JPWO2018062557A1 - 測定試薬用ラテックス粒子、感作ラテックス粒子及び免疫比濁法用測定試薬 - Google Patents
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Abstract
ジナフトチオフェン及びその誘導体の少なくともいずれか一方からなる成分（Ａ）と、成分（Ａ）を内包する基材成分（Ｂ）と、を備える測定試薬用ラテックス粒子。測定試薬用ラテックス粒子によれば、被検物質の濃度が希薄な測定試料を測定する場合であっても高感度な測定が可能である。
Description
本発明は、被検物質の濃度が希薄な測定試料を測定する場合であっても高感度な測定を可能にする測定試薬用ラテックス粒子に関する。
臨床検査をはじめとする種々の分野において、測定試料中の微量な被検物質を定量する方法として、抗原抗体反応を利用した免疫学的測定法が広く使用されている。なかでもラテックス粒子を抗原又は抗体の担体として用いたラテックス免疫比濁法は、臨床検査に用いられる生化学自動分析装置への適用が可能であり、操作が簡便で、かつ、測定に要する時間が短いため、多数の測定試料について、多種の被検物質の測定を迅速に行うことができる。そのため、測定方法としてラテックス免疫比濁法を採用する微量被検物質の種類が更に増加している。
ラテックス免疫比濁法による測定試料中の抗原又は抗体等の被検物質の定量は、抗原又は抗体を担持したラテックス粒子（以下、「感作ラテックス粒子」ともいう。）の凝集により生ずる吸光度の変化を光学的に検出することにより行われる。この吸光度の変化は、感作ラテックス粒子の凝集によって形成される凝集塊に由来する見かけの粒子径の変化に基づくものである。
従来、ラテックス免疫比濁法において担体として用いられるラテックス粒子には、抗原又は抗体の粒子表面への感作（固定化）が容易であり、比較的安価で、かつ重合反応も制御しやすいことから、ポリスチレンを主成分とするポリスチレン系ラテックス粒子が用いられてきた（特許文献１等）。しかし、ポリスチレン系ラテックス粒子をラテックス免疫比濁法における担体として用いた場合、測定試料中の被検物質の濃度が希薄であると、形成される凝集塊の数が少なくなり、また、凝集塊の見かけの粒子径もラテックス粒子数に対する被検物質の濃度が適当な範囲である場合に比べ小さくなることから、十分な感度が得られないという問題があった。
そこで、被検物質の濃度が希薄な場合において低下する測定感度を向上させることを目的として、形成される凝集塊の見かけの粒子径が大きくなるように、ポリスチレン系ラテックスの粒子径を大きくすることが試みられている。
しかしながら、ラテックス粒子の粒子径を大きくしすぎると、使用する光学測定機器における測定可能な吸光度上限との関係から、反応液中における感作ラテックス粒子の濃度を使用する光学的測定機器に適合するように低く調整する必要が生じる。反応液中の感作ラテックス粒子の濃度を低くすると、一定時間内に感作ラテックス粒子と被検物質とが出会う確率が低下してしまい、期待した測定感度の向上が得られないことがしばしば発生した。また、担体となるラテックス粒子の粒子径を大きくするとラテックス粒子が沈降しやすくなり、感作ラテックス粒子を含む測定試薬を溶液状態で保存する場合に保存安定性が低下してしまうことがあった。
このようにポリスチレン系ラテックス粒子の粒子径を大きくする方法では、一定の大きさまでは測定感度の向上が見込めるものの、当該一定の大きさを超えて粒子径を大きくすると、かえって測定感度の低下を招いたり、測定試薬の保存安定性に問題が生じたりするという問題があった。
しかしながら、ラテックス粒子の粒子径を大きくしすぎると、使用する光学測定機器における測定可能な吸光度上限との関係から、反応液中における感作ラテックス粒子の濃度を使用する光学的測定機器に適合するように低く調整する必要が生じる。反応液中の感作ラテックス粒子の濃度を低くすると、一定時間内に感作ラテックス粒子と被検物質とが出会う確率が低下してしまい、期待した測定感度の向上が得られないことがしばしば発生した。また、担体となるラテックス粒子の粒子径を大きくするとラテックス粒子が沈降しやすくなり、感作ラテックス粒子を含む測定試薬を溶液状態で保存する場合に保存安定性が低下してしまうことがあった。
このようにポリスチレン系ラテックス粒子の粒子径を大きくする方法では、一定の大きさまでは測定感度の向上が見込めるものの、当該一定の大きさを超えて粒子径を大きくすると、かえって測定感度の低下を招いたり、測定試薬の保存安定性に問題が生じたりするという問題があった。
これに対して特許文献２及び特許文献３では、ビニルナフタレンとスチレンを共重合させることによって、製造されるラテックス粒子の屈折率を高めることにより、粒子径を大きくせずに、測定感度の向上を図る方法が開示されている。
しかしながら、特許文献２及び特許文献３に記載されたラテックス粒子を用いた場合でも、ビニルナフタレン−スチレン共重合体ラテックス粒子（以下、「ビニルナフタレン系ラテックス粒子」ともいう。）の屈折率（ｎ＝１．６４）は、ポリスチレン系ラテックス粒子の屈折率（ｎ＝１．５８）に対して大きく差が有るものではないため、実際に合成したラテックス粒子の吸光度について十分な増加が見られず、期待する測定感度が得られないという問題があった。
本発明は、被検物質の濃度が希薄な測定試料を測定する場合であっても高感度な測定を可能にする測定試薬用ラテックス粒子を提供することを目的とする。
本発明は、被検物質の濃度が希薄な測定試料を測定する場合であっても高感度な測定を可能にする測定試薬用ラテックス粒子を提供することを目的とする。
本発明者らは、鋭意検討した結果、新規の高屈折率材料を用いることで、例えばソープフリー乳化重合法、シード重合法、シード膨潤法等、水中で当該新規の高屈折率材料をラテックス粒子に含有させる方法を利用して、粒子の粒子径のＣＶ値を損ねることなく、粒子の吸光度を大きく向上させ、被検物質の濃度が希薄な測定試料を測定する場合であっても高感度な測定を可能にする測定試薬用ラテックス粒子が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。
本発明は以下の内容に関する。
（１）ジナフトチオフェン及びその誘導体の少なくともいずれか一方からなる成分（Ａ）と、成分（Ａ）を内包する基材成分（Ｂ）と、を備える測定試薬用ラテックス粒子。
（２）成分（Ｂ）として、スチレン及びビニルナフタレンの少なくともいずれか一方を含む（１）に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
（３）成分（Ａ）に対する成分（Ｂ）の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が、１．０〜９．０である（１）又は（２）に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
（４）ジナフトチオフェン誘導体が、次式で示される（１）から（３）のいずれか１つに記載の測定試薬用ラテックス粒子。
（式中、Ｒ１、Ｒ2は水素原子を表すか、又は、ハロゲン原子、ホルミル基、炭素原子数１〜３のアルキル基、ビニル基、アリル基、（メタ）アクリロイルオキシアルキレン基；当該アルキレン部分は直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１〜３のアルキレン鎖で構成される、を表す。
Ｒ３、Ｒ４は水素原子を表すか、又は、メトキシ基、エトキシ基、水酸基、末端に水酸基、ビニル基、エポキシ基、又は（メタ）アクリロイルオキシ基、のいずれかを有する炭素数１〜３のアルコキシ基を表す。
Ｒ１、Ｒ2、Ｒ３、Ｒ４は互いに独立して水酸原子または上記置換基を表す。）
（５）Ｒ１、Ｒ2が共に水素原子を表す場合、Ｒ３、Ｒ４が共に、メトキシ基、エトキシ基、水酸基、末端に水酸基、ビニル基、エポキシ基、又は（メタ）アクリロイルオキシ基、のいずれかを有する炭素数１〜３のアルコキシ基を表し；Ｒ３、Ｒ４が共に水素原子を表す場合、Ｒ１、Ｒ2の一方が水素原子を表し、他方がハロゲン原子、ホルミル基、炭素原子数１〜３のアルキル基、ビニル基、アリル基、（メタ）アクリロイルオキシアルキレン基；当該アルキレン部分は直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１〜３のアルキレン鎖で構成される、を表す、（４）に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
（６）（メタ）アクリロイルオキシアルキレン基；当該アルキレン部分は直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１〜３のアルキレン鎖で構成される、が、次式で表される基である（５）に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
（式中、Ｒは直鎖状又は分枝鎖状のアルキレン鎖を表し、ｍは１〜３の整数を表す。）
（７）Ｒ１、Ｒ2は、一方が水素原子を表し、他方が炭素原子数１〜３のアルキル基、ビニル基、アリル基、次式（ｂ１−１）、（ｂ１−２）、（ｂ２−１）又は（ｂ２−２）で表される基である（５）に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
（８）Ｒ３、Ｒ４が、水酸基を表すか、又は次式で表される基のいずれかを表す（５）に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
（９）（１）から（８）のいずれか１つに記載の測定試薬用ラテックス粒子に、被検物質と特異的に結合する物質を担持させた感作ラテックス粒子。
（１０）（９）に記載の感作ラテックス粒子が緩衝液中に分散している免疫比濁法用測定試薬。
（１）ジナフトチオフェン及びその誘導体の少なくともいずれか一方からなる成分（Ａ）と、成分（Ａ）を内包する基材成分（Ｂ）と、を備える測定試薬用ラテックス粒子。
（２）成分（Ｂ）として、スチレン及びビニルナフタレンの少なくともいずれか一方を含む（１）に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
（３）成分（Ａ）に対する成分（Ｂ）の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が、１．０〜９．０である（１）又は（２）に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
（４）ジナフトチオフェン誘導体が、次式で示される（１）から（３）のいずれか１つに記載の測定試薬用ラテックス粒子。
Ｒ３、Ｒ４は水素原子を表すか、又は、メトキシ基、エトキシ基、水酸基、末端に水酸基、ビニル基、エポキシ基、又は（メタ）アクリロイルオキシ基、のいずれかを有する炭素数１〜３のアルコキシ基を表す。
Ｒ１、Ｒ2、Ｒ３、Ｒ４は互いに独立して水酸原子または上記置換基を表す。）
（５）Ｒ１、Ｒ2が共に水素原子を表す場合、Ｒ３、Ｒ４が共に、メトキシ基、エトキシ基、水酸基、末端に水酸基、ビニル基、エポキシ基、又は（メタ）アクリロイルオキシ基、のいずれかを有する炭素数１〜３のアルコキシ基を表し；Ｒ３、Ｒ４が共に水素原子を表す場合、Ｒ１、Ｒ2の一方が水素原子を表し、他方がハロゲン原子、ホルミル基、炭素原子数１〜３のアルキル基、ビニル基、アリル基、（メタ）アクリロイルオキシアルキレン基；当該アルキレン部分は直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１〜３のアルキレン鎖で構成される、を表す、（４）に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
（６）（メタ）アクリロイルオキシアルキレン基；当該アルキレン部分は直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１〜３のアルキレン鎖で構成される、が、次式で表される基である（５）に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
（７）Ｒ１、Ｒ2は、一方が水素原子を表し、他方が炭素原子数１〜３のアルキル基、ビニル基、アリル基、次式（ｂ１−１）、（ｂ１−２）、（ｂ２−１）又は（ｂ２−２）で表される基である（５）に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
（１０）（９）に記載の感作ラテックス粒子が緩衝液中に分散している免疫比濁法用測定試薬。
本発明によれば、被検物質の濃度が希薄な測定試料であっても高感度な測定を可能にする測定試薬用ラテックス粒子を提供することができる。本発明の測定試薬用ラテックス粒子は、従来のポリスチレン系ラテックス粒子やビニルナフタレン系ラテックス粒子に対して、粒子径は同程度のまま、粒子表面におけるタンパク質の吸着量を低下させることなく、希薄濃度域における被検物質の測定感度を向上させることができる。また、本発明の測定試薬用ラテックス粒子を用いれば、粒子の沈降による測定試薬の保存安定性の低下がなく、高感度な測定試薬を得ることが可能になる。
以下に、実施形態を挙げて本発明の説明を行うが、本発明は以下の実施形態に限定されるものではない。
［測定試薬用ラテックス粒子］
［測定試薬用ラテックス粒子］
本発明は、ジナフトチオフェン及びその誘導体の少なくともいずれか一方からなる成分（Ａ）と、成分（Ａ）を内包する基材成分（Ｂ）と、を備える測定試薬用ラテックス粒子に関する。
ジナフトチオフェンは屈折率（ｎ633）が１．８程度と非常に高いことから、基材成分（Ｂ）中に包含させることにより、高い吸光度のラテックス粒子が得られるため、当該ラテックス粒子を測定試薬用ラテックス粒子として使用すれば、被検物質の濃度が希薄な測定試料を測定する場合であっても高感度な測定が可能になる。
ジナフトチオフェンは屈折率（ｎ633）が１．８程度と非常に高いことから、基材成分（Ｂ）中に包含させることにより、高い吸光度のラテックス粒子が得られるため、当該ラテックス粒子を測定試薬用ラテックス粒子として使用すれば、被検物質の濃度が希薄な測定試料を測定する場合であっても高感度な測定が可能になる。
成分（Ｂ）としては、スチレン及びビニルナフタレンの少なくともいずれか一方を含むことが好ましい。被検物質と特異的に結合する物質を担持させやすくなるからである。
スチレンとしては、スチレン系ラテックス粒子の製造に用いられる、公知のスチレンであれば、特に限定されることなく使用できる。例えば、スチレン、ｏ−メチルスチレン、ｐ−メチルスチレン、ｐ−クロロスチレン、スチレンスルホン酸塩、ｏ−メチルスチレンスルホン酸塩、ｐ−メチルスチレンスルホン酸塩、ｐ−クロロスチレンスルホン酸塩等、公知のスチレンを使用することができる。また、塩としても、特に限定されることはなく、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩等を使用することができる。本明細書において「スチレン」の語は、スチレンそれ自体と、スチレン系ラテックス粒子の製造に用いられる公知のスチレン類を総称する意味の両方で用いている。
ビニルナフタレンとしては、１−ビニルナフタレン、２−ビニルナフタレンのいずれも使用することができる。本明細書において「ビニルナフタレン」の語は、特にことわらない限り、２種のビニルナフタレンを総称する意味で用いている。
ジナフトチオフェン及びその誘導体は、嵩高い構造を備えることに起因して、基材成分（Ｂ）中に内包させることが困難であった。そこで、本発明者等は研究の結果、所定の置換基で置換されたジナフトチオフェン誘導体を用いることで、基材成分（Ｂ）中に包含させ易くなることを知見した。
ジナフトチオフェン誘導体としては、例えば、次式で示されるものを用いることができる。
（式中、Ｒ１、Ｒ2は水素原子を表すか、又は、ハロゲン原子、ホルミル基、炭素原子数１〜３のアルキル基、ビニル基、アリル基、（メタ）アクリロイルオキシアルキレン基；当該アルキレン部分は直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１〜３のアルキレン鎖で構成される、を表す。
Ｒ３、Ｒ４は水素原子を表すか；又は、メトキシ基、エトキシ基、水酸基、末端に水酸基、ビニル基、エポキシ基、又は、（メタ）アクリロイルオキシ基、のいずれかを有する炭素数１〜３のアルコキシ基、を表す。
Ｒ１、Ｒ2、Ｒ３、Ｒ４は互いに独立して水素原子または上記置換基を表す。）
なお、本明細書において、「ホルミル基」は、−ＣＨＯの構造を、又、「（メタ）アクリロイルオキシ基」は、アクリロイルオキシ基又はメタクリロイルオキシ基を表す。
ジナフトチオフェン誘導体としては、例えば、次式で示されるものを用いることができる。
Ｒ３、Ｒ４は水素原子を表すか；又は、メトキシ基、エトキシ基、水酸基、末端に水酸基、ビニル基、エポキシ基、又は、（メタ）アクリロイルオキシ基、のいずれかを有する炭素数１〜３のアルコキシ基、を表す。
Ｒ１、Ｒ2、Ｒ３、Ｒ４は互いに独立して水素原子または上記置換基を表す。）
なお、本明細書において、「ホルミル基」は、−ＣＨＯの構造を、又、「（メタ）アクリロイルオキシ基」は、アクリロイルオキシ基又はメタクリロイルオキシ基を表す。
上述のジナフトチオフェン誘導体の中でも、Ｒ１、Ｒ2が共に水素原子を表す場合、Ｒ３、Ｒ４が共に、メトキシ基、エトキシ基、水酸基、末端に水酸基、ビニル基、エポキシ基、（メタ）アクリロイルオキシ基、のいずれかを有する炭素数１〜３のアルコキシ基を表し、Ｒ３、Ｒ４が共に水素原子を表す場合、Ｒ１、Ｒ２の一方が水素原子を表し、他方がハロゲン原子、ホルミル基、炭素原子数１〜３のアルキル基、ビニル基、アリル基、（メタ）アクリロイルオキシアルキレン基；当該アルキレン部分は直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１〜３のアルキレン鎖で構成される、を表すことが好ましい。基材成分（Ｂ）中に成分（Ａ）を内包させやすくなるからである。
（メタ）アクリロイルオキシアルキレン基；当該アルキレン部分は直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１〜３のアルキレン鎖で構成される、としては、例えば、次式（ｂ１）又は（ｂ２）で表される基を用いることができる。
（式中、Ｒは直鎖状又は分枝鎖状のアルキレン鎖を表し、ｍは１〜３の整数を表す。）
Ｒ１、Ｒ２は、一方が水素原子を表し、他方が炭素原子数１〜３のアルキル基、ビニル基、アリル基、式（ｂ１−１）で表されるメタクリロイルオキシメチレン基、式（ｂ１−２）で表されるメタクリロイルオキシエチリデン基、式（ｂ２−１）で表されるアクリロイルオキシメチレン基又は式（ｂ２−２）で表されるメタクリロイルオキシエチリデン基であることが好ましい。
またＲ３、Ｒ４は、水酸基を表すか、又は次式で表されるメトキシ基（ｂ３）、２−ヒドロキシエタノール基（ｂ４）、２−アリルオキシ基（ｂ５）、グリシジルオキシ基（ｂ６）、２−メタクリロイルオキシエトキシ基（ｂ７）のいずれかであることが好ましい。
ここで、ジナフトチオフェン誘導体において、置換基が導入される位置番号を以下の通りとすると、Ｒ１が６位、Ｒ２が８位に導入されることが好ましく、Ｒ３が１１位又は１２位、Ｒ４が２位又は３位に導入されることが好ましい。
Ｒ３、Ｒ４が共に水素原子でない場合、Ｒ３が１１位、Ｒ４が３位に導入されるか、又はＲ３が１２位、Ｒ４が２位に導入されることが好ましい。
Ｒ３、Ｒ４が共に水素原子でない場合、Ｒ３が１１位、Ｒ４が３位に導入されるか、又はＲ３が１２位、Ｒ４が２位に導入されることが好ましい。
ジナフトチオフェン及びその誘導体は特に制限されないが、具体例としては、構造式（ａ１）〜（ａ１８）で表されるものを用いることができる。これらは単独で用いてもよく、２種類以上を併用しても良い。
なお、下記構造を繰り返し単位として含む重合体を測定試薬用ラテックス粒子を製造する際の成分（Ａ）として用いてもよいが、後述する有機溶媒への溶解性等の観点からは、単量体で用いることが好ましい。念のための付言であるが、前記記載は、例えばシード重合法などによりジナフトチオフェン誘導体の単量体を種粒子内で重合させ、結果として成分（Ａ）が重合体としてラテックス粒子に内包されていることと矛盾するものではない。
なお、下記構造を繰り返し単位として含む重合体を測定試薬用ラテックス粒子を製造する際の成分（Ａ）として用いてもよいが、後述する有機溶媒への溶解性等の観点からは、単量体で用いることが好ましい。念のための付言であるが、前記記載は、例えばシード重合法などによりジナフトチオフェン誘導体の単量体を種粒子内で重合させ、結果として成分（Ａ）が重合体としてラテックス粒子に内包されていることと矛盾するものではない。
なお、上記構造式（ａ１）〜（ａ１８−２）のそれぞれの名称を列記する。
式（ａ１）：ジナフトチオフェン、
式（ａ２）：６−ホルミル−ジナフトチオフェン、
式（ａ３）：６−ビニル−ジナフトチオフェン、
式（ａ４−１）：６−メタクリロイルオキシメチル−ジナフトチオフェン、
式（ａ５−１）：６−メタクリロイルオキシエチリデン−ジナフトチオフェン、
式（ａ６）：６−メチル−ジナフトチオフェン、
式（ａ７）：６−エチル−ジナフトチオフェン、
式（ａ８）：５,９−ジブロロ−ジナフトチオフェン、
式（ａ９）：２，１２−ジメトキシ−ジナフトチオフェン、
式（ａ１０）：２，１２−ジヒドロキシ−ジナフトチオフェン、
式（ａ１１）：２，１２−ジ（２−ヒドロキシエトキシ）−ジナフトチオフェン、
式（ａ１２）：２，１２−ジ（２−アリルオキシ）−ジナフトチオフェン、
式（ａ１３）：３，１１−ジ（２−ヒドロキシエトキシ）−ジナフトチオフェン、
式（ａ１４）：３，１１−ジ（２−アリルオキシ）−ジナフトチオフェン、
式（ａ１５）：２，１２−ジグリシジルオキシ−ジナフトチオフェン、
式（ａ１６−１）：２，１２−ジ（２−メタクリロイルオキシエトキシ）−ジナフトチオフェン、
式（ａ１７）：３，１１−ジグリシジルオキシ−ジナフトチオフェン、
式（ａ１８−１）：３，１１−ジ（２−メタクリロイルオキシエトキシ）−ジナフトチオフェン
式（ａ４−２）：６−アクリロイルオキシメチル−ジナフトチオフェン、
式（ａ５−２）：６−アクリロイルオキシエチリデン−ジナフトチオフェン、
式（ａ１６−２）：２，１２−ジ（２−アクリロイルオキシエトキシ）−ジナフトチオフェン、
式（ａ１８−２）：３，１１−ジ（２−アクリロイルオキシエトキシ）−ジナフトチオフェン。
式（ａ１）：ジナフトチオフェン、
式（ａ２）：６−ホルミル−ジナフトチオフェン、
式（ａ３）：６−ビニル−ジナフトチオフェン、
式（ａ４−１）：６−メタクリロイルオキシメチル−ジナフトチオフェン、
式（ａ５−１）：６−メタクリロイルオキシエチリデン−ジナフトチオフェン、
式（ａ６）：６−メチル−ジナフトチオフェン、
式（ａ７）：６−エチル−ジナフトチオフェン、
式（ａ８）：５,９−ジブロロ−ジナフトチオフェン、
式（ａ９）：２，１２−ジメトキシ−ジナフトチオフェン、
式（ａ１０）：２，１２−ジヒドロキシ−ジナフトチオフェン、
式（ａ１１）：２，１２−ジ（２−ヒドロキシエトキシ）−ジナフトチオフェン、
式（ａ１２）：２，１２−ジ（２−アリルオキシ）−ジナフトチオフェン、
式（ａ１３）：３，１１−ジ（２−ヒドロキシエトキシ）−ジナフトチオフェン、
式（ａ１４）：３，１１−ジ（２−アリルオキシ）−ジナフトチオフェン、
式（ａ１５）：２，１２−ジグリシジルオキシ−ジナフトチオフェン、
式（ａ１６−１）：２，１２−ジ（２−メタクリロイルオキシエトキシ）−ジナフトチオフェン、
式（ａ１７）：３，１１−ジグリシジルオキシ−ジナフトチオフェン、
式（ａ１８−１）：３，１１−ジ（２−メタクリロイルオキシエトキシ）−ジナフトチオフェン
式（ａ４−２）：６−アクリロイルオキシメチル−ジナフトチオフェン、
式（ａ５−２）：６−アクリロイルオキシエチリデン−ジナフトチオフェン、
式（ａ１６−２）：２，１２−ジ（２−アクリロイルオキシエトキシ）−ジナフトチオフェン、
式（ａ１８−２）：３，１１−ジ（２−アクリロイルオキシエトキシ）−ジナフトチオフェン。
上述のジナフトチオフェン及び／又はジナフトチオフェン誘導体は常温で固体であるため、粒子の製造に用いる際には有機溶媒に溶解させる必要がある。このとき、有機溶媒への溶解性が高い材料ほどラテックス粒子への含有率を高めることが出来、最終的に（Ａ）及び（Ｂ）から構成される粒子の吸光度を向上させることが出来る。
このような有機溶媒への溶解性の観点からは、上述の式（ａ１）〜式（ａ１８−２）の化合物の中でも、酢酸エチル５０ｇに２５℃で１ｇ以上溶解することができる6VDNpTh：式（ａ３）、DNTMA：式（ａ４−１）、EDNTMA：式（ａ５−１）、6MeDNT：式（ａ６）、6EDNT：式（ａ７）、DODNT：式（ａ１０）、DAODNT：式（ａ１２）、3,11-DAODNT：式（ａ１４）、DGODNT：式（ａ１５）、3,11-DGODNT：式（ａ１７）が好ましく、酢酸エチル３０ｇに２５℃で１ｇ以上溶解することができる6VDNpTh：式（ａ３）、DNTMA：式（ａ４）、EDNTMA：式（ａ５）、6MeDNT：式（ａ６）、6EDNT：式（ａ７）がより好ましい。
このような有機溶媒への溶解性の観点からは、上述の式（ａ１）〜式（ａ１８−２）の化合物の中でも、酢酸エチル５０ｇに２５℃で１ｇ以上溶解することができる6VDNpTh：式（ａ３）、DNTMA：式（ａ４−１）、EDNTMA：式（ａ５−１）、6MeDNT：式（ａ６）、6EDNT：式（ａ７）、DODNT：式（ａ１０）、DAODNT：式（ａ１２）、3,11-DAODNT：式（ａ１４）、DGODNT：式（ａ１５）、3,11-DGODNT：式（ａ１７）が好ましく、酢酸エチル３０ｇに２５℃で１ｇ以上溶解することができる6VDNpTh：式（ａ３）、DNTMA：式（ａ４）、EDNTMA：式（ａ５）、6MeDNT：式（ａ６）、6EDNT：式（ａ７）がより好ましい。
上記有機溶剤としては特に限定されず、例えば、ドデカン、デカン、イソドデカン、ノナン、ｎ−ヘキシルエーテル、オクタン、イソオクタン、シクロオクタン、ジフェニルエーテル、ヘキサン、ベンゼン、プロピルベンゼン、ｏージクロロベンゼン、エチルベンゼン、ｐ−キシレン、トルエン、ジエチルエーテル、クロロホルム、酢酸エチル、酢酸ブチル、四塩化炭素、イソプロピルエーテル、塩化メチレン、シクロヘキサン、テトラヒドロフラン、アセトン、アセトニトリル、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、酢酸、１−ブタノール、２−プロパノール、１−プロパノール、メタノール、ギ酸、メチルエチルケトン、ジオキサン、エチレングリコール等が挙げられる。好ましくは疎水性有機溶媒である、ドデカン、デカン、イソドデカン、ノナン、ｎ−ヘキシルエーテル、オクタン、イソオクタン、シクロオクタン、ジフェニルエーテル、ヘキサン、ベンゼン、プロピルベンゼン、ｏージクロロベンゼン、エチルベンゼン、ｐ−キシレン、トルエン、ジエチルエーテル、クロロホルム、酢酸エチル、酢酸ブチル、四塩化炭素、イソプロピルエーテル、塩化メチレン、シクロヘキサンが挙げられる。
上記（Ａ）の含有率は特には限定されないが、上記粒子の全質量基準で１０質量％以上５０質量％以下が好ましい。上記（Ａ）の含有量が１０質量％以上の場合には、粒子の屈折率を十分に高めることができ、吸光度が高くなり望ましい。好ましくは、１０質量％以上４０質量％以下であり、より好ましくは、１５質量％以上４０質量％以下である。また、上記（Ａ）の含有率が５０質量％を超えると粒子の比重が高くなり、ラテックス粒子の分散安定性が著しく低くなる。
上記（Ｂ）としては、スチレン、ビニルナフタレン、及びその両方からなる群から選択される少なくとも１種の単量体が（共）重合した合成高分子を用いることが出来る。本発明はラテックス粒子の屈折率を高めることで、被検物質の濃度が希薄な測定試料を測定する場合であっても高い吸光度を得ることが出来、高感度な測定を可能にする。従って、本発明粒子を構成する上記（Ｂ）にも高い屈折率が求められる。また、感作ラテックス粒子として用いる場合、粒子表面に抗体等を結合させる必要があり、スチレン、又はビニルナフタレン、又はその両方からなる合成高分子はこの条件を満たすものである。上記（Ｂ）として好ましくは、より高い屈折率を有するビニルナフタレンである。
上記（Ｂ）の含有率は特には限定されないが、上記粒子の全質量基準で５０質量％以上９０質量％以下が好ましい。上記（Ｂ）の含有率が９０質量％より高いと、粒子の屈折率を十分に高めることが出来ず、期待する吸光度増加が得られない。また、上記（Ｂ）の含有率が５０質量％未満だと粒子の比重が高くなり、ラテックス粒子の分散安定性が著しく低くなる。
本発明の測定試薬用ラテックスは、上記（Ａ）及び上記（Ｂ）の配合比（Ｂ）／（Ａ）を所定の範囲とすることで、比重の増加を抑え、高い屈折率と吸光度を得ることが可能となる。上記（Ｂ）／（Ａ）の好ましい上限は９．０、好ましい下限は１．０である。より好ましい上限は７．５、より好ましい下限は１．５である。さらに好ましい上限は７．０である。
本発明の測定試薬用ラテックス粒子は更に重合性不飽和単量体を含有してもよい。上記重合性不飽和単量体としては、通常のラジカル重合に使用できるものであれば特に限定されず、例えば（メタ）アクリル酸、（メタ）アクリロニトリル、（メタ）アクリル酸アミド、ハロゲン化ビニル、ビニルエステル、（メタ）アクロレイン、マレイン酸誘導体、フマル酸誘導体等が挙げられる。なお、本明細書において（メタ）アクリル酸とは、アクリル酸又はメタクリル酸を意味する。
本発明の測定試薬用ラテックス粒子に更に上記重合性不飽和単量体を含有させる場合には、上記重合性不飽和単量体の含有率の好ましい上限は５質量％である。上記重合性不飽和単量体の含有率が５質量％を超えると、粒子の屈折率を十分に高めることが出来ず、期待する吸光度増加が得られないことがある。上記重合性不飽和単量体の好ましい下限は特に限定されず、ラテックス粒子の硬さ、弾性、耐水性当、制御したい性質により異なり、実験を通じる等して適宜設定することが出来る。
本発明の測定試薬用ラテックス粒子の製造方法としては特に限定はされず、懸濁重合法、乳化重合法、ソープフリー重合法、シード重合法、分散重合法等の従来公知の重合法が挙げられ、いずれの重合法であってもよいが、好ましくは水中で行なえ、均一粒径の粒子を得ることが可能な、乳化重合法、ソープフリー重合法、シード重合法が良い。更に好ましくは、非反応性材料でも粒子に内包することが可能なシード重合法が良い。
上記シード重合法による本発明の測定試薬用ラテックス粒子の製造例としては、水性媒体中に、上記（Ｂ）を用いて予め合成した種粒子と、上記（Ａ）及び重合開始剤を上記有機溶剤に溶解させた溶液を混合したのち、１２〜４８時間攪拌することで種粒子に上記（Ａ）を膨潤させる。その後、６０℃〜９０℃で３〜２４時間加熱することで、下記（Ａ）及び（Ｂ）から構成された粒子を得ることが出来る。このシード重合法に用いられる重合開始剤としては、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルペルオキシド、ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド、過酸化ベンゾイル、メチルエチルケトンペルオキシド等が挙げられるが、好ましくは過酸化ベンゾイルが良い。
上記種粒子を調製する方法としては特に限定されず、公知の方法を用いることができるが、乳化剤（界面活性剤）を使用しないソープフリー乳化重合法が好ましい。この乳化重合法に用いられる重合開始剤としては過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウムなどが挙げられるが、好ましくは過硫酸カリウムが良い。本発明では、反応容器にイオン交換水、例えば、モノマー、重合開始剤を仕込み、攪拌しながら反応容器内を窒素置換した後、６５℃〜８０℃で１２〜４２時間反応を行うことにより製造することができる。得られた粒子は低い粒子径のＣＶ値を有し、優れた分散安定性を有する。
本発明の測定試薬用ラテックス粒子の平均粒子径は、ラテックス免疫比濁法の具体的な方法や用いる測定機器の仕様等によって適宜選択すればよいが、好ましい下限は０．０１μｍ、好ましい上限は１．０μｍである。平均粒子径が０．０１μｍ以下であると、凝集による光学的変化量が小さすぎて測定に必要な感度が得られなかったり、感作ラテックス粒子の調整時の遠心分離の際等に長時間を要して製造コストが高くなったりすることがある。平均粒子径が１．０μｍを超えると、測定試薬中の被検物質が高濃度であるときに感作ラテックス粒子の凝集による光学的変化量が光学的測定機器の測定可能領域を超えてしまい、被検物質の量に応じた光学的変化量が得られないことがある。平均粒子径のより好ましい下限は０．０５μｍ、より好ましい上限は０．７μｍ、更に好ましい下限は０．１μｍ、更に好ましい上限は０．４μｍである。なお、「粒子径」は、透過電子顕微鏡（ＴＥＭ）画像より得られた５００個の粒子について、それぞれ粒子径を測定した際の平均値である。
本発明の測定試薬用ラテックス粒子の粒子径の変動係数（ＣＶ値）は特に限定はされず、ラテックス免疫比濁法の具体的な方法や用いる測定機器の仕様等によって適宜選択すればよいが、好ましくは２０％以下である。ＣＶ値が２０％を超えると、感作ラテックス粒子の調製時の製造再現性が低下し、測定試薬の性能（測定再現性）が低下することがある。ＣＶ値は１５％以下であることがより好ましく、１０％以下であることが更に好ましい。なお、上記粒子径の変動係数は、下記（１）により算出される。
式（１）：粒子径の変動係数（ＣＶ値）＝粒子径の標準偏差／平均粒子径
式（１）：粒子径の変動係数（ＣＶ値）＝粒子径の標準偏差／平均粒子径
［感作ラテックス粒子／免疫比濁法用測定試薬］
本発明の測定試薬用ラテックス粒子を担体として、被検物質と特異的に結合する物質を担持させて、感作ラテックス粒子を製造することができる。本発明の測定試薬用ラテックス粒子に、被検物質と特異的に結合する物質を担持させた感作ラテックス粒子もまた、本発明の１つである。感作ラテックス粒子は緩衝液中に分散していることが好ましい。
本発明の測定試薬用ラテックス粒子を担体として、被検物質と特異的に結合する物質を担持させて、感作ラテックス粒子を製造することができる。本発明の測定試薬用ラテックス粒子に、被検物質と特異的に結合する物質を担持させた感作ラテックス粒子もまた、本発明の１つである。感作ラテックス粒子は緩衝液中に分散していることが好ましい。
上記被検物質と特異的に結合する物質としては、免疫血清学的測定試薬（免疫学的凝集反応及び凝集阻止反応において使用されるもの）、生化学測定法として通常使用される生理活性物質であれば特に限定されない。なかでも、抗原抗体反応に利用できる物質が好適である。
本発明における抗原抗体反応に利用できる物質としては、例えば、たんぱく質、核酸、核たんぱく質、エストロゲン等のホルモン、脂質等の抗原又は抗体が挙げられる。上記抗原としては、例えば、各種抗原、レセプター、酵素等が挙げられる。より具体的には、例えば、β２マイクログロブリン、Ｃ−反応性タンパク（ＣＲＰ）、ヒトフィブリノーゲン、フェリチン、リウマチ因子（ＲＡ）、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、マイコプラズマ抗原、ＨＢｓ抗原等が挙げられる。 上記抗体としては、例えば、各種の毒素や病原菌等に対する抗体が挙げられる。より具体的には、例えば、抗ストレプトリジンＯ抗体、抗エストロゲン抗体、β２マイクログロブ リン抗体、梅毒トレポネーマ抗体、梅毒脂質抗原に対する抗体、抗ＨＢｓ抗体、抗ＨＢｃ抗体、抗Ｈｂｅ抗体、抗ＰＳＡ抗体、抗ＣＲＰ抗体等が挙げられる。
なお、感作ラテックス粒子を製造するため測定試薬用ラテックス粒子に担持させる抗体としては、免疫グロブリン分子自体の他、例えば、Ｆ（ａｂ’）２のような抗原結合性の機能断片であってもよい。また、上記抗体は、ポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体のどちらを用いてもかまわない。上記抗体の取得方法も通常使用される方法を用いることができるほか、遺伝子組み換え技術により得られたものであってもよい。本明細書において「抗原抗体反応」、「抗原」、「抗体」の語を用いる場合、通常の意味に加え、特異的な結合反応により感作ラテックス粒子を凝集させることができる上記の概念・形態のいずれをも含む場合があり、限定的に解釈してはならない。
本発明の測定試薬用ラテックス粒子に被検物質と特異的に結合する物質を担持させて、感 作ラテックス粒子を製造する方法としては特に限定されず、従来公知の物理的及び／又は 化学的結合により担持させる方法を用いることができる。 本発明の感作ラテックス粒子における被検物質と特異的に結合する物質の担持量は、用いられる被検物質と特異的に結合する物質の種類により異なり、実験的に最適な量を適宜設定することができる。
なお、本明細書において「担持」、「感作」、「固定化」の語は、通常の意味を有し、同義に使用している。
なお、本明細書において「担持」、「感作」、「固定化」の語は、通常の意味を有し、同義に使用している。
このような方法により得られた本発明の感作ラテックス粒子は、必要に応じてウシ血清アルブミン等で被覆（ブロッキング）処理を施し、適当な緩衝液に分散して感作ラテックス粒子分散液として用いる。感作ラテックス粒子分散液は、免疫比濁法用測定試薬として用いることができる。本発明の感作ラテックス粒子が緩衝液中に分散している免疫比濁法用測定試薬もまた、本発明の１つである。本発明の免疫比濁法用測定試薬は、測定に用いる希釈液（緩衝液）や標準物質等を組み合わせて、測定試薬キットとして用いることができる。
上記希釈液は、測定試料等を希釈するのに用いられる。上記希釈液としては、ｐＨ５．０〜９．０の緩衝液であればどのようなものでも用いることができる。具体的には、例えば、リン酸緩衝液、グリシン緩衝液、トリス緩衝液、ホウ酸緩衝液、クエン酸緩衝液、グッド緩衝液等が挙げられる。
本発明の免疫比濁法用測定試薬や希釈液は、測定感度の向上や抗原抗体反応の促進のため に、種々の増感剤を含有してもよい。上記増感剤としては、例えば、メチルセルロース、エチルセルロース等のアルキル化多糖類や、プルラン、ポリビニルピロリドン等が挙げられる。
本発明の免疫比濁法用測定試薬や希釈液は、測定試料中に存在する被検物質以外の物質により起こる非特異的凝集反応を抑制するためや、測定試薬の安定性を高めるために、アルブミン（牛血清アルブミン、卵性アルブミン）、カゼイン、ゼラチン等のタンパク質やその分解物、アミノ酸又は界面活性剤等を含有してもよい。
本発明の免疫比濁法用測定試薬を用いれば、測定試料中の被検物質と感作ラテックス粒子に担持された被検物質に特異的に結合する物質との反応により生じる感作ラテックス粒子の凝集の度合いを光学的に測定することにより、測定試料中の被検物質の量を測定するこができる。上記光学的測定には、散乱光強度、透過光強度、吸光度等を検出できる光学機器、又は、これらの検出方法を複数備えた光学機器等を用いることができる。代表的には、臨床検査で広く使用されている生化学自動分析機であればいずれも使用することができる。
上記凝集の度合いを光学的に測定する方法としては従来公知の方法が用いられ、例えば、凝集の形成を濁度の増加としてとらえる比濁法、凝集の形成を粒度分布又は平均粒子径の変化としてとらえる方法、凝集の形成による前方散乱光の変化を積分球を用いて測定し透過光強度との比を比較する積分球濁度法等が挙げられる。また、測定法としては、例えば、異なる時点で少なくとも２つの測定値を得て、これらの時点間における測定値の増加分（増加速度）に基づき凝集の程度を求める速度試験（レートアッセイ）や、ある時点（通常は反応の終点と考えられる時点）で１つの測定値を得て、この測定値に基づき凝集の程度を求める終点試験（エンドポイントアッセイ）等が挙げられる。なかでも、測定の簡便性、迅速性の点から比濁法による終点試験が好適である。本明細書において「免疫比濁」、「免疫比濁法」の語を用いる場合、上記の概念・形態のいずれも含むものとし、限定的に解釈してはならない。
以下、実施例、比較例により本発明の詳細について説明するが、本発明はこれらによって限定されるものではない。
［実施例１］
本発明の測定試薬用ラテックス粒子の製造に使用する種粒子をソープフリー乳化重合法を用いて作製した。反応容器にイオン交換水1200ｍＬ、モノマーとして、スチレン120ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液13ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリスチレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。
本発明の測定試薬用ラテックス粒子の製造に使用する種粒子をソープフリー乳化重合法を用いて作製した。反応容器にイオン交換水1200ｍＬ、モノマーとして、スチレン120ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液13ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリスチレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。
上記ソープフリー乳化重合法により得られた種粒子を使用して、本発明の測定試薬用ラテックス粒子を、シード重合法を用いて製造した。6VDNpTh2.0ｇ、過酸化ベンゾイル0.005ｇを酢酸エチル30.0ｇに溶解させ、常温で６時間攪拌し、6VDNpTh溶液を得た。
上記種粒子懸濁液80ｇに上記6VDNpTh溶液を混合し、常温で24時間攪拌することで種粒子に6VDNpTh及び過酸化ベンゾイルを内包させた。その後、70℃で10時間加熱攪拌を行い、6VDNpThの重合と酢酸エチルを蒸発除去することで、スチレンと6VDNpThの複合粒子を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径は０．１８０μｍ、粒子径のＣＶ値は５．３％であった。
上記種粒子懸濁液80ｇに上記6VDNpTh溶液を混合し、常温で24時間攪拌することで種粒子に6VDNpTh及び過酸化ベンゾイルを内包させた。その後、70℃で10時間加熱攪拌を行い、6VDNpThの重合と酢酸エチルを蒸発除去することで、スチレンと6VDNpThの複合粒子を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径は０．１８０μｍ、粒子径のＣＶ値は５．３％であった。
なお、ラテックス粒子の粒子径及びＣＶ値は、ラテックス粒子を常法に従ってコロジオン膜上に載せ、透過型電子顕微鏡により粒子画像を撮影し、画像上で観察された５００個以上の粒子の粒子径を計測する方法により求めた。
［実施例２］
本発明の測定試薬用ラテックス粒子の製造に使用する種粒子をソープフリー乳化重合法を用いて作製した。反応容器にイオン交換水1200ｍＬ、モノマーとして、１−ビニルナフタレン120ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液13ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリビニルナフタレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。
本発明の測定試薬用ラテックス粒子の製造に使用する種粒子をソープフリー乳化重合法を用いて作製した。反応容器にイオン交換水1200ｍＬ、モノマーとして、１−ビニルナフタレン120ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液13ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリビニルナフタレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。
上記ソープフリー乳化重合法により得られた種粒子を使用して、本発明の測定試薬用ラテックス粒子を、シード重合法を用いて製造した。6VDNpTh3.6ｇ、過酸化ベンゾイル0.005ｇを酢酸エチル30.0ｇに溶解させ、常温で６時間攪拌し、6VDNpTh溶液を得た。上記種粒子懸濁液64ｇに上記6VDNpTh溶液を混合し、常温で24時間攪拌することで種粒子に6VDNpTh及び過酸化ベンゾイルを内包させた。その後、70℃で10時間加熱攪拌を行い、6VDNpThの重合と酢酸エチルの蒸発除去することで、１−ビニルナフタレンと6VDNpThの複合粒子を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．１９８μｍ、粒子径のＣＶ値は４．６％であった。
［実施例３］
本発明の測定試薬用ラテックス粒子について、ソープフリー乳化重合法を用いて製造した。DNTMA23ｇをアセトン30ｇに溶解させ、常温で６時間攪拌し、DNTMA溶液を得た。反応容器にイオン交換水1000ｍＬ、モノマーとして、スチレン77ｍＬ及びDNTMA溶液を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液10ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してスチレンとDNTMAの複合粒子を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．２９２μｍ、粒子径のＣＶ値は９．１％であった。
本発明の測定試薬用ラテックス粒子について、ソープフリー乳化重合法を用いて製造した。DNTMA23ｇをアセトン30ｇに溶解させ、常温で６時間攪拌し、DNTMA溶液を得た。反応容器にイオン交換水1000ｍＬ、モノマーとして、スチレン77ｍＬ及びDNTMA溶液を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液10ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してスチレンとDNTMAの複合粒子を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．２９２μｍ、粒子径のＣＶ値は９．１％であった。
［実施例４］
本発明の測定試薬用ラテックス粒子について、ソープフリー乳化重合法を用いて製造した。EDNTMA18ｇをアセトン30ｇに溶解させ、常温で６時間攪拌し、DNTMA溶液を得た。反応容器にイオン交換水1000ｍＬ、モノマーとして、スチレン82ｍＬ及びDNTMA溶液を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液10ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してスチレンとEDNTMAの複合粒子を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．２７７μｍ、粒子径のＣＶ値は９．６％であった。
本発明の測定試薬用ラテックス粒子について、ソープフリー乳化重合法を用いて製造した。EDNTMA18ｇをアセトン30ｇに溶解させ、常温で６時間攪拌し、DNTMA溶液を得た。反応容器にイオン交換水1000ｍＬ、モノマーとして、スチレン82ｍＬ及びDNTMA溶液を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液10ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してスチレンとEDNTMAの複合粒子を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．２７７μｍ、粒子径のＣＶ値は９．６％であった。
［実施例５］
本発明の測定試薬用ラテックス粒子の製造に使用する種粒子をソープフリー乳化重合法を用いて作製した。反応容器にイオン交換水1200ｍＬ、モノマーとして、１−ビニルナフタレン120ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液13ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリビニルナフタレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。
本発明の測定試薬用ラテックス粒子の製造に使用する種粒子をソープフリー乳化重合法を用いて作製した。反応容器にイオン交換水1200ｍＬ、モノマーとして、１−ビニルナフタレン120ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液13ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリビニルナフタレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。
上記ソープフリー乳化重合法により得られた種粒子を使用して、本発明の測定試薬用ラテックス粒子を、シード重合法を用いて製造した。6MeDNT2.8ｇを酢酸エチル30.0ｇに溶解させ、常温で６時間攪拌し、6MeDNT溶液を得た。上記種粒子懸濁液72ｇに上記6VDNpTh溶液を混合し、常温で24時間攪拌することで種粒子に6MeDNTを内包させた。その後、70℃で10時間加熱攪拌を行い、酢酸エチルの蒸発除去することで、１−ビニルナフタレンと6MeDNTの複合粒子を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．２１４μｍ、粒子径のＣＶ値は６．９％であった。
［実施例６］
本発明の測定試薬用ラテックス粒子の製造に使用する種粒子をソープフリー乳化重合法を用いて作製した。反応容器にイオン交換水1200ｍＬ、モノマーとして、１−ビニルナフタレン120ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液13ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリビニルナフタレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。
本発明の測定試薬用ラテックス粒子の製造に使用する種粒子をソープフリー乳化重合法を用いて作製した。反応容器にイオン交換水1200ｍＬ、モノマーとして、１−ビニルナフタレン120ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液13ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリビニルナフタレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。
上記ソープフリー乳化重合法により得られた種粒子を使用して、本発明の測定試薬用ラテックス粒子を、シード重合法を用いて製造した。6EDNT2.5ｇを酢酸エチル30.0ｇに溶解させ、常温で６時間攪拌し、6EDNT溶液を得た。上記種粒子懸濁液75ｇに上記6EDNT溶液を混合し、常温で24時間攪拌することで種粒子に6EDNTを内包させた。その後、70℃で10時間加熱攪拌を行い、酢酸エチルの蒸発除去することで、１−ビニルナフタレンと6EDNTの複合粒子を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．２０７μｍ、粒子径のＣＶ値は３．５％であった。
［実施例７］
本発明の測定試薬用ラテックス粒子の製造に使用する種粒子をソープフリー乳化重合法を用いて作製した。反応容器にイオン交換水1200ｍＬ、モノマーとして、スチレン120ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液13ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリスチレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。
本発明の測定試薬用ラテックス粒子の製造に使用する種粒子をソープフリー乳化重合法を用いて作製した。反応容器にイオン交換水1200ｍＬ、モノマーとして、スチレン120ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液13ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリスチレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。
上記ソープフリー乳化重合法により得られた種粒子を使用して、本発明の測定試薬用ラテックス粒子を、シード重合法を用いて製造した。6VDNpTh1.5ｇ、１−ビニルナフタレン2.5ｇ、過酸化ベンゾイル0.005ｇを酢酸エチル30.0ｇに溶解させ、常温で６時間攪拌し、6VDNpTh溶液を得た。
上記種粒子懸濁液60ｇに上記6VDNpTh溶液を混合し、常温で24時間攪拌することで種粒子に6VDNpTh及び過酸化ベンゾイルを内包させた。その後、70℃で10時間加熱攪拌を行い、6VDNpTh及び１−ビニルナフタレンの重合と酢酸エチルの蒸発除去することで、スチレンと6VDNpTh及び１−ビニルナフタレンの複合粒子を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．２２３μｍ、粒子径のＣＶ値は６．６％であった。
上記種粒子懸濁液60ｇに上記6VDNpTh溶液を混合し、常温で24時間攪拌することで種粒子に6VDNpTh及び過酸化ベンゾイルを内包させた。その後、70℃で10時間加熱攪拌を行い、6VDNpTh及び１−ビニルナフタレンの重合と酢酸エチルの蒸発除去することで、スチレンと6VDNpTh及び１−ビニルナフタレンの複合粒子を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．２２３μｍ、粒子径のＣＶ値は６．６％であった。
［実施例８］
本発明の測定試薬用ラテックス粒子について、ソープフリー乳化重合法を用いて製造した。DNTMA12ｇをアセトン30ｇに溶解させ、常温で６時間攪拌し、DNTMA溶液を得た。反応容器にイオン交換水1000ｍＬ、モノマーとして、スチレン88ｍＬ及びDNTMA溶液を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液10ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してスチレンとDNTMAの複合粒子を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．２９２μｍ、粒子径のＣＶ値は９．１％であった。
本発明の測定試薬用ラテックス粒子について、ソープフリー乳化重合法を用いて製造した。DNTMA12ｇをアセトン30ｇに溶解させ、常温で６時間攪拌し、DNTMA溶液を得た。反応容器にイオン交換水1000ｍＬ、モノマーとして、スチレン88ｍＬ及びDNTMA溶液を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液10ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してスチレンとDNTMAの複合粒子を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．２９２μｍ、粒子径のＣＶ値は９．１％であった。
［比較例１］
測定試薬用ラテックス粒子について、ソープフリー乳化重合法を用いて製造した。反応容器にイオン交換水1000ｍＬ、モノマーとして、スチレン100ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液10ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリスチレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．２０３μｍ、粒子径のＣＶ値は４．４％であった。
本比較例は特許文献２に記載のラテックス粒子に相当する。
測定試薬用ラテックス粒子について、ソープフリー乳化重合法を用いて製造した。反応容器にイオン交換水1000ｍＬ、モノマーとして、スチレン100ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液10ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリスチレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．２０３μｍ、粒子径のＣＶ値は４．４％であった。
本比較例は特許文献２に記載のラテックス粒子に相当する。
［比較例２］
測定試薬用ラテックス粒子について、ソープフリー乳化重合法を用いて製造した。反応容器にイオン交換水1000ｍＬ、モノマーとして、スチレン80ｍＬ、１−ビニルナフタレン20ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液10ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリスチレン−ポリビニルナフタレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．１５２μｍ、粒子径のＣＶ値は５．２％であった。
本比較例は特許文献２に記載のラテックス粒子に相当する。
測定試薬用ラテックス粒子について、ソープフリー乳化重合法を用いて製造した。反応容器にイオン交換水1000ｍＬ、モノマーとして、スチレン80ｍＬ、１−ビニルナフタレン20ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液10ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリスチレン−ポリビニルナフタレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．１５２μｍ、粒子径のＣＶ値は５．２％であった。
本比較例は特許文献２に記載のラテックス粒子に相当する。
［比較例３］
測定試薬用ラテックス粒子について、ソープフリー乳化重合法を用いて製造した。反応容器にイオン交換水1000ｍＬ、モノマーとして、スチレン60ｍＬ、１−ビニルナフタレン40ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液10ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリスチレン−ポリビニルナフタレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．１６０μｍ、粒子径のＣＶ値は８．６％であった。
本比較例は特許文献２に記載のラテックス粒子に相当する。
測定試薬用ラテックス粒子について、ソープフリー乳化重合法を用いて製造した。反応容器にイオン交換水1000ｍＬ、モノマーとして、スチレン60ｍＬ、１−ビニルナフタレン40ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液10ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリスチレン−ポリビニルナフタレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．１６０μｍ、粒子径のＣＶ値は８．６％であった。
本比較例は特許文献２に記載のラテックス粒子に相当する。
［比較例４］
測定試薬用ラテックス粒子について、ソープフリー乳化重合法を用いて製造した。反応容器にイオン交換水1000ｍＬ、モノマーとして、スチレン30ｍＬ、１−ビニルナフタレン70ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液10ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリスチレン−ポリビニルナフタレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．２６７μｍ、粒子径のＣＶ値は６．２％であった。
測定試薬用ラテックス粒子について、ソープフリー乳化重合法を用いて製造した。反応容器にイオン交換水1000ｍＬ、モノマーとして、スチレン30ｍＬ、１−ビニルナフタレン70ｍＬ、を加え攪拌し、その後、反応容器内を窒素置換した。反応容器内の温度が70℃に達した後、3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液10ｍＬを滴下した。3％（ｗ/ｖ）過硫酸カリウム水溶液の滴下から24時間後、反応を停止し、濾過してポリスチレン−ポリビニルナフタレン系ラテックス粒子懸濁液を得た。得られたラテックス粒子の平均粒子径０．２６７μｍ、粒子径のＣＶ値は６．２％であった。
［評価１］測定試薬用ラテックス粒子の吸光度測定
実施例１〜８及び比較例１〜４で得られた各測定試薬用ラテックス粒子を濃度０．０１重量％に調製し、分光光度計（日立製Ｕ−３９００）を用いて波長５８０ｎｍの吸光度を測定した。ポリスチレン粒子の波長５８０ｎｍの吸光度については、一般的に下記［式（２）］で算出できることが判っている。
［式（２）］：吸光度（理論値）＝２．７１７×粒子径（μｍ）−０．２１８
本発明の測定試薬用ラテックス粒子について、同粒子径のポリスチレン粒子の吸光度を算出し、比較評価を行った。結果を表１に示した。
実施例１〜８及び比較例１〜４で得られた各測定試薬用ラテックス粒子を濃度０．０１重量％に調製し、分光光度計（日立製Ｕ−３９００）を用いて波長５８０ｎｍの吸光度を測定した。ポリスチレン粒子の波長５８０ｎｍの吸光度については、一般的に下記［式（２）］で算出できることが判っている。
［式（２）］：吸光度（理論値）＝２．７１７×粒子径（μｍ）−０．２１８
本発明の測定試薬用ラテックス粒子について、同粒子径のポリスチレン粒子の吸光度を算出し、比較評価を行った。結果を表１に示した。
表１より、比較例１の粒子（ポリスチレン系ラテックス粒子）は、上記した［式（２）］で算出した吸光度（理論値）と比較し、大よそ一致することを確認した。また、比較例２、３、４の粒子（ビニルナフタレン系ラテックス粒子）では、１−ビニルナフタレンの組成比が高くなるに伴い、比較例１の粒子に比べて吸光度が高くなることが判る。これは、特許文献２に記載の通り、スチレンよりも高屈折率の材料である１−ビニルナフタレンを含有させたことに起因する結果である。
一方、本発明の測定試薬用ラテックス粒子である実施例１〜８では、比較例２、３、４よりも高い吸光度増加を確認した。ジナフトチオフェン、又はジナフトチオフェン誘導体の屈折率はｎ＝１．７０〜１．８１と、ポリスチレンの屈折率（ｎ＝１．５８）や１−ビニルナフタレンの屈折率（ｎ＝１．６４）と比較して類い稀な高屈折率材料であることに起因する結果である。
また実施例１〜８において、実施例３の吸光度（測定値）が一番高かった。その理由は以下のように考えられる。上述の化学式（ａ４−１）、（ｂ１−１）で表されるように、ジナフトチオフェンに導入された置換基Ｒ１は、その構造中に不飽和二重結合を有する。この不飽和二重結合により、ジナフトチオフェン誘導体（成分Ａ）の有機溶媒への溶解性が向上したことにより、ジナフトチオフェン誘導体の添加量が比較的少ないにも関わらず、種粒子中にジナフトチオフェン誘導体が効率良く含漬されたためと考えられる。
一方、本発明の測定試薬用ラテックス粒子である実施例１〜８では、比較例２、３、４よりも高い吸光度増加を確認した。ジナフトチオフェン、又はジナフトチオフェン誘導体の屈折率はｎ＝１．７０〜１．８１と、ポリスチレンの屈折率（ｎ＝１．５８）や１−ビニルナフタレンの屈折率（ｎ＝１．６４）と比較して類い稀な高屈折率材料であることに起因する結果である。
また実施例１〜８において、実施例３の吸光度（測定値）が一番高かった。その理由は以下のように考えられる。上述の化学式（ａ４−１）、（ｂ１−１）で表されるように、ジナフトチオフェンに導入された置換基Ｒ１は、その構造中に不飽和二重結合を有する。この不飽和二重結合により、ジナフトチオフェン誘導体（成分Ａ）の有機溶媒への溶解性が向上したことにより、ジナフトチオフェン誘導体の添加量が比較的少ないにも関わらず、種粒子中にジナフトチオフェン誘導体が効率良く含漬されたためと考えられる。
また実施例８では、スチレンの含量が実施例８（８８）をまたぐ比較例１（１００）、比較例２（８０）に対して、高い吸光度を示し、かつ、１−ジビニルナフタレン含量が実施例８（１２）の３．３倍（４０／１２）である比較例３、５．８倍（７０／１２）である比較例４よりも高い吸光度を示している。これは、ジナフォトチオフェン誘導体が少量の含有であっても吸光度増加効果が高いことを示すものであり、実用的に有利な材料であることを示唆している。例えば、抗体等のラテックス粒子への担持効率はラテックス粒子の組成に依存することが知られているが、本発明の粒子は、その組成の変化が従来の粒子に対して僅かですむため、従来の試薬からの置き換えを有利に行うことができる。また例えば、ジナフトチオフェン誘導体の含有量を少量から相当量まで、広い範囲から選ぶことができるため、被検物質の濃度が希薄な領域における感度を選択的に向上させたい場合などに特に有利である。
以上より、本発明の測定試薬用ラテックス粒子は、粒子の吸光度を大きく向上させることで、被検物質の濃度が希薄な測定試料を測定する場合であっても高感度な測定を可能にすることが確認された。
以上より、本発明の測定試薬用ラテックス粒子は、粒子の吸光度を大きく向上させることで、被検物質の濃度が希薄な測定試料を測定する場合であっても高感度な測定を可能にすることが確認された。
本発明によれば、被検物質の濃度が希薄な測定試料を測定する場合であっても高感度な測定を可能にする測定試薬用ラテックス粒子を提供することができる。
Claims (10)
- ジナフトチオフェン及びその誘導体の少なくともいずれか一方からなる成分（Ａ）と、
前記成分（Ａ）を内包する基材成分（Ｂ）と、を備えることを特徴とする測定試薬用ラテックス粒子。 - 前記成分（Ｂ）として、スチレン及びビニルナフタレンの少なくともいずれか一方を含むことを特徴とする請求項１に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
- 前記成分（Ａ）に対する前記成分（Ｂ）の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が、１．０〜９．０であることを特徴とする請求項１又は２に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
- 前記ジナフトチオフェン誘導体が、次式で示されることを特徴とする請求項１から３のいずれか１項に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
Ｒ３、Ｒ４は水素原子を表すか、又は、メトキシ基、エトキシ基、水酸基、末端に水酸基、ビニル基、エポキシ基、又は（メタ）アクリロイルオキシ基、のいずれかを有する炭素数１〜３のアルコキシ基を表す。
Ｒ１、Ｒ2、Ｒ３、Ｒ４は互いに独立して水酸原子または上記置換基を表す。） - Ｒ１、Ｒ2が共に水素原子を表す場合、Ｒ３、Ｒ４が共に、メトキシ基、エトキシ基、水酸基、末端に水酸基、ビニル基、エポキシ基、又は（メタ）アクリロイルオキシ基、のいずれかを有する炭素数１〜３のアルコキシ基を表し；Ｒ３、Ｒ４が共に水素原子を表す場合、Ｒ１、Ｒ2の一方が水素原子を表し、他方がハロゲン原子、ホルミル基、炭素原子数１〜３のアルキル基、ビニル基、アリル基、（メタ）アクリロイルオキシアルキレン基；当該アルキレン部分は直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１〜３のアルキレン鎖で構成される、を表す、請求項４に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
- 前記（メタ）アクリロイルオキシアルキレン基；当該アルキレン部分は直鎖状又は分枝鎖状の炭素数１〜３のアルキレン鎖で構成される、が、次式で表される基である請求項５に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
- Ｒ１、Ｒ2は、一方が水素原子を表し、他方が炭素原子数１〜３のアルキル基、ビニル基、アリル基、次式（ｂ１−１）、（ｂ１−２）、（ｂ２−１）又は（ｂ２−２）で表される基であることを特徴とする請求項５に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
- Ｒ３、Ｒ４が、水酸基を表すか、又は次式で表される基のいずれかを表すことを特徴とする請求項５に記載の測定試薬用ラテックス粒子。
- 請求項１から８のいずれか１項に記載の測定試薬用ラテックス粒子に、被検物質と特異的に結合する物質を担持させたことを特徴とする感作ラテックス粒子。
- 請求項９に記載の感作ラテックス粒子が緩衝液中に分散していることを特徴とする免疫比濁法用測定試薬。
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