することを含んで成る、哺乳類の血管系における内膜過形成を抑制する方法を提供する：〔上式中、Ｒ₁，Ｒ₄およびＲ₅は個別にＨ，Ｆ，Cl，Br，-CF₃，または炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルコキシであり、Ｒ₂およびＲ₃は個別にＨまたは炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルであり；Ｒ₆はＨ、炭素原子数１〜18の直鎖もしくは分技鎖アルキル、または（ここでｎは１または２であり；各Ｘは個別にＣ，Ｎ，ＮＨ，ＯまたはＳであり、ただし少なくとも１個、好ましくは２個のＸがＣであり；Ｒ₉，Ｒ₁₀およびＲ₁ ₁ は個別にＨ，Ｆ，Br，Cl，-CF₃，または炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルコキシである）であり；Ｒ₇およびＲ₈は個別にＨ、炭素原子数１〜18の直鎖もしくは分枝鎖アルキルまたは-CONH-Ｒ₁₂であるか、あるいはＲ₇とＲ₈はそれらを結合しているＮ原子と一緒になって、環原子数３〜８の置換または非置換複素環を形成し；Ｒ₁₂はＨ、（ここでＹは窒素であり；Ｒ₁₃およびＲ₁₄は個別にＨ、炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルであるか、またはＲ₁₃とＲ₁₄はそれらを結合しているＮ原子と一緒になって、環原子数３〜８の置換もしくは非置換複素環を形成し；Ｚは炭素であり；そしてＲ₁₅，Ｒ₁₆およびＲ₁₇は個別にＨまたは炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルであり、あるいはＲ₁₅とＲ₁₆、Ｒ₁₆とＲ₁₇、またはＲ₁₅とＲ₁₇がＺと一緒になって炭素原子数３〜８の置換もしくは非置換モノシクロアルキルを形成し、あるいはＲ₁₅，Ｒ₁₆およびＲ₁₇がＺと一緒になって炭素原子数７〜14の置換もしくは非置換モノもしくはポリシクロアルキルまたは炭素原子数６〜14の置換もしくは非置換橋架モノもしくはポリシクロアルキルを形成する）である〕。本発明の一態様では、Ｒ₁，Ｒ₄およびＲ₅は個別にＨ、メチルまたはメトキシであり；Ｒ₂およびＲ₃は個別にＨまたはメチルであり；Ｒ₆は炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルコキシ、または（ここでｎは１または２であり；各Ｘは個別にＣ，ＳおよびＮから成る群より選ばれ、ただし１個、好ましくは２個のＸがＣであり；Ｒ₉，Ｒ₁₀およびＲ₁₁は個別にＨ、メチルまたはメトキシである）であり；Ｒ₇およびＲ₈は個別にＨ、炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルまたは-CONH-Ｒ₁₂であり；Ｒ₁₂はＨ、（ここでＹは窒素であり；Ｚは炭素であり；Ｒ₁₃およびＲ₁₄はＹと一緒になって環原子数５〜６の複素環を形成し；そしてＲ₁₅とＲ₁₆、Ｒ₁₆とＲ₁₇、またはＲ₁₅ とＲ₁₇がＺと一緒になって炭素原子数５〜６の置換もしくは非置換モノシクロアルキルを形成し、あるいはＲ₁₅，Ｒ₁₆およびＲ₁₇がＺと一緒になって炭素原子数９〜10の置換もしくは非置換モノもしくはポリシクロアルキルまたは炭素原子数８〜10の置換もしくは非置換橋架モノもしくはポリシクロアルキルを形成する）である。別の関連する態様では、Ｒ₇とＲ₈はそれらを結合しているＮと一緒になって環原子数６以下の非置換の複素環を形成する。別の態様では、Ｒ₁₃とＲ₁₄はＹと一緒になって次の成分（ここでＹは窒素であり、ｎは１または２であり、そしてＲ₁₈およびＲ₁₉は個別にＨ，Ｆ，Br，Cl，-CF₃，または炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルコキシである）を形成する。別の態様では、Ｒ₁₅とＲ₁₆、Ｒ₁₆とＲ₁₇、またはＲ₁₅とＲ₁₇がＺと一緒になって次の成分（ここでＺは炭素であり、ｎは１または２であり、Ｒ₂₀，Ｒ₂₁およびＲ₂₂は個別にＨ，Ｆ，Br，Cl，-CF₃，または炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝状アルキルもしくはアルコキシである）を形成する。別の態様では、Ｒ₆は（ここで各Ｘは炭素である）である。別の態様では、Ｒ₁₈およびＲ₁₉が個別にＨ、メチル、エチル、メトキシまたはエトキシである。更なる態様は、Ｒ₂₀，Ｒ₂₁およびＲ₂₂が個別にＨ、メチル、エチル、メトキシまたはエトキシであるものを提供する。好ましい態様では、本発明はＲ₆がベンジルオキシである化合物を提供する。本発明の別の好ましい態様では、Ｒ₇またはＲ₈がであるものを提供する。本発明の特に好ましい態様では、化合物がNNC92-0270である：本発明の更なる態様では、内膜過形成が血管形成術、動脈内膜切除術、整腹アテローム切除術、血管内レーザー剥離または血管移植片の吻合のような血管再建による血管損傷をはじめとする血管損傷に起因する。本発明の別の態様では、哺乳類の急性血管損傷の前、同時または後の抗過形成性有効期間内で式Ｉの化合物が投与される。本発明の追加の態様では、抗過形成性有効量のヘパリンと同時に式Ｉの化合物が投与される。本発明は更に、例えば哺乳類においてPDGF活性を抑制するために、非ペプチド性PDGFアンタゴニストとして式Ｉの化合物を使用する方法も提供する。本発明の上記および他の面は、下記の発明の詳細な説明を参照することにより明らかになるだろう。発明の詳細な説明上述したように、血管の再狭窄は血管形成術、動脈内膜切除術またはバイパス移植術を受けた患者に共通の問題である。再狭窄は、細胞外マトリックスの生成（付着）はもちろん外科手術によっても、損傷を受けた部位への血管平滑筋細胞の増殖（有糸分裂）と移動の両方を含む過程によって進行すると思われる、内膜過形成の一例である。一般的には、Harker，Am ．J．Cardiol． 60:20B-28B，1987；およびDeFe udis，Drug News and Perspectives 5:49-51，1992を参照のこと。この増殖過程は、血管移植片（自系または同種異系を含む天然移植片、および合成移植片の両方）および移植された臓器の閉塞の形でも現れる。この増殖過程は平滑筋細胞に富む病変の発生を引き起こすので、本明細書中では内膜過形成と呼ぶことにする。本発明は、単独でまたは抗過形成性有効量のヘパリンと併用した、抗過形成性有効量の非ペプチド性PDGFアンタゴニストの使用を通して高ＳＭＣ病変〔内膜の肥厚（過形成）による血管の一部または完全遮断〕の発生を抑制する方法を提供する。本発明の範囲内での使用に特に着目されるのは、式Ｉの４−〔２−（Ｎ− ２−カルボキサミドインドール）アミノエチル〕ベンゼンスルホンアミドである。本発明の非ペプチド性PDGFアンタゴニストは、強皮症、肺過形成、腎線維症、慢性関節リウマチの治療法において、または骨肉腫、線維肉腫、神経膠腫もしくは他の増殖性細胞疾患を含むがそれに限定されない固形癌の治療において有用である。本発明の化合物は、当業界で周知の方法を使って合成することができる〔Fran cia他，Boll ．Chim．Farm．114:379-393，1975；Vicentini他，II Farmaco ．Ed ．Sc ．38:672-678，1983；Biere他， Chem ． 16:1340-1346，1973を参照のこと〕。例えば、式Ｉの化合物の合成のための典型的なスキームを下記に示す。適当な２−（アミノエチル）ベンゼンをまず無水酢酸との反応によりアセチル化し、次いでクロロスルホン酸での処理によりベンゼンスルホニルクロリドIIに変換する。次にIIをアミン処理により所望のスルホンアミドに変換することができる。IIIはそのままで、Ｒ₇とＲ₈がスルホンアミドを形成する式Ｉの化合物のための適切な構成単位を提供する。Ｒ₇とＲ₈がスルホニル尿素を形成する式Ｉの化合物の合成のためには、Ｒ₇とＲ₈がＨであるIVが下記に示すような更なる操作のための出発材料となる。IVをまずエチルクロロホルメートでの処理によりエチルスルホニルカルバメートＶに変換する。次いでＶを適当なアミンとの反応によりIVに（またはＲ₇とＲ₈が-CON H₂である式Ｉの化合物に）、またはヒドラジンとの反応によりIVに変換することができる。アセチルアミドを水性塩基または酸のいずれかの中で加水分解して遊離アミンVIII を与える。次いで適当なインドール−２−カルボン酸クロリドを使ってVIII をアシル化して、式Ｉの化合物であるＸを与えることができる。IXは対応するインドール−２−カルボン酸をオキサリルクロリドと反応させることにより調製される。インドール−２−カルボン酸は当業者に周知の多数の方法のうちの１つにより調製される。より珍しい３−アルコキシインドール（Ｒ₆はアルコキシまたは記載のようなメトキシ−環化合物である）の典型的な化合物の調製を下記に示す。２−アミノ安息香酸エチルをα−ブロモ酢酸エチルでＮ−アルキル化してＸＩを与える。ＸＩをナトリウムエトキシドで処理して３−オキソインドールＸIIを与える。適当なハロゲン化アルキルでのアルキル化により、３−アルコキシインドールＸIII を与える。けん化後のオキサリルクロリドとの反応により、酸クロリドＸＶを与える。本明細書中で用いる「非ペプチド性PDGFアンタゴニスト」なる語は、PDGFで誘導される応答経路の刺激を抑制する、ペプチド性化合物以外の化合物を言う。「応答経路」は、必ずしも常にではないか一般的に、膜結合型レセプターに直接関連づけられる外部刺激に応じて活性化される生化学経路である。応答経路は一般に、感受性細胞系からの細胞外マトリックス分泌、ホルモン分泌、化学走性、分化、または感受性細胞の細胞分裂の刺激、といった細胞性応答を誘導する。 PDGFレセプターは、通常その発現が中胚葉由来の細胞に限定される膜貫通型の一体型糖タンパク質である。２つのPDGFレセプターポリペプチドが記載されている。それらは「αレセプター」（Kelly他，WO 90/14425；Kelly他，米国特許第5 ,371,205号；Claesson-Welsh他，Proc ．Natl．Acad．Sci．USA 86:4917-4921，1 989）および「βレセプター」（Claesson-Welsh他，Mol ．Cell．Blol. 8:3476-3 486，1988；Gronwald他，Proc ．Natl．Acad．Scl．USA 85:3435-3439，1988）と呼ばれる。PDGFリガンドの存在下で、レセプターポリペプチドは二量化する。よって３種のレセプターサブタイプが可能である：αα、αβおよびββ。βレセプターはPDGFのＢ鎖に特異的であり、一方αレセプターはＡ鎖とＢ鎖に結合する。従って、PDGFへの細胞の増殖調節応答性は、PPDFのＡＡ、ＡＢおよびＢＢリガンドイソ型タンパク質の利用可能性にだけでなく、異なるPDGFレセプターサブタイプの発現および利用可能性にも依存する（Heldin他，Cell Regul．1:555-566 ，1990）。ヒト平滑筋細胞はαレセプターとβレセプターの両サブタイプを発現する（Heldin他，Cell Regul．1:555-566，1990）が、単一のレセプターサブタイプのみを発現する他の細胞型が知られている（Gronwald他，J ．Biol．Chem ． 264:8120-8125，1989）。本発明は、抗過形成性有効量の非ペプチド性PDGFアンタゴニストと抗過形成性有効量のヘパリンを協同して投与することにより、内膜過形成を抑制する方法も提供する。本明細書で用いる「ヘパリン」という語は、グルコサミンとグルクロン酸糖残基の反復構造により一般に特徴付けられる、構造的に複雑な硫酸化グリコサミノグリカンの化合物群のいずれかの構成員を指す（Casu，Adv ．Carbohyd ．Chem．and Biochem. 47:578-583，1985）。最も広く知られているヘパリンは、ウシ肺またはブタ腸から調製された「未分画の」または「市販の」ヘパリンであって、それらは約8,000〜20,000ダルトンの分子量に及ぶヘパリン分子の不均一混合物を包含する（Wolinsky他，J ．Am．Coll．Cardi ol． 15:475-481，1990）。しかしなから、ヘパリンという語は広範囲のより均一なヘパリン調製物、並びに硫酸ヘパランのようなヘパリン様分子も包含する。それらの特定のヘパリン例の中で、より具体的なヘパリンサプタイプも知られている。例えば、報告によれば、平滑筋細胞の増殖を阻害することに関して未分画ヘパリンよりも40倍まで活性である、内皮細胞（Castellot他，J.Cell ．Biol. 90 :372-379，1981）および平滑筋細胞（Fritze他，J ．Cell．Biol. 100:1041-1 049，1985）により生産される硫酸ヘパラン成分が単離されている。その上、天然に存在するヘパリンサイズ変異体の中で、抗凝固活性または抗増殖活性のいずれかを主として示す分画ヘパリン種が単離されている（Wolinsky他，J ．Am．Col l．Cardiol． 15:475-481，1990）。後者の活性は低分子量ヘパリン種、例えば五（ペンタ）〜十（デカ）糖類の範囲内のヘパリンに存在する傾向があり、それらの種はより大きな生体適合性とより長い半減期も与えることが報告されており（Id，Bacher他，Thrombosis Res．70:295-306，1993）、従って本発明の特定態様において特に有用かもしれない。本発明を説明する目的でのヘパリンの定義の中には合成ヘパリンおよびヘパリン誘導体も含まれ、多種多様なヘパリンが常用の化学合成、修飾および分解技術を使って製造されている〔例えばRoden，L．Th e Biochem-istry of Glycoproteins and Proteoglycans （Lennarz，W.J．編）26 7-371頁，Plenum Publishing Corp.，New York，1980を参照のこと。その内容は参考として本明細書中に組み込まれる〕。化合物の「抗過形成性有効量」は、血管、血管移植片または移植臓器の血管成分において内膜過形成を測定可能なほどに減少または防止するのに十分な化合物の量として定義される。より詳しくは、「内膜過形成の抑制」は、技術の現状において説明されている内膜過形成過程、例えば血管平滑筋細胞（VSMC）移動、VSMC増殖、および細胞外マトリックスの新生内膜沈着、のうちの１つまたは複数の測定可能な抑制を含むものとして本明細書では定義される。この状況下では、内膜過形成のまたは内膜過形成に含まれる過形成過程の減少または防止は、当業界で周知の試験管内、生体内および生体外アッセイ方法を使って、特に霊長類のアッセイ方法（例えば、非ヒトもしくはヒト霊長類のVS MC培養物もしくは血管組織外植片、または非ヒト霊長類の生体内試験）を使って、容易に評価することができる。PDGFがそれの刺激作用を及ぼさないようにすることにより、SMC増殖およびその後のマトリックス沈着を減らすことができる。内膜過形成の減少は、急性血管損傷後の管腔容積の低下の有意な減少として臨床的に表れる。そのような減少は一般的に、初期損傷部位における再血管形成手術（例えば繰り返し血管形成術）の必要性の減少をもたらすだろう。本発明の方法は、急性血管損傷による内膜過形成の治療に特に有用である。急性血管損傷は、生涯に渡って発達する慢性血管損傷（例えばアテローム硬化症）とは対照的に、迅速に（即ち数日から数カ月の間に）起こる損傷である。急性血管損傷はしばしば、血管形成術、動脈内膜切除術、整腹アテローム切除術、血管内ステント据付、血管内レーザー剥離、血管移植片の吻合などの技術を使用する、血管再建のような外科的処置から生じる。過形成は、例えば血管移植片の設置または臓器移植に応答して、遅延反応として起こることもある。単独でまたはヘパリンと併用して、非ペプチド性PDGFアンタゴニスト療法で治療されるヒトの場合、該アンタゴニストは広範囲の条件のもとで投与され得る。アンタゴニストは血管再生術の前とそのような手術後の複数回、ボーラス注射によって投与することができる。アンタゴニストは、手術前に（一般に手術前の24時間以内に）ボーラス注射（静脈内、筋肉内、腹腔内または皮下）としておよび手術後の連続した輸液（埋込式ポンプを通した輸液を含む）として与えることができる。多くの場合、入院中は一日量を投与し（輸液による投与を含む）、その後で１〜２週間またはそれ以上の外来患者治療の期間の間、より少頻度のボーラス注射を与えることが好ましいだろう。処置は最初の損傷後６カ月まで続けることができる。アンタゴニストは静脈内、筋肉内または皮下注射を含む複数のルートで投与することができる。加えて、灌流バルーンカテーテル、ステント上へのコーティング、またはゲルコーティングされたバルーンへの設置を使って、アンタゴニストを血管損傷部位に局所的に投与することもできる。後者の場合、アンタゴニストの用量は全身投与される時に必要であるものよりも実質的に少ないだろうと期待される。アンタゴニストは徐放性デリバリーシステム、例えば血管移植片もしくはステント中に組み込んだそのようなシステムにより、または濯流もしくは二重バルーンカテーテルによって送達せしめることもできる。ポンプおよび他の既知のデリバリーシステムを使ってもよい。本発明の別の態様では、非ペプチド性PDGFアンタゴニストは、哺乳類の血管系での内膜過形成を協同して抑制するのに十分なアンタゴニストとヘパリンの各々の単位用量で、哺乳類にヘパリンと協同投与される。本明細書中の「協同投与(c oordinate adminis tration)」は、アンタゴニストとヘパリンの同時の、別々のまたは連続した投与を含むつもりである。この場合、アンタゴニストとヘパリンの両者は互いに関して限定された併用有効期間の中で投与される。「併用有効期間」とは、２つの剤が過形成を抑制するのに併用すると有効であるようなアンタゴニストの投与とヘパリンの投与の間に入る最大期間として定義される。「併用すると有効である」という語は、他の点では同等の条件および用量の下で単独で投与した抗体またはヘパリンのいずれかにより独立に提供される最大抑制レベルを上回る、内膜の肥厚もしくは損傷形成のまたは過形成過程の測定可能な抑制をもたらすものとして定義される。通常、ヘパリンの用量は約１μｇ〜100mg／kg／日であろう。好ましくは、ヘパリンの用量は29μｇ〜10mg／kg／日であり、より好ましくは約１mg／kg／日未満であろう。当業者が知るように、実際の用量は患者のパラメーターや投与されるアンタゴニストおよびヘパリンの特性を含む、特定の状況を考慮しながら決定されるだろう。過形成の抑制は患者の臨床的事象の減少をもたらすと期待されるだろう。それらとしては、心筋梗塞、狭心症、再血管形成術の必要性および死亡のうちの１つまたは複数の減少が挙げられる。次の実施例は例示目的で与えられるのであって、限定目的ではない。実施例実施例１アンタゴニストアッセイ SWISS3T3細胞中で発現される血清応答要素（ＳＲＥ）−ルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現を阻止することができる物質を同定するＳＲＥ−ルシフェラーゼ高処理量アッセイ系を通して、非ペプチド性PDGFアンタゴニストとしてのNNC9 2-0270の最初の特徴づけが可能になった。ＳＲＥ−ルシフェラーゼ構成物である pKZ67は、−360から＋30までのヒトc-fos配列を含む合成セグメント（van Straaten他，Proc ．Natl．Acad．Sci USA 80:3183-3187，1983）（ＴＡＴＡ、ＳＲＥおよびＳＩＥプロモーター要素を含む）、ルシフェラーゼ配列（Delegean e他，Mol ．Cell Biol． 7:3994-4002，1987；deWet他，Mol ．Cell Biol． 7:2 5-737，1987）およびヒト成長ホルモン遺伝子ターミネーターを含有するルシフェラーゼ発現単位を含んで成るpUC18由来の哺乳類細胞発現ベクターである。この発現単位は、SV40プロモーター配列とターミネーター配列によって隣接されたネオマイシン耐性マーカーを含む第二の発現単位に対して反対の転写方向にある。SWISS3T3細胞は、PDGF−AA，−ABおよび−BB；bFGF並びにEGFのような内因性増殖因子レセプターを発現する。それらの増殖因子のいずれかによる該レセプターの刺激は、ルシフェラーゼの誘導に至るシグナルカスケードを開始させる。ＰＭＡ（ホボール12−ミリステート13−アセテート）は、プロテインキナーゼＣを刺激することにより該レセプターを迂回しそして内部シグナルカスケードを開始させてルシフェラーゼの誘導をもたらす。アンタゴニスト特異性の程度は、３つの増殖因子（PDGF，bFGFおよびEGF）についての生成シグナルを比較することにより決定することができる。対照に比べて50倍のシグナル低下をもたらす化合物を更なる分析に使った。 SWISS3T3細胞（ＳＲＥ−ルシフェラーゼレポーター遺伝子でトランスフェクトされた、SWISS3T3/KZ67-G1-6）を、維持培地〔10％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、２ mMＬ−グルタミン、１mMピルビン酸ナトリウム、１mg／mlのG418が補足されたＤＭＥＭ（GIBCO BRL，Gaithersburg，MD）〕中での連続継代により維持した。アッセイの２日前に、細胞をトリプシン処理し、増殖培地（１％ＦＢＳ、２mMＬ− グルタミン、１mMピルビン酸ナトリウムが補足されたＤＭＥＭ）中で５×10⁴細胞／ウエルに調整し、不透明の白い96ウエルマイクロタイタープレートに200μｌ／ウエル（１×10⁴細胞／ウエル）を接種し、そして37℃，５％CO₂で48時間増殖させた。試験物質は４％DMSO中に調製した。ウエルから弱った培地を除去し、50μｌ／ウエルのアッセイ培地〔0.5％第Ｖ画分ＢＳＡ（Sigma，St．Louis，Mo.）、２m MＬ−グルタミン、１mMピルビン酸ナトリウム、20mM Hepesが補足されたハムＦ1 2培地(Gibco)〕を添加することにより、誘導を開始した。アッセイ培地中50ng/m lのPDGF 25μｌ（最終濃度12.5ng/ml）または８ng/mlのbFGF 25μｌ（最終濃度 2.0ng/ml）を該ウエルに添加した。アッセイ培地中に調製した次の対照を各プレートに含めた：未処理のウエル（基底）、12.5ng/ml、より好ましくは6.25ng/ml のPDGF−BB〔血小板由来増殖因子、原液10μｌ/ml10mM酢酸，0.25％ RSA／PBS〕、2.0ng／mlのbFGF〔塩基性繊維芽細胞増殖因子（Genzyme Diagnostics，Cambri dge，MA）〕、4.5ng/mlのEGF〔表皮増殖因子(Sigma)〕または50ng/mlのPMA（Sig ma）。DMSOの最終アッセイ濃度は１％を超えなかった。プレートを37℃，５％CO₂ で５時間インキュベートした。誘導後、プロメガ社製ルシフェラーゼアッセイキット（E1500；Promega Corp. ，Madison，WI）を使ってアッセイキットプロトコールに従ってルシフェラーゼ活性を測定した。簡単に言えば、プレートからアッセイ培地を除去し、無菌水で１：５希釈した25μｌ／ウエルの細胞溶解緩衝液をプレートに添加した。プレートを15分間インキュベートした。プレートをLumiskan（商標）マイクロタイタールミノメーター（ICN Biomedical，Cleveland，OH）に移し、そこに40μｌ／ウエルのルシフェラーゼアッセイ基質（Promega Corp.）を添加した。１秒間の混合と１〜３のシグナルの積分の後、発光の量（相対光単位、ＲＬＵ）を測定した。全ての測定値から基底の（未誘導の）ルシフェラーゼシグナルを差し引き、そして試験試料により誘導されたルシフェラーゼシグナルを、対照からのシグナルに対する百分率（％）として表した。基底レベルを超えるシグナルを誘導する試料を、更なる特徴づけのために選択した。表１に与えるデータは、対照活性の50％を阻害するのに必要なNN C92-0270のおよその有効量（ＩＣ₅₀）を示す。表１実施例２ラット平滑筋細胞（ＳＭＣ）への¹²⁵Ｉ−PDGF−BB結合の阻害ラットＳＭＣの単層培養物への¹²⁵Ｉ−PDGF−BB結合を阻害する能力についてN NC92-0270を分析した。ラットＳＭＣへの¹²⁵Ｉ−PDGF−BB結合の阻害をアッセイするために、ＳＭＣを約20,000細胞／ウエルの密度で24ウエル培養皿に接種した。接種後２〜７日目に細胞をアッセイに使った。試験化合物を結合培地〔500ml のハムＦ12(Gibco BRL)，12mlの1M Hepes，pH7.4，5mlの100×PSN（Gibco BRL）、1gmのウサギ血清アルブミン(Sigma Chemical Co.，St．Louis，MO)〕中で表２に示す濃度に希釈し、次いで三重反復試験においてＳＭＣ（１ml／ウエル）に添加した。次いでそれらのウエルに50μｌの¹²⁵Ｉ−PDGF−BB原液を添加した。結合培地のみを陰性対照として使用し、¹²⁵Ｉ−PDGF−BBに対する非特異的結合を測定するのに200ng/mlのPDGF−BBの添加を使った。４℃で約1.5時間細胞をインキュベートし、次いで結合培地で洗浄して未結合のリガンドを除去した。次いで細胞を抽出緩衝液（20mM Tris-HCl pH8.0，100mM NaCl，１mM EDTA，0.5％Nonident P-40，0.5％デオキシコール酸ナトリウム，10mM Nal，１％ウシ血清アルブミン）と共にインキュベートし、抽出液を収集し、γカウンター中でカウントした。結合研究の結果を表２に示す。データは¹²⁵Ｉ−PDGF−BBについての結合した比放射能（cpm）として与えられる。200ng／mlの未標識のPDGF−BBの添加により測定された非特異的結合は853cpm であり、与えられるデータからこの値が差し引かれている。表２ラットＳＭＣへの¹²⁵Ｉ−PDGF−BB結合の阻害これらの結果は、NNC92-0270が細胞表面PDGFレセプターへのPDGF−BB結合の有力な阻害剤であることを証明する。続いて、10％ヒト血清の存在下で放射標識リガンドを細胞に添加した時にラットＳＭＣへの¹²⁵Ｉ−PDGF−BB結合を阻害する能力についてNNC92-0270を分析した。上記と同様にしてラットＳＭＣを24ウエル培養皿に接種し、アッセイした。試験化合物を結合培地のみ、または10％ヒト血清を含む結合培地のいずれかにより表３に示す濃度に希釈し、次いで三重反復試験において１mlアリコートを試験細胞に添加した。¹²⁵Ｉ−PDGF−BBの20×原液50μｌを各ウエルに添加した。４ ℃で2.5時間細胞をインキュベートし、次いで結合培地で洗浄して未結合のリガンドを除去し、そして抽出緩衝液を使って収集した。次いで抽出液をγカウンター中でカウントして結合したCPMを測定した。表３に与える結果は、結合培地のみで希釈したものに比べて10％ヒト血清を含む結合培地で希釈した時、NNC92-0270がほぼ等しい¹²⁵Ｉ−PDGF−BB結合阻害力を有することを証明する。結合培地のみを使った陰性対照試料よりも、ヒト血清を含む陰性対照試料の方が¹²⁵Ｉ−PDGF−BBの結合が低いことに注目すべきである。その結果を結合した合計CPMとして与える。表３ヒト血清の存在下または非存在下でのラットＳＭＣへの¹²⁵Ｉ−PDGF−BB結合の阻害実施例３ヒヒ平滑筋細胞に対するPDGF−BB有糸分裂促進活性の阻害ヒヒ平滑筋細胞に対するPDGFの有糸分裂促進活性を阻害する能力についてNNC9 2-0270を分析した。ヒヒ血管平滑筋細胞(BVSMC)に対して行った全ての有糸分裂アッセイは、13〜20継代培養した細胞の初代培養物に関して実施した。出発培養物は大動脈性組織外植片の派生物から確立された。ヒヒ平滑筋細胞を、10％ウシ胎児血清が補足されたDMEM中、ウエルあたり約20,000細胞の密度で24ウエルの培養皿に接種した。使用する１日前に培地を除去し、１mlのMito Media（表５）を各ウエルに添加して、細胞を静止状態にした。実験開始時点で、細胞をPDGF−BBで刺激した。 1，0.5，0.25，0.062および0ng／mlの濃度を使ってPDGF−BBについて標準曲線を作成した。0.25％アルブミンを含む10mM酢酸中への希釈により各PDGF濃度について20×原液を作り、そして50μｌのPDGFまたは希釈賦形剤のみを培養ウエルに添加した。 PDGF−BB有糸分裂促進活性を中和するNNC92-0270の活性を分析するために、１ ng／mlのPDGFをNNC92-0270の様々な希釈液と一緒にウエルに添加した。細胞を試験試料と共に37℃で約20時間インキュベートした。次いで、〔³Ｈ〕チミジンの2 0×原液50μｌを各ウエルに添加して１μCi／mlの最終濃度を与えた。細胞を37 ℃で４時間インキュベートし、ＰＢＳで洗浄し、次いでトリプシンを使って収穫し、Wallac（Turku，Finland）Betaplate（商標）液体シンチレーションカウンター中で〔³Ｈ〕チミジンの取込みについてカウントした。表４に与える結果は、PDGF−BB有糸分裂促進活性が用量依存形式でNNC92-0270により阻害されることを証明する。この阻害のED₅₀はNNC92-0270の場合約12.5μＭであった。表４ヒヒ平滑筋細胞に対するPDGF−BB有糸分裂促進活性の阻害これと同じ実験の一部として、ヘパリンの存在下でNNC92-0270の阻害活性を分析した。我々は以前に、ヘパリンが中和モノクローナル抗体と協同形式でヒヒ平滑筋細胞に対するPDGF有糸分裂促進活性を阻害する作用をすることを証明した。本発明者らはPDGF−BB有糸分裂促進活性を阻害することにおいてヘパリンの存在が同様な増強作用を有するかどうかをNNC92-0270を使って調べようと思う。 0.5U/mlの未分画ヘパリンの存在下でNNC92-0270を１ng/mlの PDGF−BBと共にインキュベートした。細胞を上記と同様に〔³Ｈ〕チミジンでパルス標識し、〔³Ｈ〕チミジン取込みのレベルを測定した。その結果を表４に与える。それらの結果は、NNC92-0270へのヘパリンの添加がNNC92-0270のみにより達成されるものを超える大きな〔³Ｈ〕チミジン取込みの阻害をもたらしたことを証明する。実施例５浄化試験浄化（wash-out）試験においてヒヒ平滑筋細胞へのPDGF−BB有糸分裂促進活性に対する長期阻害作用についてNNC92-01270を分析した。ヒヒＳＭＣを24ウエルの培養皿にウエルあたり20,000個の密度で接種し、そして２日間増殖させた。培地を除去し、Mito Media（表５）で置換して細胞を静止状態にしておいた。PDGF −BBの添加の24時間前かまたはPDGF−BBの添加に続いて、細胞をNNC92-0270または賦形剤対照（0.5％DMSO）で処理するように、実験を設定した。NNC92-0270または賦形剤対照で最初に24時間処理した細胞は、Mito Mediaで洗浄して試験化合物を除去し、次いでPDGF−BB（１ng／ml）と共に更に24時間インキュベートした。第二セットの細胞は、NNC 92-0270または賦形剤対照と同時にPDGF−BBで24時間処理した。次いで両方の細胞を〔³Ｈ〕チミジンで４時間パルス標識し（最終１μCi／ml）、そしてWallac Betaplateカウンター中で〔³Ｈ〕チミジン取込みについてCPMをカウントした。表６に示す結果は、三重反復測定において〔³Ｈ〕チミジン取込みの平均±標準偏差として与えられる。酢酸（10mM）をPDGF−BB賦形剤対照として使用し、そして0.5％DMSOを試験化合物対照として使った。表５表６ヒヒ平滑筋細胞へのPDGF−BB有糸分裂促進活性に対する NNC92-0270 の長期作用を調べるための浄化試験本発明の特定態様を例示目的で記載してきたけれども、上記から、発明の精神および範囲から逸脱することなく様々な変更を行い得ることは理解されるだろう。従って、本発明は添付の請求の範囲による以外は限定されない。

【手続補正書】【提出日】平成１０年１月１３日（１９９８．１．１３）【補正内容】請求の範囲 1. 哺乳類の血管系における内膜過形成を抑制するための剤であって、式Ｉ：〔上式中、Ｒ₁，Ｒ₄およびＲ₅は個別にＨ，Ｆ，Cl，Br，-CF₃，または炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルコキシであり；Ｒ₂およびＲ₃は個別にＨまたは炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルであり；Ｒ₆はＨ、炭素原子数１〜18の直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルコキシ、または（ここでｎは１または２であり；各Ｘは個別にＣ，Ｎ，ＮＨ，ＯまたはＳであり、ただし少なくとも１〜２個のＸがＣであり；Ｒ₉，Ｒ₁₀およびＲ₁₁は個別にＨ，Ｆ，Br，Cl，-CF₃，または炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルコキシである）であり；Ｒ₇およびＲ₈は個別にＨ、炭素原子数１〜18の直鎖もしくは分枝鎖アルキルまたは-CONH-Ｒ₁₂であるか、あるいはＲ₇とＲ₈はそれらを結合しているＮ原子と一緒になって、環原子数３〜８の置換または非置換の複素環を形成し；Ｒ₁₂はＨ、（ここでＹは窒素であり；Ｒ₁₃およびＲ₁₄は個別にＨ、炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルであるか、またはＲ₁₃とＲ₁₄はそれらを結合しているＮ原子と一緒になって、環原子数３〜８の置換もしくは非置換の複素環を形成し；Ｚは炭素であり；そしてＲ₁₅，Ｒ₁₆およびＲ₁₇は個別にＨまたは炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルであり、あるいはＲ₁₅とＲ₁₆、Ｒ₁₆とＲ₁₇、またはＲ₁₅とＲ₁₇がＺと一緒になって炭素原子数３〜８の置換もしくは非置換モノシクロアルキルを形成し、あるいはＲ₁₅，Ｒ₁₆およびＲ₁₇がＺと一緒になって炭素原子数７〜14の置換もしくは非置換モノもしくはポリシクロアルキルまたは炭素原子数６〜14の置換もしくは非置換橋架モノもしくはポリシクロアルキルを形成する）である〕により表される血小板由来増殖因子（PDGF）アンタゴニストの抗過形成性有効量を含んで成る剤。 2. Ｒ₁，Ｒ₄およびＲ₅が個別にＨ、メチルまたはメトキシであり；Ｒ₂およびＲ₃が個別にＨまたはメチルであり；Ｒ₆が炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルコキシ、または（ここでｎは１または２であり；各Ｘは個別にＣ，ＳおよびＮから成る群より選ばれ、ただし１〜２個のＸがＣであり；Ｒ₉，Ｒ₁₀およびＲ₁₁は個別にＨ、メチルまたはメトキシである）であり；Ｒ₇およびＲ₈が個別にＨ、炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルまたは-CONH−Ｒ₁₂であり；Ｒ₁₂がＨ、（ここでＹは窒素であり；Ｚは炭素であり；Ｒ₁₃およびＲ₁₄はＹと一緒になって環原子数５〜６の複素環を形成し；そしてＲ₁₅ とＲ₁₆、Ｒ₁₆とＲ₁₇、またはＲ₁₅とＲ₁₇がＺと一緒になって炭素原子数５〜６の置換もしくは非置換モノシクロアルキルを形成し、あるいはＲ₁₅，Ｒ₁₆およびＲ₁₇がＺと一緒になって炭素原子数９〜10の置換もしくは非置換モノもしくはポリシクロアルキルまたは炭素原子数８〜10の置換もしくは非置換橋架モノもしくはポリシクロアルキルを形成する）である、請求項１に記載の剤。３．Ｒ₇とＲ₈がそれらを結合しているＮと一緒になって環原子数６以下の非置換の複素環を形成する、請求項１に記載の剤。 4. Ｒ₁₃とＲ₁₄がＹと一緒になって次の成分（ここでＹは窒素であり、ｎは１または２であり、そしてＲ₁₈およびＲ₁₉は個別にＨ，Ｆ，Br，Cl，-CF₃，または炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルコキシである）を形成する、請求項１に記載の剤。 5. Ｒ₁₅とＲ₁₆、Ｒ₁₆とＲ₁₇、またはＲ₁₅とＲ₁₇がＺと一緒になって次の成分（ここでＺは炭素であり、ｎは１または２であり、Ｒ₂₀，Ｒ₂₁およびＲ₂₂は個別にＨ，Ｆ，Br，Cl，-CF₃，または炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルコキシである）を形成する、請求項１に記載の剤。 6. Ｒ₆が（ここで各Ｘは炭素である）である、請求項１に記載の剤。 7. Ｒ₁₈およびＲ₁₉が個別にＨ、メチル、エチル、メトキシまたはエトキシである、請求項４に記載の剤。 8. Ｒ₂₀，Ｒ₂₁およびＲ₂₂が個別にＨ、メチル、エチル、メトキシまたはエトキシである、請求項５に記載の剤。 9. Ｒ₆がベンジルオキシである、請求項１に記載の剤。 10．Ｒ₇またはＲ₈がである、請求項１に記載の剤。 11．前記非ペプチド性PDGFアンタゴニストがNNC92-0270：である、請求項１に記載の剤。 12．前記哺乳類が霊長類である、請求項１に記載の剤。 13．前記非ペプチド性PDGFアンタゴニストが、急性血管損傷と同時に、またはその前の抗過形成性有効期間内に前記哺乳類に投与される、請求項１に記載の剤。 14．前記損傷が血管再建によるものである、請求項13に記載の剤。 15．前記血管再建が、血管形成術、動脈内膜切除術、整腹アテローム切除術、血管内レーザー剥離または血管移植片の吻合を含んで成る、請求項14に記載の剤。 16．前記非ペプチド性PDGFアンタゴニストが、前記哺乳類における急性血管損傷後の抗過形成性有効期間内に投与される、請求項１に記載の剤。 17．前記損傷が血管再建によるものである、請求項16に記載の剤。 18．前記血管再建が、血管形成術、動脈内膜切除術、整腹アテローム切除術、血管内レーザー剥離または血管移植片の吻合を含んで成る、請求項17に記載の剤。 19．前記哺乳類に協同投与される非ペプチド性PDGFアンタゴニストの抗過形成性有効量とヘパリンの抗過形成性有効量とを含んで成る剤であって、前記協同投与される抗原とヘパリンが併用すると前記過形成を抑制するのに有効である、請求項１に記載の剤。 20．前記非ペプチド性PDGFアンタゴニストおよびヘパリンが、経口、静脈内、脈管周囲、経皮および直腸投与方法から成る群より選ばれた投与方法により前記哺乳類に投与される、請求項19に記載の剤。 21．哺乳類においてPDGF活性を阻害するための剤であって、式Ｉ：〔上式中、Ｒ₁，Ｒ₄およびＲ₅は個別にＨ，Ｆ，Cl，Br，-CF₃，または炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルコキシであり；Ｒ₂およびＲ₃は個別にＨまたは炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルであり；Ｒ₆はＨ、炭素原子数１〜18の直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルコキシ、または（ここでｎは１または２であり；各Ｘは個別にＣ，Ｎ，ＮＨ，ＯまたはＳであり、ただし少なくとも１〜２個のＸがＣであり；Ｒ₉，Ｒ₁₀およびＲ₁₁は個別にＨ，Ｆ，Br，Cl，-CF₃，または炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルコキシである）であり；Ｒ₇およびＲ₈は個別にＨ、炭素原子数１〜18の直鎖もしくは分枝鎖アルキルまたは-CONH-Ｒ₁₂であるか、あるいはＲ₇とＲ₈はそれらを結合しているＮ原子と一緒になって、環原子数３〜８の置換または非置換の複素環を形成し；Ｒ₁₂はＨ、（ここでＹは窒素であり；Ｒ₁₃およびＲ₁₄は個別にＨ、炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルであるか、またはＲ₁₃とＲ₁₄はそれらを結合しているＮ原子と一緒になって、環原子数３〜８の置換もしくは非置換の複素環を形成し；Ｚは炭素であり；そしてＲ₁₅，Ｒ₁₆およびＲ₁₇は個別にＨまたは炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルであり、あるいはＲ₁₅とＲ₁₆、Ｒ₁₆とＲ₁₇、またはＲ₁₅とＲ₁₇がＺと一緒になって炭素原子数３〜８の置換もしくは非置換モノシクロアルキルを形成し、あるいはＲ₁₅，Ｒ₁₆およびＲ₁₇がＺと一緒になって炭素原子数７〜14の置換もしくは非置換のモノもしくはポリシクロアルキルまたは炭素原子数６〜14の置換もしくは非置換の橋架モノもしくはポリシクロアルキルを形成する）である〕により表される化合物の有効量を含んで成る剤。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者オーメ，マークダブリュアメリカ合衆国，ワシントン 98117，シアトル，ノースウエストエイティーナインスストリート 636 (72)発明者モイニハン，クリステンエム. アメリカ合衆国，ワシントン 98105，シアトル，ナインスアベニュノースイースト 5209

Claims

【特許請求の範囲】 1. 哺乳類の血管系における内膜過形成を抑制する方法であって、式Ｉ：〔上式中、Ｒ₁，Ｒ₄およびＲ₅は個別にＨ，Ｆ，Cl，Br，-CF₃，または炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルコキシであり；Ｒ₂およびＲ₃は個別にＨまたは炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルであり；Ｒ₆はＨ、炭素原子数１〜18の直鎖もしくは分技鎖アルキルもしくはアルコキシ、または（ここでｎは１または２であり；各Ｘは個別にＣ，Ｎ，ＮＨ，ＯまたはＳであり、ただし少なくとも１〜２個のＸがＣであり；Ｒ₉，Ｒ₁₀およびＲ₁₁は個別にＨ，Ｆ，Br，Cl，-CF₃，または炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分技鎖アルキルもしくはアルコキシである）であり；Ｒ₇およびＲ₈は個別にＨ、炭素原子数１〜18の直鎖もしくは分枝鎖アルキルまたは-CONH-Ｒ₁₂であるか、あるいはＲ₇とＲ₈はそれらを結合しているＮ原子と一緒になって、環原子数３〜８の置換または非置換の複素環を形成し；Ｒ₁₂はＨ、（ここでＹは窒素であり；Ｒ₁₃およびＲ₁₄は個別にＨ、炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルであるか、またはＲ₁₃とＲ₁₄はそれらを結合しているＮ原子と一緒になって、環原子数３〜８の置換もしくは非置換の複素環を形成し；Ｚは炭素であり；そしてＲ₁₅，Ｒ₁₆およびＲ₁₇は個別にＨまたは炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルであり、あるいはＲ₁₅とＲ₁₆、Ｒ₁₆とＲ₁₇、またはＲ₁₅とＲ₁₇がＺと一緒になって炭素原子数３〜８の置換もしくは非置換モノシクロアルキルを形成し、あるいはＲ₁₅，Ｒ₁₆およびＲ₁₇がＺと一緒になって炭素原子数７〜14の置換もしくは非置換モノもしくはポリシクロアルキルまたは炭素原子数６〜14の置換もしくは非置換橋架モノもしくはポリシクロアルキルを形成する）である〕により表される血小板由来増殖因子（PDGF）アンタゴニストの抗過形成性有効量を前記哺乳類に投与することを含んで成る方法。 2. Ｒ₁，Ｒ₄およびＲ₅が個別にＨ、メチルまたはメトキシであり；Ｒ₂およびＲ₃が個別にＨまたはメチルであり；Ｒ₆が炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルコキシ、または（ここでｎは１または２であり；各Ｘは個別にＣ，ＳおよびＮから成る群より選ばれ、ただし１〜２個のＸがＣであり；Ｒ₉，Ｒ₁₀およびＲ₁₁は個別にＨ、メチルまたはメトキシである）であり；Ｒ₇およびＲ₈が個別にＨ、炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルまたは-CONH-Ｒ₁₂であり；Ｒ₁₂がＨ、（ここでＹは窒素であり；Ｚは炭素であり；Ｒ₁₃およびＲ₁₄はＹと一緒になって環原子数５〜６の複素環を形成し；そしてＲ₁₅とＲ₁₆、Ｒ₁₆とＲ₁₇、またはＲ₁₅ とＲ₁₇がＺと一緒になって炭素原子数５〜６の置換もしくは非置換モノシクロアルキルを形成し、あるいはＲ₁₅，Ｒ₁₆およびＲ₁₇がＺと一緒になって炭素原子数９〜10の置換もしくは非置換モノもしくはポリシクロアルキルまたは炭素原子数８〜10の置換もしくは非置換橋架モノもしくはポリシクロアルキルを形成する）である、請求項１に記載の方法。 3. Ｒ₇とＲ₈がそれらを結合しているＮと一緒になって環原子数６以下の非置換の複素環を形成する、請求項１に記載の方法。 4. Ｒ₁₃とＲ₁₄がＹと一緒になって次の成分（ここでＹは窒素であり、ｎは１または２であり、そしてＲ₁₈およびＲ₁₉は個別にＨ，Ｆ，Br，Cl，-CF₃，または炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分技鎖アルキルもしくはアルコキシである）を形成する、請求項１に記載の方法。 5. Ｒ₁₅とＲ₁₆、Ｒ₁₆とＲ₁₇、またはＲ₁₅とＲ₁₇がＺと一緒になって次の成分（ここでＺは炭素であり、ｎは１または２であり、Ｒ₂₀，Ｒ₂₁およびＲ₂₂は個別にＨ，Ｆ，Br，Cl，-CF₃，または炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルコキシである）を形成する、請求項１に記載の方法。 6. Ｒ₆が（ここで各Ｘは炭素である）である、請求項１に記載の方法。 7. Ｒ₁₈およびＲ₁₉が個別にＨ、メチル、エチル、メトキシまたはエトキシである、請求項４に記載の方法。 8. Ｒ₂₀，Ｒ₂₁およびＲ₂₂が個別にＨ、メチル、エチル、メトキシまたはエトキシである、請求項５に記載の方法。 9. Ｒ₆がベンジルオキシである、請求項１に記載の方法。 10．Ｒ₇またはＲ₈がである、請求項１に記載の方法。 11．前記非ペプチド性PDGFアンタゴニストがNNC92-0270：である、請求項１に記載の方法。 12．前記哺乳類が霊長類である、請求項１に記載の方法。 13．前記非ペプチド性PDGFアンタゴニストが、急性血管損傷と同時に、またはその前の抗過形成性有効期間内に前記哺乳類に投与される、請求項１に記載の方法。 14．前記損傷が血管再建によるものである、請求項13に記載の方法。 15．前記血管再建が、血管形成術、動脈内膜切除術、整腹アテローム切除術、血管内レーザー剥離、血管内ステント据付または血管移植片の吻合を含んで成る、請求項14に記載の方法。 16．前記非ペプチド性PDGFアンタゴニストが、前記哺乳類における急性血管損傷後の抗過形成性有効期間内に投与される、請求項１に記載の方法。 17．前記損傷が血管再建によるものである、請求項16に記載の方法。 18．前記血管再建が、血管形成術、動脈内膜切除術、整腹アテローム切除術、血管内レーザー剥離、血管内ステント据付または血管移植片の吻合を含んで成る、請求項17に記載の方法。 19．哺乳類の血管系における内膜過形成を抑制する方法であって、非ペプチド性PDGFアンタゴニストの抗過形成性有効量とヘパリンの抗過形成性有効量とを協同投与することを含んで成り、ここで前記協同投与される抗原とヘパリンが、併用すると前記過形成を抑制するのに有効である、請求項１に記載の方法。 20．前記非ペプチド性PDGFアンタゴニストおよびヘパリンが、経口、静脈内、脈管周囲、経皮および直腸投与方法から成る群より選ばれた投与方法により前記哺乳類に投与される、請求項19に記載の方法。 21．哺乳類においてPDGF活性を阻害する方法であって、式Ｉ：〔上式中、Ｒ₁，Ｒ₄およびＲ₅は個別にＨ，Ｆ，Cl，Br，-CF₃，または炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルコキシであり；Ｒ₂およびＲ₃は個別にＨまたは炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分技鎮アルキルであり；Ｒ₆はＨ、炭素原子数１〜18の直鎖もしくは分技鎖アルキルもしくはアルコキシ、または（ここでｎは１または２であり；各Ｘは個別にＣ，Ｎ，ＮＨ，ＯまたはＳであり、ただし少なくとも１〜２個のＸがＣであり；Ｒ₉，Ｒ₁₀およびＲ₁₁は個別にＨ，Ｆ，Br，Cl，-CF₃，または炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルもしくはアルコキシである）であり；Ｒ₇およびＲ₈は個別にＨ、炭素原子数１〜18の直鎖もしくは分枝鎖アルキルまたは-CONH-Ｒ₁₂であるか、あるいはＲ₇とＲ₈はそれらを結合しているＮ原子と一緒になって、環原子数３〜８の置換または非置換の複素環を形成し；Ｒ₁₂はＨ、（ここでＹは窒素であり；Ｒ₁₃およびＲ₁₄は個別にＨ、炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルであるか、またはＲ₁₃とＲ₁₄はそれらを結合しているＮ原子と一緒になって、環原子数３〜８の置換もしくは非置換の複素環を形成し；Ｚは炭素であり；そしてＲ₁₅，Ｒ₁₆およびＲ₁₇は個別にＨまたは炭素原子数１〜６の直鎖もしくは分枝鎖アルキルであり、あるいはＲ₁₅とＲ₁₆、Ｒ₁₆とＲ₁₇、またはＲ₁₅とＲ₁₇がＺと一緒になって炭素原子数３〜８の置換もしくは非置換モノシクロアルキルを形成し、あるいはＲ₁₅，Ｒ₁₆およびＲ₁₇がＺと一緒になって炭素原子数７〜14の置換もしくは非置換のモノもしくはポリシクロアルキルまたは炭素原子数６〜14の置換もしくは非置換の橋架モノもしくはポリシクロアルキルを形成する）である〕により表される化合物の有効量を前記哺乳類に投与することを含んで成る方法。