JP2001296299A - 診断薬用粒子および免疫比濁方法 - Google Patents
診断薬用粒子および免疫比濁方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 被検物質濃度が非常に低い領域において、高
感度測定が可能な、診断薬用粒子および該粒子を用いた
診断薬用試薬を得る。 【解決手段】 ナトリウムＤ線で測定した屈折率が1.6
以上のポリマーから構成され、数平均粒子径が0.02〜0.
5μmであることを特徴とする診断薬用粒子。
感度測定が可能な、診断薬用粒子および該粒子を用いた
診断薬用試薬を得る。 【解決手段】 ナトリウムＤ線で測定した屈折率が1.6
以上のポリマーから構成され、数平均粒子径が0.02〜0.
5μmであることを特徴とする診断薬用粒子。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、被検物質濃度が非
常に低い領域において、高感度測定が可能な、診断薬用
粒子および該粒子を用いた診断薬用試薬に関する。
常に低い領域において、高感度測定が可能な、診断薬用
粒子および該粒子を用いた診断薬用試薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】臨床検査の分野において検体中の微量物
質の定量法として、抗原抗体反応を利用した免疫測定法
が広く行われている。なかでもラテックス粒子を用いた
ラテックス免疫比濁法は簡便かつ測定時間が短いことか
ら、近年の迅速検査の要求に応じて広く用いられるよう
になってきた。ラテックス免疫比濁法による検体中の抗
原または抗体の定量は、ラテックス凝集による吸光度変
化を光学的に検出することにより行われる。この吸光度
の変化は、ラテックスの凝集による見かけの粒子径変化
に基づくものである。従来、ラテックス免疫比濁法に
は、抗原または抗体の固定化が容易であることからポリ
スチレンを主成分とするポリスチレン系ラテックス粒子
が汎用されてきた。しかし、検査項目によっては検体中
の被検物質濃度が非常に希薄な領域を測定する必要があ
り、このような領域では凝集するラテックスの数や凝集
塊のサイズが小さく、従来のポリスチレン系ラテックス
では十分な感度が得られているとはいえなかった。そこ
で、感度向上を目的としてポリスチレン系ラテックスの
粒径を大きくする試みが行われているが、粒子が沈降し
やすくなり診断薬の保存安定性に問題があった。また、
検査装置の検出上限以下に粒子吸光度を抑える必要から
反応液中の粒子濃度が小さくなるため、凝集反応速度が
極端に遅くなり十分な感度が得られない等の問題もあっ
た。
質の定量法として、抗原抗体反応を利用した免疫測定法
が広く行われている。なかでもラテックス粒子を用いた
ラテックス免疫比濁法は簡便かつ測定時間が短いことか
ら、近年の迅速検査の要求に応じて広く用いられるよう
になってきた。ラテックス免疫比濁法による検体中の抗
原または抗体の定量は、ラテックス凝集による吸光度変
化を光学的に検出することにより行われる。この吸光度
の変化は、ラテックスの凝集による見かけの粒子径変化
に基づくものである。従来、ラテックス免疫比濁法に
は、抗原または抗体の固定化が容易であることからポリ
スチレンを主成分とするポリスチレン系ラテックス粒子
が汎用されてきた。しかし、検査項目によっては検体中
の被検物質濃度が非常に希薄な領域を測定する必要があ
り、このような領域では凝集するラテックスの数や凝集
塊のサイズが小さく、従来のポリスチレン系ラテックス
では十分な感度が得られているとはいえなかった。そこ
で、感度向上を目的としてポリスチレン系ラテックスの
粒径を大きくする試みが行われているが、粒子が沈降し
やすくなり診断薬の保存安定性に問題があった。また、
検査装置の検出上限以下に粒子吸光度を抑える必要から
反応液中の粒子濃度が小さくなるため、凝集反応速度が
極端に遅くなり十分な感度が得られない等の問題もあっ
た。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記のよう
な従来のラテックス免疫比濁法における問題を解決する
ためになされたものであって、希薄な被検物質濃度領域
において、超高感度測定が可能であり、保存安定性に優
れた診断薬粒子および当該診断薬用粒子をその構成成分
の一部とする診断薬用試薬を提供することを目的とす
る。
な従来のラテックス免疫比濁法における問題を解決する
ためになされたものであって、希薄な被検物質濃度領域
において、超高感度測定が可能であり、保存安定性に優
れた診断薬粒子および当該診断薬用粒子をその構成成分
の一部とする診断薬用試薬を提供することを目的とす
る。
【０００４】
【発明を解決するための手段】本発明者は、上記課題を
解決すべく鋭意研究を重ねた結果、本発明の診断薬用粒
子に到達した。すなわち、本発明は、ナトリウムＤ線の
波長で測定した屈折率が1.6以上であるポリマーから構
成され、数平均粒子径が0.02〜0.5μmであることを特徴
とする診断薬用粒子ならびにこれらの診断薬用粒子を含
有してなる診断薬用試薬を提供するものである。
解決すべく鋭意研究を重ねた結果、本発明の診断薬用粒
子に到達した。すなわち、本発明は、ナトリウムＤ線の
波長で測定した屈折率が1.6以上であるポリマーから構
成され、数平均粒子径が0.02〜0.5μmであることを特徴
とする診断薬用粒子ならびにこれらの診断薬用粒子を含
有してなる診断薬用試薬を提供するものである。
【０００５】以下、本発明をさらに具体的に説明する。
本発明の診断薬用粒子はポリスチレン系ラテックスの屈
折率である1.59よりも高い屈折率である1.6以上のポリ
マーからなり、かつ数平均粒子径が0.02〜0.5μｍであ
る。本発明において、屈折率はナトリウムＤ線により測
定したものである。屈折率が1.6以上のポリマーは、そ
のホモポリマーが屈折率1.6以上のモノマー（以下、
「特定モノマー」という）を含むモノマーの重合体であ
る。その特定モノマーとしては、ビニルナフタレン、ビ
ニルカルバゾール、アセナフチレン、メタクリル酸ペン
タクロロフェニル、メタクリル酸α−ナフチル、メタク
リル酸ペンタブロモフェニル、メタクリル酸-o-クロロ
フェニルジフェニルメチル、アクリル酸-α−ブロモフ
ェニル、ジビニルベンゼン、Ｎ−ビニルフタルイミド、
メタクリル酸β−ナフチル、２−ビニルチオフェン、メ
タクリル酸α−ナフチル、メタクリル酸ペンタブロモフ
ェニル、アクリル酸トリブロモフェニル、o-クロロスチ
レン、2,6-ジクロロスチレン、ビニルフェニルスルフィ
ド等をあげることができる。
本発明の診断薬用粒子はポリスチレン系ラテックスの屈
折率である1.59よりも高い屈折率である1.6以上のポリ
マーからなり、かつ数平均粒子径が0.02〜0.5μｍであ
る。本発明において、屈折率はナトリウムＤ線により測
定したものである。屈折率が1.6以上のポリマーは、そ
のホモポリマーが屈折率1.6以上のモノマー（以下、
「特定モノマー」という）を含むモノマーの重合体であ
る。その特定モノマーとしては、ビニルナフタレン、ビ
ニルカルバゾール、アセナフチレン、メタクリル酸ペン
タクロロフェニル、メタクリル酸α−ナフチル、メタク
リル酸ペンタブロモフェニル、メタクリル酸-o-クロロ
フェニルジフェニルメチル、アクリル酸-α−ブロモフ
ェニル、ジビニルベンゼン、Ｎ−ビニルフタルイミド、
メタクリル酸β−ナフチル、２−ビニルチオフェン、メ
タクリル酸α−ナフチル、メタクリル酸ペンタブロモフ
ェニル、アクリル酸トリブロモフェニル、o-クロロスチ
レン、2,6-ジクロロスチレン、ビニルフェニルスルフィ
ド等をあげることができる。
【０００６】本発明の診断薬用粒子の一つの形態として
は、上記特定モノマーの単独重合体から構成される診断
薬用粒子を挙げることができる。一方、上記特定モノマ
ーと共重合可能なモノマーとの共重合体であっても、屈
折率が1.6以上のポリマーで構成される診断薬用粒子で
あれば、本発明の診断薬の別の形態として使用すること
ができる。特定モノマーと共重合可能な他のモノマー
（以下、「単量体(A)」という）としては、スチレン、
α−メチルスチレン、ビニルトルエン、ジビニルベンゼ
ン、スチレンスルホン酸などの芳香族ビニル化合物、あ
るいはメチルメタクリレート、メチルアクリレート、エ
チルアクリレートなどのアルキルアクリレートおよびア
ルキルメタクリレート、あるいは酢酸ビニルなどのビニ
ルエステル化合物などが挙げられる。これらは単独ある
いは組合せて、上記特定モノマーと共重合することがで
きる。特定モノマーと単量体（A）との構成比は、得ら
れるポリマー粒子の屈折率が1.6以上であればいかなる
比率であってもかまわないが、特定モノマーが少なくと
もモノマー全量の５重量％以上含まれている必要があ
る。
は、上記特定モノマーの単独重合体から構成される診断
薬用粒子を挙げることができる。一方、上記特定モノマ
ーと共重合可能なモノマーとの共重合体であっても、屈
折率が1.6以上のポリマーで構成される診断薬用粒子で
あれば、本発明の診断薬の別の形態として使用すること
ができる。特定モノマーと共重合可能な他のモノマー
（以下、「単量体(A)」という）としては、スチレン、
α−メチルスチレン、ビニルトルエン、ジビニルベンゼ
ン、スチレンスルホン酸などの芳香族ビニル化合物、あ
るいはメチルメタクリレート、メチルアクリレート、エ
チルアクリレートなどのアルキルアクリレートおよびア
ルキルメタクリレート、あるいは酢酸ビニルなどのビニ
ルエステル化合物などが挙げられる。これらは単独ある
いは組合せて、上記特定モノマーと共重合することがで
きる。特定モノマーと単量体（A）との構成比は、得ら
れるポリマー粒子の屈折率が1.6以上であればいかなる
比率であってもかまわないが、特定モノマーが少なくと
もモノマー全量の５重量％以上含まれている必要があ
る。
【０００７】さらに、抗原あるいは抗体との化学結合が
可能な官能基を持ったモノマー（以下、「単量体(B)」
という）を特定モノマーに共重合することにより、化学
結合用の診断薬用粒子を構成することも可能である。単
量体（B）としては、アクリル酸、メタクリル酸、クロ
トン酸、イタコン酸、フマル酸、マレイン酸などのカル
ボン酸モノマー、アクロレイン、メタクロレイン等のア
ルデヒドモノマーを挙げることができる。これらは単独
あるいは組み合わせて、特定モノマー、あるいは特定モ
ノマーと単量体(A)と共重合することができる。この場
合も、得られるポリマー粒子の屈折率が1.60以上である
必要があり、特定モノマーの含有比率は少なくともモノ
マー全量の５重量％以上必要である。本発明の診断薬用
粒子の粒径は0.02〜0.5μmが高感度を得るために必要で
あるが、自動検査機において使用される光源の波長によ
って、その適切な粒径は変化する。波長のおよそ１．３
倍以下の粒径を持つ粒子の使用が好ましい。
可能な官能基を持ったモノマー（以下、「単量体(B)」
という）を特定モノマーに共重合することにより、化学
結合用の診断薬用粒子を構成することも可能である。単
量体（B）としては、アクリル酸、メタクリル酸、クロ
トン酸、イタコン酸、フマル酸、マレイン酸などのカル
ボン酸モノマー、アクロレイン、メタクロレイン等のア
ルデヒドモノマーを挙げることができる。これらは単独
あるいは組み合わせて、特定モノマー、あるいは特定モ
ノマーと単量体(A)と共重合することができる。この場
合も、得られるポリマー粒子の屈折率が1.60以上である
必要があり、特定モノマーの含有比率は少なくともモノ
マー全量の５重量％以上必要である。本発明の診断薬用
粒子の粒径は0.02〜0.5μmが高感度を得るために必要で
あるが、自動検査機において使用される光源の波長によ
って、その適切な粒径は変化する。波長のおよそ１．３
倍以下の粒径を持つ粒子の使用が好ましい。
【０００８】本発明において、好ましい形態は特定モノ
マーと単量体(A)の共重合体、特に好ましくは特定モノ
マーと芳香族ビニルモノマーとの共重合体である。ここ
で、特定モノマーと芳香族ビニルモノマーの共重合割合
は、特定モノマー２０〜８０重量％、好ましくは３０〜
８０重量％、芳香族ビニルモノマー２０〜８０重量％、
好ましくは２０〜７０重量％である。
マーと単量体(A)の共重合体、特に好ましくは特定モノ
マーと芳香族ビニルモノマーとの共重合体である。ここ
で、特定モノマーと芳香族ビニルモノマーの共重合割合
は、特定モノマー２０〜８０重量％、好ましくは３０〜
８０重量％、芳香族ビニルモノマー２０〜８０重量％、
好ましくは２０〜７０重量％である。
【０００９】本発明において、上記特定モノマーを含む
モノマーは乳化重合などにより製造することができる。
前記乳化重合は通常の方法で実施することができ、例え
ば、水性媒体中に、単量体混合物、ラジカル重合開始
剤、乳化剤のほか、必要に応じて連鎖移動剤、キレート
化剤、ｐＨ調整剤等を添加し、例えば、常温〜１００℃
の温度で１〜３０時間程度重合する。水性媒体として
は、水および水溶性溶媒の混合溶媒を使用することが好
ましく、例えば水とエタノールなどのアルコールとの混
合溶媒である。
モノマーは乳化重合などにより製造することができる。
前記乳化重合は通常の方法で実施することができ、例え
ば、水性媒体中に、単量体混合物、ラジカル重合開始
剤、乳化剤のほか、必要に応じて連鎖移動剤、キレート
化剤、ｐＨ調整剤等を添加し、例えば、常温〜１００℃
の温度で１〜３０時間程度重合する。水性媒体として
は、水および水溶性溶媒の混合溶媒を使用することが好
ましく、例えば水とエタノールなどのアルコールとの混
合溶媒である。
【００１０】前記ラジカル重合開始剤としては、例え
ば、クメンハイドロパーオキサイド、ジイソプロピルベ
ンゼンハイドロパーオキサイド、パラメンタンハイドロ
パーオキサイド等の有機ハイドロパーオキサイド類から
なる酸化剤と、含糖ピロリン酸鉄処方、スルホキシレー
ト処方、含糖ピロリン酸鉄／スルホキシレート混合処方
等の還元剤との組み合わせからなるレドックス系開始
剤；過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム等の過硫酸
塩；２，２’−アゾビスイソブチロニトリル、２，２’
−アゾビス（４−メトキシ−２，４−ジメチルバレロニ
トリル）、２，２’−アゾビス−２，４−ジメチルバレ
ロニトリル、１，１’−アゾビスシクロヘキサン−１−
カルボニトリル等のアゾ化合物；ベンゾイルパーオキ
サイド、ジ−ｔ−ブチルパーオキサイド、ラウロイルパ
ーオキサイド、ｔ−ブチルパーオキシ−２−エチルヘキ
サノエート等の有機過酸化物；過酸化水素等を挙げるこ
とができ、好ましくはレドックス系開始剤、過硫酸塩で
ある。ラジカル重合開始剤の使用量は、単量体混合物１
００重量部当たり、通常、０．０５〜５重量部、好まし
くは０．１〜２重量部程度である。
ば、クメンハイドロパーオキサイド、ジイソプロピルベ
ンゼンハイドロパーオキサイド、パラメンタンハイドロ
パーオキサイド等の有機ハイドロパーオキサイド類から
なる酸化剤と、含糖ピロリン酸鉄処方、スルホキシレー
ト処方、含糖ピロリン酸鉄／スルホキシレート混合処方
等の還元剤との組み合わせからなるレドックス系開始
剤；過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム等の過硫酸
塩；２，２’−アゾビスイソブチロニトリル、２，２’
−アゾビス（４−メトキシ−２，４−ジメチルバレロニ
トリル）、２，２’−アゾビス−２，４−ジメチルバレ
ロニトリル、１，１’−アゾビスシクロヘキサン−１−
カルボニトリル等のアゾ化合物；ベンゾイルパーオキ
サイド、ジ−ｔ−ブチルパーオキサイド、ラウロイルパ
ーオキサイド、ｔ−ブチルパーオキシ−２−エチルヘキ
サノエート等の有機過酸化物；過酸化水素等を挙げるこ
とができ、好ましくはレドックス系開始剤、過硫酸塩で
ある。ラジカル重合開始剤の使用量は、単量体混合物１
００重量部当たり、通常、０．０５〜５重量部、好まし
くは０．１〜２重量部程度である。
【００１１】前記乳化剤としては、陰イオン性乳化剤、
非イオン性乳化剤、陽イオン性乳化剤、両性乳化剤等を
挙げることができる。陰イオン性乳化剤としては、例え
ば、高級アルコール硫酸エステルのアルカリ金属塩、ア
ルキルベンゼンスルホン酸のアルカリ金属塩、コハク酸
ジアルキルエステルスルホン酸のアルカリ金属塩、アル
キルジフェニルエーテルジスルホン酸のアルカリ金属
塩、ポリオキシエチレンアルキル（またはアルキルフェ
ニル）エーテル硫酸エステル塩等などを、非イオン性乳
化剤としては、例えば、ポリオキシエチレンアルキルエ
ーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル
等のほか、反応性乳化剤として、アクアロンＲＳ−２０
（商品名、第一工業製薬（株）製）、アデカリアソープ
ＮＥ−２０、アデカリアソープＳＥ−１０Ｎ（商品名、
旭電化工業（株）製）等を挙げることができる。陽イオ
ン性界面活性剤としては、アルキルピリジニルクロライ
ド、アルキルアンモニウムクロライド等を挙げることが
でき、また両性乳化剤としては、ラウリルベタインが適
当である。乳化剤の使用量は、単量体混合物１００重量
部当たり、通常、０．０１〜５重量部である。本発明の
診断薬用粒子は、コアシェル構造ではなく、粒子全体が
同一のポリマーからなっていることが好ましい。
非イオン性乳化剤、陽イオン性乳化剤、両性乳化剤等を
挙げることができる。陰イオン性乳化剤としては、例え
ば、高級アルコール硫酸エステルのアルカリ金属塩、ア
ルキルベンゼンスルホン酸のアルカリ金属塩、コハク酸
ジアルキルエステルスルホン酸のアルカリ金属塩、アル
キルジフェニルエーテルジスルホン酸のアルカリ金属
塩、ポリオキシエチレンアルキル（またはアルキルフェ
ニル）エーテル硫酸エステル塩等などを、非イオン性乳
化剤としては、例えば、ポリオキシエチレンアルキルエ
ーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル
等のほか、反応性乳化剤として、アクアロンＲＳ−２０
（商品名、第一工業製薬（株）製）、アデカリアソープ
ＮＥ−２０、アデカリアソープＳＥ−１０Ｎ（商品名、
旭電化工業（株）製）等を挙げることができる。陽イオ
ン性界面活性剤としては、アルキルピリジニルクロライ
ド、アルキルアンモニウムクロライド等を挙げることが
でき、また両性乳化剤としては、ラウリルベタインが適
当である。乳化剤の使用量は、単量体混合物１００重量
部当たり、通常、０．０１〜５重量部である。本発明の
診断薬用粒子は、コアシェル構造ではなく、粒子全体が
同一のポリマーからなっていることが好ましい。
【００１２】本発明の診断薬用粒子には抗原または抗体
などを担持させることができる。担持させることができ
る抗原または抗体とは、検体中に一般に含まれている成
分に反応するものであれば特に制限されないが、例え
ば、アンチプラスミン検査用抗アンチプラスミン抗体、
Ｄダイマー検査用抗Ｄダイマー抗体、ＦＤＰ検査用抗Ｆ
ＤＰ抗体、ｔＰＡ検査用抗ｔＰＡ抗体、ＴＡＴ検査用抗
トロンビン＝アンチトロンビン複合体抗体、ＦＰＡ検査
用抗ＦＰＡ抗体等の凝固線溶関連検査用抗原または抗
体；ＢＦＰ検査用抗ＢＦＰ抗体、ＣＥＡ検査用抗ＣＥＡ
抗体、ＡＦＰ検査用抗ＡＦＰ抗体、フェリチン検査用抗
フェリチン抗体、ＣＡ１９−９検査用抗ＣＡ１９−９抗
体等の腫瘍関連検査用抗原または抗体；アポリポタンパ
ク検査用抗アポリポタンパク抗体、β２―ミクロブロブ
リン検査用抗β２―ミクロブロブリン抗体、α１―ミク
ログロブリン検査用抗α１―ミクログロブリン抗体、免
疫グロブリン検査用抗免疫グロブリン抗体、ＣＲＰ検査
用抗ＣＲＰ抗体等の血清蛋白関連検査用抗原または抗
体；ＨＣＧ検査用抗ＨＣＧ抗体等の内分泌機能検査用抗
原または抗体；ＨＢｓ抗原検査用抗ＨＢｓ抗体、ＨＢｓ
抗体検査用ＨＢｓ抗原、ＨＣＶ抗体検査用ＨＣＶ抗原、
ＨＩＶ―１抗体用ＨＩＶ−１抗原、ＨＩＶ―２抗体検査
用ＨＩＶ−２抗原、ＨＴＬＶ―１検査用ＨＴＬＶ−１抗
原、マイコプラズマ症検査用マイコプラズマ抗原、トキ
ソプラズマ検査用トキソプラズマ抗原、ＡＳＯ検査用ス
トレプトリジンＯ抗原等の感染症関連検査用抗原または
抗体；抗ＤＮＡ抗体検査用ＤＮＡ抗原、ＲＦ検査用熱変
成ヒトＩｇＧ等自己免疫関連検査用抗原または抗体；ジ
ゴキシン検査用抗ジゴキシン抗体、リドカイン検査用抗
リドカイン抗体等の薬物分析用抗原または抗体などを挙
げることができるが、これらに限定されるものではな
い。抗体としてはポリクローナル抗体またはモノクロー
ナル抗体のどちらを用いてもかまわない。
などを担持させることができる。担持させることができ
る抗原または抗体とは、検体中に一般に含まれている成
分に反応するものであれば特に制限されないが、例え
ば、アンチプラスミン検査用抗アンチプラスミン抗体、
Ｄダイマー検査用抗Ｄダイマー抗体、ＦＤＰ検査用抗Ｆ
ＤＰ抗体、ｔＰＡ検査用抗ｔＰＡ抗体、ＴＡＴ検査用抗
トロンビン＝アンチトロンビン複合体抗体、ＦＰＡ検査
用抗ＦＰＡ抗体等の凝固線溶関連検査用抗原または抗
体；ＢＦＰ検査用抗ＢＦＰ抗体、ＣＥＡ検査用抗ＣＥＡ
抗体、ＡＦＰ検査用抗ＡＦＰ抗体、フェリチン検査用抗
フェリチン抗体、ＣＡ１９−９検査用抗ＣＡ１９−９抗
体等の腫瘍関連検査用抗原または抗体；アポリポタンパ
ク検査用抗アポリポタンパク抗体、β２―ミクロブロブ
リン検査用抗β２―ミクロブロブリン抗体、α１―ミク
ログロブリン検査用抗α１―ミクログロブリン抗体、免
疫グロブリン検査用抗免疫グロブリン抗体、ＣＲＰ検査
用抗ＣＲＰ抗体等の血清蛋白関連検査用抗原または抗
体；ＨＣＧ検査用抗ＨＣＧ抗体等の内分泌機能検査用抗
原または抗体；ＨＢｓ抗原検査用抗ＨＢｓ抗体、ＨＢｓ
抗体検査用ＨＢｓ抗原、ＨＣＶ抗体検査用ＨＣＶ抗原、
ＨＩＶ―１抗体用ＨＩＶ−１抗原、ＨＩＶ―２抗体検査
用ＨＩＶ−２抗原、ＨＴＬＶ―１検査用ＨＴＬＶ−１抗
原、マイコプラズマ症検査用マイコプラズマ抗原、トキ
ソプラズマ検査用トキソプラズマ抗原、ＡＳＯ検査用ス
トレプトリジンＯ抗原等の感染症関連検査用抗原または
抗体；抗ＤＮＡ抗体検査用ＤＮＡ抗原、ＲＦ検査用熱変
成ヒトＩｇＧ等自己免疫関連検査用抗原または抗体；ジ
ゴキシン検査用抗ジゴキシン抗体、リドカイン検査用抗
リドカイン抗体等の薬物分析用抗原または抗体などを挙
げることができるが、これらに限定されるものではな
い。抗体としてはポリクローナル抗体またはモノクロー
ナル抗体のどちらを用いてもかまわない。
【００１３】本発明の診断薬用粒子から、臨床検査用の
ラテックス診断薬が調製できる。一般には、上記のよう
な抗原または抗体を上記の方法で担持させた本発明の診
断薬用粒子を、必要に応じてウシ血清アルブミン等でブ
ロック処理を施し、適当な緩衝液に分散し感作ラテック
ス分散液とする。この感作ラテックス分散液に、測定に
用いる緩衝液および標準物質等を添付し、ラテックス診
断薬キットとして用いられる。
ラテックス診断薬が調製できる。一般には、上記のよう
な抗原または抗体を上記の方法で担持させた本発明の診
断薬用粒子を、必要に応じてウシ血清アルブミン等でブ
ロック処理を施し、適当な緩衝液に分散し感作ラテック
ス分散液とする。この感作ラテックス分散液に、測定に
用いる緩衝液および標準物質等を添付し、ラテックス診
断薬キットとして用いられる。
【００１４】本発明の診断薬用粒子を用いた検査に於い
ては、従来の吸光度を計測する検査機を用いることがで
きる。検査機の吸光度の計測法には被検査物質を添加し
た後の吸光度の変化速度を計測するレートアッセイ法、
または一定の時間経過後の準平衡濁度を計測するエンド
ポイント法での計測が可能である。
ては、従来の吸光度を計測する検査機を用いることがで
きる。検査機の吸光度の計測法には被検査物質を添加し
た後の吸光度の変化速度を計測するレートアッセイ法、
または一定の時間経過後の準平衡濁度を計測するエンド
ポイント法での計測が可能である。
【００１５】
【発明の実施の形態】以下、本発明を実施例によりさら
に詳しく説明する。なお、以下で「部」とは重量部であ
る。また、得られた診断薬用粒子の粒径および屈折率は
下記のように測定した。診断薬用粒子の粒径測定 診断薬用粒子を室温で３６時間透析してポリマー粒子の
精製した後、常法に従ってコロジオン膜状にのせ透過型
電子顕微鏡により粒子写真を撮影し、写真上の粒子径を
計測することにより粒子径を求めた。診断薬用粒子の屈折率測定 プロピレングリコールと水を混合することにより種々の
屈折率を持つ溶液を調製し、その屈折率はアッベ屈折計
で測定した。この溶液に診断薬用粒子を0.0１重量％と
なるよう分散し、ナトリウムＤ線により吸光度測定をお
こない、吸光度が最低となる溶液の屈折率を計算によっ
て求め、その粒子の屈折率とした。
に詳しく説明する。なお、以下で「部」とは重量部であ
る。また、得られた診断薬用粒子の粒径および屈折率は
下記のように測定した。診断薬用粒子の粒径測定 診断薬用粒子を室温で３６時間透析してポリマー粒子の
精製した後、常法に従ってコロジオン膜状にのせ透過型
電子顕微鏡により粒子写真を撮影し、写真上の粒子径を
計測することにより粒子径を求めた。診断薬用粒子の屈折率測定 プロピレングリコールと水を混合することにより種々の
屈折率を持つ溶液を調製し、その屈折率はアッベ屈折計
で測定した。この溶液に診断薬用粒子を0.0１重量％と
なるよう分散し、ナトリウムＤ線により吸光度測定をお
こない、吸光度が最低となる溶液の屈折率を計算によっ
て求め、その粒子の屈折率とした。
【００１６】実施例１ ビニルナフタレン６０部、スチレン４０部、水２５０
部、エタノール２５０部、過硫酸カリウム１部、ドデシ
ルベンゼンスルホン酸０．２部の重合処方にて、５Ｌの
攪拌機付ガラスフラスコを用いて、窒素雰囲気下、温度
８０℃、６時間で重合を行い、ポリマー粒子を得た。重
合転化率は９０％以上であった。得られた粒子の粒子径
は３１０ｎｍで、屈折率は１．６４７であった。 実施例２ 冷却管、温度調節器、攪拌装置を備えた１Ｌの４口フラ
スコに水１００部とドデシルベンゼンスルホン酸ナトリ
ウム０．１部及びスチレン１８部、メタクリル酸２部を
入れ、毎分２００回転でかき混ぜながら、次に過硫酸カ
リウム１部を水５０部に溶解して加え、温度が７５度に
なってから２時間反応を行ったのち、スチレン７５部、
メタクリル酸５部とドデシルベンゼンスルホン酸ナトリ
ウム０．６部と水２００部からなる単量体エマルジョン
を５時間掛けて滴下し、引き続き４時間重合を続け、重
合体粒子を得た。この粒子を精製し１０％とした。精製
粒子の平均粒径は０．１５μｍであった。このシード粒
子１００部を上記と同様に４つ口フラスコに入れ、２０
０回転で攪拌しながら７５度に上昇させ、過硫酸カリウ
ム１．５部を水７０部に溶解し他ものを投入し、次に下
記に示す組成の混合単量体９０部を水５００部、ドデシ
ルベンゼンスルホン酸ナトリウム２部と混合した単量体
エマルジョンを５時間掛けて滴下した。得られた粒子径
は約０．３μｍで、固形分は約１５％であった。
部、エタノール２５０部、過硫酸カリウム１部、ドデシ
ルベンゼンスルホン酸０．２部の重合処方にて、５Ｌの
攪拌機付ガラスフラスコを用いて、窒素雰囲気下、温度
８０℃、６時間で重合を行い、ポリマー粒子を得た。重
合転化率は９０％以上であった。得られた粒子の粒子径
は３１０ｎｍで、屈折率は１．６４７であった。 実施例２ 冷却管、温度調節器、攪拌装置を備えた１Ｌの４口フラ
スコに水１００部とドデシルベンゼンスルホン酸ナトリ
ウム０．１部及びスチレン１８部、メタクリル酸２部を
入れ、毎分２００回転でかき混ぜながら、次に過硫酸カ
リウム１部を水５０部に溶解して加え、温度が７５度に
なってから２時間反応を行ったのち、スチレン７５部、
メタクリル酸５部とドデシルベンゼンスルホン酸ナトリ
ウム０．６部と水２００部からなる単量体エマルジョン
を５時間掛けて滴下し、引き続き４時間重合を続け、重
合体粒子を得た。この粒子を精製し１０％とした。精製
粒子の平均粒径は０．１５μｍであった。このシード粒
子１００部を上記と同様に４つ口フラスコに入れ、２０
０回転で攪拌しながら７５度に上昇させ、過硫酸カリウ
ム１．５部を水７０部に溶解し他ものを投入し、次に下
記に示す組成の混合単量体９０部を水５００部、ドデシ
ルベンゼンスルホン酸ナトリウム２部と混合した単量体
エマルジョンを５時間掛けて滴下した。得られた粒子径
は約０．３μｍで、固形分は約１５％であった。
【００１７】
【表１】
【００１８】比較例１ スチレン１００部、水５００部、過硫酸カリウム１部、
ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム０．２部の重合
処方にて、５Ｌの攪拌機付ガラスフラスコを用いて、窒
素雰囲気下、温度８０℃、６時間で重合を行い、ポリマ
ー粒子を得た。重合転化率は９８％以上であった。得ら
れた粒子の粒子径は３１５ｎｍで、屈折率は１．５９で
あった。 比較例２ スチレン１００部、水５００部、過硫酸カリウム１部、
ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム０．１部の重合
処方にて、５Ｌの攪拌機付ガラスフラスコを用いて、窒
素雰囲気下、温度８０℃、６時間で重合を行い、ポリマ
ー粒子を得た。重合転化率は９８％以上であった。得ら
れた粒子の粒子径は４７１ｎｍで、屈折率は１．５９で
あった。
ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム０．２部の重合
処方にて、５Ｌの攪拌機付ガラスフラスコを用いて、窒
素雰囲気下、温度８０℃、６時間で重合を行い、ポリマ
ー粒子を得た。重合転化率は９８％以上であった。得ら
れた粒子の粒子径は３１５ｎｍで、屈折率は１．５９で
あった。 比較例２ スチレン１００部、水５００部、過硫酸カリウム１部、
ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム０．１部の重合
処方にて、５Ｌの攪拌機付ガラスフラスコを用いて、窒
素雰囲気下、温度８０℃、６時間で重合を行い、ポリマ
ー粒子を得た。重合転化率は９８％以上であった。得ら
れた粒子の粒子径は４７１ｎｍで、屈折率は１．５９で
あった。
【００１９】適用例 実施例１、比較例１および２で得られた診断薬用粒子を
遠心分離で精製した後、ＣＲＰ抗体を感作し、０．１％
ＢＳＡを含むＰＢＳ緩衝液で３回遠心洗浄して０．０２
５ｗ／ｖに調整した。この感作診断薬用粒子について、
ＣＲＰ抗原標準液にて検量線を作成した。 装置：日立 ７０２０型自動分析装置 使用波長：６００ｎｍ、測定温度：３７℃ 被検査物質（０〜１ｍｇ／ｄｌのＣＲＰ標準液）：３μ
ｌ 第１試薬（牛血清アルブミン０．１重量％を含むＰＢ
Ｓ）：２００μｌ 第２試薬（感作診断薬用粒子の 重量％ 分散
液）：２００μｌ 測定には、被検査物質、第１試薬、第２試薬の混合攪拌
後、２００秒目の濁度のを計測するエンドポイント法に
て検量線を作成した。
遠心分離で精製した後、ＣＲＰ抗体を感作し、０．１％
ＢＳＡを含むＰＢＳ緩衝液で３回遠心洗浄して０．０２
５ｗ／ｖに調整した。この感作診断薬用粒子について、
ＣＲＰ抗原標準液にて検量線を作成した。 装置：日立 ７０２０型自動分析装置 使用波長：６００ｎｍ、測定温度：３７℃ 被検査物質（０〜１ｍｇ／ｄｌのＣＲＰ標準液）：３μ
ｌ 第１試薬（牛血清アルブミン０．１重量％を含むＰＢ
Ｓ）：２００μｌ 第２試薬（感作診断薬用粒子の 重量％ 分散
液）：２００μｌ 測定には、被検査物質、第１試薬、第２試薬の混合攪拌
後、２００秒目の濁度のを計測するエンドポイント法に
て検量線を作成した。
【００２０】測定例１ 抗ＣＲＰ抗体を感作した実施例１（０．０２５ｗ／ｖ
％）および比較例１の診断薬粒子（０．０２５および
０．０4ｗ／ｖ％）を用いて、上記測定方法に従い測定
し、検量線を作成した。検量線を図１に示す。実施例１
の診断薬用粒子を用いた場合は高感度の測定が可能であ
った。比較例１の診断薬用粒子を用いた場合は、実施例
１に比較して多量の粒子を用いた場合でも、実施例１に
比較して低い感度しか得られなかった。
％）および比較例１の診断薬粒子（０．０２５および
０．０4ｗ／ｖ％）を用いて、上記測定方法に従い測定
し、検量線を作成した。検量線を図１に示す。実施例１
の診断薬用粒子を用いた場合は高感度の測定が可能であ
った。比較例１の診断薬用粒子を用いた場合は、実施例
１に比較して多量の粒子を用いた場合でも、実施例１に
比較して低い感度しか得られなかった。
【００２１】測定例２ 抗ＣＲＰ抗体を感作した実施例１（０．０２５ｗ／ｖ
％）および比較例２の診断薬粒子（０．０２５ｗ／ｖ
％）を用いて、上記測定方法に従い測定し、検量線を作
成した。検量線を図２に示す。実施例１の診断薬用粒子
を用いた場合は高感度の測定が可能であった。比較例１
の診断薬用粒子を用いた場合は、十分な感度が得られな
かった。
％）および比較例２の診断薬粒子（０．０２５ｗ／ｖ
％）を用いて、上記測定方法に従い測定し、検量線を作
成した。検量線を図２に示す。実施例１の診断薬用粒子
を用いた場合は高感度の測定が可能であった。比較例１
の診断薬用粒子を用いた場合は、十分な感度が得られな
かった。
【００２２】診断薬用粒子の分散安定性 上記で感作した実施例１および比較例２の診断薬用粒子
を４℃で１ヶ月間保存し、粒子分散液の状態を黙視にて
確認した。結果を表１に示す。
を４℃で１ヶ月間保存し、粒子分散液の状態を黙視にて
確認した。結果を表１に示す。
【００２３】
【表２】
【００２４】
【発明の効果】本発明の診断薬用粒子および診断薬用試
薬を用いることにより、本発明の診断薬用粒子は屈折率
が1.60以上とポリスチレンの屈折率1.59に比較して屈折
率が高いことが特徴である。さらに、高い屈折率のため
ポリスチレン系ラテックスより小さい粒径でも大きな吸
光度が得られるため、粒子沈降や凝集速度の低下等の問
題がなく、高感度な診断薬を得ることが可能である。
薬を用いることにより、本発明の診断薬用粒子は屈折率
が1.60以上とポリスチレンの屈折率1.59に比較して屈折
率が高いことが特徴である。さらに、高い屈折率のため
ポリスチレン系ラテックスより小さい粒径でも大きな吸
光度が得られるため、粒子沈降や凝集速度の低下等の問
題がなく、高感度な診断薬を得ることが可能である。
【００２５】
【図１】図１は、抗ＣＲＰ抗体を感作した、実施例１お
よび比較例１の診断薬用粒子を用いて、ＣＲＰ抗原を測
定した検量線である。
よび比較例１の診断薬用粒子を用いて、ＣＲＰ抗原を測
定した検量線である。
【図２】図２は、抗ＣＲＰ抗体を感作した、実施例１お
よび比較例２の診断薬用粒子を用いて、ＣＲＰ抗原を測
定した検量線である。
よび比較例２の診断薬用粒子を用いて、ＣＲＰ抗原を測
定した検量線である。
フロントページの続き (72)発明者 笠井 澄 東京都中央区築地二丁目11番24号ジェイエ スアール株式会社内 Ｆターム(参考） 4J100 AB00P AB02Q AB03Q AB04Q AB07Q AB08P AB16P AB16Q AF06Q AG04Q AJ01Q AJ02Q AJ08Q AJ09Q AL03Q AL08P AP01P AQ06P AQ28P AR09P BA51P BA56Q BB01P BB03P BC43P BC49P BC83P CA04 CA05 JA53
Claims (4)
- 【請求項１】 ナトリウムＤ線で測定した屈折率が1.6
以上のポリマーから構成され、数平均粒子径が0.02〜0.
5μmであることを特徴とする診断薬用粒子。 - 【請求項２】 ポリマーが（ａ）芳香族ビニルモノマー
と（ｂ）そのホモポリマーのナトリウムＤ線で測定した
屈折率が1.60以上となるモノマーとの共重合体であるこ
とを特徴とする請求項１記載の診断薬用粒子。 - 【請求項３】 抗原または抗体を担持してなる請求項１
記載の診断薬用粒子。 - 【請求項４】 抗原または抗体を担持してなる請求項１
〜２記載及び請求項３の診断薬用粒子と検体を混合し、
前記粒子の凝集から検体中の被検査物質を定量すること
を特徴とする免疫比濁測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000115138A JP2001296299A (ja) | 2000-04-17 | 2000-04-17 | 診断薬用粒子および免疫比濁方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000115138A JP2001296299A (ja) | 2000-04-17 | 2000-04-17 | 診断薬用粒子および免疫比濁方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001296299A true JP2001296299A (ja) | 2001-10-26 |
Family
ID=18626839
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000115138A Pending JP2001296299A (ja) | 2000-04-17 | 2000-04-17 | 診断薬用粒子および免疫比濁方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001296299A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012133771A1 (ja) | 2011-03-31 | 2012-10-04 | 積水メディカル株式会社 | 測定試薬用ラテックス粒子、感作ラテックス粒子及び免疫比濁法用測定試薬 |
| WO2018062557A1 (ja) * | 2016-09-30 | 2018-04-05 | 積水化学株式会社 | 測定試薬用ラテックス粒子、感作ラテックス粒子及び免疫比濁法用測定試薬 |
| WO2018216784A1 (ja) | 2017-05-24 | 2018-11-29 | 積水化学工業株式会社 | 測定試薬用ラテックス粒子、感作ラテックス粒子及び免疫比濁法用測定試薬 |
-
2000
- 2000-04-17 JP JP2000115138A patent/JP2001296299A/ja active Pending
Cited By (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10048268B2 (en) | 2011-03-31 | 2018-08-14 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Latex particle for measurement reagent, coated latex particle, and measurement reagent for immunoturbidimetric method |
| CN103460046B (zh) * | 2011-03-31 | 2016-08-03 | 积水医疗株式会社 | 测定试剂用胶乳粒子、致敏胶乳粒子及免疫比浊法用测定试剂 |
| CN103460046A (zh) * | 2011-03-31 | 2013-12-18 | 积水医疗株式会社 | 测定试剂用胶乳粒子、致敏胶乳粒子及免疫比浊法用测定试剂 |
| EP2693214A1 (en) * | 2011-03-31 | 2014-02-05 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Latex particle for measurement reagent, sensitized latex particle, and measurement reagent for immunonephelometry |
| WO2012133771A1 (ja) | 2011-03-31 | 2012-10-04 | 積水メディカル株式会社 | 測定試薬用ラテックス粒子、感作ラテックス粒子及び免疫比濁法用測定試薬 |
| EP2693214A4 (en) * | 2011-03-31 | 2014-12-03 | Sekisui Medical Co Ltd | LATEX PARTICLE FOR MEASUREMENT REAGENT, SENSITIZED LATEX PARTICLE, AND MEASUREMENT REAGENT FOR IMMUNO-NEPHELOMETRY |
| JP5170806B2 (ja) * | 2011-03-31 | 2013-03-27 | 積水メディカル株式会社 | 測定試薬用ラテックス粒子、感作ラテックス粒子及び免疫比濁法用測定試薬 |
| KR20140030164A (ko) | 2011-03-31 | 2014-03-11 | 세키스이 메디칼 가부시키가이샤 | 측정 시약용 라텍스 입자, 감작 라텍스 입자 및 면역 비탁법용 측정 시약 |
| WO2018062557A1 (ja) * | 2016-09-30 | 2018-04-05 | 積水化学株式会社 | 測定試薬用ラテックス粒子、感作ラテックス粒子及び免疫比濁法用測定試薬 |
| JPWO2018062557A1 (ja) * | 2016-09-30 | 2019-08-29 | 積水化学工業株式会社 | 測定試薬用ラテックス粒子、感作ラテックス粒子及び免疫比濁法用測定試薬 |
| WO2018216784A1 (ja) | 2017-05-24 | 2018-11-29 | 積水化学工業株式会社 | 測定試薬用ラテックス粒子、感作ラテックス粒子及び免疫比濁法用測定試薬 |
| CN110637232A (zh) * | 2017-05-24 | 2019-12-31 | 积水化学工业株式会社 | 测定试剂用胶乳粒子、致敏胶乳粒子及免疫比浊法用测定试剂 |
| JPWO2018216784A1 (ja) * | 2017-05-24 | 2020-03-26 | 積水化学工業株式会社 | 測定試薬用ラテックス粒子、感作ラテックス粒子及び免疫比濁法用測定試薬 |
| JP7161213B2 (ja) | 2017-05-24 | 2022-10-26 | 積水メディカル株式会社 | 測定試薬用ラテックス粒子、感作ラテックス粒子及び免疫比濁法用測定試薬 |
| CN110637232B (zh) * | 2017-05-24 | 2023-08-18 | 积水医疗株式会社 | 测定试剂用胶乳粒子、致敏胶乳粒子及免疫比浊法用测定试剂 |
| US11867694B2 (en) | 2017-05-24 | 2024-01-09 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Latex particles for measurement reagents, sensitized latex particles, and measurement reagent for turbidimetric immunoassay |
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